Tn3 transposon
टीएन3 ट्रांसपोसन एक 4957 आधार जोड़ी गतिशील आनुवंशिक तत्व है, जो प्रोकैरियोट्स में पाया जाता है। यह तीन प्रोटीनों को कूटबद्ध करता हैः β-लैक्टामेज़, एक एंजाइम जो β-लैक्टम एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति प्रतिरोध प्रदान करता है (और जीन ब्ला द्वारा कूटबद्ध किया जाता है)। टीएन3 ट्रांसपोसेज (जीन टीएनपीए द्वारा एन्कोडेड) टीएन3 रिज़ॉल्वेस (जीन टीएनपीआर द्वारा एन्कोडेड) शुरू में ट्रांसपोसेज के एक दमनक के रूप में खोजा गया, रिज़ॉल्वेस भी टीएन3 प्रतिकृति (शेरैट 1989) को सुविधाजनक बनाने में भूमिका निभाता है। ट्रांसपोसन 38बीपी उल्टे दोहराव की एक जोड़ी से घिरा हुआ है। प्रतिकृति का तंत्र चरण 1-प्रतिकृति एकीकरण यह पहला चरण ट्रांसपोसेज द्वारा उत्प्रेरित किया जाता है। ट्रांसपोसन (दाता प्लास्मिड) वाला प्लास्मिड एक मेजबान प्लास्मिड (लक्ष्य प्लास्मिड) के साथ फ्यूज हो जाता है। इस प्रक्रिया में, ट्रांसपोसन और मेजबान डीएनए का एक छोटा खंड दोहराया जाता है। अंतिम उत्पाद एक 'कोइनटेग्रेट' प्लास्मिड है जिसमें ट्रांसपोसन की दो प्रतियां होती हैं। शापिरो (1978) ने इस प्रक्रिया के लिए निम्नलिखित तंत्र का प्रस्ताव रखाः चार एकल-स्ट्रैंड दरारें होती हैं-दाता प्लास्मिड के प्रत्येक स्ट्रैंड पर एक और लक्ष्य प्लास्मिड के प्रत्येक स्ट्रैंड पर एक। दाता और लक्षित प्लास्मिड एक साथ जुड़े होते हैं, लेकिन मूल दरारों की स्थिति के कारण दो एकल-फंसे हुए क्षेत्र होते हैं। डीएनए प्रतिकृति एकल-फंसे हुए क्षेत्रों को दो बार फंसे हुए बनाती है, मौजूदा स्ट्रैंड को एक टेम्पलेट के रूप में उपयोग करती है। यह इस चरण में है कि ट्रांसपोसन को दोहराया जाता है। दाहिनी ओर के आरेख उस तरीके को दर्शाते हैं जिसमें प्लास्मिड के जुड़ने के बाद दरारों की स्थिति कुछ क्षेत्रों की प्रतिकृति की ओर ले जाती है। चरण 2-रिज़ॉल्यूशन मेजबान और लक्षित अणुओं को अलग करने के लिए टीएन3 रिज़ॉल्वेस रेस नामक एक विशिष्ट स्थल पर ट्रांसपोसन की पुरानी और नई प्रति के बीच साइट-विशिष्ट पुनर्संयोजन को निष्पादित करता है, जो ट्रांसपोसन की प्रत्येक प्रति में मौजूद होता है। रेस 114 बी. पी. लंबा है और इसमें 3 उप-स्थल हैं, अर्थात् साइट I, II और III। इनमें से प्रत्येक स्थल अलग-अलग लंबाई (क्रमशः 28,34 और 25 बी. पी.) के हैं और वे असमान रूप से 22 बी. पी. के साथ साइट I और II को अलग करते हैं और साइट II और III के बीच केवल 5 बी. पी. हैं। साइटों में 6 बी. पी. उल्टे दोहराए गए रूपांकन होते हैं जो परिवर्तनीय लंबाई के एक केंद्रीय अनुक्रम को घेरते हैं। ये रूपांकन समाधान के लिए बाध्यकारी स्थलों के रूप में कार्य करते हैं, ताकि प्रत्येक स्थल एक समाधान डिमर को बांधता है लेकिन अलग-अलग आत्मीयता और शायद थोड़ा अलग प्रोटीन-डी. एन. ए. जटिल वास्तुकला के साथ। पुनः संयोजन के लिए तीनों उप-स्थल आवश्यक हैं। पुनर्संयोजन में, प्रत्येक उप-स्थल से बंधे रिज़ॉल्वेज़ डाइमर के साथ दो सीधे दोहराए गए रेस साइट, एक बड़ी जटिल संरचना बनाने के लिए एक साथ आते हैं जिसे सिनेप्टोसोम कहा जाता है। साइट II और III से बंधे रिज़ॉल्वेस इस परिसर के संयोजन की शुरुआत करता है। इस संरचना में, जिसकी सटीक वास्तुकला अभी भी स्पष्ट नहीं है, दो रेस साइटों को इस तरह से आपस में जोड़ा गया है कि साइट I की दो प्रतियों को जोड़ा जा सके, जिससे प्रत्येक साइट से बंधे रिज़ॉल्वेज डाइमर को एक टेट्रामर बनाने की अनुमति मिलती है। पुनः, यह सहायक स्थलों (साइट II और III) पर बंधे रिज़ॉल्वेज़ डाइमरों और साइट I पर रिज़ॉल्वेज़ के बीच की अंतःक्रिया है जो दो डाइमरों को सिनेप्स करने और एक टेट्रामर बनाने का कारण बनती है। टेट्रामर बनने के बाद यह सक्रिय हो जाता है और ऊपर और नीचे के डीएनए स्ट्रैंड को एक साथ साइट I के बीच में 2 बी. पी. ओवरहैंग के साथ विभाजित किया जाता है। स्ट्रैंड का आदान-प्रदान अभी तक अज्ञात तंत्र द्वारा होता है जिसके परिणामस्वरूप 180° का शुद्ध घूर्णन होता है। स्ट्रैंड एक्सचेंज के बाद धर्म (स्टार्क एट अल।, 1992) होता है। दो सीधे दोहराए गए रेस साइटों के बीच पुनर्संयोजन दो मूल अणुओं में "सहसंयोजन" को अलग करता है, या हल करता है, जिनमें से प्रत्येक में अब Tn3 ट्रांसपोसन की एक प्रति होती है। समाधान के बाद ये दोनों अणु एक साधारण दो-नोडेड कैटेनेन के रूप में जुड़े रहते हैं जिसे आसानी से एक प्रकार II टोपोइसोमरेज़ (ग्रिंडले 2002) द्वारा विवो में अलग किया जा सकता है। जंगली प्रकार के समाधान प्रणाली के लिए बिल्कुल एक सुपरकॉइल्ड सब्सट्रेट की आवश्यकता होती है और यह कि पुनर्संयोजन स्थल एक ही डीएनए अणु पर सीधे दोहराव में उन्मुख होते हैं। हालांकि, कई "विनियमित" या "अतिसक्रिय" उत्परिवर्ती जो सहायक स्थलों की आवश्यकता खो चुके हैं, उन्हें अलग कर दिया गया है। ये उत्परिवर्ती केवल साइट I की दो प्रतियों के बीच पुनर्संयोजन को उत्प्रेरित करने में सक्षम हैं, जो मूल रूप से पुनर्संयोजन साइट के आकार को 114bp से घटाकर केवल 28bp कर देता है। इसके अलावा, इन उत्परिवर्तकों की कोई सुपरकॉइलिंग या कनेक्टिविटी आवश्यकताएं नहीं हैं (अर्नोल्ड एट अल।, 1999) और स्तनधारी कोशिकाओं में काम करने के लिए दिखाया गया है। अतिसक्रिय समाधान उत्परिवर्ती अब तक परिवर्तित अनुक्रम विशिष्टता के साथ समाधान बनाने में उपयोगी साबित हुए हैं, लेकिन संरचनात्मक कार्य में भी। संपूर्ण समाधान पुनर्संयोजन प्रतिक्रिया को इन विट्रो में पुनः प्रस्तुत किया जा सकता है, जिसमें जंगली प्रकार के प्रोटीन या अतिसक्रिय उत्परिवर्तकों का उपयोग करके केवल समाधान, एक सब्सट्रेट डीएनए और बहुआयामी धनायन की आवश्यकता होती है। अतिसक्रिय समाधान उत्परिवर्ती, यदि आगे विकसित किए जाते हैं, तो आणविक जीव विज्ञान में अब तक सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली पुनर्संयोजन प्रणाली, क्री और एफएलपी का विकल्प बन सकते हैं। संदर्भ शेराट, डी. जे. (1989)। टीएन3 और संबंधित स्थानांतरणीय तत्वः स्थल-विशिष्ट पुनर्संयोजन और स्थानांतरन। बर्ग, डी. ई., होवे, एम. (एडस्) मोबाइल डी. एन. ए. में। अमेरिकन सोसाइटी फॉर माइक्रोबायोलॉजी, वाशिंगटन, डी. सी. पीपी. 163-184 ग्रिंडले, एन. डी. एफ. (2002)। टीएन3 जैसे तत्वों की गतिः स्थानांतरण और संकल्प को एकीकृत करना। मोबाइल डीएनए II में, क्रेग, एन., क्रेगी, आर., गेलर्ट, एम. और लैम्बोविट्ज़, ए. (एड। ), पीपी 272-302। ए. एस. एम. प्रेस, वाशिंगटन, डी. सी., यू. एस. ए. आणविक जीवविज्ञान आणविक आनुवंशिकी डी. एन. ए. गतिशील आनुवंशिक तत्व