L-Photo-methionine
એલ-ફોટો-મેથિઓનાઇન એ એલ-મેથિઓનાઇનનું ફોટો-રિએક્ટિવ એમિનો એસિડ વ્યુત્પન્ન છે જે 2005 માં કૃત્રિમ રીતે રચાયું હતું. પ્રોટીન એમિનો એસિડની લાંબી પોલિમર સાંકળો છે; જે વિવિધ માળખા અને કદમાં હોઈ શકે છે. પ્રોટીન એકબીજા સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરી શકે છે (પ્રોટીન-પ્રોટીન ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ અથવા પી. પી. આઈ.) અને આ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ સાથે, સેલ્યુલર ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ અને માર્ગોને અસર કરે છે. આવી ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ; વાયરલ ફ્યુઝનમાં અને વૃદ્ધિ-પરિબળ સિગ્નલિંગમાં એન્ટિવાયરલ અથવા કેન્સર વિરોધી દવાઓ માટે આશાસ્પદ લાગતી હતી, તેથી ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓને સમજવા માટે સંશોધન કરવું આવશ્યક છે. તે સાથે, સંશોધનોએ સાબિત કરવાનું શરૂ કર્યું છે કે પ્રોટીન અલગ અસ્તિત્વની તુલનામાં સુપરમોલેક્યુલર સંકુલમાં કાર્ય કરે છે. તેથી, વૈજ્ઞાનિકો મોનિકા સુચનેક, અન્ના રાડઝિકોવ્સ્કી અને ક્રિસ્ટોફ થિએલે સંશોધન કર્યું કે કુદરતી વાતાવરણમાં આ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓનો વધુ સારી રીતે અભ્યાસ કરવાની સીધી રીત ફોટો-ક્રોસ-લિંકિંગ પ્રોટીનની નવી રીત બનાવવી હતી; જે એલ-ફોટો-મેથિઓનાઇનનું સંશ્લેષણ તરફ દોરી ગઈ અને તે જ અભ્યાસમાં, એલ-ફોટો-લ્યુસીન. સંશ્લેષણ રેસમિક ફોટો-મેથિઓનાઇનને સ્ટ્રેકર એમિનો એસિડ સંશ્લેષણ દ્વારા 4,4 '-એઝી-પેન્ટેનલમાંથી સંશ્લેષણ કરવામાં આવે છે. એલ એન્ન્ટીયોમર એસિટામાઇડના એન્ઝાઇમેટિક રિઝોલ્યુશન દ્વારા અલગ પડે છે. મેથિઓનાઇનનું ફોટોએક્ટિવેશન અગાઉ ઉલ્લેખ કર્યો હતો તેમ, એલ-ફોટો-મેથિઓનાઇનનો ઉપયોગ તેમના મૂળ વાતાવરણમાં પ્રોટીન સાથે પ્રોટીન-પ્રોટીનની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાનો અભ્યાસ કરવા માટે થઈ શકે છે. યુવી પ્રકાશના સંપર્કમાં આવે ત્યારે એમિનો એસિડ કેવી રીતે વર્તે છે તે આ કેવી રીતે શક્ય છે. પ્રથમ સંશ્લેષણ કામ કરે છે તે સાબિત કરવા માટે, યોગ્ય સ્પેક્ટ્રોસ્કોપિક પદ્ધતિઓ કરવા માટે તેના પોતાના સંશ્લેષણ હેઠળ કિરણોત્સર્ગી કાર્બન (14C) ઉમેરવામાં આવે છે. ફોટો-મેથિઓનાઇનનું સક્રિયકરણ કારણ કે અગાઉના સંશ્લેષણએ કામ કર્યું હતું, ફોટો-મેથિઓનાઇન ડાયઝિરીન રિંગને કારણે ફોટો-પ્રતિક્રિયાશીલ છે. એકવાર આ વીંટી યુવી પ્રકાશના સંપર્કમાં આવી જાય પછી, નાઇટ્રોજન નાઇટ્રોજન ગેસ (એન 2) તરીકે નીકળી જાય છે અને અત્યંત પ્રતિક્રિયાશીલ મધ્યવર્તી કાર્બાઇન બનાવે છે. એમિનો એસિડનું ફોટો-સક્રિયકરણ પ્રોટીનમાં ફોટો-ક્રોસ-લિંકિંગની ક્ષમતા પ્રદાન કરે છે. આ પ્રકારના ક્રોસ-લિંકિંગના ત્રણ મુખ્ય ફાયદા છે; ટૂંકા ગાળાના મધ્યસ્થીઓને કારણે આ ક્રોસ લિંકિંગ માટે વધુ વિશિષ્ટતા છે અને આ એમિનો એસિડ કાર્યાત્મક છે, અને સૌથી અગત્યનું; ઝેરી નથી (એટલે કે તે પ્રોટીનના કાર્ય અથવા માળખાને નાટ્યાત્મક રીતે વિક્ષેપિત ન કરે). સંશોધનમાં જાણવા મળ્યું હતું કે આ સક્રિયકરણ દર-મર્યાદિત પગલું છે; ક્રોસ-લિન્કેજ નહીં. એક નવું કાર્યક્ષમ સંશ્લેષણ અને ઉપયોગ વૈજ્ઞાનિકો મિકેલ વિલા-પેરેલો, મેથ્યુ આર. પ્રેટ, ફ્રેજ તુલિન અને ટોમ ડબ્લ્યુ. મુઇર એક કાર્યક્ષમ સંશ્લેષણ બનાવવા માંગતા હતા કારણ કે મૂળમાં ઉત્સેચકીય દ્રાવણની જરૂર હતી અને તેની ઉપજ ઓછી હતી. તેથી, તેઓએ એલ-ગ્લુટામિક એસિડથી કાર્બોક્સિલિક એસિડ (ટર્ટ-બ્યુટાઇલ) અને એમાઇન પર બીઓસી બંને પરના જૂથોને સુરક્ષિત કરવા સાથે શરૂઆત કરી. આ સંશ્લેષણ ક્લાસિક તરીકે વિગતવાર પસાર થશે નહીં, પરંતુ નીચે સંપૂર્ણ સંશ્લેષણ છે. વાસ્તવિક પગલાં શોધવા માટે, સંદર્ભ જુઓ. તેથી, એકવાર તેઓએ એલ-ફોટો-મેથિઓનાઇનનું સંશ્લેષણ કર્યું પછી, ઉપજ 32 ટકા હતી, જે મૂળ સંશ્લેષણ કરતા ઘણી વધારે (છ ગણી) હતી. તે પછી તેનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો (એમાઇન પર સંરક્ષણ જૂથ એફ. એમ. ઓ. સી. સાથે) જેનો અભ્યાસ કરવા માટે તે ઉત્પાદન વધુ કૃત્રિમ પગલાઓમાંથી પસાર થયું હતું કે શું એમિનો-એસિડ ક્રોસ લિંકર અને પોસ્ટ-ટ્રાન્સલેશનલ મોડિફિકેશન (પી. ટી. એમ.) એ જ પ્રોટીન સાઇટ પર રજૂ કરી શકાય છે કે કેમ ખાસ કરીને એમિનો-એસિડની સહસંયોજક ક્રિયાપ્રતિક્રિયાને પકડવા માટે જે પી. ટી. એમ. પર આધારિત છે. પી. ટી. એમ. પ્રોટીન-પ્રોટીન ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓનું નિયમન કરે છે જેમાં ક્ષણિક અને સબસ્ટોઇકોમેટ્રિક લાક્ષણિકતાઓ હોય છે; જે આને પ્રમાણભૂત પદ્ધતિઓ દ્વારા શોધવાનું મુશ્કેલ બનાવે છે. તેથી, તે કામ કરશે કે નહીં તે જોવા માટે, સ્માડ 2 ના MH2 ડોમેનનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો કારણ કે આ સિગ્નલિંગ પ્રોટીન એકવાર રીસેપ્ટર-ફોસ્ફોરિલેટેડ સેરીન અવશેષોના સંપર્કમાં આવે ત્યારે સ્થિર હોમો-ટ્રિમર રચવા માટે જાણીતું છે. અભિવ્યક્તિ પ્રોટીન બંધન (ઇ. પી. એલ. તરીકે ઓળખાય છે) નો ઉપયોગ સ્માડ2-એમ. એચ. 2-સી. એસ. પી. એસ. એમ.-ફોટો-મેટ (1) રચવા માટે સંશ્લેષણ કરવા માટે કરવામાં આવ્યો હતો. નિયંત્રણ પ્રોટીન સામે ક્રોસ-લિંકર (ફોટો-મેટ) સાથે ઉત્પાદનનો અભ્યાસ કરવામાં આવ્યો હતોઃ એચ. એ.-એમ. એચ. 2-સી. એસ. પી. એસ. એમ. પી. એસ. (આમાં ફોટો-મેથિઓનાઇનનો અભાવ છે, 2) એસ. ડી. એસ.-પેજનો ઉપયોગ કરીને અને એન્ટિ-એચ. એ. એન્ટિબોડીનો ઉપયોગ કરીને વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગ. 1 એ બે મુખ્ય ક્રોસ-લિંક્ડ પ્રજાતિઓ પેદા કરી હતી જે સ્માડ 2-એસએચ 2 ના ડાયમર અને ટ્રીમર સાથે સુસંગત પરમાણુ વજન ધરાવે છે. તે ક્રોસ-લિંકર વિના, ડાયમર અને ટ્રીમર ભાગ્યે જ બિન-કિરણોત્સર્ગી 1 માં અને યુવી ઇરેડિયેશન પહેલાં અને પછી 2 માં મળી આવ્યા હતા. તે સાબિત કરવું કે એલ-ફોટો-મેથિઓનાઇનનો ઉપયોગ ઇ. પી. એલ. સાથે થઈ શકે છે અને તેનો ઉપયોગ ક્ષણિક એમ. એચ. 2-એમ. એચ. 2 ક્રિયાપ્રતિક્રિયા નક્કી કરવા માટે થઈ શકે છે જે પી. ટી. એમ. પર આધારિત હતી. કોલેસ્ટ્રોલ હોમિયોસ્ટેસિસમાં ફોટો-મેથિઓનાઇન પ્રોટીન ઇન્ટરેક્શન કોમ્પ્લેક્સ અને મેમ્બ્રેન પ્રોટીનના કાર્યનો ઉપયોગ અગાઉ જણાવ્યા મુજબ, વૈજ્ઞાનિકો મોનિકા સુચનેક, અન્ના રાડઝિકોવ્સ્કી અને ક્રિસ્ટોફ થિએલ તેમના કુદરતી વાતાવરણમાં પ્રોટીન-પ્રોટીનની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાનો અભ્યાસ કરવા માંગતા હતા. ખાસ કરીને, પટલ પ્રોટીન (સંકુલમાં અને એસ. સી. એ. પી., ઇન્સિગ-1 અને એસ. આર. ઇ. બી. પી. છે) જે કોલેસ્ટ્રોલ હોમિયોસ્ટેસિસનું નિયમન કરે છે જેથી તેઓ જાણવા માંગતા હતા કે તેમનું કાર્ય શું હતું અને જટિલ માળખું શું હતું. તેઓએ જે શોધી કાઢ્યું હતું તે એ હતું કે આ ફોટો-રિએક્ટિવ એમિનો એસિડનો ઉપયોગ સસ્તન પ્રાણીઓના કોષો દ્વારા પ્રોટીનમાં અસરકારક રીતે સામેલ કરવામાં આવ્યો હતો, પરંતુ તેમાં સંશોધિત ટી. આર. એન. એ. (ટ્રાન્સફર આર. એન. એ.) અથવા એ. એ. આર. એસ. (એમિનોસિલ ટી. આર. એન. એ. સંશ્લેષણ) નો ઉપયોગ કરવાની જરૂર નહોતી, જે ચોક્કસ ક્રોસ-લિંકિંગની જરૂર હતી. આ ક્રોસ-લિંકિંગ વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગ દ્વારા નક્કી કરી શકાય છે અને તેઓએ ઇન્સિગ-1 અને પીજીઆરએમસી 1 (પ્રોજેસ્ટેરોન-બંધનકર્તા પટલ પ્રોટીન) વચ્ચે સીધી ક્રિયાપ્રતિક્રિયા શોધી કાઢી હતી. તમામ ચાર પટલ પ્રોટીન એન્ડોપ્લાઝ્મિક રેટિક્યુલમમાં જોવા મળે છે અને કોમ્પ્લેક્સ કોલેસ્ટ્રોલના નીચા સ્તરને પ્રતિસાદ આપે છે. એચ. એ. (હેમેગગ્લુટિનિન ટેગ્ડ પી. જી. આર. એમ. સી. 1) અને માઈક ટેગ્ડ ઇન્સિગ-1 ધરાવતા કોષો (સી. ઓ. એસ. 7) ફોટો-મેટ સાથે અને તેના વગર ઉગાડવામાં આવતા હતા. ફોટો-મેટની હાજરીમાં, ઇન્સિગ-1 અને એસ. સી. એ. પી. એ પી. જી. આર. એમ. સી. 1 સાથે ક્રોસ-લિંક્ડ કર્યું હતું; ખાસ કરીને, ઇન્સિગ-1 ક્રોસ-લિંક્ડમાં મજબૂત બેન્ડ હતું. એચ. એ. માટે એન્ટિબોડી સાથે ઇમ્યુનોપ્રેસિપિટેટિંગ ડિટર્જન્ટ-એક્સટ્રેક્ટ્સ દ્વારા ક્રોસ-લિંકિંગ શોધી કાઢવામાં આવ્યું હતું, ત્યારબાદ માઈક માટે એન્ટિબોડી સાથે વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગનો ઉપયોગ કરીને ઇન્સિગ-1 માટે અવક્ષેપકનું પરીક્ષણ કરવામાં આવ્યું હતું. એક સમાન બેન્ડ શોધના વિપરીત ક્રમમાં જોવા મળ્યું હતું; જેનો અર્થ થાય છે કે માયસી એન્ટિબોડીનું ઇમ્યુનોપ્રેસિપિટેશન કરવામાં આવ્યું હતું અને ત્યારબાદ એચ. એ. એન્ટિબોડી સાથે બ્લોટિંગ કરવામાં આવ્યું હતું. તેથી, આ પદ્ધતિ કામ કરવા માટે સાબિત થઈ હતી કે ફોટો-મેટ પ્રોટીનને ક્રોસ-લિંક કરી શકે છે, પરંતુ આ ક્રોસ-લિંકિંગની શારીરિક અસરો હજુ નક્કી કરવામાં આવી નથી. માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી પ્રોટીન સાથે પ્રોટીન-પ્રોટીન ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓનો અભ્યાસ કરવા માટે પ્રોટીન નેનોપ્રોબ્સનો ઉપયોગ પ્રોટીન નેનોપ્રોબ (જે ક્રોસ-લિંકિંગને સક્ષમ કરે છે) નો ઉપયોગ કરીને અભ્યાસ કરવામાં આવ્યો હતો જેણે પ્રોટીનની અંદર ફોટો-મેથિઓનાઇન રજૂ કર્યું હતું (પુનઃ સંયોજક અભિવ્યક્તિ દરમિયાન) જે પ્રોટીનને તેની આરક્ષિત રચનાને જાળવી રાખવા તરફ દોરી જાય છે જ્યારે તેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ માટે મેપ કરવાની ક્ષમતા ધરાવે છે. આ મોડેલનો ઉપયોગ સંપર્ક સપાટીના પ્રદેશ તરીકે કરવામાં આવ્યો હતો જે 14-3-3 ζ પ્રોટીનના બે અણુઓ વચ્ચેની જાણીતી ક્રિયાપ્રતિક્રિયા (હોમોડીમેરાઇઝેશન) માં સામેલ છે. એકવાર ફોટો-મેથિઓનાઇન રજૂ થઈ જાય અને યુવી-લાઇટનો ઉપયોગ કરીને સક્રિય થઈ જાય, તે કોઈ વિશિષ્ટતા (એટલે કે કોઈ જૂથ નહીં) સાથે ક્રોસ-લિંક કરી શકે છે અને લિંક્સની લંબાઈ શૂન્ય હોય છે. ઉચ્ચ રીઝોલ્યુશન માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી અથવા એમ. એસ. (એમ. એસ./એમ. એસ. પણ) નો ઉપયોગ ક્રોસ-લિંક્ડ અવશેષો અને પ્રતિક્રિયા ત્રિજ્યા નક્કી કરવા માટે કરી શકાય છે; સંશોધકોને પ્રોટીનના હોમોડીમેરાઇઝેશનની લાક્ષણિકતા અને સંશોધન કરવાની મંજૂરી આપે છે. ફોટો-મેથિઓનાઇન સાથે ઉચ્ચ-રીઝોલ્યુશન એમએસના ઉપયોગના તેના ફાયદા છે કારણ કે તે ફરીથી પ્રોટીનને તેની મૂળ સ્થિતિમાં રહેવાની મંજૂરી આપે છે, પ્રોટીનની થોડી માત્રાનો ઉપયોગ કરતી વખતે વાજબી સમય માપદંડ હોય છે. રાસાયણિક ક્રોસ-લિંકિંગની સરખામણીમાં ફોટો-એક્ટિવ ક્રોસ-લિંકર (ફોટો-મેથિઓનાઇન) નો ઉપયોગ કરીને પ્રતિક્રિયાની વિશિષ્ટતા અને પ્રતિબંધો પર પણ ઓછી મર્યાદાઓ છે. એમ. એસ. સાથે મળીને પ્રોટીન નેનોપ્રોબમાંથી સંયુક્ત ફોટો-ઇનિશિયેટેડ ક્રોસ-લિંકિંગની આ પદ્ધતિ માત્ર હોમોડિમરની રચના જ નહીં પરંતુ ઓલિગોમર્સ અને સિદ્ધાંતમાં; હેટેરોમર્સ (જેમ કે પ્રોટીન-પ્રોટીન મિશ્રણની રચના અને તેની કાર્યક્ષમતા) ની લાક્ષણિકતા માટે પણ ઉપયોગી થઈ શકે છે. ફોટો-સાયટોક્રોમ બી5નો ઉપયોગ કરીને સાયટોક્રોમ પી450 ઇલેક્ટ્રોન-ટ્રાન્સપોર્ટ ચેઇનનો અભ્યાસ કરવાની ક્ષમતા સાયટોક્રોમ બી5ને પ્રોટીન-પ્રોટીન ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓનો નકશો બનાવવા માટે ફોટો-મેથિઓનાઇન સાથે સંશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું, જ્યારે સસ્તન પ્રાણીઓના મિશ્ર કાર્ય ઓક્સિડેઝ સિસ્ટમ (એમ. એફ. ઓ. તરીકે પણ ઓળખાય છે) નો અભ્યાસ કરવા માટે તેની રચનાને પણ ઓળખવામાં આવી હતી. આ પ્રણાલી એન્ડોપ્લાઝ્મિક રેટિક્યુલમના પટલમાં સ્થિત છે અને તે સાયટોક્રોમ પી450, એન. એ. ડી. પી. એચ.: સાયટોક્રોમ પી450 રિડક્ટેઝ અને સાયટોક્રોમ બી5 સાથે એન. એ. ડી. એચ.: સાયટોક્રોમ બી5 રિડક્ટેઝથી બનેલી છે. એકવાર સાયટોક્રોમ બી5 સંકુલમાં ફોટો-મેથિઓનાઇનનો સમાવેશ કરવામાં આવ્યો (એટલે કે ફોટો-મેટને મેથિઓનાઇનની જગ્યાએ બદલવામાં આવ્યું હતું અને હવે ફોટો-સાઇટ બી5), ફોટો-સાઇટ બી5 અને સાયટોક્રોમ પી450ને યુવી-લાઇટ હેઠળ મૂકવામાં આવ્યા હતા અને એસ. ડી. એસ.-પેજનો ઉપયોગ કરીને ઉત્પાદનોનો અભ્યાસ કરવામાં સક્ષમ હતા; આ પદ્ધતિએ ત્રણ ક્રોસ-લિંક્સ દર્શાવ્યા હતા. ફોટો-મેથિઓનાઇન ફોટો-સાયટ બી5ના મેપિંગમાં સફળ સાબિત થયું હતું કારણ કે માલ્ડી-ટીઓએફ પદ્ધતિમાં ત્રણ ઓલિગોમર્સ (કાઇમોટ્રિપ્ટિક પેપ્ટાઇડ્સમાંથી) દર્શાવવામાં આવ્યા હતા જે ફોટો-સાયટ બી5 અને સાયટોક્રોમ પી450ના 1:1,1:2 અને 2:1 ના મોલેક્યુલર વજન ગુણોત્તરથી બનેલા હતા. સાયટોક્રોમ પી450 અને સાયટોક્રોમ બી5ના અભ્યાસમાં અહીં ફોટો-મેથિઓનાઇનને જે બાબત એટલી ઉપયોગી બનાવે છે તે એ છે કે આ પદ્ધતિ માત્ર દ્રાવકના સંપર્કમાં આવેલા પ્રદેશોમાં જ નહીં, પણ મૂળ વાતાવરણમાં પણ પ્રોટીન-પ્રોટીન ઇન્ટરફેસને મેપ કરે છે; પટલ. એક લાક્ષણિક ક્રોસ-લિંકિંગ પદ્ધતિ માત્ર દ્રાવક ખુલ્લા વિસ્તારોમાં જ કામ કરી શકે છે, જે ફરી એકવાર સાબિત કરે છે કે ફોટો-મેથિઓનાઇન તેમના મૂળ વાતાવરણમાં પ્રોટીન સાથે આ પ્રોટીન-પ્રોટીન ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓનો નકશો બનાવવા માટે ઉપયોગી છે. લેમિનિન γ1 સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરતા નિડોજેન-1નું પ્રોટીન માળખું વિશ્લેષણ લેમિનિન બેઝમેન્ટ પટલમાં જોવા મળતા બિન-કોલેજનસ પ્રોટીન છે અને બિન-સહસંયોજક સ્વ-ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ દ્વારા નેટવર્ક બનાવે છે. નિડોજેન્સ (જેને એન્ટેક્ટીન તરીકે પણ ઓળખવામાં આવે છે) એ સલ્ફેટેડ મોનોમેરિક ગ્લાયકોપ્રોટીન છે જે ઉચ્ચ સજીવોના ભોંયરામાં પટલમાં સર્વવ્યાપક રીતે હાજર હોય છે. નિડોજેન્સ ભોંયરાની રચનામાં મદદ કરે છે. લેમિનિન્સ અને નિડોજેન્સ બંને હાજર હોવાથી, બંને એક સંકુલમાં 1:1 નો સ્ટોઇકિઓમેટ્રી સંબંધ રાખવા માટે એકબીજા સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે. લેમિનિન γ1 ના ટૂંકા હાથનો અભ્યાસ કરવા માટે, ફોટો મેથિઓનાઇને નિડોજેન-1, લેમિનિન γ1 LEb2-4 અને લેમિનિન γ1 ટૂંકા હાથ બંનેને રજૂ કર્યા હતા કે કેમ તે જોવા માટે કે આ ફોટો-ક્રોસ લિંકિંગ પદ્ધતિ માળખાને મેપ કરી શકે છે કે કેમ. એમએસ/એમએસ વિશ્લેષણ ક્રોસ-લિંકિંગ પહેલાં કરવામાં આવ્યું હતું કે માત્ર 13-25% મેથિઓનાઇનનો સમાવેશ કરવામાં આવ્યો હતો, પરંતુ એકવાર યુવી-એ-પ્રેરિત અથવા અન્ય ક્રોસ-લિંકર, બીએસ 2 જી-મધ્યસ્થ ક્રોસ-લિંક્ડ (એક હોમોબિફંક્શનલ ક્રોસ-લિંકર), ફોટો-મેથિઓનાઇનની ટકાવારી વધીને 35 ટકા થઈ ગઈ હતી. બંને ક્રોસ-લિંકરોએ કાર્યોને સમજવામાં મદદ કરવા માટે કોમ્પ્યુટેશનલ અને પ્રાયોગિક બંને રીતે વધારાની માળખાકીય સમજ દર્શાવી હતી. ડાયમેરિક સ્ટ્રક્ચર અને ઓલિગોમેરિક સ્ટ્રક્ચર સાયક્લોઓક્સિજનેઝ-2 (સીઓએક્સ-2) અને માઇક્રોસોમલ પ્રોસ્ટાગ્લાન્ડિન ઇ 2 સિન્થેઝ-1 (એમ. પી. જી. ઇ. એસ.-1) સ્ટ્રક્ચરનો ફોટો-મેથિઓનાઇન (ફોટો-એક્ટિવેટેબલ) અને બાયફંક્શનલ ક્રોસ લિંકર બંનેનો ઉપયોગ કરીને અભ્યાસ કરવામાં આવ્યો હતો. COX-2 માં ઉપયોગમાં લેવાતા ફોટો-મેથિઓનાઇને બાયફંક્શનલ ક્રોસ-લિંકરની જેમ જ દર્શાવ્યું હતું કે ત્યાં એક ડાયમેરિક માળખું હતું જે એન્ઝાઇમના સ્ફટિક માળખા સાથે સુસંગત હતું. એમ. પી. જી. ઇ. એસ.-1માં, માનવ કોષો (એ549) ને ડિસ્યુસિનિમિડાઇલ સુબેરેટ (રાસાયણિક ક્રોસ-લિંકર) સાથે સારવાર કરવામાં આવી હતી, જેમાં 33કેડીએનું ડાયમર અને 45કેડીએનું ટ્રીમર મળ્યું હતું, જ્યારે તેને ફોટો-મેથિઓનાઇન સાથે સારવાર કરવામાં આવી હતી, જેમાં સમાન પરમાણુ વજન (33કેડીએ) નું ડાયમર અને બે અનુમાનિત ટ્રાયમર (50કેડીએ અને 55કેડીએ) મળ્યા હતા. એકવાર એમ. પી. જી. ઇ. એસ.-1 અવરોધક (એમ. એફ. 63) રજૂ કરવામાં આવ્યું; આ 50કે. ડી. એ. અને 55કે. ડી. એ. સંકુલની રચનાને અવરોધે છે. રાસાયણિક ક્રોસ-લિંકર દ્વારા પ્રાપ્ત ડાયમર અને ટ્રીમરને અવરોધકથી અસર થઈ ન હતી. તેમ છતાં, ફોટો-મેથિઓનાઇન અથવા ડિસ્યુસિનિમિડાઇલ સબરેટે COX-2 અને mPGES-1 વચ્ચે કોઈ પ્રોટીન-પ્રોટીન ક્રિયાપ્રતિક્રિયા દર્શાવી ન હતી અને આ વિવિધ કારણોસર હોઈ શકે છે. ફોટો-મેથિઓનાઇન માટે; એક આ સમયે નીચા સમાવેશને કારણે હોઈ શકે છે કારણ કે તે 0.7% હતું. તેથી, એમ. પી. જી. ઇ. એસ.-1 માટે; આમાં 152 એમિનો એસિડ છે તેથી મોનોમર દીઠ માત્ર એક ફોટો-મેથિઓનાઇનનો સમાવેશ કરવામાં આવશે. તેનો અર્થ એ પણ છે કે એક ચોક્કસ મેથિઓનાઇનને બદલવામાં આવશે નહીં જેથી એમ. પી. જી. ઇ. એસ.-1 ની વિજાતીય વસ્તીમાં પરિણમે છે જેના પરિણામે વિવિધ ક્રોસ-લિંકિંગ થાય છે. તેમ છતાં તે કોઈ પ્રોટીન-પ્રોટીન ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ દર્શાવતું ન હતું, તેનો ઉપયોગ ઓલિગોમેરિક માળખા નક્કી કરવાની ટોચ પર કોષ પટલમાં અવરોધક-પ્રેરિત પ્રોટીન રચનાત્મક ફેરફારોને શોધવા માટે થઈ શકે છે. એસ્ચેરીચીયા કોલી કોષો ફોટો-મેથિઓનાઇનનો ઉપયોગ એસ્ચેરીચીયા કોલી કોષોમાં રિકોમ્બિનન્ટ પ્રોટીનને લેબલ કરવા માટે થઈ શકે છે; જોકે સામાન્ય રીતે મેથિઓનાઇન એક દુર્લભ એમિનો એસિડ છે તેથી તેનો અર્થ એ કે તે માત્ર મર્યાદિત માળખાકીય માહિતી આપી શકે છે. તેમ છતાં, ફોટો-મેથિઓનાઇનને Ca2 + નિયમનકારી પ્રોટીન કેલમોડ્યુલિન (CaM જે 17-kDa હતું) માં સામેલ કરવામાં આવ્યું હતું જેમાં નવ મેથિઓનાઇન હોય છે અને માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી (MS) દ્વારા અભ્યાસ કરવામાં આવે છે. આ પદ્ધતિને જે અલગ બનાવે છે તે છે કોષોમાં સમાવેશ કરવા માટે DMEM (ડુલ્બેક્કોના મોડિફાઇડ ઇગલ 'સ લિમિટિંગ મીડિયમ) અથવા ડાયલાઈઝ્ડ ફેટલ બોવાઇન સીરમને બદલે ખનિજ ક્ષાર માધ્યમનો ઉપયોગ. ખનિજ મીઠાના માધ્યમનો ઉપયોગ અન્ય પ્રોટોકોલ (એલ. બી. માધ્યમમાં કોષોને ઉછેરવું, ધોવા પછી ધોવા અને વધુ ક્ષીણ માધ્યમમાં ઉછેર) સાથે જટિલ પગલાંને દૂર કરવા માટે શરૂઆતથી કોષોને ઉગાડવાની મંજૂરી આપે છે, જેનો અર્થ છે કે ફોટો-મેથિઓનાઇનને કોષની વૃદ્ધિની શરૂઆતમાં જ સામેલ કરી શકાય છે, જેની ઉપજ 30 ટકાથી વધુ હતી. કોષ વૃદ્ધિ પ્રક્રિયા દરમિયાન ફોટો-મેથિઓનાઇને કોઈ નુકસાન દર્શાવ્યું ન હતું અને એકવાર યુવી-એ પ્રકાશ દ્વારા ફોટો-સક્રિય થયા પછી, એકવાર એમએસએ નક્કી કર્યું હતું કે ફોટો-મેથિઓનાઇન લેબલવાળા સીએએમના શિખરો છે ત્યારે સીએએમ પાસે નવ અલગ ક્રોસ-લિંક સાઇટ્સ હતી. ફોટો-મેથિઓનાઇનનો ઉપયોગ માત્ર 3D પ્રોટીન માળખાના મેપિંગ માટે, પ્રોટીન-પ્રોટીન ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓનો અભ્યાસ કરવા માટે જ નહીં, પરંતુ હવે પ્રોટીનમાં હાઇડ્રોફોબિક પ્રદેશો માટે પણ થઈ શકે છે. સંદર્ભો બાયોકેમિસ્ટ્રી શોધ પદ્ધતિઓ ફોટોકેમિસ્ટ્રી આલ્ફા-એમિનો એસિડ એમિનો એસિડ ડેરિવેટિવ્ઝ ડાયઝિરીન્સ