Proximity extension assay
निकटता विस्तार परख (पी. ई. ए.) एक जैविक नमूने जैसे सीरम या प्लाज्मा में मौजूद कई विशिष्ट प्रोटीनों की मात्रा का पता लगाने और उनकी मात्रा निर्धारित करने की एक विधि है। विधि का उपयोग प्रोटिओमिक्स के अनुसंधान क्षेत्र में किया जाता है, विशेष रूप से एफ़िनिटी प्रोटिओमिक्स, जहां एक में बायोमार्कर के रूप में उपयोग के लिए रक्त में कई विशिष्ट प्रोटीन की प्रचुरता में अंतर की खोज की जाती है। बायोमार्कर और बायोमार्कर हस्ताक्षर संयोजन, रोग की स्थिति और दवा की प्रभावकारिता निर्धारित करने के लिए उपयोगी हैं। प्रोटीन का पता लगाने के अधिकांश तरीकों में पहले प्रोटीन एनालाइट को पकड़ने और स्थिर करने के लिए एक ठोस चरण का उपयोग शामिल है, जहां एक या कुछ प्रोटीन में मात्रा निर्धारित की जाती है, जैसे कि एलिसा। इसके विपरीत, पी. ई. ए. को एक सजातीय एक नली प्रतिक्रिया समाधान में एक ठोस चरण के बिना किया जाता है, जहां एंटीबॉडी के सेट में अद्वितीय डी. एन. ए. अनुक्रम टैग, जिसे निकटता जांच कहा जाता है, प्रत्येक लक्षित प्रोटीन के लिए विशिष्ट जोड़े में काम करते हैं। पी. ई. ए. को अक्सर एंटीबॉडी का उपयोग करके किया जाता है और यह एक प्रकार का प्रतिरक्षात्मक परीक्षण है। निकटता जांच द्वारा लक्ष्य बंधन डीएनए-टैग की उनकी स्थानीय सापेक्ष प्रभावी सांद्रता को बढ़ाता है जो एक दूसरे के लिए कमजोर पूरकता के संकरण को सक्षम करता है जो फिर प्रत्येक लक्षित प्रोटीन के लिए विशिष्ट संयुक्त डीएनए अनुक्रम बनाने वाले डीएनए पॉलीमरेज़ मध्यस्थता विस्तार को सक्षम बनाता है। 3 'एक्सोन्यूक्लीज़ कुशल पॉलीमरेज़ का उपयोग पृष्ठभूमि के शोर को कम करता है और हाइपर थर्मोस्टेबल पॉलीमरेज़ एक प्राकृतिक गर्म-प्रारंभ प्रतिक्रिया के साथ एक सरल परख में मध्यस्थता करते हैं। डी. एन. ए. अनुक्रम के विस्तार उत्पादों का यह निर्मित पूल पी. सी. आर. द्वारा प्रवर्धित एम्प्लिकॉन बनाता है जहाँ प्रत्येक एम्प्लिकॉन अनुक्रम एक लक्षित प्रोटीन पहचान से मेल खाता है और मात्रा इसकी मात्रा को दर्शाती है। इसके बाद, इन एम्प्लिकॉनों का पता लगाया जाता है और डीएनए-टैग गिनती द्वारा वास्तविक समय पीसीआर या अगली पीढ़ी के डीएनए अनुक्रमण द्वारा उनकी मात्रा निर्धारित की जाती है। पी. ई. ए. विस्तार प्रतिक्रिया से एक पता लगाने योग्य डी. एन. ए. अनुक्रम उत्पन्न करने के लिए प्रति प्रोटीन दो सही तरीके से बंधे एंटीबॉडी के संयोजन की आवश्यकता के कारण एक साथ कई प्रोटीन का पता लगाने (तथाकथित मल्टीप्लेक्सिंग) में सक्षम बनाता है। अनुक्रम के केवल संज्ञानात्मक जोड़े को सही संकेत के रूप में पता लगाया जाता है, जो एक समय में लगभग 30 प्रोटीन पर सीमित ठोस चरण ग्रहण विधियों से परे मल्टीप्लेक्सिंग को सक्षम करता है। डी. एन. ए. प्रवर्धन शक्ति एक माइक्रोलीटर से नीचे भी मिनट के नमूने की मात्रा को सक्षम बनाती है। पी. ई. ए. का उपयोग 1000 से अधिक शोध प्रकाशनों में किया गया है। विकास पी. ई. ए. निकटता बंधन परख (पी. एल. ए.) से प्राप्त होता है जो डी. एन. ए. पोलीमरेज़ के बजाय निकटता जांच के अनुक्रमों को एकजुट करने के लिए डी. एन. ए. लिगाज़ एंजाइम का उपयोग करता है। पी. एल. ए. मल्टीप्लेक्सिंग के लिए भी उपयुक्त है, लेकिन सीरम और प्लाज्मा नमूनों के घटकों से लाइगेज एंजाइमों के एंजाइमेटिक नमूना चर अवरोध से पीड़ित है। डी. एन. ए. पोलीमरेज़ एंजाइम समान अवरोध से पीड़ित नहीं होते हैं और आसानी से बहुगुणित भी होते हैं और 384 प्रोटीन तक बहुगुणित किए गए हैं। पी. ई. ए. प्रदर्शन तापमान के प्रति संवेदनशील है क्योंकि यह एक डी. एन. ए. संकरण-आधारित प्रतिक्रिया है। इसलिए कमरे के तापमान पर बिना किसी गतिविधि के अति-तापीय बहुलकों का उपयोग बेंच टॉप रिएक्शन असेंबली का समर्थन करता है। संदर्भ प्रोटिओमिक्स जैव रसायन पहचान विधियाँ