Proximity ligation assay
निकटता बंधन परख (इन सीटू पी. एल. ए.) एक ऐसी तकनीक है जो उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता के साथ प्रोटीन, प्रोटीन इंटरैक्शन, बाह्य कोशिकीय पुटिकाओं और पोस्ट ट्रांसलेशनल संशोधनों का प्रत्यक्ष पता लगाने के लिए पारंपरिक प्रतिरक्षा परख की क्षमताओं का विस्तार करती है। प्रोटीन लक्ष्यों का आसानी से पता लगाया जा सकता है और एकल अणु संकल्प के साथ स्थानीयकृत किया जा सकता है और अपरिवर्तित कोशिकाओं और ऊतकों में वस्तुनिष्ठ रूप से मात्रा निर्धारित की जा सकती है। केवल कुछ कोशिकाओं का उपयोग करते हुए, उप-कोशिकीय घटनाएं, यहां तक कि क्षणिक या कमजोर अंतःक्रियाएं, मूल स्थान पर प्रकट होती हैं और कोशिकाओं की उप-आबादी को अलग किया जा सकता है। घंटों के भीतर, पारंपरिक सह-प्रतिरक्षी अवक्षेपण और सह-स्थानीयकरण तकनीकों के परिणामों की पुष्टि की जा सकती है। पी. एल. ए. सिद्धांत विभिन्न प्रजातियों में उठाए गए दो प्राथमिक एंटीबॉडी रुचि के प्रोटीन पर लक्षित एंटीजन को पहचानते हैं (चित्र 1)। विभिन्न प्राथमिक एंटीबॉडी के स्थिर क्षेत्रों के खिलाफ निर्देशित माध्यमिक एंटीबॉडी (2o Ab), जिन्हें पी. एल. ए. जांच कहा जाता है, प्राथमिक एंटीबॉडी (चित्र 2) से जुड़ते हैं। पी. एल. ए. की प्रत्येक जांच में एक छोटा अनुक्रम विशिष्ट डी. एन. ए. स्ट्रैंड जुड़ा होता है। यदि पी. एल. ए. जांच निकटता में हैं (अर्थात, यदि रुचि के दो मूल प्रोटीन निकटता में हैं, या एक प्रोटीन परिसर का हिस्सा हैं, जैसा कि आंकड़ों में दिखाया गया है), तो डी. एन. ए. स्ट्रैंड दो अन्य अनुक्रम-विशिष्ट डी. एन. ए. ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स को उपयुक्त सब्सट्रेट और एंजाइमों (चित्र 3) के साथ जोड़कर रोलिंग सर्कल डी. एन. ए. संश्लेषण में भाग ले सकते हैं। डी. एन. ए. संश्लेषण प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप डी. एन. ए. वृत्त का कई सौ गुना प्रवर्धन होता है। इसके बाद, फ्लोरोसेंट-लेबल वाले पूरक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड जांच जोड़े जाते हैं, और वे प्रवर्धित डीएनए (चित्र 4) से जुड़ जाते हैं। प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी से देखने पर प्रतिदीप्ति की परिणामी उच्च सांद्रता आसानी से एक विशिष्ट उज्ज्वल स्थान के रूप में दिखाई देती है। दिखाए गए विशिष्ट मामले में (चित्र 5), नाभिक बड़ा होता है क्योंकि यह एक बी-सेल लिम्फोमा कोशिका है। दिलचस्प दो प्रोटीन बी सेल रिसेप्टर और एम. वाई. डी. 88 हैं। कोशिका द्रव्य में अंतःक्रिया की खोज दिलचस्प थी क्योंकि बी कोशिका रिसेप्टर्स को कोशिका झिल्ली में स्थित माना जाता है। ऊपर वर्णित अनुप्रयोगों पी. एल. ए. का उपयोग कई अन्य विषयों के बीच पशु विकास और स्तन कैंसर के पहलुओं का अध्ययन करने के लिए किया गया है। इन सीटू प्रॉक्सिमिटी लाइगेशन एसेज़ (आई. एस. पी. एल. ए.) को आई. एच. सी. की तुलना में विभिन्न लाभों के साथ मानव ऊतकों में एंटीबॉडी सत्यापन पर लागू किया गया है, जिसमें पता लगाने की विशिष्टता में वृद्धि, अनिर्दिष्ट धुंधलापन में कमी और बेहतर स्थानीयकरण शामिल है। प्रोटीन और आर. एन. ए. के संबंध का अध्ययन करने के लिए तकनीक की एक भिन्नता (आर. आई. एस. एच.-पी. एल. ए.) का उपयोग किया गया है। इन सीटू पी. एल. ए. की एक अन्य भिन्नता में एक मल्टीप्लेक्स पी. एल. ए. परख शामिल है जो समानांतर में कई प्रोटीन परिसरों की कल्पना करना संभव बनाता है। पी. एल. ए. को एलिसा, फ्लो साइटोमेट्री जैसे अन्य पठित रूपों के साथ भी जोड़ा जा सकता है। और पश्चिमी धब्बा संदर्भ जैव रसायन का पता लगाने की प्रतिक्रियाएँ प्रतिरक्षात्मक परीक्षण