Endospore staining
એન્ડોસ્પોર સ્ટેનિંગ એ બેક્ટેરિયાના નમૂનામાં એન્ડોસ્પોર્સની હાજરીને ઓળખવા માટે બેક્ટેરિયોલોજીમાં ઉપયોગમાં લેવાતી એક તકનીક છે. બેક્ટેરિયાની અંદર, એન્ડોસ્પોર્સ એ રક્ષણાત્મક માળખાં છે જેનો ઉપયોગ આત્યંતિક પરિસ્થિતિઓમાં ટકી રહેવા માટે થાય છે, જેમાં ઊંચા તાપમાનનો સમાવેશ થાય છે, જે તેમને રસાયણો માટે અત્યંત પ્રતિરોધક બનાવે છે. એન્ડોસ્પોર્સમાં બહુ ઓછું અથવા કોઈ ATP નથી જે સૂચવે છે કે તેઓ કેટલા નિષ્ક્રિય હોઈ શકે છે. એન્ડોસ્પોર્સમાં કેરાટિનનું બનેલું સખત બાહ્ય આવરણ હોય છે જે તેમને ન્યુક્લીક ડીએનએ તેમજ અન્ય અનુકૂલનથી રક્ષણ આપે છે. એન્ડોસ્પોર્સ વનસ્પતિ કોષોમાં પુનઃજનન કરવામાં સક્ષમ છે, જે એક રક્ષણાત્મક પ્રકૃતિ પ્રદાન કરે છે જે તેમને સરળ સ્ટેનિંગ અને ગ્રામ સ્ટેનિંગ જેવી સામાન્ય તકનીકોનો ઉપયોગ કરીને ડાઘ પાડવાનું મુશ્કેલ બનાવે છે. એન્ડોસ્પોર સ્ટેનિંગ માટેની વિશેષ તકનીકોમાં શેફર-ફુલ્ટન સ્ટેન અને મોએલર સ્ટેનનો સમાવેશ થાય છે. ઈતિહાસ એન્ડોસ્પોર્સનો સૌપ્રથમ અભ્યાસ 1876માં વૈજ્ઞાનિકો કોહ્ન અને કોચ દ્વારા કરવામાં આવ્યો હતો. એવું જાણવા મળ્યું હતું કે મિથાઇલીન બ્લુ, સેફ્રનિન અને કાર્બોલ ફ્યુચિન જેવા સરળ સ્ટેનનો ઉપયોગ કરીને એન્ડોસ્પોર્સને રંગીન કરી શકાતા નથી. આ વૈજ્ઞાનિકોએ અન્ય કેટલાક લોકો સાથે મળીને શોધ્યું કે બીજકણ નિષ્ક્રિય અને ગરમી સામે પ્રતિરોધક છે. 1900ના દાયકાની શરૂઆતમાં, સંશોધકો આ એન્ડોસ્પોર્સમાંથી રોગ અને ચેપને સુધારવા માટે વૈકલ્પિક પદ્ધતિઓ શોધવાનો પ્રયાસ કરી રહ્યા હતા. 1922માં, ડોર્નરે એન્ડોસ્પોર્સને ડાઘવા માટેની એક પદ્ધતિ પ્રકાશિત કરી. તેમણે એક વિભેદક સ્ટેનિંગ તકનીક શોધી કાઢી જ્યાં એન્ડોસ્પોર્સ લીલા દેખાય છે અને વનસ્પતિ કોષો ગુલાબી લાલ દેખાય છે. ડોર્નરે પ્રક્રિયામાં એક પગલા તરીકે ગરમીનો ઉપયોગ કર્યો હતો, પરંતુ તે સમય માંગી લેતી હતી, તેથી 1933 માં, શેફર અને ફુલ્ટને તેમની પદ્ધતિમાં ફેરફાર કર્યો. શેફર અને ફુલ્ટને બન્સન બર્નરનો ઉપયોગ કરીને ગરમીની પ્રક્રિયાને ઘણી ઝડપી બનાવી હતી. આ પદ્ધતિ સૌથી વધુ ફાયદાકારક ન હોવા છતાં, તે ડોર્નરની પદ્ધતિ કરતાં ઘણી વધુ અનુકૂળ હતી. આ સુધારેલી પદ્ધતિએ ઝડપી અને સરળ પરીક્ષણ પૂરું પાડ્યું હતું અને બીજકણને રંગો માટે વધુ સંવેદનશીલ બનાવવાની મંજૂરી આપી હતી. આજ સુધી, શેફર-ફુલ્ટન ડાઘ હજુ પણ બેક્ટેરિયાને ઓળખવામાં મદદ કરવા માટે કરવામાં આવે છે. ઉદાહરણો એન્ડોસ્પોર્સ ઘણી સખત પરિસ્થિતિઓમાં દાયકાઓ સુધી ટકી શકે છે, જેમ કે સૂકવણી અને ઠંડું. આનું કારણ એ છે કે એન્ડોસ્પોરની અંદરનું ડીએનએ લાંબા સમય સુધી ટકી રહેવા માટે સક્ષમ છે. મોટાભાગના બેક્ટેરિયા તેમના ઉચ્ચ પ્રતિકારને કારણે એન્ડોસ્પોર્સ રચવામાં અસમર્થ હોય છે, પરંતુ કેટલીક સામાન્ય પ્રજાતિઓ જાતિ બેસિલસ (100 થી વધુ પ્રજાતિઓ) અને ક્લોસ્ટ્રિડિયમ (160 થી વધુ પ્રજાતિઓ) છે. - બેસિલસ એન્થ્રેસીસ, જે એન્થ્રેક્સનું કારણ બને છે-બેસિલસ સેરિયસ-બે પ્રકારના ખોરાકના ઝેરનું કારણ બની શકે છેઃ ઇમેટિક અને ઝાડા-બેસિલસ સબટિલિસ-જે જમીનમાં જોવા મળે છે-ક્લોસ્ટ્રિડિયમ ટેટાની,-બીજકણ જે તાળું જડબાં (ટિટાનસ) અને કઠોર લકવાનું કારણ બને છે. ક્લોસ્ટ્રિડિયમ બોટ્યુલિનમ-એવા ખોરાકમાં બીજકણ જોવા મળે છે જેને યોગ્ય રીતે તૈયાર કરવામાં આવ્યા નથી. ક્લોસ્ટ્રિડિયમ બોટ્યુલિનમને કેટલીકવાર બોટોક્સ તરીકે વેચવામાં આવે છે અને ચેતા સંક્રમણને અટકાવે છે. - ક્લોસ્ટ્રિડિયમ ડિફિસાઇલ-મોટા ભાગે અન્ય એન્ટિબાયોટિક્સથી આંતરડામાં બળતરા થાય છે. લક્ષણોમાં ઝાડા, પેટમાં દુખાવો અને તાવનો સમાવેશ થાય છે. આકાર અને સ્થાન એન્ડોસ્પોર્સના પ્રકારો કે જેને ઓળખી શકાય છે તેમાં મુક્ત એન્ડોસ્પોર્સ, કેન્દ્રીય એન્ડોસ્પોર્સ (કોષની મધ્યમાં), સબટર્મિનલ (કોષના અંત અને મધ્યમાં) અને અંતિમ (કોષના અંત) એન્ડોસ્પોર્સનો સમાવેશ થાય છે. ત્યાં ટર્મિનલ અથવા સબટર્મિનલનું સંયોજન પણ હોઈ શકે છે. એન્ડોસ્પોર્સને આકાર, ગોળાકાર અથવા લંબગોળ (અંડાકાર), કોષના સંબંધિત કદ અને તેઓ કોષને સોજો દેખાય છે કે નહીં તેના આધારે અલગ કરી શકાય છે. સ્ટેનિંગ મિકેનિઝમ શેફર-ફુલ્ટન સ્ટેનિંગ પદ્ધતિમાં, મેલાચાઇટ લીલો ધરાવતો પ્રાથમિક ડાઘ બેક્ટેરિયાને વરાળ આપીને બીજકણમાં દબાણ કરવામાં આવે છે. બીજકણને ડાઘવા માટે સ્લાઇડ પર 15 મિનિટ કે તેથી વધુ સમય માટે મેલાકાઇટ લીલો છોડી શકાય છે. બીજકણને તેમની ઘનતાને કારણે ડાઘ પડવામાં લાંબો સમય લાગે છે, તેથી આ વિભેદક ડાઘ કરતી વખતે ગરમી મોર્ડન્ટ તરીકે કામ કરે છે. મેલાકાઇટ લીલો પાણીમાં દ્રાવ્ય હોય છે તેથી વનસ્પતિ કોષો અને બીજકણ માતૃ કોષોને નિસ્યંદિત પાણીથી રંગહીન કરી શકાય છે અને 0.5 ટકા સેફ્રાનિન સાથે પ્રતિકાર કરી શકાય છે. અંતે, યોગ્ય સમીયર એન્ડોસ્પોરને લાલ અથવા ગુલાબી રંગના કોષની અંદર લીલા બિંદુ તરીકે બતાવશે. માયકોબેક્ટેરિયમ એ એક અવરોધ છે જે આ પ્રકારની સ્ટેનિંગ પ્રક્રિયાનો સામનો કરે છે કારણ કે તે કોઈપણ એન્ડોસ્પોર્સ ઉત્પન્ન કરતું નથી તેમ છતાં તે હજુ પણ લીલા રંગનો ડાઘ કરશે. આ તેની મીણની કોષ દિવાલને કારણે છે જે ડીકલોરાઇઝિંગ પ્રક્રિયા પછી પણ મેલાચાઇટ લીલો રંગ જાળવી રાખે છે. આ ચોક્કસ પ્રકારના બેક્ટેરિયમ વિશે વધુ માહિતી મેળવવા માટે એસિડ-ફાસ્ટ સ્ટેન તરીકે ઓળખાતા એક અલગ પ્રકારના સ્ટેનિંગ કરવા પડશે. સ્ટેનિંગ પ્રક્રિયા એસેપ્ટિક તકનીકનો ઉપયોગ કરીને, ઇચ્છિત જીવતંત્ર સાથે સ્થિર સ્લાઇડ તૈયાર કરો અને હવામાં સૂકવો. ઉકળતા પાણીનું સ્નાન તૈયાર કરો. કાગળના ટુવાલના ટુકડાથી સ્લાઇડને ઢાંકી દો અને પાણીના સ્નાન ઉપર સ્ટેનિંગ રેક પર મૂકો. સ્લાઇડ પર કાગળના ટુવાલમાં મલાકાઇટ ગ્રીન (પ્રાથમિક ડાઘ) ભરી દો. સ્લાઇડને 5 થી 7 મિનિટ (મોર્ડન્ટ) માટે વરાળ આપો. સમય પૂરો થયા પછી, ફોર્સેપ્સનો ઉપયોગ કરીને પાણીના સ્નાનમાંથી સ્લાઇડને કાળજીપૂર્વક દૂર કરો. પેપરટૉવેલ દૂર કરો. સ્લાઇડને ઠંડી થવા દો, અને પછી સ્ટેનિંગ રેક પર ફોર્સેપ્સનો ઉપયોગ કરીને, જ્યાં સુધી પ્રવાહ સ્પષ્ટ ન થાય ત્યાં સુધી નિસ્યંદિત પાણીથી નરમાશથી કોગળા કરો (ડીકોલોરાઇઝર). કોઈપણ વધારાનું પાણી રેડવું અને એક મિનિટ માટે સેફ્રનિન (કાઉન્ટરસ્ટેઇન) સાથે સ્ટેનિંગ રેક અને ફ્લડ પર સ્લાઇડ મૂકો. નિસ્યંદિત પાણીથી હળવેથી કોઈપણ વધારાનું સેફ્રાનિન ધોઈ નાખો અને કાળજીપૂર્વક બંને બાજુઓ સૂકવી દો. જ્યારે સ્લાઇડ સૂકી હોય, ત્યારે ઓઇલ ઇમર્શન ઓબ્જેક્ટિવ (100X) હેઠળ માઇક્રોસ્કોપ હેઠળ સ્લાઇડ જુઓ. સંદર્ભ સ્ટેનિંગ માઇક્રોબાયોલોજી તકનીકો બેક્ટેરિયોલોજી માઇક્રોસ્કોપી