Isotope-coded affinity tag
एक आइसोटोप-कोडित एफ़िनिटी टैग (आईसीएटी) एक इन-विट्रो आइसोटोपिक लेबलिंग विधि है जिसका उपयोग मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा मात्रात्मक प्रोटिओमिक्स के लिए किया जाता है जो रासायनिक लेबलिंग अभिकर्मकों का उपयोग करता है। इन रासायनिक जांचों में तीन तत्व होते हैंः एक अमीनो एसिड साइड चेन को लेबल करने के लिए एक प्रतिक्रियाशील समूह (जैसे, सिस्टीन अवशेषों को संशोधित करने के लिए आयोडोएसिटामाइड), एक आइसोटोपिक रूप से कोडित लिंकर, और लेबल किए गए प्रोटीन/पेप्टाइड्स के आत्मीयता अलगाव के लिए एक टैग (जैसे, बायोटिन)। नमूनों को जोड़ा जाता है और फिर क्रोमैटोग्राफी के माध्यम से अलग किया जाता है, फिर प्रोटीन के बीच द्रव्यमान-से-आवेश अनुपात निर्धारित करने के लिए एक द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमीटर के माध्यम से भेजा जाता है। केवल पेप्टाइड्स युक्त सिस्टीन का विश्लेषण किया जा सकता है। चूँकि केवल पेप्टाइड्स युक्त सिस्टीन का विश्लेषण किया जाता है, अक्सर पोस्ट ट्रांसलेशनल संशोधन खो जाता है। मूल टैग को ड्यूटेरियम का उपयोग करके विकसित किया गया था, लेकिन बाद में उसी समूह ने कॉलम के स्थिर चरण के साथ ड्यूटेरियम की बातचीत के कारण तरल क्रोमैटोग्राफी के दौरान शिखर पृथक्करण के मुद्दों को दरकिनार करने के बजाय 13 सी का उपयोग करके टैग को फिर से डिज़ाइन किया। मात्रात्मक प्रोटिओमिक्स दो प्रोटिओम की मात्रात्मक तुलना के लिए, एक नमूने को समस्थानिक रूप से हल्के (डी0) प्रोब के साथ और दूसरे को समस्थानिक रूप से भारी (डी8) संस्करण के साथ लेबल किया जाता है। त्रुटि को कम करने के लिए, दोनों नमूनों को फिर जोड़ा जाता है, एक प्रोटीज (यानी, ट्रिप्सिन) के साथ पचाया जाता है, और आइसोटोप-कोडित टैगिंग अभिकर्मकों के साथ लेबल किए गए पेप्टाइड्स को अलग करने के लिए एविडिन एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी के अधीन किया जाता है। इन पेप्टाइड्स का विश्लेषण फिर लिक्विड क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एल. सी.-एम. एस.) द्वारा किया जाता है। अलग-अलग द्रव्यमान-टैग किए गए पेप्टाइड जोड़े की संकेत तीव्रता के अनुपात को दो नमूनों में प्रोटीन के सापेक्ष स्तर को निर्धारित करने के लिए निर्धारित किया जाता है। संदर्भ जैव रसायन का पता लगाने की विधियाँ प्रोटिओमिक्स