Umu Chromotest
फार्माकोलॉजी और जेनेटिक्स के लिए, उमू क्रोमोटेस्ट, जिसे पहली बार ओडा एट अल द्वारा विकसित और प्रकाशित किया गया था, रासायनिक यौगिकों की जीनोटॉक्सिक क्षमता का आकलन करने के लिए एक जैविक परख (बायोएसे) है। यह यूमू ऑपरॉन की अभिव्यक्ति को प्रेरित करने के लिए डी. एन. ए.-हानिकारक एजेंटों की क्षमता पर आधारित है। क्षति प्रेरक (डिन) जीन आरसीए, लेक्सए और यूएमयूडी के संबंध में, यूएमयूसी जीन अनिवार्य रूप से एसओएस प्रतिक्रिया के माध्यम से जीवाणु उत्परिवर्तन में शामिल है। यह परीक्षण एक ऑपरॉन संलयन का उपयोग करता है जो लाख ऑपरॉन (बीटा-गैलेक्टोसिडेस, एक प्रोटीन जो लैक्टोज को कम करता है, के उत्पादन के लिए जिम्मेदार) को यूमू-संबंधित प्रोटीन के नियंत्रण में रखता है। एक सरल रंगीन परीक्षण एक लैक्टोज एनालॉग को जोड़कर संभव है जो β-गैलेक्टोसिडेस द्वारा अवक्रमित होता है, एक रंगीन यौगिक का उत्पादन करता है जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री के माध्यम से मात्रात्मक रूप से मापा जा सकता है। रंग विकास की डिग्री उत्पादित β-गैलेक्टोसिडेस का एक अप्रत्यक्ष उपाय है, जो स्वयं सीधे डीएनए क्षति की मात्रा से संबंधित है। उमू क्रोमोटेस्ट के पास अपनी प्रक्रिया को आईएसओ 13829 "जल गुणवत्ता-उमू-परीक्षण का उपयोग करके पानी और अपशिष्ट जल की जीनोटॉक्सिसिटी का निर्धारण" के तहत संहिताबद्ध करने का अतिरिक्त लाभ है। हालांकि जीनोटोक्सिसिटी को सीधे मनुष्यों में कैंसर के विकास से नहीं जोड़ा जा सकता है, बैक्टीरिया में जीनोटोक्सिक प्रभाव और स्तनधारियों में उनके उत्परिवर्तक और ट्यूमर शुरू करने वाले गुणों के बीच एक मजबूत संबंध मौजूद दिखाया गया है। सिद्धांत साल्मोनेला टाइफिम्यूरियम टी. ए. 1535 [पी. एस. के. 1002] बैक्टीरिया एक 96-कुएँ सूक्ष्म प्लेट में संभावित जीनोटोक्सिक परीक्षण यौगिकों के संपर्क में हैं। यदि जीवाण्विक जीनोम में जीनोटॉक्सिक घाव उत्पन्न होते हैं, तो सामान्य एस. ओ. एस. प्रतिक्रिया के हिस्से के रूप में यू. एम. यू. सी. जीन प्रेरित होता है। प्लास्मिड पी. एस. के. 1002 में एस. ओ. एस. क्रोमोटेस्ट में संलयन की तरह, एल. ए. सी. जेड. रिपोर्टर जीन से जुड़ा यू. एम. यू. सी. जीन होता है। इस प्रकार यू. एम. यू. सी.-जीन का प्रेरण नमूने की जीनोटॉक्सिक क्षमता के लिए एक उपाय है। चूँकि यूएमयूसी-जीन को बीटा-गैलेक्टोसिडेस के लिए लैकजेड-जीन के साथ जोड़ा जाता है, इसलिए यूएमयूसी-जीन के प्रेरण का मूल्यांकन आसानी से बीटा-गैलेक्टोसिडेस गतिविधि के निर्धारण द्वारा किया जा सकता है, जिसे लैक्स-एन्कोडेड बी-गैलेक्टोसिडेस द्वारा एक रंगहीन ओ. एन. पी. जी. सब्सट्रेट (ओ-नाइट्रोफेनिल-बीटा-डी-गैलेक्टोपाइरेनोसाइड) को पीले उत्पाद ओ-नाइट्रोफेनिल में परिवर्तित करके मापा जाता है। चूंकि एस. ओ. एस. प्रतिक्रिया जीनोटॉक्सिक घावों के लिए एक सामान्य प्रतिक्रिया है, इसलिए उपयुक्त रिपोर्टर जीन निर्माण के साथ एस. टाइफिम्यूरियम का एक प्रकार जीवाणु जीनोटॉक्सिन के सभी वर्गों की पहचान करने के लिए पर्याप्त है। अन्य बैक्टीरियल जीनोटोक्सिसिटी और म्यूटेजेनिसिटी परखों के साथ, गतिविधि के लिए चयापचय सक्रियण की आवश्यकता वाले यौगिकों की जांच एस9 माइक्रोसोमल रैट लिवर एक्सट्रैक्ट के साथ की जा सकती है। प्रक्रिया एस. वृद्धि के घातीय चरण में टाइफिम्यूरियम बैक्टीरिया सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रणों के साथ-साथ रिक्त स्थान सहित तीन गुना में परीक्षण नमूने की घटती सांद्रता के लिए 2 घंटे के लिए उजागर होते हैं। 2 घंटे के बाद, एक्सपोजर कल्चर को ताजा विकास माध्यम में पतला कर दिया जाता है और आगे 2 घंटे के लिए बढ़ने दिया जाता है। यूएमयूसी जीन और फ्यूज्ड लैकजेड रिपोर्टर जीन के प्रेरण और बाद में बीटा-गैलेक्टोसिडेस की अभिव्यक्ति का आकलन बैक्टीरिया के लिसिस के बाद किया जाता है। रंगहीन ओ. एन. पी. जी. को प्रेरित β-गैलेक्टोसिडेस की उपस्थिति में पीले उत्पाद ओ-नाइट्रोफिनाइल में परिवर्तित किया जाता है। रंग की तीव्रता प्रेरित प्रोटीन की मात्रा और इस प्रकार परीक्षण नमूने की जीनोटॉक्सिक शक्ति से संबंधित है। मात्रात्मक मेट्रिक्स का उपयोग किया जाता है, जिसमें प्लेट के अवशोषण को विकास चरण से पहले और बाद में ओ. डी. 600 पर पढ़ा जाता है, साथ ही ओ. एन. पी. जी. ऊष्मायन के बाद ओ. डी. 420 का भी उपयोग किया जाता है। यह प्रेरण अनुपात (आई. आर.) की गणना के साथ-साथ विकास कारक की गणना करने की अनुमति देता है ताकि यह निर्धारित किया जा सके कि क्या साइटोटॉक्सिसिटी भी मौजूद है और आई. आर. मूल्यों को अमान्य कर रहा है। लाभ उत्परिवर्तन के लिए उमू क्रोमोटेस्ट और पारंपरिक एम्स परीक्षण के बीच उच्च सहसंबंध इसे हर साल संश्लेषित हजारों नए दवा, कृषि और औद्योगिक रसायनों के प्रारंभिक चरण के परीक्षण के लिए एक उचित विकल्प के रूप में समर्थन करता है। अधिकांश बड़े रासायनिक निर्माताओं के पास पारंपरिक एम्स परीक्षण के साथ प्रति वर्ष 100 या अधिक सिंथेटिक रसायनों की जांच करने की क्षमता होती है, जिसके लिए कई साल्मोनेला उपभेदों के उपयोग की आवश्यकता होती है। केवल एक साल्मोनेला उपभेद का उपयोग करके यू. एम. यू. परीक्षण, संभावित रूप से समान संसाधनों के साथ नए रसायनों की एक बड़ी श्रृंखला का परीक्षण कर सकता है। सामग्री खर्च और श्रम में कमी के साथ-साथ इसकी मजबूती भी इसे जटिल पर्यावरणीय नमूनों के लिए एक उपयुक्त स्क्रीन के रूप में स्थापित करती है। संदर्भ परीक्षण