Miles and Misra method
માઇલ્સ અને મિશ્રા પદ્ધતિ (અથવા સપાટી વ્યવહાર્ય ગણતરી) એ સૂક્ષ્મજીવવિજ્ઞાનમાં બેક્ટેરિયલ સસ્પેન્શન અથવા હોમોજિનેટમાં વસાહત બનાવતા એકમોની સંખ્યા નક્કી કરવા માટે ઉપયોગમાં લેવાતી એક તકનીક છે. આ તકનીકનું વર્ણન સૌપ્રથમ 1938માં માઇલ્સ, મિશ્રા અને ઇરવિન દ્વારા કરવામાં આવ્યું હતું, જેઓ તે સમયે એલએસએચટીએમમાં કામ કરતા હતા. માઇલ્સ અને મિશ્રા પદ્ધતિ ચોક્કસ હોવાનું દર્શાવવામાં આવ્યું છે. સામગ્રી કેલિબ્રેટેડ ડ્રોપિંગ પાઇપેટ અથવા ઓટોમેટિક પાઇપેટ, જે 20મિ. લી. ના ટીપાં પહોંચાડે છે. પોષક અગર અથવા અન્ય યોગ્ય માધ્યમ ધરાવતી પેટ્રી વાનગીઓ. ફોસ્ફેટ બફર્ડ સેલાઇન (પીબીએસ) અથવા અન્ય યોગ્ય મંદન. બેક્ટેરિયલ સસ્પેન્શન અથવા હોમોજિનેટ. પદ્ધતિ ઇનોક્યુલમ/સસ્પેન્શનને 9x મંદકમાં 1x સસ્પેન્શન ઉમેરીને ક્રમિક રીતે પાતળું કરવામાં આવે છે. જ્યારે બેક્ટેરિયાનું પ્રમાણ અજ્ઞાત હોય, ત્યારે ઓછામાં ઓછું 10−8 સુધી મંદન કરવું જોઈએ. દરેક મંદન શ્રેણી માટે ત્રણ પ્લેટની જરૂર પડે છે, આંકડાકીય કારણોસર સરેરાશ ઓછામાં ઓછી 3 ગણતરીની જરૂર પડે છે. પ્લેટની સપાટી પૂરતી સૂકી હોવી જરૂરી છે જેથી 20મિ. લી. ડ્રોપને 15-20 મિનિટમાં શોષી શકાય. પ્લેટ્સને સમાન ક્ષેત્રોમાં વહેંચવામાં આવે છે (પ્લેટ દીઠ 8 સુધીનો ઉપયોગ કરવો શક્ય છે). આ ક્ષેત્રોને ડાયલ્યુશન સાથે લેબલ કરવામાં આવે છે. દરેક ક્ષેત્રમાં, 1 x 20 માઇક્રોલ યોગ્ય મંદન અગરની સપાટી પર ફેંકવામાં આવે છે અને ડ્રોપને કુદરતી રીતે ફેલાવા દેવામાં આવે છે. પદ્ધતિના મૂળ વર્ણનમાં 2.5 સે. મી. ની ઊંચાઈથી એક ડ્રોપ 1.5-2.0 સે. મી. ના વિસ્તારમાં ફેલાયેલું છે. અગરની સપાટીને પિપેટથી સ્પર્શ કરવાનું ટાળવું મહત્વપૂર્ણ છે. 18-24 કલાક માટે 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર ઊષ્માયન અને ઊષ્માયન પહેલાં સૂકવવા માટે પ્લેટને બેન્ચ પર સીધા છોડી દેવામાં આવે છે (અથવા ઉપયોગમાં લેવાતા જીવતંત્ર અને અગરને ધ્યાનમાં રાખીને યોગ્ય ઊષ્માયન પરિસ્થિતિઓ). દરેક ક્ષેત્રની વૃદ્ધિ માટે અવલોકન કરવામાં આવે છે, ઉચ્ચ સાંદ્રતા ઘટાડાના વિસ્તાર અથવા મોટી સંખ્યામાં નાની/મર્જ થયેલી વસાહતો પર સમૃદ્ધ વૃદ્ધિ આપશે. વસાહતોની ગણતરી તે ક્ષેત્રમાં કરવામાં આવે છે જ્યાં સૌથી વધુ સંખ્યામાં સંપૂર્ણ કદની અલગ વસાહતો જોઈ શકાય છે (સામાન્ય રીતે 2-20 વસાહતો વચ્ચેના ક્ષેત્રોની ગણતરી કરવામાં આવે છે). નીચેના સમીકરણનો ઉપયોગ મૂળ એલિકોટ/નમૂનામાંથી મિલી દીઠ વસાહત બનાવતા એકમો (સી. એફ. યુ.) ની સંખ્યાની ગણતરી કરવા માટે થાય છેઃ મિલી દીઠ સી. એફ. યુ. = મંદન x 50 x મંદન પરિબળ માટે વસાહતોની સરેરાશ સંખ્યા. ફાયદા અન્ય પદ્ધતિઓ કરતાં ઝડપી છે. કાર્યરત સપાટીનું ઓછું બેક્ટેરિયલ દૂષણ ઉત્પન્ન કરે છે. કોલોની બનાવતી એકમ સંદર્ભો કોષ સંવર્ધન તકનીકો માઇક્રોબાયોલોજી તકનીકો પણ જુઓ.