Proximity ligation assay
નિકટતા બંધન પરીક્ષણ (મૂળ સ્થાને પી. એલ. એ.) એ એક એવી તકનીક છે જે પ્રોટીનની સીધી તપાસ, પ્રોટીનની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ, બાહ્યકોષીય ફોલ્લાઓ અને ઉચ્ચ વિશિષ્ટતા અને સંવેદનશીલતા સાથે અનુવાદ પછીના ફેરફારોનો સમાવેશ કરવા માટે પરંપરાગત રોગપ્રતિકારક શક્તિ પરીક્ષણોની ક્ષમતાઓને વિસ્તૃત કરે છે. પ્રોટીન લક્ષ્યોને સહેલાઈથી શોધી શકાય છે અને એકલ પરમાણુ રીઝોલ્યુશન સાથે સ્થાનિક કરી શકાય છે અને બિનપરિવર્તિત કોષો અને પેશીઓમાં નિરપેક્ષપણે પ્રમાણિત કરી શકાય છે. માત્ર થોડા કોષોનો ઉપયોગ કરીને, પેટા-કોષીય ઘટનાઓ, ક્ષણિક અથવા નબળી ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ પણ મૂળ સ્થાને પ્રગટ થાય છે અને કોષોની પેટા-વસ્તીને અલગ કરી શકાય છે. કલાકોની અંદર, પરંપરાગત સહ-રોગપ્રતિકારક શક્તિ અને સહ-સ્થાનિકીકરણ તકનીકોના પરિણામોની પુષ્ટિ કરી શકાય છે. પી. એલ. એ. સિદ્ધાંત વિવિધ પ્રજાતિઓમાં ઊભા થયેલા બે પ્રાથમિક એન્ટિબોડીઝ રસના પ્રોટીન પર લક્ષિત એન્ટિજેનને ઓળખે છે (આકૃતિ 1). પી. એલ. એ. પ્રોબ્સ તરીકે ઓળખાતા વિવિધ પ્રાથમિક એન્ટિબોડીઝના સતત પ્રદેશો સામે નિર્દેશિત ગૌણ એન્ટિબોડીઝ (2o એબી) પ્રાથમિક એન્ટિબોડીઝ (આકૃતિ 2) સાથે જોડાય છે. દરેક પી. એલ. એ. તપાસમાં તેની સાથે ટૂંકા ક્રમમાં ચોક્કસ ડીએનએ સ્ટ્રાન્ડ જોડાયેલ હોય છે. જો પી. એલ. એ. તપાસ નજીકમાં હોય (એટલે કે, જો રસના બે મૂળ પ્રોટીન નજીકમાં હોય, અથવા પ્રોટીન સંકુલનો ભાગ હોય, જે આંકડામાં બતાવ્યા પ્રમાણે), તો ડીએનએ સ્ટ્રેન્ડ્સ યોગ્ય સબસ્ટ્રેટ્સ અને ઉત્સેચકો (આકૃતિ 3) સાથે બે અન્ય અનુક્રમ-વિશિષ્ટ ડીએનએ ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ્સના ઉમેરા પર રોલિંગ સર્કલ ડીએનએ સંશ્લેષણમાં ભાગ લઈ શકે છે. ડીએનએ સંશ્લેષણ પ્રતિક્રિયાના પરિણામે ડીએનએ વર્તુળના સેંકડો ગણા વિસ્તરણ થાય છે. આગળ, ફ્લોરોસન્ટ-લેબલ પૂરક ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ ચકાસણીઓ ઉમેરવામાં આવે છે, અને તેઓ વિસ્તૃત ડીએનએ (આકૃતિ 4) સાથે જોડાય છે. જ્યારે ફ્લોરોસન્સ માઇક્રોસ્કોપથી જોવામાં આવે ત્યારે ફ્લોરોસન્સની પરિણામી ઉચ્ચ સાંદ્રતા સરળતાથી એક અલગ તેજસ્વી સ્થળ તરીકે દેખાય છે. બતાવેલ ચોક્કસ કિસ્સામાં (આકૃતિ 5), ન્યુક્લિયસ મોટું થાય છે કારણ કે આ બી-સેલ લિમ્ફોમા સેલ છે. રસ ધરાવતા બે પ્રોટીન બી સેલ રીસેપ્ટર અને એમવાયડી88 છે. કોષરસમાં ક્રિયાપ્રતિક્રિયાની શોધ રસપ્રદ હતી કારણ કે બી સેલ રીસેપ્ટર્સ કોષ પટલમાં સ્થિત હોવાનું માનવામાં આવે છે. ઉપર વર્ણવ્યા મુજબ પી. એલ. એ. નો ઉપયોગ અન્ય ઘણા વિષયોમાં પ્રાણી વિકાસ અને સ્તન કેન્સરના પાસાઓનો અભ્યાસ કરવા માટે કરવામાં આવે છે. ઇન સિટુ પ્રોક્સિમિટી લિગેશન એસેઝ (આઇ. એસ. પી. એલ. એ.) નો ઉપયોગ માનવ પેશીઓમાં એન્ટિબોડી માન્યતા માટે આઇ. એચ. સી. પર વિવિધ ફાયદાઓ સાથે કરવામાં આવ્યો છે, જેમાં શોધની વિશિષ્ટતામાં વધારો, અચોક્કસ ડાઘમાં ઘટાડો અને વધુ સારું સ્થાનિકીકરણ સામેલ છે. પ્રોટીન અને આર. એન. એ. ના જોડાણનો અભ્યાસ કરવા માટે તકનીકની વિવિધતા (આર. આઈ. એસ. એચ.-પી. એલ. એ.) નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો છે. ઇન સિટુ પી. એલ. એ. ની અન્ય વિવિધતામાં મલ્ટિપ્લેક્સ પી. એલ. એ. પરીક્ષણનો સમાવેશ થાય છે જે સમાંતરમાં બહુવિધ પ્રોટીન સંકુલની કલ્પના કરવાનું શક્ય બનાવે છે. પી. એલ. એ. ને એલિસા, ફ્લો સાયટોમેટ્રી જેવા અન્ય રીડ આઉટ સ્વરૂપો સાથે પણ જોડી શકાય છે. અને વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગ સંદર્ભો બાયોકેમિસ્ટ્રી શોધ પ્રતિક્રિયાઓ ઇમ્યુનોલોજિક પરીક્ષણો