SOS chromotest
એસ. ઓ. એસ. ક્રોમોટેસ્ટ એ રાસાયણિક સંયોજનોની જીનોટૉક્સિક ક્ષમતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટેનું જૈવિક પરીક્ષણ છે. આ પરીક્ષણ એક કલરમેટ્રિક પરીક્ષણ છે જે β-ગેલેક્ટોસિડેઝ માટે માળખાકીય જનીન સાથે ફ્યુઝનના માધ્યમથી એસ્ચેરીચીયા કોલીમાં જીનોટોક્સિક એજન્ટો દ્વારા પ્રેરિત જનીનોની અભિવ્યક્તિને માપે છે. પરીક્ષણ નમૂનાઓની વધતી સાંદ્રતા સાથે 96-કૂવાના માઇક્રોપ્લેટના સ્તંભોમાં થોડા કલાકોમાં પરીક્ષણ કરવામાં આવે છે. આ પરીક્ષણ જીનોટોક્સિસિટી માટે પરંપરાગત એમ્સ પરીક્ષણ પરીક્ષણના વ્યવહારુ પૂરક અથવા વિકલ્પ તરીકે વિકસાવવામાં આવ્યું હતું, જેમાં અગર પ્લેટ પર વધતા બેક્ટેરિયાનો સમાવેશ થાય છે અને સંભવિત મ્યુટેજેનિક સંયોજનો અથવા નમૂનાઓના સંપર્કમાં આવતા બેક્ટેરિયાના પરિવર્તન દર સાથે કુદરતી પરિવર્તન દરની સરખામણી કરવામાં આવે છે. એસ. ઓ. એસ. ક્રોમોટેસ્ટ એમેસ પરીક્ષણ જેવી સ્થાપિત પદ્ધતિઓ સાથે ચોકસાઈ અને સંવેદનશીલતામાં તુલનાત્મક છે અને જીનોટોક્સિક સંયોજનોની તપાસ કરવા માટે એક ઉપયોગી સાધન છે, જે મનુષ્યમાં કાર્સિનોજેનિક સાબિત થઈ શકે છે, જેથી વધુ ઊંડાણપૂર્વકના વિશ્લેષણ માટે રસાયણોને અલગ કરી શકાય. અન્ય બેક્ટેરિયલ જેન્ટોક્સિસિટી અને મ્યુટેજેનિસિટી પરીક્ષણોની જેમ, પ્રવૃત્તિ માટે મેટાબોલિક સક્રિયકરણની જરૂર હોય તેવા સંયોજનોની S9 માઇક્રોસોમલ ઉંદર યકૃત અર્કના ઉમેરા સાથે તપાસ કરી શકાય છે. તંત્ર એસ. ઓ. એસ. પ્રતિભાવ જીનોટોક્સિક સંયોજનો માટે ઇ. કોલીની પ્રતિક્રિયામાં કેન્દ્રિય ભૂમિકા ભજવે છે કારણ કે તે રાસાયણિક એજન્ટોની વિશાળ શ્રેણીને પ્રતિસાદ આપે છે. આ સિસ્ટમને ટ્રિગર કરવાનો ઉપયોગ ડીએનએ નુકસાનના પ્રારંભિક સંકેત તરીકે થઈ શકે છે અને થઈ શકે છે. એસ. ઓ. એસ. પ્રતિભાવમાં બે જનીનો ચાવીરૂપ ભૂમિકા ભજવે છેઃ લેક્સએ સિસ્ટમમાં તમામ જનીનો માટે રિપ્રેસરને એન્કોડ કરે છે, અને રીકેએ એસ. ઓ. એસ. પ્રેરિત સંકેત દ્વારા સક્રિય થવા પર લેક્સએ રિપ્રેસરને વિભાજીત કરવામાં સક્ષમ પ્રોટીનને એન્કોડ કરે છે (આ કિસ્સામાં જીનોટોક્સિક સંયોજનની હાજરીને કારણે થાય છે). એસ. ઓ. એસ. પ્રતિક્રિયાની ચોક્કસ પદ્ધતિ હજુ પણ અજ્ઞાત હોવા છતાં, જ્યારે ડીએનએ જખમ ડીએનએ પ્રતિકૃતિને ખલેલ પહોંચાડે છે અથવા અટકાવે છે ત્યારે તે પ્રેરિત થાય છે. . વિવિધ અંતિમ બિંદુઓ એસ. ઓ. એસ. પ્રણાલીના ટ્રિગર થવાના સંભવિત સૂચકાંકો છે; આર. સી. એ. પ્રોટીનનું સક્રિયકરણ, લેક્સએ રિપ્રેસરનું વિભાજન, કોઈપણ એસ. ઓ. એસ. જનીનની અભિવ્યક્તિ વગેરે. સૌથી સરળ પરીક્ષણોમાંના એકમાં ઇ. કોલી β-ગેલેક્ટોસિડેઝ માટેના માળખાકીય જનીન, લાખઝેડ સાથે જોડાણ દ્વારા એસ. ઓ. એસ. જનીનની અભિવ્યક્તિનું નિરીક્ષણ કરવાનો સમાવેશ થાય છે. પ્રક્રિયા એસ. ઓ. એસ. ક્રોમોટેસ્ટમાં પરીક્ષણ કરવા માટે રાસાયણિકની વધતી સાંદ્રતા સાથે ઇ. કોલીનું સેવન કરવામાં આવે છે. પ્રોટીન સંશ્લેષણ માટે સમય આપ્યા પછી, β-ગેલેક્ટોસિડેઝ પ્રવૃત્તિનું એક સરળ કલરિમેટ્રિક પરીક્ષણનો ઉપયોગ કરીને પરીક્ષણ કરવામાં આવે છે. લેક્ટોઝ એનાલોગનો સમાવેશ કરીને જે અધોગતિ પર રંગીન સંયોજન ઉત્પન્ન કરે છે, રંગમાં સરળતાથી અવલોકનક્ષમ અથવા માત્રાત્મક ફેરફારનો ઉપયોગ મેટ્રિક તરીકે થાય છે. રાસાયણિક પરીક્ષણ ઉચ્ચ સાંદ્રતામાં પ્રોટીન સંશ્લેષણને અટકાવી શકે છે, જે બી-ગેલેક્ટોસિડેઝ ઇન્ડક્શનના ઓછો અંદાજ તરફ દોરી જશે, તેથી આલ્કલાઇન ફોસ્ફેટેઝની β-ગેલેક્ટોસિડેઝ સાથે વારાફરતી તપાસ કરવામાં આવે છે જેથી કોષોની અસ્તિત્વ ટકાવી રાખવા માટે ડેટાને માપવામાં આવે. પરીક્ષણ સરળતાથી થોડા કલાકોમાં પૂર્ણ કરી શકાય છે. જો માઇક્રો-પ્લેટ રીડરનો ઉપયોગ કરવામાં આવે, તો પરીક્ષણ માત્રાત્મક હોય છે અને માત્રા-પ્રતિભાવ વળાંકમાં પ્રારંભિક રેખીય ક્ષેત્ર હોય છે. આ રેખીય પ્રદેશનો ઢોળાવ દરેક સંયોજનને એક જ પરિમાણ, એસ. ઓ. એસ.-પ્રેરક શક્તિ (એસ. ઓ. એસ. આઈ. પી.) સાથે સ્પષ્ટ જોડાણની મંજૂરી આપે છે, જે સંયોજનની પ્રેરક પ્રવૃત્તિને પ્રતિબિંબિત કરે છે. આ પરીક્ષણ સ્ક્રીનીંગ હેતુઓ માટે ગુણાત્મક (રંગ ઢાળનું દૃશ્યમાન નિરીક્ષણ) અથવા સામાન્ય રીતે સ્વીકૃત મેટ્રિક્સની ગણતરી માટે માત્રાત્મક માપન (સ્પેક્ટ્રોફોટોમેટ્રી) બંને પ્રદાન કરે છે. માત્રાત્મક પરીક્ષણમાં, સંયોજનનો માત્રા-પ્રતિસાદ (બીટા-ગેલેક્ટોસિડેઝ ઉત્પાદન સાથે સંકળાયેલ રંગ ઉત્પાદન) રચવામાં આવે છે, જેમાં સાર્વત્રિક પરિમાણ તરીકે ઉપયોગમાં લેવાતા પ્રારંભિક રેખીય પ્રદેશના ઢોળાવ સાથે, એસ. ઓ. એસ.-પ્રેરક શક્તિ (એસ. ઓ. એસ. આઈ. પી.), જે એસ. ઓ. એસ. પ્રતિભાવને પ્રેરિત કરવાની સંયોજનની ક્ષમતાને પ્રતિબિંબિત કરે છે (બીટા-ગેલેક્ટોસિડેઝના ઉત્પાદન અને લેક્ટોઝ એનાલોગના વિરામ દ્વારા પરોક્ષ રીતે માપવામાં આવે છે). લાક્ષણિક રીતે, લેક્ટોઝ એનાલોગ એ એક્સ-ગેલ છે, જે બીટા-ગેલેક્ટોસિડેઝ દ્વારા વિભાજીત થાય ત્યારે વાદળી રંગ ઉત્પન્ન કરે છે. ડોઝ પ્રતિસાદ કોષોના અસ્તિત્વ દ્વારા પણ માપવામાં આવે છે, જે આલ્કલાઇન ફોસ્ફેટેઝ (જે પીળો રંગ ઉત્પન્ન કરે છે) ના વિરામ દ્વારા માપવામાં આવે છે, જે એસ. ઓ. એસ. આઈ. પી. ની ગણતરી માટે પરવાનગી આપે છે. એસ. ઓ. એસ. આઈ. પી. એ સાંદ્રતા-આધારિત મેટ્રિક હોવા છતાં, આ જ પદ્ધતિનો ઉપયોગ જટિલ પર્યાવરણીય મિશ્રણ માટે થઈ શકે છે જ્યાં સાંદ્રતા અથવા રસના સંયોજનો પણ અજ્ઞાત હોય. મધ્યવર્તી એસ. ઓ. એસ.-ઇન્ડક્શન ફેક્ટર (એસ. ઓ. એસ. આઇ. એફ.) ની ગણતરી દ્વારા, જે અગાઉથી નમૂનાઓના વિશ્લેષણાત્મક માપન વિના માત્રા-પ્રતિક્રિયાનું ઉદાહરણ આપવા માટે તે જ રીતે મંદન સામે ગોઠવી શકાય છે. ફાયદા એસ. ઓ. એસ. ક્રોમોટેસ્ટને જીનોટોક્સિસિટી માટે સૌથી સરળ અને ઝડપી ટૂંકા ગાળાનું પરીક્ષણ માનવામાં આવે છે. તે સંખ્યાબંધ કારણોસર પરંપરાગત એમ્સ પરીક્ષણ માટે ઉપયોગી અને ખર્ચ અસરકારક પૂરક તરીકે કામ કરે છે. પ્રથમ, તેની સરળતા અને ઝડપીતાને કારણે, એસ. ઓ. એસ. ક્રોમોટેસ્ટનો ઉપયોગ મોટી સંખ્યામાં સંભવિત જીનોટોક્સિક સંયોજનો માટે સ્ક્રીનીંગ પરીક્ષણ તરીકે થઈ શકે છે. બીજું, તે જીનોટોક્સિક રસાયણોની શોધને મંજૂરી આપી શકે છે જે એમ્સ પરીક્ષણમાં ખોટા નકારાત્મક પરિણામો આપે છે (જેમ કે એસ્ટ્રાડિઓલ, વધતી ચિંતાનું સંયોજન). ત્રીજું, તે એમ્સ પરીક્ષણમાં ખોટા સકારાત્મક પરિણામોમાં ભેદભાવ કરવાની અસરકારક પદ્ધતિ સાબિત કરી શકે છે. સંદર્ભો જૈવિક તકનીકો અને સાધનો આનુવંશિક પરીક્ષણો