H&E stain
হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন দাগ (বা হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন দাগ বা হেমাটোক্সিলিন-ইওসিন দাগ; প্রায়শই এইচ অ্যান্ড ই দাগ বা এইচই দাগ হিসাবে সংক্ষিপ্ত করা হয়) হিস্টোলজিতে ব্যবহৃত প্রধান টিস্যু দাগগুলির মধ্যে একটি। এটি চিকিৎসা নির্ণয়ের ক্ষেত্রে সর্বাধিক ব্যবহৃত দাগ এবং প্রায়শই এটি স্বর্ণমান। উদাহরণস্বরূপ, যখন একজন প্যাথলজিস্ট সন্দেহভাজন ক্যান্সারের বায়োপসি দেখেন, তখন হিস্টোলজিকাল বিভাগে এইচ অ্যান্ড ই দাগ পড়ার সম্ভাবনা থাকে। এইচ অ্যান্ড ই হল দুটি হিস্টোলজিকাল দাগের সংমিশ্রণঃ হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন। হেমাটোক্সিলিন কোষের নিউক্লিয়াসকে বেগুনি নীল রঙে দাগ দেয় এবং ইওসিন এক্সট্রাসেলুলার ম্যাট্রিক্স এবং সাইটোপ্লাজম গোলাপী রঙে দাগ দেয়, অন্যান্য কাঠামো বিভিন্ন রঙ, রঙ এবং এই রঙের সংমিশ্রণ গ্রহণ করে। সুতরাং একজন প্যাথলজিস্ট সহজেই একটি কোষের পারমাণবিক এবং সাইটোপ্লাজমিক অংশগুলির মধ্যে পার্থক্য করতে পারেন এবং উপরন্তু, দাগ থেকে রঙের সামগ্রিক নিদর্শনগুলি কোষের সাধারণ বিন্যাস এবং বিতরণ দেখায় এবং টিস্যু নমুনার কাঠামোর একটি সাধারণ সংক্ষিপ্ত বিবরণ প্রদান করে। সুতরাং, প্যাটার্ন স্বীকৃতি, উভয়ই বিশেষজ্ঞ মানুষের দ্বারা এবং সফ্টওয়্যার দ্বারা যা সেই বিশেষজ্ঞদের (ডিজিটাল প্যাথলজিতে) সহায়তা করে, হিস্টোলজিক তথ্য সরবরাহ করে। এই দাগের সংমিশ্রণটি 1877 সালে রাশিয়ার কাসান ইম্পেরিয়াল বিশ্ববিদ্যালয়ে রসায়নবিদ এন. উইসোজকি দ্বারা চালু করা হয়েছিল। H & E স্টেনিং পদ্ধতিটি আংশিকভাবে হিস্টোলজির প্রধান দাগ কারণ এটি দ্রুত করা যেতে পারে, ব্যয়বহুল নয় এবং টিস্যুগুলিকে এমনভাবে দাগ দেয় যে যথেষ্ট পরিমাণে মাইক্রোস্কোপিক শারীরস্থান প্রকাশিত হয় এবং হিস্টোপ্যাথোলজিক অবস্থার বিস্তৃত নির্ণয়ের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। এইচ অ্যান্ড ই দাগের ফলাফলগুলি টিস্যু ঠিক করতে ব্যবহৃত রাসায়নিকের উপর অতিরিক্ত নির্ভরশীল নয় বা ল্যাবরেটরি প্রোটোকলে সামান্য অসঙ্গতি নেই এবং এই কারণগুলি হিস্টোলজিতে এর নিয়মিত ব্যবহারে অবদান রাখে। এইচ অ্যান্ড ই দাগ সর্বদা সমস্ত টিস্যু, কোষীয় কাঠামো বা রাসায়নিক পদার্থের বিতরণকে আলাদা করার জন্য পর্যাপ্ত বৈপরীত্য সরবরাহ করে না এবং এই ক্ষেত্রে আরও নির্দিষ্ট দাগ এবং পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়। প্রয়োগের পদ্ধতি এইচ অ্যান্ড ই পদ্ধতিতে ব্যবহৃত হেমাটোক্সিলিন দ্রবণ (গঠন) প্রস্তুত করার অনেক উপায় রয়েছে, উপরন্তু, এইচ অ্যান্ড ই দাগযুক্ত স্লাইড তৈরির জন্য অনেক পরীক্ষাগার প্রোটোকল রয়েছে, যার মধ্যে কয়েকটি নির্দিষ্ট পরীক্ষাগারের জন্য নির্দিষ্ট হতে পারে। যদিও কোনও আদর্শ পদ্ধতি নেই, তবে প্রচলিত নিয়মে ফলাফলগুলি যুক্তিসঙ্গতভাবে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে কোষের নিউক্লিয়াসগুলি দাগযুক্ত নীল এবং সাইটোপ্লাজম এবং এক্সট্রাসেলুলার ম্যাট্রিক্সগুলি দাগযুক্ত গোলাপী। হিস্টোলজি পরীক্ষাগারগুলি কোনও নির্দিষ্ট প্যাথলজিস্টের জন্য দাগের পরিমাণ বা প্রকারও সামঞ্জস্য করতে পারে। টিস্যুগুলি সংগ্রহ করার পরে (প্রায়শই বায়োপসি হিসাবে) এবং স্থির করার পরে, এগুলি সাধারণত ডিহাইড্রেটেড হয় এবং গলিত প্যারাফিন মোমের মধ্যে এম্বেড করা হয়, ফলস্বরূপ ব্লকটি একটি মাইক্রোটোমে মাউন্ট করা হয় এবং পাতলা টুকরো করে কাটা হয়। স্লাইসগুলি মাইক্রোস্কোপ স্লাইডে লাগানো হয় যেখানে একটি দ্রাবক দিয়ে মোম অপসারণ করা হয় এবং স্লাইডগুলির সাথে সংযুক্ত টিস্যু স্লাইসগুলি পুনরায় হাইড্রেট করা হয় এবং দাগ দেওয়ার জন্য প্রস্তুত থাকে। বিকল্পভাবে, এইচ অ্যান্ড ই দাগ মোহস সার্জারিতে সর্বাধিক ব্যবহৃত দাগ যেখানে টিস্যুগুলি সাধারণত হিমায়িত করা হয়, একটি ক্রায়োস্ট্যাট (একটি মাইক্রোটোম যা হিমায়িত টিস্যু কেটে দেয়) কেটে, অ্যালকোহলে স্থির করা হয় এবং তারপরে দাগ দেওয়া হয়। এইচ অ্যান্ড ই স্টেনিং পদ্ধতিতে ধাতব লবণ বা মর্ড্যান্টের সাথে মিশ্রিত হেমাটোক্সিলিন প্রয়োগ করা হয়, প্রায়শই অতিরিক্ত দাগ (পার্থক্য) অপসারণের জন্য দুর্বল অ্যাসিড দ্রবণে ধুয়ে ফেলা হয়, তারপরে হালকা ক্ষারীয় জলে ব্লু করা হয়। হেমাটোক্সিলিন প্রয়োগের পরে, টিস্যুতে ইওসিন (সাধারণত ইওসিন ওয়াই) দিয়ে পাল্টা দাগ দেওয়া হয়। ফলাফল হেমাটোক্সিলিন প্রধানত নীল বা গাঢ়-বেগুনি কোষের নিউক্লিয়াসের পাশাপাশি আরও কয়েকটি টিস্যু যেমন কেরাটোহায়ালিন গ্রানুল এবং ক্যালসিফায়েড উপাদানকে রঙ দেয়। ইওসিন সাইটোপ্লাজম এবং কোলাজেনের মতো এক্সট্রাসেলুলার ম্যাট্রিক্স সহ কিছু অন্যান্য কাঠামোকে গোলাপী রঙের পাঁচটি শেডে দাগ দেয়। ইওসিনোফিলিক (ইওসিন দ্বারা দাগযুক্ত পদার্থ) কাঠামো সাধারণত আন্তঃকোষীয় বা বহির্মুখী প্রোটিন দ্বারা গঠিত হয়। লুই দেহ এবং ম্যালরি দেহগুলি ইওসিনোফিলিক কাঠামোর উদাহরণ। বেশিরভাগ সাইটোপ্লাজম ইওসিনোফিলিক এবং গোলাপী হয়ে থাকে। লোহিত রক্তকণিকা তীব্রভাবে লাল দাগযুক্ত হয়। কর্মপদ্ধতি যদিও হেমাটক্সিন, হেমাটক্সিলিনের একটি জারিত রূপ, সক্রিয় রঙিন (যখন একটি মর্ড্যান্টের সাথে মিলিত হয়), দাগটি এখনও হেমাটক্সিলিন হিসাবে উল্লেখ করা হয়। হেমাটোক্সিলিন, যখন একটি মর্ড্যান্টের (সাধারণত অ্যালুমিনিয়াম আলুম) সাথে মিলিত হয় তখন প্রায়শই একটি মৌলিক, ধনাত্মক চার্জযুক্ত বা ক্যাশনিক দাগের "অনুরূপ" বলে মনে করা হয়। ইওসিন একটি অ্যানায়োনিক (নেতিবাচকভাবে চার্জ করা) এবং অ্যাসিডিক দাগ। হেমালাম (অ্যালুমিনিয়াম আয়ন এবং হেমাটাইনের সংমিশ্রণ) দ্বারা নিউক্লিয়াসের দাগ সাধারণত ডাই-মেটাল কমপ্লেক্সকে ডি. এন. এ-র সাথে বাঁধার কারণে হয়, তবে টিস্যু বিভাগ থেকে ডি. এন. এ উত্তোলনের পরে পারমাণবিক দাগ পাওয়া যায়। এই প্রক্রিয়াটি থাইওনিন বা টলুইডিন নীলের মতো মৌলিক (ক্যাশনিক) রঞ্জক দ্বারা পারমাণবিক দাগের থেকে আলাদা। মৌলিক রঞ্জক দ্বারা দাগ কেবলমাত্র হেমালামের চেয়ে কম অম্লীয় দ্রবণ থেকে হয় এবং এটি নিউক্লিক অ্যাসিডের পূর্ববর্তী রাসায়নিক বা এনজাইম্যাটিক নিষ্কাশন দ্বারা প্রতিরোধ করা হয়। অ্যালুমিনিয়াম এবং হেমাটিনকে একসঙ্গে ধরে রাখার মতো সমন্বিত বন্ধনগুলি ডিএনএ এবং নিউক্লিয়ার ক্রোমাটিনের কার্বক্সি গ্রুপের প্রোটিনের সাথে হেমালাম কমপ্লেক্সকে আবদ্ধ করে বলে প্রমাণ রয়েছে। বেসোফিলিক এবং ইওসিনোফিলিক বলার জন্য কাঠামোগুলি অ্যাসিডিক বা ক্ষারীয় হতে হবে না; পরিভাষাটি রঞ্জকগুলির জন্য সেলুলার উপাদানগুলির সাদৃশ্যের উপর ভিত্তি করে। অন্যান্য রঙ, যেমন। হলুদ এবং বাদামী, নমুনায় উপস্থিত থাকতে পারে; এগুলি মেলানিনের মতো অভ্যন্তরীণ রঞ্জক দ্বারা সৃষ্ট। বেসাল ল্যামিনা যদি ভালভাবে দৃশ্যমান হতে হয় তবে পিএএস দাগ বা কিছু রূপালী দাগ দ্বারা দাগ দেওয়া প্রয়োজন। রেটিকুলার তন্তুগুলিরও রূপালী দাগ প্রয়োজন। হাইড্রোফোবিক কাঠামোও পরিষ্কার থাকে; এগুলি সাধারণত চর্বিতে সমৃদ্ধ, যেমন। অ্যাডিপোসাইট, নিউরন অ্যাক্সনগুলির চারপাশে মায়েলিন এবং গলগি যন্ত্রপাতি ঝিল্লি। এইচ অ্যান্ড ই দাগযুক্ত টিস্যুর উদাহরণ আরও পড়া কিরনান জে. এ (2008) হিস্টোলজিকাল এবং হিস্টোকেমিক্যাল পদ্ধতিঃ তত্ত্ব এবং অনুশীলন। 4র্থ সংস্করণ। ব্লক্সহ্যাম, যুক্তরাজ্যঃ স্কিয়ন। লিলি আরডি, পিজোলাটো পি, ডোনাল্ডসন পিটি (1976) দ্রবণীয় মেটাক্রোম মরড্যান্ট লেক ডাই সহ পারমাণবিক দাগ। রাসায়নিক এন্ডগ্রুপ ব্লকিং প্রতিক্রিয়ার প্রভাব এবং টিস্যুতে অ্যাসিড গ্রুপের কৃত্রিম প্রবর্তন। হিস্টোকেমিস্ট্রি 49:23-35। Llewellyn BD (2009) নিউক্লিয়ার স্টেনিং উইথ অ্যালাম-হেমাটক্সিলিন। বায়োটেক। হিস্টোকেম। 84: 159-177। পুচলার এইচ, মেলোয়ান এস. এন, ওয়ালড্রপ এফ. এস. (1986) ধাতু-হেমাটিন এবং-ব্রাজিলিনের দাগগুলিতে বর্তমান রাসায়নিক ধারণার প্রয়োগ। হিস্টোকেমিস্ট্রি 85:353-364। বাহ্যিক সংযোগ সিগমা-অ্যালড্রিক এইচ অ্যান্ড ই ইনফরমেশনাল প্রাইমার প্রোটোকল রুটিন মেয়ারের হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন স্টেইন (এইচ অ্যান্ড ই) হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন (এইচ অ্যান্ড ই) স্টেনিং প্রোটোকল রোজেন ল্যাব, আণবিক ও কোষীয় জীববিজ্ঞান বিভাগ, বেলর কলেজ অফ মেডিসিন) ধাপে ধাপে এইচ-ই স্টেইন মাইক্রোস্কোপি মাইক্রোবায়োলজি কৌশল ল্যাবরেটরি কৌশল হিস্টোপ্যাথোলজি হিস্টোটেকনোলজি স্টেনিং ডাই স্টেনিং