X-gal
এক্স-গ্যাল (5-ব্রোমো-4-ক্লোরো-3-ইণ্ডোলিল-বিটা-গ্যালাক্টোপাইরানোসাইডের জন্য সংক্ষিপ্ত বিসিআইজি) একটি জৈব যৌগ যা একটি প্রতিস্থাপিত ইন্ডোলের সাথে সংযুক্ত গ্যালাক্টোজ নিয়ে গঠিত। 1964 সালে জেরোম হরউইৎজ এবং সহযোগীরা এই যৌগটি সংশ্লেষিত করেন। আনুষ্ঠানিক রাসায়নিক নামটি প্রায়শই কম নির্ভুল তবে ব্রোমোক্লোরোইন্ডক্সিল গ্যালাক্টোসাইডের মতো কম জটিল বাক্যাংশে সংক্ষিপ্ত করা হয়। এক্স-গ্যাল সংকোচনের ক্ষেত্রে ইণ্ডোক্সিল থেকে পাওয়া এক্স এক্স-এর উৎস হতে পারে। আণবিক জীববিজ্ঞানে এক্স-গ্যাল প্রায়শই একটি এনজাইম, β-গ্যালাক্টোসিডেস, তার স্বাভাবিক লক্ষ্য, একটি β-গ্যালাক্টোসাইডের জায়গায় উপস্থিতির জন্য পরীক্ষা করতে ব্যবহৃত হয়। এটি হিস্টোকেমিস্ট্রি এবং ব্যাকটেরিয়োলজিতে এই এনজাইমের ক্রিয়াকলাপ সনাক্ত করতেও ব্যবহৃত হয়। এক্স-গ্যাল হল অনেকগুলি ইনডক্সিল গ্লাইকোসাইড এবং এস্টারগুলির মধ্যে একটি যা এনজাইম-অনুঘটক হাইড্রোলাইসিসের ফলে নীল রঙের মতো অদ্রবণীয় নীল যৌগ তৈরি করে। একটি কম ব্যবহৃত কিন্তু খুব অনুরূপ (কাইরাল) যৌগ হল এক্স-গ্যাল (এক্স-গ্যাল, এক্স-আলফা-গ্যাল), বা 5-ব্রোমো-4-ক্লোরো-3-ইন্ডোলিল-α-D-গ্যালাক্টোপাইরানোসাইড, যা β-গ্যালাক্টোসিডেস (ইসি 3.2.1.23) এর পরিবর্তে α-গ্যালাক্টোসিডেস (ইসি 3.2.1.22) দ্বারা হাইড্রোলাইজড হয়। এক্স-গ্যাল ল্যাকটোজের একটি এনালগ, এবং তাই β-গ্যালাক্টোসিডেস এনজাইম দ্বারা হাইড্রোলাইজড হতে পারে যা-ল্যাকটোজে β-গ্লাইকোসিডিক বন্ধনকে বিভক্ত করে। এক্স-গ্যাল, যখন β-গ্যালাক্টোসিডেস দ্বারা বিভক্ত হয়, তখন গ্যালাক্টোজ এবং 5-ব্রোমো-4-ক্লোরো-3-হাইড্রক্সিন্ডোল-1 উৎপন্ন হয়। পরেরটি তখন স্বতঃস্ফূর্তভাবে ডাইমেরাইজ হয় এবং 5,5 '-ডাইব্রোমো-4,4'-ডাইক্লোরো-নীল-2-এ জারিত হয়, যা একটি তীব্র নীল পণ্য যা অদ্রবণীয়। এক্স-গ্যাল নিজেই বর্ণহীন, তাই নীল রঙের পণ্যের উপস্থিতি সক্রিয় β-গ্যালাক্টোসিডেসের উপস্থিতির জন্য একটি পরীক্ষা হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। এটি ব্যাকটেরিয়াল β-গ্যালাক্টোসিডেস (তথাকথিত ল্যাকজেড) কে বিভিন্ন প্রয়োগে রিপোর্টার হিসাবে ব্যবহার করার অনুমতি দেয়। একইভাবে, এক্সএগাল α-গ্যালাক্টোসিডেসের জন্য একটি রিপোর্টার যৌগ হিসাবে ব্যবহৃত হয় (যেমন। খামিরের মধ্যে মেল1)। প্রতিক্রিয়া ক্লোনিং জিন ক্লোনিংয়ে, এক্স-গ্যাল একটি দৃশ্যমান ইঙ্গিত হিসাবে ব্যবহৃত হয় যে কোনও কোষ নীল/সাদা স্ক্রিনিং নামে একটি কৌশলে একটি কার্যকরী β-গ্যালাক্টোসিডেস এনজাইম প্রকাশ করে কিনা। স্ক্রিনিংয়ের এই পদ্ধতিটি একটি সফল ক্লোনিং পণ্যকে অন্যান্য ব্যর্থ পণ্য থেকে আলাদা করার একটি সুবিধাজনক উপায়। নীল/সাদা স্ক্রিনিং পদ্ধতিটি β-গ্যালাক্টোসিডেস জিনের α-পরিপূরণ নীতির উপর নির্ভর করে, যেখানে প্লাজমিডে ল্যাকজেড জিনের (ল্যাকজেডএ) একটি অংশ কোষে আরেকটি মিউট্যান্ট ল্যাকজেড জিনের (ল্যাকজেডডএম15) পরিপূরক হতে পারে। উভয় জিনই নিজেরাই অ-কার্যকরী পেপটাইড তৈরি করে, তবে, যখন একসঙ্গে প্রকাশ করা হয়, যখন ল্যাকজেডএ যুক্ত একটি প্লাজমিড ল্যাকজেডডএম15 কোষে রূপান্তরিত হয়, তখন তারা একটি কার্যকরী বিটা-গ্যালাক্টোসিডেস গঠন করে। একটি সক্রিয় β-গ্যালাক্টোসিডেসের উপস্থিতি সনাক্ত করা যেতে পারে যখন কোষগুলি এক্স-গ্যালযুক্ত প্লেটগুলিতে উত্থিত হয়, কোষের মধ্যে অধঃক্ষিপ্ত নীল রঙের পণ্যটির ফলে বৈশিষ্ট্যযুক্ত নীল উপনিবেশ তৈরি হয়। যাইহোক, একাধিক ক্লোনিং সাইট, যেখানে আগ্রহের একটি জিন প্লাজমিড ভেক্টরের মধ্যে সংযুক্ত করা যেতে পারে, ল্যাকজেডএ জিনের মধ্যে অবস্থিত। সফল বন্ধন তাই ল্যাকজেডএ জিনকে ব্যাহত করে, তাই α-পরিপূরণও ব্যাহত হয় এবং কোনও কার্যকরী β-গ্যালাক্টোসিডেস তৈরি হতে পারে না, যার ফলে সাদা উপনিবেশ তৈরি হয়। সফলভাবে সংযুক্ত সন্নিবেশযুক্ত কোষগুলি তখন ব্যর্থ নীল কোষগুলির সাদা রঙ দ্বারা সহজেই সনাক্ত করা যায়। এই পরীক্ষার জন্য ব্যবহৃত ক্লোনিং ভেক্টরগুলির উদাহরণ হল পিইউসি19, পিব্লুস্ক্রিপ্ট, পিজেএম-টি ভেক্টর, এবং এর জন্য নির্দিষ্ট ই. কোলাই হোস্ট স্ট্রেন যেমন ডিএইচ5α ব্যবহার করা প্রয়োজন যা মিউট্যান্ট ল্যাকজেডডএম15 জিন বহন করে। প্রায়শই, এক্স-গ্যাল ধারণকারী প্লেটে আইপিটিজি (আইসোপ্রোপাইল β-1-থিয়োগ্যালাক্টোপাইরানোসাইড) থাকে। আইপিটিজি হল ল্যাকটোজের অনুরূপ একটি রাসায়নিক কাঠামো। তবে, আই. পি. টি. জি-কে β-গ্যালাক্টোসিডেস দ্বারা হাইড্রোলাইজ করা যায় না। আইপিটিজি একটি সূচক হিসাবে ব্যবহৃত হয় যা ডিএনএ মুক্ত করে এবং প্রতিলিপির অনুমতি দেয় এমন ল্যাক রিপ্রেসারের সাথে আবদ্ধ হয়। আগর প্লেটে আইপিটিজির উপস্থিতি তাই β-গ্যালাক্টোসিডেসের সংশ্লেষণ বাড়ায়। এক্স-গ্যাল বৈচিত্র্যের বেশ কয়েকটি রূপ রয়েছে, যা সামান্য পার্থক্য সহ অনুরূপ অণু যা মূলত নীল ছাড়া অন্য রঙ তৈরি করতে সহায়তা করে। প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া দ্বি-সংকর বিশ্লেষণে, β-গ্যালাক্টোসিডেস একে অপরের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে এমন প্রোটিনগুলি সনাক্ত করতে রিপোর্টার হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। এই পদ্ধতিতে, জিনোম লাইব্রেরিগুলি খামির বা ব্যাকটেরিয়া সিস্টেম ব্যবহার করে প্রোটিন মিথস্ক্রিয়ার জন্য পরীক্ষা করা যেতে পারে। যেখানে স্ক্রিনিং করা প্রোটিনের মধ্যে একটি সফল মিথস্ক্রিয়া হয়, সেখানে এটি একটি প্রবর্তকের সাথে একটি অ্যাক্টিভেশন ডোমেনের বন্ধন ঘটাবে। যদি প্রবর্তক একটি ল্যাকজেড জিনের সাথে যুক্ত থাকে, তবে β-গ্যালাক্টোসিডেস উৎপাদন, যার ফলে এক্স-গ্যালের উপস্থিতিতে নীল-রঞ্জক উপনিবেশ তৈরি হয়, তাই প্রোটিনের মধ্যে একটি সফল মিথস্ক্রিয়া নির্দেশ করবে। এই কৌশলটি প্রায় 106 টিরও কম আকারের স্ক্রিনিং লাইব্রেরির মধ্যে সীমাবদ্ধ থাকতে পারে। এক্স-গ্যালের সফল ফাটল ইন্ডোলের উদ্বায়ীকরণের কারণে একটি লক্ষণীয় দুর্গন্ধ তৈরি করে। আরও দেখুন এক্স-গ্লুক রেফারেন্স গ্যালাকটোসাইডস ইন্ডোলস ক্লোরোয়ারেনেস ব্রোমোয়ারেনেস