Monocyte monolayer assay
मोनोसाइट मोनोलेयर परख (एम. एम. ए.) का उपयोग रक्त आधान प्राप्तकर्ताओं द्वारा उत्पादित एलोएंटिबॉडी के नैदानिक महत्व को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। जब असंगत कोशिकीय रक्त उत्पादों को एनीमिक रोगी को चढ़ाया जाता है तो परख का उपयोग इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस की क्षमता का आकलन करने के लिए किया जाता है। जब दाता कोशिकाओं में ऐसे पदार्थ होते हैं जो प्राप्तकर्ता द्वारा उत्पादित नहीं होते हैं, तो प्राप्तकर्ता की प्रतिरक्षा प्रणाली पदार्थ के खिलाफ एंटीबॉडी का उत्पादन करती है; इन्हें एलोएंटीबॉडी कहा जाता है। विशिष्ट श्वेत रक्त कोशिकाएँ, जिन्हें मोनोसाइट्स कहा जाता है, विदेशी सामग्री को निगलने का काम करती हैं और कुछ सूजन की घटनाओं के दौरान सक्रिय हो जाती हैं। ये सक्रिय मोनोसाइट्स एंटीबॉडी-संवेदनशील लाल रक्त कोशिकाओं (आरबीसी) के संपर्क में आते हैं और फागोसाइटोसिस (अंतर्ग्रहण) प्रदर्शित कर सकते हैं या नहीं और दाता लाल रक्त कोशिकाओं को नष्ट कर सकते हैं। यदि मोनोसाइट्स आर. बी. सी. को नष्ट कर देते हैं, तो उन आर. बी. सी. से जुड़ी एंटीबॉडी को चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता है। पृष्ठभूमि ब्लड बैंकिंग एक नैदानिक प्रयोगशाला के भीतर एक एकाग्रता है जो संभावित आधान प्राप्तकर्ताओं के नमूनों का विश्लेषण करती है और उस रोगी की देखभाल के प्रभारी स्वास्थ्य सेवा दल को संगत रक्त उत्पाद प्रदान करती है। कई नियमित परीक्षण किए जाते हैं जिनमें रक्त टाइपिंग (एबीओ/आरएच स्थिति का निर्धारण), एंटीबॉडी स्क्रीनिंग, सीरोलॉजिकल क्रॉस-मैचिंग, डायरेक्ट एंटीग्लोबुलिन परीक्षण और एंटीबॉडी पहचान शामिल हैं। एबीओ और आरएच (डी) रक्त समूह एंटीजन के लिए प्राकृतिक रूप से होने वाले एंटीबॉडी (आइसोहेमेग्लुटिनिन) की उपस्थिति के अलावा, अतिरिक्त प्रतिरक्षा-उत्तेजित एंटीबॉडी को अप्रत्याशित एलोएंटीबॉडी माना जाता है। अप्रत्याशित एंटीबॉडी की पहचान एक श्रम-गहन प्रक्रिया है, और कभी-कभी एंटीबॉडी की उचित पहचान में सहायता के लिए विशेष प्रयोगशाला तकनीकों को जोड़ने की आवश्यकता होती है। इन तकनीकों में एल्यूशंस, अधिशोषण और एंजाइम उपचार शामिल हैं। कुछ रोगी उच्च आवृत्ति वाले एंटीजन के लिए एंटीबॉडी का उत्पादन करते हैं। अर्थात्, लाल कोशिका प्रतिजन मानव आबादी के एक महत्वपूर्ण हिस्से में मौजूद हैं। यह संदिग्ध हो सकता है और यह आकलन करना बहुत मुश्किल हो सकता है कि एंटीबॉडी को चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता है या नहीं। चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण एंटीबॉडी एक एंटीबॉडी है जो इन विट्रो हेमोलिसिस या संक्रमित दाता लाल रक्त कोशिकाओं के जीवित रहने में कमी लाने में सक्षम है। मोनोसाइट मोनोलेयर परख का उपयोग करके नैदानिक महत्व के लिए उच्च आवृत्ति वाले प्रतिजनों के प्रतिजनकों का मूल्यांकन किया जा सकता है। हेमोलिटिक आधान प्रतिक्रिया रक्त आधान के लिए असामान्य प्रतिक्रियाओं की कई अलग-अलग किस्में हैं। इनमें से, एक संभावित जानलेवा प्रतिक्रिया को हेमोलिटिक आधान प्रतिक्रिया के रूप में जाना जाता है। यह एक प्रतिरक्षा मध्यस्थ प्रतिक्रिया है जहां प्राप्तकर्ता एंटीबॉडी दाता लाल रक्त कोशिका एंटीजन (ओं) पर हमला करते हैं, जिससे दाता कोशिकाओं का हेमोलिसिस होता है। प्रतिक्रिया के दौरान, तुरंत बाद, या 28 दिनों के बाद तक हो सकती है। पहले 24 घंटों के भीतर एक तीव्र प्रतिक्रिया देखी जाती है, जबकि आधान के बाद 24 घंटे और 28 दिनों के बीच एक विलंबित प्रतिक्रिया देखी जाएगी। एलोएंटिबॉडी गठन और नैदानिक महत्व एबीओ रक्त समूह प्रणाली के बारे में बात करते समय, लैंडस्टीनर के नियम में कहा गया है कि यदि किसी व्यक्ति के पास ए और/या बी एंटीजन है, तो वे इन एंटीजनों के लिए एंटीबॉडी नहीं बनाएँगे। हालाँकि, यदि किसी व्यक्ति के पास ए या बी एंटीजन नहीं हैं, तो वे स्वाभाविक रूप से ए और बी एंटीबॉडी का उत्पादन करेंगे। इंटरनेशनल सोसाइटी ऑफ ब्लड ट्रांसफ्यूजन (आई. एस. बी. टी.) के अनुसार, सैकड़ों विभिन्न लाल रक्त कोशिका प्रतिजनों वाले 43 रक्त समूह प्रणालियों का वर्णन किया गया है। कुछ अपवादों के साथ, कई गैर-ए. बी. ओ. रक्त समूह प्रणाली एंटीजनों को एंटीबॉडी उत्पादन को प्रोत्साहित करने के लिए एक संवेदनशील घटना की आवश्यकता होती है। दूसरे शब्दों में, अवैध एंटीबॉडी उत्पादन के लिए प्रतिरक्षा प्रणाली को एंटीजन के संपर्क में होना चाहिए। एंटीजन के संपर्क में आना रक्त आधान, स्टेम सेल/अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण और गर्भावस्था के माध्यम से हो सकता है। एक एलोएंटिबॉडी का नैदानिक महत्व दाता लाल रक्त कोशिका के जीवित रहने में कमी लाने की इसकी क्षमता पर निर्भर करता है। चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण एलोएंटिबॉडी की विशेषताओं में शामिल हैंः इम्यूनोग्लोबुलिन जी एंटीबॉडी उपवर्ग, शरीर के तापमान पर प्रतिक्रियाशीलता, और एक अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण में एंटी-ह्यूमन ग्लोबुलिन (ए. एच. जी.) की उपस्थिति में लाल रक्त कोशिका के एकत्रीकरण का कारण बनने की क्षमता। कभी-कभी, एंटीबॉडी के नैदानिक महत्व को निर्धारित करना मुश्किल हो सकता है। उच्च प्रसार वाले लाल कोशिका प्रतिजनों के प्रतिजन कभी-कभी चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण एलोएंटिबॉडी का पता लगाने को छुपा सकते हैं क्योंकि संबंधित प्रतिजन अधिकांश पर मौजूद होता है, यदि सभी नहीं, तो इन प्रतिजनों का पता लगाने के लिए उपयोग की जाने वाली लाल रक्त कोशिकाओं में प्रतिजन होता है। यही वह जगह है जहाँ मोनोसाइट मोनोलेयर परख उपयोगी हो सकता है। सिद्धांत एमएमए एक बहुत ही श्रम-गहन, हस्तचालित प्रयोगशाला परीक्षण विधि है। इस परख में निम्नलिखित चरण किए जाते हैंः सामान्य, स्वस्थ व्यक्तियों से एंटीकोआगुलेटेड रक्त एकत्र किया जाता है। एसिड साइट्रेट डेक्सट्रोज को प्राथमिकता दी जाती है। परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (पी. बी. एम. सी.) को फिकॉल-पाक घनत्व प्रवणता का उपयोग करके रक्त के नमूने से काटा जाता है। पी. बी. एम. सी. को फॉस्फेट-बफ़र्ड सेलाइन (पी. बी. एस.) का उपयोग करके धोया जाता है और फिर मोनोसाइट्स को व्यवहार्य रखने के लिए ऊतक संवर्धन मीडिया में निलंबित किया जाता है। पी. बी. एम. सी.-मीडिया मिश्रण को एक ऊतक संवर्धन कक्ष स्लाइड में जोड़ा जाता है। मोनोसाइट एक मोनोसाइट मोनोलेयर बनाते हुए कांच की स्लाइड से चिपके रहेंगे। सीरम को मिश्रित किया जाता है और 5 प्रतिशत समूह ओ आरबीसी निलंबन के साथ शरीर के तापमान (37 डिग्री सेल्सियस) पर ऊष्मायन किया जाता है। (यह कदम एंटीबॉडी के साथ आर. बी. सी. को संवेदनशील या कोट करता है) संवेदनशील आर. बी. सी. को किसी भी अनबाउंड एंटीबॉडी या हस्तक्षेप करने वाले पदार्थों को हटाने के लिए पी. बी. एस. के साथ धोया जाता है। धोए गए, संवेदनशील आर. बी. सी. को फिर मोनोसाइट मोनोलेयर ऊतक संवर्धन कक्ष स्लाइड में जोड़ा जाता है। 60 मिनट, 37 डिग्री सेल्सियस ऊष्मायन के बाद, सुपरनेटेंट को चैम्बर स्लाइड से हटा दिया जाता है और पीबीएस से धोया जाता है। एक बार जब स्लाइड पूरी तरह से सूख जाती है, तो इसे राइट-गीमेसा दाग से दाग दिया जाता है। आर. बी. सी. फागोसाइटोसिस के प्रमाण के लिए सूक्ष्मदर्शी के तहत कम से कम 600 (200 यदि संक्रमण 20 प्रतिशत से अधिक है) मोनोसाइट्स देखे जाते हैं। गुणवत्ता आश्वासन के लिए रोगी के नमूने के साथ एक सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण भी किया जाता है। व्याख्या यदि सकारात्मक या नकारात्मक नियंत्रण विफल हो जाते हैं, तो पूरी परीक्षण प्रक्रिया अमान्य है और इसे दोहराया जाना चाहिए। सकारात्मक एम. एम. ए. के लिए मानदंड प्रयोगशाला के अनुसार अलग-अलग होंगे, हालांकि सैंड्रा नैन्स एट अल द्वारा मूल रूप से स्थापित सीमा 20 प्रतिशत से अधिक फागोसाइटिक गतिविधि देखी गई है। चिकित्सकीय रूप से, एक सकारात्मक एमएमए इंगित करेगा कि परख में उपयोग किए जाने वाले रोगी के सीरम में चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण एंटीबॉडी होते हैं जो एंटीबॉडी-मध्यस्थता वाले फागोसाइटोसिस का कारण बनने में सक्षम होते हैं। तीव्र हेमोलिटिक आधान प्रतिक्रिया एंटीबॉडी ऑप्सोनाइजेशन एलोएंटीबॉडी संदर्भ आधान चिकित्सा रक्त परीक्षण भी देखें।