PBR322
पी. बी. आर. 322 एक प्लास्मिड है और यह पहले व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले ई. कोलाई क्लोनिंग वैक्टरों में से एक था। कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, सैन फ्रांसिस्को में हर्बर्ट बोयर की प्रयोगशाला में 1977 में बनाया गया, इसका नाम पोस्टडॉक्टरल शोधकर्ता फ्रांसिस्को बोलिवर ज़पाटा और रेमंड एल. रोड्रिगेज के नाम पर रखा गया था। पी का अर्थ है "प्लास्मिड", और बीआर का अर्थ है "बोलिवर" और "रोड्रिगेज"। पी. बी. आर. 322 लंबाई में 4361 आधार जोड़े हैं और इसमें दो एंटीबायोटिक प्रतिरोध जीन हैं-जीन बी. एल. ए. एन्कोडिंग एम्पिसिलिन प्रतिरोध (ए. एम. पी. आर.) प्रोटीन, और जीन टी. टी. ए. एन्कोडिंग टेट्रासाइक्लिन प्रतिरोध (टी. टी. आर.) प्रोटीन। इसमें पी. एम. बी. 1 की प्रतिकृति की उत्पत्ति होती है, और आर. ओ. पी. जीन, जो प्लास्मिड प्रतिलिपि संख्या के एक अवरोधक को कूटबद्ध करता है। प्लास्मिड में चालीस से अधिक प्रतिबंध एंजाइमों के लिए अद्वितीय प्रतिबंध स्थल हैं। इन चालीस स्थलों में से ग्यारह टेटआर जीन के भीतर स्थित हैं। टेटआर जीन के प्रवर्तक के भीतर प्रतिबंध एंजाइम हिंद III और क्लाई के लिए दो स्थल हैं। इन एंटीबायोटिक प्रतिरोध जीन के स्रोत एम्पीआर gene.The के अंदर छह प्रमुख प्रतिबंध स्थल हैं जो टेट्रासाइक्लिन के लिए पी. एस. सी. 101 और एम्पिसिलिन के लिए आर. एस. एफ. 2124 से हैं। वृत्ताकार अनुक्रम को इस तरह से क्रमांकित किया गया है कि 0 अद्वितीय इकोआरआई साइट का मध्य है और गिनती टेटआर जीन के माध्यम से बढ़ती है। उदाहरण के लिए अगर हमें एम्पिसिलिन को हटाना है, तो हमें पी. एस. टी. आई. के खिलाफ प्रतिबंध एंडोन्यूक्लीज़ या आणविक कैंची का उपयोग करना चाहिए और फिर पी. बी. आर. 322 एम्पिसिलिन के लिए प्रतिरोधी बन जाएगा। प्रविष्टि निष्क्रियता की वही प्रक्रिया टेट्रासाइक्लिन पर भी लागू की जा सकती है। एम्पीआर जीन पेनिसिलिन बीटा-लैक्टामेज़ है। प्रवर्तक पी1 और पी3 बीटा-लैक्टामेज़ जीन के लिए हैं। पी3 प्राकृतिक प्रवर्तक है, और पी1 को पी. बी. आर. 322 बनाने के लिए दो अलग-अलग डी. एन. ए. टुकड़ों के बंधन द्वारा कृत्रिम रूप से बनाया जाता है। पी2 पी1 के समान क्षेत्र में है, लेकिन यह विपरीत स्ट्रैंड पर है और टेट्रासाइक्लिन प्रतिरोध जीन की दिशा में प्रतिलेखन शुरू करता है। पृष्ठभूमि प्रारंभिक प्रतिरूपण प्रयोग प्राकृतिक प्लास्मिड जैसे कोलई1 और पी. एस. सी. 101 का उपयोग करके किए जा सकते हैं। इनमें से प्रत्येक प्लास्मिड के अपने फायदे और नुकसान हो सकते हैं। उदाहरण के लिए, कोलई1 प्लास्मिड और इसके व्युत्पन्न में उच्च प्रतिलिपि संख्या का लाभ होता है और प्लास्मिड की उच्च उपज का उत्पादन करने के लिए प्लास्मिड के क्लोराम्फेनिकॉल प्रवर्धन की अनुमति देता है, हालांकि कोलिसिन ई1 के प्रति प्रतिरक्षा के लिए स्क्रीनिंग तकनीकी रूप से सरल नहीं है। साल्मोनेला पनामा का एक प्राकृतिक प्लास्मिड, प्लास्मिड पी. एस. सी. 101, टेट्रासाइक्लिन प्रतिरोध प्रदान करता है जो एंटीबायोटिक चयन के साथ सरल स्क्रीनिंग प्रक्रिया की अनुमति देता है, लेकिन यह एक कम प्रतिलिपि संख्या वाला प्लास्मिड है जो प्लास्मिड की उच्च उपज नहीं देता है। एक अन्य प्लास्मिड, आरएसएफ 2124, जो कोलई1 का व्युत्पन्न है, एम्पिसिलिन प्रतिरोध प्रदान करता है लेकिन बड़ा है। कई अन्य प्लास्मिडों का निर्माण कृत्रिम रूप से किया गया था ताकि एक ऐसा बनाया जा सके जो क्लोनिंग उद्देश्य के लिए आदर्श हो, और पी. बी. आर. 322 को कई लोगों द्वारा सबसे बहुमुखी पाया गया और इसलिए इसका सबसे अधिक उपयोग किया गया। इसमें दो एंटीबायोटिक प्रतिरोध जीन हैं, जो चयन योग्य मार्कर के रूप में हैं, और कई सुविधाजनक अद्वितीय प्रतिबंध स्थल हैं जो इसे क्लोनिंग वेक्टर के रूप में उपयुक्त बनाते हैं। प्लास्मिड का निर्माण 3 मुख्य स्रोतों से आनुवंशिक सामग्री के साथ किया गया था-पी. एस. सी. 101 का टेट्रासाइक्लिन प्रतिरोध जीन, आर. एस. एफ. 2124 का एम्पिसिलिन प्रतिरोध जीन, और पी. एम. बी. 1 के प्रतिकृति तत्व, जो कोल. ई. 1 प्लास्मिड के करीबी रिश्तेदार हैं। पी. बी. आर. 322 पर आधारित बड़ी संख्या में अन्य प्लास्मिड का निर्माण विशेष रूप से विभिन्न प्रकार के उद्देश्यों के लिए किया गया है। उदाहरणों में प्लाजमिड की पी. यू. सी. श्रृंखला शामिल है। एक्स्ट्राक्रोमोसोमल प्रोटीन अभिव्यक्ति और शटल वैक्टर के लिए अधिकांश अभिव्यक्ति वैक्टर में प्रतिकृति की उत्पत्ति पी. बी. आर. 322 होती है, और पी. बी. आर. 322 के टुकड़े इंट्रास्पेशिस शटल या द्विआधारी वैक्टर और वैक्टर के निर्माण में गुणसूत्र से डी. एन. ए. के लक्षित एकीकरण और निष्कासन के लिए बहुत लोकप्रिय हैं। डी. एन. ए. अनुक्रम पी. बी. आर. 322 में अनुक्रम प्रतिबंध एंजाइम काटने की साइटों की सूची भी देखें संदर्भ बाहरी लिंक पी. बी. आर. 322 मानचित्र पी. बी. आर. 322 विशेषताएँ पी. बी. आर. 322 डी. एन. ए. गतिशील आनुवंशिक तत्व आणविक जीव विज्ञान तकनीक प्लाजमिड