Minusheet perfusion culture system
माइनशीट परफ्यूजन कल्चर सिस्टम का उपयोग एडेरेंट कोशिकाओं के साथ संयोजन में उन्नत कोशिका संवर्धन प्रयोगों के लिए और चयनित बायोमटेरियल्स, विशेष ऊतक वाहक और संगत परफ्यूजन कल्चर कंटेनरों के साथ संयोजन में विशेष ऊतक उत्पन्न करने के लिए किया जाता है। माइनशीट परफ्यूजन कल्चर प्रणाली का तकनीकी विकास इन विट्रो स्थितियों में जीव के भीतर पाए जाने वाले विशेष ऊतकों की स्थिति के जितना संभव हो उतना निकट एक वातावरण बनाने के विचार से प्रेरित था। इस आविष्कार का आधार इसलिए माइनशीट ऊतक वाहक में स्थापित इष्टतम कोशिका आसंजन के लिए व्यक्तिगत रूप से चयनित जैव सामग्री है। इसके अलावा, श्वसन गैस सहित हमेशा ताजा पोषण प्रदान करने और ऊतक-विशिष्ट द्रव वातावरण का अनुकरण करने के लिए, ऊतक वाहकों को संगत परफ्यूजन कल्चर कंटेनरों में डाला जा सकता है। नतीजतन, विभिन्न प्रकार के प्रकाशनों से पता चलता है कि इस नवीन दृष्टिकोण से उत्पन्न ऊतक एक उत्कृष्ट और स्थिर गुणवत्ता प्रदर्शित करते हैं। इस प्रकार, एक ओर यह प्रणाली अनुवर्ती कोशिकाओं के संवर्धन और विशेष ऊतकों की पीढ़ी के लिए एक अत्यधिक अनुकूलनीय आधार प्रदान करती है। दूसरी ओर माइनशीट परफ्यूजन कल्चर सिस्टम पारंपरिक स्थिर 24 वेल कल्चर प्लेट और आधुनिक परफ्यूजन कल्चर तकनीक के बीच एक व्यवस्थित अंतर को पाट रहा है। पुनर्योजी चिकित्सा, ऊतक इंजीनियरिंग, नैनो प्रौद्योगिकी, जैव सामग्री अनुसंधान और नव विकसित दवाओं के उन्नत विषाक्तता परीक्षण में विशेष ऊतकों की महत्वपूर्ण पीढ़ी की तत्काल आवश्यकता है। हालांकि, अक्सर यह देखा जाता है कि उठाए गए ऊतक अपेक्षित कार्यात्मक विशेषताओं को प्रदर्शित नहीं करते हैं। इसके बजाय अवकलन देखा जाता है [1-4]। ये कोशिका जैविक परिवर्तन कोशिकाओं के पृथक्करण के बाद उत्पन्न होते हैं और उप-इष्टतम द्रव वातावरण और जैव सामग्री पर मामूली आसंजन के कारण एक डिश में स्थिर संवर्धन के दौरान आगे बढ़ते हैं। पोषण और श्वसन गैस के साथ आगे अनियंत्रित आपूर्ति, मेटाबोलाइट्स और पैराक्राइन कारकों का एक ओवरशूट या अनुपस्थित रियोलॉजिकल तनाव अवकलन की डिग्री को बढ़ा सकता है। नतीजतन, विशेष ऊतकों की एक इष्टतम पीढ़ी के संबंध में एक शक्तिशाली रणनीति को जितना संभव हो उतना हानिकारक मापदंडों को बाहर करना पड़ता है, जबकि ऊतक विकास की प्रक्रिया का समर्थन करने वाले कारकों को तेज किया जाना चाहिए [5]। चयनित जैव पदार्थ ऊतक वाहक के भीतर विकास को बढ़ावा देते हैं प्राकृतिक परिस्थितियों में एक इष्टतम ऊतक विकास के लिए एक पूर्व शर्त बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स के साथ एक कोशिका-विशिष्ट अंतःक्रिया है, जबकि इन विट्रो स्थितियों में बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स के लिए एक विकल्प का चयन करना पड़ता है। हालांकि, महत्वपूर्ण समस्या यह है कि एक जैव सामग्री एक परिपक्व ऊतक के भीतर कार्यात्मक विशेषताओं के विकास को अच्छे और बुरे अर्थों में प्रभावित कर सकती है। नतीजतन, एक अपकोशिकीकृत बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स, नए विकसित सिंथेटिक पॉलिमर, बायोडिग्रेडेबल स्कैफोल्ड, चीनी मिट्टी या धातु मिश्र धातु की उपयुक्तता की भविष्यवाणी नहीं की जा सकती है, लेकिन इसका परीक्षण किया जाना चाहिए। कोशिका आसंजन और संचार को सकारात्मक रूप से प्रभावित करने वाले मापदंडों को पूरा करने के लिए, तकनीकी अवधारणा एक माइनशीट ऊतक वाहक (चित्र। 1)। इस उपकरण की मदद से कोशिका आसंजन और ऊतक के विकास का व्यक्तिगत रूप से चयनित जैव सामग्री के साथ परीक्षण किया जा सकता है। इन प्रयोगों को पहले स्थिर के तहत किया जा सकता है (चित्र। 2) और फिर गतिशील (चित्र। 3) सांस्कृतिक स्थितियाँ [6]। दोनों ही मामलों में एक माइनशीट ऊतक वाहक क्षति को रोकता है लेकिन प्रयोग के दौरान निहित कोशिकाओं या ऊतकों के विकास का समर्थन करता है। एक पारंपरिक 24 वेल कल्चर प्लेट के साथ संगत रहने के लिए एक चयनित जैव सामग्री को 13 मिमी के व्यास में छिद्रित किया जाना चाहिए। इस प्रारूप में कई सामग्री व्यावसायिक रूप से भी उपलब्ध हैं। आगे की सामग्री को फिल्टर, फॉइल, जाल, ऊन और मचान के रूप में लगाया जा सकता है (चित्र। 1ए)। एक आसान संचालन के लिए और विकास के दौरान क्षति को रोकने के लिए चयनित नमूनों को एक माइनशीट ऊतक वाहक के आधार भाग में रखा जाता है (चित्र। 1बी)। एक तनाव रिंग को नीचे दबाकर जैव सामग्री को स्थिति में रखा जाता है (चित्र। 1 सी)। एक ऊतक वाहक को स्थापित करने के बाद एक थैले में लपेटा जाता है और निर्जंतुक किया जाता है। ऊतक वाहक पर कोशिका बीजन कोशिका बीजन के लिए घुड़सवार ऊतक वाहक को 24 वेल कल्चर प्लेट में एक संदंश द्वारा स्थानांतरित किया जाता है (चित्र। 2)। ऊतक वाहक संवर्धन माध्यम के शीर्ष पर कोशिकाओं को केंद्रित करने के लिए एक स्तर पर जोड़ा जाता है ताकि चयनित जैव सामग्री को केवल गीला किया जा सके। फिर कोशिकाओं का एक अलिकट एक पिपेट द्वारा घुड़सवार जैव सामग्री की सतह पर स्थानांतरित किया जाता है। ऊतक वाहक के साथ एक मानक संवर्धन प्रोटोकॉल को ऊपरी तरफ कोशिकाओं को बीज करके शुरू किया जा सकता है। जब एक ऊतक वाहक को घुमाया जाता है, तो कोशिकाओं को दूसरी तरफ भी बोया जा सकता है ताकि दो अलग-अलग प्रकार की कोशिकाओं के साथ सह-संवर्धन प्रयोग संभव हो सकें। न केवल एकल कोशिका बल्कि ऊतक का एक पतला टुकड़ा भी एक माइनशीट ऊतक वाहक के भीतर एक बुने हुए जाल के दो टुकड़ों के बीच लगाया जा सकता है। आगे कोलेजन शीट जैसी लचीली सामग्री का उपयोग ड्रम की त्वचा जैसे ऊतक वाहक में किया जा सकता है। अंतिम लेकिन कम से कम उत्कृष्ट परिणाम स्थानिक पैरेन्काइमा विकास [5,6,8] के लिए एक कृत्रिम इंटरस्टिटियम के रूप में एक पॉलिएस्टर ऊन को स्थापित करके प्राप्त किए गए थे। यह स्पष्ट है कि प्रत्येक विशेष ऊतक के लिए एक ऊतक वाहक के भीतर बहुत व्यक्तिगत स्थानिक वातावरण बनाया जा सकता है। यह दिखाया गया है कि 24 वेल कल्चर प्लेट के भीतर स्थिर वातावरण पोषण और हार्मोन में कमी, मेटाबोलाइट्स की अनियंत्रित वृद्धि और समय के दौरान पैराक्राइन कारकों की अधिकता की ओर ले जाता है। इन कारणों से अनुवर्ती कोशिकाओं के साथ एक माइनशीट ऊतक वाहक का उपयोग केवल 24 वेल कल्चर प्लेट में कोशिका बीजन की छोटी अवधि के लिए किया जाता है। नतीजतन, कोशिकाओं के चिपकने के बाद ऊतक वाहक को एक गतिशील द्रव वातावरण प्रदान करने के लिए एक परफ्यूजन कल्चर कंटेनर में स्थानांतरित कर दिया जाता है। विशेष ऊतकों की व्यक्तिगत आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए विभिन्न प्रकार के परफ्यूजन कल्चर कंटेनरों का निर्माण किया गया था (चित्र। 3)। प्रत्येक परफ्यूजन कल्चर कंटेनर में कल्चर माध्यम के परिवहन के लिए कम से कम एक इनलेट और एक आउटलेट होता है। एक पात्र का एक मूल संस्करण निरंतर मध्यम परिवहन के तहत क्रमशः कोशिकाओं के सरल स्नान की अनुमति देता है (चित्र। 4ए)। एक ढाल पात्र में ऊतक वाहक को आधार और ढक्कन के बीच रखा जाता है ताकि दोनों पक्षों को उपकला के लिए एक विशिष्ट वातावरण की नकल करते हुए व्यक्तिगत माध्यम प्रदान किया जा सके (चित्र। 4बी)। एक और संवर्धन पात्र एक पारदर्शी ढक्कन और आधार से बना होता है जो ऊतक विकास के दौरान सूक्ष्म अवलोकन की अनुमति देता है (चित्र। 4 सी)। इसके अलावा, एक परफ्यूजन कल्चर कंटेनर एक लचीला सिलिकॉन ढक्कन प्रदर्शित कर सकता है। एक विलक्षण रोटर द्वारा इस ढक्कन पर बल लगाने से उपास्थि और हड्डी के ऊतक इंजीनियरिंग में आवश्यक यांत्रिक भार का अनुकरण होता है। एक विशेष ऊतक इंजीनियरिंग पात्र में अलग-अलग मचानों के साथ एक ऑरिकल या उपास्थि के विभिन्न रूपों जैसे आकार के ऊतक उत्पन्न किए जा सकते हैं। अंत में, गुर्दे के तने/पूर्वज कोशिकाओं से प्राप्त नलिकाओं का स्थानिक विस्तार पॉलिएस्टर ऊन से बने कृत्रिम इंटरस्टिटियम से भरे एक परफ्यूजन कंटेनर के भीतर प्राप्त किया जाता है। अंत में, इन सभी पात्रों को एक विशेष पॉली कार्बोनेट (मैक्रोलॉन®) से बनाया जाता है ताकि उन सभी को कई उपयोगों के लिए ऑटोक्लेव किया जा सके। परफ्यूजन कल्चर प्रयोगों का प्रदर्शन एक परफ्यूजन कल्चर कंटेनर के भीतर 37 डिग्री सेल्सियस के आवश्यक तापमान को बनाए रखने के लिए, हफ्तों तक कल्चर प्रयोगों के प्रदर्शन के दौरान एक हीटिंग प्लेट (मेडैक्स-नागेल, कील, जर्मनी) और एक कवर ढक्कन (दिखाया नहीं गया) का उपयोग किया जाता है। 5, 7)। कल्चर माध्यम का परिवहन धीरे-धीरे घूमने वाले पेरिस्टाल्टिक पंप (आई. एस. एम. ए. टी. ई. सी., आई. पी. सी. एन. 8, वर्टहेम, जर्मनी) का उपयोग करके सबसे अच्छा किया जाता है। यह 0.01 और 5 एमएल प्रति घंटे के बीच समायोज्य और सटीक पंप दर देने में सक्षम है। भंडारण बोतल से पारफ्यूजन कल्चर कंटेनर माध्यम के माध्यम से मार्ग पर निहित कोशिकाओं को प्रदान करने के लिए एक घुड़सवार ऊतक वाहक के साथ ले जाया जाता है। एक परफ्यूजन कल्चर कंटेनर के भीतर ऊतक वाहक का सटीक ज्यामितीय स्थान हमेशा सभी तरफ से ताजा पोषण और श्वसन गैस के साथ मध्यम प्रावधान के परिवहन के दौरान गारंटी देता है। साथ ही यह चयापचय उत्पादों के एक गैर-शारीरिक संचय और पैराक्राइन कारकों के एक ओवरशूट को रोकता है। पूरे संवर्धन अवधि के लिए इस नियंत्रित वातावरण को बनाए रखने के लिए, चयापचय माध्यम को एक अलग अपशिष्ट बोतल में एकत्र किया जाता है। नतीजतन, माध्यम का पुनर्चक्रण नहीं होता है। परफ्यूजन कल्चर के दौरान पी. एच. का स्थिरीकरण आम तौर पर कोशिका संवर्धन प्रयोग एक सी. ओ. 2 ऊष्मायनक में किए जाते हैं। ऐसे वातावरण में इत्र संवर्धन प्रयोग भी किए जा सकते हैं। हालांकि, एक बेहतर समाधान प्रयोगशाला की मेज पर वायुमंडलीय हवा के तहत परफ्यूजन कल्चर प्रयोगों का प्रदर्शन है, क्योंकि यह पूरी तरह से संभालने की सुविधा प्रदान करता है। हालांकि, इस मामले में संवर्धन माध्यम को वायुमंडलीय हवा के साथ समायोजित करना पड़ता है। एक ऊष्मायनक के भीतर मीडिया को 5 प्रतिशत कार्बन डाइऑक्साइड वातावरण में रखते हुए हमेशा अपेक्षाकृत अधिक मात्रा में NaHCO3 को 7.7 और 7.4 के बीच एक स्थिर pH बनाए रखने के लिए निहित किया जाता है। यदि इस तरह के तैयार किए गए माध्यम का उपयोग एक CO2 ऊष्मायनक के बाहर परफ्यूजन कल्चर के लिए किया जाता है, तो वायुमंडलीय हवा में CO2 (0.3%) की कम सामग्री के कारण pH शारीरिक सीमा से बहुत अधिक क्षारीय मानों में स्थानांतरित हो जाएगा। इस कारण से एक CO2 ऊष्मायनक के बाहर परफ्यूजन संवर्धन के लिए उपयोग किए जाने वाले किसी भी माध्यम को NaHCO3 सांद्रता को कम करके और/या जैविक बफर जैसे HEPES (GIBCO/Invitrogen, Karlsruhe, जर्मनी) या BUffer ALL (Sigma-Aldric-Chemi, München, जर्मनी) को जोड़कर स्थिर करना पड़ता है। जैविक बफर घोल की बढ़ती मात्रा को माध्यम के एक अलिकोट में मिलाकर आवश्यक राशि को आसानी से निर्धारित किया जा सकता है। फिर माध्यम को वायुमंडलीय हवा में 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मो प्लेट पर रात भर संतुलित रहना चाहिए। उदाहरण के लिए, 50 एम. एम. ओ. एल./एल. एच. ई. पी. ई. एस. का अनुप्रयोग या बफर ऑल (सी. ए.) के समतुल्य। 1 प्रतिशत) से लेकर आई. एम. डी. एम. (इसकोव का संशोधित डुल्बेको का माध्यम, जी. आई. बी. सी. ओ./इनविट्रोजन) तक एक प्रयोगशाला मेज पर वायुमंडलीय हवा के तहत दीर्घकालिक परफ्यूजन संवर्धन के दौरान 7.4 का एक स्थिर पी. एच. बनाए रखेगा। माध्यम में ऑक्सीजन की उपलब्धता एक परफ्यूजन कल्चर प्रयोग में प्राप्त करने के लिए आई. एम. डी. एम. जैसे एक चयनित माध्यम में ओ2 की उच्च संतृप्ति को गैस पारगम्य सिलिकॉन ट्यूब के माध्यम से ले जाना पड़ता है। एक सिलिकॉन ट्यूब का उपयोग एक पतली दीवार (1 मिमी), छोटे आंतरिक व्यास (1 मिमी) और इसकी विस्तारित लंबाई (1 मीटर) के कारण प्रसार द्वारा गैस विनिमय के लिए एक बड़ी सतह प्रदान करता है। उदाहरण के लिए, एक मानक परफ्यूजन कल्चर प्रयोग के दौरान वायुमंडलीय हवा के खिलाफ संतुलित आई. एम. डी. एम. (3024 मिलीग्राम/एल. एन. ए. एच. सी. ओ. 3,50 एम. एम. ओ. एल./एल. एच. ई. पी. ई. एस.) का विश्लेषण कम से कम 160 एम. एम. एच. जी. ओ. 2 [7] का निरंतर आंशिक दबाव दिखाता है। ऑक्सीजन सामग्री का मॉड्यूलेशन यह दिखाया गया है कि बढ़ती कोशिकाओं और ऊतकों को बहुत व्यक्तिगत ऑक्सीजन की आवश्यकता होती है। इस कारण से यह महत्वपूर्ण है कि ऑक्सीजन की सामग्री को व्यक्तिगत परफ्यूजन कल्चर प्रयोगों में अनुकूलित किया जा सके। तकनीकी समाधान एक गैस विनिमायक मॉड्यूल है जिसमें एक गैस प्रवेश और निकास होता है (चित्र। 6ए)। इसके अलावा मध्यम परिवहन के लिए एक लंबी पतली दीवार वाली सिलिकॉन ट्यूब के साथ एक सर्पिल मॉड्यूल के अंदर लगाया जाता है। चूँकि ट्यूब अत्यधिक गैस-पारगम्य है, यह गैस विनिमय मॉड्यूल के संवर्धन माध्यम और आंतरिक वातावरण के बीच गैसों के इष्टतम प्रसार की गारंटी देता है। नतीजतन, वांछित गैस वातावरण को मॉड्यूल के माध्यम से एक विशिष्ट गैस मिश्रण के निरंतर प्रवाह द्वारा समायोजित किया जा सकता है। इस तरह ऑक्सीजन या किसी अन्य गैस की मात्रा को प्रसार द्वारा माध्यम में संशोधित किया जा सकता है। इस सरल प्रोटोकॉल को लागू करने से पूरी तरह से बाँझ परिस्थितियों में दीर्घकालिक संवर्धन प्रयोगों के दौरान परिवहन माध्यम के भीतर ऑक्सीजन के आंशिक दबाव को कम करना संभव हो गया [7]। हानिकारक गैस के बुलबुले का उन्मूलन परफ्यूजन कल्चर प्रयोग करते हुए यह हमेशा माना जाना चाहिए कि कल्चर माध्यम के धीमे परिवहन के दौरान गैस के बुलबुले बन रहे हैं। वे भंडारण बोतल में माध्यम के चूषण के दौरान, ट्यूब के भीतर परिवहन के दौरान, संवर्धन पात्र के भीतर वितरण के दौरान और अपशिष्ट बोतल के रास्ते में उन्मूलन के दौरान उत्पन्न होते हैं। अज्ञात कारणों से गैस के बुलबुले विशेष रूप से ट्यूबों, कनेक्टरों और परफ्यूजन कंटेनरों के बीच सामग्री संक्रमण पर जमा होते हैं। सबसे पहले ये गैस के बुलबुले इतने छोटे होते हैं कि उन्हें मानव आंख से नहीं देखा जा सकता है, लेकिन संवर्धन माध्यम के चल रहे परिवहन के दौरान वे आकार में बढ़ते हैं और एक एम्बोलस बनाने में सक्षम होते हैं जो मध्यम प्रवाह को बड़े पैमाने पर बाधित करता है। एक संवर्धन पात्र के भीतर गैस के बुलबुले मध्यम आपूर्ति की क्षेत्रीय कमी का कारण बन रहे हैं और तरल पदार्थ की निरंतरता में विराम का कारण बन रहे हैं ताकि बड़े पैमाने पर तरल पदार्थ के दबाव में परिवर्तन हो सके। एक ग्रेडिएंट परफ्यूजन कल्चर कंटेनर में, जहां दो मीडिया को बिल्कुल एक ही गति से ले जाया जाता है, एम्बोलिक प्रभाव दबाव अंतर को जन्म दे सकते हैं जो बदले में निहित उपकला बाधा [5,9] को नष्ट कर सकते हैं। एक परफ्यूजन कल्चर प्रयोग के भीतर गैस के बुलबुले की सांद्रता से बचने के लिए, एक गैस विस्तारक मॉड्यूल विकसित किया गया था (चित्र। 6बी)। यह मॉड्यूल परिवहन के दौरान माध्यम से गैस के बुलबुले को हटा देता है। जब माध्यम गैस विस्तारक मॉड्यूल में प्रवेश कर रहा होता है, तो यह एक छोटे से जलाशय के भीतर उगता है और एक बाधा से नीचे गिरने से पहले फैलता है। इस प्रक्रिया के दौरान गैस के बुलबुले को गैस विस्तारक मॉड्यूल के शीर्ष पर माध्यम से अलग किया जाता है। नतीजतन, पात्र से निकलने वाला माध्यम ऑक्सीजन-संतृप्त होता है लेकिन गैस के बुलबुले [8,9] से मुक्त होता है। अनुप्रयोगों का व्यापक दायरा पिछले वर्षों में माइनशीट परफ्यूजन कल्चर प्रणाली से संबंधित कई शोध पत्र प्रकाशित किए गए थे। व्यापक स्पेक्ट्रम से पता चलता है कि मॉड्यूलर प्रणाली को ऊतक इंजीनियरिंग, जैव सामग्री अनुसंधान और उन्नत दवा दवा विषाक्तता परीक्षण में उपयोग की जाने वाली उत्कृष्ट कोशिका जैविक गुणवत्ता में विशेष ऊतक उत्पन्न करने के लिए लागू किया गया था। इन अनुप्रयोगों की पूरी सूची डेटा बैंक 'प्रोसीडिंग्स इन परफ्यूजन कल्चर' में पाई जाती है ('बाहरी लिंक' देखें)। जैसा कि कई पेटेंटों (DE 39 23 279, DE 42 00 446, DE 42 08 805, DE 44 43 902, DE 19530 556, DE 196 48 876 C2, DE 199 52 847 B4, US 5 190 878, US 5 316 945, US 5 665 599, J 2847669, DE 10 2005002 938, PA 10 2004 054 125.6, PA 10 2005001 747.9, पेटेंट लंबित) द्वारा प्रदर्शित किया गया है। पिछले वर्षों में लूसिया डेंक और विल डब्ल्यू. मिनथ द्वारा माइनशीट परफ्यूजन कल्चर प्रणाली के साथ कई प्रायोगिक प्रयोग किए गए थे। प्रयोगात्मक कार्य वर्तमान में घायल गुर्दे के पैरेनकाइमा की मरम्मत के लिए एक कृत्रिम पॉलिएस्टर इंटरस्टिटियम के निर्माण पर ध्यान केंद्रित कर रहा है। 1992 में जर्मनी के म्यूनिख में माइनशीट परफ्यूजन कल्चर सिस्टम को फिलिप मॉरिस शोध पुरस्कार 'चैलेंज ऑफ द फ्यूचर' मिला। हेनरी किसिंजर, हंस जोकिम फ्रेडरिक्स और पॉल मुलर ने यह पुरस्कार प्रदान किया। बाजार में माइनशीट परफ्यूजन कल्चर सिस्टम को पेश करने के लिए, कैथरीन लोरेंज़-मिनुथ ने गैर-लाभकारी उन्मुख मिन्यूसेल्स और मिनटिस्यू वर्ट्रीब्स जीएमबीएच (डी-93077 बैड अबाच/जर्मनी) की स्थापना की। बाहरी लिंक परफ्यूजन संस्कृति में कार्यवाही फिलिप मॉरिस स्टिफ्टंग माइनशीट वेबसाइट संदर्भ 1. एलाउट जी, हेंकेन्स टी, पापेल्यू पी, स्नाइकर्स एस, विंकन एम, वानहेके टी, रोजियर्स वी (2006) पृथक हेपेटोसाइट्स और उनकी संस्कृतियों की अवकल प्रक्रिया में अंतर्निहित आणविक तंत्र। कर्र ड्रग मेटाब 7 (6): 629-60। 2. शुह ई, हॉफमैन एस, स्टोक के, नोटबोहम एच, मुलर आर, रॉटर एन (2011) 3डी में चॉन्ड्रोसाइट पुनर्वितरणः आसंजन स्थल घनत्व और सब्सट्रेट लोच का प्रभाव। जे बायोमेड मैटर रेस एः डीओआई 10.1002/jbm.a.33226। 3. झांग वाई, ली टीएस, ली एसटी, वावरोव्स्की केए, चेंग के, गलांग जी, मल्लियारस के, अब्राहम एमआर, वांग सी, मारबन ई (2010) स्तनधारी कैडियोमायोसाइट्स का अवकलन और प्रसार 2010 पीएलओएस वन 5 (9): ई12559। 4. लियू वाई, जियांग एक्स, यू एम. के., डोंग जे., झांग एक्स, त्सांग एल. एल., चुंग वाई. डब्ल्यू., ली. टी., चैन एच. सी. (2010) अस्थि मज्जा से प्राप्त न्यूरॉन्स से उपकला कोशिकाओं में विचलन और ट्रांसलाइनेज पुनर्वितरण के माध्यम से स्विच करना। सेल बायोल इंट 34 (11): 1075-83। 5. मिनथ डब्ल्यू. डब्ल्यू. और डेंक एल. 2011 एडेरेंट कोशिकाओं के साथ उन्नत संस्कृति प्रयोग। परफ्यूजन कल्चर में एकल कोशिकाओं से लेकर विशेष ऊतकों तक। आईएसबीएन एन. आर. 978-3-88246-330-9, http://epub.uni-regensburg.de/21484 6। मिनथ डब्ल्यू डब्ल्यू, डैंक एल, ग्लैशॉसर ए 2010 कई विशेष ऊतकों की पीढ़ी के लिए एक मॉड्यूलर संस्कृति प्रणाली। जैव सामग्री 31:2945-2954। 7. स्ट्रेहल आर, शूमाकर के, मिनथ डब्ल्यूडब्ल्यू 2004 ने परफ्यूजन कल्चर में भ्रूण गुर्दे के खोजकर्ताओं को श्वसन गैस वितरण को नियंत्रित किया। ऊतक अंग्रेज़ी 10 (7-8): 1196-203। 8. मिनथ डब्ल्यूडब्ल्यू, स्ट्रेल आर, शूमाकर के 2004 ऊतक कारखानाः कार्यात्मक ऊतकों की इन विट्रो पीढ़ी के लिए एक मॉड्यूलर प्रणाली का वैचारिक डिजाइन। ऊतक अंग्रेज़ी 10:285-294। 9. मिनथ डब्ल्यू. डब्ल्यू., डेंक एल., रोसगर ए 2009 ग्रेडिएंट परफ्यूजन कल्चर-बायोमेडिसिन में उपकला के लिए एक ऊतक-विशिष्ट वातावरण का अनुकरण। जे एपिथेलियल बायोलॉजी एंड फार्माकोलॉजी 2:1-13। जैव सामग्री जैव चिकित्सा कोशिका संवर्धन आणविक जीव विज्ञान तकनीकें