T7 expression system
টি7 এক্সপ্রেশন সিস্টেমটি অণুজীববিজ্ঞানের ক্ষেত্রে ই. কোলাইয়ের স্ট্রেন ব্যবহার করে রিকম্বিনেন্ট ডিএনএ ক্লোন করতে ব্যবহৃত হয়। ই. কোলাই-তে রিকম্বিনেন্ট প্রোটিন প্রকাশের জন্য এটি সবচেয়ে জনপ্রিয় পদ্ধতি। 2021 সালের মধ্যে, এই পদ্ধতিটি 220,000-এরও বেশি গবেষণা প্রকাশনাতে বর্ণনা করা হয়েছিল। উন্নয়ন টি7 ব্যাকটেরিওফেজের জিনোমের সিকোয়েন্সিং এবং অ্যানোটেটিং 1980-এর দশকে সিনিয়র বায়োফিজিসিস্ট এফ উইলিয়াম স্টুডিয়ারের অধীনে মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের জ্বালানি বিভাগের ব্রুকহেভেন ন্যাশনাল ল্যাবরেটরিতে হয়েছিল। শীঘ্রই, গবেষণাগারটি টি7 আরএনএ পলিমারেজকে ক্লোন করতে সক্ষম হয় এবং শক্তিশালী টি7 প্রবর্তক সহ প্রায় যে কোনও জিনের প্রচুর পরিমাণে প্রতিলিপি করতে এটি ব্যবহার করে। টি7 এক্সপ্রেশন সিস্টেমের বিকাশকে ব্রুকহেভেন ন্যাশনাল ল্যাবরেটরিতে বিকশিত সবচেয়ে সফল জৈবপ্রযুক্তি হিসাবে বিবেচনা করা হয়, যা 900 টিরও বেশি সংস্থার দ্বারা লাইসেন্সপ্রাপ্ত যা ল্যাবের জন্য 55 মিলিয়ন ডলারেরও বেশি আয় করেছে। একটি অভিব্যক্তি ভেক্টর, সাধারণত পিইটি অভিব্যক্তি ভেক্টর, দুটি প্রয়োজনীয় উপাদানকে সংহত করার জন্য ইঞ্জিনিয়ার করা হয়ঃ একটি টি 7 প্রবর্তক এবং প্রবর্তকের নীচের দিকে এবং তার নিয়ন্ত্রণে আগ্রহের একটি জিন। অভিব্যক্তি ভেক্টরটি ই. কোলাইয়ের বেশ কয়েকটি প্রাসঙ্গিক স্ট্রেনের মধ্যে একটিতে রূপান্তরিত হয়, প্রায়শই বিএল21 (ডিই3)। ই. কোলাই কোষের নিজস্ব ক্রোমোজোমও রয়েছে, যার একটি জিন রয়েছে যা টি7 আরএনএ পলিমারেজ উৎপাদনের জন্য প্রকাশ করা হয়। (এই পলিমারেজ টি7 ফেজ থেকে উৎপন্ন হয়, একটি ব্যাকটেরিওফেজ ভাইরাস যা ই. কোলাই ব্যাকটেরিয়া কোষকে সংক্রামিত করে এবং তার ডিএনএকে হোস্ট ডিএনএতে সংহত করতে সক্ষম, পাশাপাশি তার সেলুলার যন্ত্রপাতিগুলিকে ওভাররাইড করে নিজের আরও অনুলিপি তৈরি করতে সক্ষম।) টি7 আরএনএ পলিমারেজ রূপান্তরিত ভেক্টরের টি7 প্রবর্তকের প্রতিলিপি শুরু করার জন্য দায়ী। টি7 জিন নিজেই একটি ল্যাক প্রবর্তকের নিয়ন্ত্রণে থাকে। সাধারণত, ল্যাক প্রবর্তক এবং টি7 প্রবর্তক উভয়ই ল্যাক দমনকারী দ্বারা ই. কোলাই কোষে দমন করা হয়। ট্রান্সক্রিপশন শুরু করার জন্য, একটি ইন্ডুসারকে অবশ্যই ল্যাক রিপ্রেসারের সাথে আবদ্ধ হতে হবে এবং টি 7 জিনের জিন অভিব্যক্তি প্রতিরোধ করতে হবে। একবার এটি হয়ে গেলে, জিনটি সাধারণত T7 RNA পলিমারেজ উৎপাদনের জন্য প্রতিলিপি করা যেতে পারে। টি7 আরএনএ পলিমারেজ, পরিবর্তে, অভিব্যক্তি ভেক্টরের উপর টি7 প্রবর্তকের সাথে আবদ্ধ হতে পারে এবং তার আগ্রহের নিম্নমুখী জিন প্রতিলিপি করা শুরু করতে পারে। এই প্রক্রিয়াটিকে উদ্দীপিত করার জন্য, সিস্টেমে ইন্ডুসার আইপিটিজি যুক্ত করা যেতে পারে। আইপিটিজি একটি বিকারক যা অ্যালোল্যাকটোজের কাঠামো অনুকরণ করে এবং তাই ল্যাক রিপ্রেসারের সাথে আবদ্ধ হতে পারে এবং এটি জিন অভিব্যক্তি প্রতিরোধ করতে পারে। একবার পর্যাপ্ত আইপিটিজি যোগ করা হলে, টি7 জিনটি সাধারণত প্রতিলিপি করা হয় এবং তাই টি7 প্রবর্তকের নিম্নমুখী আগ্রহের জিনের প্রতিলিপিও শুরু হয়। টি7 প্রবর্তকের নিয়ন্ত্রণে একটি রিকম্বিনেন্ট প্রোটিনের অভিব্যক্তি ই. কোলাই আরএনএ পলিমারেজের নিয়ন্ত্রণে থাকা প্রোটিন এক্সপ্রেশনের চেয়ে 8 গুণ দ্রুত হয়। কোষে টি7 আরএনএ পলিমারেজের অভিব্যক্তির মৌলিক মাত্রাও ব্যাকটেরিওফেজ টি7 লাইসোজাইম দ্বারা বাধাগ্রস্ত হয়, যার ফলে লাইসোজাইমিক ক্রিয়াকলাপ স্যাচুরেটেড না হওয়া পর্যন্ত টি7 আরএনএ পলিমেরেজ জমা হতে বিলম্ব হয়। কোভিড-19 মহামারী চলাকালীন, ভাইরাসের বিস্তারের বিরুদ্ধে লড়াই করার জন্য মডার্না এবং ফাইজার দ্বারা এমআরএনএ টিকা তৈরি করা হয়েছে। মডার্না এবং ফাইজার উভয়ই টিকা তৈরির জন্য প্রয়োজনীয় প্রচুর পরিমাণে এমআরএনএ তৈরি করতে টি7 এক্সপ্রেশন সিস্টেমের উপর নির্ভর করেছে। তথ্যসূত্র মাইক্রোবায়োলজি ক্লোনিং