SOS chromotest
एस. ओ. एस. क्रोमोटेस्ट रासायनिक यौगिकों की जीनोटॉक्सिक क्षमता का आकलन करने के लिए एक जैविक परख है। यह परीक्षण एक रंगीन परख है जो β-गैलेक्टोसिडेस के लिए संरचनात्मक जीन के साथ संलयन के माध्यम से एस्चेरिचिया कोलाई में जीनोटॉक्सिक एजेंटों द्वारा प्रेरित जीन की अभिव्यक्ति को मापता है। परीक्षण नमूनों की बढ़ती सांद्रता के साथ 96-कुएँ वाले माइक्रोप्लेट के स्तंभों में कुछ घंटों में परीक्षण किया जाता है। इस परीक्षण को जीनोटोक्सिसिटी के लिए पारंपरिक एम्स परीक्षण परख के एक व्यावहारिक पूरक या विकल्प के रूप में विकसित किया गया था, जिसमें अगर प्लेटों पर बैक्टीरिया का बढ़ना और संभावित रूप से उत्परिवर्तित यौगिकों या नमूनों के संपर्क में आने वाले बैक्टीरिया की उत्परिवर्तन दर से प्राकृतिक उत्परिवर्तन दर की तुलना करना शामिल है। एस. ओ. एस. क्रोमोटेस्ट सटीकता और संवेदनशीलता में एम्स परीक्षण जैसे स्थापित तरीकों से तुलनीय है और जीनोटॉक्सिक यौगिकों की जांच करने के लिए एक उपयोगी उपकरण है, जो मनुष्यों में कार्सिनोजेनिक साबित हो सकते हैं, ताकि आगे के गहन विश्लेषण के लिए रसायनों को अलग किया जा सके। अन्य बैक्टीरियल जेंटॉक्सिसिटी और म्यूटेजेनिसिटी परखों की तरह, गतिविधि के लिए चयापचय सक्रियण की आवश्यकता वाले यौगिकों की जांच एस9 माइक्रोसोमल रैट लिवर एक्सट्रैक्ट के साथ की जा सकती है। तंत्र एस. ओ. एस. प्रतिक्रिया जीनोटॉक्सिक यौगिकों के प्रति ई. कोलाई की प्रतिक्रिया में एक केंद्रीय भूमिका निभाती है क्योंकि यह रासायनिक एजेंटों की एक विस्तृत श्रृंखला के प्रति प्रतिक्रिया करती है। इस प्रणाली को ट्रिगर करने का उपयोग डीएनए क्षति के प्रारंभिक संकेत के रूप में किया जा सकता है और किया गया है। एस. ओ. एस. प्रतिक्रिया में दो जीन महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैंः लेक्सए प्रणाली में सभी जीनों के लिए एक दमनक को कूटबद्ध करता है, और आर. ई. सी. ए. एक एस. ओ. एस. प्रेरक संकेत द्वारा सक्रिय होने पर लेक्सए दमनक को तोड़ने में सक्षम प्रोटीन को कूटबद्ध करता है (इस मामले में एक जीनोटॉक्सिक यौगिक की उपस्थिति के कारण)। हालांकि एस. ओ. एस. प्रतिक्रिया का सटीक तंत्र अभी भी अज्ञात है, यह तब प्रेरित होता है जब डी. एन. ए. घाव डी. एन. ए. प्रतिकृति को बाधित करते हैं या रोकते हैं। .. विभिन्न अंतिम बिंदु एस. ओ. एस. प्रणाली के उद्दीपन के संभावित संकेतक हैं; आर. सी. ए. प्रोटीन की सक्रियता, लेक्स. ए. रिप्रेसर की दरार, किसी भी एस. ओ. एस. जीन की अभिव्यक्ति, आदि। सबसे सरल परीक्षणों में से एक में ई. कोलाई बीटा-गैलेक्टोसिडेस के लिए संरचनात्मक जीन, लैकजेड के साथ संलयन के माध्यम से एस. ओ. एस. जीन की अभिव्यक्ति की निगरानी करना शामिल है। प्रक्रिया एस. ओ. एस. क्रोमोटेस्ट में परीक्षण किए जाने वाले रसायन की बढ़ती सांद्रता के साथ ई. कोलाई को इनक्यूबेट करना शामिल है। प्रोटीन संश्लेषण के लिए समय देने के बाद, β-गैलेक्टोसिडेस गतिविधि का एक सरल रंगीन परख का उपयोग करके परीक्षण किया जाता है। एक लैक्टोज एनालॉग को शामिल करके जो क्षरण पर एक रंगीन यौगिक पैदा करता है, रंग में एक आसानी से अवलोकन योग्य या मात्रात्मक परिवर्तन का उपयोग मीट्रिक के रूप में किया जाता है। चूँकि रासायनिक परीक्षण उच्च सांद्रता पर प्रोटीन संश्लेषण को रोक सकता है, जिससे बी-गैलेक्टोसिडेस प्रेरण का कम आकलन होगा, इसलिए कोशिकाओं की उत्तरजीविता के लिए डेटा को मापने के लिए क्षारीय फॉस्फेट का β-गैलेक्टोसिडेस के साथ एक साथ परीक्षण किया जाता है। परख को आसानी से कई घंटों में पूरा किया जा सकता है। यदि माइक्रो-प्लेट रीडर का उपयोग किया जाता है, तो परीक्षण मात्रात्मक होता है और खुराक-प्रतिक्रिया वक्र में प्रारंभिक रैखिक क्षेत्र होता है। इस रैखिक क्षेत्र की ढलान प्रत्येक यौगिक के एक एकल पैरामीटर, एस. ओ. एस.-प्रेरक शक्ति (एस. ओ. एस. आई. पी.) के साथ स्पष्ट संबंध की अनुमति देती है, जो यौगिक की प्रेरक गतिविधि को दर्शाती है। यह परख जाँच उद्देश्यों के लिए एक गुणात्मक (रंग प्रवणता का दृश्य अवलोकन), या सामान्य रूप से स्वीकृत मेट्रिक्स की गणना के लिए मात्रात्मक माप (स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री) दोनों प्रदान करता है। मात्रात्मक परख में, एक यौगिक की खुराक-प्रतिक्रिया (बीटा-गैलेक्टोसिडेस उत्पादन से जुड़ा रंग उत्पादन) को प्लॉट किया जाता है, जिसमें प्रारंभिक रैखिक क्षेत्र के ढलान को एक सार्वभौमिक पैरामीटर, एस. ओ. एस.-प्रेरक शक्ति (एस. ओ. एस. आई. पी.) के रूप में उपयोग किया जाता है, जो एस. ओ. एस. प्रतिक्रिया को प्रेरित करने के लिए एक यौगिक की क्षमता को दर्शाता है (अप्रत्यक्ष रूप से बीटा-गैलेक्टोसिडेस के उत्पादन और लैक्टोज एनालॉग के टूटने के माध्यम से मापा जाता है)। आमतौर पर, लैक्टोज एनालॉग एक्स-गैल होता है, जो बीटा-गैलेक्टोसिडेस द्वारा विभाजित होने पर एक नीला रंग पैदा करता है। खुराक प्रतिक्रिया को कोशिकाओं के जीवित रहने से भी मापा जाता है, जिसे क्षारीय फॉस्फेट (जो एक पीला रंग पैदा करता है) के टूटने के माध्यम से मापा जाता है, जिससे एस. ओ. एस. आई. पी. की गणना की जा सकती है। यद्यपि एस. ओ. एस. आई. पी. एक सांद्रता-आधारित मीट्रिक है, उसी विधि का उपयोग जटिल पर्यावरणीय मिश्रणों के लिए किया जा सकता है जहां सांद्रता या रुचि के यौगिक भी अज्ञात हैं। मध्यवर्ती एस. ओ. एस.-प्रेरण कारक (एस. ओ. एस. आई. एफ.) की गणना के माध्यम से, जिसे पहले से नमूनों के विश्लेषणात्मक माप के बिना खुराक-प्रतिक्रिया का चित्रण देने के लिए उसी तरीके से डाइल्यूशन के खिलाफ प्लॉट किया जा सकता है। लाभ एस. ओ. एस. क्रोमोटेस्ट को जीनोटोक्सिसिटी के लिए सबसे सरल और त्वरित अल्पकालिक परीक्षण माना जाता है। यह कई कारणों से पारंपरिक एम्स परीक्षण के लिए एक उपयोगी और लागत प्रभावी पूरक के रूप में कार्य करता है। सबसे पहले, इसकी सरलता और तेजी के कारण, एस. ओ. एस. क्रोमोटेस्ट का उपयोग बड़ी संख्या में संभावित जीनोटॉक्सिक यौगिकों के लिए एक जांच परीक्षण के रूप में किया जा सकता है। दूसरा, यह जीनोटोक्सिक रसायनों का पता लगाने की अनुमति दे सकता है जो एम्स परीक्षण में गलत नकारात्मक परिणाम देते हैं (जैसे कि एस्ट्रैडियोल, बढ़ती चिंता का एक यौगिक)। तीसरा, यह एम्स परीक्षण में गलत सकारात्मक परिणामों में भेदभाव करने का एक प्रभावी तरीका साबित हो सकता है। संदर्भ जैविक तकनीक और उपकरण आनुवंशिकी परीक्षण