Miles and Misra method
माइल्स एंड मिश्रा मेथड (या सतह व्यवहार्य गणना) एक तकनीक है जिसका उपयोग सूक्ष्म जीव विज्ञान में जीवाणु निलंबन या समरूप में कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों की संख्या निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इस तकनीक को पहली बार 1938 में माइल्स, मिश्रा और इरविन द्वारा वर्णित किया गया था जो उस समय एलएसएचटीएम में काम कर रहे थे। माइल्स और मिश्रा विधि को सटीक दिखाया गया है। सामग्री एक कैलिब्रेटेड ड्रॉपिंग पिपेट, या स्वचालित पिपेट, जो 20 माइक्रोन की बूंदें वितरित करता है। पोषक आगर या अन्य उपयुक्त माध्यम वाले पेट्री व्यंजन। फॉस्फेट बफ़र्ड सेलाइन (पी. बी. एस.) या अन्य उपयुक्त मंदक। बैक्टीरियल सस्पेंशन या होमोजेनेट। विधि इनोकुलम/सस्पेंशन को 9x डाइल्यूएंट में 1x सस्पेंशन जोड़कर क्रमिक रूप से डाइल्यूट किया जाता है। जब बैक्टीरिया की मात्रा अज्ञात हो, तो कम से कम 10−8 तक डाइल्यूशन किया जाना चाहिए। प्रत्येक डाइल्यूशन श्रृंखला के लिए तीन प्लेटों की आवश्यकता होती है, सांख्यिकीय कारणों से औसतन कम से कम 3 गिनती की आवश्यकता होती है। प्लेटों की सतह को पर्याप्त रूप से सूखा होना चाहिए ताकि 20 माइक्रोन की बूंद को 15-20 मिनटों में अवशोषित किया जा सके। प्लेटों को समान क्षेत्रों में विभाजित किया जाता है (प्रति प्लेट 8 तक का उपयोग करना संभव है)। क्षेत्रों को डाइल्यूशन के साथ लेबल किया जाता है। प्रत्येक क्षेत्र में, उचित डाइल्यूशन का 1 x 20 माइक्रोन अगर की सतह पर गिराया जाता है और बूंद को प्राकृतिक रूप से फैलने दिया जाता है। विधि के मूल विवरण में 2.5 से. मी. की ऊँचाई से एक बूंद 1.5-2.0 से. मी. के क्षेत्र में फैली हुई है। अगर की सतह को पिपेट से छूने से बचना महत्वपूर्ण है। प्लेटों को उलटने से पहले सूखने के लिए बेंच पर सीधा छोड़ दिया जाता है और 18-24 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है (या उपयोग किए गए जीव और अगर को ध्यान में रखते हुए उपयुक्त ऊष्मायन स्थितियां)। प्रत्येक क्षेत्र को विकास के लिए देखा जाता है, उच्च सांद्रता गिरावट के क्षेत्र, या बड़ी संख्या में छोटी/विलय की गई कॉलोनियों पर एक समृद्ध विकास देगी। कॉलोनियों की गिनती उस क्षेत्र में की जाती है जहां पूर्ण आकार की असतत कॉलोनियों की सबसे अधिक संख्या देखी जा सकती है (आमतौर पर 2-20 कॉलोनियों के बीच वाले क्षेत्रों की गिनती की जाती है)। निम्नलिखित समीकरण का उपयोग मूल अलिकोट/नमूने से प्रति मिली कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सी. एफ. यू.) की संख्या की गणना करने के लिए किया जाता हैः सी. एफ. यू. प्रति मिली = एक डाइल्यूशन x 50 x डाइल्यूशन कारक के लिए कालोनियों की औसत संख्या। लाभ अन्य विधियों की तुलना में तेजी से। कार्यशील सतह के कम जीवाणु संदूषण का उत्पादन करें। कॉलोनी बनाने वाली इकाई संदर्भ कोशिका संवर्धन तकनीक सूक्ष्म जीव विज्ञान तकनीक भी देखें।