Minusheet perfusion culture system
માઇનશીટ પરફ્યુઝન કલ્ચર સિસ્ટમનો ઉપયોગ સંલગ્ન કોષો સાથે સંયોજનમાં અદ્યતન કોષ સંવર્ધન પ્રયોગો માટે અને પસંદ કરેલ બાયોમટેરિયલ્સ, વિશેષ પેશી વાહક અને સુસંગત પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનર સાથે સંયોજનમાં વિશિષ્ટ પેશીઓ ઉત્પન્ન કરવા માટે થાય છે. માઇનશીટ પરફ્યુઝન કલ્ચર સિસ્ટમનો તકનીકી વિકાસ ઈન વિટ્રો પરિસ્થિતિઓમાં જીવતંત્રની અંદર જોવા મળતી વિશિષ્ટ પેશીઓની સ્થિતિને શક્ય તેટલું નજીકનું વાતાવરણ બનાવવાના વિચાર દ્વારા સંચાલિત હતો. તેથી આ શોધનો આધાર લઘુતમ પેશી વાહકોમાં માઉન્ટ થયેલ શ્રેષ્ઠ કોષ સંલગ્નતા માટે વ્યક્તિગત રીતે પસંદ કરેલ બાયોમટેરિયલ્સ છે. વધુમાં, શ્વસન ગેસ સહિત હંમેશા તાજું પોષણ પ્રદાન કરવા અને પેશી-વિશિષ્ટ પ્રવાહી વાતાવરણનું અનુકરણ કરવા માટે, પેશી વાહકોને સુસંગત પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનરમાં દાખલ કરી શકાય છે. પરિણામે, વિવિધ પ્રકાશનો દર્શાવે છે કે આ નવીન અભિગમ દ્વારા પેદા થયેલ પેશીઓ ઉત્તમ અને સ્થિર ગુણવત્તા દર્શાવે છે. આમ, એક તરફ પ્રણાલી સુસંગત કોષોના સંવર્ધન અને વિશિષ્ટ પેશીઓના નિર્માણ માટે અત્યંત અનુકૂળ આધાર પ્રદાન કરે છે. બીજી તરફ માઇનશીટ પરફ્યુઝન કલ્ચર સિસ્ટમ પરંપરાગત સ્થિર 24 વેલ કલ્ચર પ્લેટ અને આધુનિક પરફ્યુઝન કલ્ચર ટેકનોલોજી વચ્ચેના પદ્ધતિસરના અંતરને દૂર કરી રહી છે. પુનરુત્પાદક દવા, પેશી ઇજનેરી, નેનો ટેકનોલોજી, બાયોમટેરિયલ સંશોધન અને નવા વિકસિત ફાર્માસ્યુટિકલ્સના અદ્યતન ઝેરી પરીક્ષણમાં સંવર્ધનમાં વિશિષ્ટ પેશીઓની નિર્ણાયક પેઢીની તાકીદે જરૂર છે. જો કે, ઘણીવાર એવું જોવા મળે છે કે ઊભા થયેલા પેશીઓ અપેક્ષિત કાર્યાત્મક લક્ષણો દર્શાવતા નથી. તેના બદલે અવમૂલ્યન જોવા મળે છે [1-4]. આ કોષ જૈવિક ફેરફારો કોષોના અલગ થયા પછી ઉત્પન્ન થાય છે અને સબઓપ્ટિમલ પ્રવાહી વાતાવરણ અને બાયોમટેરિયલ્સ પર નાના સંલગ્નતાને કારણે વાનગીમાં સ્થિર સંવર્ધન દરમિયાન આગળ વધે છે. પોષણ અને શ્વસન ગેસ સાથે વધુ અનિયંત્રિત પુરવઠો, મેટાબોલાઇટ્સ અને પેરાક્રીન પરિબળોનું ઓવરશૂટ અથવા ગેરહાજર રિયોલોજિકલ તણાવ અવમૂલ્યનની માત્રામાં વધારો કરી શકે છે. પરિણામે, વિશિષ્ટ પેશીઓની શ્રેષ્ઠ પેઢીના સંદર્ભમાં એક શક્તિશાળી વ્યૂહરચનાએ શક્ય તેટલા હાનિકારક પરિમાણોને બાકાત રાખવા પડે છે, જ્યારે પેશીઓના વિકાસની પ્રક્રિયાને ટેકો આપતા પરિબળોને વધુ તીવ્ર બનાવવા જોઈએ [5]. પસંદ કરેલ બાયોમટેરિયલ્સ પેશી વાહકની અંદર વિકાસને પ્રોત્સાહન આપે છે કુદરતી પરિસ્થિતિઓમાં શ્રેષ્ઠ પેશી વિકાસ માટેની પૂર્વશરત બાહ્યકોષીય મેટ્રિક્સ સાથે કોષ-વિશિષ્ટ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા છે, જ્યારે ઈન વિટ્રો પરિસ્થિતિઓમાં બાહ્યકોષીય મેટ્રિક્સ માટે વિકલ્પ પસંદ કરવો પડે છે. જો કે, નિર્ણાયક સમસ્યા એ છે કે બાયોમટેરિયલ પરિપક્વ પેશીઓની અંદર સારી અને ખરાબ અર્થમાં કાર્યાત્મક સુવિધાઓના વિકાસને પ્રભાવિત કરી શકે છે. પરિણામે, ડિસેલ્યુલરાઇઝ્ડ એક્સ્ટ્રાસેલ્યુલર મેટ્રિક્સ, નવા વિકસિત સિન્થેટિક પોલિમર, બાયોડિગ્રેડેબલ સ્કેફોલ્ડ્સ, સિરામિક્સ અથવા મેટલ એલોય્સની યોગ્યતાની આગાહી કરી શકાતી નથી પરંતુ તેનું પરીક્ષણ કરવું આવશ્યક છે. કોષ સંલગ્નતા અને સંદેશાવ્યવહારને હકારાત્મક રીતે પ્રભાવિત કરતા પરિમાણોને પહોંચી વળવા માટે, તકનીકી ખ્યાલ લઘુતમ પેશી વાહક પર આધારિત છે (આકૃતિ. 1). આ સાધનની મદદથી કોષના સંલગ્નતા અને પેશીઓના વિકાસનું વ્યક્તિગત રીતે પસંદ કરેલી બાયોમેટેરિયલ સાથે પરીક્ષણ કરી શકાય છે. આ પ્રયોગો પહેલા સ્થિર હેઠળ કરી શકાય છે (આકૃતિ. 2) અને પછી ગતિશીલ (આકૃતિ. 3) સાંસ્કૃતિક પરિસ્થિતિઓ [6]. બંને કિસ્સાઓમાં માઇનશીટ પેશી વાહક નુકસાનને અટકાવે છે પરંતુ પ્રયોગ દરમિયાન સમાવિષ્ટ કોષો અથવા પેશીઓના વિકાસને ટેકો આપે છે. પરંપરાગત 24 વેલ કલ્ચર પ્લેટ સાથે સુસંગત રહેવા માટે પસંદ કરેલી બાયોમટેરિયલને 13 મીમીના વ્યાસમાં પંચ કરવી આવશ્યક છે. આ સ્વરૂપમાં ઘણી સામગ્રી વ્યાપારી રીતે પણ ઉપલબ્ધ છે. વધુ સામગ્રીને ગાળકો, વરખ, જાળી, ઊન અને સ્કેફોલ્ડ્સના સ્વરૂપમાં લાગુ કરી શકાય છે (આકૃતિ. 1એ). સરળ સંચાલન માટે અને વિકાસ દરમિયાન નુકસાનને રોકવા માટે પસંદ કરેલા નમુનાઓને માઇનશીટ પેશી વાહકના આધાર ભાગમાં મૂકવામાં આવે છે (આકૃતિ. 1 બી). ટેન્શન રિંગને નીચે દબાવીને બાયોમટેરિયલને સ્થિતિમાં રાખવામાં આવે છે (આકૃતિ. 1 સી). ટીશ્યુ વાહકને માઉન્ટ કર્યા પછી તેને થેલીમાં ઢાંકી દેવામાં આવે છે અને વંધ્યીકૃત કરવામાં આવે છે. પેશી વાહક પર સેલ સીડિંગ કોષ સીડિંગ માટે માઉન્ટ થયેલ પેશી વાહકને 24 વેલ કલ્ચર પ્લેટમાં ફોર્સેપ્સ દ્વારા સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે (આકૃતિ. 2). પેશી વાહક સંવર્ધન માધ્યમની ટોચ પર કોષોને કેન્દ્રિત કરવા માટે એક સ્તરમાં ઉમેરવામાં આવે છે જેથી પસંદ કરેલ બાયોમટેરિયલ માત્ર ભીનું થાય. પછી કોષોનો એક અલિકોટ પાઇપેટ દ્વારા માઉન્ટ થયેલ બાયોમટેરિયલની સપાટી પર સ્થાનાંતરિત થાય છે. પેશી વાહક સાથે પ્રમાણભૂત સંવર્ધન પ્રોટોકોલ ઉપરની બાજુએ બીજ કોશિકાઓ દ્વારા શરૂ કરી શકાય છે. જ્યારે પેશી વાહકને ફેરવવામાં આવે છે, ત્યારે કોષોને બીજી બાજુ પણ બીજ આપી શકાય છે જેથી બે અલગ અલગ કોષ પ્રકારો સાથે સહ-સંવર્ધન પ્રયોગો શક્ય બને. માત્ર એક કોષ જ નહીં પણ પેશીનો પાતળો ટુકડો પણ માઇનશીટ પેશી વાહકની અંદર વણાયેલા જાળીના બે ટુકડાઓ વચ્ચે ગોઠવી શકાય છે. વધુ લવચીક સામગ્રી જેમ કે કોલેજન શીટ્સનો ઉપયોગ ડ્રમની ચામડી જેવા પેશી વાહકમાં થઈ શકે છે. અવકાશી પેરેન્કાઇમા વિકાસ [5,6,8] માટે કૃત્રિમ ઇન્ટર્સ્ટિટિયમ તરીકે પોલિએસ્ટર ફ્લીસને માઉન્ટ કરીને છેલ્લા પરંતુ ઓછામાં ઓછા ઉત્તમ પરિણામો મેળવવામાં આવ્યા હતા. તે સ્પષ્ટ છે કે દરેક વિશિષ્ટ પેશી માટે પેશી વાહકની અંદર ખૂબ જ વ્યક્તિગત અવકાશી વાતાવરણ બનાવી શકાય છે. સુસંગત પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનર એવું દર્શાવવામાં આવ્યું છે કે 24 વેલ કલ્ચર પ્લેટની અંદર સ્થિર વાતાવરણ પોષણ અને હોર્મોન્સમાં ઘટાડો, મેટાબોલાઇટ્સમાં અનિયંત્રિત વધારો અને સમય દરમિયાન પેરાક્રીન પરિબળોના ઓવરશૂટ તરફ દોરી જાય છે. આ કારણોસર 24 વેલ કલ્ચર પ્લેટમાં સંલગ્ન કોષો સાથે લઘુતમ પેશી વાહકનો ઉપયોગ માત્ર કોષના સીડિંગના ટૂંકા ગાળા માટે થાય છે. પરિણામે, કોષોના સંલગ્નતા પછી પેશી વાહકને ગતિશીલ પ્રવાહી વાતાવરણ પ્રદાન કરવા માટે પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનરમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે. વિશિષ્ટ પેશીઓની વ્યક્તિગત જરૂરિયાતોને પહોંચી વળવા માટે વિવિધ પ્રકારના પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનરનું નિર્માણ કરવામાં આવ્યું હતું (આકૃતિ. 3). દરેક પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનરમાં કલ્ચર માધ્યમના પરિવહન માટે ઓછામાં ઓછું એક ઇનલેટ અને એક આઉટલેટ હોય છે. કન્ટેનરનું મૂળભૂત સંસ્કરણ સતત મધ્યમ પરિવહન હેઠળ અનુક્રમે વધતી પેશીઓના કોષોના સરળ સ્નાનને મંજૂરી આપે છે (આકૃતિ. 4એ). ઢાળ પાત્રમાં પેશી વાહકને આધાર અને ઢાંકણની વચ્ચે મૂકવામાં આવે છે જેથી બંને બાજુઓને ઉપકલા માટે લાક્ષણિક વાતાવરણની નકલ કરતા વ્યક્તિગત માધ્યમો પૂરા પાડી શકાય (આકૃતિ. 4 બી). વધુ સંવર્ધન પાત્ર પારદર્શક ઢાંકણ અને આધારથી બનેલું હોય છે જે પેશીઓના વિકાસ દરમિયાન સૂક્ષ્મ નિરીક્ષણને મંજૂરી આપે છે (આકૃતિ. 4 સી). વધુમાં, પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનર લવચીક સિલિકોન ઢાંકણ પ્રદર્શિત કરી શકે છે. વિચિત્ર રોટર દ્વારા આ ઢાંકણ પર બળ લાગુ કરવું એ કોમલાસ્થિ અને અસ્થિ પેશી ઇજનેરીમાં જરૂરી યાંત્રિક ભારનું અનુકરણ કરે છે. આકારની પેશીઓ જેમ કે ઓરિકલ અથવા કોમલાસ્થિના વિવિધ સ્વરૂપો ખાસ પેશી ઇજનેરી કન્ટેનરમાં વ્યક્તિગત સ્કેફોલ્ડ્સ સાથે પેદા કરી શકાય છે. છેવટે, મૂત્રપિંડના સ્ટેમ/પૂર્વજ કોષોમાંથી મેળવેલા નળીઓનું અવકાશી વિસ્તરણ પોલિએસ્ટર ઊનથી બનેલા કૃત્રિમ ઇન્ટર્સ્ટિટિયમથી ભરેલા પરફ્યુઝન કન્ટેનરની અંદર મેળવવામાં આવે છે. છેવટે, આ તમામ કન્ટેનરને ખાસ પોલીકાર્બોનેટ (મેક્રોલોન®) માંથી બનાવવામાં આવે છે જેથી તે બધાને બહુવિધ ઉપયોગો માટે ઓટોક્લેવ કરી શકાય. પરફ્યુઝન કલ્ચર પ્રયોગોનું પ્રદર્શન પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનરની અંદર 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસનું જરૂરી તાપમાન જાળવવા માટે, અઠવાડિયાઓ સુધી કલ્ચર પ્રયોગોના પ્રદર્શન દરમિયાન હીટિંગ પ્લેટ (મેડેક્સ-નાગેલ, કીલ, જર્મની) અને કવર લિડ (બતાવેલ નથી) નો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે. 5, 7). સંસ્કૃતિ માધ્યમનું પરિવહન ધીમે ધીમે ફરતા પેરિસ્ટાલ્ટિક પંપ (ISMATEC, આઈ. પી. સી. એન. 8, વેર્થાઇમ, જર્મની) નો ઉપયોગ કરીને શ્રેષ્ઠ રીતે પરિપૂર્ણ થાય છે. તે 0.01 અને 5 એમએલ પ્રતિ કલાકની વચ્ચે એડજસ્ટેબલ અને ચોક્કસ પંપ દર પહોંચાડવામાં સક્ષમ છે. સંગ્રહ બોટલમાંથી પસાર થતા માર્ગ પર પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનર માધ્યમને સમાયેલ કોષો પ્રદાન કરવા માટે માઉન્ટ થયેલ પેશી વાહક સાથે પરિવહન કરવામાં આવે છે. પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનરની અંદર ટીશ્યુ વાહકની ચોક્કસ ભૌમિતિક પ્લેસમેન્ટ બધી બાજુથી હંમેશા તાજા પોષણ અને શ્વસન ગેસ સાથે મધ્યમ જોગવાઈના પરિવહન દરમિયાન બાંયધરી આપે છે. તે જ સમયે તે મેટાબોલિક ઉત્પાદનોના અનફિઝિયોલોજીકલ સંચય અને પેરાક્રીન પરિબળોના ઓવરશૂટને અટકાવે છે. સમગ્ર સંવર્ધન સમયગાળા માટે આ નિયંત્રિત વાતાવરણ જાળવવા માટે, ચયાપચય માધ્યમને એક અલગ કચરાની બોટલમાં એકત્રિત કરવામાં આવે છે. પરિણામે, માધ્યમનું પુનરાવર્તન થતું નથી. પરફ્યુઝન કલ્ચર દરમિયાન પીએચનું સ્થિરીકરણ સામાન્ય રીતે કોષ સંવર્ધન પ્રયોગો CO2 ઇન્ક્યુબેટરમાં કરવામાં આવે છે. આવા વાતાવરણમાં પરફ્યુઝન કલ્ચર પ્રયોગો પણ કરી શકાય છે. જો કે, વધુ સારો ઉકેલ પ્રયોગશાળાના ટેબલ પર વાતાવરણીય હવા હેઠળ પરફ્યુઝન કલ્ચર પ્રયોગોનું પ્રદર્શન છે, કારણ કે તે સંપૂર્ણ સંચાલનને સરળ બનાવે છે. જો કે, આ કિસ્સામાં સંવર્ધન માધ્યમને વાતાવરણીય હવા સાથે સમાયોજિત કરવું પડશે. ઇન્ક્યુબેટરની અંદર મીડિયાને 5 ટકા CO2 વાતાવરણમાં રાખવાથી હંમેશા NaHCO3ની પ્રમાણમાં ઊંચી માત્રા સમાયેલી રહે છે, જે 7.2 અને 7.4 ની વચ્ચે સતત pH જાળવી રાખે છે. જો આવા ફોર્મ્યુલેટેડ માધ્યમનો ઉપયોગ CO2 ઇન્ક્યુબેટરની બહાર પરફ્યુઝન કલ્ચર માટે કરવામાં આવે, તો વાતાવરણીય હવામાં CO2 (0.3%) ની ઓછી સામગ્રીને કારણે pH શારીરિક શ્રેણીમાંથી વધુ આલ્કલાઇન મૂલ્યો તરફ જશે. આ કારણોસર CO2 ઇન્ક્યુબેટરની બહાર પરફ્યુઝન કલ્ચર માટે ઉપયોગમાં લેવાતા કોઈપણ માધ્યમને NaHCO3 સાંદ્રતા ઘટાડીને અને/અથવા HEPES (GIBCO/Invitrogen, Karlsruhe, જર્મની) અથવા BUffer ALL (Sigma-Aldric-Chemi, München, જર્મની) જેવા જૈવિક બફર ઉમેરીને સ્થિર કરવું પડે છે. જૈવિક બફર દ્રાવણની વધતી જતી માત્રાને માધ્યમના પ્રવાહીમાં ભેળવીને જરૂરી રકમ સરળતાથી નક્કી કરી શકાય છે. પછી માધ્યમએ વાતાવરણીય હવામાં 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર થર્મો પ્લેટ પર આખી રાત સંતુલન જાળવવું જોઈએ. ઉદાહરણ તરીકે, 50 એમ. એમ. ઓ. એલ./એલ. એચ. ઇ. પી. ઇ. નો ઉપયોગ અથવા બફર ઓલ (સી. એ.) ની સમકક્ષ. 1 ટકા) થી આઇએમડીએમ (ઇસ્કોવનું મોડિફાઇડ ડુલ્બેકોનું માધ્યમ, જીઆઇબીસીઓ/ઇન્વિટ્રોજન) પ્રયોગશાળાના ટેબલ પર વાતાવરણીય હવા હેઠળ લાંબા ગાળાના પરફ્યુઝન સંવર્ધન દરમિયાન 7.4 નું સતત પીએચ જાળવી રાખશે. માધ્યમમાં ઓક્સિજનની ઉપલબ્ધતા પરફ્યુઝન કલ્ચર પ્રયોગમાં O2નું ઉચ્ચ સંતૃપ્તિ મેળવવા માટે આઇએમડીએમ જેવા પસંદ કરેલા માધ્યમને ગેસ પારગમ્ય સિલિકોન ટ્યુબ દ્વારા પરિવહન કરવું પડે છે. સિલિકોન ટ્યુબનો ઉપયોગ પાતળા દિવાલ (1 મીમી), નાના આંતરિક વ્યાસ (1 મીમી) અને તેની વિસ્તૃત લંબાઈ (1 મીમી) ને કારણે પ્રસરણ દ્વારા વાયુ વિનિમય માટે મોટી સપાટી પૂરી પાડે છે. ઉદાહરણ તરીકે, પ્રમાણભૂત પરફ્યુઝન કલ્ચર પ્રયોગ દરમિયાન વાતાવરણીય હવા સામે સંતુલિત આઇએમડીએમ (3024 મિલીગ્રામ/એલ. નાહકો3,50 એમ. એમ. ઓ. એલ./એલ. એચ. ઇ. પી. ઇ. એસ.) નું વિશ્લેષણ ઓછામાં ઓછું 160 એમ. એમ. એચ. જી. ઓ2 [7] નું સતત આંશિક દબાણ દર્શાવે છે. ઓક્સિજન સામગ્રીનું નિયમન એવું દર્શાવવામાં આવ્યું છે કે વધતા કોષો અને પેશીઓને ખૂબ જ વ્યક્તિગત ઓક્સિજન જરૂરિયાતો હોય છે. આ કારણોસર તે મહત્વનું છે કે ઓક્સિજનની સામગ્રીને વ્યક્તિગત પરફ્યુઝન કલ્ચર પ્રયોગોમાં અનુકૂલિત કરી શકાય. ટેકનિકલ ઉકેલ એ ગેસ ઇનલેટ અને આઉટલેટ ધરાવતું ગેસ એક્સ્ચેન્જર મોડ્યુલ છે (આકૃતિ. 6એ). આગળ મધ્યમ પરિવહન માટે લાંબી પાતળી દિવાલવાળી સિલિકોન ટ્યુબ સાથે સર્પાકાર મોડ્યુલની અંદર માઉન્ટ થયેલ છે. ટ્યુબ અત્યંત ગેસ-પારગમ્ય હોવાથી, તે ગેસ વિનિમય મોડ્યુલના સંવર્ધન માધ્યમ અને આંતરિક વાતાવરણ વચ્ચે વાયુઓના શ્રેષ્ઠ પ્રસરણની બાંયધરી આપે છે. પરિણામે, ઇચ્છિત વાયુ વાતાવરણને મોડ્યુલ દ્વારા ચોક્કસ વાયુ મિશ્રણના સતત પ્રવાહ દ્વારા સમાયોજિત કરી શકાય છે. આ રીતે ઓક્સિજન અથવા અન્ય કોઈપણ વાયુઓની સામગ્રીને પ્રસાર દ્વારા માધ્યમમાં નિયમન કરી શકાય છે. આ સરળ પ્રોટોકોલ લાગુ કરવાથી સંપૂર્ણપણે જંતુરહિત પરિસ્થિતિઓમાં લાંબા ગાળાના સંવર્ધન પ્રયોગો દરમિયાન પરિવહન માધ્યમની અંદર ઓક્સિજનના આંશિક દબાણને ઘટાડવાનું શક્ય બન્યું [7]. હાનિકારક વાયુ પરપોટાનું નાબૂદી પરફ્યુઝન સંવર્ધન પ્રયોગો કરતા હંમેશા એ ધ્યાનમાં લેવું જોઈએ કે સંવર્ધન માધ્યમના ધીમા પરિવહન દરમિયાન વાયુ પરપોટા રચાય છે. તેઓ સંગ્રહ બોટલમાં માધ્યમના સક્શન દરમિયાન, ટ્યુબની અંદર પરિવહન દરમિયાન, સંવર્ધન કન્ટેનરની અંદર વિતરણ દરમિયાન અને કચરાની બોટલના માર્ગમાં નાબૂદી દરમિયાન ઉત્પન્ન થાય છે. અજ્ઞાત કારણોસર ગેસ પરપોટા ખાસ કરીને ટ્યુબ, કનેક્ટર્સ અને પરફ્યુઝન કન્ટેનર વચ્ચેના ભૌતિક સંક્રમણોમાં એકઠા થાય છે. પ્રથમ આ વાયુ પરપોટા એટલા નાના હોય છે કે તેમને માનવ આંખથી જોઈ શકાતા નથી, પરંતુ સંવર્ધન માધ્યમના ચાલુ પરિવહન દરમિયાન તેઓ કદમાં વધારો કરે છે અને એક એમ્બોલસ રચવામાં સક્ષમ હોય છે જે મધ્યમ પ્રવાહને મોટા પ્રમાણમાં અવરોધે છે. કલ્ચર કન્ટેનરની અંદર ગેસ પરપોટા મધ્યમ પુરવઠાની પ્રાદેશિક અછત તરફ દોરી જાય છે અને પ્રવાહીના સાતત્યમાં વિરામનું કારણ બને છે જેથી મોટા પ્રમાણમાં પ્રવાહીના દબાણમાં ફેરફાર થાય છે. ગ્રેડિયન્ટ પરફ્યુઝન કલ્ચર કન્ટેનરમાં, જ્યાં બે માધ્યમોનું બરાબર સમાન ઝડપે પરિવહન થાય છે, એમ્બોલિક અસરો દબાણના તફાવતો તરફ દોરી શકે છે જે બદલામાં સમાયેલ ઉપકલા અવરોધ [5,9] નો નાશ કરે છે. પરફ્યુઝન કલ્ચર પ્રયોગમાં વાયુ પરપોટાની સાંદ્રતાને ટાળવા માટે, વાયુ વિસ્તરણ મોડ્યુલ વિકસાવવામાં આવ્યું હતું (આકૃતિ. 6 બી). આ મોડ્યુલ પરિવહન દરમિયાન માધ્યમમાંથી ગેસ પરપોટાને દૂર કરે છે. જ્યારે માધ્યમ ગેસ વિસ્તરણ મોડ્યુલમાં પ્રવેશ કરે છે, ત્યારે તે નાના જળાશયની અંદર વધે છે અને અવરોધ નીચે પડે તે પહેલાં વિસ્તરે છે. આ પ્રક્રિયા દરમિયાન ગેસ પરપોટાને ગેસ વિસ્તરણ મોડ્યુલની ટોચ પરના માધ્યમથી અલગ કરવામાં આવે છે. પરિણામે, કન્ટેનરમાંથી બહાર નીકળતું માધ્યમ ઓક્સિજન-સંતૃપ્ત હોય છે પરંતુ ગેસ પરપોટાથી મુક્ત હોય છે [8,9]. એપ્લિકેશનોની વ્યાપક શ્રેણી છેલ્લા વર્ષોમાં માઇનશીટ પરફ્યુઝન કલ્ચર સિસ્ટમ સાથે સંકળાયેલા અસંખ્ય કાગળો પ્રકાશિત થયા હતા. વિશાળ વર્ણપટ દર્શાવે છે કે પેશી ઇજનેરી, બાયોમટેરિયલ સંશોધન અને અદ્યતન ફાર્માસ્યુટિકલ ડ્રગ ઝેરી પરીક્ષણમાં ઉપયોગમાં લેવાતી ઉત્તમ કોષ જૈવિક ગુણવત્તામાં વિશિષ્ટ પેશીઓ ઉત્પન્ન કરવા માટે મોડ્યુલર સિસ્ટમ લાગુ કરવામાં આવી હતી. આ એપ્લિકેશનોની સંપૂર્ણ સૂચિ ડેટા બેંક 'પ્રોસિડિંગ્સ ઇન પરફ્યુઝન કલ્ચર' માં જોવા મળે છે ('બાહ્ય કડીઓ' જુઓ). જેમ કે અસંખ્ય પેટન્ટ દ્વારા દર્શાવવામાં આવ્યું છે (DE 39 23 279, DE 42 00 446, DE 42 08 805, DE 44 43 902, DE 19530 556, DE 196 48 876 C2, DE 199 52 847 B4, US 5 190 878, US 5 316 945, US 5 665 599, J 2847669, DE 10 2005002 938, PA 10 2004 054 125.6, PA 10 2005001 747.9, પેટન્ટ બાકી છે) વિલ ડબલ્યુ. મિનુથે પ્રસ્તુત માઇનશીટ પરફ્યુઝન કલ્ચર સિસ્ટમની શોધ કરી છે. છેલ્લા વર્ષોમાં લુસિયા ડેન્ક અને વિલ ડબ્લ્યુ. મિનુથ દ્વારા માઇનશીટ પરફ્યુઝન કલ્ચર સિસ્ટમ સાથે અસંખ્ય પાયલોટ પ્રયોગો કરવામાં આવ્યા હતા. પ્રાયોગિક કાર્ય હાલમાં ઇજાગ્રસ્ત રેનલ પેરેન્કાઇમાને સુધારવા માટે કૃત્રિમ પોલિએસ્ટર ઇન્ટરસ્ટિટિયમ બનાવવા પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કરી રહ્યું છે. 1992માં જર્મનીના મ્યુનિકમાં માઇનશીટ પરફ્યુઝન કલ્ચર સિસ્ટમને ફિલિપ મોરિસ રિસર્ચ એવોર્ડ 'ચેલેન્જ ઓફ ધ ફ્યુચર' મળ્યો હતો. હેનરી કિસિંજર, હંસ જોઆચિમ ફ્રેડરિક અને પોલ મુલર દ્વારા આ પુરસ્કાર એનાયત કરવામાં આવ્યો હતો. બજારમાં માઇનશીટ પરફ્યુઝન કલ્ચર સિસ્ટમ રજૂ કરવા માટે, કેથરિન લોરેન્ઝ-મિનુથે બિન-નફાકારક લક્ષી મિન્યુસેલ્સ અને મિનિટિસ્યુ વર્ટ્રીબ્સ જીએમબીએચ (ડી-93077 બેડ અબાચ/જર્મની) ની સ્થાપના કરી હતી. બાહ્ય કડીઓ પરફ્યુઝન સંસ્કૃતિમાં કાર્યવાહી ફિલિપ મોરિસ સ્ટિફ્ટંગ માઇનશીટ વેબસાઇટ સંદર્ભો 1. એલાઉટ જી, હેન્કેન્સ ટી, પેપેલ્યુ પી, સ્નાઇકર્સ એસ, વિંકન એમ, વાનહેકે ટી, રોજિયર્સ વી (2006) અલગ હેપેટોસાઇટ્સ અને તેમની સંસ્કૃતિઓની અવકલન પ્રક્રિયામાં અંતર્ગત મોલેક્યુલર મિકેનિઝમ્સ. કર્ર ડ્રગ મેટાબ 7 (6): 629-60. 2. શુહ ઇ, હોફમેન એસ, સ્ટોક કે, નોટબોહમ એચ, મુલર આર, રોટર એન (2011) 3D માં કોન્ડ્રોસાઇટ રિડિફરેન્શિયેશનઃ સંલગ્નતા સાઇટની ઘનતા અને સબસ્ટ્રેટ સ્થિતિસ્થાપકતાની અસર. જે બાયોમેડ મેટર રેસ એઃ ડીઓઆઈ 10.1002/jbm.a.33226. 3. ઝાંગ વાય, લી ટી. એસ., લી એસ. ટી., વાવરોવસ્કી કે. એ., ચેંગ કે., ગાલાંગ જી., મલ્લિયારસ કે., અબ્રાહમ એમ. આર., વાંગ સી., માર્બન ઇ. (2010) સસ્તન કેડિઓમાયોસાઇટ્સનું અવમૂલ્યન અને પ્રસાર 2010 પીએલઓએસ વન 5 (9): ઇ12559. 4. લિયુ વાય, જિઆંગ એક્સ, યુ એમ. કે., ડોંગ જે., ઝાંગ એક્સ, ત્સાંગ એલ. એલ., ચુંગ વાય. ડબલ્યુ., લી. ટી., ચાન એચ. સી. (2010) અસ્થિ મજ્જા-વ્યુત્પન્ન ચેતાકોષોમાંથી ડિડિફરેન્શિયેશન અને ટ્રાન્સલિનેજ રિડિફરેન્શિયેશન દ્વારા ઉપકલા કોષોમાં ફેરવવું. સેલ બાયોલ ઇન્ટ 34 (11): 1075-83. 5. મિનથ ડબલ્યુડબલ્યુ અને ડેન્ક એલ 2011 એડહેર્ન્ટ કોશિકાઓ સાથે એડવાન્સ્ડ કલ્ચર પ્રયોગો. પરફ્યુઝન કલ્ચરમાં એકલ કોષોથી લઈને વિશિષ્ટ પેશીઓ સુધી. ISBN Nr. 978-3-88246-330-9, http://epub.uni-regensburg.de/21484 6. મિનુથ ડબ્લ્યુડબ્લ્યુ, ડેન્ક એલ, ગ્લેશાઉઝર એ 2010 બહુવિધ વિશિષ્ટ પેશીઓની પેઢી માટે મોડ્યુલર કલ્ચર સિસ્ટમ. બાયોમટેરિયલ્સ 31:2945-2954. 7. સ્ટ્રેહલ આર, શુમાકર કે, મિનુથ ડબ્લ્યુડબ્લ્યુ 2004 પરફ્યુઝન કલ્ચરમાં ગર્ભના મૂત્રપિંડના સંશોધકોને નિયંત્રિત શ્વસન ગેસ વિતરણ. ટીશ્યુ એન્ગ 10 (7-8): 1196-203. 8. મિનથ ડબ્લ્યુડબ્લ્યુ, સ્ટ્રેહલ આર, શુમાકર કે 2004 ટીશ્યુ ફેક્ટરીઃ કાર્યાત્મક પેશીઓની ઈન વિટ્રો પેઢી માટે મોડ્યુલર સિસ્ટમની વૈચારિક રચના. ટીશ્યુ એન્જી 10:285-294. 9. મિનથ ડબ્લ્યુડબ્લ્યુ, ડેન્ક એલ, રોઝર એ 2009 ગ્રેડિયન્ટ પરફ્યુઝન કલ્ચર-બાયોમેડિસિનમાં એપિથેલિયા માટે પેશી-વિશિષ્ટ વાતાવરણનું અનુકરણ. જે. એપિથેલિયલ બાયોલોજી એન્ડ ફાર્માકોલોજી 2:1-13. બાયોમટેરિયલ્સ બાયોમેડિસિન સેલ કલ્ચર મોલેક્યુલર બાયોલોજી તકનીકો