ELISA
એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ એસે (ELISA) (,) એ સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતી વિશ્લેષણાત્મક બાયોકેમિસ્ટ્રી એસે છે, જેનું વર્ણન સૌપ્રથમ 1971માં ઇવા એન્ગવેલ અને પીટર પર્લમેન દ્વારા કરવામાં આવ્યું હતું. માપવા માટે પ્રોટીન સામે નિર્દેશિત એન્ટિબોડીઝનો ઉપયોગ કરીને પ્રવાહી નમૂનામાં લિગાન્ડ (સામાન્ય રીતે પ્રોટીન) ની હાજરીને શોધવા માટે આ પરીક્ષણ સોલિડ-ફેઝ પ્રકારનાં એન્ઝાઇમ ઇમ્યુનોએસે (ઇઆઇએ) નો ઉપયોગ કરે છે. એલિસાનો ઉપયોગ દવા, પ્લાન્ટ પેથોલોજી અને બાયોટેકનોલોજીમાં નિદાન સાધન તરીકે તેમજ વિવિધ ઉદ્યોગોમાં ગુણવત્તા નિયંત્રણ તપાસ તરીકે કરવામાં આવે છે. એલિસાના સૌથી સરળ સ્વરૂપમાં, પરીક્ષણ કરવાના નમૂનામાંથી એન્ટિજેન્સ સપાટી સાથે જોડાયેલા હોય છે. પછી, સપાટી પર મેળ ખાતી એન્ટિબોડી લાગુ કરવામાં આવે છે જેથી તે એન્ટિજેનને બાંધી શકે. આ એન્ટિબોડીને એન્ઝાઇમ સાથે જોડવામાં આવે છે અને પછી કોઈપણ અનબાઉન્ડ એન્ટિબોડીઝને દૂર કરવામાં આવે છે. અંતિમ તબક્કામાં, એન્ઝાઇમના સબસ્ટ્રેટ ધરાવતો પદાર્થ ઉમેરવામાં આવે છે. જો ત્યાં બંધનકર્તા હોય, તો અનુગામી પ્રતિક્રિયા શોધી શકાય તેવો સંકેત ઉત્પન્ન કરે છે, જે સામાન્ય રીતે રંગ પરિવર્તન હોય છે. એલિસા કરવામાં ચોક્કસ એન્ટિજેન માટે વિશિષ્ટતા સાથે ઓછામાં ઓછી એક એન્ટિબોડીનો સમાવેશ થાય છે. એન્ટિજેનની અજ્ઞાત માત્રા સાથેના નમૂનાને નક્કર આધાર (સામાન્ય રીતે પોલિસ્ટરીન માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ) પર સ્થિર કરવામાં આવે છે, ક્યાં તો બિન-વિશિષ્ટ રીતે (સપાટી પર શોષણ દ્વારા) અથવા ખાસ કરીને ("સેન્ડવિચ" એલિસામાં સમાન એન્ટિજેન માટે વિશિષ્ટ અન્ય એન્ટિબોડી દ્વારા કેપ્ચર કરીને). એન્ટિજેન સ્થિર થયા પછી, ડિટેક્શન એન્ટિબોડી ઉમેરવામાં આવે છે, જે એન્ટિજેન સાથે કોમ્પ્લેક્સ બનાવે છે. ડિટેક્શન એન્ટિબોડીને એન્ઝાઇમ સાથે સહસંયોજક રીતે જોડી શકાય છે અથવા ગૌણ એન્ટિબોડી દ્વારા શોધી શકાય છે જે બાયોકોન્જુગેશન દ્વારા એન્ઝાઇમ સાથે જોડાયેલી હોય છે. દરેક પગલા વચ્ચે, પ્લેટને સામાન્ય રીતે હળવા ડિટર્જન્ટ સોલ્યુશનથી ધોવામાં આવે છે જેથી કોઈ પણ પ્રોટીન અથવા એન્ટિબોડીઝ કે જે બિન-વિશિષ્ટ રીતે બંધાયેલા હોય તેને દૂર કરી શકાય. ધોવાના અંતિમ પગલા પછી, પ્લેટને દૃશ્યમાન સંકેત ઉત્પન્ન કરવા માટે એન્ઝાઇમેટિક સબસ્ટ્રેટ ઉમેરીને વિકસાવવામાં આવે છે, જે નમૂનામાં એન્ટિજેનની માત્રા સૂચવે છે. નોંધપાત્ર બાબત એ છે કે, એલિસા કડક રીતે "ઇમ્યુનો" પરીક્ષણોને બદલે લિગાન્ડ બંધનકર્તા પરીક્ષણોના અન્ય સ્વરૂપો કરી શકે છે, જો કે આ પદ્ધતિના સામાન્ય ઉપયોગ અને વિકાસના ઇતિહાસને કારણે નામ મૂળ "ઇમ્યુનો" ધરાવે છે. આ તકનીક માટે અનિવાર્યપણે કોઈપણ લિગેટિંગ રીએજન્ટની જરૂર પડે છે જેને ડિટેક્શન રીએજન્ટ સાથે નક્કર તબક્કા પર સ્થિર કરી શકાય છે જે ખાસ કરીને બાંધશે અને સંકેત પેદા કરવા માટે એન્ઝાઇમનો ઉપયોગ કરશે જેને યોગ્ય રીતે પ્રમાણિત કરી શકાય છે. ધોવા વચ્ચે, માત્ર લિગાન્ડ અને તેના ચોક્કસ બંધનકર્તા સમકક્ષો ઘન તબક્કામાં એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ દ્વારા ખાસ કરીને બંધાયેલા અથવા "ઇમ્યુનોસોર્બેડ" રહે છે, જ્યારે બિન-વિશિષ્ટ અથવા અનબાઉન્ડ ઘટકો ધોવાઇ જાય છે. અન્ય સ્પેક્ટ્રોફોટોમેટ્રિક વેટ લેબ એસે ફોર્મેટથી વિપરીત જ્યાં સમાન પ્રતિક્રિયા સારી રીતે (દા. ત., કુવેટ) ધોયા પછી ફરીથી વાપરી શકાય છે, એલિસા પ્લેટમાં પ્રતિક્રિયા ઉત્પાદનો નક્કર તબક્કા પર ઇમ્યુનોસોર્બ્ડ હોય છે, જે પ્લેટનો ભાગ છે, અને તેથી સરળતાથી ફરીથી વાપરી શકાતા નથી. સિદ્ધાંત એક વિશ્લેષણાત્મક બાયોકેમિસ્ટ્રી પરીક્ષણ અને "વેટ લેબ" તકનીક તરીકે, એલિસામાં વિશ્લેષણ દરમિયાન પ્રવાહી રીએજન્ટ્સનો ઉપયોગ કરવાનું ચાલુ રાખતી પદ્ધતિ દ્વારા પ્રવાહી નમૂનામાં એક એનાલાઇટ (એટલે કે, ચોક્કસ પદાર્થ કે જેની હાજરી માત્રાત્મક અથવા ગુણાત્મક રીતે વિશ્લેષણ કરવામાં આવી રહી છે) ની શોધનો સમાવેશ થાય છે (એટલે કે, બાયોકેમિકલ પ્રતિક્રિયાઓનો નિયંત્રિત ક્રમ કે જે એક સંકેત પેદા કરશે જેને સરળતાથી પરિમાણિત કરી શકાય છે અને નમૂનામાં એનાલાઇટની માત્રાના માપ તરીકે અર્થઘટન કરી શકાય છે) જે પ્રવાહી રહે છે અને પ્રતિક્રિયા ચેમ્બરની અંદર રહે છે અથવા રિએક્ટન્ટ્સને સમાવવા માટે સારી રીતે જરૂરી છે. આ "ડ્રાય લેબ" તકનીકોથી વિપરીત છે જે ડ્રાય સ્ટ્રીપ્સનો ઉપયોગ કરે છે. જો નમૂનો પ્રવાહી હોય (દા. ત., એક માપેલ નાનો ડ્રોપ), તો "ડ્રાય" વિશ્લેષણમાં અંતિમ તપાસના પગલામાં રિફ્લેક્ટોમેટ્રી જેવી પદ્ધતિઓ દ્વારા સૂકી પટ્ટીનું વાંચન સામેલ છે અને નમૂનાઓ વચ્ચે સ્પિલઓવર અથવા મિશ્રણને રોકવા માટે પ્રતિક્રિયા નિયંત્રણ ચેમ્બરની જરૂર નથી. વિજાતીય પરીક્ષણ તરીકે, ELISA અમુક ઘટકોને નક્કર તબક્કા પર શોષીને વિશ્લેષણાત્મક પ્રતિક્રિયા મિશ્રણના કેટલાક ઘટકોને અલગ કરે છે જે શારીરિક રીતે સ્થિર હોય છે. એલિસામાં, પ્રવાહી નમૂનાને વિશિષ્ટ બંધનકર્તા ગુણધર્મો સાથે સ્થિર ઘન તબક્કા પર ઉમેરવામાં આવે છે અને તે પછી બહુવિધ પ્રવાહી રીએજન્ટ્સ દ્વારા અનુસરવામાં આવે છે જે ક્રમિક રીતે ઉમેરવામાં આવે છે, સેવન કરવામાં આવે છે અને ધોવાઇ જાય છે, ત્યારબાદ કેટલાક ઓપ્ટિકલ ફેરફાર (દા. ત., એન્ઝાઇમેટિક પ્રતિક્રિયાના ઉત્પાદન દ્વારા રંગ વિકાસ) કૂવામાં અંતિમ પ્રવાહી કે જેમાંથી એનાલાઇટનો જથ્થો માપવામાં આવે છે. માત્રાત્મક "વાંચન" સામાન્ય રીતે સ્પેક્ટ્રોફોટોમેટ્રી દ્વારા પ્રસારિત પ્રકાશની તીવ્રતાની શોધ પર આધારિત હોય છે, જેમાં પ્રવાહી દ્વારા પ્રકાશની અમુક ચોક્કસ તરંગલંબાઇના પ્રસારણનું પ્રમાણ (તેમજ બહુવિધ-વેલ પ્લેટ ફોર્મેટમાં કૂવાના પારદર્શક તળિયે) નો સમાવેશ થાય છે. શોધની સંવેદનશીલતા વિશ્લેષણાત્મક પ્રતિક્રિયાઓ દરમિયાન સંકેતના વિસ્તરણ પર આધારિત છે. ઉત્સેચક પ્રતિક્રિયાઓ ખૂબ જ જાણીતી પ્રવર્ધન પ્રક્રિયાઓ હોવાથી, સંકેત ઉત્સેચકો દ્વારા પેદા થાય છે જે ચોક્કસ પ્રમાણને મંજૂરી આપવા માટે નિશ્ચિત પ્રમાણમાં શોધ રીએજન્ટ્સ સાથે જોડાયેલા હોય છે, અને આમ તેનું નામ "એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ" છે. એનાલાઇટને લિગાન્ડ પણ કહેવામાં આવે છે કારણ કે તે ખાસ કરીને ડિટેક્શન રીએજન્ટ સાથે જોડાય છે અથવા જોડાય છે, આમ એલિસા લિગાન્ડ બાઇન્ડિંગ એસેઝની મોટી શ્રેણી હેઠળ આવે છે. લિગાન્ડ-વિશિષ્ટ બંધનકર્તા રીએજન્ટને "સ્થિર" કરવામાં આવે છે, એટલે કે, સામાન્ય રીતે પારદર્શક તળિયે કોટેડ અને સૂકવવામાં આવે છે અને કેટલીકવાર કૂવાની બાજુની દિવાલ પર પણ સૂકવવામાં આવે છે (અહીં સ્થિર "નક્કર તબક્કો"/"નક્કર સબસ્ટ્રેટ" ઘન સૂક્ષ્મ કણો/મણકાના વિરોધમાં કે જેને ધોઈ શકાય છે), જે સામાન્ય રીતે "એલિસા પ્લેટ" તરીકે ઓળખાતી બહુવિધ-કૂવાની પ્લેટ તરીકે બનાવવામાં આવે છે. પરંપરાગત રીતે, રોગપ્રતિકારક શક્તિના અન્ય સ્વરૂપોની જેમ, એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી પ્રકારની પ્રતિક્રિયાની વિશિષ્ટતાનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે કારણ કે ખાસ કરીને એન્ટિજેન સામે રિએજન્ટ તરીકે એન્ટિબોડીને વધારવી સરળ છે. વૈકલ્પિક રીતે, જો એનાલાઇટ પોતે એન્ટિબોડી હોય, તો તેના લક્ષ્ય એન્ટિજેનનો ઉપયોગ બંધનકર્તા રીએજન્ટ તરીકે થઈ શકે છે. એલિસાના વિકાસ પહેલાં, ઇમ્યુનોએસે હાથ ધરવાનો એકમાત્ર વિકલ્પ રેડિયોઇમ્યુનોએસે હતો, જે કિરણોત્સર્ગી રીતે લેબલ થયેલ એન્ટિજેન્સ અથવા એન્ટિબોડીઝનો ઉપયોગ કરતી તકનીક હતી. રેડિયોઇમ્યુનોએસેમાં, કિરણોત્સર્ગી સંકેત પૂરો પાડે છે, જે સૂચવે છે કે નમૂનામાં ચોક્કસ એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડી હાજર છે કે કેમ. રેડિયોઇમ્યુનોએસેનું વર્ણન સૌપ્રથમ 1960 માં પ્રકાશિત રોઝલીન સુસમેન યાલો અને સોલોમન બર્સન દ્વારા વૈજ્ઞાનિક પેપરમાં કરવામાં આવ્યું હતું. કિરણોત્સર્ગી પ્રવૃત્તિ સંભવિત આરોગ્ય જોખમ ઊભું કરે છે, તેથી સલામત વિકલ્પની શોધ કરવામાં આવી હતી. રેડિયોઇમ્યુનોએસે માટે યોગ્ય વિકલ્પ કિરણોત્સર્ગી સંકેતની જગ્યાએ બિન-કિરણોત્સર્ગી સંકેતને બદલશે. જ્યારે ઉત્સેચકો (જેમ કે હોર્સરાડિશ પેરોક્સિડેઝ) યોગ્ય સબસ્ટ્રેટ્સ (જેમ કે એબીટીએસ અથવા ટીએમબી) સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે, ત્યારે રંગમાં ફેરફાર થાય છે, જેનો સંકેત તરીકે ઉપયોગ થાય છે. જો કે, સંકેત એન્ટિબોડી અથવા એન્ટિજેનની હાજરી સાથે સંકળાયેલો હોવો જોઈએ, તેથી જ એન્ઝાઇમને યોગ્ય એન્ટિબોડી સાથે જોડવું પડશે. આ જોડાણ પ્રક્રિયા સ્વતંત્ર રીતે સ્ટ્રેટિસ અવરામેસ અને જી. બી. દ્વારા વિકસાવવામાં આવી હતી. પિયર્સ. ધોઇને કોઈપણ અનબાઉન્ડ એન્ટિબોડી અથવા એન્ટિજેનને દૂર કરવું જરૂરી હોવાથી, એન્ટિબોડી અથવા એન્ટિજેનને કન્ટેનરની સપાટી પર નિશ્ચિત કરવું પડે છે; એટલે કે, ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ તૈયાર હોવું જોઈએ. આ પરિપૂર્ણ કરવાની એક તકનીક વાઈડ અને જર્કર પોરાથ દ્વારા 1966માં પ્રકાશિત કરવામાં આવી હતી. 1971 માં, સ્વીડનમાં સ્ટોકહોમ યુનિવર્સિટી ખાતે પીટર પર્લમેન અને ઇવા એન્ગવોલ અને નેધરલેન્ડ્સમાં એન્ટોન શુઅર્સ અને બૌક વાન વીમેને સ્વતંત્ર રીતે કાગળો પ્રકાશિત કર્યા હતા જેણે આ જ્ઞાનને EIA/ELISA કરવા માટેની પદ્ધતિઓમાં સંશ્લેષણ કર્યું હતું. પરંપરાગત એલિસામાં સામાન્ય રીતે ક્રોમોજેનિક પત્રકારો અને સબસ્ટ્રેટ્સનો સમાવેશ થાય છે જે એન્ટિજેન અથવા એનાલાઇટની હાજરી સૂચવવા માટે અમુક પ્રકારના અવલોકનક્ષમ રંગ પરિવર્તન ઉત્પન્ન કરે છે. નવી એલિસા જેવી તકનીકો માત્રાત્મક સંકેતો બનાવવા માટે ફ્લોરોજેનિક, ઇલેક્ટ્રોકેમિલ્યુમિનેસન્ટ અને માત્રાત્મક પી. સી. આર. પત્રકારોનો ઉપયોગ કરે છે. આ નવા પત્રકારોને ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા અને મલ્ટિપ્લેક્સિંગ સહિત વિવિધ લાભો હોઈ શકે છે. તકનીકી દ્રષ્ટિએ, આ પ્રકારના નવા પરીક્ષણો સખત રીતે ELISA નથી, કારણ કે તે "એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ" નથી, પરંતુ તેના બદલે કેટલાક નોનએન્ઝાઇમેટિક રિપોર્ટર સાથે જોડાયેલા છે. જો કે, આ પરીક્ષણોમાં સામાન્ય સિદ્ધાંતો મોટા ભાગે સમાન છે તે જોતાં, તેમને ઘણીવાર ELISA જેવી જ શ્રેણીમાં જૂથબદ્ધ કરવામાં આવે છે. 2012 માં, ક્રોમોજેનિક રિપોર્ટર તરીકે નેનોપાર્ટિકલ્સનો ઉપયોગ કરીને એક અતિસંવેદનશીલ, એન્ઝાઇમ-આધારિત એલિસા પરીક્ષણ માત્ર એનાલાઇટના એટોગ્રામની શોધમાંથી નગ્ન-આંખનો રંગ સંકેત આપવા સક્ષમ હતું. હકારાત્મક પરિણામો માટે વાદળી રંગ અને નકારાત્મક માટે લાલ રંગ દેખાય છે. નોંધ લો કે આ શોધ માત્ર એનાલાઇટની હાજરી અથવા ગેરહાજરીની પુષ્ટિ કરી શકે છે, વાસ્તવિક સાંદ્રતાની નહીં. પ્રકાર ચોક્કસ અણુઓ માટે ઘણા એલિસા પરીક્ષણો છે જે મેળ ખાતી એન્ટિબોડીઝનો ઉપયોગ કરે છે. એલિસા પરીક્ષણો વિશ્લેષણ અને એન્ટિબોડીઝ કેવી રીતે બંધાયેલા અને ઉપયોગમાં લેવાય છે તેના આધારે વિવિધ પ્રકારના પરીક્ષણોમાં વિભાજિત કરવામાં આવે છે. મુખ્ય પ્રકારો અહીં વર્ણવવામાં આવ્યા છે. ડાયરેક્ટ એલિસા સીધા એલિસાના પગલાં નીચેની પદ્ધતિને અનુસરે છેઃ પરીક્ષણ કરવા માટે એન્ટિજેનનું બફર દ્રાવણ માઇક્રોટાઇટર પ્લેટના દરેક કૂવામાં (સામાન્ય રીતે 96-કૂવાની પ્લેટ) ઉમેરવામાં આવે છે, જ્યાં તેને ચાર્જ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ દ્વારા પ્લાસ્ટિકને વળગી રહેવાનો સમય આપવામાં આવે છે. પ્રતિક્રિયા ન કરતા પ્રોટીનનું દ્રાવણ, જેમ કે બોવાઇન સીરમ આલ્બ્યુમિન અથવા કેસિન, દરેક કૂવામાં ઉમેરવામાં આવે છે જેથી કૂવામાંની કોઈપણ પ્લાસ્ટિકની સપાટીને આવરી શકાય જે એન્ટિજેન દ્વારા અનકોટેડ રહે છે. જોડાયેલ (સંયોજિત) એન્ઝાઇમ સાથે પ્રાથમિક એન્ટિબોડી ઉમેરવામાં આવે છે, જે ખાસ કરીને પરીક્ષણ એન્ટિજેન કોટિંગ કૂવા સાથે જોડાય છે. પછી આ ઉત્સેચક માટે સબસ્ટ્રેટ ઉમેરવામાં આવે છે. મોટેભાગે, આ સબસ્ટ્રેટ એન્ઝાઇમ સાથેની પ્રતિક્રિયા પર રંગ બદલે છે. સીરમમાં હાજર પ્રાથમિક એન્ટિબોડીની સાંદ્રતા જેટલી વધારે હોય છે, તેટલો મજબૂત રંગ બદલાય છે. ઘણીવાર, રંગની તાકાત માટે માત્રાત્મક મૂલ્યો આપવા માટે સ્પેક્ટ્રોમીટરનો ઉપયોગ થાય છે. એન્ઝાઇમ એમ્પ્લીફાયર તરીકે કામ કરે છે; જો માત્ર થોડા એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ એન્ટિબોડીઝ બંધાયેલા રહે તો પણ, એન્ઝાઇમના અણુઓ ઘણા સિગ્નલ પરમાણુઓ ઉત્પન્ન કરશે. સામાન્ય સમજની મર્યાદાઓમાં, એન્ઝાઇમ અનિશ્ચિત સમય સુધી રંગ ઉત્પન્ન કરવાનું ચાલુ રાખી શકે છે, પરંતુ વધુ એન્ટિબોડી બંધાયેલ છે, તેટલી ઝડપથી રંગ વિકસિત થશે. સીધો ELISA નો મોટો ગેરલાભ એ છે કે એન્ટિજેન સ્થિરીકરણની પદ્ધતિ ચોક્કસ નથી; જ્યારે સીરમનો ઉપયોગ પરીક્ષણ એન્ટિજેનના સ્ત્રોત તરીકે થાય છે, ત્યારે નમૂનામાંના તમામ પ્રોટીન માઇક્રોટાઇટર પ્લેટને સારી રીતે વળગી રહી શકે છે, તેથી સીરમમાં એનાલાઇટની નાની સાંદ્રતા કૂવાની સપાટી સાથે જોડાય ત્યારે અન્ય સીરમ પ્રોટીન સાથે સ્પર્ધા કરવી આવશ્યક છે. સેન્ડવિચ અથવા પરોક્ષ એલિસા આ સમસ્યાનું સમાધાન પૂરું પાડે છે, તેને સીરમના પરમાણુ મિશ્રણમાંથી બહાર કાઢવા માટે પરીક્ષણ એન્ટિજેન માટે વિશિષ્ટ "કેપ્ચર" એન્ટિબોડીનો ઉપયોગ કરીને. એલિસા ગુણાત્મક અથવા માત્રાત્મક સ્વરૂપમાં ચલાવી શકાય છે. ગુણાત્મક પરિણામો નમૂના માટે સરળ હકારાત્મક અથવા નકારાત્મક પરિણામ (હા અથવા ના) પ્રદાન કરે છે. હકારાત્મક અને નકારાત્મક વચ્ચેનો કટઓફ વિશ્લેષક દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે અને તે આંકડાકીય હોઈ શકે છે. પ્રમાણભૂત વિચલનના બે કે ત્રણ ગણા (પરીક્ષણમાં સહજ ભૂલ) નો ઉપયોગ ઘણીવાર હકારાત્મક અને નકારાત્મક નમૂનાઓને અલગ પાડવા માટે થાય છે. માત્રાત્મક એલિસામાં, નમૂનાની ઓપ્ટિકલ ઘનતા (ઓડી) ની સરખામણી પ્રમાણભૂત વળાંક સાથે કરવામાં આવે છે, જે સામાન્ય રીતે લક્ષ્ય પરમાણુના જાણીતા-સાંદ્રતા દ્રાવણનું ક્રમિક મંદન હોય છે. ઉદાહરણ તરીકે, જો પરીક્ષણનો નમૂનો 1 નો OD આપે છે, તો પ્રમાણભૂત વળાંક પરનો બિંદુ કે જે OD = 1 આપે છે તે નમૂનાની સમાન વિશ્લેષણાત્મક સાંદ્રતાનો હોવો જોઈએ. "પરોક્ષ એલિસા" અને "પ્રત્યક્ષ એલિસા" નામોનો ઉપયોગ અને અર્થ પ્રયોગના સંદર્ભને આધારે સાહિત્યમાં અને વેબ સાઇટ્સ પર અલગ પડે છે. જ્યારે એન્ટિજેનની હાજરીનું વિશ્લેષણ કરવામાં આવે છે, ત્યારે "ડાયરેક્ટ એલિસા" નામ એલિસાનો ઉલ્લેખ કરે છે જેમાં માત્ર લેબલ થયેલ પ્રાથમિક એન્ટિબોડીનો ઉપયોગ થાય છે, અને "પરોક્ષ એલિસા" શબ્દ એલિસાનો ઉલ્લેખ કરે છે જેમાં એન્ટિજેન પ્રાથમિક એન્ટિબોડી દ્વારા બંધાયેલ હોય છે જે પછી લેબલ થયેલ ગૌણ એન્ટિબોડી દ્વારા શોધાય છે. પછીના કિસ્સામાં સેન્ડવિચ એલિસા પરોક્ષ એલિસાથી સ્પષ્ટ રીતે અલગ છે. જ્યારે "પ્રાથમિક" એન્ટિબોડી રસ ધરાવે છે, દા. ત. રોગપ્રતિકારક વિશ્લેષણના કિસ્સામાં, આ એન્ટિબોડી સીધી ગૌણ એન્ટિબોડી દ્વારા શોધાય છે અને "પરોક્ષ એલિસા" શબ્દ બે એન્ટિબોડીઝ સાથેના સેટિંગને લાગુ પડે છે. સેન્ડવિચ એલિસા એ "સેન્ડવિચ" એલિસાનો ઉપયોગ નમૂના એન્ટિજેનને શોધવા માટે થાય છે. પગલાંઓ છેઃ કેપ્ચર એન્ટિબોડીના જાણીતા જથ્થા સાથે સપાટી તૈયાર કરવામાં આવે છે. સપાટી પરની કોઈપણ બિન-વિશિષ્ટ બંધનકર્તા સાઇટ્સ અવરોધિત છે. એન્ટિજેન ધરાવતો નમૂનો પ્લેટ પર લાગુ કરવામાં આવે છે, અને એન્ટિબોડી દ્વારા કબજે કરવામાં આવે છે. અનબાઉન્ડ એન્ટિજેનને દૂર કરવા માટે પ્લેટ ધોવાઇ જાય છે. એક ચોક્કસ એન્ટિબોડી ઉમેરવામાં આવે છે, અને એન્ટિજેન સાથે જોડાય છે (તેથી 'સેન્ડવિચ': એન્ટિજેન બે એન્ટિબોડીઝ વચ્ચે અટવાઇ જાય છે). આ પ્રાથમિક એન્ટિબોડી દાતાના સીરમમાં હોઈ શકે છે, જે એન્ટિજેન પ્રત્યેની પ્રતિક્રિયા માટે પરીક્ષણ કરવામાં આવે છે. ઉત્સેચક સાથે જોડાયેલા ગૌણ એન્ટિબોડીઝને શોધ એન્ટિબોડીઝ તરીકે લાગુ કરવામાં આવે છે, જે ખાસ કરીને એન્ટિબોડીના એફસી ક્ષેત્ર (બિન-વિશિષ્ટ) સાથે જોડાય છે. અનબાઉન્ડ એન્ટિબોડી-ઉત્સેચક સંયોજનોને દૂર કરવા માટે પ્લેટ ધોવાઇ જાય છે. એન્ઝાઇમ દ્વારા રંગ, ફ્લોરોસન્ટ અથવા ઇલેક્ટ્રોકેમિકલ સિગ્નલમાં રૂપાંતરિત કરવા માટે રાસાયણિક ઉમેરવામાં આવે છે. પ્લેટના કુવાઓના શોષણ, ફ્લોરોસન્સ અથવા ઇલેક્ટ્રોકેમિકલ સિગ્નલ (દા. ત., વર્તમાન) ને એન્ટિજેનની હાજરી અને માત્રા નક્કી કરવા માટે માપવામાં આવે છે. જમણી બાજુની છબીમાં એન્ઝાઇમ સાથે જોડાયેલા ગૌણ એન્ટિબોડીનો ઉપયોગ શામેલ છે, જો કે, તકનીકી અર્થમાં, જો પ્રાથમિક એન્ટિબોડી એન્ઝાઇમ સાથે જોડાયેલી હોય તો આ જરૂરી નથી (જે સીધી ELISA હશે). જો કે, સેકન્ડરી-એન્ટિબોડી કોન્જ્યુગેટનો ઉપયોગ દરેક એન્ટિજેન માટે એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ એન્ટિબોડીઝ બનાવવાની ખર્ચાળ પ્રક્રિયાને ટાળે છે. એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ એન્ટિબોડીનો ઉપયોગ કરીને જે અન્ય એન્ટિબોડીઝના એફસી ક્ષેત્રને જોડે છે, આ જ એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ એન્ટિબોડીનો ઉપયોગ વિવિધ પરિસ્થિતિઓમાં થઈ શકે છે. "કેપ્ચર" એન્ટિબોડીના પ્રથમ સ્તર વિના, નમૂનામાંના કોઈપણ પ્રોટીન (સીરમ પ્રોટીન સહિત) પ્લેટની સપાટી પર સ્પર્ધાત્મક રીતે શોષી શકે છે, જે સ્થિર એન્ટિજેનનું પ્રમાણ ઘટાડે છે. પ્લાસ્ટિકમાં એન્ટિજેનને જોડવા માટે શુદ્ધ કરેલ ચોક્કસ એન્ટિબોડીનો ઉપયોગ માપ પહેલાં જટિલ મિશ્રણમાંથી એન્ટિજેનને શુદ્ધ કરવાની જરૂરિયાતને દૂર કરે છે, પરીક્ષણને સરળ બનાવે છે અને પરીક્ષણની વિશિષ્ટતા અને સંવેદનશીલતામાં વધારો કરે છે. તેથી, સંશોધન માટે ઉપયોગમાં લેવાતા સેન્ડવિચ એલિસાને ઘણીવાર માન્યતાની જરૂર પડે છે, જેથી ખોટા હકારાત્મક પરિણામોનું જોખમ ઘટાડી શકાય. સ્પર્ધાત્મક એલિસા એલિસાનો ત્રીજો ઉપયોગ સ્પર્ધાત્મક બંધન દ્વારા થાય છે. આ એલિસા માટેના પગલાં પ્રથમ બે ઉદાહરણોથી કંઈક અલગ છેઃ લેબલ વગરની એન્ટિબોડી તેના એન્ટિજેન (નમૂના) ની હાજરીમાં વિકસાવવામાં આવે છે. આ બંધાયેલા એન્ટિબોડી/એન્ટિજેન સંકુલ પછી એન્ટિજેન-કોટેડ કૂવામાં ઉમેરવામાં આવે છે. પ્લેટ ધોવાઇ જાય છે, તેથી અનબાઉન્ડ એન્ટિબોડીઝ દૂર કરવામાં આવે છે. (નમૂનામાં જેટલા વધુ એન્ટિજેન હોય છે, તેટલા વધુ એજી-એબ સંકુલ રચાય છે અને તેથી કૂવામાં એન્ટિજેન સાથે જોડાવા માટે ઓછા અનબાઉન્ડ એન્ટિબોડીઝ ઉપલબ્ધ હોય છે, તેથી "સ્પર્ધા" થાય છે.) પ્રાથમિક એન્ટિબોડી માટે વિશિષ્ટ ગૌણ એન્ટિબોડી ઉમેરવામાં આવે છે. આ બીજી એન્ટિબોડી એન્ઝાઇમ સાથે જોડાયેલી હોય છે. એક સબસ્ટ્રેટ ઉમેરવામાં આવે છે, અને બાકીના ઉત્સેચકો ક્રોમોજેનિક અથવા ફ્લોરોસન્ટ સંકેત બહાર કાઢે છે. સંકેતની અંતિમ સંતૃપ્તિને રોકવા માટે પ્રતિક્રિયા બંધ કરવામાં આવે છે. કેટલીક સ્પર્ધાત્મક એલિસા કિટમાં એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ એન્ટિબોડીને બદલે એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ એન્ટિજેનનો સમાવેશ થાય છે. લેબલ થયેલ એન્ટિજેન નમૂનાના એન્ટિજેન (લેબલ વિનાના) સાથે પ્રાથમિક એન્ટિબોડી બંધનકર્તા સ્થળો માટે સ્પર્ધા કરે છે. નમૂનામાં જેટલું ઓછું એન્ટિજેન હોય છે, તેટલું વધુ લેબલ કરેલ એન્ટિજેન કૂવામાં જાળવી રાખવામાં આવે છે અને સિગ્નલ મજબૂત બને છે. સામાન્ય રીતે, એન્ટિજેનને પહેલા કૂવામાં મૂકવામાં આવતું નથી. એચઆઇવી એન્ટિબોડીઝની તપાસ માટે, માઇક્રોટાઇટર પ્લેટના કૂવાઓને એચઆઇવી એન્ટિજેન સાથે કોટેડ કરવામાં આવે છે. બે ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે, એક એન્ઝાઇમ સાથે સંયોજિત થાય છે અને અન્ય સીરમમાં હાજર હોય છે (જો સીરમ એન્ટિબોડી માટે સકારાત્મક હોય તો). એક જ એન્ટિજેન માટે બે એન્ટિબોડીઝ વચ્ચે સંચિત સ્પર્ધા થાય છે, જેના કારણે મજબૂત સંકેત જોવા મળે છે. પરીક્ષણ કરવા માટેના સેરાને આ કુવાઓમાં ઉમેરવામાં આવે છે અને 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર સેવન કરવામાં આવે છે, અને પછી ધોવાઇ જાય છે. જો એન્ટિબોડીઝ હાજર હોય, તો એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી પ્રતિક્રિયા થાય છે. એન્ઝાઇમ-લેબલવાળા ચોક્કસ એચ. આય. વી એન્ટિબોડીઝ માટે કોઈ એન્ટિજેન બચ્યું નથી. આ એન્ટિબોડીઝ ઉમેર્યા પછી મુક્ત રહે છે અને ધોવા દરમિયાન ધોવાઇ જાય છે. સબસ્ટ્રેટ ઉમેરવામાં આવે છે, પરંતુ તેના પર કાર્ય કરવા માટે કોઈ એન્ઝાઇમ નથી, તેથી સકારાત્મક પરિણામ કોઈ રંગ પરિવર્તન બતાવતું નથી. રિવર્સ એલિસા (પરોક્ષ એલિસા) ચોથા એલિસા પરીક્ષણમાં પરંપરાગત કુવાઓનો ઉપયોગ થતો નથી. આ પરીક્ષણ એન્ટિજેન્સને પરીક્ષણ પ્રવાહીમાં સસ્પેન્ડ કરે છે. લેબલ વગરની એન્ટિબોડીને તેના એન્ટિજેન (નમૂના) ની હાજરીમાં સેવન કરવામાં આવે છે, એન્ટિબોડીઝને એન્ટિજેન્સ સાથે જોડાવા માટે પૂરતો સેવન સમયગાળો આપવામાં આવે છે. ત્યારબાદ નમૂનાને સ્કેવેન્જર કન્ટેનરમાંથી પસાર કરવામાં આવે છે. આ એક ટેસ્ટ ટ્યુબ અથવા ચેનલ દ્વારા ખાસ રચાયેલ પ્રવાહ હોઈ શકે છે. સ્કેવેન્જર કન્ટેનર અથવા ચેનલની સપાટી તેની સાથે બંધાયેલ "સ્કેવેન્જર એન્ટિજેન્સ" ધરાવે છે. આ મુક્ત એન્ટિબોડીઝ દ્વારા બાંધવામાં આવતા પ્રાથમિક એન્ટિજેન્સ સાથે સમાન અથવા પૂરતા પ્રમાણમાં સમાન હોઈ શકે છે. સ્કેવેન્જર કન્ટેનરમાં પૂરતો સપાટી વિસ્તાર અને પૂરતો સમય હોવો જોઈએ જેથી સ્કેવેન્જર એન્ટિજેન્સ નમૂનામાં દાખલ કરવામાં આવેલી તમામ વધારાની એન્ટિબોડીઝ સાથે જોડાઈ શકે. નમૂના, જેમાં હવે ટેગ કરેલા અને બંધાયેલા એન્ટિબોડીઝ હોય છે, તે ડિટેક્ટરમાંથી પસાર થાય છે. આ ઉપકરણ ફ્લો સાયટોમીટર અથવા અન્ય ઉપકરણ હોઈ શકે છે જે ટેગને પ્રકાશિત કરે છે અને પ્રતિસાદની નોંધણી કરે છે. આ પરીક્ષણ બહુવિધ એન્ટિજેન્સને એક જ સમયે ટેગ કરવા અને ગણવાની મંજૂરી આપે છે. આ બેક્ટેરિયાના ચોક્કસ તાણને બે (અથવા વધુ) વિવિધ રંગ ટેગ દ્વારા ઓળખવાની મંજૂરી આપે છે. જો બંને ટૅગ્સ કોષ પર હાજર હોય, તો કોષ તે ચોક્કસ તાણ છે. જો માત્ર એક જ હાજર હોય, તો તે નથી. આ પરીક્ષણ સામાન્ય રીતે એક સમયે એક પરીક્ષણ કરવામાં આવે છે અને માઇક્રોટાઇટર પ્લેટથી કરી શકાતું નથી. જરૂરી સાધનો સામાન્ય રીતે ઓછા જટિલ હોય છે અને ખેતરમાં તેનો ઉપયોગ કરી શકાય છે. સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતા ઉત્સેચકીય માર્કર્સ નીચેનું કોષ્ટક સામાન્ય રીતે ELISA પરીક્ષણોમાં ઉપયોગમાં લેવાતા ઉત્સેચકીય માર્કર્સની યાદી આપે છે, જે પરીક્ષણના પરિણામોને પૂર્ણ થયા પછી માપવાની મંજૂરી આપે છે. ઓ. પી. ડી. (ઓ-ફેનીલિનેડિયામાઇન ડાયહાઇડ્રોક્લોરાઇડ) એચ. આર. પી. (હોર્સરાડિશ પેરોક્સિડેઝ) ને શોધવા માટે એમ્બરને ફેરવે છે, જેનો ઉપયોગ ઘણીવાર સંયુક્ત પ્રોટીન તરીકે થાય છે. ટી. એમ. બી. (3,3 ', 5,5'-ટેટ્રામીથિલબેન્ઝીડીન) એચ. આર. પી. શોધતી વખતે વાદળી થઈ જાય છે અને સલ્ફ્યુરિક અથવા ફોસ્ફોરિક એસિડ ઉમેર્યા પછી પીળો થઈ જાય છે. એચઆરપી શોધતી વખતે એબીટીએસ (2,2 '-એઝિનોબિસ [3-ઇથાઇલબેન્ઝોથિયાઝોલિન-6-સલ્ફોનિક એસિડ]-ડાયમોનિયમ સોલ્ટ) લીલો થઈ જાય છે. પી. એન. પી. પી. (પી-નાઇટ્રોફિનાઇલ ફોસ્ફેટ, ડિસોડિયમ સોલ્ટ) આલ્કલાઇન ફોસ્ફેટેઝ શોધતી વખતે પીળો થઈ જાય છે. એપ્લિકેશન્સ કારણ કે એલિસા એન્ટિજેનની હાજરી અથવા નમૂનામાં એન્ટિબોડીની હાજરીનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે કરી શકાય છે, તે સીરમ એન્ટિબોડીની સાંદ્રતા (જેમ કે એચ. આય. વી પરીક્ષણ અથવા વેસ્ટ નાઇલ વાયરસ સાથે) નક્કી કરવા માટે એક ઉપયોગી સાધન છે. તેને ખાદ્ય ઉદ્યોગમાં દૂધ, મગફળી, અખરોટ, બદામ અને ઇંડા જેવા સંભવિત ખાદ્ય એલર્જનને શોધવામાં અને સેલિયાક રોગ માટે સીરોલોજીકલ રક્ત પરીક્ષણ તરીકે પણ ઉપયોગીતા મળી છે. એલિસાનો ઉપયોગ ટોક્સિકોલોજીમાં ચોક્કસ વર્ગની દવાઓ માટે ઝડપી અનુમાનિત સ્ક્રીન તરીકે પણ થઈ શકે છે. એલિસા એ તેની ઉચ્ચ સંવેદનશીલતાને કારણે એચ. આય. વી માટે વ્યાપકપણે ઉપયોગમાં લેવાતું પ્રથમ સ્ક્રીનીંગ પરીક્ષણ હતું. એલિસામાં, વ્યક્તિના સીરમને 400 વખત પાતળું કરવામાં આવે છે અને તે પ્લેટ પર લાગુ કરવામાં આવે છે જેમાં એચ. આય. વી એન્ટિજેન્સ જોડાયેલા હોય છે. જો એચ. આય. વીના એન્ટિબોડીઝ સીરમમાં હાજર હોય, તો તેઓ આ એચઆઇવી એન્ટિજેન્સ સાથે જોડાઈ શકે છે. પછી પ્લેટને સીરમના અન્ય તમામ ઘટકોને દૂર કરવા માટે ધોવાઇ જાય છે. ખાસ તૈયાર કરાયેલ "સેકન્ડરી એન્ટિબોડી"-એક એન્ટિબોડી જે અન્ય એન્ટિબોડીઝ સાથે જોડાય છે-પછી પ્લેટ પર લાગુ કરવામાં આવે છે, ત્યારબાદ બીજી ધોવાઇ કરવામાં આવે છે. આ ગૌણ એન્ટિબોડી રાસાયણિક રીતે અગાઉથી એન્ઝાઇમ સાથે જોડાયેલી હોય છે. આમ, પ્લેટમાં બંધાયેલ ગૌણ એન્ટિબોડીની માત્રાના પ્રમાણમાં એન્ઝાઇમ હશે. ઉત્સેચક માટે સબસ્ટ્રેટ લાગુ કરવામાં આવે છે, અને ઉત્સેચક દ્વારા ઉત્પ્રેરણ રંગ અથવા ફ્લોરોસન્સમાં ફેરફાર તરફ દોરી જાય છે. એલિસા પરિણામો સંખ્યા તરીકે નોંધવામાં આવે છે; આ પરીક્ષણનું સૌથી વિવાદાસ્પદ પાસું હકારાત્મક અને નકારાત્મક પરિણામ વચ્ચે "કટ-ઓફ" બિંદુ નક્કી કરવાનું છે. એક કટ-ઓફ બિંદુ તેની જાણીતા ધોરણ સાથે સરખામણી કરીને નક્કી કરી શકાય છે. જો કાર્યસ્થળ પર ડ્રગ સ્ક્રિનિંગ માટે એલિસા પરીક્ષણનો ઉપયોગ કરવામાં આવે, તો કટ-ઓફ સાંદ્રતા, 50 એનજી/એમએલ, ઉદાહરણ તરીકે, સ્થાપિત કરવામાં આવે છે, અને એનાલાઇટની પ્રમાણભૂત સાંદ્રતા ધરાવતો નમૂનો તૈયાર કરવામાં આવશે. અજ્ઞાત કે જે જાણીતા નમૂના કરતાં વધુ મજબૂત સંકેત ઉત્પન્ન કરે છે તે "હકારાત્મક" છે. જે નબળા સંકેત પેદા કરે છે તે "નકારાત્મક" હોય છે. ડેન્ગ્યુ, મેલેરિયા, ચાગસ રોગ, જોહ્ન રોગ અને અન્ય જેવા વિવિધ પ્રકારના રોગોને શોધવા માટે એલિસા પરીક્ષણો છે. તબીબી પ્રયોગશાળાઓમાં ઈન વિટ્રો ડાયગ્નોસ્ટિક્સ માટે પણ એલિસા પરીક્ષણોનો વ્યાપકપણે ઉપયોગ કરવામાં આવે છે. ELISA ના અન્ય ઉપયોગોમાં નીચેનાનો સમાવેશ થાય છેઃ લોહીના નમૂનાઓમાં SARS-CoV-2 એન્ટિબોડીઝની શોધ એ પણ જુઓ એગ્લૂટિનેશન-PCR ઇમ્યુનોસ્ક્રીનિંગ લેટરલ ફ્લો ટેસ્ટ મેગ્નેટિક ઇમ્યુનોએસે માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ નેફેલોમેટ્રી પ્લેક રિડક્શન ન્યુટ્રલાઇઝેશન ટેસ્ટ પ્લેટ રીડર સિક્રેશન એસે નોંધો અને સંદર્ભો બાહ્ય લિંક્સ "ELISA પ્રવૃત્તિનો પરિચય"-એરિઝોના યુનિવર્સિટી ખાતે એનિમેશન સહિત HIV શોધવા માટે ઉપયોગમાં લેવાતા ELISA ના પ્રારંભિક વૉક-થ્રુ "ELISA એસે પ્રિન્સિપલ"-ELISA ના સિદ્ધાંતની ઝાંખી અને એસે જીની ડાયગ્નોસ્ટિક વાયરોલોજી ઇમ્યુનોલોજિક પરીક્ષણોમાં વિશ્લેષણ શોધવા માટેના સાધનો