Simmons' citrate agar
सिमंस के साइट्रेट अगर का उपयोग साइट्रेट उपयोग के आधार पर ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया को अलग करने के लिए किया जाता है, विशेष रूप से एंटरोबैक्टीरियासी परिवार के गैमाप्रोटोबैक्टीरिया या यहां तक कि एक ही जीनस की प्रजातियों के बीच अंतर करने के लिए। उदाहरण के लिए, साल्मोनेला एंटरटिडिस सिमंस के अगर पर एक सकारात्मक (नीला) परिणाम देगा और इस प्रकार साल्मोनेला टाइफी, साल्मोनेला पुलोरम और साल्मोनेला गैलिनरम जैसी अन्य साल्मोनेला प्रजातियों से अलग होगा, जो एक नकारात्मक (हरा) परिणाम देगा। सिमंस आगर के लिए एक आम अनुप्रयोग मल संदूषण के लिए भोजन या पानी की निगरानी करना है, जो ई. कोलाई जैसे एंटरोबैक्टेरल्स क्रम में मल कोलीफॉर्म की उपस्थिति से इंगित होता है। एक नमूने में, ई. कोलाई, जो साइट्रेट-नकारात्मक है, को गैर-मल, साइट्रेट-पॉजिटिव कोलीफॉर्म से अलग किया जा सकता है जो अक्सर सिमंस आगर का उपयोग करके पानी, मिट्टी और पौधों में पाए जाते हैं। इसके अतिरिक्त, सिमंस आगर का उपयोग आमतौर पर आई. एम. वी. आई. सी. परीक्षणों के हिस्से के रूप में कोलीफॉर्म की पहचान करने के लिए किया जाता है। यह उन जीवों के चयन के लिए उपयोगी है जो साइट्रेट को अपने मुख्य कार्बन और ऊर्जा स्रोत के रूप में उपयोग करते हैं। यह एक परिभाषित, चयनात्मक और विभेदक माध्यम है जो एक जीव की एकमात्र कार्बन स्रोत के रूप में साइट्रेट और एकमात्र नाइट्रोजन स्रोत के रूप में अमोनियम आयनों का उपयोग करने की क्षमता का परीक्षण करता है। साइट्रेट के साइट्रेट पारगम्यता के माध्यम से एक कोशिका में प्रवेश करने के बाद, साइट्रेट लाइज़ इसे एसीटेट और ऑक्सालोएसेटेट में विभाजित कर देता है, जो आगे कार्बन डाइऑक्साइड और पायरूवेट में टूट जाता है। कोशिका के पी. एच. के आधार पर, पायरूवेट एसीटेट में बदल सकता है और पी. एच. 7 से नीचे या एसीटेट + लैक्टेट + कार्बन डाइऑक्साइड और एसीटॉइन + कार्बन डाइऑक्साइड पी. एच. 7 और उससे नीचे हो सकता है। जब अगर में पानी और सोडियम कार्बोनेट साइट्रेट चयापचय में जारी कार्बन डाइऑक्साइड के साथ प्रतिक्रिया करते हैं, तो क्षारीय उत्पाद पीएच बनाते हैं और बढ़ाते हैं, जिससे अगर का रंग हरे से नीले रंग में बदल जाता है। इस माध्यम में सोडियम क्लोराइड, सोडियम साइट्रेट, अमोनियम डाइहाइड्रोजन फॉस्फेट, डाइपोटैशियम फॉस्फेट और मैग्नीशियम सल्फेट होते हैं। इसमें ब्रोमोथाइमॉल ब्लू भी होता है, जो एक पी. एच. संकेतक है। ब्रोमोथाइमॉल नीला 6.9 से कम पी. एच. पर हरा होता है, और फिर 7.6 या उससे अधिक पी. एच. पर नीला हो जाता है। सिमंस के साइट्रेट अगर को 1926 में जेम्स एस. सिमंस द्वारा विकसित किया गया था, जिसमें साइट्रेट चयापचय से ऑक्सीडेटिव प्रतिक्रियाओं के परिणामस्वरूप पीएच में परिवर्तन का निरीक्षण करने के लिए कोसर के साइट्रेट अगर में पीएच संकेतक के रूप में 1.5% अगर और ब्रोमोथिमोल ब्लू को जोड़ा गया था। 1923 में स्टीवर्ट ए. कोसर द्वारा विकसित कोसर का अगर एक स्पष्ट, रंगहीन अगर है जो मैलापन द्वारा बैक्टीरिया के विकास के अवलोकन की अनुमति देता है। एक रंगहीन अगर के साथ, नकारात्मक परिणामों को सकारात्मक के रूप में गलत व्याख्या करना अधिक आम है, जिसे सिमंस द्वारा ब्रोमोथिमोल ब्लू जोड़ने के संशोधन से कम किया जा सकता है। संरचना माध्यम को निम्नलिखित संरचना के साथ पीएच 6.9 ± 0.2 (25 डिग्री सेल्सियस पर) पर 1 लीटर डियोनाइज्ड पानी में तैयार किया जाता है, तैयारी हालांकि इसका उपयोग अन्य प्रारूपों (जैसे, पेट्री प्लेट) में किया जा सकता है, सिमंस के साइट्रेट अगर का उपयोग अक्सर परीक्षण ट्यूबों में तिरछे या ढलानों में किया जाता है। पेट्री व्यंजनों पर तिरछा उपयोग करने का एक लाभ ऑक्सीजन तक पहुंच है, जो साइट्रेट चयापचय के लिए आवश्यक है। सिमंस आगर को आपूर्तिकर्ताओं से तैयार पाउडर या स्लेंट के रूप में खरीदा जा सकता है। एक तिरछा परीक्षण नली में गर्म अगर जोड़कर और इसे एक तिरछे कोण पर ठोस होने की अनुमति देकर एक तिरछा तैयार किया जाता है। एक नमूने से अगर में कोशिकाओं को स्थानांतरित करने के लिए, एक निर्जंतुक सुई का उपयोग नमूने से एक अलग कॉलोनी का चयन करने और अगर की सतह पर लकीर लगाने के लिए किया जाता है, जैसा कि अगर प्लेट पर किया जाता है। एक हल्का कोशिका इनोकुलम तैयार करना महत्वपूर्ण है क्योंकि इनोकुलम से कार्बन और नाइट्रोजन युक्त पोषक तत्वों या मृत जीवाणु कोशिका पदार्थ को ले जाने से गलत सकारात्मक परिणाम मिल सकते हैं। कोशिका के नमूने को स्थानांतरित करने के लिए सुई का उपयोग करने से अतिरिक्त इनोकुलम को ले जाने में कमी आ सकती है। सिमंस के साइट्रेट अगर पर उगने वाले व्याख्या जीव एकमात्र कार्बन स्रोत के रूप में साइट्रेट का उपयोग करने में सक्षम हैं और वे माध्यम में अमोनियम नमक का चयापचय कर सकते हैं (विकास के लिए एकमात्र नाइट्रोजन स्रोत के रूप में कार्य कर रहे हैं)। साइट्रेट के उपयोग से उपोत्पाद के रूप में कार्बोनेट और बाइकार्बोनेट का निर्माण होता है। साइट्रेट का क्षरण करने वाले जीवों को अमोनिया का उत्पादन करते हुए अमोनियम लवणों का भी उपयोग करना चाहिए, इस प्रकार माध्यम के पीएच को बढ़ाना चाहिए। पी. एच. में वृद्धि तब ब्रोमोथाइमॉल नीले संकेतक में रंग परिवर्तन का कारण बनती है, जिससे यह नीला हो जाता है। तटस्थ परिस्थितियों में माध्यम हरा रंग बना रहता है। नीले रंग में रंग परिवर्तन उपयोगी है क्योंकि सिमंस के साइट्रेट अगर पर वृद्धि अक्सर सीमित होती है और अगर यह रंग परिवर्तन के लिए नहीं होती तो इसका निरीक्षण करना मुश्किल होता। कभी-कभी, सिमंस के साइट्रेट अगर पर वृद्धि का पता लगाना संभव है, बिना नीले रंग के रंग परिवर्तन के। इसे साइट्रेट उपयोग परीक्षण के लिए नकारात्मक के रूप में प्राप्त किया जाना चाहिए। साल्मोनेला और प्रोविडेन्सिया जैसे बैक्टीरिया ऐसे माध्यमों पर विकसित होते हैं। संदर्भ बाहरी लिंक ए. एस. एम. माइक्रोबेलिब्रेरी लेख "साइट्रेट टेस्ट प्रोटोकॉल" माइक्रोबायोलॉजिकल मीडिया