Diethyl pyrocarbonate
ડાયઈથાઈલ પાયરોકાર્બોનેટ (DEPC), જેને ડાયઈથાઈલ ડાયકાર્બોનેટ (IUPAC નામ) પણ કહેવાય છે, તેનો ઉપયોગ પ્રયોગશાળામાં પાણીમાં અને પ્રયોગશાળાના વાસણો પર RNase ઉત્સેચકોને નિષ્ક્રિય કરવા માટે થાય છે. તે હિસ્ટિડાઇન (સૌથી મજબૂત), લાઇસિન, સિસ્ટીન અને ટાયરોસિન અવશેષોના સહસંયોજક ફેરફાર દ્વારા આમ કરે છે. ડી. ઈ. પી. સી.-ઉપચારિત (અને તેથી આર. એન. એ. એસ.-મુક્ત) પાણીનો ઉપયોગ પ્રયોગશાળામાં આર. એન. એ. ના સંચાલનમાં થાય છે જેથી આર. એન. એ. ના આર. એન. એ. દ્વારા અધોગતિના જોખમને ઘટાડી શકાય. પાણીને સામાન્ય રીતે 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર ઓછામાં ઓછા 2 કલાક માટે 0.1 ટકા વી/વી ડી. ઈ. પી. સી. સાથે પ્રક્રિયા કરવામાં આવે છે અને પછી ડી. ઈ. પી. સી. ના નિશાનને નિષ્ક્રિય કરવા માટે ઓટોક્લેવ (ઓછામાં ઓછું 15 મિનિટ) કરવામાં આવે છે. આ રીતે DEPC ને નિષ્ક્રિય કરવાથી CO2 અને ઇથેનોલ મળે છે. DEPCની ઉચ્ચ સાંદ્રતા મોટા પ્રમાણમાં RNase ને નિષ્ક્રિય કરવામાં સક્ષમ છે, પરંતુ બાકીના નિશાન અથવા આડપેદાશો ઈન વિટ્રો ટ્રાન્સક્રિપ્શન જેવી વધુ બાયોકેમિકલ પ્રતિક્રિયાઓને અટકાવી શકે છે. વધુમાં, ડી. ઇ. પી. સી. અથવા તેના આડપેદાશો હાજર હોય ત્યારે કાર્બોક્સીમીથાઇલેશન જેવા આર. એન. એ. માં રાસાયણિક ફેરફાર શક્ય છે, પરિણામે બફર એક્સચેન્જ (વરસાદ પછી) પછી પણ અખંડ આર. એન. એ. ની નબળી પુનઃપ્રાપ્તિ થાય છે. DEPC પાણીમાં અસ્થિર છે અને કાર્બન ડાયોક્સાઇડ અને ઇથેનોલ માટે હાઇડ્રોલિસિસ માટે સંવેદનશીલ છે, ખાસ કરીને ન્યુક્લિયોફાઇલની હાજરીમાં. આ કારણોસર, DEPC નો ઉપયોગ ટ્રીસ અથવા HEPES બફર સાથે કરી શકાતો નથી. તેનાથી વિપરીત, તેનો ઉપયોગ ફોસ્ફેટ-બફર ખારા અથવા એમ. ઓ. પી. એસ. સાથે થઈ શકે છે. એક સરળ નિયમ એ છે કે સક્રિય-O:,-N: અથવા-S ધરાવતા ઉત્સેચકો અથવા રસાયણોને DEPC સાથે RNase-મુક્ત બનવા માટે સારવાર કરી શકાતી નથી, કારણ કે DEPC આ પ્રજાતિઓ સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે. વધુમાં, DEPC અધઃપતન ઉત્પાદનો ઈન વિટ્રો ટ્રાન્સક્રિપ્શનને અટકાવી શકે છે. હિસ્ટિડાઇન્સના DEPC વ્યુત્પન્નકરણનો ઉપયોગ ઉત્સેચકોમાં હિસ્ટિડાઇલ અવશેષોના મહત્વનો અભ્યાસ કરવા માટે પણ થાય છે. ડી. ઈ. પી. સી. દ્વારા હિસ્ટિડીનમાં ફેરફાર કરવાથી ઇમિડાઝોલ રિંગના એન-ઓમેગા-2 નાઇટ્રોજન પર કાર્બોથોક્સિલેટેડ વ્યુત્પન્નમાં પરિણમે છે. તટસ્થ pH પર 0.5 M હાઇડ્રોક્સિલામાઇન સાથે સારવાર દ્વારા હિસ્ટિડીનનો DEPC ફેરફાર ઉલટાવી શકાય છે. ડીઇપીસીનો ઉપયોગ ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડ ડીએનએની રચનાની તપાસ માટે પણ થઈ શકે છે. આ પણ જુઓ DEC સંદર્ભો બાહ્ય કડીઓ ઓપનવેટવેર પર DEPC જીવન વૈજ્ઞાનિક વિકિ RNase અને DEPC સારવાર કાર્બોનેટ એસ્ટર ડાયકાર્બોનેટ ઇથાઇલ એસ્ટર