Recombinant AAV mediated genome engineering
रिकॉम्बिनेंट एडेनो-एसोसिएटेड वायरस (आर. ए. ए. वी.) आधारित जीनोम इंजीनियरिंग एक जीनोम संपादन मंच है जो रिकॉम्बिनेंट ए. ए. वी. वैक्टरों के उपयोग पर केंद्रित है जो जीवित स्तनधारी कोशिकाओं के जीनोम में डी. एन. ए. अनुक्रमों को डालने, हटाने या प्रतिस्थापित करने में सक्षम बनाता है। यह तकनीक मारियो केपेची और ओलिवर स्मिथिस की नोबेल पुरस्कार विजेता खोज पर आधारित है कि चूहों में सटीक जीनोम परिवर्तन करने के लिए एक प्राकृतिक उच्च-निष्ठा डीएनए मरम्मत तंत्र, समरूप पुनर्संयोजन (एचआर) का उपयोग किया जा सकता है। आर. ए. ए. वी. मध्यस्थ जीनोम-संपादन किसी भी पूर्व-स्थापित और विभेदित मानव कोशिका रेखा में जीनोम इंजीनियरिंग की अनुमति देने के लिए इस तकनीक की दक्षता में सुधार करता है, जिसमें माउस ई. एस. कोशिकाओं के विपरीत, एच. आर. की दर कम होती है। आइसोजेनिक मानव रोग मॉडल उत्पन्न करने के लिए मानव कोशिका लाइनों के इंजीनियरिंग में उपयोग के लिए तकनीक को व्यापक रूप से अपनाया गया है। इसका उपयोग प्रोटीन टीकों और चिकित्सीय के जैव-निर्माण के लिए जैव-उत्पादक कोशिका श्रृंखलाओं को अनुकूलित करने के लिए भी किया गया है। इसके अलावा, आर. ए. ए. वी. की गैर-रोगजनक प्रकृति के कारण, यह जीवित रोगियों में जीन चिकित्सा करने के लिए एक वांछनीय वेक्टर के रूप में उभरा है। आर. ए. ए. वी. वेक्टर आर. ए. ए. वी. जीनोम एकल-फंसे हुए डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड (एस. एस. डी. एन. ए.) से बना है, जो या तो सकारात्मक-या नकारात्मक-संवेदी है, जो लगभग 4.7 किलोबेस लंबा है। इन सिंगल-स्ट्रैंडेड डी. एन. ए. वायरल वैक्टरों में उच्च पारगमन दर होती है और इनमें जीनोम में डबल स्ट्रैंड डी. एन. ए. टूटने के बिना अंतःजनन एच. आर. को उत्तेजित करने का एक अनूठा गुण होता है, जो अन्य होमिंग एंडोन्यूक्लीज़ मध्यस्थ जीनोम संपादन विधियों की विशेषता है। क्षमता उपयोगकर्ता किसी भी लक्षित जीनोमिक लोकस के लिए एक आर. ए. ए. वी. वेक्टर तैयार कर सकते हैं और स्तनधारी शारीरिक कोशिका-प्रकारों में सकल और सूक्ष्म दोनों अंतजनन जीन परिवर्तन कर सकते हैं। इनमें कार्यात्मक जीनोमिक्स के लिए जीन नॉक-आउट, या जीवित कोशिकाओं में शारीरिक स्तरों पर स्थानांतरण घटनाओं को ट्रैक करने के लिए प्रोटीन टैग सम्मिलन का 'नॉक-इन' शामिल है। सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि आर. ए. ए. वी. एक समय में एक एकल एलील को लक्षित करता है और इसके परिणामस्वरूप किसी भी ऑफ-टारगेट जीनोमिक परिवर्तन नहीं होते हैं। इस वजह से, यह सूक्ष्म एस. एन. पी. या बिंदु उत्परिवर्तन के कारण होने वाली आनुवंशिक बीमारियों को नियमित रूप से और सटीक रूप से मॉडल करने में सक्षम है जो तेजी से नए दवा खोज कार्यक्रमों के लक्ष्य हैं। आज तक, आर. ए. ए. वी. मध्यस्थ जीनोम इंजीनियरिंग का उपयोग 2100 से अधिक सहकर्मी समीक्षित वैज्ञानिक पत्रिकाओं में प्रकाशित किया गया है। आर. ए. ए. वी. आधारित जीनोम संपादन का एक अन्य उभरता हुआ अनुप्रयोग रोगियों में जीन चिकित्सा के लिए है, जो सटीकता और दृष्टिकोण द्वारा वहन की जाने वाली ऑफ-टारगेट पुनर्संयोजन घटनाओं की कमी के कारण है। बायोलॉजिकल इंजीनियरिंग होमिंग एंडोन्यूक्लियस होमोलॉगस रिकॉम्बिनेशन मेगानुक्लियस जिंक फिंगर न्यूक्लियस आइसोजेनिक ह्यूमन डिजीज मॉडल कैस9 संदर्भ स्रोत ऑन्कोजेनिक पी. आई. 3. के. उत्परिवर्तन की एंडोजेनस एक्सप्रेशन सक्रिय पी. आई. 3. के. संकेत और ए. ए. सी. आर./ई. ओ. आर. टी. सी. आणविक लक्ष्य और कैंसर चिकित्सा, बोस्टन, यू. एस. ए., नवंबर 2009 में प्रस्तुत एक इनवेसिव फेनोटाइप पोस्टर ऑन्कोजेनिक पी. आई. 3. के. उत्परिवर्तन की एंडोजेनस एक्सप्रेशन ए. ए. सी. आर. 2010, वाशिंगटन, डी. सी., यू. एस. ए., अप्रैल में प्रस्तुत माइटोकॉन्ड्रिया पोस्टर में एंटी-एपोप्टोटिक प्रोटीन के संचय की ओर ले जाती है। 2010 पी. आई. 3-किनेज अवरोधक गतिविधि प्रोफाइल को परिभाषित करने के लिए 'एक्स-मैन' आइसोजेनिक कोशिका रेखाओं का उपयोग ए. ए. सी. आर. 2010, वाशिंगटन, डी. सी., यू. एस. ए., अप्रैल में प्रस्तुत पोस्टर। 2010 'एक्स-मैन' उत्परिवर्ती पी. आई. 3. सी. ए. का उपयोग व्यक्तिगत ट्यूबलिन आइसोफॉर्म की अभिव्यक्ति को बढ़ाता है और ए. ए. सी. आर. 2010, वाशिंगटन, डी. सी., यू. एस. ए., अप्रैल में प्रस्तुत एंटी-माइटोटिक कीमोथेरेपी दवाओं के लिए प्रतिरोध को बढ़ावा देता है। 2010 जैव रसायन पुनर्संयोजक प्रोटीन