HAT medium
એચ. એ. ટી. માધ્યમ (હાયપોક્સેન્થિન-એમિનોપ્ટેરિન-થાઇમાઇડિન માધ્યમ) એ સસ્તન પ્રાણીઓના કોષ સંવર્ધન માટેનું એક પસંદગી માધ્યમ છે, જે એમિનોપ્ટેરિનના સંયોજન પર આધાર રાખે છે, જે એક એવી દવા છે જે ડાયહાઇડ્રોફોલેટ રિડક્ટેઝને અટકાવીને શક્તિશાળી ફોલેટ ચયાપચય અવરોધક તરીકે કામ કરે છે, જેમાં હાયપોક્સેન્થિન (એક પ્યુરિન વ્યુત્પન્ન) અને થાઇમાઇડિન (એક ડિઓક્સિન્યુક્લિયોસાઇડ) જે ડીએનએ સંશ્લેષણમાં મધ્યસ્થી છે. યુક્તિ એ છે કે એમિનોપ્ટેરિન ડીએનએ ડી નોવો સંશ્લેષણને અવરોધે છે, જે કોષ વિભાજનને આગળ વધારવા માટે એકદમ જરૂરી છે, પરંતુ હાયપોક્સેન્થિન અને થાઇમિડીન અવરોધ ("બચાવ માર્ગ") થી બચવા માટે કોષોને કાચો માલ પૂરો પાડે છે, જો કે તેમની પાસે યોગ્ય ઉત્સેચકો હોય, જેનો અર્થ થાય છે કે જનીનોની કાર્યરત નકલો હોય જે તેમને એન્કોડ કરે છે. એન્ઝાઇમ ડાયહાઇડ્રોફોલેટ રિડક્ટેઝ, જે ડાયહાઇડ્રોફોલેટના ઘટાડા દ્વારા ટેટ્રાહાઇડ્રોફોલેટ (ટી. એચ. એફ.) ઉત્પન્ન કરે છે, તે ખાસ કરીને એમિનોપ્ટેરિન દ્વારા અવરોધિત થાય છે. ટીએચએફ, ચોક્કસ પ્રોટીન સાથે જોડાણમાં કામ કરે છે, એક કાર્બન એકમો પ્રાપ્ત કરી શકે છે જે પછી ચોક્કસ લક્ષ્યોમાં સ્થાનાંતરિત થાય છે. સેલ્યુલર પ્રજનન માટેના મહત્વપૂર્ણ લક્ષ્યાંકોમાંનું એક થાઇમીડાયલેટ સિન્થેઝ છે, જે ડિઓક્સીયુરિડીન મોનોફોસ્ફેટ (ડીયુએમપી) માંથી થાઇમીડીન મોનોફોસ્ફેટ (ટી. એમ. પી.) બનાવે છે. વધારાની ફોસ્ફોરાયલેશન પ્રતિક્રિયાઓ દ્વારા, ટી. એમ. પી. નો ઉપયોગ થાઇમિડીન ટ્રાઇફોસ્ફેટ (ટી. ટી. પી.) બનાવવા માટે થઈ શકે છે, જે ડીએનએ પોલિમરેઝ દ્વારા ડીએનએ બનાવવા માટે ઉપયોગમાં લેવાતા ચાર ન્યુક્લિયોટાઇડ અગ્રદૂતમાંથી એક છે. ડી. યુ. એમ. પી. ને રૂપાંતરિત કરવા માટે જરૂરી ટી. એચ. એફ. વિના, કોઈ ટી. ટી. પી. હોઈ શકે નહીં, અને જ્યાં સુધી ટી. એમ. પી. અન્ય સ્રોતમાંથી ઉત્પન્ન ન થઈ શકે ત્યાં સુધી ડીએનએ સંશ્લેષણ આગળ વધી શકતું નથી. વૈકલ્પિક સ્રોત એ એચ. એ. ટી. માધ્યમમાં હાજર થાઇમિડીન છે જે કોષો દ્વારા શોષી શકાય છે અને થાઇમિડીન કિનેઝ (ટી. કે.) દ્વારા ટી. એમ. પી. માં ફોસ્ફોરિલેટેડ થઈ શકે છે. આઇ. એમ. પી. ના સંશ્લેષણ (જી. એમ. પી. અને જી. ટી. પી., અને એ. એમ. પી. અને એ. ટી. પી. ના પુરોગામી) માટે પણ ટી. એચ. એફ. ની જરૂર પડે છે, અને તેને બાયપાસ પણ કરી શકાય છે. આ કિસ્સામાં હાયપોક્સેન્થિન-ગુઆનિન ફોસ્ફોરિબોસિલટ્રાન્સફેરેઝ (એચ. જી. પી. આર. ટી.) માધ્યમમાંથી શોષાયેલા હાયપોક્સેન્થિનને પી. આર. પી. પી. સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે, પાઇરોફોસ્ફેટને મુક્ત કરીને, બચાવ માર્ગ દ્વારા આઇ. એમ. પી. ઉત્પન્ન કરે છે. તેથી, કોષ સંવર્ધન માટે એચ. એ. ટી. માધ્યમનો ઉપયોગ કાર્યરત ટી. કે. અને એચ. જી. પી. આર. ટી. ધરાવતા કોષો માટે કૃત્રિમ પસંદગીનું એક સ્વરૂપ છે. આ યોજનામાં ઘણા ઉપયોગી સુધારાઓ એવા ઝેર દ્વારા શક્ય બને છે જે કોષોને મારી નાખે છે, પરંતુ જો તેમાં આમાંથી કોઈ એક જનીનનો અભાવ હોય તો તેઓ રોગપ્રતિકારક છે. આમ, ટીકેનો અભાવ ધરાવતો કોષ બ્રોમોડિયોક્સ્યુરિડીન (બીઆરડીયુ) સામે પ્રતિરોધક છે અને એચજીપીઆરટીનો અભાવ ધરાવતો કોષ 6-થિયોગુઆનાઇન (6-ટીજી) અને 8-એઝાગુઆનાઇન સામે પ્રતિરોધક છે. આમ, પછીની બે દવાઓમાંથી એક સાથે પસંદગી, ત્યારબાદ એચ. એ. ટી. માધ્યમ, પુનરાવર્તિત વસાહતો પેદા કરશે. એચ. એ. ટી. માધ્યમનો ઉપયોગ મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝની તૈયારી માટે થાય છે. આ પ્રક્રિયાને હાયબ્રીડોમા ટેકનોલોજી કહેવામાં આવે છે. પ્રયોગશાળાના પ્રાણીઓ (દા. ત., ઉંદર) સૌપ્રથમ એન્ટિજેનના સંપર્કમાં આવે છે જેની સામે આપણે એન્ટિબોડીને અલગ કરવામાં રસ ધરાવીએ છીએ. એકવાર સ્પ્લેનોસાઇટ્સ સસ્તન પ્રાણીમાંથી અલગ થઈ જાય પછી, બી કોષો પોલિઇથિલિન ગ્લાયકોલ અથવા સેન્ડાઇ વાયરસનો ઉપયોગ કરીને એચ. જી. પી. આર. ટી. નકારાત્મક, અમર માયલોમા કોષો સાથે જોડાય છે. ફ્યુઝ્ડ કોશિકાઓ એચ. એ. ટી. માધ્યમમાં સેવન કરવામાં આવે છે. માધ્યમમાં એમિનોપ્ટેરિન ડી નોવો માર્ગને અવરોધે છે. તેથી, બિનઉપયોગી માયલોમા કોષો મૃત્યુ પામે છે, કારણ કે તેઓ ડી નોવો અથવા બચાવ માર્ગ દ્વારા ન્યુક્લિયોટાઇડ્સ ઉત્પન્ન કરી શકતા નથી. બિનઉપયોગી બી કોષો મૃત્યુ પામે છે કારણ કે તેમનું આયુષ્ય ટૂંકું હોય છે. આ રીતે, માત્ર બી સેલ-માયલોમા સંકર જ ટકી રહે છે. આ કોષો એન્ટિબોડીઝ (બી કોષોનો ગુણધર્મ) ઉત્પન્ન કરે છે અને અમર (માયલોમા કોષોનો ગુણધર્મ) છે. ઇન્ક્યુબેટેડ માધ્યમને પછી મલ્ટીવેલ પ્લેટમાં એટલી હદે પાતળું કરવામાં આવે છે કે દરેક કૂવામાં માત્ર 1 કોષ હોય છે. પછી દરેક કૂવામાં રહેલા સુપરનેટન્ટને ઇચ્છિત એન્ટિબોડી માટે ચકાસી શકાય છે. કૂવામાં એન્ટિબોડીઝ એ જ બી કોષ દ્વારા ઉત્પન્ન થાય છે, તેથી તે એક જ એપિટોપ તરફ નિર્દેશિત કરવામાં આવશે, અને મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝ તરીકે ઓળખાય છે. મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝના ઉત્પાદનની શોધ સૌપ્રથમ સીઝર મિલ્સ્ટીન અને જ્યોર્જ જે. એફ. કોહલર દ્વારા કરવામાં આવી હતી, જેણે તેમને 1984 માં ફિઝિયોલોજી અથવા મેડિસિનમાં નોબેલ પુરસ્કાર મેળવ્યો હતો, જે નીલ્સ કાજ જર્ની સાથે વહેંચવામાં આવ્યો હતો. સંદર્ભો કોષ સંસ્કૃતિ માધ્યમો