Rabbit hybridoma
સસલાનું સંકરણ એ કેન્સરગ્રસ્ત બી-સેલ (માયલોમા) સાથે સસલાના બી સેલનું ઉત્પાદન કરતી એન્ટિબોડીના મિશ્રણ દ્વારા રચાયેલી એક વર્ણસંકર કોષ રેખા છે. સસલાની રોગપ્રતિકારક શક્તિને ઉચ્ચ આકર્ષણ અને ફોસ્ફો-પેપ્ટાઇડ્સ, કાર્બોહાઈડ્રેટ્સ અને ઇમ્યુનોજેન્સ સહિતના ઘણા અણુઓની વધુ વૈવિધ્યસભર ઓળખ સાથે એન્ટિબોડીઝ વિકસાવવા માટેના વાહન તરીકે દસ્તાવેજીકરણ કરવામાં આવ્યું છે જે અન્યથા ઉંદરમાં રોગપ્રતિકારક નથી. જો કે, તાજેતરમાં સુધી, સસલામાંથી ઉપલબ્ધ એન્ટિબોડીઝનો પ્રકાર પોલીક્લોનલ એન્ટિબોડીઝ સુધી મર્યાદિત હતો. 1970 ના દાયકામાં માઉસ હાઇબ્રિડોમા તકનીકના વિકાસ પછી સસલાના મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝ પેદા કરવા માટે ઘણા પ્રયાસો કરવામાં આવ્યા હતા. સસલાના મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝ બનાવવા માટે માઉસ-રેબિટ હેટેરો-હાઇબ્રિડમોસમાં સંશોધન હાથ ધરવામાં આવ્યું હતું. જો કે, આ હેટેરો-હાઈબ્રિડોમા આખરે ક્લોન કરવા મુશ્કેલ હતા, અને ક્લોન, સામાન્ય રીતે અસ્થિર હતા, અને લાંબા સમય સુધી એન્ટિબોડીઝ સ્ત્રાવ કરતા ન હતા. પ્રારંભિક ફ્યુઝન પાર્ટનર 1995માં, કેથરિન નાઈટ અને તેમના સાથીદારો, શિકાગોના લોયોલા યુનિવર્સિટી ખાતે, ઇમ્યુનોગ્લોબ્યુલિન હેવી અને લાઇટ ચેઇન એન્હાન્સર્સના નિયંત્રણ હેઠળ ઓન્કોજીન્સ વી-એ. બી. એલ. અને સી-માઇકને વધુ પડતા અભિવ્યક્ત કરતા ડબલ ટ્રાન્સજેનિક સસલાને વિકસાવવામાં સફળ રહ્યા હતા. સસલાએ માયલોમા જેવી ગાંઠની રચના કરી હતી, જે 240E-1 નામની પ્લાઝમાસીટોમા કોષ રેખાને અલગ કરવાની મંજૂરી આપે છે. સસલાના લિમ્ફોસાઇટ્સ સાથે 240E-1 કોષોનું જોડાણ સંકરણ ઉત્પન્ન કરે છે જે સસલાના મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝને સુસંગત રીતે સ્ત્રાવ કરે છે. જો કે, 1970 ના દાયકામાં વિકસિત પ્રારંભિક માઉસ માયલોમા રેખાઓની જેમ, સ્થિરતા ચિંતાનો વિષય હતો. ડૉ. નાઈટની પ્રયોગશાળાથી 240E-1 કોષ રેખા પ્રાપ્ત કરનારી સંખ્યાબંધ પ્રયોગશાળાઓએ સંલયન કોષ રેખા 240E-1 સાથે સ્થિરતાની સમસ્યાઓની જાણ કરી હતી. 1996માં, યુનિવર્સિટી ઓફ કેલિફોર્નિયા સાન ફ્રાન્સિસ્કો (યુસીએસએફ) ખાતે વેઇમિન ઝુ અને રોબર્ટ પાયટેલાએ ડૉ. નાઈટની પ્રયોગશાળામાંથી 240ઇ-1 મેળવ્યું અને સુધારેલા સસલાના સંકરણને વિકસાવવાનો પ્રયાસ કર્યો. 240E-1 ની લાક્ષણિકતાઓમાં સુધારાઓ પુનરાવર્તિત સબક્લોનિંગ, ઉચ્ચ ફ્યુઝન કાર્યક્ષમતા માટે પસંદગી, મજબૂત વૃદ્ધિ અને તબક્કા-વિરોધાભાસ માઇક્રોસ્કોપ હેઠળ તેજસ્વી દેખાવ જેવી મોર્ફોલોજિકલ લાક્ષણિકતાઓ દ્વારા પૂર્ણ કરવામાં આવ્યા હતા. સ્થિર સંકરણ અને મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડી સ્ત્રાવ ઉત્પન્ન કરવાની તેમની ક્ષમતા માટે પસંદ કરેલા પેટા ક્લોન્સનું વધુ પરીક્ષણ કરવામાં આવ્યું હતું. સબક્લોનિંગ અને પસંદગી પ્રક્રિયાઓના બહુવિધ રાઉન્ડ પછી, 240E-W નામની નવી સેલ લાઇનની ઓળખ કરવામાં આવી હતી અને જે વધુ સારી ફ્યુઝન કાર્યક્ષમતા અને સ્થિરતા દર્શાવે છે. સેલ લાઇન 240ઇ-ડબલ્યુ ત્યારથી સંશોધન અને વ્યાપારી કાર્યક્રમો માટે સસલાના મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝના ઉત્પાદન માટે વધુ વિકસિત અને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવામાં આવી છે. પ્રક્રિયા સસલામાં સંકરણ રચનાની પ્રક્રિયામાં સૌપ્રથમ સસલામાંથી બી-કોષો મેળવવાનો સમાવેશ થાય છે જેનું રસીકરણ કરવામાં આવ્યું છે. સસલા માટે અસંખ્ય રસીકરણ પ્રોટોકોલ છે, ખાસ કરીને પોલીક્લોનલ એન્ટિબોડીઝની પેઢી માટે. રસીકરણ પછી, બી-કોષોને ઉમેદવાર સસલાના ફ્યુઝન ભાગીદાર કોષ રેખા સાથે જોડવામાં આવે છે જેથી વર્ણસંકર રચના થાય. સંકરણમાંથી પરિણામી એન્ટિબોડીઝની એન્ટિજેન માટે તપાસ કરવામાં આવે છે જે ELISA, વેસ્ટર્ન બ્લોટ, ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી અને FACS જેવા નિદાન પરીક્ષણો દ્વારા રસના માપદંડને પૂર્ણ કરે છે. મોનોક્લોનલ લાક્ષણિકતાઓની ખાતરી કરવા માટે પરિણામી હાયબ્રડોમાને સબક્લોન કરી શકાય છે. નેશનલ કેન્સર ઇન્સ્ટિટ્યૂટ (બેથેસ્ડા, યુએસએ) ખાતે સસલાના એન્ટિબોડીઝ મિશેલ હો અને ઇરા પાસ્ટનનું માનવીયકરણ સસલાના મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝના જૂથને અલગ પાડે છે (દા. ત. YP218, YP223) જે મેસોથેલિનના દુર્લભ એપિટોપ્સને ઓળખે છે, જેમાં કેન્સર ઉપચાર માટે સી ટર્મિનલ એન્ડની નજીકની નબળી રોગપ્રતિકારક સાઇટ્સનો સમાવેશ થાય છે. ડૉ. હોની પ્રયોગશાળાએ પ્રોટીન ડેટા બેંકમાંથી તેમના એન્ટિજેન્સ સાથે સસલાના એન્ટિબોડીઝની જટિલ રચનાઓનું વિશ્લેષણ કર્યું અને સસલાના એફવી પર એન્ટિજેન-સંપર્ક કરતા અવશેષોને તેના એન્ટિજેનથી 6 એંગસ્ટ્રોમ અંતરની અંદર ઓળખી કાઢ્યા. તેઓએ "એચ. વી. 4" અને "એલ. વી. 4" નામ આપ્યું, બિન-પૂરકતા-નિર્ધારિત ક્ષેત્ર (સી. ડી. આર.) લૂપ જે માળખાકીય રીતે એન્ટિજેનની નજીક છે અને અનુક્રમે સસલાની ભારે સાંકળ અને હળવી સાંકળના માળખા 3 માં સ્થિત છે. કોમ્પ્યુટેશનલ સ્ટ્રક્ચરલ મોડેલિંગના આધારે, હો અને ઝાંગે સંયુક્ત કબાત/આઇએમજીટી/પેરાટોમ સીડીઆરને માનવ જર્મલાઇન ફ્રેમવર્ક ક્રમમાં કલમ બનાવીને માનવકરણ વ્યૂહરચના તૈયાર કરી. ઇમ્યુનોટોક્સિન માનવકૃત સસલાના એફવીએસ (દા. ત.) થી બનેલું છે. એચ. વાય. પી. 218) તબીબી રીતે ઉપયોગમાં લેવાતા ઝેર સાથે જોડાઈને તેમના મૂળ સસલાના એફ. વી. માંથી મેળવેલા ઇમ્યુનોટોક્સિન કરતાં ગાંઠના કોષો સામે મજબૂત સાયટોટોક્સિસિટી દર્શાવે છે. એચવાયપી218 એન્ટિબોડી પર આધારિત સીએઆર ટી કોષો પણ ઉંદરમાં ગાંઠની વૃદ્ધિને અસરકારક રીતે અટકાવે છે. પદ્ધતિ (એટલે કે. સંયુક્ત કબાત/આઇએમજીટી/પેરાટોમ સસલાના સીડીઆરને સ્થિર માનવ જર્મલાઇન માળખામાં કલમ બનાવવાનું) સસલાના એન્ટિબોડીઝને માનવીય બનાવવા માટેના સામાન્ય અભિગમ તરીકે સૂચવવામાં આવ્યું છે. સંદર્ભો બાહ્ય કડીઓ 240ઇ-ડબલ્યુ ઇમ્યુનોલોજી બાયોટેકનોલોજી ઇમ્યુન સિસ્ટમ મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝ માટે 240ઇ-1 સેલોસૌરસ એન્ટ્રી માટે બાહ્ય કડીઓ સેલોસૌરસ એન્ટ્રી થેરાપ્યુટિક એન્ટિબોડીઝ રેબિટ સેલ લાઇન્સ