Tetramer assay
ટેટ્રામર એસે (ટેટ્રામર સ્ટેન તરીકે પણ ઓળખાય છે) એ એક એવી પ્રક્રિયા છે જે રક્તના નમૂનામાં આપેલ એન્ટિજેન માટે ચોક્કસ ટી કોષોને શોધવા અને તેનું પ્રમાણ નક્કી કરવા માટે ટેટ્રામેરિક પ્રોટીનનો ઉપયોગ કરે છે. પરીક્ષણમાં ઉપયોગમાં લેવાતા ટેટ્રામર્સ ચાર મુખ્ય હિસ્ટોકોમ્પેટિબિલિટી કોમ્પ્લેક્સ (એમ. એચ. સી.) અણુઓથી બનેલા હોય છે, જે શરીરના મોટાભાગના કોષોની સપાટી પર જોવા મળે છે. એમ. એચ. સી. અણુઓ કોષમાં વાયરસ, બેક્ટેરિયા, કેન્સરગ્રસ્ત પરિવર્તન અથવા અન્ય એન્ટિજેન્સની હાજરીનો સંપર્ક કરવાના માર્ગ તરીકે ટી-કોષોમાં પેપ્ટાઇડ્સ રજૂ કરે છે. જો ટી-સેલનું રીસેપ્ટર એમ. એચ. સી. પરમાણુ દ્વારા પ્રસ્તુત પેપ્ટાઇડ સાથે મેળ ખાય છે, તો રોગપ્રતિકારક પ્રતિભાવ શરૂ થાય છે. આમ, એમ. એચ. સી. ટેટ્રામર્સ કે જે ચોક્કસ પેપ્ટાઇડ રજૂ કરવા માટે બાયોએન્જિનિયર્ડ છે તેનો ઉપયોગ તે પેપ્ટાઇડ સાથે મેળ ખાતા રીસેપ્ટર્સ સાથે ટી-કોષો શોધવા માટે થઈ શકે છે. ટેટ્રામર્સને ફ્લોરોફોર સાથે લેબલ કરવામાં આવે છે, જે ટેટ્રામર-બાઉન્ડ ટી-કોષોને ફ્લો સાયટોમેટ્રી સાથે વિશ્લેષણ કરવાની મંજૂરી આપે છે. ફ્લો સાયટોમેટ્રી દ્વારા ટી-કોષોનું પ્રમાણ અને વર્ગીકરણ સંશોધકોને વાયરલ ચેપ અને રસી વહીવટ તેમજ એન્ટિજેન-વિશિષ્ટ ટી-કોષોની કાર્યક્ષમતાની રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાની તપાસ કરવા માટે સક્ષમ બનાવે છે. સામાન્ય રીતે, જો કોઈ વ્યક્તિની રોગપ્રતિકારક શક્તિને રોગકારકનો સામનો કરવો પડ્યો હોય, તો વ્યક્તિ પાસે તે રોગકારક પર કેટલાક પેપ્ટાઇડ પ્રત્યે વિશિષ્ટતા ધરાવતા ટી કોષો હશે. તેથી, જો પેથોજેનિક પેપ્ટાઇડ માટે ચોક્કસ ટેટ્રામર ડાઘ હકારાત્મક સંકેતમાં પરિણમે છે, તો આ સૂચવી શકે છે કે વ્યક્તિની રોગપ્રતિકારક શક્તિએ તે પેથોજેનનો સામનો કર્યો છે અને પ્રતિક્રિયા બનાવી છે. આ પદ્ધતિ સૌપ્રથમ 1996માં સ્ટેનફોર્ડ યુનિવર્સિટીની પ્રયોગશાળા દ્વારા પ્રકાશિત કરવામાં આવી હતી. એન્ટિજેન-વિશિષ્ટ ટી-કોષોનું પ્રમાણ નક્કી કરવાના અગાઉના પ્રયાસોમાં ઓછા સચોટ મર્યાદિત મંદન પરીક્ષણનો સમાવેશ થતો હતો, જે ટી-કોષોની સંખ્યાનો અંદાજ તેમના વાસ્તવિક સ્તરોથી 50-500 વખત નીચે કરે છે. ટી-સેલ રીસેપ્ટર્સ અને એમ. એચ. સી.-પેપ્ટાઇડ મોનોમર્સની ઓછી બંધનકર્તા સંબંધને કારણે દ્રાવ્ય એમ. એચ. સી. મોનોમર્સનો ઉપયોગ કરતા સ્ટેન પણ અસફળ રહ્યા હતા. એમ. એચ. સી. ટેટ્રામર્સ લક્ષ્ય ટી-સેલ પર એક કરતાં વધુ રીસેપ્ટર સાથે જોડાઈ શકે છે, પરિણામે કુલ બંધનકર્તા શક્તિમાં વધારો થાય છે અને વિયોજન દર ઓછો થાય છે. સીડી8 + ટી-કોષોનો ઉપયોગ ટેટ્રામર સ્ટેન સામાન્ય રીતે સાયટોટોક્સિક ટી લિમ્ફોસાઇટ (સીટીએલ) વસ્તીનું વિશ્લેષણ કરે છે. સી. ટી. એલ. ને સી. ડી. 8 + ટી-કોષો પણ કહેવામાં આવે છે, કારણ કે તેમની પાસે સી. ડી. 8 સહ-ગ્રાહીકો હોય છે જે એમ. એચ. સી. વર્ગ Iના અણુઓ સાથે જોડાય છે. શરીરના મોટાભાગના કોષો એમ. એચ. સી. વર્ગ I અણુઓ વ્યક્ત કરે છે, જે અંતઃકોશિકીય એન્ટિજેન્સની પ્રક્રિયા કરવા અને કોષની સપાટી પર હાજર થવા માટે જવાબદાર છે. જો એમ. એચ. સી. વર્ગ I અણુઓ દ્વારા રજૂ કરવામાં આવતા પેપ્ટાઇડ્સ વિદેશી હોય-ઉદાહરણ તરીકે, કોષના પોતાના પ્રોટીનને બદલે વાયરલ પ્રોટીનમાંથી મેળવવામાં આવે છે-તો પેપ્ટાઇડ સાથે મેળ ખાતા રીસેપ્ટર સાથે સીટીએલ કોષનો નાશ કરશે. ટેટ્રામર સ્ટેન ફ્લો સાયટોમેટ્રી દ્વારા આ કોષોના વિઝ્યુલાઇઝેશન, ક્વોન્ટિફિકેશન અને સૉર્ટિંગ માટે પરવાનગી આપે છે, જે ઇમ્યુનોલોજીમાં અત્યંત ઉપયોગી છે. ટી-સેલની વસ્તીને વાયરસના સમયગાળા દરમિયાન અથવા રસી લગાવ્યા પછી ટ્રેક કરી શકાય છે. ટેટ્રામર સ્ટેનને ELIspot જેવા કાર્યાત્મક પરીક્ષણો સાથે પણ જોડી શકાય છે, જે નમૂનામાં સાયટોકીન સ્ત્રાવના કોષોની સંખ્યાને શોધી કાઢે છે. પ્રયોગશાળામાં વિકસિત એમ. એચ. સી. વર્ગ I ટેટ્રામર કન્સ્ટ્રક્શન એમ. એચ. સી. ટેટ્રામર મોલેક્યુલ્સ કોષો પર કોમ્પ્લેક્સ પ્રસ્તુત કરતા એન્ટિજેનની નકલ કરી શકે છે અને એન્ટિજેનને ઓળખતા ટી-કોષો સાથે જોડાઈ શકે છે. વર્ગ I એમ. એચ. સી. અણુઓ અપરિવર્તનશીલ પ્રકાશ સાંકળ બીટા-2 માઇક્રોગ્લોબુલિન (β2m) સાથે સંકળાયેલ બહુરૂપી ભારે α-સાંકળથી બનેલા છે. એસ્ચેરીચીયા કોલીનો ઉપયોગ પ્રકાશ સાંકળ અને ભારે સાંકળના ટૂંકા સંસ્કરણનું સંશ્લેષણ કરવા માટે થાય છે જેમાં બાયોટિન 15 એમિનો એસિડ ઓળખ ટેગનો સમાવેશ થાય છે. આ એમ. એચ. સી. સાંકળો બી. આર. એ. ઉત્સેચક સાથે બાયોટિનિલેટેડ હોય છે અને રસના એન્ટિજેનિક પેપ્ટાઇડ સાથે રિફોલ્ડ થાય છે. બાયોટિન એ એક નાનો અણુ છે જે સ્ટ્રેપ્ટાવિડિન નામના અન્ય પ્રોટીન સાથે મજબૂત બંધન બનાવે છે. ફ્લોરોફોર ટેગ કરેલ સ્ટ્રેપ્ટાવિડિનને બાયોએન્જિનિયર્ડ એમ. એચ. સી. મોનોમર્સમાં ઉમેરવામાં આવે છે, અને બાયોટિન-સ્ટ્રેપ્ટાવિડિનની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાથી ચાર એમ. એચ. સી. મોનોમર્સ સ્ટ્રેપ્ટાવિડિન સાથે જોડાય છે અને ટેટ્રામર બનાવે છે. જ્યારે ટેટ્રામર્સને લોહીના નમૂના સાથે મિશ્રિત કરવામાં આવે છે, ત્યારે તેઓ યોગ્ય એન્ટિજેન વિશિષ્ટ રીસેપ્ટરને વ્યક્ત કરતા ટી-કોષો સાથે જોડાય છે. કોઈપણ એમ. એચ. સી. ટેટ્રામર્સ કે જે બંધાયેલા નથી તે ફ્લો સાયટોમેટ્રી સાથે વિશ્લેષણ કરવામાં આવે તે પહેલાં નમૂનામાંથી ધોવાઇ જાય છે. રિકોમ્બિનન્ટ એમ. એચ. સી. અણુઓમાં તાજેતરની પ્રગતિઓએ પેપ્ટાઇડ એમ. એચ. સી. જટિલ રચના અને અનુગામી મલ્ટિમેરાઇઝેશનનું લોકશાહીકરણ કર્યું છે. એમ. એચ. સી. વર્ગ-1 અણુઓની વ્યાપક શ્રેણીના અત્યંત સક્રિય ફોર્મ્યુલેશન હવે બિન-નિષ્ણાત વપરાશકર્તાઓને વિશેષ ઉપકરણો વિના કોઈપણ પ્રયોગશાળામાં રોજિંદા ધોરણે તેમના પોતાના કસ્ટમ પેપ્ટાઇડ-એમ. એચ. સી. સંકુલ બનાવવાની મંજૂરી આપે છે. સીડી4 + ટી-સેલ્સ ટેટ્રામર્સ કે જે સહાયક ટી-સેલ્સ સાથે જોડાય છે તે પણ વિકસાવવામાં આવ્યા છે. સહાયક ટી-કોષો અથવા સી. ડી. 4 + ટી-કોષો સી. ડી. 4 સહ-ગ્રાહીઓને વ્યક્ત કરે છે. તેઓ વર્ગ II એમ. એચ. સી. અણુઓ સાથે જોડાય છે, જે ફક્ત ડેંડ્રાઇટિક કોષો અથવા મેક્રોફેજ જેવા વ્યાવસાયિક એન્ટિજેન-પ્રસ્તુત કોષોમાં જ વ્યક્ત થાય છે. વર્ગ II એમ. એચ. સી. અણુઓ બાહ્યકોષીય એન્ટિજેન્સ રજૂ કરે છે, જે સહાયક ટી-કોષોને બેક્ટેરિયા, ફૂગ અને પરોપજીવીઓને શોધવાની મંજૂરી આપે છે. વર્ગ II એમ. એચ. સી. ટેટ્રામરનો ઉપયોગ વધુ સામાન્ય બની રહ્યો છે, પરંતુ વર્ગ I ટેટ્રામર કરતાં ટેટ્રામર બનાવવાનું વધુ મુશ્કેલ છે અને સહાયક ટી-કોષો અને એમ. એચ. સી. અણુઓ વચ્ચેનું બંધન વધુ નબળું છે. નેચરલ કિલર ટી-સેલ્સ નેચરલ કિલર ટી-સેલ્સ (એનકેટી સેલ્સ) ને પણ ટેટ્રામર ટેકનોલોજી સાથે જોઈ શકાય છે. એનકેટી કોષો પ્રોટીન સાથે જોડાય છે જે લિપિડ અથવા ગ્લાયકોલિપિડ એન્ટિજેન્સ રજૂ કરે છે. એન્. કે. ટી. કોષો જે એન્ટિજેન પ્રસ્તુત સંકુલ સાથે જોડાય છે તેમાં સી. ડી. 1 પ્રોટીનનો સમાવેશ થાય છે, તેથી સી. ડી. 1 થી બનેલા ટેટ્રામર્સનો ઉપયોગ એન. કે. ટી. કોષો પર ડાઘ પાડવા માટે થઈ શકે છે. ઉદાહરણો એચ. આય. વી સંક્રમણ માટે કોષ-મધ્યસ્થ રોગપ્રતિકારક પ્રતિભાવ પર કેન્દ્રિત ટેટ્રામર તકનીકનો પ્રારંભિક ઉપયોગ. એમ. એચ. સી. ટેટ્રામર્સ એચ. આય. વી એન્ટિજેન્સ રજૂ કરવા માટે વિકસાવવામાં આવ્યા હતા અને ચેપગ્રસ્ત દર્દીઓના લોહીના નમૂનાઓમાં તે એચઆઇવી એન્ટિજેન્સ માટે ચોક્કસ સીટીએલની ટકાવારી શોધવા માટે ઉપયોગમાં લેવાતા હતા. એચઆઇવી ચેપમાં સીટીએલના કાર્યને લાક્ષણિકતા આપવા માટે આની સરખામણી સાયટોટોક્સિક પરીક્ષણો અને પ્લાઝ્મા આરએનએ વાયરલ લોડના પરિણામો સાથે કરવામાં આવી હતી. ટેટ્રામર્સ સાથે જોડાયેલા સીટીએલને સાયટોકીન સ્ત્રાવના વિશ્લેષણ માટે ઇએલઆઇસ્પોટ કુવાઓમાં વર્ગીકૃત કરવામાં આવ્યા હતા. અન્ય એક અભ્યાસમાં ઈન્ફલ્યુએન્ઝા રસી વિતરણ પદ્ધતિની અસરકારકતાની તપાસ કરવા માટે એમ. એચ. સી. ટેટ્રામર સંકુલોનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. ઉંદરને ઈન્ફલ્યુએન્ઝા માટે ચામડીની નીચે અને ઇન્ટ્રાનાસલ રસી આપવામાં આવી હતી, અને ફ્લો સાયટોમેટ્રી સાથે જોડાયેલા ટેટ્રામર સ્ટેનનો ઉપયોગ રસીમાં ઉપયોગમાં લેવાતા એન્ટિજેન માટે ચોક્કસ સીટીએલને માપવા માટે કરવામાં આવ્યો હતો. આનાથી બે અલગ-અલગ રસી વિતરણ પદ્ધતિઓમાં રોગપ્રતિકારક પ્રતિભાવ (વાયરસને લક્ષ્ય બનાવતા ટી-કોષોની સંખ્યા) ની સરખામણી કરવાની મંજૂરી મળી. સંદર્ભો વધુ વાંચન રક્ત પરીક્ષણો ફ્લો સાયટોમેટ્રી