DAPI
डी. ए. पी. आई. (उच्चारण 'डी. ए. पी. पी. वाई.',/डी. ए. पी. आई./), या 4′, 6-डायमिडिनो-2-फेनिलिंडोल, एक फ्लोरोसेंट दाग है जो डी. एन. ए. में एडेनिन-थाइमिन-समृद्ध क्षेत्रों से दृढ़ता से जुड़ता है। इसका फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। चूंकि डी. ए. पी. आई. एक अक्षुण्ण कोशिका झिल्ली से गुजर सकता है, इसका उपयोग जीवित और स्थिर दोनों कोशिकाओं पर दाग लगाने के लिए किया जा सकता है, हालांकि यह जीवित कोशिकाओं में कम कुशलता से झिल्ली से गुजरता है और इसलिए झिल्ली व्यवहार्यता के लिए एक मार्कर प्रदान करता है। डी. ए. पी. आई. को पहली बार 1971 में ओटो डैन की प्रयोगशाला में ट्राइपानोसोमियासिस के इलाज के लिए दवाओं की खोज के हिस्से के रूप में संश्लेषित किया गया था। हालांकि यह एक दवा के रूप में असफल रहा, आगे की जांच ने संकेत दिया कि यह डी. एन. ए. से दृढ़ता से बंधा हुआ था और बंधे होने पर अधिक प्रतिदीप्तिशील हो गया। इसने 1975 में अल्ट्रासेंट्रीफ्यूगेशन में माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए की पहचान करने में इसका उपयोग किया, जो एक फ्लोरोसेंट डीएनए दाग के रूप में डीएपीआई का पहला दर्ज उपयोग था। डी. एन. ए. से बंधे होने पर मजबूत प्रतिदीप्ति के कारण प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के लिए डी. एन. ए. के प्रतिदीप्ति धुंधलापन के लिए डी. ए. पी. आई. को तेजी से अपनाया गया। पादप, मेटाज़ोआ और बैक्टीरिया कोशिकाओं और वायरस कणों में डी. एन. ए. का पता लगाने के लिए इसका उपयोग 1970 के दशक के अंत में प्रदर्शित किया गया था, और कोशिकाओं के अंदर डी. एन. ए. के मात्रात्मक धब्बों का प्रदर्शन 1977 में किया गया था। फ्लो साइटोमेट्री के लिए डी. एन. ए. दाग के रूप में डी. ए. पी. आई. का उपयोग भी इस समय के आसपास प्रदर्शित किया गया था। प्रतिदीप्ति गुण जब दोहरे फंसे डीएनए से बंधे होते हैं, तो डीएपीआई में 358 एनएम (पराबैंगनी) की तरंग दैर्ध्य पर अधिकतम अवशोषण होता है और इसका उत्सर्जन अधिकतम 461 एनएम (नीला) होता है। इसलिए, प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के लिए, डी. ए. पी. आई. पराबैंगनी प्रकाश से उत्तेजित होता है और एक नीले/स्यान फिल्टर के माध्यम से इसका पता लगाया जाता है। उत्सर्जन शिखर काफी व्यापक है। डी. ए. पी. आई. आर. एन. ए. से भी जुड़ जाएगा, हालांकि यह उतना प्रबल फ्लोरोसेंट नहीं है। आर. एन. ए. से बंधे होने पर इसका उत्सर्जन लगभग 500 एन. एम. हो जाता है। डी. ए. पी. आई. का नीला उत्सर्जन सूक्ष्मदर्शी विशेषज्ञों के लिए सुविधाजनक है जो एक ही नमूने में कई फ्लोरोसेंट दागों का उपयोग करना चाहते हैं। डी. ए. पी. आई. और हरे-फ्लोरोसेंट अणुओं जैसे फ्लोरासिन और हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन (जी. एफ. पी.) के बीच कुछ फ्लोरोसेंस ओवरलैप होता है लेकिन इसका प्रभाव कम होता है। यदि अत्यंत सटीक छवि विश्लेषण की आवश्यकता है तो वर्णक्रमीय अनमिक्सिंग का उपयोग इस प्रभाव के लिए जिम्मेदार हो सकता है। विश्लेषणात्मक प्रतिदीप्ति प्रकाश सूक्ष्मदर्शी के बाहर डी. ए. पी. आई. दूषित माइकोप्लाज्मा या वायरस के डी. एन. ए. का पता लगाने के लिए कोशिका संवर्धन के लेबलिंग के लिए भी लोकप्रिय है। विकास माध्यम में लेबल किए गए माइकोप्लाज्मा या वायरस कण एक बार डी. ए. पी. आई. द्वारा दागदार हो जाते हैं जिससे उनका पता लगाना आसान हो जाता है। अवशोषण और प्रतिदीप्ति गुणों का प्रतिरूपण इस डी. एन. ए. प्रतिदीप्ति जांच को ध्रुवीकरण निरंतरता मॉडल के आई. ई. एफ. संस्करण के साथ समय-निर्भर घनत्व कार्यात्मक सिद्धांत का उपयोग करके प्रभावी रूप से प्रतिरूपित किया गया है। इस क्वांटम-मैकेनिकल मॉडलिंग ने संरचनात्मक लचीलेपन और ध्रुवीकरण में कमी के संदर्भ में डीएनए पॉकेट में माइनर ग्रूव बाइंडिंग और इंटरकलेशन द्वारा दिए गए अवशोषण और प्रतिदीप्ति व्यवहार को तर्कसंगत बना दिया है। जीवित कोशिकाओं और विषाक्तता डी. ए. पी. आई. का उपयोग निश्चित कोशिका धुंधला करने के लिए किया जा सकता है। जीवित कोशिका धुंधलापन के लिए आवश्यक डी. ए. पी. आई. की सांद्रता आम तौर पर बहुत अधिक होती है; इसका उपयोग शायद ही कभी जीवित कोशिकाओं के लिए किया जाता है। इसके एमएसडीएस में इसे गैर-विषाक्त लेबल किया गया है और हालांकि इसमें ई. कोलाई के लिए उत्परिवर्तन नहीं दिखाया गया था, इसे निर्माता की जानकारी में एक ज्ञात उत्परिवर्तन के रूप में लेबल किया गया है। चूंकि यह एक छोटा डीएनए बाइंडिंग यौगिक है, इसलिए इसके कुछ कार्सिनोजेनिक प्रभाव होने की संभावना है और इसके संचालन और निपटान में सावधानी बरती जानी चाहिए। विकल्प होक्स्ट दाग डी. ए. पी. आई. के समान हैं क्योंकि वे नीले-फ्लोरोसेंट डी. एन. ए. दाग भी हैं जो लाइव-और फिक्स्ड-सेल दोनों अनुप्रयोगों के साथ संगत हैं, साथ ही साथ डी. ए. पी. आई. के लिए समान उपकरण फ़िल्टर सेटिंग्स का उपयोग करके दिखाई देते हैं। संदर्भ डी. एन. ए. बाइंडिंग लिगैंड होचस्ट स्टेन लेक्सिट्रोप्सिन नेट्रोप्सिन पेंटामिडाइन स्टेनिंग डाईज़ फ्लोरोसेंट डाईज़ डी. एन. ए.-बाइंडिंग पदार्थ इंडोल्स एमिडाइन्स भी देखें।