Endospore staining
एंडोस्पोर स्टेनिंग एक तकनीक है जिसका उपयोग जीवाणु विज्ञान में बैक्टीरिया के नमूने में एंडोस्पोर की उपस्थिति की पहचान करने के लिए किया जाता है। बैक्टीरिया के भीतर, एंडोस्पोर्स सुरक्षात्मक संरचनाएं हैं जिनका उपयोग चरम स्थितियों में जीवित रहने के लिए किया जाता है, जिसमें उच्च तापमान भी शामिल है जो उन्हें रसायनों के लिए अत्यधिक प्रतिरोधी बनाता है। एंडोस्पोर्स में बहुत कम या कोई ए. टी. पी. नहीं होता है जो इंगित करता है कि वे कितने निष्क्रिय हो सकते हैं। एंडोस्पोर्स में केराटिन से बना एक सख्त बाहरी परत होती है जो उन्हें नाभिकीय डीएनए के साथ-साथ अन्य अनुकूलन से बचाती है। एंडोस्पोर्स वानस्पतिक कोशिकाओं में पुनः अंकुरित होने में सक्षम होते हैं, जो एक सुरक्षात्मक प्रकृति प्रदान करता है जिससे उन्हें सरल धुंधलापन और ग्राम धुंधलापन जैसी सामान्य तकनीकों का उपयोग करके दाग लगाना मुश्किल हो जाता है। एंडोस्पोर स्टेनिंग के लिए विशेष तकनीकों में शेफर-फुल्टन स्टेन और मोएलर स्टेन शामिल हैं। एंडोस्पोर्स के इतिहास का अध्ययन पहली बार 1876 में वैज्ञानिकों कोहन और कोच द्वारा किया गया था। यह पाया गया कि एंडोस्पोर्स को मिथिलीन ब्लू, सैफ्रैनिन और कार्बोल फ्यूचिन जैसे सरल दागों का उपयोग करके दाग नहीं लगाया जा सकता है। इन वैज्ञानिकों ने कुछ अन्य लोगों के साथ मिलकर पाया कि बीजाणु निष्क्रिय और गर्मी के प्रति प्रतिरोधी थे। 1900 के दशक की शुरुआत में, शोधकर्ता इन एंडोस्पोर्स से बीमारी और संक्रमण में सुधार के लिए वैकल्पिक तरीके खोजने की कोशिश कर रहे थे। 1922 में, डोर्नर ने एंडोस्पोर्स को दाग लगाने के लिए एक विधि प्रकाशित की। उन्होंने एक अंतर धुंधला करने की तकनीक की खोज की जिसमें एंडोस्पोर हरे रंग के दिखाई देते हैं और वनस्पति कोशिकाएं गुलाबी लाल दिखाई देती हैं। डोर्नर ने इस प्रक्रिया में एक कदम के रूप में गर्मी का उपयोग किया, लेकिन इसमें समय लगता था, इसलिए 1933 में, शेफर और फुल्टन ने अपनी विधि को संशोधित किया। शेफर और फुल्टन ने बुनसेन बर्नर का उपयोग करके हीटिंग प्रक्रिया को बहुत तेज कर दिया। हालाँकि यह विधि सबसे अधिक फायदेमंद नहीं थी, लेकिन यह डोर्नर की विधि की तुलना में बहुत अधिक सुविधाजनक थी। इस बेहतर विधि ने एक त्वरित और आसान परीक्षण प्रदान किया और बीजाणुओं को रंगों के प्रति अधिक संवेदनशील होने की अनुमति दी। आज तक, शैफर-फुल्टन दाग अभी भी बैक्टीरिया की पहचान करने में मदद करने के लिए किया जाता है। उदाहरण एंडोस्पोर कई कठिन परिस्थितियों में दशकों तक रहने में सक्षम हैं, जैसे कि सुखाना और जमना। ऐसा इसलिए है क्योंकि एंडोस्पोर के अंदर डीएनए लंबे समय तक जीवित रहने में सक्षम है। अधिकांश बैक्टीरिया अपने उच्च प्रतिरोध के कारण एंडोस्पोर्स बनाने में असमर्थ होते हैं, लेकिन कुछ सामान्य प्रजातियां हैं बैसिलस (100 से अधिक प्रजातियां) और क्लॉस्ट्रिडियम (160 से अधिक प्रजातियां)। - बेसिलस एंथ्रेसेस, जो एंथ्रेक्स का कारण बनता है-बेसिलस सेरियस-दो प्रकार के खाद्य विषाक्तता का कारण बन सकता हैः इमेटिक और डायरिया-बेसिलस सबटिलिस-जो मिट्टी में पाया जाता है-क्लॉस्ट्रिडियम टेटानी,-बीजाणु जो लॉक जबड़े (टेटनस) और कठोर पक्षाघात का कारण बनता है। - क्लॉस्ट्रिडियम बोटुलिनम-ऐसे खाद्य पदार्थों में पाया जाने वाला बीजाणु जिन्हें ठीक से डिब्बाबंद नहीं किया गया है। क्लॉस्ट्रिडियम बोटुलिनम को कभी-कभी बोटॉक्स के रूप में बेचा जाता है और तंत्रिका संचरण को रोकता है। - क्लॉस्ट्रिडियम डिफिसाइल-बृहदान्त्र में सूजन का कारण बनता है, अक्सर अन्य एंटीबायोटिक दवाओं से। लक्षणों में दस्त, पेट दर्द और बुखार शामिल हैं। आकार और स्थान एंडोस्पोर्स के प्रकार जिन्हें पहचाना जा सकता है, उनमें मुक्त एंडोस्पोर्स, केंद्रीय एंडोस्पोर्स (कोशिका के बीच में), सबटर्मिनल (कोशिका के अंत और मध्य के बीच) और टर्मिनल (कोशिका के अंत में) एंडोस्पोर्स शामिल हैं। टर्मिनल या सबटर्मिनल का एक संयोजन भी हो सकता है। एंडोस्पोर्स को कोशिका के सापेक्ष आकार, या तो गोलाकार या अण्डाकार (अंडाकार), और क्या वे कोशिका को सूजन का कारण बनते हैं या नहीं, के आधार पर अलग किया जा सकता है। धुंधला तंत्र शेफर-फुल्टन धुंधला विधि में, मैलाकाइट हरे रंग वाले एक प्राथमिक दाग को बैक्टीरिया को भाप देकर बीजाणु में मजबूर किया जाता है। बीजाणुओं पर दाग लगाने के लिए मैलाकाइट ग्रीन को स्लाइड पर 15 मिनट या उससे अधिक समय के लिए छोड़ा जा सकता है। बीजाणुओं को उनके घनत्व के कारण दाग लगने में लंबा समय लगता है, इसलिए इस विभेदक दाग को करते समय गर्मी मॉर्डेन्ट के रूप में कार्य करती है। मैलाकाइट हरा पानी में घुलनशील होता है, इसलिए वनस्पति कोशिकाओं और बीजाणु मातृ कोशिकाओं को आसुत जल से रंगहीन किया जा सकता है और 0.5 प्रतिशत सैफ्रानिन के साथ काउंटरस्टैंड किया जा सकता है। अंत में, एक उचित स्मीयर एंडोस्पोर को लाल या गुलाबी रंग की कोशिका के भीतर एक हरे बिंदु के रूप में दिखाएगा। माइकोबैक्टीरियम एक बाधा है जिसका सामना इस प्रकार की धुंधला करने की प्रक्रिया के साथ किया जाता है क्योंकि यह अभी भी हरे रंग का दाग लगाएगा, भले ही यह किसी भी एंडोस्पोर्स का उत्पादन नहीं करता है। यह इसकी मोम कोशिका भित्ति के कारण है जो विकर्णन प्रक्रिया के बाद भी मैलाकाइट हरे रंग को बरकरार रखती है। इस विशेष प्रकार के जीवाणु के बारे में अधिक जानकारी प्राप्त करने के लिए एसिड-फास्ट स्टेन नामक एक अलग प्रकार का धब्बा लगाना होगा। धब्बा लगाने की प्रक्रिया एसेप्टिक तकनीक का उपयोग करके, वांछित जीव के साथ गर्मी स्थिर स्लाइड तैयार करें और हवा में सुखाएं। उबलते पानी का स्नान तैयार करें। स्लाइड को पेपर टॉवेल के टुकड़े से ढक दें और पानी के स्नान के ऊपर दागदार रैक पर रखें। स्लाइड पर कागज के तौलिए को मैलाकाइट ग्रीन (प्राथमिक दाग) से भर दें। स्लाइड को 5 से 7 मिनट (मोर्डेंट) के लिए भाप दें। समय समाप्त होने के बाद, संदंश का उपयोग करके पानी के स्नान से स्लाइड को सावधानीपूर्वक हटा दें। पेपरटॉवेल को हटा दें। स्लाइड को ठंडा होने दें, और फिर दागदार रैक के ऊपर संदंश का उपयोग करके, धीरे-धीरे आसुत जल से तब तक कुल्ला करें जब तक कि बहाव स्पष्ट न हो जाए (डीकोलोराइज़र)। किसी भी अतिरिक्त पानी को डालें और एक मिनट के लिए सैफ्रानिन (काउंटरस्टेन) के साथ दागदार रैक और फ्लड पर स्लाइड रखें। किसी भी अतिरिक्त सैफ्रैनिन को आसुत जल से धीरे-धीरे धो लें और दोनों तरफ ध्यान से सुखा लें। जब स्लाइड सूखी होती है, तो तेल विसर्जन उद्देश्य (100X) के तहत सूक्ष्मदर्शी के नीचे स्लाइड देखें। संदर्भ धुंधला सूक्ष्म जीव विज्ञान तकनीक जीवाणु विज्ञान सूक्ष्मदर्शी