H&E stain
હેમેટોક્સિલિન અને ઇઓસિન ડાઘ (અથવા હેમેટોક્સિલિન અને ઇઓસિન ડાઘ અથવા હેમેટોક્સિલિન-ઇઓસિન ડાઘ; ઘણીવાર સંક્ષિપ્તમાં એચ એન્ડ ઇ ડાઘ અથવા એચઇ ડાઘ તરીકે ઓળખાય છે) એ હિસ્ટોલોજીમાં ઉપયોગમાં લેવાતા મુખ્ય પેશીના ડાઘમાંથી એક છે. તે તબીબી નિદાનમાં સૌથી વધુ ઉપયોગમાં લેવાતો ડાઘ છે અને ઘણીવાર તે સુવર્ણ ધોરણ છે. ઉદાહરણ તરીકે, જ્યારે પેથોલોજિસ્ટ શંકાસ્પદ કેન્સરની બાયોપ્સી જુએ છે, ત્યારે હિસ્ટોલોજિકલ વિભાગ એચ એન્ડ ઇ સાથે રંગીન થવાની સંભાવના છે. એચ એન્ડ ઇ એ બે હિસ્ટોલોજીકલ સ્ટેનનું સંયોજન છેઃ હેમેટોક્સિલિન અને ઇઓસિન. હેમેટોક્સિલિન કોષના કેન્દ્રને જાંબલી વાદળી રંગ આપે છે, અને ઇઓસિન બાહ્યકોષીય મેટ્રિક્સ અને કોષરસને ગુલાબી રંગ આપે છે, અન્ય રચનાઓ આ રંગોના વિવિધ રંગછટા, રંગછટા અને સંયોજનો લે છે. તેથી પેથોલોજિસ્ટ કોષના પરમાણુ અને કોષરસાત્મક ભાગો વચ્ચે સરળતાથી તફાવત કરી શકે છે, અને વધુમાં, ડાઘમાંથી રંગની એકંદર પેટર્ન કોષોની સામાન્ય રચના અને વિતરણ દર્શાવે છે અને પેશીના નમૂનાના માળખાની સામાન્ય ઝાંખી પ્રદાન કરે છે. આમ, પેટર્ન માન્યતા, બંને નિષ્ણાત મનુષ્યો દ્વારા અને સોફ્ટવેર દ્વારા જે તે નિષ્ણાતોને (ડિજિટલ પેથોલોજીમાં) સહાય કરે છે, હિસ્ટોલોજિક માહિતી પ્રદાન કરે છે. આ ડાઘ સંયોજન 1877માં રસાયણશાસ્ત્રી એન. વિસોઝકી દ્વારા રશિયાની કાસન ઇમ્પીરિયલ યુનિવર્સિટીમાં રજૂ કરવામાં આવ્યું હતું. H & E સ્ટેનિંગ પ્રક્રિયા એ હિસ્ટોલોજીમાં મુખ્ય ડાઘ છે કારણ કે તે ઝડપથી કરી શકાય છે, ખર્ચાળ નથી, અને પેશીઓને એવી રીતે ડાઘાવે છે કે નોંધપાત્ર પ્રમાણમાં માઇક્રોસ્કોપિક એનાટોમી જાહેર થાય છે, અને તેનો ઉપયોગ હિસ્ટોપેથોલોજિક પરિસ્થિતિઓની વિશાળ શ્રેણીનું નિદાન કરવા માટે થઈ શકે છે. એચ એન્ડ ઇ સ્ટેનિંગના પરિણામો પેશીઓને ઠીક કરવા માટે ઉપયોગમાં લેવાતા રાસાયણિક અથવા પ્રયોગશાળાના પ્રોટોકોલમાં થોડી અસાતત્યતા પર વધુ પડતા નિર્ભર નથી, અને આ પરિબળો હિસ્ટોલોજીમાં તેના નિયમિત ઉપયોગમાં ફાળો આપે છે. એચ એન્ડ ઇ સ્ટેનિંગ હંમેશા તમામ પેશીઓ, સેલ્યુલર માળખાં અથવા રાસાયણિક પદાર્થોના વિતરણને અલગ પાડવા માટે પૂરતો વિરોધાભાસ પ્રદાન કરતું નથી, અને આ કિસ્સાઓમાં વધુ ચોક્કસ સ્ટેન અને પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે. H & E પ્રક્રિયામાં ઉપયોગમાં લેવાતા હેમેટોક્સિલિન સોલ્યુશન્સ (રચના) તૈયાર કરવાની ઘણી રીતો છે, વધુમાં, H & E રંગીન સ્લાઇડ્સ બનાવવા માટે ઘણા પ્રયોગશાળા પ્રોટોકોલ છે, જેમાંથી કેટલીક ચોક્કસ પ્રયોગશાળા માટે વિશિષ્ટ હોઈ શકે છે. જો કે કોઈ પ્રમાણભૂત પ્રક્રિયા નથી, તેમ છતાં પરંપરાગત રીતે પરિણામો વ્યાજબી રીતે સુસંગત છે કે કોષના કેન્દ્રક રંગીન વાદળી હોય છે અને કોષરસ અને બાહ્યકોષીય મેટ્રિક્સ રંગીન ગુલાબી હોય છે. હિસ્ટોલોજી પ્રયોગશાળાઓ ચોક્કસ રોગવિજ્ઞાની માટે સ્ટેનિંગની માત્રા અથવા પ્રકારને પણ સમાયોજિત કરી શકે છે. પેશીઓ એકત્રિત કર્યા પછી (ઘણીવાર બાયોપ્સી તરીકે) અને નિશ્ચિત કર્યા પછી, તેઓ સામાન્ય રીતે નિર્જલીકૃત થાય છે અને ઓગાળવામાં આવેલા પેરાફિન મીણમાં જડિત થાય છે, પરિણામી બ્લોકને માઇક્રોટોમ પર માઉન્ટ કરવામાં આવે છે અને પાતળા સ્લાઇસેસમાં કાપવામાં આવે છે. સ્લાઇસને માઇક્રોસ્કોપ સ્લાઇડ્સ પર જોડવામાં આવે છે, જે સમયે મીણને દ્રાવકથી દૂર કરવામાં આવે છે અને સ્લાઇડ્સ સાથે જોડાયેલા પેશીઓના સ્લાઇસને ફરીથી હાઇડ્રેટેડ કરવામાં આવે છે અને ડાઘ માટે તૈયાર હોય છે. વૈકલ્પિક રીતે, એચ એન્ડ ઇ ડાઘ એ મોહ સર્જરીમાં સૌથી વધુ ઉપયોગમાં લેવાતો ડાઘ છે જેમાં પેશીઓને સામાન્ય રીતે સ્થિર કરવામાં આવે છે, ક્રાયોસ્ટેટ (એક માઇક્રોટોમ જે સ્થિર પેશીઓને કાપે છે) પર કાપવામાં આવે છે, આલ્કોહોલમાં નિશ્ચિત કરવામાં આવે છે અને પછી રંગીન કરવામાં આવે છે. એચ એન્ડ ઇ સ્ટેનિંગ પદ્ધતિમાં ધાતુના મીઠું અથવા મોર્ડન્ટ સાથે મિશ્રિત હેમેટોક્સિલિનનો ઉપયોગ થાય છે, જે પછી ઘણીવાર નબળા એસિડ દ્રાવણમાં કોગળા કરીને વધારાનું સ્ટેનિંગ (તફાવત) દૂર કરવામાં આવે છે, ત્યારબાદ હળવા આલ્કલાઇન પાણીમાં બ્લ્યુઇંગ કરવામાં આવે છે. હેમેટોક્સિલિન લાગુ કર્યા પછી, પેશીઓને ઇઓસિન (સૌથી સામાન્ય રીતે ઇઓસિન વાય) સાથે વળાંક આપવામાં આવે છે. પરિણામો હેમાટોક્સિલિન મુખ્યત્વે કોષોના કેન્દ્રને વાદળી અથવા ઘેરા જાંબલી રંગ આપે છે, સાથે સાથે અન્ય કેટલીક પેશીઓ, જેમ કે કેરાટોહાયલિન ગ્રાન્યુલ્સ અને કેલ્સિફાઇડ સામગ્રી. ઇઓસિન કોષરસ અને કોલેજન જેવા બાહ્યકોષીય મેટ્રિક્સ સહિત કેટલીક અન્ય રચનાઓને ગુલાબી રંગના પાંચ રંગોમાં ડાઘાવે છે. ઇઓસિનોફિલિક (ઇઓસિન દ્વારા રંગીન પદાર્થો) માળખાં સામાન્ય રીતે અંતઃકોશિકીય અથવા બાહ્યકોશિકીય પ્રોટીનથી બનેલા હોય છે. લેવી બોડીઝ અને મેલોરી બોડીઝ ઇઓસિનોફિલિક માળખાના ઉદાહરણો છે. મોટાભાગનું કોષરસ ઇઓસિનોફિલિક હોય છે અને તેને ગુલાબી રંગ આપવામાં આવે છે. લાલ રક્તકણો ખૂબ જ લાલ રંગના હોય છે. જોકે હેમેટિન, હેમેટોક્સિલિનનું ઓક્સિડાઇઝ્ડ સ્વરૂપ, સક્રિય રંગદ્રવ્ય છે (જ્યારે મોર્ડન્ટ સાથે જોડવામાં આવે છે), તેમ છતાં ડાઘને હજુ પણ હેમેટોક્સિલિન તરીકે ઓળખવામાં આવે છે. હેમેટોક્સિલિન, જ્યારે મોર્ડન્ટ (સૌથી સામાન્ય રીતે એલ્યુમિનિયમ ફિટકરી) સાથે જોડવામાં આવે છે ત્યારે તેને ઘણીવાર મૂળભૂત, હકારાત્મક રીતે ચાર્જ કરેલા અથવા કેશનિક ડાઘ જેવું લાગે છે. ઇઓસિન એ આયનીય (નકારાત્મક ચાર્જ) અને એસિડિક ડાઘ છે. હેમલમ (એલ્યુમિનિયમ આયનો અને હેમેટિનનું સંયોજન) દ્વારા ન્યુક્લિયસનું સ્ટેનિંગ સામાન્ય રીતે ડાઈ-મેટલ કોમ્પ્લેક્સને ડીએનએ સાથે જોડવાને કારણે થાય છે, પરંતુ પેશીઓના વિભાગોમાંથી ડીએનએ કાઢ્યા પછી ન્યુક્લિયર સ્ટેનિંગ મેળવી શકાય છે. આ પદ્ધતિ થિયોનિન અથવા ટોલ્યુઇડિન વાદળી જેવા મૂળભૂત (કેશનિક) રંગો દ્વારા પરમાણુ સ્ટેનિંગ કરતા અલગ છે. મૂળભૂત રંગો દ્વારા ડાઘ માત્ર હેમલમ કરતાં ઓછા એસિડિક દ્રાવણમાંથી જ થાય છે, અને તે ન્યુક્લિક એસિડના અગાઉના રાસાયણિક અથવા ઉત્સેચકીય નિષ્કર્ષણ દ્વારા અટકાવવામાં આવે છે. એવા પુરાવા છે જે સૂચવે છે કે એલ્યુમિનિયમ અને હેમેટિનને એકસાથે પકડનારા બંધની જેમ, હેમલમ સંકુલને ડીએનએ અને પરમાણુ ક્રોમેટિનમાં પ્રોટીનના કાર્બોક્સી જૂથો સાથે જોડે છે. બેસોફિલિક અને ઇઓસિનોફિલિક કહેવા માટે માળખાં એસિડિક અથવા બેઝિક હોવું જરૂરી નથી; પરિભાષા રંગો માટે સેલ્યુલર ઘટકોના આકર્ષણ પર આધારિત છે. અન્ય રંગો, દા. ત. પીળો અને કથ્થઈ, નમૂનામાં હાજર હોઈ શકે છે; તેઓ મેલાનિન જેવા આંતરિક રંજકદ્રવ્યોને કારણે થાય છે. બેઝલ લેમિનેને પી. એ. એસ. ડાઘ અથવા કેટલાક ચાંદીના ડાઘ દ્વારા રંગીન કરવાની જરૂર છે, જો તે સારી રીતે દૃશ્યમાન હોય. રેટિક્યુલર રેસાને પણ ચાંદીના ડાઘની જરૂર પડે છે. હાઇડ્રોફોબિક માળખાં પણ સ્પષ્ટ રહે છે; આ સામાન્ય રીતે ચરબીથી સમૃદ્ધ હોય છે, દા. ત. એડિપોસાઇટ્સ, ચેતાકોષ ચેતાક્ષની આસપાસ માઇલિન અને ગોલ્ગી ઉપકરણ પટલ. H & E રંગીન પેશીઓના ઉદાહરણો સંદર્ભો વધુ વાંચન કીર્નન JA (2008) હિસ્ટોલોજિકલ અને હિસ્ટોકેમિકલ પદ્ધતિઓઃ થિયરી અને પ્રેક્ટિસ. ચોથી આવૃત્તિ. બ્લોક્સહામ, યુકેઃ સાયન. લિલી આર. ડી., પિઝોલેટો પી., ડોનાલ્ડસન પી. ટી. (1976) દ્રાવ્ય મેટાક્રોમ મોર્ડન્ટ લેક ડાયઝ સાથે પરમાણુ સ્ટેન. રાસાયણિક અંતિમ જૂથ અવરોધિત પ્રતિક્રિયાઓની અસર અને પેશીઓમાં એસિડ જૂથોની કૃત્રિમ રજૂઆત. હિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી 49:23-35. લેવેલિન બી. ડી. (2009) એલ્યુમ-હેમેટોક્સિલિન સાથે ન્યુક્લિયર સ્ટેનિંગ. બાયોટેક. હિસ્ટોકેમ. 84: 159-177. પુશ્ટલર એચ, મેલોન એસ. એન., વાલ્ડ્રોપ એફ. એસ. (1986) મેટલ-હેમેટિન અને-બ્રેઝિલિન સ્ટેન માટે વર્તમાન રાસાયણિક વિભાવનાઓનો ઉપયોગ. હિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી 85:353-364. બાહ્ય કડીઓ સિગ્મા-એલ્ડ્રિક એચ એન્ડ ઇ ઇન્ફોર્મેશનલ પ્રાઇમર પ્રોટોકોલ રૂટિન મેયરનું હેમેટોક્સિલિન અને ઇઓસિન સ્ટેન (એચ એન્ડ ઇ) હેમેટોક્સિલિન અને ઇઓસિન (એચ એન્ડ ઇ) સ્ટેનિંગ પ્રોટોકોલ રોસેન લેબ, મોલેક્યુલર અને સેલ્યુલર બાયોલોજી વિભાગ, બેલર કોલેજ ઓફ મેડિસિન) સ્ટેપ બાય સ્ટેપ પ્રોટોકોલ એચ-ઇ સ્ટેઇન માઇક્રોસ્કોપી માઇક્રોબાયોલોજી તકનીકો લેબોરેટરી તકનીકો હિસ્ટોપેથોલોજી હિસ્ટોટેકનોલોજી સ્ટેનિંગ ડાય સ્ટેનિંગ