Proximity ligation assay
প্রক্সিমিটি লাইগেশন অ্যাসে (ইন সিটু পি. এল. এ) এমন একটি প্রযুক্তি যা প্রোটিন, প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া, এক্সট্রাসেলুলার ভেসিকেল এবং উচ্চ নির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতার সাথে পোস্ট ট্রান্সলেশনাল পরিবর্তনগুলির সরাসরি সনাক্তকরণ অন্তর্ভুক্ত করার জন্য ঐতিহ্যবাহী ইমিউনোঅ্যাসেসের ক্ষমতাকে প্রসারিত করে। প্রোটিন লক্ষ্যগুলি সহজেই সনাক্ত করা যায় এবং একক অণু রেজোলিউশনের সাথে স্থানীয়করণ করা যায় এবং অপরিবর্তিত কোষ এবং টিস্যুতে উদ্দেশ্যমূলকভাবে পরিমাপ করা যায়। শুধুমাত্র কয়েকটি কোষ ব্যবহার করে, উপ-কোষীয় ঘটনা, এমনকি ক্ষণস্থায়ী বা দুর্বল মিথস্ক্রিয়া, সিটুতে প্রকাশিত হয় এবং কোষের উপ-জনসংখ্যার মধ্যে পার্থক্য করা যেতে পারে। কয়েক ঘন্টার মধ্যে, প্রচলিত সহ-ইমিউনোপ্রিসিপিটেশন এবং সহ-স্থানীয়করণ কৌশলগুলির ফলাফল নিশ্চিত করা যেতে পারে। পি. এল. এ নীতি বিভিন্ন প্রজাতিতে উত্থিত দুটি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি আগ্রহের প্রোটিনের লক্ষ্য অ্যান্টিজেনকে সনাক্ত করে (চিত্র 1)। পি. এল. এ প্রোব নামে পরিচিত বিভিন্ন প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির ধ্রুবক অঞ্চলের বিরুদ্ধে নির্দেশিত গৌণ অ্যান্টিবডিগুলি (2o এবি) প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির সাথে আবদ্ধ হয় (চিত্র 2)। প্রতিটি পি. এল. এ প্রোবে একটি সংক্ষিপ্ত ক্রম নির্দিষ্ট ডি. এন. এ স্ট্র্যান্ড সংযুক্ত থাকে। যদি পি. এল. এ প্রোবগুলি কাছাকাছি থাকে (অর্থাৎ, যদি আগ্রহের দুটি মূল প্রোটিন কাছাকাছি থাকে, বা কোনও প্রোটিন কমপ্লেক্সের অংশ, যেমন চিত্রগুলিতে দেখানো হয়েছে), ডি. এন. এ স্ট্র্যান্ডগুলি উপযুক্ত স্তর এবং এনজাইমগুলির সাথে আরও দুটি ক্রম-নির্দিষ্ট ডি. এন. এ অলিগোনিউক্লিওটাইড যুক্ত করে ঘূর্ণায়মান বৃত্তের ডি. এন. এ সংশ্লেষণে অংশ নিতে পারে (চিত্র 3)। ডি. এন. এ সংশ্লেষণ প্রতিক্রিয়ার ফলে ডি. এন. এ বৃত্তের কয়েকশো গুণ বৃদ্ধি ঘটে। এরপরে, ফ্লুরোসেন্ট-লেবেলযুক্ত পরিপূরক অলিগোনিউক্লিওটাইড প্রোব যোগ করা হয় এবং তারা পরিবর্ধিত ডিএনএর সাথে আবদ্ধ হয় (চিত্র 4)। ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ দিয়ে দেখলে ফ্লুরোসেন্সের ফলস্বরূপ উচ্চ ঘনত্ব একটি স্বতন্ত্র উজ্জ্বল দাগ হিসাবে সহজেই দৃশ্যমান হয়। দেখানো নির্দিষ্ট ক্ষেত্রে (চিত্র 5), নিউক্লিয়াসটি বড় হয় কারণ এটি একটি বি-সেল লিম্ফোমা কোষ। আগ্রহের দুটি প্রোটিন হল একটি বি সেল রিসেপ্টর এবং এমওয়াইডি88। সাইটোপ্লাজমে মিথস্ক্রিয়ার সন্ধানটি আকর্ষণীয় ছিল কারণ বি কোষ রিসেপ্টরগুলি কোষের ঝিল্লিতে অবস্থিত বলে মনে করা হয়। অ্যাপ্লিকেশন পি. এল. এ উপরে বর্ণিত হিসাবে অন্যান্য অনেক বিষয়ের মধ্যে প্রাণী বিকাশ এবং স্তন ক্যান্সারের দিকগুলি অধ্যয়ন করতে ব্যবহৃত হয়েছে। সনাক্তকরণের নির্দিষ্টতা বৃদ্ধি, অনির্দিষ্ট দাগ হ্রাস এবং আরও ভাল স্থানীয়করণ সহ আই. এইচ. সি-র তুলনায় বিভিন্ন সুবিধা সহ মানব টিস্যুতে অ্যান্টিবডি বৈধকরণে ইন সিটু প্রক্সিমিটি লাইগেশন অ্যাসেস (আই. এস. পি. এল. এ) প্রয়োগ করা হয়েছে। প্রোটিন এবং আর. এন. এ-র সংযোগ অধ্যয়নের জন্য কৌশলটির একটি বৈচিত্র্য (আর. আই. এস. এইচ-পি. এল. এ) ব্যবহার করা হয়েছে। ইন সিটু পি. এল. এ-র আরেকটি বৈচিত্র্যের মধ্যে একটি মাল্টিপ্লেক্স পি. এল. এ অ্যাসে রয়েছে যা সমান্তরালে একাধিক প্রোটিন কমপ্লেক্স কল্পনা করা সম্ভব করে তোলে। পি. এল. এ-কে অন্যান্য রিড আউট ফর্ম যেমন এলিসা, ফ্লো সাইটোমেট্রি-র সঙ্গেও যুক্ত করা যেতে পারে। এবং ওয়েস্টার্ন ব্লটিং রেফারেন্স বায়োকেমিস্ট্রি সনাক্তকরণ প্রতিক্রিয়া ইমিউনোলজিক পরীক্ষা