ELISA
এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসরবেন্ট অ্যাসে (ELISA) (,) একটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত বিশ্লেষণাত্মক জৈব রসায়ন পরীক্ষা, যা 1971 সালে ইভা ইংভাল এবং পিটার পার্লম্যান প্রথম বর্ণনা করেছিলেন। পরিমাপ করার জন্য প্রোটিনের বিরুদ্ধে নির্দেশিত অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে তরল নমুনায় লিগ্যান্ডের (সাধারণত একটি প্রোটিন) উপস্থিতি সনাক্ত করতে একটি কঠিন-পর্যায়ের ধরনের এনজাইম ইমিউনোঅ্যাসে (ইআইএ) ব্যবহার করা হয়। এলিসা ঔষধ, উদ্ভিদ রোগবিদ্যা এবং জৈবপ্রযুক্তিতে একটি ডায়াগনস্টিক সরঞ্জাম হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছে, পাশাপাশি বিভিন্ন শিল্পে মান নিয়ন্ত্রণ পরীক্ষা করা হয়েছে। এলিসার সবচেয়ে সহজ আকারে, পরীক্ষার জন্য নমুনা থেকে অ্যান্টিজেনগুলি একটি পৃষ্ঠের সাথে সংযুক্ত করা হয়। তারপর, একটি মিলযুক্ত অ্যান্টিবডি পৃষ্ঠের উপর প্রয়োগ করা হয় যাতে এটি অ্যান্টিজেনকে বাঁধতে পারে। এই অ্যান্টিবডি একটি এনজাইমের সাথে যুক্ত হয় এবং তারপরে যে কোনও সীমাহীন অ্যান্টিবডি অপসারণ করা হয়। চূড়ান্ত পর্যায়ে, উৎসেচকের স্তরযুক্ত একটি পদার্থ যোগ করা হয়। যদি বাঁধাই থাকে, পরবর্তী প্রতিক্রিয়া একটি সনাক্তযোগ্য সংকেত তৈরি করে, সাধারণত একটি রঙ পরিবর্তন। একটি এলিসা সঞ্চালনে একটি নির্দিষ্ট অ্যান্টিজেনের জন্য নির্দিষ্টতা সহ কমপক্ষে একটি অ্যান্টিবডি জড়িত থাকে। অজানা পরিমাণে অ্যান্টিজেন সহ নমুনাটি একটি কঠিন সাপোর্টে (সাধারণত একটি পলিস্টাইরিন মাইক্রোটাইটার প্লেট) স্থির করা হয় হয় অ-নির্দিষ্টভাবে (পৃষ্ঠে শোষণের মাধ্যমে) বা বিশেষভাবে (একই অ্যান্টিজেনের জন্য নির্দিষ্ট অন্য অ্যান্টিবডি দ্বারা ক্যাপচারের মাধ্যমে, একটি "স্যান্ডউইচ" এলিসায়)। অ্যান্টিজেনটি অচল হয়ে যাওয়ার পরে, সনাক্তকরণ অ্যান্টিবডি যোগ করা হয়, যা অ্যান্টিজেনের সাথে একটি জটিল গঠন করে। সনাক্তকরণ অ্যান্টিবডি একটি এনজাইমের সাথে সমযোজীভাবে যুক্ত হতে পারে বা নিজে একটি গৌণ অ্যান্টিবডি দ্বারা সনাক্ত করা যেতে পারে যা জৈব সংযোগের মাধ্যমে একটি এনজাইমের সাথে যুক্ত। প্রতিটি ধাপের মধ্যে, প্লেটটি সাধারণত একটি হালকা ডিটারজেন্ট দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয় যাতে কোনও প্রোটিন বা অ্যান্টিবডি অপসারণ করা যায় যা অ-নির্দিষ্টভাবে আবদ্ধ। ধোয়ার চূড়ান্ত ধাপের পরে, একটি দৃশ্যমান সংকেত তৈরি করতে একটি এনজাইম্যাটিক স্তর যোগ করে প্লেটটি তৈরি করা হয়, যা নমুনায় অ্যান্টিজেনের পরিমাণ নির্দেশ করে। লক্ষণীয় যে, এলিসা কঠোরভাবে "ইমিউনো" পরীক্ষার পরিবর্তে অন্যান্য ধরনের লিগ্যান্ড বাইন্ডিং পরীক্ষা করতে পারে, যদিও এই পদ্ধতির সাধারণ ব্যবহার এবং বিকাশের ইতিহাসের কারণে নামটি মূল "ইমিউনো" বহন করে। কৌশলটির জন্য মূলত যে কোনও লিগিং বিকারক প্রয়োজন যা একটি সনাক্তকরণ বিকারক সহ কঠিন পর্যায়ে স্থির করা যেতে পারে যা বিশেষভাবে আবদ্ধ হবে এবং একটি সংকেত তৈরি করতে একটি এনজাইম ব্যবহার করবে যা সঠিকভাবে পরিমাপ করা যেতে পারে। ধোয়ার মধ্যে, শুধুমাত্র লিগ্যান্ড এবং তার নির্দিষ্ট বাঁধাই প্রতিরূপগুলি কঠিন পর্যায়ে অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি মিথস্ক্রিয়া দ্বারা বিশেষভাবে আবদ্ধ বা "ইমিউনোসোর্বড" থাকে, যখন অনির্দিষ্ট বা সীমাহীন উপাদানগুলি ধুয়ে ফেলা হয়। অন্যান্য স্পেকট্রোফোটোমেট্রিক ওয়েট ল্যাব অ্যাসে ফরম্যাটের বিপরীতে যেখানে একই প্রতিক্রিয়া ভাল (যেমন, একটি কিউভেট) ধোয়ার পরে পুনরায় ব্যবহার করা যেতে পারে, এলিসা প্লেটগুলিতে প্রতিক্রিয়া পণ্যগুলি শক্ত পর্যায়ে ইমিউনোসরবেড থাকে, যা প্লেটের অংশ, এবং তাই সহজে পুনরায় ব্যবহারযোগ্য নয়। নীতি একটি বিশ্লেষণাত্মক জৈব রসায়ন পরীক্ষা এবং একটি "ওয়েট ল্যাব" কৌশল হিসাবে, এলিসা একটি তরল নমুনায় একটি বিশ্লেষক (অর্থাৎ, নির্দিষ্ট পদার্থ যার উপস্থিতি পরিমাণগত বা গুণগতভাবে বিশ্লেষণ করা হচ্ছে) এমন একটি পদ্ধতির দ্বারা সনাক্ত করে যা বিশ্লেষণের সময় তরল বিকারক ব্যবহার অব্যাহত রাখে (অর্থাৎ, জৈব রাসায়নিক প্রতিক্রিয়াগুলির নিয়ন্ত্রিত ক্রম যা একটি সংকেত তৈরি করবে যা সহজেই পরিমাপ করা যেতে পারে এবং নমুনায় বিশ্লেষকের পরিমাণের পরিমাপ হিসাবে ব্যাখ্যা করা যেতে পারে) যা তরল থাকে এবং প্রতিক্রিয়া চেম্বারের ভিতরে থাকে বা প্রতিক্রিয়াশীলগুলিকে রাখার জন্য ভালভাবে প্রয়োজন। এটি "ড্রাই ল্যাব" কৌশলগুলির বিপরীতে যা শুকনো স্ট্রিপ ব্যবহার করে। এমনকি যদি নমুনাটি তরল হয় (উদাহরণস্বরূপ, একটি পরিমাপ করা ছোট ড্রপ), "শুষ্ক" বিশ্লেষণের চূড়ান্ত সনাক্তকরণ ধাপে প্রতিফলনমিতির মতো পদ্ধতির মাধ্যমে একটি শুকনো ফালা পড়া জড়িত এবং নমুনাগুলির মধ্যে স্পিলওভার বা মিশ্রণ রোধ করতে প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ চেম্বারের প্রয়োজন হয় না। একটি ভিন্নধর্মী বিশ্লেষণ হিসাবে, এলিসা বিশ্লেষণাত্মক প্রতিক্রিয়া মিশ্রণের কিছু উপাদানকে একটি কঠিন পর্যায়ে শোষণ করে পৃথক করে যা শারীরিকভাবে স্থির থাকে। এলিসাতে, একটি তরল নমুনা বিশেষ বাঁধাই বৈশিষ্ট্য সহ একটি স্থির কঠিন পর্যায়ে যোগ করা হয় এবং তার পরে একাধিক তরল বিকারক যোগ করা হয় যা ক্রমানুসারে যোগ করা হয়, ইনকিউবেট করা হয় এবং ধুয়ে ফেলা হয়, তারপরে কিছু অপটিক্যাল পরিবর্তন (যেমন, একটি এনজাইম্যাটিক বিক্রিয়ার পণ্য দ্বারা রঙের বিকাশ) কূপের চূড়ান্ত তরলে যা থেকে বিশ্লেষকের পরিমাণ পরিমাপ করা হয়। পরিমাণগত "রিডিং" সাধারণত স্পেকট্রোফোটোমেট্রি দ্বারা প্রেরিত আলোর তীব্রতা সনাক্তকরণের উপর ভিত্তি করে, যার মধ্যে তরলের মাধ্যমে আলোর কিছু নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের সংক্রমণের পরিমাণ (পাশাপাশি একাধিক-কূপ প্লেট বিন্যাসে কূপের স্বচ্ছ তল) জড়িত। সনাক্তকরণের সংবেদনশীলতা বিশ্লেষণাত্মক প্রতিক্রিয়ার সময় সংকেতের সম্প্রসারণের উপর নির্ভর করে। যেহেতু উৎসেচকের প্রতিক্রিয়া খুব সুপরিচিত পরিবর্ধন প্রক্রিয়া, তাই সংকেতটি উৎসেচক দ্বারা উৎপন্ন হয় যা সঠিক পরিমাণ নির্ধারণের অনুমতি দেওয়ার জন্য নির্দিষ্ট অনুপাতে সনাক্তকরণ বিকারকগুলির সাথে যুক্ত থাকে এবং এইভাবে নামটি "উৎসেচক-সংযুক্ত"। বিশ্লেষককে লিগ্যান্ডও বলা হয় কারণ এটি বিশেষভাবে একটি সনাক্তকরণ বিকারককে বাঁধবে বা সংযুক্ত করবে, এইভাবে এলিসা লিগ্যান্ড বাঁধাই পরীক্ষার বৃহত্তর বিভাগের অধীনে পড়ে। লিগ্যান্ড-নির্দিষ্ট বাঁধাই বিকারককে "অচল" করা হয়, অর্থাৎ, সাধারণত স্বচ্ছ নীচের অংশে প্রলেপ দেওয়া হয় এবং শুকানো হয় এবং কখনও কখনও একটি কূপের পার্শ্ব প্রাচীরও (এখানে স্থির "কঠিন পর্যায়"/"কঠিন স্তর" যা কঠিন মাইক্রো পার্টিকেল/পুঁতির বিপরীতে যা ধুয়ে ফেলা যেতে পারে), যা সাধারণত "এলিসা প্লেট" নামে পরিচিত একাধিক কূপ প্লেট হিসাবে নির্মিত হয়। প্রচলিতভাবে, অন্যান্য ধরনের ইমিউনোঅ্যাসেসের মতো, অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি ধরনের প্রতিক্রিয়ার নির্দিষ্টতা ব্যবহার করা হয় কারণ বিশেষ করে একটি অ্যান্টিজেনের বিরুদ্ধে বলক হিসাবে একটি অ্যান্টিবডি উত্থাপন করা সহজ। বিকল্পভাবে, যদি অ্যানালাইট নিজেই একটি অ্যান্টিবডি হয়, তবে এর লক্ষ্য অ্যান্টিজেনকে বাঁধাই বিকারক হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। ইতিহাস এলিসা-র বিকাশের আগে, ইমিউনোঅ্যাসে পরিচালনার একমাত্র বিকল্প ছিল রেডিওইম্যুনোঅ্যাসে, যা তেজস্ক্রিয়ভাবে লেবেলযুক্ত অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে একটি কৌশল। রেডিওইম্যুনোঅ্যাসে-তে, তেজস্ক্রিয়তা সংকেত প্রদান করে, যা নির্দেশ করে যে নমুনায় একটি নির্দিষ্ট অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডি উপস্থিত রয়েছে কিনা। 1960 সালে প্রকাশিত রোজালিন সুসমান ইয়ালো এবং সলোমন বারসনের একটি বৈজ্ঞানিক গবেষণাপত্রে রেডিওইম্যুনোয়াসে প্রথম বর্ণনা করা হয়। যেহেতু তেজস্ক্রিয়তা একটি সম্ভাব্য স্বাস্থ্য হুমকির কারণ হয়ে দাঁড়িয়েছে, তাই একটি নিরাপদ বিকল্পের সন্ধান করা হয়েছিল। রেডিওইম্যুনোঅ্যাসের একটি উপযুক্ত বিকল্প তেজস্ক্রিয় সংকেতের পরিবর্তে একটি অ-তেজস্ক্রিয় সংকেত প্রতিস্থাপন করবে। যখন এনজাইমগুলি (যেমন হর্সরাডিশ পারঅক্সিডেস) উপযুক্ত স্তরগুলির (যেমন এবিটিএস বা টিএমবি) সাথে প্রতিক্রিয়া দেখায়, তখন রঙের পরিবর্তন ঘটে, যা একটি সংকেত হিসাবে ব্যবহৃত হয়। যাইহোক, সংকেতটি অ্যান্টিবডি বা অ্যান্টিজেনের উপস্থিতির সাথে যুক্ত হতে হবে, যে কারণে এনজাইমটিকে একটি উপযুক্ত অ্যান্টিবডির সাথে যুক্ত করতে হবে। এই সংযোগ প্রক্রিয়াটি স্বাধীনভাবে স্ট্রাটিস আভ্রামিয়াস এবং জি. বি. দ্বারা বিকশিত হয়েছিল। পিয়ার্স। যেহেতু ধোয়ার মাধ্যমে কোনও আনবাউন্ড অ্যান্টিবডি বা অ্যান্টিজেন অপসারণ করা প্রয়োজন, তাই অ্যান্টিবডি বা অ্যান্টিজেনকে ধারকটির পৃষ্ঠে স্থির করতে হবে; অর্থাৎ, ইমিউনোসরবেন্ট অবশ্যই প্রস্তুত করতে হবে। এটি সম্পন্ন করার একটি কৌশল 1966 সালে ওয়াইড এবং জার্কার পোরাথ দ্বারা প্রকাশিত হয়েছিল। 1971 সালে, সুইডেনের স্টকহোম বিশ্ববিদ্যালয়ের পিটার পার্লম্যান এবং ইভা ইংভাল এবং নেদারল্যান্ডসের অ্যান্টন শুয়ার্স এবং বাউক ভ্যান উইমেন স্বাধীনভাবে গবেষণাপত্র প্রকাশ করেন যা এই জ্ঞানকে ইআইএ/এলিসা সম্পাদনের পদ্ধতিতে সংশ্লেষিত করে। ঐতিহ্যবাহী এলিসাতে সাধারণত ক্রোমোজেনিক রিপোর্টার এবং সাবস্ট্রেট জড়িত থাকে যা অ্যান্টিজেন বা অ্যানালাইটের উপস্থিতি নির্দেশ করার জন্য এক ধরনের পর্যবেক্ষণযোগ্য রঙ পরিবর্তন তৈরি করে। নতুন এলিসার মতো কৌশলগুলি পরিমাণগত সংকেত তৈরি করতে ফ্লোরোজেনিক, ইলেক্ট্রোকেমিলুমিনেসেন্ট এবং পরিমাণগত পিসিআর রিপোর্টার ব্যবহার করে। এই নতুন সাংবাদিকদের উচ্চ সংবেদনশীলতা এবং মাল্টিপ্লেক্সিং সহ বিভিন্ন সুবিধা থাকতে পারে। প্রযুক্তিগত দিক থেকে, এই ধরনের নতুন পরীক্ষা কঠোরভাবে এলিসা নয়, কারণ এগুলি "এনজাইম-লিঙ্কযুক্ত" নয়, বরং কিছু নন-এনজাইম্যাটিক রিপোর্টারের সাথে যুক্ত। যাইহোক, এই মূল্যায়নের সাধারণ নীতিগুলি মূলত একই রকম, এগুলি প্রায়শই ELISA-এর মতো একই বিভাগে গোষ্ঠীভুক্ত করা হয়। 2012 সালে, ক্রোমোজেনিক রিপোর্টার হিসাবে ন্যানো পার্টিকেল ব্যবহার করে একটি অতি সংবেদনশীল, এনজাইম-ভিত্তিক এলিসা পরীক্ষা বিশ্লেষণের নিছক অ্যাটোগ্রাম সনাক্তকরণ থেকে একটি নগ্ন-চোখের রঙ সংকেত দিতে সক্ষম হয়েছিল। ইতিবাচক ফলাফলের জন্য নীল রঙ এবং নেতিবাচক ফলাফলের জন্য লাল রঙ প্রদর্শিত হয়। লক্ষ্য করুন যে এই সনাক্তকরণ শুধুমাত্র বিশ্লেষণের উপস্থিতি বা অনুপস্থিতি নিশ্চিত করতে পারে, প্রকৃত ঘনত্ব নয়। প্রকার নির্দিষ্ট অণুগুলির জন্য অনেকগুলি এলিসা পরীক্ষা রয়েছে যা মিলযুক্ত অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে। বিশ্লেষণ এবং অ্যান্টিবডিগুলি কীভাবে আবদ্ধ এবং ব্যবহৃত হয় তার উপর ভিত্তি করে এলিসা পরীক্ষাগুলি বিভিন্ন ধরনের পরীক্ষায় বিভক্ত করা হয়। প্রধান প্রকারগুলি এখানে বর্ণনা করা হয়েছে। ডাইরেক্ট এলিসা সরাসরি এলিসার ধাপগুলি নীচের প্রক্রিয়াটি অনুসরণ করেঃ একটি মাইক্রোটাইটার প্লেটের প্রতিটি কুয়ায় (সাধারণত 96-কূপের প্লেট) পরীক্ষা করার জন্য অ্যান্টিজেনের একটি বাফারযুক্ত দ্রবণ যোগ করা হয়, যেখানে চার্জ মিথস্ক্রিয়ার মাধ্যমে প্লাস্টিককে মেনে চলার জন্য সময় দেওয়া হয়। প্রতিক্রিয়াশীল নয় এমন প্রোটিনের একটি দ্রবণ, যেমন বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন বা কেসিন, প্রতিটি কুয়ায় যোগ করা হয় যাতে কুয়োর যে কোনও প্লাস্টিকের পৃষ্ঠ যা অ্যান্টিজেন দ্বারা অনাবৃত থাকে তা ঢেকে যায়। একটি সংযুক্ত (সংযুক্ত) এনজাইম সহ প্রাথমিক অ্যান্টিবডি যোগ করা হয়, যা কূপের পরীক্ষা অ্যান্টিজেন লেপের সাথে বিশেষভাবে আবদ্ধ হয়। তারপর এই উৎসেচকের জন্য একটি স্তর যোগ করা হয়। প্রায়শই, এই স্তরটি উৎসেচকের সাথে বিক্রিয়ার পরে রঙ পরিবর্তন করে। সিরামে উপস্থিত প্রাথমিক অ্যান্টিবডির ঘনত্ব যত বেশি হবে, রঙ তত শক্তিশালীভাবে পরিবর্তিত হবে। প্রায়শই, রঙের শক্তির পরিমাণগত মান দিতে একটি স্পেকট্রোমিটার ব্যবহার করা হয়। এনজাইমটি পরিবর্ধক হিসাবে কাজ করে; এমনকি যদি মাত্র কয়েকটি এনজাইম-সংযুক্ত অ্যান্টিবডি আবদ্ধ থাকে, তবে এনজাইম অণুগুলি অনেক সংকেত অণু তৈরি করবে। সাধারণ জ্ঞানের সীমাবদ্ধতার মধ্যে, উৎসেচক অনির্দিষ্টকালের জন্য রঙ উৎপাদন করতে পারে, তবে যত বেশি অ্যান্টিবডি আবদ্ধ হবে, রঙ তত দ্রুত বিকশিত হবে। সরাসরি এলিসার একটি বড় অসুবিধা হল যে অ্যান্টিজেন স্থায়িত্বের পদ্ধতি নির্দিষ্ট নয়; যখন সিরামকে পরীক্ষার অ্যান্টিজেনের উৎস হিসাবে ব্যবহার করা হয়, তখন নমুনার সমস্ত প্রোটিন মাইক্রোটাইটার প্লেটের সাথে ভালভাবে লেগে থাকতে পারে, তাই সিরামে অ্যানালাইটের ছোট ঘনত্ব অবশ্যই কূপের পৃষ্ঠের সাথে আবদ্ধ হওয়ার সময় অন্যান্য সিরাম প্রোটিনের সাথে প্রতিদ্বন্দ্বিতা করতে হবে। স্যান্ডউইচ বা পরোক্ষ এলিসা সিরামের আণবিক মিশ্রণ থেকে বের করে আনার জন্য পরীক্ষার অ্যান্টিজেনের জন্য নির্দিষ্ট একটি "ক্যাপচার" অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে এই সমস্যার সমাধান প্রদান করে। এলিসা একটি গুণগত বা পরিমাণগত বিন্যাসে চালানো যেতে পারে। গুণগত ফলাফল একটি নমুনার জন্য একটি সহজ ইতিবাচক বা নেতিবাচক ফলাফল (হ্যাঁ বা না) প্রদান করে। ইতিবাচক এবং নেতিবাচকের মধ্যে কাটঅফ বিশ্লেষক দ্বারা নির্ধারিত হয় এবং পরিসংখ্যানগত হতে পারে। দুই বা তিন গুণ মান বিচ্যুতি (একটি পরীক্ষায় অন্তর্নিহিত ত্রুটি) প্রায়শই নেতিবাচক নমুনা থেকে ইতিবাচককে আলাদা করতে ব্যবহৃত হয়। পরিমাণগত এলিসাতে, নমুনার আলোকীয় ঘনত্বকে (ওডি) একটি আদর্শ বক্ররেখার সাথে তুলনা করা হয়, যা সাধারণত লক্ষ্য অণুর একটি পরিচিত-ঘনত্ব সমাধানের ক্রমিক হ্রাস। উদাহরণস্বরূপ, যদি একটি পরীক্ষার নমুনা 1 এর ওডি প্রদান করে, তবে স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখার যে বিন্দুটি ওডি = 1 দিয়েছে তা অবশ্যই নমুনার মতো একই বিশ্লেষক ঘনত্বের হতে হবে। "পরোক্ষ এলিসা" এবং "ডাইরেক্ট এলিসা" নামের ব্যবহার এবং অর্থ সাহিত্যে এবং ওয়েবসাইটে পরীক্ষার প্রেক্ষাপটের উপর নির্ভর করে পৃথক হয়। যখন একটি অ্যান্টিজেনের উপস্থিতি বিশ্লেষণ করা হয়, তখন "ডাইরেক্ট এলিসা" নামটি একটি এলিসাকে বোঝায় যেখানে শুধুমাত্র একটি লেবেলযুক্ত প্রাথমিক অ্যান্টিবডি ব্যবহার করা হয় এবং "পরোক্ষ এলিসা" শব্দটি একটি এলিসাকে বোঝায় যেখানে অ্যান্টিজেনটি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি দ্বারা আবদ্ধ থাকে যা পরে একটি লেবেলযুক্ত গৌণ অ্যান্টিবডি দ্বারা সনাক্ত করা হয়। পরের ক্ষেত্রে একটি স্যান্ডউইচ এলিসা একটি পরোক্ষ এলিসা থেকে স্পষ্টভাবে আলাদা। যখন "প্রাথমিক" অ্যান্টিবডি আগ্রহের হয়, যেমন। টিকাদান বিশ্লেষণের ক্ষেত্রে, এই অ্যান্টিবডি সরাসরি গৌণ অ্যান্টিবডি দ্বারা সনাক্ত করা হয় এবং "পরোক্ষ এলিসা" শব্দটি দুটি অ্যান্টিবডি সহ একটি সেটিং-এর ক্ষেত্রে প্রযোজ্য। স্যান্ডউইচ এলিসা একটি "স্যান্ডউইচ" এলিসা নমুনা অ্যান্টিজেন সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়। ধাপগুলি হলঃ একটি পৃষ্ঠ একটি পরিচিত পরিমাণ ক্যাপচার অ্যান্টিবডি দিয়ে প্রস্তুত করা হয়। পৃষ্ঠের যে কোনও অনির্দিষ্ট বাঁধাই সাইটগুলি অবরুদ্ধ করা হয়। অ্যান্টিজেনযুক্ত নমুনাটি প্লেটে প্রয়োগ করা হয় এবং অ্যান্টিবডি দ্বারা ধরা হয়। আনবাউন্ড অ্যান্টিজেন অপসারণের জন্য প্লেটটি ধুয়ে ফেলা হয়। একটি নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি যোগ করা হয় এবং অ্যান্টিজেনের সাথে আবদ্ধ হয় (তাই 'স্যান্ডউইচ': অ্যান্টিজেন দুটি অ্যান্টিবডির মধ্যে আটকে থাকে)। এই প্রাথমিক অ্যান্টিবডিটি কোনও দাতার সিরামে থাকতে পারে, যা অ্যান্টিজেনের প্রতি প্রতিক্রিয়াশীলতার জন্য পরীক্ষা করা হবে। এনজাইম-সংযুক্ত গৌণ অ্যান্টিবডিগুলি সনাক্তকরণ অ্যান্টিবডি হিসাবে প্রয়োগ করা হয়, যা অ্যান্টিবডির এফসি অঞ্চলের (অনির্দিষ্ট) সাথে বিশেষভাবে আবদ্ধ হয়। সীমাহীন অ্যান্টিবডি-এনজাইম কনজুগেটগুলি অপসারণের জন্য প্লেটটি ধুয়ে ফেলা হয়। একটি রাসায়নিক যোগ করা হয় যা এনজাইম দ্বারা একটি রঙ, ফ্লুরোসেন্ট বা বৈদ্যুতিন রাসায়নিক সংকেতে রূপান্তরিত হয়। অ্যান্টিজেনের উপস্থিতি এবং পরিমাণ নির্ধারণের জন্য প্লেটের কূপগুলির শোষণ, ফ্লুরোসেন্স বা তড়িৎরাসায়ন সংকেত (যেমন, বিদ্যুৎ) পরিমাপ করা হয়। ডানদিকের ছবিতে একটি এনজাইমের সাথে সংযুক্ত একটি গৌণ অ্যান্টিবডির ব্যবহার অন্তর্ভুক্ত রয়েছে, যদিও, প্রযুক্তিগত অর্থে, প্রাথমিক অ্যান্টিবডিটি যদি একটি এনজাইমের সাথে সংযুক্ত করা হয় তবে এটি প্রয়োজনীয় নয় (যা সরাসরি এলিসা হবে)। যাইহোক, একটি গৌণ-অ্যান্টিবডি কনজুগেটের ব্যবহার প্রতিটি অ্যান্টিজেনের জন্য এনজাইম-সংযুক্ত অ্যান্টিবডি তৈরির ব্যয়বহুল প্রক্রিয়া এড়াতে পারে যা কেউ সনাক্ত করতে চাইতে পারে। একটি এনজাইম-সংযুক্ত অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে যা অন্যান্য অ্যান্টিবডিগুলির এফসি অঞ্চলকে আবদ্ধ করে, এই একই এনজাইম-সংযুক্ত অ্যান্টিবডি বিভিন্ন পরিস্থিতিতে ব্যবহার করা যেতে পারে। "ক্যাপচার" অ্যান্টিবডির প্রথম স্তর ছাড়া, নমুনার যে কোনও প্রোটিন (সিরাম প্রোটিন সহ) প্লেটের পৃষ্ঠে প্রতিযোগিতামূলকভাবে শোষণ করতে পারে, যা স্থির অ্যান্টিজেনের পরিমাণ কমিয়ে দেয়। প্লাস্টিকের সাথে অ্যান্টিজেন সংযুক্ত করার জন্য বিশুদ্ধ নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডির ব্যবহার পরিমাপের আগে জটিল মিশ্রণ থেকে অ্যান্টিজেনকে শুদ্ধ করার প্রয়োজনীয়তা দূর করে, পরীক্ষাটিকে সহজতর করে এবং পরীক্ষার নির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতা বাড়ায়। অতএব, গবেষণার জন্য ব্যবহৃত একটি স্যান্ডউইচ এলিসার প্রায়শই বৈধকরণের প্রয়োজন হয়, যাতে মিথ্যা ইতিবাচক ফলাফলের ঝুঁকি হ্রাস করা যায়। প্রতিযোগিতামূলক এলিসা এলিসার তৃতীয় ব্যবহার প্রতিযোগিতামূলক বাঁধাইয়ের মাধ্যমে হয়। এই এলিসার ধাপগুলি প্রথম দুটি উদাহরণের থেকে কিছুটা আলাদাঃ লেবেলবিহীন অ্যান্টিবডি তার অ্যান্টিজেনের (নমুনা) উপস্থিতিতে ইনকিউবেট করা হয়। এই আবদ্ধ অ্যান্টিবডি/অ্যান্টিজেন কমপ্লেক্সগুলি তারপর একটি অ্যান্টিজেন-লেপা কুয়ায় যোগ করা হয়। প্লেটটি ধুয়ে ফেলা হয়, তাই সীমাহীন অ্যান্টিবডিগুলি সরানো হয়। (নমুনায় যত বেশি অ্যান্টিজেন থাকে, তত বেশি এজি-আব কমপ্লেক্স তৈরি হয় এবং তাই কূপের অ্যান্টিজেনের সাথে বাঁধার জন্য কম সীমাহীন অ্যান্টিবডি পাওয়া যায়, তাই "প্রতিযোগিতা"।) প্রাথমিক অ্যান্টিবডির জন্য নির্দিষ্ট গৌণ অ্যান্টিবডি যোগ করা হয়। এই দ্বিতীয় অ্যান্টিবডিটি এনজাইমের সাথে যুক্ত হয়। একটি স্তর যোগ করা হয় এবং অবশিষ্ট এনজাইমগুলি একটি ক্রোমোজেনিক বা ফ্লুরোসেন্ট সংকেত প্রকাশ করে। সংকেতের চূড়ান্ত সম্পৃক্ততা রোধ করতে প্রতিক্রিয়াটি বন্ধ করে দেওয়া হয়। কিছু প্রতিযোগিতামূলক এলিসা কিটের মধ্যে রয়েছে এনজাইম-সংযুক্ত অ্যান্টিবডির পরিবর্তে এনজাইম-সংযুক্ত অ্যান্টিজেন। লেবেলযুক্ত অ্যান্টিজেন নমুনা অ্যান্টিজেনের (লেবেলবিহীন) সাথে প্রাথমিক অ্যান্টিবডি বাইন্ডিং সাইটের জন্য প্রতিদ্বন্দ্বিতা করে। নমুনায় যত কম অ্যান্টিজেন থাকে, তত বেশি লেবেলযুক্ত অ্যান্টিজেন কূপের মধ্যে ধরে রাখা হয় এবং সংকেত তত শক্তিশালী হয়। সাধারণত, অ্যান্টিজেনকে প্রথমে কূপের মধ্যে স্থাপন করা হয় না। এইচআইভি অ্যান্টিবডি সনাক্তকরণের জন্য, মাইক্রোটাইটার প্লেটের কূপগুলি এইচআইভি অ্যান্টিজেনের সাথে লেপা হয়। দুটি নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি ব্যবহার করা হয়, একটি এনজাইমের সাথে সংযুক্ত এবং অন্যটি সিরামে উপস্থিত (যদি সিরাম অ্যান্টিবডির জন্য ইতিবাচক হয়)। একই অ্যান্টিজেনের জন্য দুটি অ্যান্টিবডির মধ্যে সমষ্টিগত প্রতিযোগিতা ঘটে, যার ফলে একটি শক্তিশালী সংকেত দেখা যায়। পরীক্ষা করার জন্য এই কূপগুলিতে সেরা যোগ করা হয় এবং 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেট করা হয়, এবং তারপর ধুয়ে ফেলা হয়। অ্যান্টিবডি উপস্থিত থাকলে, অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়া ঘটে। এনজাইম-লেবেলযুক্ত নির্দিষ্ট এইচআইভি অ্যান্টিবডিগুলির জন্য কোনও অ্যান্টিজেন অবশিষ্ট থাকে না। এই অ্যান্টিবডিগুলি যোগ করার পরে মুক্ত থাকে এবং ধোয়ার সময় ধুয়ে ফেলা হয়। সাবস্ট্রেট যোগ করা হয়, তবে এতে কাজ করার জন্য কোনও এনজাইম নেই, তাই একটি ইতিবাচক ফলাফল কোনও রঙের পরিবর্তন দেখায় না। বিপরীত এলিসা (পরোক্ষ এলিসা) একটি চতুর্থ এলিসা পরীক্ষায় ঐতিহ্যবাহী কূপগুলি ব্যবহার করা হয় না। এই পরীক্ষাটি অ্যান্টিজেনগুলিকে পরীক্ষার তরলে ঝুলিয়ে রাখে। লেবেলবিহীন অ্যান্টিবডি তার অ্যান্টিজেনের (নমুনা) উপস্থিতিতে ইনকিউবেট করা হয় একটি পর্যাপ্ত ইনকিউবেশন পিরিয়ড সরবরাহ করা হয় যাতে অ্যান্টিবডিগুলি অ্যান্টিজেনের সাথে আবদ্ধ হতে পারে। নমুনাটি তারপর স্ক্যাভেঞ্জার ধারকটির মধ্য দিয়ে পাঠানো হয়। এটি একটি টেস্ট টিউব বা চ্যানেলের মাধ্যমে একটি বিশেষভাবে পরিকল্পিত প্রবাহ হতে পারে। স্ক্যাভেঞ্জার ধারক বা চ্যানেলের পৃষ্ঠে "স্ক্যাভেঞ্জার অ্যান্টিজেন্স" বাঁধা থাকে। এগুলি প্রাথমিক অ্যান্টিজেনগুলির অনুরূপ বা পর্যাপ্তভাবে অনুরূপ হতে পারে যা মুক্ত অ্যান্টিবডিগুলি বাঁধবে। স্ক্যাভেঞ্জার ধারকটির পর্যাপ্ত পৃষ্ঠ এলাকা এবং পর্যাপ্ত সময় থাকতে হবে যাতে স্ক্যাভেঞ্জার অ্যান্টিজেনগুলি নমুনায় প্রবর্তিত সমস্ত অতিরিক্ত অ্যান্টিবডিগুলির সাথে আবদ্ধ হতে পারে। নমুনা, যা এখন ট্যাগ করা এবং আবদ্ধ অ্যান্টিবডি ধারণ করে, একটি ডিটেক্টরের মাধ্যমে পাস করা হয়। এই যন্ত্রটি একটি ফ্লো সাইটোমিটার বা অন্যান্য যন্ত্র হতে পারে যা ট্যাগগুলিকে আলোকিত করে এবং প্রতিক্রিয়া নিবন্ধিত করে। এই পরীক্ষাটি একাধিক অ্যান্টিজেনকে একই সময়ে ট্যাগ এবং গণনা করার অনুমতি দেয়। এটি ব্যাকটেরিয়ার নির্দিষ্ট স্ট্রেনগুলিকে দুটি (বা তার বেশি) ভিন্ন রঙের ট্যাগ দ্বারা চিহ্নিত করার অনুমতি দেয়। যদি উভয় ট্যাগ একটি কোষে উপস্থিত থাকে, তবে কোষটি সেই নির্দিষ্ট স্ট্রেন। যদি শুধুমাত্র একটি উপস্থিত থাকে, তবে তা নয়। এই পরীক্ষাটি সাধারণত একবারে একটি করে পরীক্ষা করা হয় এবং মাইক্রোটাইটার প্লেট দিয়ে করা যায় না। প্রয়োজনীয় সরঞ্জামগুলি সাধারণত কম জটিল এবং মাঠে ব্যবহার করা যেতে পারে। সাধারণভাবে ব্যবহৃত এনজাইম্যাটিক মার্কারগুলি নিম্নলিখিত টেবিলটি সাধারণত এলিসা পরীক্ষায় ব্যবহৃত এনজাইম্যাটিক মার্কারগুলিকে তালিকাভুক্ত করে, যা পরীক্ষার ফলাফলগুলি সমাপ্তির পরে পরিমাপ করার অনুমতি দেয়। ওপিডি (ও-ফেনিলেনেডিয়ামিন ডাইহাইড্রোক্লোরাইড) এইচআরপি (হর্সরাডিশ পেরোক্সিডেস) সনাক্ত করতে অ্যাম্বারকে পরিণত করে, যা প্রায়শই একটি সংযুক্ত প্রোটিন হিসাবে ব্যবহৃত হয়। এইচ. আর. পি সনাক্ত করার সময় টি. এম. বি (3,3 ', 5,5'-টেট্রামিথিলবেনজিডিন) নীল হয়ে যায় এবং সালফিউরিক বা ফসফরিক অ্যাসিড যোগ করার পরে হলুদ হয়ে যায়। এইচ. আর. পি সনাক্ত করার সময় এবি. টি. এস (2,2 '-আজিনোবিস [3-ইথাইলবেনজোথিয়াজোলিন-6-সালফোনিক অ্যাসিড]-ডায়ামোনিয়াম লবণ) সবুজ হয়ে যায়। পিএনপিপি (পি-নাইট্রোফিনাইল ফসফেট, ডিসোডিয়াম সল্ট) ক্ষারীয় ফসফেটেজ সনাক্ত করার সময় হলুদ হয়ে যায়। যেহেতু এলিসা একটি নমুনায় অ্যান্টিজেনের উপস্থিতি বা অ্যান্টিবডির উপস্থিতি মূল্যায়নের জন্য সঞ্চালিত করা যেতে পারে, এটি সিরাম অ্যান্টিবডির ঘনত্ব নির্ধারণের জন্য একটি দরকারী সরঞ্জাম (যেমন এইচআইভি পরীক্ষা বা ওয়েস্ট নাইল ভাইরাস)। এটি খাদ্য শিল্পে দুধ, চিনাবাদাম, আখরোট, বাদাম এবং ডিমের মতো সম্ভাব্য খাদ্য অ্যালার্জেন সনাক্ত করতে এবং সিলিয়াক রোগের জন্য সেরোলজিকাল রক্ত পরীক্ষা হিসাবেও প্রয়োগ খুঁজে পেয়েছে। এলিসা নির্দিষ্ট শ্রেণীর ওষুধের জন্য দ্রুত অনুমানমূলক পর্দা হিসাবে টক্সিকোলজিতেও ব্যবহার করা যেতে পারে। উচ্চ সংবেদনশীলতার কারণে এলিসা ছিল এইচআইভির জন্য ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত প্রথম স্ক্রিনিং পরীক্ষা। একটি এলিসাতে, একজন ব্যক্তির সিরাম 400 বার পাতলা করা হয় এবং একটি প্লেটে প্রয়োগ করা হয় যার সাথে এইচআইভি অ্যান্টিজেন সংযুক্ত থাকে। যদি এইচ. আই. ভি-র অ্যান্টিবডি সিরামে উপস্থিত থাকে, তবে তারা এই এইচ. আই. ভি অ্যান্টিজেনগুলির সাথে আবদ্ধ হতে পারে। তারপর প্লেটটি ধুয়ে সিরামের অন্যান্য সমস্ত উপাদান অপসারণ করা হয়। একটি বিশেষভাবে প্রস্তুত "সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি"-একটি অ্যান্টিবডি যা অন্যান্য অ্যান্টিবডিগুলির সাথে আবদ্ধ হয়-তারপর প্লেটে প্রয়োগ করা হয়, তারপরে আরেকটি ধোয়া হয়। এই গৌণ অ্যান্টিবডি রাসায়নিকভাবে একটি এনজাইমের সাথে আগে থেকে সংযুক্ত থাকে। সুতরাং, প্লেটটিতে আবদ্ধ গৌণ অ্যান্টিবডির পরিমাণের অনুপাতে এনজাইম থাকবে। উৎসেচকের জন্য একটি স্তর প্রয়োগ করা হয় এবং উৎসেচক দ্বারা অনুঘটকের ফলে রঙ বা প্রতিদীপ্তি পরিবর্তিত হয়। এলিসার ফলাফলগুলি একটি সংখ্যা হিসাবে রিপোর্ট করা হয়; এই পরীক্ষার সবচেয়ে বিতর্কিত দিকটি হল একটি ইতিবাচক এবং নেতিবাচক ফলাফলের মধ্যে "কাট-অফ" পয়েন্ট নির্ধারণ করা। একটি পরিচিত মানের সঙ্গে তুলনা করে একটি কাট-অফ পয়েন্ট নির্ধারণ করা যেতে পারে। যদি কর্মক্ষেত্রে ড্রাগ স্ক্রিনিংয়ের জন্য একটি এলিসা পরীক্ষা ব্যবহার করা হয়, উদাহরণস্বরূপ, একটি কাট-অফ ঘনত্ব, 50 এনজি/মিলি, প্রতিষ্ঠিত হয় এবং অ্যানালাইটের মানক ঘনত্ব সম্বলিত একটি নমুনা প্রস্তুত করা হবে। অজানা যেগুলি পরিচিত নমুনার চেয়ে শক্তিশালী সংকেত তৈরি করে সেগুলি "ইতিবাচক"। যেগুলি দুর্বল সংকেত তৈরি করে সেগুলি "নেতিবাচক" হয়। ডেঙ্গু, ম্যালেরিয়া, চাগাস রোগ, জোনের রোগ এবং অন্যান্য বিভিন্ন ধরনের রোগ সনাক্ত করার জন্য এলিসা পরীক্ষা রয়েছে। চিকিৎসা পরীক্ষাগারগুলিতে ইন ভিট্রো ডায়াগনস্টিকের জন্য এলিসা পরীক্ষাগুলিও ব্যাপকভাবে নিযুক্ত করা হয়। এলিসার অন্যান্য ব্যবহারগুলির মধ্যে রয়েছেঃ রক্তের নমুনায় সার্স-কোভ-2 অ্যান্টিবডি সনাক্তকরণ আরও দেখুন এগ্লুটিনেশন-পিসিআর ইমিউনোস্ক্রিনিং ল্যাটেরাল ফ্লো টেস্ট ম্যাগনেটিক ইমিউনোঅ্যাসে মাইক্রোটাইটর প্লেট নেফেলোমেট্রি প্লাক রিডাকশন নিউট্রালাইজেশন টেস্ট প্লেট রিডার সিক্রেশন অ্যাসে নোট এবং রেফারেন্স বাহ্যিক লিঙ্কগুলি "এলিসা ক্রিয়াকলাপের পরিচয়"-এইচআইভি সনাক্ত করার জন্য ব্যবহৃত এলিসার প্রারম্ভিক ওয়াক-থ্রু, অ্যারিজোনা বিশ্ববিদ্যালয়ের অ্যানিমেশন সহ "এলিসা অ্যাসে প্রিন্সিপল"-একটি এলিসার নীতির একটি সংক্ষিপ্ত বিবরণ এবং অ্যাসে জিনি ডায়াগনস্টিক ভাইরোলজি ইমিউনোলজিক পরীক্ষায় বিশ্লেষণ সনাক্ত করার সরঞ্জামগুলি দেখুন।