L-Photo-methionine
एल-फोटो-मेथियोनीन एल-मेथियोनीन का एक फोटो-रिएक्टिव एमिनो एसिड व्युत्पन्न है जिसे 2005 में कृत्रिम रूप से बनाया गया था। प्रोटीन अमीनो एसिड की लंबी बहुलक श्रृंखलाएँ हैं; जो विभिन्न संरचनाओं और आकारों में हो सकती हैं। प्रोटीन एक दूसरे के साथ अंतःक्रिया कर सकते हैं (प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रिया या पी. पी. आई.) और इन अंतःक्रियाओं के साथ, कोशिकीय अंतःक्रियाओं और मार्गों को प्रभावित करते हैं। इस तरह की अंतःक्रियाएँ; वायरल संलयन और विकास-कारक संकेत में एंटीवायरल या कैंसर-रोधी दवाओं के लिए आशाजनक लग रही थीं, इसलिए अंतःक्रियाओं को समझने के लिए शोध किया जाना चाहिए। इसके साथ, शोध ने यह साबित करना शुरू कर दिया है कि प्रोटीन पृथक संस्थाओं की तुलना में अतिआण्विक परिसरों में कार्य करते हैं। इसलिए, वैज्ञानिकों मोनिका सुचनेक, अन्ना राडज़िकोव्स्की और क्रिस्टोफ़ थिएल ने शोध किया कि प्राकृतिक वातावरण में इन अंतःक्रियाओं का बेहतर अध्ययन करने का सीधा तरीका फोटो-क्रॉस-लिंकिंग प्रोटीन का एक नया तरीका बनाना था; जिससे एल-फोटो-मेथियोनीन का संश्लेषण हुआ और उसी अध्ययन में, एल-फोटो-ल्यूसीन। संश्लेषण रेसमिक फोटो-मेथियोनीन को स्ट्रेकर एमिनो एसिड संश्लेषण द्वारा 4,4 '-अज़ी-पेंटेनल से संश्लेषित किया जाता है। एल एनान्शिओमर एसिटामाइड के एंजाइमेटिक रिज़ॉल्यूशन द्वारा अलग किया जाता है। मेथियोनीन का फोटोएक्टिवेशन जैसा कि पहले उल्लेख किया गया था, एल-फोटो-मेथियोनीन का उपयोग उनके मूल वातावरण में प्रोटीन के साथ प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है। यह कैसे संभव है कि यूवी प्रकाश के संपर्क में आने पर अमीनो एसिड कैसे व्यवहार करता है। यह साबित करने के लिए कि पहले संश्लेषण काम करता है, उचित स्पेक्ट्रोस्कोपिक विधियों को करने के लिए अपने स्वयं के संश्लेषण के तहत एक रेडियोधर्मी कार्बन (14 सी) जोड़ा जाता है। फोटो-मेथियोनीन का सक्रियण क्योंकि पिछले संश्लेषण ने काम किया था, डायज़िरिन रिंग के कारण फोटो-मेथियोनीन फोटो-प्रतिक्रियाशील होता है। एक बार जब यह वलय यूवी प्रकाश के संपर्क में आ जाता है, तो नाइट्रोजन नाइट्रोजन गैस (एन2) के रूप में निकल जाता है और अत्यधिक प्रतिक्रियाशील मध्यवर्ती कार्बाइन बनाता है। अमीनो एसिड का फोटो-सक्रियण प्रोटीन में फोटो-क्रॉस-लिंकिंग की क्षमता प्रदान करता है। इस प्रकार के क्रॉस-लिंकिंग के तीन प्रमुख फायदे हैं; अल्पकालिक मध्यवर्ती के कारण इस क्रॉस-लिंकिंग के लिए अधिक विशिष्टता है और यह कि यह अमीनो एसिड कार्यात्मक है, और सबसे महत्वपूर्ण; विषाक्त नहीं है (जिसका अर्थ है कि यह प्रोटीन के कार्य या संरचना को नाटकीय रूप से बाधित नहीं करना चाहिए)। शोध में पाया गया था कि यह सक्रियण दर-सीमित करने वाला कदम है; क्रॉस-लिंकेज नहीं। एक नया कुशल संश्लेषण और उपयोग वैज्ञानिक मिकेल विला-पेरेलो, मैथ्यू आर. प्रैट, फ्रेज ट्यूलिन और टॉम डब्ल्यू. मुइर एक कुशल संश्लेषण बनाना चाहते थे क्योंकि मूल में एक एंजाइमेटिक समाधान की आवश्यकता थी और इसकी उपज कम थी। इसलिए, उन्होंने एल-ग्लूटामिक एसिड के साथ कार्बोक्जिलिक एसिड (टर्ट-ब्यूटाइल) और एमाइन पर बीओसी दोनों पर समूहों की रक्षा के साथ शुरुआत की। इस संश्लेषण का विस्तार क्लासिक के रूप में नहीं होगा, लेकिन नीचे पूर्ण संश्लेषण दिया गया है। वास्तविक चरणों का पता लगाने के लिए, संदर्भ देखें। इसलिए, एक बार जब उन्होंने एल-फोटो-मेथियोनीन का संश्लेषण किया, तो उपज 32 प्रतिशत थी, जो मूल संश्लेषण से बहुत अधिक (छह गुना) थी। इसका उपयोग तब किया गया था (एमाइन पर एक सुरक्षा समूह एफ. एम. ओ. सी. के साथ) जिसका उस उत्पाद ने अध्ययन करने के लिए अधिक सिंथेटिक कदम उठाए कि क्या एक एमिनो-एसिड क्रॉस लिंकर और एक पोस्ट-ट्रांसलेशनल मॉडिफिकेशन (पी. टी. एम.) को उसी प्रोटीन साइट पर विशेष रूप से एमिनो-एसिड की सहसंयोजक बातचीत को पकड़ने के लिए पेश किया जा सकता है जो पी. टी. एम. पर निर्भर है। पी. टी. एम. प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रियाओं को नियंत्रित करता है जिनमें ऐसी विशेषताएं होती हैं जो क्षणिक और सबस्टोइकिओमेट्रिक होती हैं; जिससे मानक तरीकों से इनका पता लगाना मुश्किल हो जाता है। इसलिए, यह देखने के लिए कि क्या यह काम करेगा, स्मैड 2 के एम. एच. 2 डोमेन का उपयोग किया गया था क्योंकि इस सिग्नलिंग प्रोटीन को रिसेप्टर-फॉस्फोराइलेटेड सेरीन अवशेषों के संपर्क में आने के बाद स्थिर होमो-ट्रिमर बनाने के लिए जाना जाता है। एक्सप्रेशन प्रोटीन लाइगेशन (ई. पी. एल. के रूप में जाना जाता है) का उपयोग स्मैड2-एम. एच. 2-सी. एस. पी. एस. एम.-फोटो-मेट (1) बनाने के लिए संश्लेषित करने के लिए किया गया था। उत्पाद का अध्ययन एक नियंत्रण प्रोटीन के खिलाफ क्रॉस-लिंकर (फोटो-मेट) के साथ किया गया थाः एच. ए.-एम. एच. 2-सी. एस. पी. एस. एम. पी. एस. (इसमें फोटो-मेथियोनीन की कमी है, 2) एस. डी. एस.-पेज का उपयोग करके और एंटी-एच. ए. एंटीबॉडी का उपयोग करके वेस्टर्न ब्लॉटिंग। 1 ने दो प्रमुख क्रॉस-लिंक्ड प्रजातियों को उत्पन्न किया था जिनका आणविक वजन स्मैड 2-एसएच 2 के डाइमर और ट्रिमर के अनुरूप है। उस क्रॉस-लिंकर के बिना, गैर-विकिरणित 1 में और यूवी विकिरण से पहले और बाद में 2 में डाइमर और ट्रिमर का मुश्किल से पता चला था। यह साबित करना कि एल-फोटो-मेथियोनीन का उपयोग ई. पी. एल. के साथ किया जा सकता है और इसका उपयोग एक क्षणिक एम. एच. 2-एम. एच. 2 अंतःक्रिया को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है जो एक पी. टी. एम. पर निर्भर था। कोलेस्ट्रॉल होमियोस्टेसिस में फोटो-मेथियोनीन प्रोटीन इंटरैक्शन कॉम्प्लेक्स और मेम्ब्रेन प्रोटीन के कार्य का उपयोग जैसा कि पहले उल्लेख किया गया है, वैज्ञानिक मोनिका सुचनेक, एना रैडज़िकोव्स्की और क्रिस्टोफ़ थिएले अपने प्राकृतिक वातावरण में प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन का अध्ययन करना चाहते थे। विशेष रूप से, झिल्ली प्रोटीन (एक परिसर में और एस. सी. ए. पी., इन्सिग-1 और एस. आर. ई. बी. पी. हैं) जो कोलेस्ट्रॉल होमियोस्टेसिस को नियंत्रित करते हैं इसलिए वे जानना चाहते थे कि उनका कार्य क्या था और जटिल संरचना क्या थी। उन्होंने जो पाया वह यह था कि इस फोटो-रिएक्टिव अमीनो एसिड का उपयोग स्तनधारी कोशिकाओं द्वारा प्रोटीन में कुशलता से शामिल किया गया था, लेकिन संशोधित टी. आर. एन. ए. (ट्रांसफर आर. एन. ए.) या ए. ए. आर. एस. (एमिनोसेल टी. आर. एन. ए. संश्लेषण) का उपयोग करने की आवश्यकता नहीं थी जो विशिष्ट क्रॉस-लिंकिंग की अनुमति देता था। इस क्रॉस-लिंकिंग को वेस्टर्न ब्लॉटिंग द्वारा निर्धारित किया जा सकता है और उन्होंने इंसिग-1 और पीजीआरएमसी1 (एक प्रोजेस्टेरोन-बाइंडिंग मेम्ब्रेन प्रोटीन) के बीच एक सीधी बातचीत की खोज की थी। सभी चार झिल्ली प्रोटीन एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम में पाए जाते हैं और कॉम्प्लेक्स कम कोलेस्ट्रॉल के स्तर पर प्रतिक्रिया करता है। जिन कोशिकाओं (सी. ओ. एस. 7) में एच. ए. (हेमाग्लुटिनिन टैग पी. जी. आर. एम. सी. 1) और माइक टैग इनसिग-1 थे, उन्हें फोटो-मेट के साथ और उसके बिना उगाया गया था। फोटो-मेट की उपस्थिति में, इंसिग-1 और एस. सी. ए. पी. ने पी. जी. आर. एम. सी. 1 के साथ क्रॉस-लिंक्ड किया था; विशेष रूप से, इंसिग-1 क्रॉस-लिंक्ड का एक मजबूत बैंड था। एच. ए. के प्रति एंटीबॉडी के साथ इम्यूनोप्रेसिपिटेटिंग डिटर्जेंट-एक्सट्रैक्ट्स द्वारा क्रॉस-लिंकिंग का पता लगाया गया था, फिर माइक के लिए एंटीबॉडी के साथ वेस्टर्न ब्लॉटिंग का उपयोग करके इन्सिग-1 के लिए अवक्षेपक का परीक्षण किया गया था। एक समान बैंड पता लगाने के विपरीत क्रम में पाया गया; जिसका अर्थ है कि माइक एंटीबॉडी को प्रतिरक्षित किया गया था और उसके बाद एच. ए. एंटीबॉडी के साथ धब्बा लगाया गया था। इसलिए, यह विधि काम करने के लिए साबित हुई थी कि फोटो-मेट प्रोटीन को क्रॉस-लिंक कर सकता है, लेकिन इस क्रॉस-लिंकिंग के शारीरिक निहितार्थ अभी तक निर्धारित नहीं किए गए हैं। मास स्पेक्ट्रोमेट्री प्रोटीन के साथ प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए प्रोटीन नैनोप्रोब्स के उपयोग का अध्ययन एक प्रोटीन नैनोप्रोब (जो क्रॉस-लिंकिंग को सक्षम बनाता है) का उपयोग करके किया गया था जो प्रोटीन के भीतर फोटो-मेथियोनीन पेश करता है (पुनर्संयोजक अभिव्यक्ति के दौरान) जो प्रोटीन को अपनी आरक्षित संरचना को बनाए रखते हुए इसकी अंतःक्रियाओं के लिए मानचित्रित करने की क्षमता रखता है। मॉडल का उपयोग संपर्क सतह के एक क्षेत्र के रूप में किया गया था जो 14-3-3 ζ प्रोटीन के दो अणुओं के बीच एक प्रसिद्ध बातचीत (समरूपता) में शामिल है। एक बार जब फोटो-मेथियोनीन पेश किया जाता है और यूवी-प्रकाश का उपयोग करके सक्रिय हो जाता है, तो यह बिना किसी विशिष्टता (जिसका अर्थ है कि कोई समूह नहीं) के साथ क्रॉस-लिंक कर सकता है और लिंक की लंबाई शून्य होती है। उच्च रिज़ॉल्यूशन मास स्पेक्ट्रोमेट्री या एमएस (यहां तक कि एमएस/एमएस) का उपयोग क्रॉस-लिंक्ड अवशेषों और प्रतिक्रिया त्रिज्या को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है; शोधकर्ताओं को प्रोटीन के समरूपीकरण को चिह्नित करने और शोध करने की अनुमति देता है। फोटो-मेथियोनीन के साथ उच्च-रिज़ॉल्यूशन एमएस के उपयोग के अपने फायदे हैं क्योंकि यह फिर से प्रोटीन को अपनी मूल स्थिति में रहने देता है, प्रोटीन की छोटी मात्रा का उपयोग करते समय उचित समय पैमाने होते हैं। रासायनिक क्रॉस-लिंकिंग की तुलना में फोटो-एक्टिव क्रॉस-लिंकर (फोटो-मेथियोनीन) का उपयोग करके प्रतिक्रिया विशिष्टता और प्रतिबंधों पर भी कम सीमाएँ हैं। एम. एस. के साथ मिलकर प्रोटीन नैनोप्रोब से संयुक्त फोटो-इनिशिएटेड क्रॉस-लिंकिंग की यह विधि न केवल होमोडिमर गठन बल्कि ऑलिगोमर्स और सिद्धांत रूप में; हेटेरोमर्स (जैसे प्रोटीन-प्रोटीन मिश्रण की संरचना और इसकी कार्यक्षमता) को चिह्नित करने के लिए उपयोगी हो सकती है। फोटो-साइटोक्रोम बी5 का उपयोग करके साइटोक्रोम पी450 इलेक्ट्रॉन-परिवहन श्रृंखला का अध्ययन करने की क्षमता साइटोक्रोम बी5 को प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रियाओं का मानचित्रण करने के लिए फोटो-मेथियोनीन के साथ संश्लेषित किया गया था, जबकि स्तनधारी मिश्रित कार्य ऑक्सीडेस प्रणाली (जिसे एम. एफ. ओ. के रूप में भी जाना जाता है) का अध्ययन करने के लिए इसकी संरचना की पहचान भी की गई थी। यह प्रणाली एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम की झिल्ली में स्थित है और यह साइटोक्रोम पी450, एन. ए. डी. पी. एच.: साइटोक्रोम पी450 रिडक्टेस, और साइटोक्रोम बी5 के साथ एन. ए. डी. एच.: साइटोक्रोम बी5 रिडक्टेस से बना है। एक बार साइटोक्रोम बी5 परिसर में फोटो-मेथियोनीन शामिल हो जाने के बाद (जिसका अर्थ है कि फोटो-मेट को मेथियोनीन और अब फोटो-साइट बी5 के स्थान पर प्रतिस्थापित किया गया था), फोटो-साइट बी5 और साइटोक्रोम पी450 को यूवी-प्रकाश में रखा गया और उत्पादों का अध्ययन एसडीएस-पेज का उपयोग करके किया जा सका; इस विधि में तीन क्रॉस-लिंक दिखाए गए थे। फोटो-मेथियोनीन फोटो-साइट बी5 के मानचित्रण में सफल साबित हुआ था क्योंकि माल्डी-टीओएफ विधि में तीन ऑलिगोमर्स (काइमोट्रिप्टिक पेप्टाइड्स से) दिखाए गए थे जो 1:1,1:2 और 2:1 के आणविक वजन अनुपात में फोटो-साइट बी5 और साइटोक्रोम पी450 से बने थे। साइटोक्रोम पी450 और साइटोक्रोम बी5 के अध्ययन में जो बात फोटो-मेथियोनीन को यहाँ इतना उपयोगी बनाती है, वह यह है कि यह विधि न केवल प्रोटीन-प्रोटीन इंटरफेस को न केवल विलायक के संपर्क में आने वाले क्षेत्रों में, बल्कि मूल वातावरण में भी मानचित्रित करती है; झिल्ली। एक विशिष्ट क्रॉस-लिंकिंग विधि केवल विलायक के संपर्क में आने वाले क्षेत्रों में काम कर सकती है, एक बार फिर यह साबित करती है कि फोटो-मेथियोनीन अपने मूल वातावरण में प्रोटीन के साथ इन प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रियाओं का मानचित्रण करने के लिए उपयोगी है। लैमिनिन γ1 लैमिनिन के साथ अंतःक्रिया करने वाले निडोजेन-1 के प्रोटीन संरचना विश्लेषण गैर-कोलेजनस प्रोटीन हैं जो तहखाने की झिल्ली में पाए जाते हैं और गैर-सहसंयोजक स्व-अंतःक्रियाओं के माध्यम से नेटवर्क बनाते हैं। निडोजेन (जिसे एंटैक्टिन के रूप में भी जाना जाता है) सल्फेटेड मोनोमेरिक ग्लाइकोप्रोटीन हैं जो उच्च जीवों की तहखाने की झिल्ली में सर्वव्यापी रूप से मौजूद होते हैं। निडोजेन तहखाने के निर्माण में मदद करते हैं। लैमिनिन और निडोजेन दोनों के साथ, दोनों एक दूसरे के साथ बातचीत करते हैं ताकि एक परिसर में 1:1 का स्टोइकिओमेट्री संबंध हो। लैमिनिन γ1 की छोटी भुजा का अध्ययन करने के लिए, फोटो मेथियोनीन ने निडोजन-1, लैमिनिन γ1 LEb2-4, और लैमिनिन γ1 छोटी भुजा दोनों को यह देखने के लिए पेश किया कि क्या यह फोटो-क्रॉस लिंकिंग विधि संरचना का नक्शा बना सकती है। एमएस/एमएस विश्लेषण यह पता लगाने के लिए क्रॉस-लिंकिंग से पहले किया गया था कि केवल 13-25% मेथियोनीन को शामिल किया गया था, लेकिन एक बार यूवी-ए-प्रेरित या एक अन्य क्रॉस-लिंकर, बीएस2जी-मध्यस्थ क्रॉस-लिंक्ड (एक होमोबिफ़क्शनल क्रॉस-लिंकर), फोटो-मेथियोनीन का प्रतिशत बढ़कर 35 प्रतिशत हो गया था। दोनों क्रॉस-लिंकर्स ने कार्यों को समझने में मदद करने के लिए कम्प्यूटेशनल और प्रयोगात्मक दोनों तरह से अतिरिक्त संरचनात्मक अंतर्दृष्टि दिखाई थी। डायमेरिक संरचना और ऑलिगोमेरिक संरचना साइक्लोऑक्सीजिनेज-2 (सी. ओ. एक्स.-2) और माइक्रोसोमल प्रोस्टाग्लैंडिन ई2 सिंथेस-1 (एम. पी. जी. ई. एस.-1) संरचनाओं के प्रकटीकरण का अध्ययन फोटो-मेथियोनीन (फोटो-सक्रिय) और द्वि-कार्यात्मक क्रॉस लिंकर दोनों का उपयोग करके किया गया था। सी. ओ. एक्स.-2 में उपयोग किए जाने वाले फोटो-मेथियोनीन ने द्वि-कार्यात्मक क्रॉस-लिंकर के रूप में दिखाया था कि एक द्विमितीय संरचना थी जो एंजाइम की क्रिस्टल संरचना के अनुरूप थी। एम. पी. जी. ई. एस.-1 में, मानव कोशिकाओं (ए. 549) को डिसुसिनिमिडाइल सुबेरेट (रासायनिक क्रॉस-लिंकर) के साथ उपचारित किया गया था, जिसमें 33के. डी. ए. का एक डाइमर और 45के. डी. ए. का एक ट्रिमर प्राप्त हुआ था, जबकि इसे फोटो-मेथियोनीन के साथ उपचारित किया गया था, जिसमें समान आणविक भार (33के. डी. ए.) का एक डाइमर और दो पुटेटिव ट्रिमर (50के. डी. ए. और 55के. डी. ए.) प्राप्त हुए थे। एक बार एक एम. पी. जी. ई. एस.-1 अवरोधक (एम. एफ. 63) पेश किया गया था; इसने 50के. डी. ए. और 55के. डी. ए. परिसरों के गठन को बाधित कर दिया था। रासायनिक क्रॉस-लिंकर द्वारा उत्पादित डाइमर और ट्रिमर अवरोधक से प्रभावित नहीं थे। फिर भी, फोटो-मेथियोनीन और न ही डिसुसिनिमिडाइल सुबेरेट ने सी. ओ. एक्स.-2 और एम. पी. जी. ई. एस.-1 के बीच कोई प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रिया नहीं दिखाई थी और यह विभिन्न कारणों से हो सकता है। फोटो-मेथियोनीन के लिए; एक इस समय कम निगमन के कारण हो सकता है क्योंकि यह 0.7% था। तो, एम. पी. जी. ई. एस.-1 के लिए; इसमें 152 एमिनो एसिड हैं इसलिए प्रति मोनोमर केवल एक फोटो-मेथियोनीन को शामिल किया जाएगा। इसका मतलब यह भी है कि एक विशिष्ट मेथियोनीन को प्रतिस्थापित नहीं किया जाएगा ताकि एम. पी. जी. ई. एस.-1 की विषम आबादी के परिणामस्वरूप अलग-अलग क्रॉस-लिंकिंग हो। भले ही यह कोई प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रिया नहीं दिखाता था, लेकिन इसका उपयोग ओलिगोमेरिक संरचनाओं को निर्धारित करने के शीर्ष पर कोशिका झिल्ली में अवरोधक-प्रेरित प्रोटीन संरचनात्मक परिवर्तनों का पता लगाने के लिए किया जा सकता है। एस्चेरिचिया कोलाई कोशिकाओं में फोटो-मेथियोनीन का उपयोग एस्चेरिचिया कोलाई कोशिकाओं में पुनः संयोजक प्रोटीन को लेबल करने के लिए किया जा सकता है; हालाँकि सामान्य रूप से मेथियोनीन एक दुर्लभ अमीनो एसिड है, इसलिए इसका मतलब है कि यह केवल सीमित संरचनात्मक डेटा दे सकता है। फिर भी, फोटो-मेथियोनीन को Ca2 + रेगुलेटिंग प्रोटीन कैलमोडुलिन (CaM जो 17-kDa था) में शामिल किया गया था जिसमें नौ मेथियोनीन होते हैं और मास स्पेक्ट्रोमेट्री (MS) के माध्यम से अध्ययन किया जाता है। जो बात इस विधि को अलग बनाती है, वह है कोशिकाओं में शामिल करने के लिए डी. एम. ई. एम. (डुल्बेको का संशोधित ईगल का सीमित माध्यम) या डायलाइज्ड भ्रूण गोजातीय सीरम के बजाय खनिज लवण माध्यम का उपयोग। खनिज नमक माध्यम का उपयोग करने से कोशिकाओं को शुरू से ही विकसित किया जा सकता था ताकि अन्य प्रोटोकॉल के साथ जटिल चरणों को समाप्त किया जा सके (एल. बी. माध्यम में कोशिकाओं को इंक्यूबेट करना, उसके बाद धोना, और आगे कम माध्यम में इंक्यूबेट करना), जिसका अर्थ है कि फोटो-मेथियोनीन को कोशिका वृद्धि की शुरुआत में ही शामिल किया जा सकता था जिसकी उच्च उपज 30 प्रतिशत से अधिक थी। कोशिका विकास प्रक्रिया के दौरान फोटो-मेथियोनीन ने कोई नुकसान नहीं दिखाया था और एक बार यूवी-ए प्रकाश द्वारा फोटो-सक्रिय होने के बाद, सीएएम में नौ अलग-अलग क्रॉस-लिंक साइटें थीं जब एमएस ने निर्धारित किया था कि फोटो-मेथियोनीन लेबल सीएएम के शिखर थे। फोटो-मेथियोनीन का उपयोग न केवल 3डी प्रोटीन संरचना के मानचित्रण, प्रोटीन-प्रोटीन अंतःक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है, बल्कि अब प्रोटीन में हाइड्रोफोबिक क्षेत्रों का भी उपयोग किया जा सकता है। संदर्भ जैव रसायन का पता लगाने की विधियाँ फोटोकेमिस्ट्री अल्फा-एमिनो एसिड एमिनो एसिड व्युत्पन्न डायज़िरिन