Rabbit hybridoma
खरगोश संकर एक संकर कोशिका रेखा है जो खरगोश बी कोशिका का उत्पादन करने वाले एंटीबॉडी के कैंसरग्रस्त बी-कोशिका (मायलोमा) के साथ संलयन से बनती है। इतिहास खरगोश प्रतिरक्षा प्रणाली को उच्च आत्मीयता के साथ एंटीबॉडी विकसित करने और फॉस्फो-पेप्टाइड्स, कार्बोहाइड्रेट और इम्यूनोजेन्स सहित कई अणुओं की अधिक विविध पहचान के लिए एक वाहन के रूप में प्रलेखित किया गया है जो अन्यथा चूहे में प्रतिरक्षात्मक नहीं हैं। हालांकि, हाल तक, खरगोश से उपलब्ध एंटीबॉडी के प्रकार पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी के दायरे में सीमित थे। 1970 के दशक में माउस हाइब्रिडोमा प्रौद्योगिकी के विकास के बाद खरगोश मोनोक्लोनल एंटीबॉडी उत्पन्न करने के लिए कई प्रयास किए गए थे। खरगोश मोनोक्लोनल एंटीबॉडी बनाने के लिए माउस-रैबिट हेटेरो-हाइब्रिडॉमा में शोध किया गया था। हालांकि, इन हेटेरो-हाइब्रिडॉमा को अंततः क्लोन करना मुश्किल था, और क्लोन, आम तौर पर अस्थिर थे, और लंबे समय तक एंटीबॉडी का स्राव नहीं करते थे। प्रारंभिक संलयन भागीदार 1995 में, शिकागो के लोयोला विश्वविद्यालय में कैथरीन नाइट और उनके सहयोगियों ने इम्यूनोग्लोबुलिन भारी और हल्की श्रृंखला बढ़ाने वालों के नियंत्रण में ऑन्कोजीन्स वी-ए. बी. एल. और सी-माइक को अधिक व्यक्त करने वाले एक दोहरे ट्रांसजेनिक खरगोश को विकसित करने में सफलता प्राप्त की। खरगोश ने एक मायलोमा जैसा ट्यूमर बनाया, जिससे 240ई-1 नामक एक प्लाज्मासाइटोमा कोशिका रेखा को अलग करने की अनुमति मिली। खरगोश के लिम्फोसाइट्स के साथ 240ई-1 कोशिकाओं के संलयन ने संकर का उत्पादन किया जो खरगोश के मोनोक्लोनल एंटीबॉडी को एक सुसंगत तरीके से स्रावित करता है। हालाँकि, 1970 के दशक में विकसित प्रारंभिक माउस मायलोमा रेखाओं की तरह, स्थिरता एक चिंता का विषय था। डॉ. नाइट की प्रयोगशाला से 240ई-1 कोशिका रेखा प्राप्त करने वाली कई प्रयोगशालाओं ने संलयन कोशिका रेखा 240ई-1 के साथ स्थिरता समस्याओं की सूचना दी। 1996 में, कैलिफोर्निया सैन फ्रांसिस्को विश्वविद्यालय (यू. सी. एस. एफ.) में वीमिन झू और रॉबर्ट पायटेला ने डॉ. नाइट की प्रयोगशाला से 240ई-1 प्राप्त किया और एक बेहतर खरगोश संकर विकसित करने का प्रयास किया। 240ई-1 की विशेषताओं में सुधार बार-बार उप-प्रतिरूपण, उच्च संलयन दक्षता के लिए चयन, मजबूत विकास और रूपात्मक विशेषताओं जैसे कि एक चरण-विपरीत सूक्ष्मदर्शी के तहत एक उज्ज्वल उपस्थिति द्वारा पूरा किया गया था। चयनित उप-क्लोनों का एक स्थिर संकर और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी स्राव का उत्पादन करने की उनकी क्षमता के लिए आगे परीक्षण किया गया। उप-प्रतिरूपण और चयन प्रक्रियाओं के कई दौरों के बाद, 240ई-डब्ल्यू नामक एक नई कोशिका रेखा की पहचान की गई और जो बेहतर संलयन दक्षता और स्थिरता को व्यक्त करती है। सेल लाइन 240ई-डब्ल्यू को तब से अनुसंधान और वाणिज्यिक अनुप्रयोगों के लिए खरगोश मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के उत्पादन के लिए और विकसित और अनुकूलित किया गया है। प्रक्रिया खरगोश में हाइब्रिडोमा बनने की प्रक्रिया में पहले एक खरगोश से बी-कोशिकाएं प्राप्त करना शामिल है जिसे प्रतिरक्षित किया गया है। खरगोश के लिए कई टीकाकरण प्रोटोकॉल हैं, विशेष रूप से पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी की पीढ़ी के लिए। टीकाकरण के बाद, बी-कोशिकाओं को हाइब्रिडोमा बनाने के लिए एक उम्मीदवार खरगोश संलयन भागीदार कोशिका रेखा के साथ जोड़ा जाता है। हाइब्रिडोमा से परिणामी एंटीबॉडी की एक एंटीजन के लिए जांच की जाती है जो एलिसा, वेस्टर्न ब्लॉट, इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री और एफएसीएस जैसे नैदानिक परीक्षणों द्वारा रुचि के मानदंडों को पूरा करता है। मोनोक्लोनल विशेषताओं को सुनिश्चित करने के लिए परिणामी हाइब्रोडोमा को उप-क्लोन किया जा सकता है। राष्ट्रीय कैंसर संस्थान (बेथेस्डा, यू. एस. ए.) में खरगोश एंटीबॉडी मिशेल हो और इरा पास्टन के मानवीयकरण ने खरगोश मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के एक समूह को अलग किया (जैसे। YP218, YP223) जो मेसोथेलिन के दुर्लभ एपिटोप को पहचानते हैं, जिसमें कैंसर चिकित्सा के लिए सी टर्मिनल छोर के करीब खराब प्रतिरक्षात्मक स्थल शामिल हैं। डॉ. हो की प्रयोगशाला ने प्रोटीन डेटा बैंक से अपने एंटीजन के साथ खरगोश एंटीबॉडी की जटिल संरचनाओं का विश्लेषण किया, और अपने एंटीजन से 6 एंगस्ट्रॉम की दूरी के भीतर खरगोश एफवी पर एंटीजन-संपर्क करने वाले अवशेषों की पहचान की। उन्होंने "एच. वी. 4" और "एल. वी. 4", गैर-पूरकता-निर्धारण क्षेत्र (सी. डी. आर.) लूप का नाम दिया जो संरचनात्मक रूप से प्रतिजन के करीब हैं और क्रमशः खरगोश भारी श्रृंखला और हल्की श्रृंखला के ढांचे 3 में स्थित हैं। कम्प्यूटेशनल स्ट्रक्चरल मॉडलिंग के आधार पर, हो और झांग ने संयुक्त कबात/आई. एम. जी. टी./पैराटोम सी. डी. आर. को मानव जर्मलाइन फ्रेमवर्क अनुक्रम में ग्राफ्टिंग करके एक मानवीकरण रणनीति तैयार की। मानवकृत खरगोश एफ. वी. एस. से बने इम्यूनोटॉक्सिन (जैसे। एच. वाई. पी. 218) को चिकित्सकीय रूप से उपयोग किए जाने वाले विष से जोड़कर ट्यूमर कोशिकाओं के खिलाफ उनके मूल खरगोश एफ. वी. एस. से प्राप्त इम्यूनोटॉक्सिन की तुलना में मजबूत साइटोटॉक्सिसिटी दिखाई दी। एच. वाई. पी. 218 एंटीबॉडी पर आधारित सी. ए. आर. टी. कोशिकाएं भी चूहों में ट्यूमर के विकास का प्रभावी अवरोध दिखाती हैं। विधि (अर्थात। संयुक्त कबात/आई. एम. जी. टी./पैराटोम खरगोश सी. डी. आर. को एक स्थिर मानव जर्मलाइन ढांचे में ग्राफ्टिंग) खरगोश एंटीबॉडी को मानवीय बनाने के लिए एक सामान्य दृष्टिकोण के रूप में सुझाया गया है। संदर्भ बाहरी लिंक 240 ई-डब्ल्यू प्रतिरक्षा विज्ञान जैव प्रौद्योगिकी प्रतिरक्षा प्रणाली मोनोक्लोनल एंटीबॉडी चिकित्सीय एंटीबॉडी खरगोश कोशिका रेखाओं के लिए 240 ई-1 सेलोसॉरस प्रविष्टि के लिए बाह्य लिंक सेलोसॉरस प्रविष्टि