Salt bridge (protein and supramolecular)
રસાયણશાસ્ત્રમાં, સોલ્ટ બ્રિજ એ બે બિન-સહસંયોજક ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓનું સંયોજન છેઃ હાઇડ્રોજન બંધન અને આયનીય બંધન (આકૃતિ 1). આયન જોડી એ રસાયણશાસ્ત્રમાં, જૈવિક પ્રણાલીઓમાં, વિવિધ સામગ્રીઓમાં અને આયન જોડી ક્રોમેટોગ્રાફી જેવા ઘણા ઉપયોગોમાં સૌથી મહત્વપૂર્ણ બિન-સહસંયોજક દળોમાંનું એક છે. પ્રોટીનની એન્ટ્રોપિકલી પ્રતિકૂળ ફોલ્ડેડ રચનામાં સ્થિરતા માટે તે સૌથી સામાન્ય રીતે જોવા મળતું યોગદાન છે. બિન-સહસંયોજક ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ પ્રમાણમાં નબળી ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ તરીકે જાણીતી હોવા છતાં, નાની સ્થિર ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ સમાધાનકર્તાની એકંદર સ્થિરતામાં મહત્વપૂર્ણ યોગદાન આપી શકે છે. માત્ર પ્રોટીનમાં જ મીઠાના સેતુ જોવા મળતા નથી, પરંતુ તે સુપરમોલેક્યુલર રસાયણશાસ્ત્રમાં પણ મળી શકે છે. દરેકના થર્મોડાયનેમિક્સની પ્રાયોગિક પ્રક્રિયાઓ દ્વારા શોધ કરવામાં આવે છે જેથી રાજ્યની એકંદર મુક્ત ઊર્જામાં સોલ્ટ બ્રિજના મુક્ત ઊર્જાના યોગદાનનો ઉપયોગ કરી શકાય. રાસાયણિક બંધનમાં મીઠાના પુલ પાણીમાં, મીઠાના પુલ અથવા આયન જોડીઓની રચના મોટે ભાગે એન્ટ્રોપી દ્વારા ચલાવવામાં આવે છે, જે સામાન્ય રીતે જોડાણ પર ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરતા આયનોના વિઘટનને કારણે પ્રતિકૂળ δH યોગદાન સાથે હોય છે. હાઇડ્રોજન બંધ આયન જોડીઓની સ્થિરતામાં ફાળો આપે છે, દા. ત. પ્રોટોનેટેડ એમોનિયમ આયનો, અને એનાયનો સાથે કાર્બોક્સિલેટ, ફોસ્ફેટ વગેરેના કિસ્સામાં ડિપ્રોટોનેશન દ્વારા રચાય છે; પછી જોડાણ સ્થિરાંકો pH પર આધાર રાખે છે. આયન જોડી માટે એન્ટ્રોપિક પ્રેરક બળો (નોંધપાત્ર એચ-બંધન યોગદાનની ગેરહાજરીમાં) પણ દ્રાવક તરીકે મિથેનોલમાં જોવા મળે છે. બિનધ્રુવીય દ્રાવકોમાં ખૂબ ઊંચા જોડાણ સ્થિરાંકો સાથે સંપર્ક આયન જોડીઓ રચાય છે; ગેસ તબક્કામાં સંલગ્ન ઊર્જાઓ દા. ત. આલ્કલી હેલાઈડ્સ 200 kJ/mol સુધી પહોંચે છે. બીજેરમ અથવા ફ્યુઓસ સમીકરણ આયન જોડી જોડાણને આયન ચાર્જ ઝેડએ અને ઝેડબી અને માધ્યમના ડાઇલેક્ટ્રિક અચળાંક ε ના કાર્ય તરીકે વર્ણવે છે; સ્થિરતાનો અનુરૂપ આલેખ ΔG વિ. ઝેડએઝબી 200 થી વધુ આયન જોડીઓ માટે આયનોની વિશાળ વિવિધતા માટે અપેક્ષિત રેખીય સહસંબંધ દર્શાવે છે. અકાર્બનિક તેમજ કાર્બનિક આયનો મધ્યમ આયનીય શક્તિ I પર પ્રદર્શિત થાય છે, જે આયનોની પ્રકૃતિ (કદ, ધ્રુવીકરણ વગેરે) થી લગભગ સ્વતંત્ર, 1:1 એનાયન અને કેટાયનના સંયોજન માટે 5 થી 6 kJ/mol ની આસપાસ સમાન સોલ્ટ બ્રિજ એસોસિએશન αG મૂલ્યો દર્શાવે છે. δG મૂલ્યો એડિટિવ છે અને લગભગ ચાર્જનું રેખીય કાર્ય છે, જેમ કે. એક ચાર્જ એમોનિયમ કેટાયન સાથે બમણું ચાર્જ થયેલ ફોસ્ફેટ આયન લગભગ 2x5 = 10 kJ/mol માટે જવાબદાર છે. αG મૂલ્યો દ્રાવણની આયનીય શક્તિ I પર આધાર રાખે છે, જેમ કે ડેબી-હકલ સમીકરણ દ્વારા વર્ણવવામાં આવ્યું છે, શૂન્ય આયનીય શક્તિ પર αG = 8 kJ/mol અવલોકન કરે છે. ક્ષાર-આયન જોડીની સ્થિરતાને એનાયન ચાર્જ z ના કાર્ય તરીકે વધુ વિગતવાર સમીકરણ દ્વારા વર્ણવી શકાય છે. પ્રોટીનમાં જોવા મળતા મીઠાના પુલ મોટાભાગે એસ્પાર્ટિક એસિડ અથવા ગ્લુટામિક એસિડના એનાયોનિક કાર્બોક્સિલેટ (આર. સી. ઓ. ઓ. −) અને લાઇસિનમાંથી કેટાયનિક એમોનિયમ (આર. એન. એચ. 3 +) અથવા આર્જિનિનના ગુઆનિડિનિયમ (આર. એન. એચ. સી. (એન. એચ. 2) 2 +) માંથી ઉદ્ભવે છે (આકૃતિ 2). જો કે આ સૌથી સામાન્ય છે, હિસ્ટિડીન, ટાયરોસિન અને સેરીન જેવી આયનીકરણક્ષમ બાજુની સાંકળો ધરાવતા અન્ય અવશેષો પણ ભાગ લઈ શકે છે, જે તેમના પી. કે. એ. ને ખલેલ પહોંચાડતા બાહ્ય પરિબળો પર આધાર રાખે છે. મીઠાના પુલમાં ભાગ લેનારા અવશેષો વચ્ચેનું અંતર પણ મહત્વપૂર્ણ હોવાનું ટાંકવામાં આવે છે. જરૂરી અંતર 4 Å (400 પી. એમ.) કરતા ઓછું છે. આ અંતર કરતાં વધુ અંતર ધરાવતા એમિનો એસિડ મીઠાના પુલની રચના માટે લાયક નથી. સમગ્ર પ્રોટીનમાં જોવા મળતી એમિનો એસિડની અસંખ્ય આયનીકરણક્ષમ બાજુની સાંકળોને કારણે, પ્રોટીન જે પીએચ પર મૂકવામાં આવે છે તે તેની સ્થિરતા માટે નિર્ણાયક છે. પ્રોટીન-લિગાન્ડ સંકુલમાં જોવા મળતા મીઠાના પુલ પ્રોટીન અને નાના પરમાણુ લિગાન્ડ્સ વચ્ચે પણ બની શકે છે. પ્રોટીન ડેટાબેન્કમાંથી 1100 થી વધુ અનન્ય પ્રોટીન-લિગાન્ડ સંકુલ તેમના પ્રોટીન લક્ષ્યો સાથે મીઠાના પુલની રચના કરતા જોવા મળ્યા હતા, જે સૂચવે છે કે દવા-પ્રોટીનની ક્રિયાપ્રતિક્રિયામાં મીઠાના પુલ વારંવાર જોવા મળે છે. તેમાં હાઇડ્રોલેઝ, ટ્રાન્સફરેઝ, કાઇનેઝ, રિડક્ટેઝ, ઓક્સિડોરિડક્ટેઝ, લાઇએઝ અને જી પ્રોટીન-કપલ્ડ રીસેપ્ટર્સ (જી. પી. સી. આર.) સહિત વિવિધ એન્ઝાઇમ વર્ગોની રચનાઓ હોય છે. તાજેતરના અભ્યાસોએ દર્શાવ્યું છે કે પ્રોટીનની રચનાને સ્થિર કરતી અને અવરોધક પ્રવૃત્તિને સેંકડો ગણો વધારી શકે તેવી મોલેક્યુલર ક્લિપ્સ તરીકે કામ કરીને પ્રોટીન-લિગાન્ડ સંકુલને સ્થિર કરવામાં મીઠાના પુલો મહત્વપૂર્ણ ભૂમિકા ભજવે છે. તેથી લિગાન્ડ્સ અને તેમના પ્રોટીન લક્ષ્યો વચ્ચે મીઠાના પુલનો સમાવેશ તર્કસંગત દવા ડિઝાઇનમાં મૂલ્યવાન સાધન બની શકે છે. પ્રોટીનમાં સોલ્ટ બ્રિજની સ્થિરતાને માપવા માટેની પદ્ધતિઓ પ્રોટીનની ફોલ્ડેડ સ્થિતિમાં એકંદર સ્થિરતામાં સોલ્ટ બ્રિજના યોગદાનનું મૂલ્યાંકન મ્યુટેજેનેસિસ અભ્યાસો અને ન્યુક્લિયર મેગ્નેટિક રેઝોનન્સ તકનીકોમાંથી એકત્રિત કરવામાં આવેલા થર્મોડાયનેમિક ડેટા દ્વારા કરી શકાય છે. ઉચ્ચ pH પર વરસાદને રોકવા માટે ખાસ પરિવર્તન પામેલા સ્યુડો-વાઇલ્ડ-પ્રકારનાં પ્રોટીનનો ઉપયોગ કરીને, ફોલ્ડેડ પ્રોટીન સ્થિતિની એકંદર મુક્ત ઊર્જામાં સોલ્ટ બ્રિજનું યોગદાન બિંદુ-પરિવર્તન, ફેરફાર કરીને અને પરિણામે, સોલ્ટ બ્રિજને તોડીને નક્કી કરી શકાય છે. ઉદાહરણ તરીકે, અવશેષ 70 પર એસ્પાર્ટિક એસિડ (એ. એસ. પી.) અને અવશેષ 31 (આકૃતિ 3) પર હિસ્ટિડીન (હિઝ) વચ્ચે T4 લિસોઝાઇમમાં સોલ્ટ બ્રિજ અસ્તિત્વમાં હોવાનું ઓળખવામાં આવ્યું હતું. એસ્પેરાજિન (એ. એસ. એન.) (આકૃતિ 4) સાથે સાઇટ-નિર્દેશિત મ્યુટાજેનેસિસ ત્રણ નવા મ્યુટન્ટ્સ મેળવવામાં આવ્યું હતુંઃ એ. એસ. પી. 70એ. એસ. એન. હિસ 31 (મ્યુટન્ટ 1), એ. એસ. પી. 70 હિસ 31એ. એસ. એન. (મ્યુટન્ટ 2), અને એ. એસ. પી. 70એ. એસ. એન. હિસ 31એ. એસ. એન. (ડબલ મ્યુટન્ટ). એકવાર મ્યુટન્ટ્સ સ્થાપિત થઈ ગયા પછી, સોલ્ટ બ્રિજ સાથે સંકળાયેલી મુક્ત ઊર્જાની ગણતરી કરવા માટે બે પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરી શકાય છે. એક પદ્ધતિમાં જંગલી પ્રકારના પ્રોટીન વિરુદ્ધ ત્રણ મ્યુટન્ટ્સના ગલન તાપમાનનું નિરીક્ષણ સામેલ છે. વૃત્તાકાર દ્વિરૂપતામાં ફેરફાર દ્વારા વિકૃતિકરણનું નિરીક્ષણ કરી શકાય છે. ગલન તાપમાનમાં ઘટાડો સ્થિરતામાં ઘટાડો સૂચવે છે. બેક્ટેલ અને શેલમેન દ્વારા વર્ણવવામાં આવેલી પદ્ધતિ દ્વારા આનું પ્રમાણ નક્કી કરવામાં આવે છે જ્યાં બંને વચ્ચેના મુક્ત ઊર્જાના તફાવતની ગણતરી ΔTΔS દ્વારા કરવામાં આવે છે. આ ગણતરીમાં કેટલીક સમસ્યાઓ છે અને તેનો ઉપયોગ માત્ર ખૂબ જ સચોટ માહિતી સાથે જ થઈ શકે છે. T4 લિસોઝાઇમના ઉદાહરણમાં, સ્યુડો-વાઇલ્ડ-પ્રકારનો δS અગાઉ pH 5.5 પર નોંધવામાં આવ્યો હતો, તેથી આ pH પર 11°C નો મધ્યબિંદુ તાપમાનનો તફાવત 360 કેલરી/(mol·K) (1.5 kJ/(mol·K)) ના નોંધાયેલા δS દ્વારા ગુણાકાર કરીને લગભગ −4 kCl/mol (−17 kJ/mol) નો મુક્ત ઊર્જા ફેરફાર પ્રાપ્ત થાય છે. આ મૂલ્ય સોલ્ટ બ્રિજ દ્વારા પ્રોટીનની સ્થિરતામાં ફાળો આપતી મુક્ત ઊર્જાની માત્રાને અનુરૂપ છે. બીજી પદ્ધતિ સોલ્ટ બ્રિજની મુક્ત ઊર્જાની ગણતરી કરવા માટે પરમાણુ ચુંબકીય પ્રતિધ્વનિ સ્પેક્ટ્રોસ્કોપીનો ઉપયોગ કરે છે. કાર્બોક્સિલેટ અથવા એમોનિયમ જૂથને અડીને આવેલા કાર્બનના પ્રોટોનને અનુરૂપ રાસાયણિક પરિવર્તનને રેકોર્ડ કરતી વખતે ટાઇટ્રેશન કરવામાં આવે છે. અનુમાપન વળાંકનું મધ્યબિંદુ પી. કે. એ. અથવા પી. એચ. ને અનુરૂપ છે જ્યાં પ્રોટોનેટેડઃ ડિપ્રોટોનેટેડ અણુઓનો ગુણોત્તર 1:1 છે. ટી4 લિસોઝાઇમના ઉદાહરણને ચાલુ રાખીને, હિસ્ટિડીન 31 (આકૃતિ 5) ના સી2 પ્રોટોનમાં પરિવર્તનના નિરીક્ષણ દ્વારા અનુમાપન વળાંક મેળવવામાં આવે છે. આકૃતિ 5 વાઇલ્ડ-પ્રકાર અને મ્યુટન્ટ વચ્ચે ટાઇટ્રેશન વળાંકમાં પરિવર્તન દર્શાવે છે જેમાં એસ. પી. 70 એ. એસ. એન છે. રચાયેલ મીઠાનો પુલ ડિપ્રોટોનેટેડ એસ. પી. 70 અને પ્રોટોનેટેડ હિસ 31 વચ્ચે છે. આ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા તેમના 31 ના પી. કે. એ. માં જોવા મળતા પરિવર્તનનું કારણ બને છે. અનફોલ્ડેડ વાઇલ્ડ-ટાઇપ પ્રોટીનમાં, જ્યાં સોલ્ટ બ્રિજ ગેરહાજર હોય છે, તેમના 31માં મધ્યમ આયનીય શક્તિના H2O બફરમાં 6.8 નું pKa હોવાનું નોંધવામાં આવ્યું છે. આકૃતિ 5 9.05 ના જંગલી પ્રકારનો પી. કે. એ. દર્શાવે છે. પી. કે. એ. માં આ તફાવત એ. એસ. પી. 70 સાથેની તેમની 31 ની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા દ્વારા સમર્થિત છે. સોલ્ટ બ્રિજની જાળવણી માટે, તેમના 31 તેના પ્રોટોનને શક્ય તેટલા લાંબા સમય સુધી રાખવાનો પ્રયાસ કરશે. જ્યારે સોલ્ટ બ્રિજ વિક્ષેપિત થાય છે, જેમ કે મ્યુટન્ટ D70N માં, pKa 6.9 ની કિંમત પર પાછા ફરે છે, જે અનફોલ્ડેડ સ્થિતિમાં તેના 31 ની ઘણી નજીક છે. મુક્ત ઊર્જામાં સોલ્ટ બ્રિજના યોગદાનને પ્રતિબિંબિત કરવા માટે પી. કે. એ. માં તફાવતને માપી શકાય છે. ગિબ્સ મુક્ત ઊર્જાનો ઉપયોગ કરીનેઃ δG = −RTln (Keq), જ્યાં R એ સાર્વત્રિક વાયુ અચળાંક છે, T એ કેલ્વિનમાં તાપમાન છે, અને Keq એ સંતુલનમાં પ્રતિક્રિયાનો સંતુલન અચળાંક છે. હિઝ 31 નું ડિપ્રોટોનેશન એ એસિડ ડિસોસીએશન કોન્સ્ટન્ટ, કેએઃ હિઝ 31-એચ + હિઝ 31 + એચ + તરીકે ઓળખાતા વિશેષ કેક સાથે એસિડ સંતુલન પ્રતિક્રિયા છે. પી. કે. એ. પછી કા સાથે નીચે પ્રમાણે સંબંધિત છેઃ પી. કે. એ. = − લૉગ (કે. એ.). મ્યુટન્ટ અને વાઇલ્ડ-પ્રકારનાં મુક્ત ઊર્જા તફાવતની ગણતરી હવે મુક્ત ઊર્જા સમીકરણ, પી. કે. એ. ની વ્યાખ્યા, અવલોકન કરેલ પી. કે. એ. મૂલ્યો અને કુદરતી લઘુગણક અને લઘુગણક વચ્ચેના સંબંધનો ઉપયોગ કરીને કરી શકાય છે. T4 લિસોઝાઇમના ઉદાહરણમાં, આ અભિગમથી એકંદર મુક્ત ઊર્જામાં લગભગ 3 કિલો કેલરી/મોલનું ગણતરી કરેલું યોગદાન મળ્યું. સોલ્ટ બ્રિજમાં અન્ય સહભાગી સાથે સમાન અભિગમ અપનાવી શકાય છે, જેમ કે T4 લાઇસોજાઇમના ઉદાહરણમાં એએસપી 70, તેના 31ના પરિવર્તન પછી પી. કે. એ. માં તેના પરિવર્તન પર દેખરેખ રાખીને. યોગ્ય પ્રયોગ પસંદ કરતી વખતે સાવચેતીના શબ્દમાં પ્રોટીનની અંદર મીઠાના પુલનું સ્થાન સામેલ છે. ક્રિયાપ્રતિક્રિયામાં પર્યાવરણ મોટી ભૂમિકા ભજવે છે. ઉચ્ચ આયનીય શક્તિ પર, વિદ્યુતસ્થૈતિક ક્રિયાપ્રતિક્રિયા સામેલ હોવાથી મીઠાના પુલને સંપૂર્ણપણે ઢાંકી શકાય છે. T4 લાઇસોજાઇમમાં તેમના 31-એ. એસ. પી. 70 મીઠાના પુલને પ્રોટીનની અંદર દફનાવવામાં આવ્યો હતો. એન્ટ્રોપી સપાટી પરના મીઠાના પુલોમાં મોટી ભૂમિકા ભજવે છે જ્યાં સામાન્ય રીતે ખસેડવાની ક્ષમતા ધરાવતા અવશેષો તેમની સ્થિરવિદ્યુત ક્રિયાપ્રતિક્રિયા અને હાઇડ્રોજન બંધન દ્વારા સંકુચિત થાય છે. આ એન્ટ્રોપીમાં ઘટાડો દર્શાવે છે જે ક્રિયાપ્રતિક્રિયાના યોગદાનને લગભગ ભૂંસી નાખવા માટે પૂરતું છે. સપાટી પરના મીઠાના પુલોનો અભ્યાસ દફનાવવામાં આવેલા મીઠાના પુલોની જેમ જ કરી શકાય છે, જેમાં બેવડા મ્યુટન્ટ ચક્ર અને એન. એમ. આર. ટાઇટ્રેશનનો ઉપયોગ થાય છે. જો કે એવા કિસ્સાઓ અસ્તિત્વમાં છે કે જ્યાં દફનાવવામાં આવેલા મીઠાના પુલો સ્થિરતામાં ફાળો આપે છે, અન્ય કોઈ પણ વસ્તુની જેમ, અપવાદો અસ્તિત્વમાં છે અને દફનાવવામાં આવેલા મીઠાના પુલો અસ્થિર અસર પ્રદર્શિત કરી શકે છે. ઉપરાંત, સપાટી પરના મીઠાના પુલો, અમુક પરિસ્થિતિઓમાં, સ્થિર અસર પ્રદર્શિત કરી શકે છે. સ્થિર અથવા અસ્થિર અસરનું કેસ-દર-કેસ આધારે મૂલ્યાંકન કરવું આવશ્યક છે અને થોડા વ્યાપક નિવેદનો કરવામાં સક્ષમ છે. સુપ્રામોલેક્યુલર રસાયણશાસ્ત્ર એ એક ક્ષેત્ર છે જે મેક્રોમોલેક્યુલ્સ વચ્ચે બિન-સહસંયોજક ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ સાથે સંબંધિત છે. આ ક્ષેત્રમાં રસાયણશાસ્ત્રીઓ દ્વારા મીઠાના પુલનો ઉપયોગ વિવિધ અને સર્જનાત્મક બંને રીતે કરવામાં આવે છે, જેમાં આયનોનું સંવેદન, મોલેક્યુલર કેપ્સ્યુલ્સ અને ડબલ હેલિકલ પોલિમરનું સંશ્લેષણ સામેલ છે. એનાયન જટિલતા સુપરમોલેક્યુલર રસાયણશાસ્ત્રનું મુખ્ય યોગદાન એનાયનની ઓળખ અને સંવેદના માટે સમર્પિત છે. આયન જોડી એ આયન સંકુલ માટે સૌથી મહત્વપૂર્ણ પ્રેરક બળ છે, પરંતુ પસંદગી જેવી કે. હેલાઇડ શ્રેણીની અંદર હાંસલ કરવામાં આવ્યું છે, મોટે ભાગે હાઇડ્રોજન બોન્ડના યોગદાન દ્વારા. મોલેક્યુલર કેપ્સ્યુલ્સ મોલેક્યુલર કેપ્સ્યુલ્સ એ રાસાયણિક સ્કેફોલ્ડ્સ છે જે મહેમાન પરમાણુને પકડવા અને પકડી રાખવા માટે રચાયેલ છે (મોલેક્યુલર એન્કેપ્સ્યુલેશન જુઓ). સ્ઝુમ્ના અને સહકાર્યકરોએ કાયરલ આંતરિક સાથે નવીન મોલેક્યુલર કેપ્સ્યૂલ વિકસાવ્યું. આ કેપ્સ્યૂલ પ્લાસ્ટિકના ઇસ્ટર ઇંડાની જેમ બે અર્ધભાગથી બનેલું છે (આકૃતિ 6). બે અર્ધભાગ વચ્ચે મીઠાના પુલની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ તેમને દ્રાવણમાં સ્વ-ભેગા થવાનું કારણ બને છે (આકૃતિ 7). જ્યારે તેને 60 ડિગ્રી સેલ્સિયસ સુધી ગરમ કરવામાં આવે ત્યારે પણ તે સ્થિર રહે છે. ડબલ હેલિકલ પોલિમર યશિમા અને સહકાર્યકરોએ કેટલાક પોલિમર બનાવવા માટે સોલ્ટ બ્રિજનો ઉપયોગ કર્યો છે જે ડીએનએની જેમ ડબલ હેલિક્સ રચના અપનાવે છે. એક ઉદાહરણમાં, તેઓએ ડબલ હેલિકલ મેટાલોપોલિમર બનાવવા માટે પ્લેટિનમનો સમાવેશ કર્યો. તેમના મોનોમર અને પ્લેટિનમ (II) બાયફિનાઇલ (આકૃતિ 8) થી શરૂ કરીને, તેમના મેટાલોપોલિમર લિગાન્ડ વિનિમય પ્રતિક્રિયાઓની શ્રેણી દ્વારા સ્વ-એસેમ્બલ થાય છે. મોનોમરના બે ભાગો ડિપ્રોટોનેટેડ કાર્બોક્સિલેટ અને પ્રોટોનેટેડ નાઇટ્રોજન વચ્ચેના મીઠાના પુલ દ્વારા એકસાથે લંગર કરવામાં આવે છે. સંદર્ભો રાસાયણિક બંધન પ્રોટીન ઇજનેરી