Second-harmonic imaging microscopy
সেকেন্ড-হারমনিক ইমেজিং মাইক্রোস্কোপি (এস. এইচ. আই. এম) একটি অরৈখিক আলোকীয় প্রভাবের উপর ভিত্তি করে তৈরি যা সেকেন্ড-হারমনিক জেনারেশন (এস. এইচ. জি) নামে পরিচিত। কোষ এবং টিস্যু কাঠামো এবং কার্যকারিতা কল্পনা করার জন্য একটি কার্যকর মাইক্রোস্কোপ ইমেজিং বৈসাদৃশ্য প্রক্রিয়া হিসাবে এস. এইচ. আই. এম প্রতিষ্ঠিত হয়েছে। একটি দ্বিতীয়-হারমোনিক মাইক্রোস্কোপ আপতিত আলো থেকে দ্বিতীয়-হারমোনিক আলো উৎপন্ন করার একটি নমুনার ক্ষমতার বৈচিত্র্য থেকে বৈপরীত্য অর্জন করে যখন একটি প্রচলিত অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ অপটিক্যাল ঘনত্ব, পথের দৈর্ঘ্য বা নমুনার প্রতিসরাঙ্কের বৈচিত্র্য সনাক্ত করে তার বৈপরীত্য অর্জন করে। এস. এইচ. জি-র জন্য একটি ননসেন্ট্রোসিমেট্রিক আণবিক কাঠামো সহ একটি উপাদানের মধ্য দিয়ে তীব্র লেজার আলোর প্রয়োজন হয়, যা সহজাত বা বাহ্যিকভাবে প্ররোচিত হয়, উদাহরণস্বরূপ একটি বৈদ্যুতিক ক্ষেত্র দ্বারা। একটি এস. এইচ. জি উপাদান থেকে উদ্ভূত দ্বিতীয়-সুরেলা আলো উপাদানটিতে প্রবেশকারী আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্যের ঠিক অর্ধেক (ফ্রিকোয়েন্সি দ্বিগুণ)। যদিও দুই-ফোটন-উত্তেজিত ফ্লুরোসেন্স (টিপিইএফ) একটি দুই ফোটন প্রক্রিয়া, টিপিইএফ উত্তেজিত অবস্থার শিথিলতার সময় কিছু শক্তি হারায়, অন্যদিকে এসএইচজি শক্তি সংরক্ষণ করে। সাধারণত, একটি অজৈব স্ফটিক লিথিয়াম নাইওবেট (লিএনবিও3), পটাসিয়াম টাইট্যানিল ফসফেট (কেটিপি = কেটিওপিও4) এবং লিথিয়াম ট্রাইবোরেট (এলবিও = লিবি3ও5)-এর মতো এসএইচজি আলো উৎপাদনে ব্যবহৃত হয়। যদিও এস. এইচ. জি-র জন্য একটি উপাদানের নির্দিষ্ট আণবিক অভিযোজন প্রয়োজন যাতে আপতিত আলোর ফ্রিকোয়েন্সি দ্বিগুণ হয়, কিছু জৈবিক পদার্থ অত্যন্ত মেরুকরণযোগ্য হতে পারে এবং মোটামুটিভাবে সাজানো, বড় ননসেন্ট্রোসিমেট্রিক কাঠামোতে একত্রিত হতে পারে। যদিও কিছু জৈবিক পদার্থ যেমন কোলাজেন, মাইক্রোটিউবিউল এবং পেশী মায়োসিন এস. এইচ. জি সংকেত তৈরি করতে পারে, এমনকি জলও নির্দিষ্ট অবস্থার অধীনে দ্বিতীয়-হারমোনিক সংকেত তৈরি করতে পারে, যা এস. এইচ মাইক্রোস্কোপিকে কোনও লেবেলিং অণু ছাড়াই পৃষ্ঠের সম্ভাব্যতা চিত্র করতে দেয়। এস. এইচ. জি প্যাটার্নটি মূলত ফেজ ম্যাচিং শর্ত দ্বারা নির্ধারিত হয়। একটি এসএইচজি ইমেজিং সিস্টেমের জন্য একটি সাধারণ সেটআপে একটি লেজার স্ক্যানিং মাইক্রোস্কোপ থাকবে যার সাথে একটি টাইটানিয়াম নীলকান্তমণি মোড-লক লেজার উত্তেজনা উৎস হিসাবে থাকবে। এস. এইচ. জি সংকেতটি সামনের দিকে প্রচারিত হয়। যাইহোক, কিছু পরীক্ষায় দেখা গেছে যে এস. এইচ. জি উৎপাদিত সংকেতের তরঙ্গদৈর্ঘ্যের প্রায় দশমাংশের ক্রমের বস্তুগুলি প্রায় সমানভাবে সামনের এবং পিছনের সংকেত তৈরি করবে। উপকারিতা এস. এইচ. আই. এম জীবন্ত কোষ এবং টিস্যু ইমেজিংয়ের জন্য বেশ কয়েকটি সুবিধা প্রদান করে। এস. এইচ. জি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির মতো অন্যান্য কৌশলের মতো অণুগুলির উত্তেজনার সাথে জড়িত নয়, তাই অণুগুলি ফটোটক্সিসিটি বা ফটোব্লিচিংয়ের প্রভাব ভোগ করা উচিত নয়। এছাড়াও, যেহেতু অনেক জৈবিক কাঠামো শক্তিশালী এস. এইচ. জি সংকেত তৈরি করে, তাই বহির্জাগতিক প্রোব সহ অণুগুলির লেবেলিংয়ের প্রয়োজন হয় না যা একটি জৈবিক ব্যবস্থার কার্যকারিতাও পরিবর্তন করতে পারে। আপতিত আলোর জন্য নিকটবর্তী ইনফ্রারেড তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করে, এস. এইচ. আই. এম-এর পুরু টিস্যুগুলির গভীরে ইমেজিং করে নমুনাগুলির ত্রিমাত্রিক চিত্র তৈরি করার ক্ষমতা রয়েছে। টু-ফোটন ফ্লুরোসেন্স (2পিইএফ) টু-ফোটন ফ্লুরোসেন্স (2পিইএফ)-এর সাথে পার্থক্য এবং পরিপূরকত্ব এসএইচজি থেকে একটি খুব আলাদা প্রক্রিয়াঃ এতে উচ্চতর শক্তি স্তরে ইলেকট্রনগুলির উত্তেজনা এবং পরবর্তী ফোটন নির্গমন দ্বারা উত্তেজনা হ্রাস জড়িত (এসএইচজি-র বিপরীতে, যদিও এটি একটি 2-ফোটন প্রক্রিয়াও)। সুতরাং, 2পিইএফ একটি অসঙ্গত প্রক্রিয়া, স্থানগতভাবে (আইসোট্রপিকভাবে নির্গত) এবং সাময়িকভাবে (বিস্তৃত, নমুনা-নির্ভর বর্ণালী)। এটি এস. এইচ. জি-র মতো নির্দিষ্ট কাঠামোর জন্যও নির্দিষ্ট নয়। তাই এটি মাল্টিপোটন ইমেজিং-এ এস. এইচ. জি-র সাথে যুক্ত হতে পারে যা কিছু অণু প্রকাশ করে যা অটোফ্লুরেসেন্স তৈরি করে, যেমন টিস্যুতে ইলাস্টিন (যেখানে এস. এইচ. জি উদাহরণস্বরূপ কোলাজেন বা মায়োসিন প্রকাশ করে)। এসএইচজি ইমেজিংয়ের জন্য ব্যবহৃত হওয়ার আগে, এসএইচজি-র প্রথম প্রদর্শন 1961 সালে পি. এ. ফ্রাঙ্কেন, জি. ওয়েইনরিচ, সি. ডব্লিউ. পিটার্স এবং মিশিগান বিশ্ববিদ্যালয়ের এ. ই. হিল একটি কোয়ার্টজ নমুনা ব্যবহার করে করেছিলেন। 1968 সালে, ইন্টারফেস থেকে এস. এইচ. জি ব্লুমবার্গেন দ্বারা আবিষ্কৃত হয়েছিল এবং তারপর থেকে পৃষ্ঠতলের বৈশিষ্ট্য এবং ইন্টারফেস গতিবিদ্যা অনুসন্ধানের জন্য একটি সরঞ্জাম হিসাবে ব্যবহৃত হচ্ছে। 1971 সালে, ফাইন এবং হ্যানসেন জৈবিক টিস্যুর নমুনা থেকে এস. এইচ. জি-র প্রথম পর্যবেক্ষণের কথা জানান। 1974 সালে, হেলওয়ার্থ এবং ক্রিস্টেনসেন প্রথম পলিক্রিস্টালাইন ZnSe থেকে SHG সংকেতগুলি ইমেজিং করে SHG এবং মাইক্রোস্কোপির সংহতকরণের কথা জানান। 1977 সালে কলিন শেপার্ড একটি স্ক্যানিং অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ দিয়ে বিভিন্ন এসএইচজি স্ফটিকের ছবি তোলেন। ইঁদুরের লেজের টেন্ডনে কোলাজেন তন্তুগুলির অভিযোজন অধ্যয়নের জন্য 1986 সালে ফ্রুন্ড এবং ডয়েশ প্রথম জৈবিক ইমেজিং পরীক্ষা-নিরীক্ষা করেছিলেন। 1993 সালে, লুইস বৈদ্যুতিক ক্ষেত্রে স্টাইরিল রঞ্জকের দ্বিতীয়-সুরেলা প্রতিক্রিয়া পরীক্ষা করেছিলেন। তিনি জীবন্ত কোষের ইমেজিংয়ের কাজও দেখিয়েছিলেন। 2006 সালে, গোরো মিজুতানি গ্রুপ একটি নন-স্ক্যানিং এসএইচজি মাইক্রোস্কোপ তৈরি করে যা বড় নমুনা পর্যবেক্ষণের জন্য প্রয়োজনীয় সময়কে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করে, এমনকি যদি দুই-ফোটন প্রশস্ত-ক্ষেত্র মাইক্রোস্কোপ 1996 সালে প্রকাশিত হয় এবং এসএইচজি সনাক্ত করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। নন-স্ক্যানিং এসএইচজি অণুবীক্ষণ যন্ত্রটি উদ্ভিদের শ্বেতসার, মেগামোলিকুল, মাকড়সার রেশম ইত্যাদি পর্যবেক্ষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। 2010 সালে ভিভো ইমেজিং-এ এস. এইচ. জি-কে পুরো প্রাণীর মধ্যে প্রসারিত করা হয়। 2019 সালে, কীটনাশকের কার্যকারিতা মূল্যায়নের একটি উপায় প্রদান করার জন্য সরাসরি পাতার পৃষ্ঠে নির্বাচিতভাবে কৃষি রাসায়নিকের ইমেজিং ব্যবহারের ক্ষেত্রে এস. এইচ. জি প্রয়োগগুলি প্রসারিত হয়েছিল। পরিমাণগত পরিমাপ ওরিয়েন্টেশনাল অ্যানিসোট্রপি এসএইচজি মেরুকরণ অ্যানিসোট্রপি টিস্যুতে প্রোটিনের সংগঠনের অভিযোজন এবং মাত্রা নির্ধারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে কারণ এসএইচজি সংকেতগুলির সুনির্দিষ্ট মেরুকরণ রয়েছে। অ্যানিসোট্রপি সমীকরণ ব্যবহার করেঃ এবং সমান্তরাল এবং লম্ব দিকগুলিতে মেরুকরণের তীব্রতা অর্জন করে। একটি উচ্চ মান একটি অ্যানিসোট্রপিক অভিযোজন নির্দেশ করে যেখানে একটি নিম্ন মান একটি আইসোট্রপিক কাঠামো নির্দেশ করে। ক্যাম্পাগনোলা এবং লোউ দ্বারা করা কাজে দেখা গেছে যে কোলাজেন তন্তুগুলি একটি মান সহ সুসংহত কাঠামো গঠন করে। পশ্চাদগামী এস. এইচ. জি এস. এইচ. জি একটি সুসঙ্গত প্রক্রিয়া (স্থানিক এবং সাময়িকভাবে) হওয়ায়, এটি উত্তেজনার দিক সম্পর্কে তথ্য রাখে এবং আইসোট্রপিকভাবে নির্গত হয় না। এটি মূলত সামনের দিকে নির্গত হয় (উত্তেজনার মতো), তবে পর্যায়-মিলনের অবস্থার উপর নির্ভর করে পিছনের দিকেও নির্গত হতে পারে। প্রকৃতপক্ষে, সংহতির দৈর্ঘ্য যা অতিক্রম করে সংকেতের রূপান্তর হ্রাস পায় তা হ 'লঃ সামনের জন্য, তবে পিছনের জন্য যেমন>>। অতএব, পুরু কাঠামো সামনের দিকে এবং পাতলা কাঠামো পিছনের দিকে প্রাধান্য পাবেঃ যেহেতু এস. এইচ. জি রূপান্তরটি অরৈখিক রূপান্তরকারীগুলির সংখ্যার বর্গক্ষেত্রের উপর প্রথম অনুমানের উপর নির্ভর করে, তাই পুরু কাঠামো দ্বারা নির্গত হলে সংকেতটি বেশি হবে, সুতরাং সামনের দিকে সংকেতটি পিছনের দিকের তুলনায় বেশি হবে। যাইহোক, টিস্যুটি উৎপাদিত আলোকে ছড়িয়ে দিতে পারে এবং এস. এইচ. জি-র একটি অংশ সামনের দিকে পিছনের দিকে বিপরীতমুখী-প্রতিফলিত হতে পারে। তারপর, ফরওয়ার্ড-ওভার-ব্যাকওয়ার্ড অনুপাত এফ/বি গণনা করা যেতে পারে এবং এটি এস. এইচ. জি কনভার্টারগুলির (সাধারণত কোলাজেন ফাইব্রিল) বিশ্বব্যাপী আকার এবং বিন্যাসের একটি মেট্রিক। এটিও দেখানো যেতে পারে যে বিচ্ছুরকের সমতলের বাইরের কোণ যত বেশি হবে, তার এফ/বি অনুপাত তত বেশি হবে (চিত্র দেখুন। 2. 14)। মেরুকরণ-সমাধানকৃত এস. এইচ. জি 2002 সালে স্টোলার ও অন্যান্যরা পোলারিমেট্রি-র সুবিধাগুলি এস. এইচ. জি-র সঙ্গে যুক্ত করেছিলেন। পোলারিমেট্রি আণবিক স্তরে অভিযোজন এবং ক্রম পরিমাপ করতে পারে এবং এস. এইচ. জি-র সাথে মিলিত হয়ে এটি কোলাজেনের মতো নির্দিষ্ট কাঠামোর নির্দিষ্টতার সাথে এটি করতে পারেঃ মেরুকরণ-সমাধানকৃত এস. এইচ. জি মাইক্রোস্কোপি (পি-এস. এইচ. জি) এইভাবে এস. এইচ. জি মাইক্রোস্কোপির একটি সম্প্রসারণ। পি-এসএইচজি আরেকটি অ্যানিসোট্রপি প্যারামিটারকে সংজ্ঞায়িত করেঃ যা, আর-এর মতো, চিত্রায়িত হওয়া কাঠামোর প্রধান অভিযোজন এবং বিশৃঙ্খলার একটি পরিমাপ। যেহেতু এটি প্রায়শই দীর্ঘ নলাকার ফিলামেন্টগুলিতে (কোলাজেনের মতো) সঞ্চালিত হয়, তাই এই অ্যানিসোট্রপি প্রায়শই সমান হয়, যেখানে অরৈখিক সংবেদনশীলতা টেনসর এবং এক্স ফিলামেন্টের দিক (বা কাঠামোর প্রধান দিক), ওয়াই অর্থোগোনাল থেকে এক্স এবং জেড উত্তেজনা আলোর বিস্তার। এফ. এফ. টি বিশ্লেষণের মাধ্যমে পি-এস. এইচ. জি থেকে চিত্রের সমতল এক্স. ওয়াই-তে ফিলামেন্টগুলির অভিযোজন φ বের করা যেতে পারে এবং একটি মানচিত্রে রাখা যেতে পারে। ফাইব্রোসিস কোয়ান্টাইজেশন কোলাজেন (বিশেষ ক্ষেত্রে, তবে এসএইচজি মাইক্রোস্কোপি-তে ব্যাপকভাবে অধ্যয়ন করা হয়েছে), বিভিন্ন রূপে বিদ্যমান থাকতে পারেঃ 28 টি বিভিন্ন প্রকার, যার মধ্যে 5 টি ফাইব্রিলার। চ্যালেঞ্জগুলির মধ্যে একটি হল টিস্যুতে ফাইব্রিলার কোলাজেনের পরিমাণ নির্ধারণ এবং পরিমাপ করা, যাতে অন্যান্য অ-কোলাজেনাস পদার্থের সাথে এর বিবর্তন এবং সম্পর্ক দেখতে সক্ষম হয়। সেই লক্ষ্যে, এস. এইচ. জি তরঙ্গদৈর্ঘ্যে বিদ্যমান অবশিষ্ট ফ্লুরোসেন্স বা শব্দের সামান্য পরিমাণ অপসারণের জন্য একটি এস. এইচ. জি মাইক্রোস্কোপি চিত্র সংশোধন করতে হবে। এর পরে, ছবির ভিতরে কোলাজেন পরিমাপ করার জন্য একটি মাস্ক প্রয়োগ করা যেতে পারে। অন্যান্য পরিমাপ কৌশলগুলির মধ্যে, এটি বেশ জটিল হওয়া সত্ত্বেও সম্ভবত সর্বোচ্চ নির্দিষ্টতা, পুনরুত্পাদনযোগ্যতা এবং প্রয়োগযোগ্যতা সহ একটি। অন্যান্য এটি প্রমাণ করতেও ব্যবহৃত হয়েছে যে ব্যাকপ্রোপ্যাগেটিং অ্যাকশন সম্ভাব্যতা ভোল্টেজ অ্যাটেনুয়েশন ছাড়াই ডেনড্রাইটিক মেরুদণ্ড আক্রমণ করে, দীর্ঘমেয়াদী সম্ভাবনার উপর ভবিষ্যতের কাজের জন্য একটি ভাল ভিত্তি প্রতিষ্ঠা করে। এখানে এর ব্যবহার ছিল যে এটি স্ট্যান্ডার্ড টু-ফোটন মাইক্রোস্কোপি দিয়ে অপ্রাপ্য নির্ভুলতার সাথে ক্ষুদ্র ডেনড্রাইটিক মেরুদণ্ডের ভোল্টেজ সঠিকভাবে পরিমাপ করার একটি উপায় সরবরাহ করেছিল। এদিকে, এসএইচজি অনুপ্রবেশের গভীরতার সীমাবদ্ধতা অতিক্রম করে ইমেজিং-গাইডেড ফটোডাইনামিক থেরাপি সক্ষম করতে দক্ষতার সাথে নিকট-ইনফ্রারেড আলোকে দৃশ্যমান আলোতে রূপান্তর করতে পারে। ইমেজ করা এস. এইচ. জি মাইক্রোস্কোপি এবং এর সম্প্রসারণগুলি বিভিন্ন টিস্যু অধ্যয়নের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারেঃ কিছু উদাহরণ চিত্র নীচের চিত্রে রিপোর্ট করা হয়েছেঃ এক্সট্রাসেলুলার ম্যাট্রিক্সের ভিতরে কোলাজেন প্রধান প্রয়োগ হিসাবে রয়ে গেছে। এটি টেন্ডন, ত্বক, হাড়, কর্নিয়া, মহাধমনী, ফ্যাসিয়া, কার্টিলেজ, মেনিস্কাস, ইন্টারভার্টেব্রাল ডিস্কে পাওয়া যায়। মায়োসিন কঙ্কালের পেশী বা কার্ডিয়াক পেশীতেও দেখা যেতে পারে। টি. এইচ. জি মাইক্রোস্কোপি থার্ড-হারমনিক জেনারেশন (টি. এইচ. জি) মাইক্রোস্কোপির সাথে যুক্ত হওয়া এস. এইচ. জি মাইক্রোস্কোপির পরিপূরক হতে পারে, কারণ এটি আড়াআড়ি ইন্টারফেসের প্রতি সংবেদনশীল এবং তৃতীয় ক্রমের অরৈখিক সংবেদনশীলতা অ্যাপ্লিকেশন ক্যান্সারের অগ্রগতি, টিউমারের বৈশিষ্ট্যকরণ ম্যামোগ্রাফিক ঘনত্ব কোলাজেন ঘনত্বের সাথে সম্পর্কযুক্ত, এইভাবে এস. এইচ. জি স্তন ক্যান্সার সনাক্ত করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। এস. এইচ. জি সাধারণত মাল্টিপোটন মাইক্রোস্কোপি (বা টমোগ্রাফি) নামে একটি রুটিনের অংশ হিসাবে অন্যান্য অরৈখিক কৌশল যেমন কোহেরেন্ট অ্যান্টি-স্টোকস রমন স্কেটারিং বা টু-ফোটন এক্সাইটেশন মাইক্রোস্কোপির সাথে যুক্ত হয় যা বায়োপসির একটি অ-আক্রমণাত্মক এবং দ্রুত ইন ভিভো হিস্টোলজি সরবরাহ করে যা ক্যান্সারযুক্ত হতে পারে। স্তন ক্যান্সার সামনের এবং পিছনের এসএইচজি চিত্রগুলির তুলনা কোলাজেনের মাইক্রোস্ট্রাকচার সম্পর্কে অন্তর্দৃষ্টি দেয়, যা নিজেই টিউমারের গ্রেড এবং পর্যায়ের সাথে সম্পর্কিত এবং স্তনে এর অগ্রগতি সম্পর্কে। এসএইচজি এবং 2পিইএফ-এর তুলনা টিউমারে কোলাজেন অভিযোজনের পরিবর্তনও দেখাতে পারে। যদিও এস. এইচ. জি মাইক্রোস্কোপি স্তন ক্যান্সার গবেষণায় অনেক অবদান রেখেছে, এটি এখনও হাসপাতালে বা সাধারণভাবে এই প্যাথলজি নির্ণয়ের জন্য একটি নির্ভরযোগ্য কৌশল হিসাবে প্রতিষ্ঠিত হয়নি। ডিম্বাশয়ের ক্যান্সার স্বাস্থ্যকর ডিম্বাশয়গুলি এস. এইচ. জি-তে একটি অভিন্ন এপিথেলিয়াল স্তর এবং তাদের স্ট্রোমায় সুসংগঠিত কোলাজেন উপস্থিত থাকে, যেখানে অস্বাভাবিক ডিম্বাশয়গুলি বড় কোষ এবং পরিবর্তিত কোলাজেন কাঠামো সহ একটি এপিথেলিয়াম দেখায়। আর অনুপাতটি এটি দেখানোর জন্যও ব্যবহার করা হয় যে সাধারণ টিস্যুগুলির তুলনায় ক্যান্সারের ক্ষেত্রে ফাইব্রিলগুলির প্রান্তিককরণ কিছুটা বেশি। ত্বকের ক্যান্সার এসএইচজি, আবার, 2পিইএফ-এর সাথে মিলিত হয়ে অনুপাত গণনা করতে ব্যবহৃত হয়ঃ যেখানে এস. এইচ. জি (রেসপ)। টি. পি. ই. এফ) হল এস. এইচ. জি (রেসপ)-তে প্রান্তিক পিক্সেলের সংখ্যা। 2পিইএফ) চিত্র, একটি উচ্চ এমএফএসআই যার অর্থ একটি বিশুদ্ধ এসএইচজি চিত্র (কোনও ফ্লুরোসেন্স ছাড়াই)। সর্বোচ্চ এম. এফ. এস. আই ক্যান্সারযুক্ত টিস্যুতে পাওয়া যায়, যা স্বাভাবিক টিস্যু থেকে আলাদা করার জন্য একটি বৈপরীত্য মোড প্রদান করে। এস. এইচ. জি-কে থার্ড-হারমনিক জেনারেশন (টি. এইচ. জি)-এর সঙ্গেও যুক্ত করা হয়েছিল যাতে দেখা যায় যে টিউমারে ব্যাকওয়ার্ড টি. এইচ. জি-র পরিমাণ বেশি। অগ্ন্যাশয়ের ক্যান্সার অগ্ন্যাশয়ের ক্যান্সারে কোলাজেন আল্ট্রাস্ট্রাকচারের পরিবর্তনগুলি মাল্টিপোটন ফ্লুরোসেন্স এবং মেরুকরণ-সমাধানকৃত এস. এইচ. আই. এম দ্বারা তদন্ত করা যেতে পারে। ফুসফুস, কোলনিক, ইসোফেজিয়াল স্ট্রোমা এবং সার্ভিকাল ক্যান্সারের অধ্যয়নের জন্য অন্যান্য ক্যান্সার এস. এইচ. জি মাইক্রোস্কোপি রিপোর্ট করা হয়েছিল। প্যাথোলজি সনাক্তকরণ গঠনে পরিবর্তন বা কোলাজেন ফাইব্রিলের মেরুকরণ প্যাথোলজির লক্ষণ হতে পারে। বিশেষত, কোলাজেন তন্তুগুলির অ্যানিসোট্রপিক প্রান্তিককরণ ত্বকের প্যাথোলজিকাল দাগ থেকে সুস্থ ডার্মিসের বৈষম্যের অনুমতি দেয়। এছাড়াও, অস্টিওআর্থারাইটিসের মতো কার্টিলেজের প্যাথোলজিগুলি মেরুকরণ-সমাধানকৃত এসএইচজি মাইক্রোস্কোপি দ্বারা তদন্ত করা যেতে পারে। এস. এইচ. আই. এম পরে ফাইব্রো-কার্টিলেজ (মেনিস্কাস)-এ প্রসারিত হয়। টিস্যু ইঞ্জিনিয়ারিং এস. এইচ. জি-র নির্দিষ্ট অণুগুলির ছবি তোলার ক্ষমতা মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে একটি নির্দিষ্ট টিস্যুর কাঠামোকে একবারে একটি উপাদান এবং বিভিন্ন স্কেলে (ম্যাক্রো থেকে মাইক্রো পর্যন্ত) প্রকাশ করতে পারে। উদাহরণস্বরূপ, কোলাজেন (টাইপ I) বিশেষভাবে কোষের এক্সট্রাসেলুলার ম্যাট্রিক্স (ইসিএম) থেকে চিত্রায়িত হয়, অথবা যখন এটি টিস্যুতে স্ক্যাফোল্ড বা কনজঙ্কটিভ উপাদান হিসাবে কাজ করে। এস. এইচ. জি সিল্কের ফাইব্রোইন, পেশীতে মায়োসিন এবং জৈব সংশ্লেষিত সেলুলোজও প্রকাশ করে। এই সমস্ত ইমেজিং ক্ষমতা কৃত্রিম টিস্যু ডিজাইন করতে ব্যবহার করা যেতে পারে, টিস্যুর নির্দিষ্ট পয়েন্টগুলিকে লক্ষ্য করেঃ এস. এইচ. জি প্রকৃতপক্ষে পরিমাণগতভাবে কিছু অভিমুখ এবং উপাদানের পরিমাণ এবং ব্যবস্থা পরিমাপ করতে পারে। এছাড়াও, এস. এইচ. জি অন্যান্য মাল্টিপোটন কৌশলের সাথে মিলিত হয়ে ইঞ্জিনিয়ারড টিস্যুর বিকাশ পর্যবেক্ষণ করতে পারে, যখন নমুনাটি তুলনামূলকভাবে পাতলা হয়। অবশ্যই, এগুলি অবশেষে মনগড়া টিস্যুগুলির মান নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। পর্যাপ্ত ঘন কোলাজেনের স্ব-সংগঠন বৈশিষ্ট্যের কারণে চোখের পৃষ্ঠে কর্নিয়ার কাঠামোকে কোলাজেনের প্লাইউডের মতো কাঠামো দিয়ে তৈরি বলে মনে করা হয়। তবুও, এই টিস্যুতে ল্যামেলার কোলাজেনস অভিযোজন এখনও বিতর্কের মধ্যে রয়েছে। কোলাজেনের অঙ্গসংস্থানগত পরিবর্তনগুলি প্রকাশ করতে এস. এইচ. জি দ্বারা কেরাটোকোনাস কর্নিয়ার চিত্রও তোলা যেতে পারে। তৃতীয়-হারমোনিক জেনারেশন (টি. এইচ. জি) মাইক্রোস্কোপি কর্নিয়ার ছবি তোলার জন্যও ব্যবহৃত হয়, যা এস. এইচ. জি সংকেতের পরিপূরক কারণ এই টিস্যুতে টি. এইচ. জি এবং এস. এইচ. জি ম্যাক্সিমা প্রায়শই বিভিন্ন জায়গায় থাকে। আরও দেখুন দ্বিতীয়-হারমোনিক প্রজন্মের অরৈখিক আলোকবিদ্যা দ্বি-ফোটন উত্তেজনা মাইক্রোস্কোপি উৎস রেফারেন্স মাইক্রোস্কোপি সেল ইমেজিং ল্যাবরেটরি সরঞ্জাম অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপি