Countercurrent chromatography
কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি (সিসিসি, কাউন্টার-কারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি) হল তরল-তরল ক্রোমাটোগ্রাফির একটি রূপ যা একটি তরল স্থির পর্যায় ব্যবহার করে যা অণুর জড়তা দ্বারা ধরে রাখা হয় যা কেন্দ্রমুখী বলের কারণে একটি কেন্দ্রত্যাগের কেন্দ্রের দিকে ত্বরান্বিত স্থির পর্যায় গঠন করে এবং একটি মিশ্রণের রাসায়নিক উপাদানগুলিকে পৃথক করতে, সনাক্ত করতে এবং পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়। তার বিস্তৃত অর্থে, পাল্টা-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফি সম্পর্কিত তরল ক্রোমাটোগ্রাফি কৌশলগুলির একটি সংগ্রহকে অন্তর্ভুক্ত করে যা কোনও কঠিন সমর্থন ছাড়াই দুটি অমিশ্রণীয় তরল পর্যায় নিয়োগ করে। দুটি তরল পর্যায় একে অপরের সংস্পর্শে আসে কারণ কমপক্ষে একটি পর্যায় একটি কলাম, একটি ফাঁপা নল বা চ্যানেলের সাথে সংযুক্ত চেম্বারগুলির একটি সিরিজের মাধ্যমে পাম্প করা হয়, যার মধ্যে উভয় পর্যায় রয়েছে। ফলস্বরূপ গতিশীল মিশ্রণ এবং নিষ্পত্তি ক্রিয়া দুটি পর্যায়ে উপাদানগুলিকে তাদের নিজ নিজ দ্রবণীয়তা দ্বারা পৃথক করার অনুমতি দেয়। পছন্দসই পৃথকীকরণের জন্য সঠিক নির্বাচনযোগ্যতা প্রদানের জন্য কমপক্ষে দুটি অমিশ্রণীয় তরল সমন্বিত বিভিন্ন ধরনের দ্বি-পর্যায় দ্রাবক ব্যবস্থা নিযুক্ত করা যেতে পারে। কিছু ধরনের বিপরীতমুখী ক্রোমাটোগ্রাফি, যেমন দ্বৈত প্রবাহ সিসিসি, একটি সত্যিকারের বিপরীতমুখী প্রক্রিয়া বৈশিষ্ট্যযুক্ত যেখানে দুটি অমিশ্রণীয় পর্যায় একে অপরের পাশ দিয়ে প্রবাহিত হয় এবং কলামের বিপরীত প্রান্তে প্রস্থান করে। তবে, প্রায়শই, একটি তরল স্থির পর্যায় হিসাবে কাজ করে এবং চলন্ত পর্যায়টি পাম্প করার সময় কলামে ধরে রাখা হয়। তরল স্থির পর্যায়টি কেন্দ্রমুখী বলের কারণে একটি কেন্দ্রত্যাগের কেন্দ্রের দিকে ত্বরান্বিত স্থির পর্যায় গঠনকারী অণুগুলির মাধ্যাকর্ষণ বা জড়তা দ্বারা জায়গায় রাখা হয়। মাধ্যাকর্ষণ পদ্ধতির একটি উদাহরণ হল ড্রপলেট কাউন্টার কারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি (ডি. সি. সি. সি)। দুটি পদ্ধতি রয়েছে যার দ্বারা স্থির পর্যায়টি কেন্দ্রমুখী বল দ্বারা ধরে রাখা হয়ঃ হাইড্রোস্ট্যাটিক এবং হাইড্রোডায়নামিক। হাইড্রোস্ট্যাটিক পদ্ধতিতে, কলামটি একটি কেন্দ্রীয় অক্ষের চারপাশে ঘোরানো হয়। হাইড্রোস্ট্যাটিক যন্ত্রগুলি সেন্ট্রিফিউগাল পার্টিশন ক্রোমাটোগ্রাফি (সিপিসি) নামে বাজারজাত করা হয়। হাইড্রোডায়নামিক যন্ত্রগুলি প্রায়শই উচ্চ-গতির বা উচ্চ-কার্যকারিতা পাল্টা-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফি (যথাক্রমে এইচএসসিসিসি এবং এইচপিসিসিসি) যন্ত্র হিসাবে বাজারজাত করা হয় যা কলামে স্থির পর্যায় ধরে রাখতে হেলিকাল কয়েলে আর্কিমিডিসের স্ক্রু বলের উপর নির্ভর করে। একটি সিসিসি সিস্টেমের উপাদানগুলি বেশিরভাগ তরল ক্রোমাটোগ্রাফি কনফিগারেশনের অনুরূপ, যেমন উচ্চ-কার্যকারিতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (এইচপিএলসি)। এক বা একাধিক পাম্প পর্যায়গুলি সি. সি. সি যন্ত্রের কলামে পৌঁছে দেয়। একটি স্বয়ংক্রিয় বা ম্যানুয়াল সিরিঞ্জ দিয়ে ভরা একটি নমুনা লুপের মাধ্যমে কলামে নমুনাগুলি প্রবর্তন করা হয়। অতিবেগুনী-দৃশ্যমান স্পেকট্রোস্কোপি বা ভর স্পেকট্রোমেট্রি-র মতো বিভিন্ন ডিটেক্টর দিয়ে বহির্গমন পর্যবেক্ষণ করা হয়। পাম্প, সিসিসি যন্ত্র, নমুনা ইনজেকশন এবং সনাক্তকরণ ম্যানুয়ালি বা মাইক্রোপ্রসেসর দিয়ে নিয়ন্ত্রণ করা যেতে পারে। ইতিহাস আধুনিক পাল্টা-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফি তত্ত্ব এবং অনুশীলনের পূর্বসূরি ছিল পাল্টা-বর্তমান বিতরণ (সিসিডি)। 1930-এর দশকে র্যান্ডাল এবং লংটিন সিসিডি তত্ত্বটি বর্ণনা করেছিলেন। আর্চার মার্টিন এবং রিচার্ড লরেন্স মিলিংটন সিঞ্জ 1940-এর দশকে পদ্ধতিটি আরও উন্নত করেছিলেন। অবশেষে, লাইম্যান সি ক্রেইগ 1944 সালে ক্রেইগ কাউন্টারকারেন্ট ডিস্ট্রিবিউশন যন্ত্রপাতি চালু করেন যা পরীক্ষাগারের কাজের জন্য সিসিডিকে ব্যবহারিক করে তোলে। বেশ কয়েক দশক ধরে বিভিন্ন ধরনের দরকারী যৌগকে আলাদা করতে সিসিডি ব্যবহার করা হয়েছিল। স্ট্যান্ডার্ড কলাম ক্রোমাটোগ্রাফি একটি কঠিন স্থির পর্যায় এবং একটি তরল গতিশীল পর্যায় নিয়ে গঠিত, যেখানে গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি (জিসি) একটি কঠিন সমর্থন এবং একটি বায়বীয় গতিশীল পর্যায়ে একটি কঠিন বা তরল স্থির পর্যায় ব্যবহার করে। বিপরীতে, তরল-তরল ক্রোমাটোগ্রাফিতে, গতিশীল এবং স্থির উভয় পর্যায়ই তরল। তবে, বৈপরীত্যটি প্রথমে যতটা দেখা যায় ততটা তীব্র নয়। উদাহরণস্বরূপ, বিপরীত-পর্যায় ক্রোমাটোগ্রাফিতে, স্থির পর্যায়কে একটি তরল হিসাবে বিবেচনা করা যেতে পারে যা একটি মাইক্রো-ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কঠিন সমর্থনের সাথে রাসায়নিক বন্ধন দ্বারা স্থির থাকে। বিপরীতমুখী ক্রোমাটোগ্রাফিতে কেন্দ্রমুখী বা মহাকর্ষীয় শক্তি স্থির তরল স্তরকে অচল করে দেয়। কঠিন সাপোর্টগুলি বাদ দিয়ে, কলামে অ্যানালাইটের স্থায়ী শোষণ এড়ানো হয় এবং অ্যানালাইটের একটি উচ্চ পুনরুদ্ধার অর্জন করা যেতে পারে। পাল্টা-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফি যন্ত্রটি কেবল সচল এবং স্থির পর্যায়গুলি পরিবর্তন করে স্বাভাবিক পর্যায় ক্রোমাটোগ্রাফি এবং বিপরীত-পর্যায় ক্রোমাটোগ্রাফির মধ্যে সহজেই পরিবর্তিত হয়। কলাম ক্রোমাটোগ্রাফির ক্ষেত্রে, বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ স্থির পর্যায়ের মাধ্যম এবং এর বিশেষ বৈশিষ্ট্যগুলির দ্বারা পৃথকীকরণের সম্ভাবনা সীমিত থাকে। বিপরীতমুখী ক্রোমাটোগ্রাফিতে প্রায় যে কোনও জোড়া অমিশ্রণীয় সমাধান ব্যবহার করা যেতে পারে যদি স্থির পর্যায়টি সফলভাবে ধরে রাখা যায়। দ্রাবকের খরচও সাধারণত এইচ. পি. এল. সি-র তুলনায় কম হয়। কলাম ক্রোমাটোগ্রাফির তুলনায়, প্রবাহ এবং মোট দ্রাবক ব্যবহার বেশিরভাগ বিপরীত-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফি পৃথকীকরণের অর্ধেক এমনকি দশমাংশ পর্যন্ত হ্রাস করা যেতে পারে। এছাড়াও, স্থির পর্যায়ের মাধ্যম ক্রয় ও নিষ্পত্তির খরচ বাদ দেওয়া হয়। পাল্টা-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফির আরেকটি সুবিধা হল যে পরীক্ষাগারে পরিচালিত পরীক্ষাগুলি শিল্প ভলিউমে স্কেল করা যেতে পারে। যখন গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি বা এইচ. পি. এল. সি বড় পরিমাণে সঞ্চালিত হয়, তখন পৃষ্ঠ-থেকে-আয়তনের অনুপাত এবং প্রবাহের গতিবিদ্যার সমস্যাগুলির কারণে রেজোলিউশন হারিয়ে যায়; উভয় পর্যায়ই তরল হলে এটি এড়ানো হয়। সিসিসি পৃথকীকরণ প্রক্রিয়াটি তিনটি পর্যায়ে ঘটে বলে মনে করা যেতে পারেঃ মিশ্রণ, নিষ্পত্তি এবং দুটি পর্যায়ের পৃথকীকরণ (যদিও এগুলি প্রায়শই অবিচ্ছিন্নভাবে ঘটে)। পর্যায়গুলির মধ্যে আন্তঃপৃষ্ঠীয় ক্ষেত্র সর্বাধিকতর করার জন্য এবং ভর স্থানান্তর বাড়ানোর জন্য তীব্র মিশ্রণ গুরুত্বপূর্ণ। বিশ্লেষক তার বিভাজন সহগ অনুসারে পর্যায়গুলির মধ্যে বিতরণ করবে যাকে বিতরণ সহগ, বিতরণ ধ্রুবক বা বিভাজন অনুপাতও বলা হয় এবং পি, কে, ডি, কেসি বা কেডি দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করা হয়। একটি নির্দিষ্ট বাইফাসিক দ্রাবক ব্যবস্থায় একটি বিশ্লেষকের জন্য বিভাজন সহগ যন্ত্রের আয়তন, প্রবাহের হার, স্থির পর্যায় ধারণ আয়তনের অনুপাত এবং স্থির পর্যায়কে অচল করার জন্য প্রয়োজনীয় জি-বল থেকে স্বাধীন। স্থির পর্যায় ধরে রাখার মাত্রা একটি গুরুত্বপূর্ণ পরামিতি। স্থির পর্যায় ধারণকে প্রভাবিত করে এমন সাধারণ কারণগুলি হল প্রবাহের হার, বাইফাসিক দ্রাবক ব্যবস্থার দ্রাবক গঠন এবং জি-বল। স্থির পর্যায় ধারণকে স্থির পর্যায় আয়তন ধারণ অনুপাত (এস. এফ) দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করা হয় যা স্থির পর্যায়ের আয়তনকে যন্ত্রের মোট আয়তন দ্বারা ভাগ করা হয়। নিষ্পত্তি সময় দ্রাবক ব্যবস্থা এবং নমুনা ম্যাট্রিক্সের একটি বৈশিষ্ট্য, যা উভয়ই স্থির পর্যায় ধারণকে ব্যাপকভাবে প্রভাবিত করে। বেশিরভাগ প্রক্রিয়া রসায়নবিদদের কাছে, "বিপরীতমুখী" শব্দটি দুটি অমিশ্রণীয় তরলকে বোঝায় যা বিপরীত দিকে চলে, যেমনটি সাধারণত বড় কেন্দ্রত্যাগী এক্সট্র্যাক্টর ইউনিটে ঘটে। দ্বৈত প্রবাহ (নীচে দেখুন) সি. সি. সি ব্যতীত, বেশিরভাগ বিপরীতমুখী ক্রোমাটোগ্রাফি পদ্ধতিতে একটি স্থির পর্যায় এবং একটি গতিশীল পর্যায় থাকে। এমনকি এই পরিস্থিতিতেও যন্ত্রের কলামের মধ্যে বিপরীত প্রবাহ ঘটে। বেশ কয়েকজন গবেষক সিসিসি এবং সিপিসি উভয়ের নাম পরিবর্তন করে তরল-তরল ক্রোমাটোগ্রাফি করার প্রস্তাব দিয়েছেন, তবে অন্যরা মনে করেন যে "বিপরীতমুখী" শব্দটি নিজেই একটি ভুল নাম। কলাম ক্রোমাটোগ্রাফি এবং এইচপিএলসি-র বিপরীতে, কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি অপারেটররা কলাম ভলিউমের তুলনায় বড় ভলিউম ইনজেক্ট করতে পারে। সাধারণত কয়েল ভলিউমের 5 থেকে 10 শতাংশ ইনজেকশন দেওয়া যেতে পারে। কিছু কিছু ক্ষেত্রে এটি কয়েলের আয়তনের 15 থেকে 20 শতাংশ পর্যন্ত বৃদ্ধি করা যেতে পারে। সাধারণত, বেশিরভাগ আধুনিক বাণিজ্যিক সিসিসি এবং সিপিসি 5 থেকে 40 গ্রাম/এল ক্ষমতা ইনজেকশন করতে পারে। পরিসীমা এত বড়, এমনকি একটি নির্দিষ্ট যন্ত্রের জন্যও, সমস্ত যন্ত্রের বিকল্পগুলি ছেড়ে দিন, কারণ লক্ষ্য, ম্যাট্রিক্স এবং উপলব্ধ বাইফাসিক দ্রাবকের ধরণ এতটাই পরিবর্তিত হয়। প্রায় 10 গ্রাম/এল একটি আরও সাধারণ মান হবে, যা বেশিরভাগ অ্যাপ্লিকেশন বেস মান হিসাবে ব্যবহার করতে পারে। বিপরীতমুখী পৃথকীকরণ শুরু হয় কাঙ্ক্ষিত পৃথকীকরণের জন্য একটি উপযুক্ত বাইফাসিক দ্রাবক ব্যবস্থা বেছে নেওয়ার মাধ্যমে। বিভিন্ন অনুপাতে এন-হেক্সেন (বা হেপ্টেন), ইথাইল অ্যাসিটেট, মিথানল এবং জলের সংমিশ্রণ সহ সি. সি. সি অনুশীলনকারীর কাছে বাইফাসিক দ্রাবক মিশ্রণের একটি বিস্তৃত বিন্যাস পাওয়া যায়। এই মৌলিক দ্রাবক ব্যবস্থাকে কখনও কখনও এইচ. ই. এম. ওয়াট দ্রাবক ব্যবস্থা হিসাবে উল্লেখ করা হয়। দ্রাবক ব্যবস্থার নির্বাচন সিসিসি সাহিত্যের পর্যালোচনার দ্বারা পরিচালিত হতে পারে। একটি সর্বোত্তম দ্রাবক ব্যবস্থা নির্ধারণের জন্য পাতলা স্তর ক্রোমাটোগ্রাফির পরিচিত কৌশলও ব্যবহার করা যেতে পারে। "পরিবার"-তে দ্রাবক ব্যবস্থার সংগঠন দ্রাবক ব্যবস্থার পছন্দকেও ব্যাপকভাবে সহজ করেছে। একটি দ্রাবক ব্যবস্থা এক-ফ্লাস্ক বিভাজন পরীক্ষার মাধ্যমে পরীক্ষা করা যেতে পারে। পার্টিশনিং পরীক্ষা থেকে পরিমাপ করা পার্টিশন সহগটি যৌগের এলিউশন আচরণ নির্দেশ করবে। সাধারণত, এমন একটি দ্রাবক ব্যবস্থা বেছে নেওয়া বাঞ্ছনীয় যেখানে লক্ষ্য যৌগের (গুলি) বিভাজন সহগ 0.25 এবং 8 এর মধ্যে থাকে। ঐতিহাসিকভাবে, মনে করা হত যে কোনও বাণিজ্যিক বিপরীতমুখী ক্রোমাটোগ্রাফ আয়নিক তরলের উচ্চ সান্দ্রতার সঙ্গে মোকাবিলা করতে পারে না। যাইহোক, 30 থেকে 70 +% আয়নিক তরল (এবং সম্ভাব্য 100% আয়নিক তরল, যদি উভয় পর্যায়ই উপযুক্তভাবে কাস্টমাইজড আয়নিক তরল হয়) সমন্বিত করতে পারে এমন আধুনিক যন্ত্রগুলি উপলব্ধ হয়েছে। আয়নিক তরলগুলি মেরু/অ-মেরু জৈব, আকিরাল এবং কাইরাল যৌগ, জৈব-অণু এবং অজৈব পৃথকীকরণের জন্য কাস্টমাইজ করা যেতে পারে, কারণ আয়নিক তরলগুলি অসাধারণ সচ্ছলতা এবং নির্দিষ্টতার জন্য কাস্টমাইজ করা যেতে পারে। বাইফাসিক দ্রাবক ব্যবস্থা বেছে নেওয়ার পরে একটি ব্যাচ তৈরি করা হয় এবং একটি বিভাজক ফানেলে ভারসাম্য বজায় রাখা হয়। এই পদক্ষেপকে দ্রাবক ব্যবস্থার প্রাক-ভারসাম্য বলা হয়। দুটি পর্যায় পৃথক করা হয়েছে। তারপর কলামটি একটি পাম্প দিয়ে স্থির দিয়ে ভরা হয়। এরপরে, কলামটি একটি ভারসাম্য পরিস্থিতি সেট করা হয়, যেমন পছন্দসই ঘূর্ণন গতি, এবং মোবাইল পর্যায়টি কলামের মাধ্যমে পাম্প করা হয়। চলন্ত পর্যায়টি স্থির পর্যায়ের একটি অংশকে স্থানচ্যুত করে যতক্ষণ না কলামের ভারসাম্য অর্জন করা হয় এবং চলন্ত পর্যায়টি কলাম থেকে সরে যায়। কলামের ভারসাম্য ধাপের সময় বা ভারসাম্য সম্পন্ন হওয়ার পরে যে কোনও সময় নমুনাটি কলামে প্রবর্তন করা যেতে পারে। এলাউন্টের ভলিউম কলামে মোবাইল ফেজের ভলিউম অতিক্রম করার পরে, নমুনা উপাদানগুলি নির্গত হতে শুরু করবে। ইঞ্জেকশনের সময় থেকে চলন্ত পর্যায়ের একটি কলাম ভলিউম কলামের মধ্য দিয়ে গেলে একতার একটি বিভাজন সহগ সহ যৌগগুলি নির্গত হবে। ফলাফলের রেজোলিউশন বাড়াতে সাহায্য করার জন্য যৌগটি অন্য একটি স্থির পর্যায়ে চালু করা যেতে পারে। লক্ষ্য যৌগ (গুলি) বিচ্ছিন্ন হওয়ার পরে বা কলামের মধ্য দিয়ে স্থির পর্যায়টি পাম্প করে কলামটি বহিষ্কৃত হওয়ার পরে প্রবাহ বন্ধ হয়ে যায়। কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফির একটি প্রধান প্রয়োগের উদাহরণ হল উদ্ভিদ নির্যাসের মতো একটি অত্যন্ত জটিল ম্যাট্রিক্স নেওয়া, একটি সাবধানে নির্বাচিত দ্রাবক সিস্টেমের সাথে কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি পৃথকীকরণ সম্পাদন করা এবং সমস্ত নমুনা পুনরুদ্ধারের জন্য কলামটি এক্সট্রুড করা। মূল জটিল ম্যাট্রিক্সকে বিচ্ছিন্ন সংকীর্ণ মেরুকরণ ব্যান্ডে বিভক্ত করা হবে, যা পরে রাসায়নিক গঠন বা জৈব ক্রিয়াকলাপের জন্য পরীক্ষা করা যেতে পারে। অন্যান্য ক্রোমাটোগ্রাফিক এবং অ-ক্রোমাটোগ্রাফিক কৌশলগুলির সাথে এক বা একাধিক বিপরীত-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফি পৃথকীকরণ সম্পাদন করা অত্যন্ত জটিল ম্যাট্রিক্সের গঠনগত স্বীকৃতিতে দ্রুত অগ্রগতির সম্ভাবনা রাখে। ড্রপলেট সিসিসি ড্রপলেট কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি (ডিসিসিসি) 1970 সালে তানিমুরা, পিসানো, ইতো এবং বোম্যান দ্বারা চালু করা হয়েছিল। ডিসিসিসি কেবল মাধ্যাকর্ষণ ব্যবহার করে স্থির পর্যায়ের মধ্য দিয়ে চলন্ত পর্যায়কে সরাতে যা সিরিজে সংযুক্ত দীর্ঘ উল্লম্ব টিউবগুলিতে রাখা হয়। অবরোহী মোডে, ঘন ভ্রাম্যমাণ পর্যায় এবং নমুনার ফোঁটাগুলিকে শুধুমাত্র মাধ্যাকর্ষণ ব্যবহার করে হালকা স্থির পর্যায়ের কলামের মধ্য দিয়ে পড়তে দেওয়া হয়। যদি একটি কম ঘন ভ্রাম্যমাণ পর্যায় ব্যবহার করা হয় তবে এটি স্থির পর্যায়ের মধ্য দিয়ে উঠবে; এটিকে আরোহী মোড বলা হয়। এক কলাম থেকে অন্য কলামে যত উজ্জ্বলতা স্থানান্তরিত হয়; যত বেশি কলাম ব্যবহার করা হয়, তত বেশি তাত্ত্বিক প্লেট অর্জন করা যায়। ডি. সি. সি. সি প্রাকৃতিক পণ্য পৃথকীকরণের সাথে কিছু সাফল্য উপভোগ করেছে তবে উচ্চ-গতির পাল্টা-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফির দ্রুত বিকাশের দ্বারা মূলত গ্রহন করা হয়েছিল। ডিসিসিসির প্রধান সীমাবদ্ধতা হল যে প্রবাহের হার কম, এবং বেশিরভাগ বাইনারি দ্রাবক ব্যবস্থার জন্য দুর্বল মিশ্রণ অর্জন করা হয়। সি. সি. সি-র আধুনিক যুগ ডঃ ইয়োইচিরো ইতো দ্বারা গ্রহ কেন্দ্রত্যাগের বিকাশের সাথে শুরু হয়েছিল যা 1966 সালে একটি বদ্ধ হেলিকাল টিউব হিসাবে প্রথম চালু করা হয়েছিল যা একটি "গ্রহ" অক্ষের উপর ঘোরানো হয়েছিল যা একটি "সূর্য" অক্ষের উপর পরিণত হয়। পরবর্তীকালে একটি ফ্লো-থ্রু মডেল তৈরি করা হয় এবং 1970 সালে নতুন কৌশলটিকে কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি বলা হয়। ক্লোরোফর্মে ডিএনপি অ্যামিনো অ্যাসিডের পরীক্ষামূলক মিশ্রণ ব্যবহার করে কৌশলটি আরও উন্নত করা হয়েছিলঃ হিমবাহ অ্যাসিটিক অ্যাসিডঃ 0.1 এম জলীয় হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড (2ঃ2:1 ভি/ভি) দ্রাবক ব্যবস্থা। যন্ত্রটি ইঞ্জিনিয়ার করার জন্য অনেক উন্নয়নের প্রয়োজন ছিল যাতে কয়েল (গুলি) এর মাধ্যমে পর্যায়গুলি পাম্প করার সময় প্রয়োজনীয় গ্রহের গতি বজায় রাখা যায়। দুটি অক্ষের আপেক্ষিক ঘূর্ণন (সিঙ্ক্রোনাস বা নন-সিঙ্ক্রোনাস), কুণ্ডলীর মধ্য দিয়ে প্রবাহের দিক এবং রটার কোণের মতো পরামিতিগুলি তদন্ত করা হয়েছিল। 1982 সালের মধ্যে এই প্রযুক্তিটি যথেষ্ট উন্নত ছিল যাতে এই কৌশলটিকে "হাই-স্পিড" কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি (এইচএসসিসিসি) বলা যায়। পিটার কারমেসি প্রাথমিকভাবে পিসি ইনকর্পোরেটেড. ইটো মাল্টিলেয়ার কয়েল সেপারেটর/এক্সট্র্যাক্টরকে বাণিজ্যিকীকরণ করেছিলেন যা একটি একক ববিন (যার উপর কয়েলটি ক্ষত করা হয়) এবং একটি পাল্টা ভারসাম্য ব্যবহার করে, পাশাপাশি "ফ্লাইং লিড" এর একটি সেট যা ববিনগুলিকে সংযুক্ত করে। ডাঃ ওয়াল্টার কনওয়ে এবং অন্যান্যরা পরে ববিনের নকশাটি এমনভাবে বিকশিত করেছিলেন যে একাধিক কয়েল, এমনকি বিভিন্ন টিউবিং আকারের কয়েলগুলি একক ববিনের উপর স্থাপন করা যেতে পারে। এডওয়ার্ড চৌ পরে ফার্ম্যাটেক সিসিসি হিসাবে একটি ট্রিপল ববিনের নকশা বিকশিত এবং বাণিজ্যিকীকরণ করেছিলেন যার তিনটি ববিনের মধ্যে নেতৃত্বের জন্য একটি ডি-টুইস্ট প্রক্রিয়া ছিল। 1993 সালে মুক্তিপ্রাপ্ত কোয়াট্রো সিসিসি একটি অভিনব মিরর ইমেজ, টুইন ববিন ডিজাইন ব্যবহার করে বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ যন্ত্রগুলিকে আরও বিকশিত করে, যার জন্য একাধিক ববিনের মধ্যে ফার্ম্যাটেকের ডি-টুইস্ট পদ্ধতির প্রয়োজন ছিল না, তাই এখনও একই যন্ত্রের উপর একাধিক ববিনের ব্যবস্থা করতে পারে। হাইড্রোডায়নামিক সিসিসি এখন প্রতি যন্ত্রে 4টি পর্যন্ত কয়েল সহ উপলব্ধ। এই কয়েলগুলি পি. টি. এফ. ই, পি. ই. কে, পি. ভি. ডি. এফ বা স্টেইনলেস স্টিলের নলগুলিতে হতে পারে। "2ডি" সিসিসি-র সুবিধার্থে 2,3 বা 4টি কয়েল একই বোরের হতে পারে (নীচে দেখুন)। কয়েলগুলি কয়েলটি লম্বা করতে এবং ক্ষমতা বাড়ানোর জন্য সিরিজে সংযুক্ত করা যেতে পারে, অথবা কয়েলগুলি সমান্তরালভাবে সংযুক্ত করা যেতে পারে যাতে 2,3, বা 4 টি বিচ্ছেদ একই সাথে করা যেতে পারে। কয়েলগুলি বিভিন্ন আকারের হতে পারে, একটি যন্ত্রের উপর, একটি যন্ত্রের উপর 1 থেকে 6 মিমি পর্যন্ত, এইভাবে একটি একক যন্ত্রকে প্রতিদিন মিলিগ্রাম থেকে কিলো পর্যন্ত অনুকূলিত করার অনুমতি দেয়। আরও সম্প্রতি কাস্টম বা স্ট্যান্ডার্ড বিকল্প হিসাবে উড়ন্ত সীসার পরিবর্তে বিভিন্ন হাইড্রোডায়নামিক সিসিসি ডিজাইনের জন্য ঘূর্ণায়মান সিলের সাথে যন্ত্রের ডেরিভেটিভ দেওয়া হয়েছে। উচ্চ কার্যকারিতা সিসিসি সরঞ্জামের পরিচালন নীতির জন্য একটি ববিনের চারপাশে কুণ্ডলিত একটি নল সমন্বিত একটি কলাম প্রয়োজন। ববিনটি একটি দ্বি-অক্ষ জাইরেটরি গতিতে (একটি কার্ডিওড) ঘোরানো হয়, যার ফলে প্রতিটি ঘূর্ণনের সময় কলামে একটি পরিবর্তনশীল জি-বল কাজ করে। এই গতির ফলে কলামটি প্রতি ঘূর্ণনে একটি বিভাজনের ধাপ দেখতে পায় এবং দুটি অমিশ্রণীয় তরল পর্যায়ের মধ্যে বিভাজনের সহগের কারণে নমুনার উপাদানগুলি কলামে আলাদা হয়। "হাই-পারফরম্যান্স" কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি (এইচ. পি. সি. সি. সি) এইচ. এস. সি. সি-র মতোই কাজ করে। একটি সাত বছরের গবেষণা ও উন্নয়ন প্রক্রিয়া এইচ. পি. সি. সি. সি যন্ত্র তৈরি করেছিল যা এইচ. এস. সি. সি. সি মেশিনের 80 গ্রামের তুলনায় 240 গ্রাম উৎপাদন করেছিল। জি-বলের এই বৃদ্ধি এবং কলামের বৃহত্তর বোর উন্নত মোবাইল ফেজ প্রবাহের হার এবং উচ্চতর স্থির ফেজ ধরে রাখার কারণে থ্রুপুট দশগুণ বৃদ্ধি করতে সক্ষম হয়েছে। কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি একটি প্রস্তুতিমূলক তরল ক্রোমাটোগ্রাফি কৌশল, তবে উচ্চ-জি এইচপিসিসিসি যন্ত্রের আবির্ভাবের সাথে সাথে এখন কয়েক মিলিগ্রামের মতো কম নমুনা লোডিং সহ যন্ত্রগুলি পরিচালনা করা সম্ভব, যেখানে অতীতে শত শত মিলিগ্রাম প্রয়োজন ছিল। এই কৌশলটির প্রধান প্রয়োগের ক্ষেত্রগুলির মধ্যে রয়েছে প্রাকৃতিক পণ্য পরিশোধন এবং ওষুধের বিকাশ। হাইড্রোস্ট্যাটিক সিসিসি হাইড্রোস্ট্যাটিক সিসিসি বা সেন্ট্রিফিউগাল পার্টিশন ক্রোমাটোগ্রাফি (সিপিসি) 1980-এর দশকে জাপানি সংস্থা সানকি ইঞ্জিনিয়ারিং লিমিটেড দ্বারা উদ্ভাবিত হয়েছিল, যার সভাপতি ছিলেন কানিচি নুনোগাকি। 1990-এর দশকের শেষের দিক থেকে ফ্রান্সে সিপিসি ব্যাপকভাবে বিকশিত হয়েছে। ফ্রান্সে, তারা প্রাথমিকভাবে সান্কি দ্বারা প্রবর্তিত স্ট্যাকড ডিস্ক ধারণাকে অপ্টিমাইজ করেছিল। আরও সম্প্রতি, ফ্রান্স এবং যুক্তরাজ্যে, পিটিএফই, স্টেইনলেস স্টিল বা টাইটানিয়াম রটার দিয়ে নন-স্ট্যাকড ডিস্ক সিপিসি কনফিগারেশন তৈরি করা হয়েছে। এগুলি মূল ধারণার স্ট্যাক করা ডিস্কগুলির মধ্যে সম্ভাব্য ফুটো কাটিয়ে উঠতে এবং ভাল উত্পাদন অনুশীলনের জন্য বাষ্প পরিষ্কার করার অনুমতি দেওয়ার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। 100 মিলি থেকে 12 লিটার পর্যন্ত ভলিউম বিভিন্ন রটার উপকরণগুলিতে পাওয়া যায়। 25-লিটার রটার সিপিসি-তে একটি টাইটানিয়াম রটার রয়েছে। এই কৌশলটি কখনও কখনও "দ্রুত" সিপিসি বা "উচ্চ-কার্যকারিতা" সিপিসি নামে বিক্রি করা হয়। উপলব্ধি কেন্দ্রত্যাগী বিভাজন ক্রোমাটোগ্রাফ যন্ত্রটি একটি অনন্য রটার দিয়ে গঠিত যা কলাম ধারণ করে। এই ঘূর্ণন তার কেন্দ্রীয় অক্ষের উপর আবর্তিত হয় (যখন এইচ. এস. সি. সি. সি কলাম তার গ্রহের অক্ষের উপর আবর্তিত হয় এবং একই সাথে অন্য সৌর অক্ষের চারপাশে উৎকেন্দ্রিকভাবে আবর্তিত হয়)। কম কম্পন এবং গোলমাল সহ, সিপিসি 500 থেকে 2000 আরপিএম পর্যন্ত একটি সাধারণ ঘূর্ণন গতির পরিসীমা সরবরাহ করে। হাইড্রোডায়নামিক সিসিসির বিপরীতে, ঘূর্ণনের গতি স্থির পর্যায়ের ধারণ আয়তনের অনুপাতের সাথে সরাসরি আনুপাতিক নয়। ডিসিসিসির মতো, সিপিসি অবরোহী বা আরোহী মোডে পরিচালিত হতে পারে, যেখানে দিকটি মাধ্যাকর্ষণের পরিবর্তে রটার দ্বারা উত্পন্ন বলের সাথে আপেক্ষিক। বৃহত্তর চেম্বার এবং চ্যানেল সহ একটি নতুন নকশা করা সিপিসি কলামকে কেন্দ্রাতিগ বিভাজন নিষ্কাশন (সিপিই) নামকরণ করা হয়েছে। সিপিই নকশায়, দ্রুত প্রবাহ হার এবং বর্ধিত কলাম লোডিং অর্জন করা যেতে পারে। সুবিধাগুলি সিপিসি দ্রুত ব্যাচ-উৎপাদনের জন্য বিশ্লেষণাত্মক যন্ত্রপাতি (কয়েক মিলিলিটার) থেকে শিল্প যন্ত্রপাতি (কয়েক লিটার) পর্যন্ত সরাসরি স্কেল-আপ প্রদান করে। সিপিসি জলীয় দ্বি-পর্যায়ের দ্রাবক ব্যবস্থার জন্য বিশেষভাবে উপযুক্ত বলে মনে হয়। সাধারণত, সিপিসি যন্ত্রগুলি দ্রাবক ব্যবস্থা ধরে রাখতে পারে যা পর্যায়গুলির মধ্যে ঘনত্বের সামান্য পার্থক্যের কারণে একটি হাইড্রোডায়নামিক যন্ত্রে ভালভাবে ধরে রাখা হয় না। এটি সিপিসি যন্ত্রের বিকাশের জন্য খুব সহায়ক হয়েছে যাতে প্রবাহের নিদর্শনগুলি কল্পনা করা যায় যা সিপিসি চেম্বারে একটি অ্যাসিঙ্ক্রোনাস ক্যামেরা এবং সিপিসি রটার দ্বারা ট্রিগার করা একটি স্ট্রোবোস্কোপের সাথে মিশ্রণ এবং বসতি স্থাপনের জন্ম দেয়। অপারেশনের পদ্ধতি বিজ্ঞানীর নির্দিষ্ট পৃথকীকরণের চাহিদা মেটানোর জন্য পূর্বোক্ত হাইড্রোডায়নামিক এবং হাইড্রোস্ট্যাটিক যন্ত্রগুলি বিভিন্ন উপায়ে বা অপারেশনের পদ্ধতিতে নিযুক্ত করা যেতে পারে। কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি কৌশলের শক্তি এবং সম্ভাবনার সুবিধা নেওয়ার জন্য ক্রিয়াকলাপের অনেক পদ্ধতি তৈরি করা হয়েছে। সাধারণত, বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ যন্ত্রের সাহায্যে নিম্নলিখিত পদ্ধতিগুলি সম্পাদন করা যেতে পারে। স্বাভাবিক-পর্যায় একটি বাইফাসিক দ্রাবক ব্যবস্থার অ-জলীয় বা পর্যায়কে চলন্ত পর্যায় হিসাবে কলামের মধ্য দিয়ে পাম্প করে স্বাভাবিক পর্যায় নির্গমন অর্জন করা হয়, যেখানে কলামে আরও মেরু স্থির পর্যায় বজায় রাখা হয়। এর মূল নামকরণের কারণ প্রাসঙ্গিক। যেহেতু কাগজের ক্রোমাটোগ্রাফির মূল স্থির পর্যায়গুলি ডায়াটোমাসিয়াস আর্থস (প্রাকৃতিক মাইক্রো-পোরাস সিলিকা)-এর মতো আরও দক্ষ উপকরণ দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়েছিল এবং তারপরে আধুনিক সিলিকা জেল, পাতলা-স্তর ক্রোমাটোগ্রাফি স্থির পর্যায়টি ছিল মেরু (সিলিকার সাথে সংযুক্ত হাইড্রক্সি গ্রুপ) এবং এন-হেক্সেন-এর মতো অ-মেরু দ্রাবকগুলির সাথে সর্বাধিক ধারণ অর্জন করা হয়েছিল। মেরু যৌগগুলিকে প্লেটের উপরে সরানোর জন্য ক্রমান্বয়ে আরও মেরু ইলুয়েন্ট ব্যবহার করা হয়েছিল। বিভিন্ন অ্যালকেন বন্ধনের পর্যায়গুলি পরীক্ষা করা হয়েছিল যার মধ্যে সি 18 সবচেয়ে জনপ্রিয় হয়ে ওঠে। অ্যালকেন চেইনগুলি সিলিকার সাথে রাসায়নিকভাবে আবদ্ধ ছিল এবং ইল্যুশন প্রবণতার একটি বিপরীত ঘটনা ঘটেছিল। এইভাবে একটি মেরু স্থির ক্রোমাটোগ্রাফি "স্বাভাবিক" পর্যায়ে পরিণত হয় এবং অ-মেরু স্থির পর্যায় ক্রোমাটোগ্রাফি "বিপরীত" পর্যায়ে পরিণত হয়। বিপরীত-পর্যায়ে বিপরীত-পর্যায়ে (যেমন। জলীয় গতিশীল পর্যায়) এলিউশন, জলীয় পর্যায়টি কম মেরু স্থির পর্যায় সহ গতিশীল পর্যায় হিসাবে ব্যবহৃত হয়। কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফিতে একই দ্রাবক ব্যবস্থা সাধারণ বা বিপরীত পর্যায় মোডে কেবল কলামের মধ্য দিয়ে মোবাইল পর্যায়ের প্রবাহের দিক পরিবর্তন করে ব্যবহার করা যেতে পারে। ইলুশন-এক্সট্রুশন একটি পৃথকীকরণ পরীক্ষার শেষে কলাম থেকে স্থির পর্যায়ের এক্সট্রুশন ঘূর্ণন বন্ধ করে এবং কলামের মাধ্যমে দ্রাবক বা গ্যাস পাম্প করে সিসিসি অনুশীলনকারীরা ই. ই. সি. সি. সি শব্দটির পরামর্শ দেওয়ার আগে ব্যবহার করেছিলেন। ইল্যুশন-এক্সট্রুশন মোডে (ই. ই. সি. সি. সি), ঘূর্ণন বজায় রাখার সময় সিস্টেমে পাম্প করা পর্যায়টি পরিবর্তন করে একটি নির্দিষ্ট বিন্দুর পরে মোবাইল পর্যায়টি এক্সট্রুড করা হয়। উদাহরণস্বরূপ, যদি একটি নির্দিষ্ট বিন্দুতে গতিশীল পর্যায় হিসাবে জলীয় পর্যায় দিয়ে পৃথকীকরণ শুরু করা হয় তবে জৈব পর্যায়টি কলামের মাধ্যমে পাম্প করা হয় যা কার্যকরভাবে পরিবর্তনের সময় কলামে উপস্থিত উভয় পর্যায়কে ধাক্কা দেয়। সম্পূর্ণ নমুনাটি বিস্তারের মাধ্যমে রেজোলিউশনের ক্ষতি ছাড়াই মেরুকরণের ক্রমে (স্বাভাবিক বা বিপরীত) বাদ দেওয়া হয়। এর জন্য দ্রাবক পর্যায়ের শুধুমাত্র একটি কলাম ভলিউমের প্রয়োজন হয় এবং পরবর্তী পৃথকীকরণের জন্য নতুন স্থির পর্যায়ে পূর্ণ কলামটি ছেড়ে যায়। গ্রেডিয়েন্ট একটি দ্রাবক গ্রেডিয়েন্টের ব্যবহার কলাম ক্রোমাটোগ্রাফিতে খুব ভালভাবে বিকশিত হয়েছে তবে সিসিসিতে কম দেখা যায়। মেরুকরণের বিস্তৃত পরিসর জুড়ে সর্বোত্তম রেজোলিউশন অর্জনের জন্য পৃথকীকরণের সময় মোবাইল পর্যায়ের মেরুকরণ বৃদ্ধি (বা হ্রাস) করে একটি দ্রাবক গ্রেডিয়েন্ট তৈরি করা হয়। উদাহরণস্বরূপ, একটি মিথানল-জল মোবাইল ফেজ গ্রেডিয়েন্ট স্থির পর্যায় হিসাবে হেপ্টেন ব্যবহার করে নিযুক্ত করা যেতে পারে। সমস্ত বাইফাসিক দ্রাবক ব্যবস্থায় এটি সম্ভব নয়, কারণ কলামের মধ্যে ভারসাম্য পরিস্থিতি বিঘ্নিত করে তৈরি স্থির পর্যায়ের অত্যধিক ক্ষতির কারণে। গ্রেডিয়েন্টগুলি ধাপে ধাপে বা ধারাবাহিকভাবে তৈরি করা যেতে পারে। ডুয়াল-মোডে, মোবাইল এবং স্থির পর্যায়গুলি পৃথকীকরণ পরীক্ষার মাধ্যমে আংশিকভাবে বিপরীত হয়। এর জন্য কলামের মাধ্যমে পাম্প করা পর্যায়ের পাশাপাশি প্রবাহের দিক পরিবর্তন করা প্রয়োজন। দ্বৈত-মোড অপারেশনটি কলাম থেকে পুরো নমুনাটি বের করে দেওয়ার সম্ভাবনা রয়েছে তবে প্রবাহের পর্যায় এবং দিক পরিবর্তন করে ইল্যুশনের ক্রমটি ব্যাহত হয়। দ্বৈত-প্রবাহ দ্বৈত-প্রবাহ, যা দ্বৈত, পাল্টা-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফি নামেও পরিচিত, তখন ঘটে যখন উভয় পর্যায়ই কলামের ভিতরে বিপরীত দিকে প্রবাহিত হয়। হাইড্রোডায়নামিক এবং হাইড্রোস্ট্যাটিক সিসিসি উভয়ের জন্য দ্বৈত-প্রবাহ পরিচালনার জন্য যন্ত্রগুলি উপলব্ধ। ডুয়াল-ফ্লো কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি প্রথম 1985 সালে ইয়োইচিরো ইতো দ্বারা ফোম সিসিসির জন্য বর্ণনা করা হয়েছিল যেখানে গ্যাস-তরল পৃথকীকরণ করা হয়েছিল। শীঘ্রই তরল-তরল পৃথকীকরণ অনুসরণ করা হয়। পাল্টা-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফি যন্ত্রটি অবশ্যই পরিবর্তন করতে হবে যাতে কলামের উভয় প্রান্তে প্রবেশ এবং নির্গমন ক্ষমতা উভয়ই থাকে। এই মোডটি কলামের মাঝখানে বা একটি হাইড্রোডায়নামিক যন্ত্রের দুটি ববিনের মধ্যে নমুনা প্রবর্তনের সাথে অবিচ্ছিন্ন বা ক্রমিক পৃথকীকরণের ব্যবস্থা করতে পারে। ইন্টারমিট্যান্ট কাউন্টারকারেন্ট এক্সট্রাকশন (আই. সি. সি. ই) নামে একটি কৌশল হল একটি আধা-ধারাবাহিক পদ্ধতি যেখানে পর্যায়গুলির প্রবাহকে স্বাভাবিক এবং বিপরীত-পর্যায়ের এলিউশনের মধ্যে "মাঝে মাঝে" পরিবর্তিত করা হয় যাতে স্থির পর্যায়টিও পরিবর্তিত হয়। পুনর্ব্যবহার এবং ক্রমিক পুনর্ব্যবহারযোগ্য ক্রোমাটোগ্রাফি এইচপিএলসি এবং সিসিসি উভয় ক্ষেত্রেই অনুশীলন করা হয়। পুনর্ব্যবহারযোগ্য ক্রোমাটোগ্রাফিতে, লক্ষ্যযুক্ত যৌগগুলি নির্গত হওয়ার পরে কলামে পুনরায় চালু করা হয়। কলামের মধ্য দিয়ে প্রতিটি পাস তাত্ত্বিক প্লেটের সংখ্যা বৃদ্ধি করে যা যৌগগুলি অনুভব করে এবং ক্রোমাটোগ্রাফিক রেজোলিউশন বাড়ায়। সরাসরি পুনর্ব্যবহার অবশ্যই একটি আইসক্রেটিক দ্রাবক ব্যবস্থার মাধ্যমে করা উচিত। এই মোডের সাহায্যে, বিচ্ছেদ সহজতর করার জন্য একই বা ভিন্ন কলামে নির্বাচিতভাবে পুনরায় ক্রোমাটোগ্রাফ করা যেতে পারে। নির্বাচিত পুনর্ব্যবহারের এই প্রক্রিয়াকে "হার্ট-কাট" বলা হয়েছে এবং পুনরুদ্ধারের কিছু ত্যাগের ক্ষতি সহ নির্বাচিত লক্ষ্য যৌগগুলিকে শুদ্ধ করতে বিশেষভাবে কার্যকর। একটি ক্রোমাটোগ্রাফি পরীক্ষা থেকে নির্বাচিত ভগ্নাংশগুলিকে অন্য ক্রোমাটোগ্রাফিক পদ্ধতির মাধ্যমে পুনরায় পৃথক করার প্রক্রিয়া বিজ্ঞানীদের দ্বারা দীর্ঘকাল ধরে অনুশীলন করা হয়েছে। পুনর্ব্যবহার এবং ক্রমিক ক্রোমাটোগ্রাফি এই প্রক্রিয়ার একটি সুশৃঙ্খল সংস্করণ। সিসিসিতে, কলামের পৃথকীকরণের বৈশিষ্ট্যগুলি কেবল বাইফাসিক দ্রাবক ব্যবস্থার গঠন পরিবর্তন করে পরিবর্তন করা যেতে পারে। আয়ন-বিনিময় এবং পিএইচ-জোন-পরিশোধন একটি প্রচলিত সিসিসি পরীক্ষায় যন্ত্রটি স্থির পর্যায়ে পূর্ণ হওয়ার আগে এবং গতিশীল পর্যায়ে ভারসাম্য বজায় রাখার আগে বাইফাসিক দ্রাবক ব্যবস্থাটি প্রাক-ভারসাম্যপূর্ণ হয়। প্রাক-ভারসাম্যের পরে উভয় পর্যায়কে পরিবর্তন করে একটি আয়ন-এক্সচেঞ্জ মোড তৈরি করা হয়েছে। সাধারণত, একটি আয়নিক ডিসপ্লেসার (বা এলুটার) ভ্রাম্যমাণ পর্যায়ে যোগ করা হয় এবং একটি আয়নিক রিটেইনার স্থির পর্যায়ে যোগ করা হয়। উদাহরণস্বরূপ, জলীয় গতিশীল পর্যায়ে একটি স্থানচ্যুতিকারী হিসাবে এন. এ. আই থাকতে পারে এবং জৈব স্থির পর্যায়টি আলিকাট 336 নামক কোয়াটারনারি অ্যামোনিয়াম লবণের সাথে একটি অনুচর হিসাবে সংশোধন করা যেতে পারে। পিএইচ-জোন-রিফাইনিং মোড হল এক ধরনের আয়ন-এক্সচেঞ্জ মোড যা অ্যাসিড এবং/অথবা ক্ষারগুলিকে দ্রাবক পরিবর্তনকারী হিসাবে ব্যবহার করে। সাধারণত, বিশ্লেষকরা তাদের পিকেএ মান দ্বারা নির্ধারিত ক্রমে বাদ দেওয়া হয়। উদাহরণস্বরূপ, হেক্সেন-ইথাইল অ্যাসিটেট-মিথানল-ওয়াটার (3ঃ7:1ঃ9, ভি/ভি) দ্বারা গঠিত বাইফাসিক দ্রাবক ব্যবস্থার সাথে জেলসেমিয়াম এলিগ্যানস স্টেম এক্সট্র্যাক্টের 4.5 গ্রাম নমুনা থেকে 6টি অক্সিন্ডোল অ্যালকালয়েড পৃথক করা হয়েছিল যেখানে 10 এম. এম ট্রাইথাইলামাইন (টি. ই. এ) একটি রিটেইনার হিসাবে উপরের জৈব স্থির পর্যায়ে এবং 10 এম. এম হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড (এইচ. সি. এল) একটি ইলুটার হিসাবে জলীয় মোবাইল পর্যায়ে যোগ করা হয়েছিল। আয়ন-এক্সচেঞ্জ মোড যেমন পিএইচ-জোন-রিফাইনিং-এর অসাধারণ সম্ভাবনা রয়েছে কারণ উচ্চ নমুনা লোড পৃথকীকরণ শক্তি ত্যাগ না করেই অর্জন করা যেতে পারে। এটি অ্যালকালয়েডযুক্ত নাইট্রোজেন বা ফ্যাটি অ্যাসিডযুক্ত কার্বক্সিলিক অ্যাসিডের মতো আয়নীকরণযোগ্য যৌগগুলির সাথে সবচেয়ে ভাল কাজ করে। বিভিন্ন ধরনের রাসায়নিক পদার্থ শুদ্ধ করার জন্য শিল্প ও পরীক্ষাগার উভয় ক্ষেত্রেই পাল্টা-বর্তমান ক্রোমাটোগ্রাফি এবং সম্পর্কিত তরল-তরল পৃথকীকরণ কৌশল ব্যবহার করা হয়েছে। পৃথকীকরণের উপলব্ধিগুলির মধ্যে রয়েছে প্রোটিন, ডিএনএ, ক্যানাবিস স্যাটিভা অ্যান্টিবায়োটিক থেকে ক্যানাবিডিওল (সিবিডি), ভিটামিন, প্রাকৃতিক পণ্য, ফার্মাসিউটিক্যালস, ধাতব আয়ন, কীটনাশক, এনানটিওমার, পরিবেশগত নমুনা থেকে পলিয়ারোম্যাটিক হাইড্রোকার্বন, সক্রিয় এনজাইম এবং কার্বন ন্যানোটিউব। কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফি তার উচ্চ গতিশীল স্কেলিবিলিটির জন্য পরিচিতঃ মিলিগ্রাম থেকে কিলোগ্রাম পরিমাণ বিশুদ্ধ রাসায়নিক উপাদানগুলি এই কৌশলটির মাধ্যমে প্রাপ্ত করা যেতে পারে। এটি রাসায়নিকভাবে জটিল নমুনাগুলিকে অমীমাংসিত কণার সাথে সামঞ্জস্য করার সুবিধাও রয়েছে। আরও দেখুন ক্রোমাটোগ্রাফির ইতিহাস সুপারক্রিটিকাল ফ্লুইড ক্রোমাটোগ্রাফি রেফারেন্স বাহ্যিক লিঙ্ক ক্রোমাটোগ্রাফি