Monocyte monolayer assay
મોનોસાઈટ મોનોલેયર એસે (એમ. એમ. એ.) નો ઉપયોગ રક્ત સંક્રમણ પ્રાપ્તકર્તાઓ દ્વારા ઉત્પાદિત એલોએન્ટિબોડીઝના તબીબી મહત્વને નિર્ધારિત કરવા માટે થાય છે. જ્યારે અસંગત સેલ્યુલર રક્ત ઉત્પાદનોને એનેમિક દર્દીને ટ્રાન્સફ્યુઝ કરવામાં આવે છે ત્યારે પરીક્ષણનો ઉપયોગ ઇન્ટ્રાવાસ્ક્યુલર હેમોલિસિસની સંભાવનાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે થાય છે. જ્યારે દાતા કોષો એવા પદાર્થો ધરાવે છે જે પ્રાપ્તકર્તા દ્વારા ઉત્પન્ન થતા નથી, ત્યારે પ્રાપ્તકર્તાની રોગપ્રતિકારક શક્તિ પદાર્થ સામે એન્ટિબોડીઝ ઉત્પન્ન કરે છે; આને એલોએન્ટિબોડીઝ કહેવામાં આવે છે. ચોક્કસ શ્વેત રક્તકણો, જેને મોનોસાઇટ્સ કહેવાય છે, તેમને વિદેશી પદાર્થો પીવાનું કામ સોંપવામાં આવે છે અને ચોક્કસ બળતરા ઘટનાઓ દરમિયાન સક્રિય થાય છે. આ સક્રિય મોનોસાઇટ્સ એન્ટિબોડી-સેન્સિટાઇઝ્ડ રેડ બ્લડ સેલ્સ (આરબીસી) ના સંપર્કમાં આવે છે અને ફેગોસાઇટોસિસ (ઇન્જેશન) પ્રદર્શિત કરી શકે છે અથવા ન પણ કરી શકે અને દાતા લાલ રક્ત કોશિકાઓનો નાશ કરી શકે છે. જો મોનોસાઇટ્સ આર. બી. સી. નો નાશ કરે છે, તો તે આર. બી. સી. સાથે જોડાયેલ એન્ટિબોડી તબીબી રીતે નોંધપાત્ર માનવામાં આવે છે. પૃષ્ઠભૂમિ બ્લડ બેંકિંગ બ્લડ બેંકિંગ એ ક્લિનિકલ લેબોરેટરીની અંદરની એક સાંદ્રતા છે જે સંભવિત સંક્રમણ પ્રાપ્તકર્તાઓના નમૂનાઓનું વિશ્લેષણ કરે છે અને તે દર્દીની સંભાળના પ્રભારી આરોગ્ય સંભાળ ટીમને સુસંગત રક્ત ઉત્પાદનો પ્રદાન કરે છે. લોહીની ટાઇપિંગ (એબીઓ/આરએચ સ્થિતિનું નિર્ધારણ), એન્ટિબોડી સ્ક્રિનિંગ, સેરોલોજિક ક્રોસ-મેચિંગ, ડાયરેક્ટ એન્ટિગ્લોબ્યુલિન પરીક્ષણ અને એન્ટિબોડી ઓળખ સહિત અનેક નિયમિત પરીક્ષણો કરવામાં આવે છે. એબીઓ અને આરએચ (ડી) રક્ત જૂથ એન્ટિજેન્સમાં કુદરતી રીતે બનતાં એન્ટિબોડીઝ (આઇસોહેમેગ્લુટિનિન્સ) ની હાજરી ઉપરાંત, વધારાના રોગપ્રતિકારક-ઉત્તેજિત એન્ટિબોડીઝને અનપેક્ષિત એલોએન્ટિબોડીઝ ગણવામાં આવે છે. અણધારી એન્ટિબોડીઝની ઓળખ એ શ્રમ-સઘન પ્રક્રિયા છે, અને કેટલીકવાર એન્ટિબોડીની યોગ્ય ઓળખ કરવામાં મદદ કરવા માટે વિશેષ પ્રયોગશાળા તકનીકોના ઉમેરાની જરૂર પડે છે. આ તકનીકોમાં ઇલ્યુશન, શોષણ અને એન્ઝાઇમ સારવારનો સમાવેશ થાય છે. કેટલાક દર્દીઓ ઉચ્ચ આવર્તન એન્ટિજેન્સ માટે એન્ટિબોડીઝ ઉત્પન્ન કરે છે. એટલે કે, લાલ કોષના એન્ટિજેન્સ માનવ વસ્તીના નોંધપાત્ર ભાગમાં હાજર છે. એન્ટિબોડીને તબીબી રીતે નોંધપાત્ર માનવામાં આવે છે કે નહીં તે મૂલ્યાંકન કરવું શંકાસ્પદ અને ખૂબ જ મુશ્કેલ હોઈ શકે છે. તબીબી રીતે નોંધપાત્ર એન્ટિબોડી એ એન્ટિબોડી છે જે ઈન વિટ્રો હેમોલિસિસ અથવા સંક્રમિત દાતા લાલ રક્ત કોશિકાઓના અસ્તિત્વમાં ઘટાડો કરવા માટે સક્ષમ છે. મોનોસાઈટ મોનોલેયર પરીક્ષણનો ઉપયોગ કરીને ક્લિનિકલ મહત્વ માટે ઉચ્ચ આવર્તન એન્ટિજેન્સ માટે એન્ટિબોડીઝનું મૂલ્યાંકન કરી શકાય છે. હેમોલિટીક ટ્રાન્સફ્યુઝન પ્રતિક્રિયા રક્ત તબદિલી માટે અસામાન્ય પ્રતિક્રિયાઓની ઘણી જુદી જુદી જાતો છે. આમાંથી, સંભવિત જીવલેણ પ્રતિક્રિયાને હેમોલિટીક ટ્રાન્સફ્યુઝન પ્રતિક્રિયા તરીકે ઓળખવામાં આવે છે. આ એક રોગપ્રતિકારક મધ્યસ્થ પ્રતિક્રિયા છે જ્યાં પ્રાપ્તકર્તા એન્ટિબોડીઝ દાતા લાલ રક્તકણોના એન્ટિજેન (ઓ) પર હુમલો કરે છે, જે દાતા કોશિકાઓના હેમોલિસિસનું કારણ બને છે. પ્રતિક્રિયા દરમિયાન, તરત પછી અથવા 28 દિવસ પછી સુધી થઈ શકે છે. પ્રથમ 24 કલાકની અંદર તીવ્ર પ્રતિક્રિયા જોવા મળે છે, જ્યારે વિલંબિત પ્રતિક્રિયા રક્ત તબદિલી પછી 24 કલાક અને 28 દિવસની વચ્ચે જોવા મળે છે. એલોએન્ટિબોડી રચના અને ક્લિનિકલ મહત્વ જ્યારે એબીઓ રક્ત જૂથ પ્રણાલી વિશે વાત કરવામાં આવે છે, ત્યારે લેન્ડસ્ટેનરનો કાયદો જણાવે છે કે જો કોઈ વ્યક્તિ પાસે એ અને/અથવા બી એન્ટિજેન હોય, તો તે આ એન્ટિજેન્સ માટે એન્ટિબોડીઝ બનાવશે નહીં. જો કે, જો કોઈ વ્યક્તિ પાસે એ અથવા બી એન્ટિજેન્સ ન હોય, તો તે કુદરતી રીતે એન્ટી-એ અને એન્ટી-બી એન્ટિબોડીઝ ઉત્પન્ન કરશે. ઇન્ટરનેશનલ સોસાયટી ઓફ બ્લડ ટ્રાન્સફ્યુઝન (ISBT) અનુસાર, સેંકડો વિવિધ લાલ રક્તકણોના એન્ટિજેન્સ ધરાવતી 43 રક્ત જૂથ પ્રણાલીઓનું વર્ણન કરવામાં આવ્યું છે. કેટલાક અપવાદો સાથે, ઘણા બિન-એ. બી. ઓ. રક્ત જૂથ પ્રણાલીના એન્ટિજેન્સને એન્ટિબોડીના ઉત્પાદનને ઉત્તેજીત કરવા માટે સંવેદનશીલ ઘટનાની જરૂર પડે છે. બીજા શબ્દોમાં કહીએ તો, રોગપ્રતિકારક શક્તિ ગેરકાયદેસર એન્ટિબોડીના ઉત્પાદન માટે એન્ટિજેનના સંપર્કમાં હોવી જોઈએ. એન્ટિજેન્સનો સંપર્ક રક્ત તબદિલી, સ્ટેમ સેલ/બોન મેરો ટ્રાન્સપ્લાન્ટ અને ગર્ભાવસ્થા દ્વારા થઈ શકે છે. એલોએન્ટિબોડીનું તબીબી મહત્વ દાતા લાલ રક્તકણોના અસ્તિત્વમાં ઘટાડો કરવાની તેની ક્ષમતા પર આધાર રાખે છે. તબીબી રીતે નોંધપાત્ર એલોએન્ટિબોડીઝની લાક્ષણિકતાઓમાં નીચેનાનો સમાવેશ થાય છેઃ ઇમ્યુનોગ્લોબ્યુલિન જી એન્ટિબોડી પેટા વર્ગ, શરીરના તાપમાન પર પ્રતિક્રિયાશીલતા અને પરોક્ષ એન્ટિગ્લોબ્યુલિન પરીક્ષણમાં એન્ટિ-હ્યુમન ગ્લોબ્યુલિન (એ. એચ. જી.) ની હાજરીમાં લાલ રક્તકણોના એકત્રીકરણનું કારણ બનવાની ક્ષમતા. કેટલીકવાર, એન્ટિબોડીનું ક્લિનિકલ મહત્વ નક્કી કરવું મુશ્કેલ હોઈ શકે છે. ઉચ્ચ પ્રચલિત લાલ કોષ એન્ટિજેન્સ માટે એન્ટિબોડીઝ કેટલીકવાર તબીબી રીતે નોંધપાત્ર એલોએન્ટિબોડીઝની શોધને છુપાવી શકે છે કારણ કે અનુરૂપ એન્ટિજેન મોટાભાગના, જો બધા નહીં, તો સ્ક્રીનીંગ લાલ રક્ત કોશિકાઓ પર હાજર હોય છે, જેનો ઉપયોગ આ એન્ટિબોડીઝને શોધવા માટે થાય છે. આ તે છે જ્યાં મોનોસાઈટ મોનોલેયર પરીક્ષણ ઉપયોગી હોઈ શકે છે. સિદ્ધાંત એમએમએ એ ખૂબ જ શ્રમ-સઘન, જાતે પ્રયોગશાળા પરીક્ષણ પદ્ધતિ છે. આ પરીક્ષણમાં નીચેના પગલાં લેવામાં આવે છેઃ સામાન્ય, તંદુરસ્ત વ્યક્તિઓ પાસેથી એન્ટિકોએગ્યુલેટેડ લોહી એકત્રિત કરવામાં આવે છે. એસિડ સાઇટ્રેટ ડેક્સટ્રોઝને પ્રાધાન્ય આપવામાં આવે છે. પેરિફેરલ બ્લડ મોનોન્યુક્લિયર સેલ્સ (પી. બી. એમ. સી.) ને ફિકોલ-પેક ઘનતા ઢાળનો ઉપયોગ કરીને લોહીના નમૂનામાંથી કાપવામાં આવે છે. પી. બી. એમ. સી. ને ફોસ્ફેટ-બફર્ડ સેલાઇન (પી. બી. એસ.) નો ઉપયોગ કરીને ધોવામાં આવે છે અને પછી મોનોસાઇટ્સને વ્યવહારુ રાખવા માટે ટીશ્યુ કલ્ચર મીડિયામાં સસ્પેન્ડ કરવામાં આવે છે. પી. બી. એમ. સી.-મીડિયાનું મિશ્રણ પછી ટીશ્યુ કલ્ચર ચેમ્બર સ્લાઇડમાં ઉમેરવામાં આવે છે. મોનોસાયટ્સ એક મોનોસાયટ મોનોલેયર બનાવતી કાચની સ્લાઇડને વળગી રહેશે. સીરમ મિશ્ર કરવામાં આવે છે અને શરીરના તાપમાન (37 ડિગ્રી સેલ્સિયસ) પર 5 ટકા જૂથ ઓ. આર. બી. સી. સસ્પેન્શન સાથે સેવન કરવામાં આવે છે. (આ પગલું એન્ટીબોડી સાથે આરબીસીને સંવેદનશીલ બનાવે છે અથવા કોટ કરે છે) સંવેદનશીલ આરબીસીને કોઈપણ અનબાઉન્ડ એન્ટિબોડી અથવા દખલ કરનારા પદાર્થોને દૂર કરવા માટે પીબીએસ સાથે ધોવામાં આવે છે. ધોવાઇ, સંવેદનશીલ આરબીસી પછી મોનોસાઈટ મોનોલેયર ટીશ્યુ કલ્ચર ચેમ્બર સ્લાઇડમાં ઉમેરવામાં આવે છે. 60 મિનિટ, 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસના સેવન પછી, સુપરનેટન્ટને ચેમ્બર સ્લાઇડ્સમાંથી દૂર કરવામાં આવે છે અને પીબીએસથી ધોઈ નાખવામાં આવે છે. એકવાર સ્લાઇડ સંપૂર્ણપણે સૂકાઈ જાય પછી, તેને રાઈટ-ગિમેસા ડાઘથી રંગવામાં આવે છે. આરબીસી ફેગોસાઇટોસિસના પુરાવા માટે માઇક્રોસ્કોપ હેઠળ ઓછામાં ઓછા 600 (જો પોઝિટિવિટી 20 ટકાથી વધુ હોય તો 200) મોનોસાઇટ્સ જોવા મળે છે. ગુણવત્તાની ખાતરી માટે દર્દીના નમૂના સાથે હકારાત્મક અને નકારાત્મક નિયંત્રણ પણ કરવામાં આવે છે. અર્થઘટન જો હકારાત્મક કે નકારાત્મક નિયંત્રણો નિષ્ફળ જાય, તો સમગ્ર પરીક્ષણ પ્રક્રિયા અમાન્ય છે અને તેનું પુનરાવર્તન કરવું આવશ્યક છે. સકારાત્મક એમ. એમ. એ. માટેના માપદંડ પ્રયોગશાળા દ્વારા અલગ અલગ હશે, જોકે સાન્દ્રા નેન્સ એટ અલ દ્વારા મૂળ રૂપે સ્થાપિત થ્રેશોલ્ડ> 20 ટકા ફેગોસાઇટિક પ્રવૃત્તિ જોવા મળે છે. તબીબી રીતે, હકારાત્મક એમએમએ સૂચવે છે કે પરીક્ષણમાં ઉપયોગમાં લેવાતા દર્દીના સીરમમાં તબીબી રીતે નોંધપાત્ર એન્ટિબોડીઝ હોય છે જે એન્ટિબોડી-મધ્યસ્થી ફેગોસાયટોસિસ પેદા કરવામાં સક્ષમ હોય છે. તીવ્ર હેમોલિટીક ટ્રાન્સફ્યુઝન પ્રતિક્રિયા એન્ટિબોડી ઓપ્સોનાઇઝેશન એલોએન્ટિબોડીઝ સંદર્ભો ટ્રાન્સફ્યુઝન દવા રક્ત પરીક્ષણો પણ જુઓ.