H&E stain
हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन दाग (या हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन दाग या हेमेटोक्सिलिन-ईओसिन दाग; अक्सर एच एंड ई दाग या एचई दाग के रूप में संक्षिप्त) ऊतक विज्ञान में उपयोग किए जाने वाले प्रमुख ऊतक दागों में से एक है। यह चिकित्सा निदान में सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला दाग है और अक्सर स्वर्ण मानक होता है। उदाहरण के लिए, जब एक रोगविज्ञानी एक संदिग्ध कैंसर की बायोप्सी को देखता है, तो ऊतकीय खंड में एच एंड ई के दाग लगने की संभावना होती है। एच एंड ई दो ऊतकीय दागों का संयोजन हैः हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन। हेमेटोक्सिलिन कोशिका नाभिक पर एक बैंगनी नीला रंग दाग लगाता है, और ईओसिन बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स और साइटोप्लाज्म गुलाबी रंग दाग लगाता है, अन्य संरचनाओं के साथ इन रंगों के विभिन्न रंग, रंग और संयोजन लेते हैं। इसलिए एक रोगविज्ञानी आसानी से एक कोशिका के परमाणु और कोशिका-द्रव्य भागों के बीच अंतर कर सकता है, और इसके अतिरिक्त, दाग से रंग के समग्र पैटर्न कोशिकाओं के सामान्य लेआउट और वितरण को दर्शाते हैं और ऊतक के नमूने की संरचना का एक सामान्य अवलोकन प्रदान करते हैं। इस प्रकार, स्वयं विशेषज्ञ मनुष्यों द्वारा और उन विशेषज्ञों (डिजिटल पैथोलॉजी में) की सहायता करने वाले सॉफ्टवेयर द्वारा पैटर्न की पहचान, ऊतकीय जानकारी प्रदान करती है। इस दाग संयोजन को 1877 में रूस के कासन इंपीरियल विश्वविद्यालय में रसायनज्ञ एन. विसोज़की द्वारा पेश किया गया था। उपयोग एच एंड ई धुंधला करने की प्रक्रिया कुछ हद तक ऊतक विज्ञान में प्रमुख दाग है क्योंकि इसे जल्दी से किया जा सकता है, महंगा नहीं है, और ऊतकों को इस तरह से दाग लगाता है कि काफी मात्रा में सूक्ष्म शरीर रचना प्रकट होती है, और इसका उपयोग हिस्टोपैथोलॉजिकल स्थितियों की एक विस्तृत श्रृंखला का निदान करने के लिए किया जा सकता है। एच एंड ई धुंधलापन के परिणाम ऊतक को ठीक करने के लिए उपयोग किए जाने वाले रसायन या प्रयोगशाला प्रोटोकॉल में थोड़ी विसंगतियों पर अत्यधिक निर्भर नहीं हैं, और ये कारक ऊतक विज्ञान में इसके नियमित उपयोग में योगदान करते हैं। एच एंड ई धुंधलापन हमेशा सभी ऊतकों, कोशिकीय संरचनाओं या रासायनिक पदार्थों के वितरण को अलग करने के लिए पर्याप्त विपरीतता प्रदान नहीं करता है, और इन मामलों में अधिक विशिष्ट दाग और विधियों का उपयोग किया जाता है। एच एंड ई प्रक्रिया में उपयोग किए जाने वाले हेमेटोक्सिलिन समाधान (सूत्रीकरण) तैयार करने के कई तरीके हैं, इसके अलावा, एच एंड ई दागदार स्लाइडों के उत्पादन के लिए कई प्रयोगशाला प्रोटोकॉल हैं, जिनमें से कुछ एक निश्चित प्रयोगशाला के लिए विशिष्ट हो सकते हैं। हालांकि कोई मानक प्रक्रिया नहीं है, परंपरा के अनुसार परिणाम उचित रूप से सुसंगत हैं कि कोशिका नाभिक नीले रंग के हैं और कोशिका द्रव्य और बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स गुलाबी रंग के हैं। हिस्टोलॉजी प्रयोगशालाएँ किसी विशेष रोगविज्ञानी के लिए धुंधलापन की मात्रा या प्रकार को भी समायोजित कर सकती हैं। ऊतकों को एकत्र करने (अक्सर बायोप्सी के रूप में) और ठीक करने के बाद, उन्हें आम तौर पर निर्जलित किया जाता है और पिघले हुए पैराफिन मोम में एम्बेड किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप ब्लॉक को एक माइक्रोटोम पर लगाया जाता है और पतले स्लाइस में काटा जाता है। स्लाइसों को सूक्ष्मदर्शी स्लाइडों पर चिपकाया जाता है जिस बिंदु पर मोम को एक विलायक से हटा दिया जाता है और स्लाइडों से जुड़े ऊतक स्लाइसों को फिर से पानी दिया जाता है और दाग के लिए तैयार होते हैं। वैकल्पिक रूप से, एच एंड ई दाग मोह सर्जरी में सबसे अधिक उपयोग किया जाने वाला दाग है जिसमें ऊतकों को आम तौर पर जमाया जाता है, एक क्रायोस्टेट (एक माइक्रोटोम जो जमे हुए ऊतक को काटता है) पर काटा जाता है, शराब में लगाया जाता है, और फिर दाग लगाया जाता है। एच एंड ई धुंधला करने की विधि में एक धातु नमक, या मोर्डेंट के साथ मिश्रित हेमेटोक्सिलिन का अनुप्रयोग शामिल है, जिसके बाद अक्सर अतिरिक्त धुंधलापन (विभेदन) को हटाने के लिए एक कमजोर एसिड समाधान में कुल्ला किया जाता है, इसके बाद हल्के क्षारीय पानी में ब्लिंग किया जाता है। हेमेटोक्सिलिन के अनुप्रयोग के बाद, ऊतक को ईओसिन (आमतौर पर ईओसिन वाई) के साथ प्रतिस्थापित किया जाता है। परिणाम हेमेटोक्सिलिन मुख्य रूप से कोशिकाओं के नाभिक को नीले या गहरे बैंगनी रंग के साथ-साथ कुछ अन्य ऊतकों, जैसे कि केराटोहायलिन दानेदार और कैल्सीफाइड सामग्री को रंग देता है। ईओसिन कोशिका द्रव्य और कुछ अन्य संरचनाओं पर दाग लगाता है जिसमें बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स जैसे कोलेजन गुलाबी रंग के पांच रंगों में होते हैं। इओसिनोफिलिक (पदार्थ जो इओसिन द्वारा दागदार होते हैं) संरचनाएं आम तौर पर अंतःकोशिकीय या बाह्यकोशिकीय प्रोटीन से बनी होती हैं। लेवी निकाय और मैलोरी निकाय ईओसिनोफिलिक संरचनाओं के उदाहरण हैं। अधिकांश कोशिका द्रव्य इओसिनोफिलिक होता है और गुलाबी रंग में प्रस्तुत किया जाता है। लाल रक्त कोशिकाएँ अत्यधिक लाल रंग की होती हैं। हालांकि हेमेटॉक्सिन, हेमेटॉक्सीलिन का एक ऑक्सीकृत रूप, सक्रिय रंगीन है (जब एक मॉर्डेंट के साथ जोड़ा जाता है), दाग को अभी भी हेमेटॉक्सीलिन के रूप में जाना जाता है। हेमेटोक्सिलिन, जब एक मोर्डेंट (आमतौर पर एल्यूमीनियम फिटकरी) के साथ जोड़ा जाता है, तो इसे अक्सर एक मूल, सकारात्मक रूप से आवेशित, या कैशनिक दाग के समान माना जाता है। ईओसिन एक आयनिक (नकारात्मक आवेशित) और अम्लीय दाग है। हेमलम (एल्यूमीनियम आयनों और हेमेटिन का एक संयोजन) द्वारा नाभिक का धब्बा आमतौर पर डाई-मेटल कॉम्प्लेक्स को डी. एन. ए. से बांधने के कारण होता है, लेकिन ऊतक वर्गों से डी. एन. ए. के निष्कर्षण के बाद परमाणु धब्बा प्राप्त किया जा सकता है। यह तंत्र थियोनिन या टोलुइडिन ब्लू जैसे मूल (कैशनिक) रंगों द्वारा परमाणु धुंधलापन से अलग है। मूल रंगों द्वारा धब्बा केवल उन घोलों से होता है जो हेमलम की तुलना में कम अम्लीय होते हैं, और इसे न्यूक्लिक एसिड के पूर्व रासायनिक या एंजाइमेटिक निष्कर्षण द्वारा रोका जाता है। यह इंगित करने के लिए सबूत हैं कि एल्यूमीनियम और हेमेटिन को एक साथ रखने वाले बंधनों के समान समन्वय बंधन, हेमलम कॉम्प्लेक्स को डीएनए और परमाणु क्रोमैटिन में प्रोटीन के कार्बोक्सी समूहों से बांधते हैं। संरचनाओं को अम्लीय या क्षारीय होने की आवश्यकता नहीं है जिसे बेसोफिलिक और इओसिनोफिलिक कहा जा सके; शब्दावली रंगों के लिए सेलुलर घटकों की आत्मीयता पर आधारित है। अन्य रंग, जैसे। पीले और भूरे, नमूने में मौजूद हो सकते हैं; वे मेलेनिन जैसे आंतरिक वर्णकों के कारण होते हैं। बेसल लैमिने को पी. ए. एस. दाग या कुछ चांदी के दाग से दागने की आवश्यकता होती है, अगर उन्हें अच्छी तरह से दिखाई देना है। रेटिकुलर फाइबर के लिए भी चांदी के दाग की आवश्यकता होती है। हाइड्रोफोबिक संरचनाएं भी स्पष्ट रहती हैं; ये आमतौर पर वसा से भरपूर होती हैं, जैसे। एडिपोसाइट्स, न्यूरॉन अक्षतंतुओं के आसपास माइलिन और गोल्गी उपकरण झिल्ली। एच एंड ई दागदार ऊतकों के उदाहरण संदर्भ आगे कीरन जे. ए. 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