Tetramer assay
টেট্রামার অ্যাসে (টেট্রামার স্টেইন নামেও পরিচিত) এমন একটি পদ্ধতি যা রক্তের নমুনার মধ্যে প্রদত্ত অ্যান্টিজেনের জন্য নির্দিষ্ট টি কোষগুলি সনাক্ত এবং পরিমাপ করতে টেট্রামেরিক প্রোটিন ব্যবহার করে। পরীক্ষায় ব্যবহৃত টেট্রামারগুলি চারটি প্রধান হিস্টোকম্প্যাটিবিলিটি কমপ্লেক্স (এম. এইচ. সি) অণু নিয়ে গঠিত, যা শরীরের বেশিরভাগ কোষের পৃষ্ঠে পাওয়া যায়। একটি কোষে ভাইরাস, ব্যাকটেরিয়া, ক্যান্সারজনিত মিউটেশন বা অন্যান্য অ্যান্টিজেনের উপস্থিতি যোগাযোগ করার উপায় হিসাবে এম. এইচ. সি অণুগুলি টি-কোষে পেপটাইড উপস্থাপন করে। যদি একটি টি-কোষের রিসেপ্টর একটি এম. এইচ. সি অণু দ্বারা উপস্থাপিত পেপটাইডের সাথে মেলে, তবে একটি ইমিউন প্রতিক্রিয়া শুরু হয়। সুতরাং, একটি নির্দিষ্ট পেপটাইড উপস্থাপনের জন্য বায়ো ইঞ্জিনিয়ার করা এম. এইচ. সি টেট্রামারগুলি সেই পেপটাইডের সাথে মেলে এমন রিসেপ্টরগুলির সাথে টি-কোষগুলি খুঁজে বের করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। টেট্রামারগুলিকে একটি ফ্লুরোফোর দিয়ে চিহ্নিত করা হয়, যা টেট্রামার-আবদ্ধ টি-কোষগুলিকে ফ্লো সাইটোমেট্রি দিয়ে বিশ্লেষণ করার অনুমতি দেয়। ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা টি-কোষের পরিমাণ এবং বাছাই গবেষকদের ভাইরাল সংক্রমণ এবং টিকা প্রশাসনের পাশাপাশি অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট টি-কোষের কার্যকারিতা সম্পর্কে ইমিউন প্রতিক্রিয়া তদন্ত করতে সক্ষম করে। সাধারণত, যদি কোনও ব্যক্তির ইমিউন সিস্টেম কোনও প্যাথোজেনের মুখোমুখি হয়, তবে সেই ব্যক্তির সেই প্যাথোজেনের কিছু পেপটাইডের প্রতি নির্দিষ্টতা সহ টি কোষ থাকবে। অতএব, যদি কোনও প্যাথোজেনিক পেপটাইডের জন্য নির্দিষ্ট কোনও টেট্রামার দাগ একটি ইতিবাচক সংকেত দেয়, তবে এটি নির্দেশ করতে পারে যে ব্যক্তির ইমিউন সিস্টেম সেই প্যাথোজেনের মুখোমুখি হয়েছে এবং প্রতিক্রিয়া তৈরি করেছে। ইতিহাস এই পদ্ধতিটি 1996 সালে স্ট্যানফোর্ড বিশ্ববিদ্যালয়ের একটি গবেষণাগার দ্বারা প্রথম প্রকাশিত হয়েছিল। অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট টি-কোষের পরিমাণ নির্ধারণের পূর্ববর্তী প্রচেষ্টাগুলিতে কম নির্ভুল সীমিতকরণ পরীক্ষা জড়িত ছিল, যা টি-কোষের সংখ্যা তাদের প্রকৃত স্তরের নিচে 50-500 সময়ে অনুমান করে। টি-সেল রিসেপ্টর এবং এম. এইচ. সি-পেপটাইড মনোমারের কম বাঁধাই সম্পর্কিততার কারণে দ্রবণীয় এম. এইচ. সি মনোমার ব্যবহার করা দাগগুলিও ব্যর্থ হয়েছিল। এম. এইচ. সি টেট্রামারগুলি লক্ষ্য টি-কোষে একাধিক রিসেপ্টরকে আবদ্ধ করতে পারে, যার ফলে মোট বাঁধাই শক্তি বৃদ্ধি পায় এবং বিচ্ছিন্নতার হার কম হয়। সিডি8 + টি-কোষ ব্যবহার করে টেট্রামার দাগ সাধারণত সাইটোটক্সিক টি লিম্ফোসাইট (সিটিএল) জনসংখ্যা বিশ্লেষণ করে। সিটিএলগুলিকে সিডি8 + টি-কোষও বলা হয়, কারণ তাদের সিডি8 সহ-রিসেপ্টর রয়েছে যা এমএইচসি ক্লাস 1 অণুর সাথে আবদ্ধ হয়। শরীরের বেশিরভাগ কোষ এম. এইচ. সি ক্লাস 1 অণু প্রকাশ করে, যা আন্তঃকোষীয় অ্যান্টিজেন প্রক্রিয়াকরণ এবং কোষের পৃষ্ঠে উপস্থিত হওয়ার জন্য দায়ী। যদি এম. এইচ. সি ক্লাস 1 অণু দ্বারা উপস্থাপিত পেপটাইডগুলি বিদেশী হয়-উদাহরণস্বরূপ, কোষের নিজস্ব প্রোটিনের পরিবর্তে ভাইরাল প্রোটিন থেকে উদ্ভূত হয়-পেপটাইডের সাথে মেলে এমন একটি রিসেপ্টর সহ সি. টি. এল কোষটিকে ধ্বংস করে দেবে। টেট্রামার দাগগুলি ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা এই কোষগুলির ভিজ্যুয়ালাইজেশন, কোয়ান্টিফিকেশন এবং বাছাইয়ের অনুমতি দেয়, যা ইমিউনোলজিতে অত্যন্ত কার্যকর। টি-কোষের জনসংখ্যা একটি ভাইরাসের সময়কাল বা একটি টিকা প্রয়োগের পরে ট্র্যাক করা যেতে পারে। টেট্রামার দাগগুলি ইএলআইস্পটের মতো কার্যকরী পরীক্ষার সাথেও যুক্ত করা যেতে পারে, যা একটি নমুনায় সাইটোকাইন নিঃসরণকারী কোষের সংখ্যা সনাক্ত করে। এম. এইচ. সি ক্লাস I টেট্রামার কনস্ট্রাকশন একটি গবেষণাগারে বিকশিত এম. এইচ. সি টেট্রামার অণুগুলি কোষের উপর উপস্থিত জটিল অ্যান্টিজেনের অনুকরণ করতে পারে এবং টি-কোষের সাথে আবদ্ধ হতে পারে যা অ্যান্টিজেনকে চিনতে পারে। প্রথম শ্রেণীর এম. এইচ. সি অণুগুলি একটি অপরিবর্তনীয় হালকা চেইন বিটা-2 মাইক্রোগ্লোবুলিনের (β2m) সাথে যুক্ত একটি পলিমরফিক ভারী α-চেইন দিয়ে গঠিত। এসচেরিকিয়া কোলাই হালকা শৃঙ্খল এবং ভারী শৃঙ্খলের একটি সংক্ষিপ্ত সংস্করণ সংশ্লেষ করতে ব্যবহৃত হয় যার মধ্যে বায়োটিন 15 অ্যামিনো অ্যাসিড স্বীকৃতি ট্যাগ রয়েছে। এই এম. এইচ. সি চেইনগুলি বি. আর. এ এনজাইমের সাথে বায়োটিনিলেটেড এবং আগ্রহের অ্যান্টিজেনিক পেপটাইড দিয়ে পুনরায় ভাঁজ করা হয়। বায়োটিন একটি ছোট অণু যা স্ট্রেপ্টাভিডিন নামে আরেকটি প্রোটিনের সাথে একটি শক্তিশালী বন্ধন তৈরি করে। বায়োইঞ্জিনিয়ার্ড এম. এইচ. সি মনোমারগুলিতে ফ্লুরোফোর ট্যাগযুক্ত স্ট্রেপ্টাভিডিন যোগ করা হয় এবং বায়োটিন-স্ট্রেপ্টাভিডিন মিথস্ক্রিয়া চারটি এম. এইচ. সি মনোমারকে স্ট্রেপ্টাভিডিন-এর সাথে আবদ্ধ করে একটি টেট্রামার তৈরি করে। যখন টেট্রামারগুলি রক্তের নমুনার সাথে মিশ্রিত হয়, তখন তারা উপযুক্ত অ্যান্টিজেন নির্দিষ্ট রিসেপ্টর প্রকাশ করে টি-কোষের সাথে আবদ্ধ হয়। যে কোনও এম. এইচ. সি টেট্রামার যেগুলি আবদ্ধ নয় সেগুলি ফ্লো সাইটোমেট্রি দিয়ে বিশ্লেষণ করার আগে নমুনা থেকে ধুয়ে ফেলা হয়। রিকম্বিনেন্ট এম. এইচ. সি অণুগুলির মধ্যে সাম্প্রতিক অগ্রগতিতে পেপটাইড এম. এইচ. সি জটিল গঠন এবং পরবর্তী মাল্টিমেরাইজেশন গণতান্ত্রিক হয়েছে। এম. এইচ. সি প্রথম শ্রেণীর অণুগুলির একটি বিস্তৃত পরিসরের অত্যন্ত সক্রিয় গঠনগুলি এখন অ-বিশেষজ্ঞ ব্যবহারকারীদের বিশেষ সরঞ্জাম ছাড়াই যে কোনও পরীক্ষাগারে প্রতিদিন তাদের নিজস্ব কাস্টম পেপটাইড-এম. এইচ. সি কমপ্লেক্স তৈরি করার অনুমতি দেয়। সিডি4 + টি-কোষ টেট্রামারও তৈরি করা হয়েছে যা সহায়ক টি-কোষের সাথে আবদ্ধ হয়। সহায়ক টি-কোষ বা সিডি4 + টি-কোষগুলি সিডি4 সহ-রিসেপ্টরগুলিকে প্রকাশ করে। এগুলি দ্বিতীয় শ্রেণীর এম. এইচ. সি অণুগুলির সাথে আবদ্ধ হয়, যা শুধুমাত্র ডেনড্রাইটিক কোষ বা ম্যাক্রোফেজের মতো পেশাদার অ্যান্টিজেন-উপস্থাপক কোষে প্রকাশিত হয়। দ্বিতীয় শ্রেণীর এম. এইচ. সি অণুগুলি বহির্মুখী অ্যান্টিজেন উপস্থাপন করে, যা সহায়ক টি-কোষগুলিকে ব্যাকটেরিয়া, ছত্রাক এবং পরজীবী সনাক্ত করতে সহায়তা করে। দ্বিতীয় শ্রেণীর এম. এইচ. সি টেট্রামারের ব্যবহার আরও সাধারণ হয়ে উঠছে, তবে প্রথম শ্রেণীর টেট্রামারের তুলনায় টেট্রামার তৈরি করা আরও কঠিন এবং সহায়ক টি-কোষ এবং এম. এইচ. সি অণুর মধ্যে বন্ধন আরও দুর্বল। প্রাকৃতিক ঘাতক টি-কোষ প্রাকৃতিক ঘাতক টি-কোষও (এনকেটি কোষ) টেট্রামার প্রযুক্তির সাহায্যে দৃশ্যমান করা যেতে পারে। এনকেটি কোষগুলি প্রোটিনের সাথে আবদ্ধ হয় যা লিপিড বা গ্লাইকোলিপিড অ্যান্টিজেন উপস্থাপন করে। এনকেটি কোষগুলি যে অ্যান্টিজেন উপস্থাপনা জটিলতার সাথে আবদ্ধ হয় তাতে সিডি1 প্রোটিন জড়িত থাকে, তাই সিডি1 দিয়ে তৈরি টেট্রামারগুলি এনকেটি কোষগুলির জন্য দাগ দেওয়ার জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। উদাহরণ এইচ. আই. ভি সংক্রমণের জন্য কোষ-মধ্যস্থ ইমিউন প্রতিক্রিয়ার উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করে টেট্রামার প্রযুক্তির একটি প্রাথমিক প্রয়োগ। এইচ. আই. ভি অ্যান্টিজেন উপস্থাপনের জন্য এম. এইচ. সি টেট্রামার তৈরি করা হয়েছিল এবং সংক্রমিত রোগীদের রক্তের নমুনায় সেই এইচ. আই. ভি অ্যান্টিজেনের জন্য নির্দিষ্ট সি. টি. এল-এর শতাংশ খুঁজে বের করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। এইচ. আই. ভি সংক্রমণে সি. টি. এল-এর কার্যকারিতা চিহ্নিত করতে এটিকে সাইটোটক্সিক পরীক্ষা এবং প্লাজমা আর. এন. এ ভাইরাল লোডের ফলাফলের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। টেট্রামারের সাথে আবদ্ধ সিটিএলগুলিকে সাইটোকাইন নিঃসরণ বিশ্লেষণের জন্য ইএলআইস্পট কূপগুলিতে বাছাই করা হয়েছিল। আরেকটি গবেষণায় ইনফ্লুয়েঞ্জা টিকা বিতরণ পদ্ধতির কার্যকারিতা তদন্ত করতে এম. এইচ. সি টেট্রামার কমপ্লেক্স ব্যবহার করা হয়েছে। ইঁদুরকে ইনফ্লুয়েঞ্জার জন্য সাবকুটেনিয়াস এবং ইন্ট্রানাসাল টিকা দেওয়া হয়েছিল এবং ফ্লো সাইটোমেট্রি সহ টেট্রামার দাগগুলি ভ্যাকসিনে ব্যবহৃত অ্যান্টিজেনের জন্য নির্দিষ্ট সিটিএলগুলি পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। এটি দুটি ভিন্ন টিকা বিতরণ পদ্ধতিতে ইমিউন প্রতিক্রিয়ার (একটি ভাইরাসকে লক্ষ্য করে এমন টি-কোষের সংখ্যা) তুলনা করার অনুমতি দেয়। তথ্যসূত্র আরও পড়া রক্ত পরীক্ষা ফ্লো সাইটোমেট্রি