Isotope-coded affinity tag
একটি আইসোটোপ-কোডেড অ্যাফিনিটি ট্যাগ (আইসিএটি) একটি ইন-ভিট্রো আইসোটোপিক লেবেলিং পদ্ধতি যা ভর বর্ণালী দ্বারা পরিমাণগত প্রোটিওমিক্সের জন্য ব্যবহৃত হয় যা রাসায়নিক লেবেলিং বিকারক ব্যবহার করে। এই রাসায়নিক প্রোবগুলি তিনটি উপাদান নিয়ে গঠিতঃ একটি অ্যামিনো অ্যাসিড সাইড চেইন লেবেল করার জন্য একটি প্রতিক্রিয়াশীল গ্রুপ (যেমন, সিস্টিনের অবশিষ্টাংশগুলি সংশোধন করার জন্য আয়োডোঅ্যাসিটামাইড), একটি আইসোটোপিকভাবে কোডেড লিঙ্কার এবং লেবেলযুক্ত প্রোটিন/পেপটাইডগুলির অ্যাফিনিটি বিচ্ছিন্নতার জন্য একটি ট্যাগ (যেমন, বায়োটিন)। নমুনাগুলি একত্রিত করা হয় এবং তারপর ক্রোমাটোগ্রাফির মাধ্যমে পৃথক করা হয়, তারপর প্রোটিনের মধ্যে ভর-থেকে-চার্জ অনুপাত নির্ধারণ করতে একটি ভর স্পেকট্রোমিটারের মাধ্যমে পাঠানো হয়। শুধুমাত্র পেপটাইডযুক্ত সিস্টিন বিশ্লেষণ করা যেতে পারে। যেহেতু শুধুমাত্র পেপটাইডযুক্ত সিস্টিন বিশ্লেষণ করা হয়, তাই প্রায়শই পোস্ট ট্রান্সলেশনাল পরিবর্তনটি হারিয়ে যায়। মূল ট্যাগগুলি ডিউটেরিয়াম ব্যবহার করে তৈরি করা হয়েছিল, কিন্তু পরে একই গোষ্ঠী তরল ক্রোমাটোগ্রাফির সময় শীর্ষ পৃথকীকরণের সমস্যাগুলিকে এড়াতে 13সি ব্যবহার করে ট্যাগগুলিকে নতুন করে ডিজাইন করেছিল কারণ ডিউটেরিয়াম কলামের স্থির পর্যায়ের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে। পরিমাণগত প্রোটিওমিক্স দুটি প্রোটিওমের পরিমাণগত তুলনার জন্য, একটি নমুনাকে আইসোটোপিকভাবে হালকা (ডি0) প্রোব এবং অন্যটিকে আইসোটোপিকভাবে ভারী (ডি8) সংস্করণ দিয়ে চিহ্নিত করা হয়। ত্রুটি হ্রাস করার জন্য, উভয় নমুনাকে তারপর একত্রিত করা হয়, একটি প্রোটিজ (অর্থাৎ, ট্রিপসিন) দিয়ে হজম করা হয় এবং আইসোটোপ-কোডেড ট্যাগিং বিকারকগুলির সাথে লেবেলযুক্ত পেপটাইডগুলিকে পৃথক করার জন্য অ্যাভিডিন অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি করা হয়। এই পেপটাইডগুলি তারপর তরল ক্রোমাটোগ্রাফি-মাস স্পেকট্রোমেট্রি (এলসি-এমএস) দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়। দুটি নমুনায় প্রোটিনের আপেক্ষিক মাত্রা নির্ধারণের জন্য পৃথকভাবে ভর-ট্যাগ করা পেপটাইড জোড়ার সংকেত তীব্রতার অনুপাত পরিমাপ করা হয়। তথ্যসূত্র জৈব রসায়ন সনাক্তকরণ পদ্ধতি প্রোটিওমিক্স