Terminal deoxynucleotidyl transferase
টার্মিনাল ডিঅক্সিন্যুক্লিওটিডিল ট্রান্সফারেজ (টিডিটি), যা ডিএনএ নিউক্লিওটিডাইলক্সোট্রান্সফেরেজ (ডিএনটিটি) বা টার্মিনাল ট্রান্সফারেজ নামেও পরিচিত, একটি বিশেষ ডিএনএ পলিমারেজ যা অপরিণত, প্রাক-বি, প্রাক-টি লিম্ফয়েড কোষ এবং তীব্র লিম্ফোব্লাস্টিক লিউকেমিয়া/লিম্ফোমা কোষে প্রকাশিত হয়। টিডিটি অ্যান্টিবডি জিন পুনঃসংযোগের সময় টিসিআর এবং বিসিআর জিনের ভি, ডি এবং জে এক্সনে এন-নিউক্লিওটাইড যোগ করে, যা সংযোগমূলক বৈচিত্র্যের ঘটনাকে সক্ষম করে। মানুষের মধ্যে, টার্মিনাল ট্রান্সফারেজ ডিএনটিটি জিন দ্বারা এনকোড করা হয়। ডি. এন. এ পলিমারেজ উৎসেচকের এক্স পরিবারের সদস্য হিসাবে, এটি পলিমারেজ λ এবং পলিমারেজ μ এর সাথে একত্রে কাজ করে, যা উভয়ই পলিমারেজ উৎসেচকের একই এক্স পরিবারের অন্তর্গত। টিডিটি দ্বারা প্রবর্তিত বৈচিত্র্য মেরুদণ্ডী রোগ প্রতিরোধ ব্যবস্থার বিবর্তনে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করেছে, উল্লেখযোগ্যভাবে অ্যান্টিজেন রিসেপ্টরগুলির বিভিন্নতা বৃদ্ধি করেছে যা একটি কোষ প্যাথোজেনগুলির বিরুদ্ধে লড়াই করার জন্য সজ্জিত। টিডিটি নকআউট ইঁদুর ব্যবহার করে করা গবেষণায় সাধারণ বা বন্য-ধরনের সিস্টেমের তুলনায় টি-সেল রিসেপ্টর (টিসিআর) বৈচিত্র্যে ব্যাপক হ্রাস (10 গুণ) পাওয়া গেছে। টিসিআর-এর বৃহত্তর বৈচিত্র্য যা একটি জীব দ্বারা সজ্জিত তা সংক্রমণের বিরুদ্ধে বৃহত্তর প্রতিরোধের দিকে পরিচালিত করে। যদিও টিডিটি 1960 সালে স্তন্যপায়ী প্রাণীদের মধ্যে চিহ্নিত প্রথম ডিএনএ পলিমারেজগুলির মধ্যে একটি ছিল, তবে এটি সমস্ত ডিএনএ পলিমারেজগুলির মধ্যে সবচেয়ে কম বোঝা যায়। 2016-18-এ, টিডিটি তার আরও বিস্তৃতভাবে পরিচিত টেমপ্লেট স্বাধীন আচরণ ছাড়াও ট্রান্স টেমপ্লেট নির্ভরশীল আচরণ প্রদর্শন করতে আবিষ্কৃত হয়েছিল, টিডিটি ভ্রূণের লিভার এইচএসসি-তে অনুপস্থিত, যা ভ্রূণের সময়কালে বি-কোষের সংযোগমূলক বৈচিত্র্যকে উল্লেখযোগ্যভাবে ক্ষতিগ্রস্ত করে। ফাংশন এবং নিয়ন্ত্রণ সাধারণত, টিডিটি একটি ডিএনএ অণুর 3 'টার্মিনাস-এ নিউক্লিওটাইডের সংযোজনকে অনুঘটক করে। বেশিরভাগ ডিএনএ পলিমারেজের মতো নয়, এর জন্য কোনও টেমপ্লেটের প্রয়োজন হয় না। এই উৎসেচকের পছন্দের স্তর হল 3 '-ওভারহ্যাং, তবে এটি 3' প্রান্তে নিউক্লিওটাইড যুক্ত করতে পারে। উপরন্তু, টিডিটি হল একমাত্র পলিমারেজ যা ভিভোর দ্রবণে মুক্ত নিউক্লিওটাইড থেকে 2-15 এনটি ডিএনএ পলিমারের সংশ্লেষণকে অনুঘটক করার জন্য পরিচিত। ইন ভিট্রোতে, এই আচরণ নির্দিষ্ট দৈর্ঘ্য ছাড়াই ডিএনএ পলিমারের সাধারণ গঠনকে অনুঘটক করে। ভিভোতে উত্পাদিত 2-15 nt ডিএনএ টুকরোগুলি ডিএনএ মেরামত এবং/অথবা পুনর্মিলন যন্ত্রপাতি সম্পর্কিত সংকেত পথে কাজ করার জন্য অনুমান করা হয়। অনেক পলিমারেজের মতো, টি. ডি. টি-র জন্য একটি ডাইভ্যালেন্ট ক্যাটায়ন কোফ্যাক্টর প্রয়োজন, তবে, এবং-এর মতো বিস্তৃত ক্যাটায়ন ব্যবহার করার দক্ষতার ক্ষেত্রে টি. ডি. টি অনন্য। এনজাইম্যাটিক ক্রিয়াকলাপের হার নির্ভর করে উপলব্ধ ডাইভ্যালেন্ট ক্যাটায়ন এবং নিউক্লিওটাইড যোগ করার উপর। টিডিটি বেশিরভাগ প্রাথমিক লিম্ফয়েড অঙ্গগুলিতে প্রকাশিত হয়, যেমন থাইমাস এবং অস্থি মজ্জা। এর অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণ একাধিক পথের মাধ্যমে ঘটে। এর মধ্যে রয়েছে প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া, যেমন টি. ডি. আই. এফ1। টি. ডি. আই. এফ1 হল আরেকটি প্রোটিন যা টি. ডি. টি পলিমারেজের ডি. এন. এ বাঁধাই অঞ্চলটিকে আড়াল করে টি. ডি. টি-র সাথে মিথস্ক্রিয়া করে তার কার্যকারিতা রোধ করে। টিডিটি অভিব্যক্তির নিয়ন্ত্রণ প্রতিলিপি স্তরেও বিদ্যমান, পর্যায়-নির্দিষ্ট কারণগুলির দ্বারা প্রভাবিত নিয়ন্ত্রণ সহ, এবং একটি উন্নয়নমূলকভাবে সীমাবদ্ধ পদ্ধতিতে ঘটে। যদিও অভিব্যক্তিটি সাধারণত প্রাথমিক লিম্ফয়েড অঙ্গগুলিতে পাওয়া যায়, সাম্প্রতিক গবেষণায় পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে অ্যান্টিজেনের মাধ্যমে উদ্দীপনার ফলে টি-কোষের জন্য থাইমাসের বাইরে জিন পুনর্বিন্যাসের জন্য প্রয়োজনীয় অন্যান্য এনজাইমগুলির সাথে গৌণ টিডিটি অভিব্যক্তি হতে পারে। তীব্র লিম্ফোব্লাস্টিক লিউকেমিয়ার রোগীরা প্রচুর পরিমাণে টিডিটি উৎপাদন করে। এই রোগীদের থেকে উদ্ভূত কোষের রেখা বিশুদ্ধ টি. ডি. টি-র প্রথম উৎসগুলির মধ্যে একটি হিসাবে কাজ করে এবং এই আবিষ্কারের দিকে পরিচালিত করে যে মানব এবং গবাদি পশুর আইসোফর্মগুলির মধ্যে ক্রিয়াকলাপের পার্থক্য রয়েছে। অনেক পলিমারেজের মতো, টি. ডি. টি-র অনুঘটক স্থানের পাম ডোমেনে দুটি ডাইভ্যালেন্ট ক্যাটায়ন রয়েছে যা নিউক্লিওটাইড বাঁধনে সহায়তা করে, 3 '-ও. এইচ গ্রুপের পি. কে. এ কমাতে সহায়তা করে এবং শেষ পর্যন্ত ফলস্বরূপ পাইরোফসফেট উপ-পণ্যের প্রস্থানকে সহজতর করে। আইসোফর্মের বৈচিত্র্য টি. ডি. টি-র বেশ কয়েকটি আইসোফর্ম ইঁদুর, গবাদি পশু এবং মানুষের মধ্যে দেখা গেছে। আজ অবধি, ইঁদুরের মধ্যে দুটি রূপ চিহ্নিত করা হয়েছে এবং তিনটি মানুষের মধ্যে চিহ্নিত করা হয়েছে। ইঁদুরের মধ্যে চিহ্নিত দুটি স্প্লাইস ভ্যারিয়েন্ট তাদের নিজ নিজ দৈর্ঘ্য অনুযায়ী নামকরণ করা হয়েছেঃ টিডিটিএস 509 অ্যামিনো অ্যাসিড নিয়ে গঠিত এবং টিডিটিএল, দীর্ঘতর ভ্যারিয়েন্ট, 529 অ্যামিনো অ্যাসিড নিয়ে গঠিত। টিডিটিএস এবং টিডিটিএল-এর মধ্যে পার্থক্য ডিএনএ এবং নিউক্লিওটাইডগুলিকে আবদ্ধ করে এমন অঞ্চলের বাইরে ঘটে। 20টি অ্যামিনো অ্যাসিডের পার্থক্য এনজাইম্যাটিক ক্রিয়াকলাপকে প্রভাবিত করে তা বিতর্কিত, কেউ কেউ যুক্তি দেন যে টিডিটিএল-এর পরিবর্তনগুলি এক্সোন্যুক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপ প্রদান করে যেখানে অন্যরা যুক্তি দেন যে টিডিটিএল এবং টিডিটিএস-এর ইন ভিট্রো ক্রিয়াকলাপ প্রায় অভিন্ন। উপরন্তু, টিডিটিএল একটি অজানা পদ্ধতির মাধ্যমে ভিভোতে টিডিটিএস-এর অনুঘটক ক্রিয়াকলাপকে সংশোধন করতে পারে বলে জানা গেছে। এটি পরামর্শ দেওয়া হয় যে এটি ভি (ডি) জে পুনর্মিলনে টিডিটির ভূমিকা নিয়ন্ত্রণে সহায়তা করে। মানব টিডিটি আইসোফর্মের তিনটি রূপ রয়েছে-টিডিটিএল1, টিডিটিএল2 এবং টিডিটিএস। টিডিটিএল1 লিম্ফয়েড কোষের রেখায় ব্যাপকভাবে প্রকাশিত হয় যেখানে টিডিটিএল2 প্রধানত সাধারণ ছোট লিম্ফোসাইটগুলিতে প্রকাশিত হয়। উভয়ই যখন প্রকাশ করা হয় তখন নিউক্লিয়াসে অবস্থান করে এবং উভয়ই 3 '-> 5' এক্সোনিউক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপ ধারণ করে। এর বিপরীতে, টিডিটিএস আইসোফর্মগুলি এক্সোন্যুক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপ ধারণ করে না এবং ভি (ডি) জে পুনর্মিলনের সময় প্রয়োজনীয় বর্ধিতকরণ সম্পাদন করে। যেহেতু মুরিন টিডিটিএল-এ অনুমান করা অনুরূপ এক্সোন্যুক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপ মানব এবং বোভাইন টিডিটিএল-এ পাওয়া যায়, কেউ কেউ মনে করেন যে বোভাইন এবং মানব টিডিটিএল আইসোফর্মগুলি ইঁদুরের মতো একই পদ্ধতিতে টিডিটিএস আইসোফর্মগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করে। উপরন্তু, কেউ কেউ অনুমান করেন যে টিডিটিএল1 টিডিটিএল2 এবং/অথবা টিডিটিএস কার্যকলাপের নিয়ন্ত্রণে জড়িত থাকতে পারে। ভি (ডি) জে পুনর্মিলনে ভূমিকা আরএজি 1/2 এনজাইমের ক্রিয়ার পরে, ক্লিভেজ ইভেন্ট দ্বারা তৈরি প্রতিটি ডিএনএ বিভাগের শেষে ক্লিভড ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ-তে হেয়ারপিন কাঠামো থাকে। হেয়ারপিনগুলি উভয়ই আর্টেমিস কমপ্লেক্স দ্বারা খোলা হয়, যার ফসফোরিলেটেড হলে এন্ডোনিউক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপ থাকে, যা টিডিটি-কে কাজ করার জন্য মুক্ত 3 'ওএইচ প্রান্ত সরবরাহ করে। একবার আর্টেমিস কমপ্লেক্স তার কাজ শেষ করে এবং সদ্য খোলা ডিএনএ হেয়ারপিনে প্যালিনড্রোমিক নিউক্লিওটাইড (পি-নিউক্লিওটাইড) যুক্ত করে, টিডিটি তার কাজ করার জন্য মঞ্চ তৈরি করে। টিডিটি এখন 5 'থেকে 3' দিকে বিদ্যমান পি-নিউক্লিওটাইডগুলিতে এন-নিউক্লিওটাইড যুক্ত করতে সক্ষম যা পলিমারেজগুলি কাজ করার জন্য পরিচিত। আর্টেমিস কমপ্লেক্সের ক্রিয়ার পরে উত্পন্ন প্রতিটি 3 'প্রান্তে গড়ে 2-5টি এলোমেলো বেস জোড়া যোগ করা হয়। যোগ করা ঘাঁটির সংখ্যা দুটি নতুন সংশ্লেষিত এস. এস. ডি. এন. এ বিভাগের জন্য স্বাভাবিক ওয়াটসন-ক্রিক বেস পেয়ারিং প্যাটার্ন (এ-টি, সি-জি) অনুসারে অ-সমজাতীয় শেষ যোগদানের সময় মাইক্রোহোমোলজি সারিবদ্ধকরণের জন্য যথেষ্ট। সেখান থেকে অপ্রচলিত নিউক্লিওটাইডগুলি আর্টেমিস কমপ্লেক্সের মতো একটি এক্সোন্যুক্লিয়াস দ্বারা নির্গত হয় (যার এন্ডোন্যুক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপের পাশাপাশি এক্সোন্যুক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপ রয়েছে), এবং তারপরে টেমপ্লেট-নির্ভর পলিমারেজগুলি ফাঁকগুলি পূরণ করতে পারে, অবশেষে লিগাসের ক্রিয়ার সাথে নতুন কোডিং জয়েন্ট তৈরি করে বিভাগগুলিকে একত্রিত করে। যদিও টিডিটি এন-নিউক্লিওটাইড বিভাগে যোগ করার সময় চারটি ক্ষারীয় জোড়ার মধ্যে বৈষম্য করে না, তবে এটি গুয়ানিন এবং সাইটোসিন ক্ষারীয় জোড়ার জন্য পক্ষপাত দেখিয়েছে। টেমপ্লেট নির্ভর ক্রিয়াকলাপ একটি টেমপ্লেট-নির্ভর পদ্ধতিতে, টিডিটি বেশিরভাগ পলিমারেসে পাওয়া ইন সিস পদ্ধতির বিপরীতে ট্রান্স হিসাবে উল্লেখ করা পদ্ধতিতে ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএতে স্ট্র্যান্ড ব্রেক জুড়ে নিউক্লিওটাইডগুলিকে অন্তর্ভুক্ত করতে পারে। এটি ক্রমবর্ধমান ব্যবধানের সাথে স্ট্র্যান্ড এবং কমের মধ্যে একটি বেস-পেয়ার বিরতির সাথে সর্বোত্তমভাবে ঘটে। এটি লুপ1 নামক টি. ডি. টি-র একটি উপবিভাগ দ্বারা সহজতর হয় যা নির্বাচিতভাবে ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডি. এন. এ-তে সংক্ষিপ্ত বিরতির জন্য অনুসন্ধান করে। উপরন্তু, এই টেমপ্লেট নির্ভর ক্রিয়াকলাপের আবিষ্কার আরও বিশ্বাসযোগ্য যান্ত্রিক অনুমানের দিকে পরিচালিত করেছে যে কীভাবে ভি (ডি) জে পুনর্মিলনে এন অঞ্চলের সংযোজনগুলির দৈর্ঘ্যের বন্টন ঘটে। পলিমারেজ মাইক্রো এবং পলিমারেজ λ ট্রান্স টেম্পলেটেড নির্ভরশীল সিন্থেটিক ক্রিয়াকলাপে টিডিটির অনুরূপ প্রদর্শন করে, তবে ডাউনস্ট্রিম ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএর উপর অনুরূপ নির্ভরতা ছাড়াই। এছাড়াও, পলিমরেজ λ অনুরূপ টেমপ্লেট-স্বাধীন সিন্থেটিক ক্রিয়াকলাপ প্রদর্শন করতে দেখা গেছে। টার্মিনাল ট্রান্সফারেজ হিসাবে ক্রিয়াকলাপের পাশাপাশি, এটি আরও সাধারণ টেমপ্লেট-নির্ভর ফ্যাশনে কাজ করার জন্যও পরিচিত। টিডিটি এবং পলিমারেজ-এর মধ্যে সাদৃশ্য থেকে বোঝা যায় যে এগুলি বিবর্তনীয়ভাবে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত। ইউজেস টার্মিনাল ট্রান্সফারেজের আণবিক জীববিজ্ঞানে প্রয়োগ রয়েছে। এটি আর. এ. সি. ই-তে নিউক্লিওটাইড যোগ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে যা পরবর্তী পি. সি. আর-এ প্রাইমারের জন্য একটি টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। এটি তেজস্ক্রিয় আইসোটোপগুলির সাথে লেবেলযুক্ত নিউক্লিওটাইডগুলি যুক্ত করতেও ব্যবহার করা যেতে পারে, উদাহরণস্বরূপ অ্যাপোপটোসিসের প্রদর্শনের জন্য টিইউএনইএল পরীক্ষায় (টার্মিনাল ডিওক্সিন্যুক্লিওটিডিল ট্রান্সফারেজ ডিইউটিপি নিক এন্ড লেবেলিং) (যা আংশিকভাবে, খণ্ডিত ডিএনএ দ্বারা চিহ্নিত করা হয়)। এটি তীব্র লিম্ফোব্লাস্টিক লিউকেমিয়া নির্ণয়ের জন্য ইমিউনোফ্লোরেসেন্স পরীক্ষায়ও ব্যবহৃত হয়। ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি এবং ফ্লো সাইটোমেট্রি-তে, টিডিটি-র অ্যান্টিবডিগুলি অপরিণত টি এবং বি কোষ এবং প্লুরিপোট্যান্ট হেমাটোপোয়েটিক স্টেম কোষের উপস্থিতি প্রদর্শন করতে ব্যবহার করা যেতে পারে, যা অ্যান্টিজেন ধারণ করে, যখন পরিপক্ক লিম্ফয়েড কোষগুলি সর্বদা টিডিটি-নেতিবাচক হয়। যদিও টিডিটি-পজিটিভ কোষগুলি স্বাস্থ্যকর লিম্ফ নোড এবং টনসিলগুলিতে অল্প সংখ্যায় পাওয়া যায়, তীব্র লিম্ফোব্লাস্টিক লিউকেমিয়ার ম্যালিগন্যান্ট কোষগুলিও টিডিটি-পজিটিভ, এবং তাই অ্যান্টিবডিগুলি এই রোগ নির্ণয়ের জন্য একটি প্যানেলের অংশ হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে এবং এটিকে শৈশবের ছোট কোষের টিউমার থেকে আলাদা করতে পারে। টিডিটি অলিগোনিউক্লিওটাইডের ডি নোভো সংশ্লেষণে সাম্প্রতিক প্রয়োগও দেখেছে, যেখানে টিডিটি-ডিএনটিপি টেথারড অ্যানালগগুলি একবারে 1 নট দ্বারা প্রাইমার এক্সটেনশন করতে সক্ষম। অন্য কথায়, টিডিটি উৎসেচক একটি প্রাইমার ক্রমে একবারে একটি অক্ষর যোগ করে সিন্থেটিক ডিএনএ তৈরির ক্ষমতা প্রদর্শন করেছে। আরও দেখুন ডি. এন. এ ডি. এন. এ পলিমারেজ রেফারেন্স আরও পড়া বাহ্যিক লিঙ্ক ইসি 2.7.7