FLP-FRT recombination
આનુવંશિકતામાં, એફ. એલ. પી.-એફ. આર. ટી. પુનઃસંયોજન એ સ્થળ-નિર્દેશિત પુનઃસંયોજન તકનીક છે, જેનો ઉપયોગ વિવોમાં નિયંત્રિત પરિસ્થિતિઓમાં જીવતંત્રના ડી. એન. એ. માં હેરફેર કરવા માટે વધુને વધુ થાય છે. તે ક્રે-લોક્સ પુનઃસંયોજન જેવું જ છે પરંતુ તેમાં બેકરના યીસ્ટ સૅકરોમાઇસીસ સેરેવિસિયાના 2 માઇક્રોન પ્લાઝમિડમાંથી મેળવેલા પુનઃસંયોજન ફ્લિપેઝ (એફ. એલ. પી.) દ્વારા ટૂંકા ફ્લિપેઝ ઓળખ લક્ષ્ય (એફ. આર. ટી.) સાઇટ્સ વચ્ચેના અનુક્રમોનું પુનઃસંયોજન સામેલ છે. 34 બી. પી. ન્યૂનતમ એફ. આર. ટી. સાઇટ ક્રમમાં 5 '3' ક્રમ હોય છે, જેના માટે ફ્લિપેઝ (એફ. એલ. પી.) બંને 13-બી. પી. 5 '-જી. એ. એ. જી. ટી. ટી. સી. ટી. ટી. સી.-3' હથિયારો સાથે જોડાય છે, જે 8 બી. પી. સ્પેસરની બાજુમાં હોય છે, એટલે કે. વિપરીત દિશામાં સ્થળ-વિશિષ્ટ પુનઃસંયોજન (ક્રોસઓવરનો પ્રદેશ). એફ. આર. ટી.-મધ્યસ્થ ક્લેવેજ અસમપ્રમાણતાવાળા 8 બી. પી. કોર પ્રદેશ (5 '3') થી ઉપરના સ્ટ્રાન્ડ પર અને નીચેની સ્ટ્રાન્ડ પર આ ક્રમની પાછળ થાય છે. કેટલાક પ્રકારનાં એફ. આર. ટી. સ્થળો અસ્તિત્વ ધરાવે છે, પરંતુ પુનઃસંયોજન સામાન્ય રીતે માત્ર બે સમાન એફ. આર. ટી. વચ્ચે જ થઈ શકે છે પરંતુ સામાન્ય રીતે બિન-સમાન ("હેટેરોસ્પેસિફિક") એફ. આર. ટી. વચ્ચે નહીં. જૈવિક કાર્ય યીસ્ટમાં, આ એન્ઝાઇમ દુર્લભ ખોટી વિભાજન ઘટનાઓને કારણે 2 માઇક્રોન પ્લાઝમિડ કોપી નંબરમાં ઘટે છે. તે ડીએનએ પ્રતિકૃતિ દરમિયાન 2 માઇક્રોન પ્લાઝમિડ પર બે ઊંધી પુનરાવર્તનો વચ્ચે પુનઃસંયોજન કરીને આમ કરે છે. આ એક પ્રતિકૃતિ કાંટાની દિશામાં ફેરફાર કરે છે, જે એક જ આરંભમાં નકલ કરવાના બહુવિધ રાઉન્ડનું કારણ બને છે. એફ. આર. ટી. સાઇટ ક્રમ સેનેકોફ એટ અલના પરિવર્તન. (1987) એ તપાસ કરી કે એફ. આર. ટી. ની અંદર ન્યુક્લિયોટાઇડ અવેજીઓએ એફ. એલ. પી.-મધ્યસ્થ પુનઃસંયોજનની અસરકારકતાને કેવી રીતે અસર કરી. લેખકોએ એક અથવા બંને એફ. આર. ટી. સાઇટ્સમાં બેઝ અવેજીને પ્રેરિત કર્યા અને સાઇટ-વિશિષ્ટ પુનઃસંયોજનોનું નિરીક્ષણ કરવા માટે જરૂરી એફ. એલ. પી. ની સાંદ્રતાનું પરીક્ષણ કર્યું. દરેક આધાર અવેજી એફ. આર. ટી. સ્થળની અંદર તેર ન્યુક્લિયોટાઇડ્સમાંથી દરેક પર કરવામાં આવી હતી (ઉદાહરણ તરીકે જી થી એ, ટી અને સી). પ્રથમ, લેખકોએ દર્શાવ્યું હતું કે એફ. આર. ટી. ક્રમમાં મોટાભાગના પરિવર્તનો જો બે સાઇટ્સમાંથી માત્ર એકમાં હાજર હોય તો ન્યૂનતમ અસરો પેદા કરે છે. જો બંને સ્થળોમાં પરિવર્તન થાય છે, તો એફએલપીની કાર્યક્ષમતામાં નાટ્યાત્મક ઘટાડો થાય છે. બીજું, લેખકોએ માહિતી પૂરી પાડી કે જેના માટે ન્યુક્લિઓટાઇડ્સ એફએલપીના બંધન અને સ્થળ-વિશિષ્ટ પુનઃસંયોજનની અસરકારકતા માટે સૌથી નિર્ણાયક છે. જો બંને એફ. આર. ટી. સ્થળોમાં પ્રથમ ન્યુક્લિયોટાઇડને સાયટોસિન (જી થી સી) માં બદલવામાં આવે, તો ત્રીજા ન્યુક્લિયોટાઇડને થાઇમિન (એ થી ટી) માટે બદલવામાં આવે, અથવા સાતમા ન્યુક્લિયોટાઇડને એડેનોસિન (જી થી એ) માટે બદલવામાં આવે, તો પછી એફ. એલ. પી.-મધ્યસ્થી સાઇટ-વિશિષ્ટ પુનઃસંયોજનની અસરકારકતા 100 ગણાથી વધુ ઘટી જાય છે. જ્યારે એફ. આર. ટી. સાઇટ્સમાંથી માત્ર એકમાં ઉપરોક્ત કોઈપણ ન્યુક્લિયોટાઇડ્સના બેઝ અવેજીને કારણે અસરકારકતામાં અનુક્રમે દસ ગણો, દસ ગણો અને પાંચ ગણો ઘટાડો થયો. કેપિટલાઇઝ્ડ ન્યુક્લિયોટાઇડ્સમાં બેઝ સબસ્ટિટ્યુશનને કારણે એફએલપી-મધ્યસ્થી સાઇટ-વિશિષ્ટ પુનઃસંયોજનમાં સૌથી મોટો ઘટાડો થયો (વાઇલ્ડટાઇપ x મ્યુટન્ટ અને મ્યુટન્ટ x મ્યુટન્ટ): 5 '3' ઘણી ઉપલબ્ધ રચનાઓમાં અપસ્ટ્રીમ તત્વથી દૂર અને તે જ દિશામાં વધારાની આર્મ સિક્વન્સ (5 '-3') એક બેઝ જોડીનો સમાવેશ થાય છેઃ 5 '3' આ સેગમેન્ટ એક્સસિશન માટે ડિસ્પેન્સેબલ છે પરંતુ એકીકરણ માટે જરૂરી છે, જેમાં રિકોમ્બિનેઝ-મધ્યસ્થી કેસેટ એક્સચેન્જનો સમાવેશ થાય છે. કારણ કે પુનઃસંયોજન પ્રવૃત્તિને પસંદ કરેલા અંગને લક્ષિત કરી શકાય છે, અથવા પુનઃસંયોજન પ્રવૃત્તિના નીચા સ્તરનો ઉપયોગ માત્ર કોષોના સબસેટના ડીએનએને સતત બદલવા માટે કરી શકાય છે, એફએલપી-એફઆરટીનો ઉપયોગ બહુકોશિક સજીવોમાં આનુવંશિક મોઝેઇક બનાવવા માટે થઈ શકે છે. આ તકનીકનો ઉપયોગ કરીને, જનીનની ખોટ અથવા ફેરફારનો અભ્યાસ રસના આપેલ લક્ષ્ય અંગમાં કરી શકાય છે, એવા કિસ્સાઓમાં પણ કે જ્યાં પ્રાયોગિક પ્રાણીઓ અન્ય અવયવોમાં આ જનીનની ખોટ (અવકાશી નિયંત્રણ) થી બચી શકશે નહીં. જનીનમાં ફેરફારની અસરનો સમય જતાં અભ્યાસ પણ કરી શકાય છે, વિકાસમાં મોડેથી પુનઃસંયોજન પ્રવૃત્તિને ટ્રિગર કરવા માટે ઇન્ડ્યુસિબલ પ્રમોટરનો ઉપયોગ કરીને (અસ્થાયી નિયંત્રણ)-આ ફેરફારને અટકાવે છે. એફએલપીનું બાયોકેમિકલ માળખું અને ક્રિયાના મિકેનિઝમ બાયોકેમિકલી સંબંધિત માળખું અને સક્રિય સાઇટ એફએલપી પ્રોટીન, ક્રીની જેમ, ટાયરોસિન ફેમિલી સાઇટ-વિશિષ્ટ રિકોમ્બિનેઝ છે. પુનઃસંયોજનનું આ કુટુંબ એક પ્રકારનાં આઇ. બી. ટોપોઆઇસોમરેઝ મિકેનિઝમ દ્વારા તેનું કાર્ય કરે છે, જે ડીએનએના બે અલગ અલગ સેરનું પુનઃસંયોજન કરે છે. પુનઃસંયોજન પુનરાવર્તિત બે-પગલાંની પ્રક્રિયા દ્વારા કરવામાં આવે છે. પ્રારંભિક પગલું હોલીડે જંક્શન મધ્યવર્તીની રચનાનું કારણ બને છે. બીજું પગલું બે પૂરક સેરના પરિણામી પુનઃસંયોજનને પ્રોત્સાહન આપે છે. તેમના કુટુંબનું નામ સૂચવે છે તેમ, અત્યંત સંરક્ષિત ટાયરોસિન ન્યુક્લિયોફાઇલ ડીએનએ સ્ટ્રેન્ડ્સને વિભાજિત કરે છે. ટાયરોસિનના ન્યુક્લિયોફિલિક ગુણધર્મો હુમલો કરે છે અને ડીએનએ ક્લેવેજના બિંદુ પર 3 '-ફોસ્ફેટ સાથે જોડાય છે. વિભાજીત ડીએનએનું પરિણામી 5 '-હાઇડ્રોક્સિલ જૂથ ન્યુક્લિયોફાઇલ તરીકે કાર્ય કરે છે અને પૂરક રીતે વિભાજીત ડીએનએ સ્ટ્રાન્ડ પર 3'-ફોસ્ફેટ પર હુમલો કરે છે, પરિણામે સફળ પુનઃસંયોજન થાય છે. ટાયરોસિન અવશેષની બહાર, એક સંરક્ષિત ઉત્પ્રેરક પેન્ટાડ હોય છે. આ પેન્ટાડ લાઇસિન (Lysβ), બે આર્જિનાઇન્સ (Arg I અને II), એક હિસ્ટિડીન (હિસ્-II) અને હિસ્ટિડીન/ટ્રિપ્ટોફન (હિસ્/ટ્રીપ-III) થી બનેલો છે, જેમાં એફએલપી અને ક્રીના સક્રિય સ્થળ (અન્ય આઈબી ટોપિયોસોમેરેસ સાથે) માટે અવશેષોના ફરજિયાત અને અત્યંત સંરક્ષિત નક્ષત્રનો સમાવેશ થાય છે. આ અન્ય અવશેષો એફ. એલ. પી. બંધનની યોગ્ય દિશા અને ડીએનએ સ્ટ્રેન્ડ્સ પર સ્થિતિ માટે નિર્ણાયક છે. એફએલપી-મધ્યસ્થી સાઇટ-વિશિષ્ટ પુનઃસંયોજનનો ઉપયોગ પ્રારંભિક સમસ્યાઓ થર્મોલેબિલિટી એફએલપી-એફઆરટી પુનઃસંયોજનનો પ્રારંભિક ઉપયોગ સસ્તન પ્રાણીઓમાં કામ કરતો ન હતો. એફએલપી પ્રોટીન થર્મોલેબિલ (ઊંચા તાપમાને વિકૃત) હતું અને તેથી આ મોડેલ પ્રણાલીઓના શરીરના ઊંચા તાપમાનને કારણે સસ્તન પ્રાણીઓના મોડેલમાં ઉપયોગી નહોતું. જો કે, પેટન્ટ અને ક્રે-લોક્સ પુનઃસંયોજનના ઉપયોગ પરના પ્રતિબંધોને કારણે, વધુ થર્મોસ્ટેબલ એફએલપી-એફઆરટી કેસેટ બનાવવા માટે ખૂબ રસ લેવામાં આવ્યો હતો. કેટલાક પ્રથમ પરિણામો બુચોલ્ઝ એટ અલ દ્વારા તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા. (1997) એસ્ચેરીચીયા કોલીમાં સાયકલિંગ મ્યુટેજેનેસિસનો ઉપયોગ કરીને. તેમના સંશોધનમાં, લેખકોએ ઇ. કોલી કોષોને બે પ્લાઝમિડ સાથે સંક્રમિત કર્યાઃ એક અરેબિનોઝ પ્રમોટરના ડાઉનસ્ટ્રીમમાં રેન્ડમલી મ્યુટેટેડ એફએલપી પ્રોટીન માટે કોડિંગ અને બીજું એફઆરટી કેસેટમાં એલએસીઝેડ જનીન પ્રમોટર ધરાવે છે. ઇ. કોલીને અરેબિનોઝ પ્લેટ પર 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસ અને 40 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર ઉગાડવામાં આવતું હતું, અને જો પુનઃસંયોજન થાય, તો એલ. એ. સી. ઝેડ. અભિવ્યક્તિ ક્ષીણ થઈ જશે, અને વસાહતો સફેદ દેખાશે. દરેક પેઢીમાંથી સફેદ વસાહતો પસંદ કરવામાં આવી હતી અને આઠ પેઢીઓ સુધી સમાન અગાઉના તાપમાને નવી અરેબિનોઝ પ્લેટ પર ઉગાડવામાં આવી હતી. વેસ્ટર્ન-બ્લોટિંગ દ્વારા પુનઃસંયોજનની પુષ્ટિ થયા પછી અને ઉત્પરિવર્તિત એફએલપી જનીનોને અનુક્રમિત કર્યા પછી, આ આઠમી પેઢીના એફએલપી પ્રોટીન (એફએલપીઈ) ને સસ્તન પ્રાણીઓના કોષ સંવર્ધનમાં સંક્રમિત કરવામાં આવ્યું હતું, અને સસ્તન પ્રાણીઓના કોષોમાં પુનઃસંયોજનની પુષ્ટિ કરવામાં આવી હતી. એફએલપીના આ પ્રકારમાં માત્ર 4 એમિનો એસિડ અવેજી છેઃ પી2એસ, એલ33એસ, વાય108એન અને એસ294પી. આનુવંશિક મોઝેઇકનું સર્જન આનુવંશિક મોઝેઇકવાદ એક જીવતંત્રની અંદર થાય છે જ્યારે સમાન કોષ પ્રકારો ચોક્કસ સ્થાન પર ભિન્ન જીનોટાઇપ્સને કારણે વિવિધ ફેનોટાઇપ્સને વ્યક્ત કરે છે. સરળ શબ્દોમાં કહીએ તો, આ ત્યારે થાય છે જ્યારે એક જીવતંત્રમાં વિવિધ જીનોટાઇપ હોય છે, જે સામાન્ય રીતે પ્રકૃતિમાં દુર્લભ હોય છે. જો કે, આ એફએલપી-એફઆરટી પુનઃસંયોજનનો ઉપયોગ કરીને સરળતાથી (અને સમસ્યાત્મક રીતે) ઉત્પન્ન કરી શકાય છે. જો કોષની અંદર બે અલગ-અલગ એફ. આર. ટી. સાઇટ્સ હાજર હોય અને એફ. એલ. પી. યોગ્ય સાંદ્રતામાં હાજર હોય, તો એફ. આર. ટી. કેસેટને બે એફ. આર. ટી. સાઇટ્સ વચ્ચે હટાવવાનું અને દાખલ કરવાનું ચાલુ રહેશે. આ પ્રક્રિયા ત્યાં સુધી ચાલુ રહેશે જ્યાં સુધી એફએલપી પ્રોટીન જરૂરી સાંદ્રતાથી નીચે ન આવે, પરિણામે જીવતંત્રની અંદર વિવિધ જીનોટાઇપ ધરાવતા કોષો બને છે. આ ફળની માખીઓથી ઉંદર સુધી જોવામાં આવ્યું છે અને તે ચોક્કસ રંગસૂત્રો (શારીરિક અને જાતિ) અથવા કોષ પ્રકારો (શારીરિક અને જર્મલાઇન) સામે અંધાધૂંધ છે. ડાયમેકી એટ અલના પ્રકાશન પહેલાં કોષ વંશોનું નિર્ધારણ. (1998), ક્રી રિકોમ્બિનેઝનો ઉપયોગ એન2 પ્રમોટરનો ઉપયોગ કરીને ઉંદરમાં ન્યુરોનલ પ્રોજેનિટર્સના સેલ-ફેટ મેપિંગ માટે કરવામાં આવ્યો હતો. આમ, ડાયમેકી એટ અલના લેખકો. (1998) એ સિદ્ધાંત આપ્યો કે એફએલપી રિકોમ્બિનેઝનો ઉપયોગ ઉંદરમાં ક્રી રિકોમ્બિનેઝ જેવી જ અસરકારકતા સાથે સમાન રીતે થઈ શકે છે. લેખકોએ બે ટ્રાન્સજેનિક માઉસ રેખાઓ બનાવીઃ એક ન્યુરોનલ ડબલ્યુ. એન. ટી. 1:: એફ. એલ. પી. ફ્યુઝન રેખા અને એક રેખા જેમાં ટી. એમ. 1સી. ડબલ્યુ. આર. ના 18મા એક્સોનની બાજુમાં એફ. આર. ટી. કેસેટ હતી. લેખકોએ આ એક્સોનને ઉચ્છેદન માટે પસંદ કર્યું કારણ કે જો તેને ઉચ્છેદન કરવામાં આવે, તો તેનું પરિણામ નલ ફીનોટાઇપમાં આવે છે. લેખકોએ બે પંક્તિઓનું મિશ્રણ કર્યું અને સંતાનનું બલિદાન આપવામાં આવે તે પહેલાં સંતાનને પુખ્તાવસ્થા સુધી પહોંચવાની મંજૂરી આપી. ન્યુરોનલ, સ્નાયુબદ્ધ, આંતરડાના અને પૂંછડીના પેશીઓ પર આર. એન. એ. નિષ્કર્ષણ કરવામાં આવ્યું હતું. રિવર્સ-ટ્રાન્સક્રિપ્શન પી. સી. આર. અને નોર્ધન બ્લોટિંગે મગજની પેશીઓમાં ટી. એમ. 1સી. ડબલ્યુ. આર. ના 18મા એક્સોનના પુષ્કળ પ્રમાણમાં અને સ્નાયુબદ્ધ પેશીઓમાં (સ્નાયુની અંદરના શ્વાન કોષોને કારણે) સાધારણ રીતે કાપવાની પુષ્ટિ કરી હતી. અપેક્ષા મુજબ, અન્ય પેશીઓમાં ચીરો જોવા મળ્યો ન હતો. લેખકોએ ક્રી રિકોમ્બિનેઝ કરતાં સેલ-ફેટ નિર્ધારણમાં એફએલપી રિકોમ્બિનેઝની કાર્યક્ષમતા, જો વધુ સારી ન હોય તો, સમાન જોઈ. ડ્રોસોફિલા મેલાનોગાસ્ટર (ફ્રૂટ ફ્લાય) માં આજની તારીખે, ડી. મેલાનોગાસ્ટરમાં ઘણી વખત એફએલપી રિકોમ્બિનેઝનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો છે. ડી. મેલાનોગાસ્ટરમાં ક્રી રિકોમ્બિનેઝ સાથે એફએલપી રિકોમ્બિનેઝની સરખામણી ફ્રિકેનહૌસ એટ અલ દ્વારા પ્રકાશિત કરવામાં આવી હતી. (2015) ફ્રિકેનહૌસ એટ અલના લેખકો. (2015) નો બે ગણો ઉદ્દેશ હતોઃ એફએલપી રિકોમ્બિનેઝ "નોક-આઉટ" ની અસરકારકતાને ક્રી રિકોમ્બિનેઝ "નોક-આઉટ" અને આરએનએઆઈ નોકડાઉન સાથે લાક્ષણિકતા આપો અને તેની તુલના કરો અને ડી. મેલાનોગાસ્ટરના ચેતાકોષો અને સ્નાયુ પેશીઓમાં એફયુએસ માટે ફ્લાય ઓર્થોલોગ, કાબેઝા (કાઝ) ના કાર્યને જાહેર કરો. મનુષ્યોમાં એમીયોટ્રોફિક લેટરલ સ્ક્લેરોસિસ (એ. એલ. એસ.) અને ફ્રન્ટોટેમ્પોરલ ડિમેન્શિયામાં એફ. યુ. એસ. ને મજબૂત રીતે સામેલ કરવામાં આવ્યું છે. લેખકોએ ખાસ કરીને ચેતાકોષોમાં પુનઃસંયોજનને વ્યક્ત કરવા માટે એલાવ-ગેલ4/યુએએસ-એફએલપી અથવા ક્રે સિસ્ટમનો ઉપયોગ કર્યો હતો અને તેને ખાસ કરીને સ્નાયુઓમાં વ્યક્ત કરવા માટે મેફ2-ગેલ4/યુએએસ-એફએલપી અથવા ક્રે સિસ્ટમનો ઉપયોગ કર્યો હતો. લેખકો નિષ્કર્ષ કાઢે છે કે ક્રી પ્રોટીન અને આર. એન. એ. આઈ. ટ્રાન્સક્રિપ્ટ બંનેમાં જોવા મળતી લીકી અભિવ્યક્તિના અભાવને કારણે ચોક્કસ પેશીઓ અથવા કોષ રેખાઓમાં ચોક્કસ જનીનોને બહાર કાઢવાના હેતુથી આર. એન. એ. આઈ. અને ક્રી રિકોમ્બિનેઝ બંને કરતાં એફ. એલ. પી. રિકોમ્બિનેઝ "નોક-આઉટ" સાધન વધુ અસરકારક છે. ઉપરાંત, લેખકોએ ક્રે પ્રોટીનમાં ઝેરીપણું જોયું જે એફ. એલ. પી. પ્રોટીન સાથે જોવા મળતું નથી. ડેનિઓ રેરિયો (ઝેબ્રાફિશ) માં વોંગ એટ અલ દ્વારા ઝેબ્રાફિશમાં એફએલપીઇ રિકોમ્બિનેઝ સિસ્ટમની અસરકારકતાનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. (2009). સ્નાયુ-વિશિષ્ટ પ્રમોટરના ડાઉનસ્ટ્રીમમાં એફ. આર. ટી.-ફ્લેન્ક્ડ એન્હાન્સડ ગ્રીન ફ્લોરોસન્ટ પ્રોટીન (ઇ. જી. એફ. પી.) માટે હેમિઝીગસ ગર્ભને એફ. એલ. પી. ઈ. પ્રોટીન સાથે ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવ્યા હતા. એફએલપીઇ વિના, આ ભ્રૂણએ તમામ સ્નાયુ પેશીઓમાં ઇજીએફપી વ્યક્ત કરવું જોઈએ, અને જો જંગલી પ્રકારનાં સ્ટ્રાન્ડ સાથે પાર કરવામાં આવે, તો પરિણામી સંતાનના 50 ટકા સ્નાયુ પેશીઓમાં પણ ઇજીએફપી વ્યક્ત કરવું જોઈએ. એફ. એલ. પી. ઈ. સાથે ઇન્જેક્ટ કરાયેલ ગર્ભમાં સ્નાયુ પેશીઓમાં ઇ. જી. એફ. પી. ની અભિવ્યક્તિમાં નોંધપાત્ર ઘટાડો થયો હતો અને મોઝેસિઝમ પણ જોવા મળ્યું હતું. જ્યારે આ ભ્રૂણ પુખ્તાવસ્થામાં પહોંચ્યા, ત્યારે તેમને જંગલી પ્રકારનાં તાણ સાથે જોડવામાં આવ્યા હતા, અને પરિણામી પકડમાં નોંધપાત્ર રીતે ઓછી સંતાન હતી જે સ્નાયુ પેશીઓમાં ઇ. જી. એફ. પી. વ્યક્ત કરે છે (0-4%). આ પરિણામો દર્શાવે છે કે એફએલપીઇ માત્ર શારીરિક કોષોમાં જ અત્યંત અસરકારક નથી, તે ઝેબ્રાફિશની જર્મલાઇનમાં પણ અત્યંત અસરકારક છે. છોડમાં અરેબિડોપ્સિસ થાલિયાના અને તમાકુ ફાયટોસેન્સરમાં "ફાયટોસેન્સર" અથવા "સેન્ટિનલ્સ" નું સર્જન આનુવંશિક રીતે સુધારેલા છોડ છે જે જૈવિક અથવા અજૈવિક અશુદ્ધિઓની હાજરીની જાણ કરી શકે છે. આ એન્જિનિયર્ડ પ્લાન્ટ્સના ઉત્પાદનમાં મહાન કૃષિ અને પ્રયોગશાળા વચન છે. જો કે, યોગ્ય રિપોર્ટર વેક્ટર બનાવવું સમસ્યારૂપ હોવાનું દર્શાવવામાં આવ્યું છે. સિસ-રેગ્યુલેટરી તત્વો છોડમાં જનીનોના ટ્રાન્સક્રિપ્શનલ સક્રિયકરણમાં મુખ્ય ભૂમિકા ભજવે છે, અને ઘણાને સારી રીતે સમજવામાં આવતા નથી. ઘણા ફાયટોસેન્સર કાં તો તેમના રિપોર્ટર જનીનોને વ્યક્ત કરે છે અથવા કૃત્રિમ પ્રવર્તકોને કારણે ખોટા-હકારાત્મક અહેવાલ આપે છે. રાવ એટ અલના લેખકો. (2010) એ અત્યંત કાર્યક્ષમ ફાયટોસેન્સરના ઉત્પાદન માટે એફએલપી રિકોમ્બિનેઝ ટૂલનો ઉપયોગ કર્યો હતો. લેખકોએ એફએલપીના ઉત્પાદનને પ્રેરિત કરવા માટે હીટ શોક પ્રમોટરનો ઉપયોગ કર્યો હતો જ્યારે એફઆરટી-ફ્લેન્ક્ડ વેક્ટરએ સીએએમવી 35એસ પ્રમોટરને બીટા-ગ્લુકોરોનિડેઝ જનીન (જીયુએસ) થી અલગ કર્યું હતું. જ્યારે છોડ ગરમીના આંચકાના સંપર્કમાં આવ્યા હતા, ત્યારે એફએલપી-ઇન્ડક્શન એફઆરટી-ફ્લેન્ક્ડ વેક્ટરના ઉચ્છેદન તરફ દોરી ગયું હતું, જે અસરકારક રીતે જીયુએસ જનીનને સીધું જ સીએએમવી 35એસ પ્રમોટરની નીચે તરફ ખસેડી રહ્યું હતું. જીયુએસના સક્રિયકરણને કારણે છોડના પાંદડા લીલાથી વાદળીમાં બદલાઈ ગયા; આમ, ફાયટોસેન્સર અસરકારક રીતે મોડેલ સિસ્ટમમાં તણાવની જાણ કરે છે! ગેટ-વે-રેડી ઇન્ડ્યુસિબલ એમ. આઈ. આર. એન. એ. (જી. આર. આઈ. એમ.) એક્સપ્રેશન સિસ્ટમના ઉત્પાદન સાથે આર. એન. એ. ઇન્ટરફિયરન્સ (આર. એન. એ. આઈ.) એ યુકેરીયોટ્સમાં જનીનોની અભિવ્યક્તિ અને સંભવિત જનીન નોકઆઉટમાં એક આદર્શ પરિવર્તન કર્યું છે. GRIM અભિવ્યક્તિ પ્રણાલીના ઉત્પાદન પહેલાં, RNAi વેક્ટરની રચના ખર્ચાળ અને સમય માંગી લેતી હતી. વેક્ટર પરંપરાગત કોપી-એન્ડ-પેસ્ટ મોલેક્યુલર ક્લોનિંગ પદ્ધતિ દ્વારા ઉત્પન્ન કરવામાં આવ્યા હતા. ગારવિક-કોપેન્સ એટ અલ. (2011) એ આર. એન. એ. આઈ. વેક્ટરના ઉત્પાદન માટે વધુ કાર્યક્ષમ પદ્ધતિ વિકસાવી છે જેમાં આર. એન. એ. આઈ. ની અભિવ્યક્તિને ક્રે-રિકોમ્બિનેઝનો ઉપયોગ કરીને નોક-ઇન અને એફ. એલ. પી.-રેકોમ્બિનેઝનો ઉપયોગ કરીને નોક-આઉટ કરી શકાય છે. નવીન જી. આર. આઈ. એમ. અભિવ્યક્તિ પ્રણાલી કૃત્રિમ આર. એન. એ. આઈ. રચનાઓ ધરાવતા અભિવ્યક્તિ વાહકની વધુ ઝડપી પેઢી માટે પરવાનગી આપે છે. લેખકોએ બતાવ્યું કે તેમની અભિવ્યક્તિ પ્રણાલી માનવ ગર્ભ કિડની (HEK) કોષોમાં ખૂબ અસરકારક રીતે કામ કરે છે, જે પરમાણુ સંશોધનમાં એક સામાન્ય માનવ અમર કોષ રેખા છે. આ પણ જુઓ સ્થળ-વિશિષ્ટ રિકોમ્બિનેઝ ટેકનોલોજી રિકોમ્બિનેઝ-મધ્યસ્થ કેસેટ એક્સચેન્જ ક્રિઓ રિકોમ્બિનેઝ ક્રિઓ-લોક્સ રિકોમ્બિનેશન આનુવંશિક રિકોમ્બિનેશન હોમોલોગસ રિકોમ્બિનેશન સંદર્ભો બાહ્ય કડીઓ એફ. એલ. પી.-એફ. આર. ટી. રિકોમ્બિનેઝઃ મિકેનિઝમ ઓફ એક્શન વિડિયો ઓફ ધ યુટિલાઇઝેશન એફ. એલ. પી.-એફ. આર. ટી. રિકોમ્બિનેઝ ઇન ડી. મેલાનોસ્ટર ફોટોરિસેપ્ટર એપ્લિકેશન ઓફ એફ. એલ. પી. મ્યુટજેનેસિસ ઓફ વિબ્રિયો કોલેરા જિનેટિક્સ તકનીકો મોલેક્યુલર જિનેટિક્સ