Eukaryotic DNA replication
ইউক্যারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপি একটি সংরক্ষিত প্রক্রিয়া যা প্রতি কোষ চক্রে একবার ডিএনএ প্রতিলিপিকে সীমাবদ্ধ করে। ক্রোমোজোমাল ডিএনএর ইউক্যারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপি একটি কোষের প্রতিলিপির জন্য কেন্দ্রীয় এবং ইউক্যারিওটিক জিনোমের রক্ষণাবেক্ষণের জন্য প্রয়োজনীয়। ডি. এন. এ প্রতিলিপি হল ডি. এন. এ পলিমারেজের ক্রিয়া যা মূল টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ডের পরিপূরক ডি. এন. এ স্ট্র্যান্ডকে সংশ্লেষিত করে। ডি. এন. এ সংশ্লেষ করার জন্য, ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডি. এন. এ পলিমারেজের আগে ডি. এন. এ হেলিকেস দ্বারা উন্মুক্ত করা হয়, দুটি একক-স্ট্র্যান্ডেড টেমপ্লেট সহ একটি প্রতিলিপি কাঁটাচামচ গঠন করে। প্রতিলিপি প্রক্রিয়া একটি একক ডিএনএ ডাবল হেলিক্সকে দুটি ডিএনএ হেলিসে অনুলিপি করার অনুমতি দেয়, যা মাইটোসিসের সময় কন্যা কোষে বিভক্ত হয়। প্রতিলিপি কাঁটাতে সঞ্চালিত প্রধান উৎসেচক ক্রিয়াকলাপগুলি প্রোক্যারিওট থেকে ইউক্যারিওট পর্যন্ত ভালভাবে সংরক্ষিত থাকে, তবে ইউক্যারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপিতে প্রতিলিপি যন্ত্রটি অনেক বড় জটিল, প্রতিলিপির স্থানে অনেক প্রোটিনকে সমন্বয় করে, প্রতিলিপি গঠন করে। প্রতিটি প্রলিফারেটিভ কোষে সম্পূর্ণ জিনোমিক ডিএনএ অনুলিপি করার জন্য প্রতিলিপি দায়ী। এই প্রক্রিয়াটি পিতামাতার কোষ থেকে কন্যা কোষে বংশগত/জেনেটিক তথ্যের উচ্চ-বিশ্বস্ততার উত্তরণের অনুমতি দেয় এবং তাই এটি সমস্ত জীবের জন্য প্রয়োজনীয়। কোষচক্রের বেশিরভাগ অংশ ত্রুটি ছাড়াই ডি. এন. এ প্রতিলিপি তৈরি হয় তা নিশ্চিত করার জন্য তৈরি করা হয়। কোষ চক্রের জি1 পর্যায়ে, অনেক ডিএনএ প্রতিলিপি নিয়ন্ত্রক প্রক্রিয়া শুরু করা হয়। ইউক্যারিওটসে, বেশিরভাগ ডি. এন. এ সংশ্লেষণ কোষ চক্রের এস পর্যায়ে ঘটে এবং দুটি কন্যা অনুলিপি তৈরি করতে পুরো জিনোমকে অবাঞ্ছিত এবং প্রতিলিপি করা আবশ্যক। জি2-এর সময়, যে কোনও ক্ষতিগ্রস্ত ডিএনএ বা প্রতিলিপির ত্রুটি সংশোধন করা হয়। অবশেষে, জিনোমের একটি অনুলিপি মাইটোসিস বা এম পর্যায়ে প্রতিটি কন্যা কোষে বিভক্ত করা হয়। এই কন্যা প্রতিলিপিগুলির প্রত্যেকটিতে প্যারেন্টাল ডুপ্লেক্স ডিএনএ থেকে একটি স্ট্র্যান্ড এবং একটি নেসেন্ট অ্যান্টিপ্যারেলাল স্ট্র্যান্ড থাকে। এই প্রক্রিয়াটি প্রোক্যারিওট থেকে ইউক্যারিওট পর্যন্ত সংরক্ষিত এবং সেমিকনজারভেটিভ ডিএনএ প্রতিলিপি হিসাবে পরিচিত। ডি. এন. এ প্রতিলিপির স্থানের জন্য অর্ধ-রক্ষণশীল প্রতিলিপির প্রক্রিয়া হল একটি কাঁটার মতো ডি. এন. এ কাঠামো, প্রতিলিপি কাঁটাচামচ, যেখানে ডি. এন. এ হেলিক্স খোলা থাকে, বা ক্ষতহীন থাকে, শনাক্তকরণের জন্য অপ্রচলিত ডি. এন. এ নিউক্লিওটাইডগুলি প্রকাশ করে এবং মুক্ত নিউক্লিওটাইডগুলিকে ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডি. এন. এ-তে অন্তর্ভুক্ত করার জন্য বেস পেয়ারিং করে। ইউক্যারিওটিক ডি. এন. এ প্রতিলিপির সূচনা হল ডি. এন. এ সংশ্লেষণের প্রথম পর্যায় যেখানে ডি. এন. এ ডাবল হেলিক্স অনাবৃত থাকে এবং ডি. এন. এ পলিমারেজ α দ্বারা একটি প্রাথমিক প্রাথমিক ঘটনা সামনের স্ট্র্যান্ডে ঘটে। পিছিয়ে পড়া স্ট্র্যান্ডের প্রাইমিং ইভেন্ট একটি প্রতিলিপি কাঁটাচামচ স্থাপন করে। ডিএনএ পলিমারেজ α দ্বারা ডিএনএ সংশ্লেষণের অনুমতি দেওয়ার জন্য ডিএনএ হেলিক্সের প্রাইমিং একটি আরএনএ প্রাইমারের সংশ্লেষণ নিয়ে গঠিত। প্রাইমিং সামনের স্ট্র্যান্ডের উৎপত্তিস্থলে এবং পিছিয়ে থাকা স্ট্র্যান্ডের প্রতিটি ওকাজাকি খণ্ডের শুরুতে একবার ঘটে। প্রতিলিপির উৎপত্তি প্রতিলিপির উৎপত্তি থেকে শুরু হয়। এই সাইটগুলি ধারণকারী ডিএনএ সিকোয়েন্সগুলি প্রাথমিকভাবে 1970-এর দশকের শেষের দিকে প্লাজমিডগুলির প্রতিলিপি সমর্থন করার দক্ষতার ভিত্তিতে পৃথক করা হয়েছিল, তাই স্বায়ত্তশাসিত প্রতিলিপি সিকোয়েন্স (এআরএস) উপাধি দেওয়া হয়েছিল। উত্সগুলি তাদের দক্ষতার ক্ষেত্রে ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়, যার মধ্যে কিছু প্রায় প্রতিটি কোষ চক্রে ব্যবহৃত হয় এবং অন্যগুলি এক হাজার এস পর্যায়ে শুধুমাত্র একটিতে ব্যবহার করা যেতে পারে। ইস্ট এ. আর. এস-এর মোট সংখ্যা কমপক্ষে 1600, তবে কম সক্রিয় সাইটগুলি গণনা করা হলে 5000-এর বেশি হতে পারে, অর্থাৎ প্রতি 2000 থেকে 8000 বেস জোড়ায় একটি এ. আর. এস থাকতে পারে। প্রাক-প্রতিলিপি জটিল একাধিক প্রতিলিপি প্রোটিন একত্রিত হয় এবং ডিএনএ প্রতিলিপি শুরু করার জন্য এই প্রতিলিপি উত্স থেকে বিচ্ছিন্ন হয়। প্রাক-প্রতিলিপি জটিল (প্রাক-আরসি) গঠন সহ প্রতিলিপি সূচনা প্রক্রিয়ার একটি মূল মধ্যবর্তী। অ্যাসোসিয়েশন অফ দ্য অরিজিন রিকগনিশন কমপ্লেক্স (ও. আর. সি) একটি প্রতিলিপি উৎপত্তির সাথে কোষ বিভাজন চক্র 6 প্রোটিন (সি. ডি. সি. 6) নিয়োগ করে মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণের (এম. সি. এম 2-7) জটিল প্রোটিন লোড করার জন্য একটি প্ল্যাটফর্ম তৈরি করে, যা ক্রোমাটিন লাইসেন্সিং এবং ডি. এন. এ প্রতিলিপি ফ্যাক্টর 1 প্রোটিন (সি. ডি. টি 1) দ্বারা সহজতর হয়। কোষচক্রের জি1 পর্যায়ে প্রতিলিপি উৎপত্তির সঙ্গে এম. সি. এম2-7 জটিলের স্থিতিশীল সংযোগের জন্য ও. আর. সি, সি. ডি. সি6 এবং সি. ডি. টি1 একসঙ্গে প্রয়োজন। প্রতিলিপির ইউক্যারিওটিক উৎসগুলি বেশ কয়েকটি প্রোটিন কমপ্লেক্সের গঠন নিয়ন্ত্রণ করে যা দুটি দ্বিমুখী ডিএনএ প্রতিলিপি কাঁটার সমাবেশের দিকে পরিচালিত করে। এই ঘটনাগুলি প্রতিলিপির উৎপত্তিস্থলে প্রাক-প্রতিলিপি জটিল (প্রাক-আরসি) গঠনের মাধ্যমে শুরু হয়। এই প্রক্রিয়াটি কোষ চক্রের জি1 পর্যায়ে ঘটে। প্রাক-আরসি গঠনে অরিজিন রিকগনিশন কমপ্লেক্স (ওআরসি), সিডিসি6 প্রোটিন, সিডিটি1 প্রোটিন এবং মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ প্রোটিন (ম্যাকএম2-7) সহ অনেক প্রতিলিপি উপাদানের সুশৃঙ্খল সমাবেশ জড়িত। একবার প্রাক-আরসি গঠিত হলে, দুটি কাইনেস, সাইক্লিন-নির্ভর কাইনেস 2 (সিডিকে) এবং ডিবিএফ 4-নির্ভর কাইনেস (ডিডিকে) দ্বারা কমপ্লেক্সের সক্রিয়করণ শুরু হয় যা ডিএনএ প্রতিলিপির সূচনার আগে প্রাক-আরসিকে দীক্ষা কমপ্লেক্সে রূপান্তর করতে সহায়তা করে। এই পরিবর্তনে ডি. এন. এ-কে শিথিল করতে এবং ক্ষতবিক্ষত ডি. এন. এ-র চারপাশে একাধিক ইউক্যারিওটিক ডি. এন. এ পলিমারেজ জমা করার জন্য অতিরিক্ত প্রতিলিপি উপাদানগুলির সুশৃঙ্খল সমাবেশ জড়িত। প্রতিলিপির উৎপত্তিস্থলে দ্বিমুখী প্রতিলিপি কাঁটাচামচ কীভাবে প্রতিষ্ঠিত হয় সেই প্রশ্নের কেন্দ্রবিন্দু হল সেই প্রক্রিয়া যার মাধ্যমে ও. আর. সি প্রাক-প্রতিলিপি জটিল গঠনের জন্য প্রতিটি প্রতিলিপির উৎসে দুটি হেড-টু-হেড এম. সি. এম. 2-7 কমপ্লেক্স নিয়োগ করে। উৎপত্তি শনাক্তকরণ জটিল প্রাক-প্রতিলিপি জটিলের (প্রাক-আরসি) সমাবেশের প্রথম ধাপ হল প্রতিলিপির উৎসের সাথে উৎপত্তি শনাক্তকরণ জটিলের (ওআরসি) বন্ধন। মাইটোসিসের শেষের দিকে, সিডিসি6 প্রোটিন আবদ্ধ ওআরসি-তে যোগ দেয় এবং তারপরে সিডিটি1-এমসিএম2-7 কমপ্লেক্সকে আবদ্ধ করে। ডি. এন. এ-তে ছয়টি প্রোটিন মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ (এম. সি. এম 2-7) কমপ্লেক্স লোড করার জন্য ও. আর. সি, সি. ডি. সি 6 এবং সি. ডি. টি 1 প্রয়োজন। ও. আর. সি হল একটি ছয়-উপ-একক, ও. আর. সি1পি-6, প্রোটিন কমপ্লেক্স যা প্রতিলিপির সূচনার জন্য ডি. এন. এ-তে প্রতিলিপিমূলক উৎস স্থানগুলি নির্বাচন করে এবং ক্রোমাটিনের সাথে ও. আর. সি বন্ধন কোষ চক্রের মাধ্যমে নিয়ন্ত্রিত হয়। সাধারণত, ও. আর. সি উপ-ইউনিটগুলির কার্যকারিতা এবং আকার অনেক ইউক্যারিওটিক জিনোম জুড়ে সংরক্ষিত থাকে যার মধ্যে পার্থক্য হল তাদের বিচ্ছিন্ন ডি. এন. এ বাঁধাই সাইট। সবচেয়ে ব্যাপকভাবে অধ্যয়ন করা মূল স্বীকৃতি জটিল হল স্যাকারোমাইসেস সেরেভিসিয়া বা খামির যা স্বায়ত্তশাসিত প্রতিলিপি ক্রমের (এ. আর. এস) সাথে আবদ্ধ বলে পরিচিত। এস. সেরেভিসিয়া ওআরসি 30 টি বেস জোড়ার একটি অঞ্চল জুড়ে প্রতিলিপির ইস্ট উত্সের এ এবং বি 1 উভয় উপাদানের সাথে বিশেষভাবে যোগাযোগ করে। এই ক্রমগুলির সাথে বাঁধাইয়ের জন্য এটিপি প্রয়োজন। এ. আর. এস ডি. এন. এ-র সঙ্গে আবদ্ধ এস. সেরেভিসিয়া ও. আর. সি-র পারমাণবিক কাঠামো নির্ধারণ করা হয়েছে। ও. আর. সি. 1, ও. আর. সি. 2, ও. আর. সি. 3, ও. আর. সি. 4 এবং ও. আর. সি. 5 দুটি ধরনের মিথস্ক্রিয়ার মাধ্যমে এ উপাদানটিকে ঘিরে রাখে, ভিত্তি অ-নির্দিষ্ট এবং ভিত্তি-নির্দিষ্ট, যা এ উপাদানটিতে ডি. এন. এ-কে বাঁকায়। পাঁচটি সাবইউনিট আধার নির্দিষ্টতা ছাড়াই একটি শক্ত গ্রিপ তৈরি করতে এ উপাদানটির একাধিক বিন্দুতে সুগার ফসফেট মেরুদণ্ডের সাথে যোগাযোগ করে। ওআরসি1 এবং ওআরসি2 এ উপাদানটির ছোট খাঁজটির সাথে যোগাযোগ করে যখন ওআরসি4-এর একটি ডানাযুক্ত হেলিক্স ডোমেন একটি সন্নিবেশ হেলিক্সের (আইএইচ) মাধ্যমে এ উপাদানটির প্রধান খাঁজটিতে অপরিবর্তনীয় টি-এর মিথাইল গোষ্ঠীর সাথে যোগাযোগ করে। মেটাজোয়ানগুলিতে এই আই. এইচ-এর অনুপস্থিতি মানব ও. আর. সি-তে ক্রম নির্দিষ্টতার অভাবকে ব্যাখ্যা করে। এস. সি. ও. আর. সি থেকে আই. এইচ অপসারণের ফলে এটি এ উপাদানটির জন্য তার নির্দিষ্টতা হারায় এবং প্রবর্তক অঞ্চলগুলির সাথে স্বচ্ছন্দভাবে এবং অগ্রাধিকারের সাথে (83 শতাংশ) আবদ্ধ হয়। এ. আর. এস ডি. এন. এ ও. আর. সি2, ও. আর. সি5 এবং ও. আর. সি6-এর সাথে মিথস্ক্রিয়ার মাধ্যমে বি1 উপাদানের দিকেও ঝুঁকে থাকে। ও. আর. সি দ্বারা উৎপত্তির ডি. এন. এ-র বাঁকানো বিবর্তনীয়ভাবে সংরক্ষিত বলে মনে হয় যে এটি এম. সি. এম2-7 জটিল লোডিং ব্যবস্থার জন্য প্রয়োজনীয় হতে পারে। যখন ও. আর. সি প্রতিলিপির উৎপত্তির সময় ডি. এন. এ-র সাথে আবদ্ধ হয়, তখন এটি প্রাক-প্রতিলিপি জটিলতার অন্যান্য মূল সূচনা কারণগুলির সমাবেশের জন্য একটি মঞ্চ হিসাবে কাজ করে। কোষ চক্রের জি1 পর্যায়ে এই প্রাক-প্রতিলিপি জটিল সমাবেশটি এস পর্যায়ে ডিএনএ প্রতিলিপি সক্রিয় করার আগে প্রয়োজন হয়। মেটাফেজে ক্রোমোজোম থেকে কমপ্লেক্সের অন্তত একটি অংশ (ওআরসি1) অপসারণ স্তন্যপায়ী ওআরসি-র নিয়ন্ত্রণের অংশ যাতে মেটাফেজ সম্পন্ন হওয়ার আগে প্রাক-প্রতিলিপি জটিল গঠন নির্মূল করা হয় তা নিশ্চিত করা যায়। সি. ডি. সি. 6 প্রোটিন কোষ বিভাজন চক্র 6 (সি. ডি. সি. 6) প্রোটিনের মূল শনাক্তকরণ কমপ্লেক্সের (ও. আর. সি) সাথে বন্ধন প্রতিলিপির উৎপত্তির সময় প্রাক-প্রতিলিপি জটিলের (প্রাক-আর. সি) সমাবেশের একটি অপরিহার্য পদক্ষেপ। সি. ডি. সি. 6 ডি. এন. এ-তে ও. আর. সি-এর সাথে এটিপি-নির্ভর পদ্ধতিতে আবদ্ধ হয়, যা অরিজিন বাইন্ডিংয়ের প্যাটার্নে একটি পরিবর্তনকে প্ররোচিত করে যার জন্য ও. আর. সি. 1 এটি. পিজ প্রয়োজন। ক্রোমাটিনের সঙ্গে যুক্ত হওয়ার জন্য সিডিসি6-এর ওআরসি প্রয়োজন এবং ক্রোমাটিনের সঙ্গে আবদ্ধ হওয়ার জন্য সিডিটি1-এমসিএম2-7 হেপ্টামারের প্রয়োজন হয়। ও. আর. সি-সি. ডি. সি. 6 কমপ্লেক্স একটি বলয়-আকৃতির কাঠামো গঠন করে এবং এটি অন্যান্য এ. টি. পি-নির্ভর প্রোটিন মেশিনের অনুরূপ। সিডিসি6-এর মাত্রা এবং ক্রিয়াকলাপ কোষ চক্রের সময় প্রতিলিপির উৎস ব্যবহার করার ফ্রিকোয়েন্সি নিয়ন্ত্রণ করে। সি. ডি. টি. 1 প্রোটিন ডি. এন. এ প্রতিলিপির জন্য ক্রোমাটিনের লাইসেন্সের জন্য ক্রোমাটিন লাইসেন্সিং এবং ডি. এন. এ রেপ্লিকেশন ফ্যাক্টর 1 (সি. ডি. টি. 1) প্রোটিন প্রয়োজন। এস. সেরেভিসিয়ায়, সিডিটি1 ম্যাকএম2-7 একক হেক্সামারের বাম হাতের খোলা রিং কাঠামোকে স্থিতিশীল করে ক্রোমোজোমের উপর একবারে ম্যাকএম2-7 জটিলকে লোড করার সুবিধা দেয়। সি. ডি. টি. 1-কে সি. ডি. সি. 6-এর সি টার্মিনাসের সাথে যুক্ত হতে দেখা গেছে যাতে ক্রোমাটিনের সাথে এম. সি. এম প্রোটিনের সংযোগকে সহযোগিতামূলকভাবে প্রচার করা যায়। ও. সি. সি. এম (ও. আর. সি-সি. ডি. সি. 6-সি. ডি. টি 1-এম. সি. এম) কমপ্লেক্সের ক্রায়ো-ই. এম কাঠামো দেখায় যে সি. ডি. টি 1-সি. টি. ডি ম্যাক. এম 6-ডব্লিউ. এইচ. ডি-এর সাথে মিথস্ক্রিয়া করে। মেটাজোয়ানগুলিতে, কোষ চক্রের সময় সি. ডি. টি. 1 ক্রিয়াকলাপ প্রোটিন জেমিনিনের সাথে এর সংযোগ দ্বারা কঠোরভাবে নিয়ন্ত্রিত হয়, যা উভয়ই ডি. এন. এ-র পুনঃ-প্রতিলিপি প্রতিরোধ করার জন্য এস পর্যায়ে সি. ডি. টি 1 ক্রিয়াকলাপকে বাধা দেয় এবং এটিকে সর্বব্যাপীকরণ এবং পরবর্তী প্রোটোলাইসিস থেকে প্রতিরোধ করে। মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ প্রোটিন কমপ্লেক্স মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ (এম. সি. এম) প্রোটিনগুলি এস. সেরেভিসিয়ায় ডি. এন. এ প্রতিলিপি সূচনা মিউট্যান্টের জন্য একটি জেনেটিক স্ক্রিনের নামে নামকরণ করা হয়েছিল যা এ. আর. এস-নির্দিষ্ট পদ্ধতিতে প্লাজমিড স্থায়িত্বকে প্রভাবিত করে। ম্যাকএম2, ম্যাকএম3, ম্যাকএম4, ম্যাকএম5, ম্যাকএম6 এবং ম্যাকএম7 একটি হেক্সামেরিক কমপ্লেক্স গঠন করে যার ম্যাকএম2 এবং ম্যাকএম5-এর মধ্যে ব্যবধান সহ একটি খোলা-রিং কাঠামো রয়েছে। ক্রোমাটিনের উপর এম. সি. এম প্রোটিনের সমাবেশের জন্য অরিজিন রিকগনিশন কমপ্লেক্স (ও. আর. সি), সি. ডি. সি 6 এবং সি. ডি. টি 1-এর সমন্বিত কার্যকারিতা প্রয়োজন। একবার ম্যাকএম প্রোটিনগুলি ক্রোমাটিনে লোড হয়ে গেলে, পরবর্তী ডিএনএ প্রতিলিপি প্রতিরোধ না করে ক্রোমাটিন থেকে ওআরসি এবং সিডিসি 6 অপসারণ করা যেতে পারে। এই পর্যবেক্ষণ থেকে জানা যায় যে প্রাক-প্রতিলিপি জটিলের প্রাথমিক ভূমিকা হল সঠিকভাবে এম. সি. এম প্রোটিন লোড করা। ক্রোমাটিনের ম্যাকএম প্রোটিনগুলি একটি হেড-টু-হেড ডাবল হেক্সামার গঠন করে যেখানে দুটি বলয় সামান্য হেলানো, বাঁকানো এবং অফ-সেন্টার্ড থাকে এবং কেন্দ্রীয় চ্যানেলে একটি কিঙ্ক তৈরি করে যেখানে আবদ্ধ ডিএনএ দুটি বলয়ের ইন্টারফেসে ধরা পড়ে। প্রতিটি হেক্সামেরিক ম্যাকএম2-7 রিং প্রথমে প্রতিলিপির সমাবেশের জন্য স্ক্যাফোল্ড হিসাবে কাজ করে এবং তারপরে অনুঘটক সিএমজি (সিডিসি 45-এমসিএম-জিএনএস) হেলিকেসের মূল হিসাবে কাজ করে, যা প্রতিলিপির একটি প্রধান উপাদান। প্রতিটি এম. সি. এম প্রোটিন অন্যান্য সমস্ত প্রোটিনের সাথে অত্যন্ত সম্পর্কিত, তবে প্রতিটি সাবইউনিট প্রকারের পার্থক্যকারী অনন্য ক্রমগুলি ইউক্যারিওট জুড়ে সংরক্ষিত থাকে। সমস্ত ইউক্যারিওটের ঠিক ছয়টি ম্যাকএম প্রোটিন অ্যানালগ রয়েছে যা প্রতিটি বিদ্যমান শ্রেণীর (ম্যাকএম-2-7) মধ্যে পড়ে, যা নির্দেশ করে যে প্রতিটি ম্যাকএম প্রোটিনের একটি অনন্য এবং গুরুত্বপূর্ণ কাজ রয়েছে। ডি. এন. এ হেলিকেজ ক্রিয়াকলাপের জন্য মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ প্রোটিন প্রয়োজন। এস পর্যায়ে ছয়টি এম. সি. এম প্রোটিনের যে কোনও একটি নিষ্ক্রিয়করণ অপরিবর্তনীয়ভাবে প্রতিলিপি কাঁটার আরও অগ্রগতি রোধ করে যে হেলিকেজ পুনর্ব্যবহারযোগ্য হতে পারে না এবং প্রতিলিপির উৎসে একত্রিত করা আবশ্যক। মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ প্রোটিন জটিল হেলিকেজ ক্রিয়াকলাপের পাশাপাশি, কমপ্লেক্সটি এটিপিজ ক্রিয়াকলাপকেও যুক্ত করেছে। গবেষণায় দেখা গেছে যে ম্যাকএম প্রোটিন কমপ্লেক্সের মধ্যে ম্যাকএম প্রোটিনের নির্দিষ্ট অনুঘটক জোড়া রয়েছে যা এটিপি হাইড্রোলাইসিস সমন্বয় করতে একসাথে কাজ করে। এই গবেষণাগুলি, যা ম্যাকএম2-7 কমপ্লেক্সের ক্রায়ো-ই. এম কাঠামো দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছে, দেখায় যে ম্যাকএম কমপ্লেক্স একটি হেক্সামার যার সাবইউনিটগুলি ম্যাকএম2-এমসিএম6-এমসিএম4-এমসিএম7-এমসিএম3-এমসিএম5-এর ক্রমে একটি রিংয়ে সাজানো থাকে। প্রতিটি অনুঘটক জুটির উভয় সদস্য এমন গঠনে অবদান রাখে যা এটিপি বাঁধাই এবং হাইড্রোলাইসিসের অনুমতি দেয় এবং সক্রিয় এবং নিষ্ক্রিয় সাবইউনিটের মিশ্রণ সম্ভবত ম্যাকএম হেক্সামেরিক কমপ্লেক্সকে একটি সমন্বিত এটিপিজ ক্রিয়াকলাপ তৈরি করতে সামগ্রিকভাবে এটিপি বাঁধাই এবং হাইড্রোলাইসিস সম্পূর্ণ করতে দেয়। মিনিক্রোমোসোম রক্ষণাবেক্ষণ প্রোটিনের পারমাণবিক স্থানীয়করণ ক্রমবর্ধমান খামির কোষে নিয়ন্ত্রিত হয়। কোষচক্রের জি1 পর্যায় এবং এস পর্যায়ে নিউক্লিয়াসে ম্যাকএম প্রোটিন উপস্থিত থাকে, তবে জি2 পর্যায় এবং এম পর্যায়ে সাইটোপ্লাজমে রপ্তানি করা হয়। কোষের নিউক্লিয়াসে প্রবেশের জন্য একটি সম্পূর্ণ এবং অক্ষত ছয়টি উপ-একক এম. সি. এম কমপ্লেক্সের প্রয়োজন হয়। মার্কিন সেরেভিসিয়ায়, সাইক্লিন-নির্ভর কাইনেজ (সি. ডি. কে) কার্যকলাপ দ্বারা পারমাণবিক রপ্তানির প্রচার করা হয়। ক্রোমাটিনের সাথে যুক্ত ম্যাকএম প্রোটিনগুলি সিডিকে-র অ্যাক্সেসযোগ্যতার অভাবের কারণে সিডিকে রপ্তানি যন্ত্রপাতি থেকে সুরক্ষিত থাকে। ইনিশিয়েশন কমপ্লেক্স কোষচক্রের জি1 পর্যায়ে, প্রতিলিপির সূচনা উপাদান, অরিজিন রিকগনিশন কমপ্লেক্স (ও. আর. সি), সি. ডি. সি. 6, সি. ডি. টি. 1, এবং মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ (এম. সি. এম) প্রোটিন কমপ্লেক্স, এম. সি. এম রিং কমপ্লেক্সের একটি হেড-টু-হেড ডাইমার গঠনের জন্য ডি. এন. এ-র সাথে ক্রমানুসারে আবদ্ধ হয়, যা প্রাক-প্রতিলিপি জটিল (প্রাক-আর. সি) নামে পরিচিত। ইস্ট প্রাক-আরসি একটি বদ্ধ ডিএনএ কমপ্লেক্স গঠন করে, মানব প্রাক-আরসি একটি খোলা কমপ্লেক্স গঠন করে। জি1 পর্যায়কে কোষচক্রের এস পর্যায়ে রূপান্তরিত করার সময়, এস পর্যায়-নির্দিষ্ট সাইক্লিন-নির্ভর প্রোটিন কাইনেজ (সিডিকে) এবং সিডিসি7/ডিবিএফ4 কাইনেজ (ডিডিকে) নিষ্ক্রিয় প্রাক-আরসিকে দুটি দ্বিমুখী প্রতিলিপি একত্রিত করতে সক্ষম একটি সক্রিয় কমপ্লেক্সে রূপান্তরিত করে। ক্রায়োএম কাঠামো দেখায় যে দুটি ডিডিকে দুটি রিং জুড়ে ছড়িয়ে থাকা এমসিএম ডাবল হেক্সামারের ইন্টারফেসে স্বাধীনভাবে ডক করে। এম. সি. এম. 4, এম. সি. এম. 2 এবং এম. সি. এম. 6-এর এন. টি. ই-তে একাধিক স্তরের ক্রমিক ফসফোরিলেশন একটি দোলনা প্রক্রিয়া দ্বারা অর্জন করা হয় যার মাধ্যমে ডি. বি. এফ. 4 তার একাধিক স্তরের উপর সি. ডি. সি. 7 স্থাপন করার জন্য বিভিন্ন দোলনা অবস্থা ধরে নেয়। বিশেষ করে ডিডিকে দ্বারা এমসিএম ডাবল হেক্সামার, ম্যাকএম4-এনএসডি-র ফসফরিলেশন খামিরের কার্যকারিতার জন্য অপরিহার্য। ডি. ডি. কে এবং সি. ডি. কে দ্বারা এম. সি. এম সক্রিয় হওয়ার পরে সি. ডি. সি. 45 এবং জি. আই. এন. এস নিয়োগ করা হয়। সি. ডি. সি. 45 প্রোটিন কোষ বিভাজন চক্র 45 (সি. ডি. সি. 45) প্রোটিন প্রাক-প্রতিলিপি জটিলকে দীক্ষা জটিলতায় রূপান্তর করার জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ উপাদান। সি. ডি. সি. 45 প্রোটিন দীক্ষা নেওয়ার আগে প্রতিলিপির উৎসে একত্রিত হয় এবং স্যাকারোমাইসেস সেরেভিসিয়ায় প্রতিলিপি শুরু করার জন্য প্রয়োজনীয়, এবং দীর্ঘায়নের সময় এর একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা রয়েছে। সুতরাং, ক্রোমোজোমাল ডিএনএ প্রতিলিপির সূচনা এবং সম্প্রসারণ উভয় পর্যায়ে সিডিসি 45-এর কেন্দ্রীয় ভূমিকা রয়েছে। জি1 পর্যায়ের শেষের দিকে এবং কোষ চক্রের এস পর্যায়ে দীক্ষা শুরু হওয়ার পরে সিডিসি45 ক্রোমাটিনের সাথে যুক্ত হয়। সিডিসি45 শারীরিকভাবে ম্যাকএম5-এর সঙ্গে যুক্ত হয় এবং ম্যাকএম জিন পরিবারের ছয় সদস্যের মধ্যে পাঁচজনের সঙ্গে ওআরসি2 জিনের জিনগত মিথস্ক্রিয়া প্রদর্শন করে। ডি. এন. এ পলিমারেজ α, ডি. এন. এ পলিমারেজ ε, প্রতিলিপি প্রোটিন এ (আর. পি. এ) এবং ক্রোমাটিনে প্রসারিত কোষ নিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেন (পি. সি. এন. এ) সহ অন্যান্য বিভিন্ন প্রতিলিপি প্রোটিন লোড করার জন্য ক্রোমাটিনে সি. ডি. সি. 45 লোড করা গুরুত্বপূর্ণ। জেনোপাস নিউক্লিয়াস-মুক্ত ব্যবস্থার মধ্যে, এটি প্রদর্শিত হয়েছে যে প্লাজমিড ডিএনএ শিথিল করার জন্য সিডিসি 45 প্রয়োজন। জেনোপাস নিউক্লিয়াস-মুক্ত সিস্টেমটি আরও দেখায় যে ক্রোমাটিনের সাথে ডিএনএ আনওয়াইন্ডিং এবং টাইট আরপিএ বাঁধাই শুধুমাত্র সিডিসি 45-এর উপস্থিতিতে ঘটে। ক্রোমাটিনের সাথে সিডিসি45-এর বন্ধন নির্ভর করে সিএলবি-সিডিসি28 কাইনেজ ক্রিয়াকলাপের পাশাপাশি কার্যকরী সিডিসি6 এবং ম্যাকএম2-এর উপর, যা পরামর্শ দেয় যে সিডিসি45 এস-ফেজ সাইক্লিন-নির্ভর কাইনেস (সিডিকে) সক্রিয় করার পরে প্রাক-আরসি-র সাথে যুক্ত হয়। সময় এবং সি. ডি. কে নির্ভরতার দ্বারা নির্দেশিত, ডি. এন. এ প্রতিলিপির সূচনার প্রতিশ্রুতির জন্য ক্রোমাটিনের সাথে সি. ডি. সি. 45-এর বন্ধন অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। এস পর্যায়ে, সি. ডি. সি. 45 শারীরিকভাবে ক্রোমাটিনে এম. সি. এম প্রোটিনের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে; তবে, ক্রোমাটিন থেকে সি. ডি. সি. 45-এর বিচ্ছিন্নতা এম. সি. এম-এর তুলনায় ধীর, যা নির্দেশ করে যে প্রোটিনগুলি বিভিন্ন প্রক্রিয়া দ্বারা মুক্তি পায়। জি. আই. এন. এস ছয়টি মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ প্রোটিন এবং সি. ডি. সি. 45 প্রতিলিপি কাঁটাচামচ চলাচলের জন্য এবং ডি. এন. এ-র শিথিলকরণের জন্য সূচনা এবং দীর্ঘায়নের সময় প্রয়োজনীয়। জি. আই. এন. এস দীক্ষা চলাকালীন প্রতিলিপির উৎপত্তির সময় এম. সি. এম এবং সি. ডি. সি. 45-এর মিথস্ক্রিয়ার জন্য এবং তারপর প্রতিলিপির অগ্রগতির সাথে সাথে ডি. এন. এ প্রতিলিপির কাঁটাতে প্রয়োজনীয়। জি. আই. এন. এস কমপ্লেক্স চারটি ছোট প্রোটিন এস. এল. ডি5 (সি. ডি. সি. 105), পি. এস. এফ1 (সি. ডি. সি. 101), পি. এস. এফ2 (সি. ডি. সি. 102) এবং পি. এস. এফ3 (সি. ডি. সি. 103) নিয়ে গঠিত, জি. আই. এন. এস জাপানি ভাষায় 'গো, আইচি, নি, সান' বোঝায় যার অর্থ '5,1,2,3'। সি. ডি. সি. 45, এম. সি. এম. 2-7 এবং জি. আই. এন. এস একসঙ্গে সি. এম. জি হেলিকেজ গঠন করে, যা প্রতিলিপির প্রতিলিপি হেলিকেজ। যদিও শুধুমাত্র ম্যাকএম2-7 কমপ্লেক্সের দুর্বল হেলিকেস ক্রিয়াকলাপ রয়েছে, শক্তিশালী হেলিকেস ক্রিয়াকলাপের জন্য সিডিসি45 এবং জিআইএনএস প্রয়োজন, ক্রোমোজোম প্রতিলিপির জন্য ম্যাকএম10 ম্যাকএম10 অপরিহার্য এবং ডিএনএ প্রতিলিপির উৎপত্তির সময় নিষ্ক্রিয় আকারে লোড হওয়া মিনি ক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ 2-7 হেলিকেসের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে। ম্যাকএম10 অনুঘটক ডিএনএ পলিমারেজ α-কে চ্যাপেরোন করে এবং প্রতিলিপি কাঁটাতে পলিমারেজকে স্থিতিশীল করতে সহায়তা করে। ডিডিকে এবং সিডিকে কাইনেস এস পর্যায়ের শুরুতে, প্রাক-প্রতিলিপি জটিলকে অবশ্যই দুটি এস পর্যায়-নির্দিষ্ট কাইনেস দ্বারা সক্রিয় করতে হবে যাতে প্রতিলিপির উৎসে একটি দীক্ষা জটিল গঠন করা যায়। একটি কাইনেজ হল সিডিসি7-ডিবিএফ4 কাইনেজ যাকে ডিবিএফ4-ডিপেন্ডেন্ট কাইনেজ (ডিডিকে) বলা হয় এবং অন্যটি হল সাইক্লিন-ডিপেন্ডেন্ট কাইনেজ (সিডিকে)। ইস্ট এবং জেনোপাস-এ সিডিসি45-এর ক্রোমাটিন-বাইন্ডিং অ্যাসেসগুলি দেখিয়েছে যে সিডিকে ক্রিয়ার একটি ডাউনস্ট্রিম ইভেন্ট ক্রোমাটিনে সিডিসি45 লোড করছে। সিডিসি6 ও সিডিসি6-এর মধ্যে সংযোগ এবং সিডিসি6-এর সিডিসি-নির্ভর ফসফোরিলেশনের কারণে সিডিসি6-কে সিডিসি ক্রিয়ার লক্ষ্য হিসাবে অনুমান করা হয়েছে। সিডিসি6-এর সিডিকে-নির্ভর ফসফোরাইলেশনকে এস পর্যায়ে প্রবেশের জন্য প্রয়োজনীয় বলে মনে করা হয়। ডিডিকে, সিডিসি7-এর অনুঘটক উপ-একক এবং অ্যাক্টিভেটর প্রোটিন, ডিবিএফ4, উভয়ই ইউক্যারিওটসে সংরক্ষিত থাকে এবং কোষ চক্রের এস পর্বের সূচনার জন্য প্রয়োজনীয়। প্রতিলিপির ক্রোমাটিন উৎসে সিডিসি45 লোড করার জন্য ডি. বি. এফ. 4 এবং সি. ডি. সি. 7 উভয়েরই প্রয়োজন হয়। ডিডিকে কাইনেজ বাঁধনের লক্ষ্য হল ম্যাকএম কমপ্লেক্সের ক্রোমাটিন-আবদ্ধ রূপ। উচ্চ রেজোলিউশনের ক্রায়োএম কাঠামো দেখায় যে ডিডিকে-র ডিবিএফ4 সাবইউনিট ডিএনএ-আবদ্ধ এমসিএম-ডিএইচ-এর হেক্সামার ইন্টারফেস জুড়ে বিস্তৃত, একটি হেক্সামারের ম্যাকএম2 এবং বিপরীত হেক্সামারের ম্যাকএম4/6-এর সাথে যোগাযোগ করে। ম্যাকএম2, ম্যাকএম4 এবং ম্যাকএম6 হল ডিডিকে দ্বারা ফসফরিলেশনের সমস্ত স্তর কিন্তু শুধুমাত্র ম্যাকএম4-এর এন-টার্মিনাল সেরিন/থ্রেওনিন সমৃদ্ধ ডোমেন (এনএসডি) একটি প্রয়োজনীয় ডিডিকে লক্ষ্য। এনএসডি-র ফসফরিলেশন ম্যাকএম হেলিকেজ ক্রিয়াকলাপের সক্রিয়করণের দিকে পরিচালিত করে। ডিপিবি11, এসএলডি3, এবং এসএলডি2 প্রোটিন এসএলডি3, এসএলডি2, এবং ডিপিবি11 অনেক প্রতিলিপি প্রোটিনের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে। এস. এল. ডি. 3 এবং সি. ডি. সি. 45 একটি জটিল গঠন করে যা জি11 পর্যায়ে প্রতিলিপির প্রাথমিক উৎপত্তির সময় প্রাক-আরসি-র সাথে এবং পারস্পরিক এম. সি. এম-নির্ভর পদ্ধতিতে এস পর্যায়ে প্রতিলিপির পরবর্তী উৎসের সাথে যুক্ত। ডিপিবি11 এবং এসএলডি2 পলিমারেজের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে এবং ক্রস-লিঙ্কিং পরীক্ষাগুলি ইঙ্গিত দিয়েছে যে ডিপিবি11 এবং পলিমেরেজ এস পর্যায়ে মিলিত হয় এবং প্রতিলিপির উৎসের সাথে যুক্ত হয়। এসএলডি3 এবং এসএলডি2 সিডিকে দ্বারা ফসফরিলেটেড, যা দুটি প্রতিলিপি প্রোটিনকে ডিপিবি11-এর সাথে আবদ্ধ করতে সক্ষম করে। ডিপিবি11-এর দুটি জোড়া বিআরসিএ1 সি টার্মিনাস (বিআরসিটি) ডোমেন ছিল যা ফসফোপেপটাইড-বাইন্ডিং ডোমেন হিসাবে পরিচিত। বি. আর. সি. টি ডোমেনের এন-টার্মিনাল জোড়া ফসফরিলেটেড এস. এল. ডি 3-এর সাথে এবং সি-টার্মিনাল জোড়া ফসফরিলেটেড এস. এল. ডি 2-এর সাথে আবদ্ধ হয়। এই দুটি মিথস্ক্রিয়া সি. ডি. কে-নির্ভর ডি. এন. এ-এর সক্রিয়করণের জন্য অপরিহার্য। ডিপিবি11 জি. আই. এন. এস-এর সঙ্গেও মিথস্ক্রিয়া করে এবং ক্রোমোজোমাল ডি. এন. এ প্রতিলিপির সূচনা ও সম্প্রসারণের পদক্ষেপে অংশগ্রহণ করে। জি. আই. এন. এস হল প্রতিলিপি কাঁটাতে পাওয়া প্রতিলিপি প্রোটিনগুলির মধ্যে একটি এবং সি. ডি. সি. 45 এবং এম. সি. এম-এর সাথে একটি জটিল গঠন করে। ডি. পি. বি. 11, এস. এল. ডি. 2 এবং এস. এল. ডি. 3-এর মধ্যে এই ফসফোরিলেশন-নির্ভর মিথস্ক্রিয়া ডি. এন. এ প্রতিলিপির সি. ডি. কে-নির্ভর সক্রিয়করণের জন্য প্রয়োজনীয় এবং কিছু পরীক্ষার মধ্যে ক্রস-লিঙ্কিং বিকারক ব্যবহার করে, একটি ভঙ্গুর জটিলকে চিহ্নিত করা হয়েছিল যাকে প্রি-লোডিং কমপ্লেক্স (প্রি-এল. সি) বলা হয়। এই কমপ্লেক্সে রয়েছে পোল, জি. আই. এন. এস, এস. এল. ডি2 এবং ডিপিবি11। প্রাক-এলসি একটি সিডিকে-নির্ভর এবং ডিডিকে-নির্ভর পদ্ধতিতে উৎসের সাথে যে কোনও সংযোগের আগে গঠিত হতে দেখা যায় এবং সিডিকে কার্যকলাপ প্রাক-এলসি গঠনের মাধ্যমে ডিএনএ প্রতিলিপির সূচনা নিয়ন্ত্রণ করে। সম্প্রসারণ প্রাক-প্রতিলিপি জটিল (প্রাক-আরসি) গঠন ডিএনএ প্রতিলিপির সূচনার সম্ভাব্য স্থানগুলিকে চিহ্নিত করে। ডাবল স্ট্রেন্ডেড ডি. এন. এ-কে ঘিরে থাকা মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ কমপ্লেক্সের সাথে সামঞ্জস্য রেখে, প্রাক-আর. সি গঠন মূল ডি. এন. এ-র অবিলম্বে শিথিলকরণ বা ডি. এন. এ পলিমারেজ নিয়োগের দিকে পরিচালিত করে না। পরিবর্তে, কোষ চক্রের জি1-এর সময় যে প্রাক-আরসি গঠিত হয় তা শুধুমাত্র ডিএনএ-কে শিথিল করার জন্য সক্রিয় করা হয় এবং কোষগুলি জি1 থেকে কোষ চক্রের এস পর্যায়ে যাওয়ার পরে প্রতিলিপি তৈরি করা শুরু করে। একবার দীক্ষা জটিল গঠন হয়ে গেলে এবং কোষগুলি এস পর্যায়ে চলে গেলে, জটিলটি তখন একটি প্রতিলিপিতে পরিণত হয়। ইউক্যারিওটিক প্রতিলিপি জটিল ডি. এন. এ প্রতিলিপির সমন্বয়ের জন্য দায়ী। ডি. এন. এ পলিমারেজ ε এবং ডি. এন. এ পলিমারেজ δ দ্বারা সামনের এবং পিছনের স্ট্র্যান্ডের প্রতিলিপি তৈরি করা হয়। ক্ল্যাস্পিন, অ্যান্ড1, রেপ্লিকেশন ফ্যাক্টর সি ক্ল্যাম্প লোডার এবং কাঁটাচামচ সুরক্ষা কমপ্লেক্স সহ অনেক প্রতিলিপি উপাদান পলিমারেজ ফাংশন নিয়ন্ত্রণ এবং সিডিসি45-এমসিএম-জিএনএস কমপ্লেক্স দ্বারা টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ডের আনওয়াইন্ডিংয়ের সাথে ডিএনএ সংশ্লেষণের সমন্বয়ের জন্য দায়ী। ডি. এন. এ উন্মুক্ত হওয়ার সাথে সাথে মোচড়ের সংখ্যা হ্রাস পায়। এর জন্য ক্ষতিপূরণ করার জন্য রিথ সংখ্যা বৃদ্ধি পায়, ডিএনএতে ধনাত্মক সুপারকয়েল প্রবর্তন করে। এই সুপারকয়েলগুলি অপসারণ না করা হলে ডিএনএ প্রতিলিপি বন্ধ হয়ে যেত। টোপোআইসোমেরেসগুলি প্রতিলিপি কাঁটার আগে এই সুপারকয়েলগুলি অপসারণের জন্য দায়ী। প্রতিটি প্রলিফারেটিভ কোষে পুরো জিনোমিক ডিএনএ অনুলিপি করার জন্য প্রতিলিপি দায়ী। বেস পেয়ারিং এবং চেইন গঠনের প্রতিক্রিয়া, যা ডটার হেলিক্স গঠন করে, ডিএনএ পলিমারেজ দ্বারা অনুঘটকিত হয়। এই এনজাইমগুলি একক-আটকে থাকা ডিএনএ বরাবর চলে এবং টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ডটি "পড়া" করে এবং সঠিক পিউরিন নিউক্লিওবেস, অ্যাডেনিন এবং গুয়ানিন, এবং পাইরিমিডিন নিউক্লিওবেস, থাইমিন এবং সাইটোসিনকে অন্তর্ভুক্ত করার অনুমতি দিয়ে নবজাতক ডিএনএ স্ট্র্যান্ডের সম্প্রসারণের অনুমতি দেয়। সক্রিয় মুক্ত ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিওটাইড কোষে ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিওটাইড ট্রাইফসফেট (ডিএনটিপি) হিসাবে বিদ্যমান। এই মুক্ত নিউক্লিওটাইডগুলি শেষ অন্তর্ভুক্ত নিউক্লিওটাইডের একটি উন্মুক্ত 3 '-হাইড্রক্সিল গ্রুপে যোগ করা হয়। এই বিক্রিয়ায়, মুক্ত ডি. এন. টি. পি থেকে একটি পাইরোফসফেট নির্গত হয়, যা পলিমারাইজেশন বিক্রিয়ার জন্য শক্তি উৎপন্ন করে এবং 5 'মনোফসফেটকে উন্মুক্ত করে, যা তারপর 3' অক্সিজেনের সাথে সমযোজীভাবে আবদ্ধ হয়। উপরন্তু, ভুলভাবে ঢোকানো নিউক্লিওটাইডগুলি সরানো যেতে পারে এবং একটি শক্তিশালীভাবে অনুকূল প্রতিক্রিয়ায় সঠিক নিউক্লিওটাইড দ্বারা প্রতিস্থাপিত হতে পারে। এই বৈশিষ্ট্যটি সঠিক প্রুফরিডিং এবং ডিএনএ প্রতিলিপির সময় ঘটে যাওয়া ত্রুটিগুলির মেরামতের জন্য গুরুত্বপূর্ণ। প্রতিলিপি কাঁটাচামচ হল নতুন পৃথক টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ডগুলির মধ্যে সংযোগস্থল, যা নেতৃস্থানীয় এবং পিছিয়ে থাকা স্ট্র্যান্ড হিসাবে পরিচিত এবং ডাবল স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ। যেহেতু দ্বৈত ডিএনএ সমান্তরাল, তাই প্রতিলিপি কাঁটাতে দুটি নতুন স্ট্র্যান্ডের মধ্যে ডিএনএ প্রতিলিপি বিপরীত দিকে ঘটে, তবে সমস্ত ডিএনএ পলিমারেজ নতুন সংশ্লেষিত স্ট্র্যান্ডের সাপেক্ষে 5 'থেকে 3' দিকে ডিএনএ সংশ্লেষিত করে। ডিএনএ প্রতিলিপির সময় আরও সমন্বয় প্রয়োজন। দুটি প্রতিলিপি পলিমারিস বিপরীত দিকে ডি. এন. এ সংশ্লেষিত করে। পলিমারেজ ε ক্রমাগত "নেতৃস্থানীয়" ডিএনএ স্ট্র্যান্ডের উপর ডিএনএ সংশ্লেষিত করে কারণ এটি প্রতিলিপি দ্বারা ডিএনএ আনওয়াইন্ডিংয়ের মতো একই দিকে নির্দেশ করছে। এর বিপরীতে, পলিমারেজ δ "ল্যাগিং" স্ট্র্যান্ডে ডিএনএ সংশ্লেষিত করে, যা বিপরীত ডিএনএ টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ড, একটি খণ্ডিত বা বিচ্ছিন্ন পদ্ধতিতে। পিছিয়ে পড়া স্ট্র্যান্ডে ডিএনএ প্রতিলিপি পণ্যগুলির অবিচ্ছিন্ন প্রসারিত অংশগুলি ওকাজাকি টুকরো হিসাবে পরিচিত এবং ইউক্যারিওটিক প্রতিলিপি কাঁটাতে দৈর্ঘ্যে প্রায় 100 থেকে 200 বেস। পিছিয়ে পড়া স্ট্র্যান্ডে সাধারণত একক-আটকে থাকা ডি. এন. এ-র দীর্ঘ প্রসারিত অংশ থাকে যা একক-আটকে থাকা বাঁধাই প্রোটিনের সাথে আবৃত থাকে, যা একটি গৌণ কাঠামো গঠন প্রতিরোধ করে একক-আটকে থাকা টেমপ্লেটগুলিকে স্থিতিশীল করতে সহায়তা করে। ইউক্যারিওটসে, এই একক-স্ট্র্যান্ডযুক্ত বাঁধাই প্রোটিনগুলি একটি হেটেরোট্রিমেরিক জটিল যা প্রতিলিপি প্রোটিন এ (আরপিএ) নামে পরিচিত। প্রতিটি ওকাজাকি খণ্ডের আগে একটি আর. এন. এ প্রাইমার থাকে, যা সংশ্লেষণের সময় পরবর্তী ওকাজাকি খণ্ডের মিছিল দ্বারা স্থানচ্যুত হয়। আর. এন. এ. এস. এইচ ডি. এন. এ-কে স্বীকৃতি দেয়ঃ আর. এন. এ সংকর যা আর. এন. এ প্রাইমার ব্যবহার করে তৈরি করা হয় এবং একটি প্রাইমার রেখে প্রতিলিপি স্ট্র্যান্ড থেকে এগুলি অপসারণের জন্য দায়ীঃ টেমপ্লেট জংশন। ডি. এন. এ পলিমারেজ α, এই স্থানগুলিকে শনাক্ত করে এবং প্রাইমার অপসারণের মাধ্যমে অবশিষ্ট বিরতিগুলিকে প্রসারিত করে। ইউক্যারিওটিক কোষে, আর. এন. এ প্রাইমারের ঠিক উপরের দিকে ডি. এন. এ বিভাগের একটি ছোট পরিমাণও স্থানচ্যুত হয়, যা একটি ফ্ল্যাপ কাঠামো তৈরি করে। এই ফ্ল্যাপটি তারপর এন্ডোনিউক্লিয়াস দ্বারা বিভক্ত করা হয়। প্রতিলিপি কাঁটাতে, ফ্ল্যাপ অপসারণের পরে ডি. এন. এ-তে ব্যবধানটি ডি. এন. এ লিগাজ 1 দ্বারা সিল করা হয়, যা নতুন সংশ্লেষিত স্ট্র্যান্ডের 3 '-ও. এইচ এবং 5' ফসফেটের মধ্যে থাকা নিকগুলি মেরামত করে। ইউক্যারিওটিক ওকাজাকি খণ্ডের তুলনামূলকভাবে সংক্ষিপ্ত প্রকৃতির কারণে, পিছিয়ে পড়া স্ট্র্যান্ডে অবিচ্ছিন্নভাবে ঘটে যাওয়া ডিএনএ প্রতিলিপি সংশ্লেষণ কম দক্ষ এবং নেতৃস্থানীয়-স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণের তুলনায় বেশি সময়সাপেক্ষ। একবার সমস্ত আর. এন. এ প্রাইমার অপসারণ এবং নিক মেরামত করা হলে ডি. এন. এ সংশ্লেষণ সম্পূর্ণ হয়। ডিএনএ প্রতিলিপির সময়, প্রতিলিপিটি প্যারেন্টাল ডুপ্লেক্স ডিএনএকে 5 'থেকে 3' দিকে দুটি একক-আটকে থাকা ডিএনএ টেমপ্লেট প্রতিলিপি কাঁটাতে উন্মুক্ত করবে। নেতৃস্থানীয় স্ট্র্যান্ড হল টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ড যা প্রতিলিপি কাঁটাতারের চলাচলের মতো একই দিকে প্রতিলিপি করা হচ্ছে। এটি মূল স্ট্র্যান্ডের পরিপূরক নতুন সংশ্লেষিত স্ট্র্যান্ডকে প্রতিলিপি কাঁটাতারের চলাচলের মতো একই দিকে 5 'থেকে 3' সংশ্লেষিত করার অনুমতি দেয়। একবার একটি আর. এন. এ প্রাইমার একটি প্রাইমেস দ্বারা সামনের স্ট্র্যান্ডের 3 'প্রান্তে যুক্ত হয়ে গেলে, ডি. এন. এ সংশ্লেষণ সামনের স্ট্র্যান্ডের সাপেক্ষে 3' থেকে 5 'দিকে নিরবচ্ছিন্নভাবে চলতে থাকবে। ডি. এন. এ পলিমারেজ ε ক্রমাগত টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ডে নিউক্লিওটাইড যোগ করবে তাই নেতৃস্থানীয় স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণের জন্য শুধুমাত্র একটি প্রাইমার প্রয়োজন এবং এর নিরবচ্ছিন্ন ডি. এন. এ পলিমারেজ কার্যকলাপ রয়েছে। ল্যাগিং স্ট্র্যান্ডে ল্যাগিং স্ট্র্যান্ড ডিএনএ প্রতিলিপি অবিচ্ছিন্ন। ল্যাগিং স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণে, প্রতিলিপি কাঁটার বিপরীত দিকে ডিএনএ পলিমারেজের চলাচলের জন্য একাধিক আরএনএ প্রাইমারের ব্যবহার প্রয়োজন। ডিএনএ পলিমারেজ ডিএনএর ছোট ছোট টুকরোগুলি সংশ্লেষিত করবে যা ওকাজাকি টুকরোগুলি বলা হয় যা প্রাইমারের 3 'প্রান্তে যোগ করা হয়। এই টুকরোগুলি ইউক্যারিওটগুলিতে 100 থেকে 400 নিউক্লিওটাইডের মধ্যে যে কোনও জায়গায় দীর্ঘ হতে পারে। ওকাজাকি খণ্ড সংশ্লেষণের শেষে, ডিএনএ পলিমারেজ δ পূর্ববর্তী ওকাজাকি খণ্ডে চলে যায় এবং আরএনএ প্রাইমার এবং ডিএনএর একটি ছোট অংশ ধারণকারী এর 5 'প্রান্তকে স্থানচ্যুত করে। এটি একটি আর. এন. এ-ডি. এন. এ একক স্ট্র্যান্ড ফ্ল্যাপ তৈরি করে, যা অবশ্যই বিভক্ত করতে হবে এবং দুটি ওকাজাকি টুকরোগুলির মধ্যে নিকটি ডি. এন. এ লিগাজ 1 দ্বারা সিল করতে হবে। এই প্রক্রিয়াটি ওকাজাকি ফ্র্যাগমেন্ট ম্যাচিউরেশন নামে পরিচিত এবং এটি দুটি উপায়ে পরিচালনা করা যেতে পারেঃ একটি প্রক্রিয়া ছোট ফ্ল্যাপগুলি প্রক্রিয়া করে, অন্যটি দীর্ঘ ফ্ল্যাপগুলির সাথে সম্পর্কিত। ডি. এন. এ পলিমারেজ δ তার পলিমারাইজেশনের আগে ডি. এন. এ বা আর. এন. এ-এর 2 থেকে 3টি নিউক্লিওটাইড স্থানচ্যুত করতে সক্ষম, যা ফেন1-এর জন্য একটি সংক্ষিপ্ত "ফ্ল্যাপ" স্তর তৈরি করে, যা ফ্ল্যাপ থেকে নিউক্লিওটাইড, একবারে একটি নিউক্লিওটাইড অপসারণ করতে পারে। এই প্রক্রিয়ার চক্রের পুনরাবৃত্তি করে, ডিএনএ পলিমারেজ δ এবং ফেন1 আরএনএ প্রাইমার অপসারণের সমন্বয় করতে পারে এবং ল্যাগিং স্ট্র্যান্ডে একটি ডিএনএ নিক ছেড়ে যেতে পারে। এটি প্রস্তাব করা হয়েছে যে এই পুনরাবৃত্তিমূলক প্রক্রিয়াটি কোষের চেয়ে বেশি পছন্দসই কারণ এটি কঠোরভাবে নিয়ন্ত্রিত এবং বড় ফ্ল্যাপ তৈরি করে না যা এক্সাইজ করার প্রয়োজন হয়। নিয়ন্ত্রিত ফেন1/ডিএনএ পলিমারেজ δ ক্রিয়াকলাপের ক্ষেত্রে, কোষটি ডিএনএ2 ব্যবহার করে দীর্ঘ ফ্ল্যাপ তৈরি এবং প্রক্রিয়া করার জন্য একটি বিকল্প প্রক্রিয়া ব্যবহার করে, যার হেলিকেজ এবং নিউক্লিজ উভয় ক্রিয়াকলাপ রয়েছে। এই দীর্ঘ ফ্ল্যাপগুলি অপসারণের জন্য ডিএনএ2-এর নিউক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপ প্রয়োজন, যা ফেন1 দ্বারা প্রক্রিয়াজাত করার জন্য একটি ছোট ফ্ল্যাপ রেখে যায়। ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি অধ্যয়নগুলি ইঙ্গিত দেয় যে ল্যাগিং স্ট্র্যান্ডে নিউক্লিওসোম লোডিং সংশ্লেষণের স্থানের খুব কাছাকাছি ঘটে। সুতরাং, ওকাজাকি খণ্ডের পরিপক্কতা একটি কার্যকর প্রক্রিয়া যা সদ্যোজাত ডিএনএ সংশ্লেষিত হওয়ার পরপরই ঘটে। প্রতিলিপি ডিএনএ পলিমেরেস প্রতিলিপি হেলিকেস প্যারেন্টাল ডিএনএ ডুপ্লেক্সকে উন্মুক্ত করার পরে, দুটি একক-আটকে থাকা ডিএনএ টেমপ্লেট প্রকাশ করার পরে, প্যারেন্টাল জিনোমের দুটি অনুলিপি তৈরি করতে প্রতিলিপি পলিমেরেসের প্রয়োজন হয়। ডিএনএ পলিমারেজ ফাংশন অত্যন্ত বিশেষায়িত এবং নির্দিষ্ট টেমপ্লেট এবং সংকীর্ণ স্থানীয়করণে প্রতিলিপি সম্পাদন করে। ইউক্যারিওটিক প্রতিলিপি কাঁটাতে, তিনটি স্বতন্ত্র প্রতিলিপি পলিমারিস কমপ্লেক্স রয়েছে যা ডিএনএ প্রতিলিপিতে অবদান রাখেঃ পলিমারিস α, পলিমারিস δ, এবং পলিমারিস ε। এই তিনটি পলিমারেজ কোষের কার্যকারিতার জন্য অপরিহার্য। যেহেতু ডি. এন. এ পলিমারেজগুলির একটি প্রাইমারের প্রয়োজন হয় যার উপর ডি. এন. এ সংশ্লেষণ শুরু করার জন্য, পলিমারেজ α (পোল α) একটি প্রতিলিপি প্রাইমাস হিসাবে কাজ করে। পোল α একটি আর. এন. এ প্রাইমেজের সাথে যুক্ত এবং এই কমপ্লেক্সটি একটি প্রাইমার সংশ্লেষ করে প্রাইমিং কাজটি সম্পন্ন করে যার মধ্যে 10 থেকে 20 টি ডি. এন. এ ঘাঁটির পরে আর. এন. এ-র একটি ছোট 10 টি নিউক্লিওটাইড প্রসারিত থাকে। গুরুত্বপূর্ণভাবে, এই প্রাথমিক ক্রিয়াটি অগ্রগামী-স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণ শুরু করার জন্য উৎসে প্রতিলিপির সূচনার সময় এবং পিছিয়ে পড়া স্ট্র্যান্ডের প্রতিটি ওকাজাকি খণ্ডের 5 'প্রান্তে ঘটে। যাইহোক, পোল α ডিএনএ প্রতিলিপি চালিয়ে যেতে সক্ষম নয় এবং ডিএনএ সংশ্লেষণ চালিয়ে যাওয়ার জন্য অন্য পলিমারেজ দিয়ে প্রতিস্থাপন করতে হবে। পলিমারেজ স্যুইচিংয়ের জন্য ক্ল্যাম্প লোডারের প্রয়োজন হয় এবং এটি প্রমাণিত হয়েছে যে স্বাভাবিক ডিএনএ প্রতিলিপির জন্য তিনটি ডিএনএ পলিমারেজের সমন্বিত ক্রিয়া প্রয়োজনঃ প্রাইমিং সংশ্লেষণের জন্য পোল α, লিডিং-স্ট্র্যান্ড প্রতিলিপির জন্য পোল ε এবং পল δ, যা ক্রমাগত লোড করা হয়, ল্যাগিং-স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণের সময় ওকাজাকি টুকরো তৈরি করার জন্য। পলিমারেজ α (পোল α): একটি ছোট অনুঘটক উপ-একক (প্রিএস) এবং একটি বড় অ-অনুঘটক (প্রিএল) উপ-একক সহ একটি জটিল গঠন করে। প্রথমত, একটি আরএনএ প্রাইমারের সংশ্লেষণ ডিএনএ পলিমারেজ আলফা দ্বারা ডিএনএ সংশ্লেষণের অনুমতি দেয়। সামনের স্ট্র্যান্ডের উৎপত্তিস্থলে এবং পিছিয়ে পড়া স্ট্র্যান্ডের প্রতিটি ওকাজাকি খণ্ডের শুরুতে একবার ঘটে। প্রি সাবইউনিটগুলি একটি প্রাইমেস হিসাবে কাজ করে, একটি আরএনএ প্রাইমার সংশ্লেষিত করে। ডি. এন. এ পোল α নতুন গঠিত প্রাইমারকে ডি. এন. এ নিউক্লিওটাইড দিয়ে প্রসারিত করে। প্রায় 20টি নিউক্লিওটাইডের পরে, সামনের স্ট্র্যান্ডে পোল ε এবং পিছিয়ে থাকা স্ট্র্যান্ডে পোল δ দ্বারা প্রসারিত হয়। পলিমারেজ δ (পোল δ): অত্যন্ত প্রসেসিভ এবং প্রুফরিডিং রয়েছে, 3 '-> 5' এক্সোন্যুক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপ। ভিভোতে, এটি প্রধান পলিমারেজ যা ল্যাগিং স্ট্র্যান্ড এবং লিডিং স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণ উভয় ক্ষেত্রেই জড়িত। পলিমারেজ ε (পোল ε): অত্যন্ত প্রক্রিয়াজাত এবং প্রুফরিডিং রয়েছে, 3 '-> 5' এক্সোন্যুক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপ। পোল δ-এর সাথে অত্যন্ত সম্পর্কিত, ভিভোতে এটি প্রধানত পোল δ-এর ত্রুটি পরীক্ষা করার ক্ষেত্রে কাজ করে। সিডিসি45-এমসিএম-জিএনএস হেলিকেজ কমপ্লেক্স ডিএনএ হেলিকেজ এবং পলিমেরেজগুলি অবশ্যই প্রতিলিপি কাঁটাতে ঘনিষ্ঠ সংস্পর্শে থাকতে হবে। সংশ্লেষণের অনেক আগেই যদি শিথিল হয়ে যায়, তবে একক-আটকে থাকা ডি. এন. এ-র বড় অংশ উন্মুক্ত হয়ে যায়। এটি ডিএনএ ক্ষতির সংকেত সক্রিয় করতে পারে বা ডিএনএ মেরামত প্রক্রিয়াকে প্ররোচিত করতে পারে। এই সমস্যাগুলিকে ব্যর্থ করার জন্য, ইউক্যারিওটিক প্রতিলিপিতে বিশেষ প্রোটিন থাকে যা প্রতিলিপি কাঁটার আগে হেলিকেজ ক্রিয়াকলাপ নিয়ন্ত্রণ করার জন্য ডিজাইন করা হয়। এই প্রোটিনগুলি হেলিকেস এবং পলিমেরেসগুলির মধ্যে শারীরিক মিথস্ক্রিয়ার জন্য ডকিং সাইটও সরবরাহ করে, যার ফলে ডিএনএ সংশ্লেষণের সাথে ডুপ্লেক্স আনওয়াইন্ডিং নিশ্চিত করা হয়। ডিএনএ পলিমারেজগুলি কাজ করার জন্য, প্রতিলিপির জন্য দুটি একক-আটকে থাকা ডিএনএ টেমপ্লেট প্রকাশ করতে ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ হেলিক্সকে উন্মুক্ত করতে হবে। ডি. এন. এ হেলিকেসগুলি ক্রোমোজোম প্রতিলিপির সময় ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডি. এন. এ-কে শিথিল করার জন্য দায়ী। ইউক্যারিওটিক কোষে হেলিকেসগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে জটিল। হেলিকেসের অনুঘটক কেন্দ্রটি ছয়টি ক্ষুদ্র ক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ (এম. সি. এম. 2-7) প্রোটিন নিয়ে গঠিত, যা একটি হেক্সামেরিক বলয় গঠন করে। ডিএনএ থেকে দূরে, ম্যাকএম2-7 প্রোটিনগুলি একটি একক হেটেরোহেক্সামার গঠন করে এবং ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ-র চারপাশে হেড-টু-হেড ডাবল হেক্সামার হিসাবে ডিএনএ প্রতিলিপির উৎসে একটি নিষ্ক্রিয় আকারে লোড করা হয়। ম্যাকএম প্রোটিনগুলি প্রতিলিপির উৎপত্তির জন্য নিয়োগ করা হয় এবং তারপর এস পর্যায়ে জিনোমিক ডিএনএ জুড়ে পুনরায় বিতরণ করা হয়, যা প্রতিলিপি কাঁটাতে তাদের স্থানীয়করণের ইঙ্গিত দেয়। এম. সি. এম প্রোটিনের লোডিং শুধুমাত্র কোষ চক্রের জি1-এর সময় ঘটতে পারে, এবং লোড করা কমপ্লেক্সটি তারপর সি. ডি. সি. 45 প্রোটিন এবং জি. আই. এন. এস কমপ্লেক্স নিয়োগের মাধ্যমে এস পর্যায়ে সক্রিয় করা হয় যাতে ডি. এন. এ প্রতিলিপি কাঁটাতে সক্রিয় সি. ডি. সি. 45-এম. সি. এম-জি. আই. এন. এস (সি. এম. জি) হেলিকেস তৈরি হয়। ডিএনএ প্রতিলিপির জন্য এস পর্যায় জুড়ে এম. সি. এম ক্রিয়াকলাপ প্রয়োজন। সি. এম. জি হেলিকেসের চারপাশে বিভিন্ন নিয়ন্ত্রক উপাদান একত্রিত হয়ে 'রিপ্লিসোম প্রগ্রেশন কমপ্লেক্স' তৈরি করে যা ডি. এন. এ পলিমেরেজের সাথে যুক্ত হয়ে ইউক্যারিওটিক প্রতিলিপি গঠন করে, যার কাঠামো এখনও তার ব্যাকটেরিয়া প্রতিরূপের তুলনায় বেশ দুর্বলভাবে সংজ্ঞায়িত। বিচ্ছিন্ন সিএমজি হেলিকেস এবং রিপ্লিসোম প্রগ্রেশন কমপ্লেক্সে একটি একক ম্যাকএম প্রোটিন রিং কমপ্লেক্স রয়েছে যা পরামর্শ দেয় যে উৎপত্তির সময় ম্যাকএম প্রোটিনের লোড করা ডাবল হেক্সামারকে সূচনা প্রক্রিয়ার অংশ হিসাবে দুটি একক হেক্সামেরিক রিংয়ে বিভক্ত করা যেতে পারে, প্রতিটি ম্যাকএম প্রোটিন জটিল রিং প্রতিটি উত্স থেকে প্রতিষ্ঠিত দুটি প্রতিলিপি কাঁটাতে সিএমজি হেলিকেসের মূল গঠন করে। ডি. এন. এ-কে শিথিল করার জন্য সম্পূর্ণ সি. এম. জি কমপ্লেক্স প্রয়োজন এবং সি. ডি. সি. 45-এম. সি. এম-জি. আই. এন. এস-এর কমপ্লেক্স হল ইউক্যারিওটিক কোষে কার্যকরী ডি. এন. এ হেলিকেজ। সিটিএফ4 এবং অ্যান্ড1 প্রোটিন সিএমজি কমপ্লেক্স সিটিএফ4 এবং অ্যান্ড1 প্রোটিনের সাথে মিথস্ক্রিয়ার মাধ্যমে প্রতিলিপির সাথে মিথস্ক্রিয়া করে। সিটিএফ 4/এবং 1 প্রোটিন সিএমজি কমপ্লেক্স এবং ডিএনএ পলিমারেজ α উভয়ের সাথেই মিথস্ক্রিয়া করে। সিটিএফ 4 একটি পলিমারেজ α আনুষঙ্গিক ফ্যাক্টর, যা প্রতিলিপি উৎসে পলিমারেজ α নিয়োগের জন্য প্রয়োজনীয়। এম. আর. সি1 এবং ক্ল্যাস্পিন প্রোটিন এম. আর. সি1/ক্ল্যাস্পিন প্রোটিন সি. এম. জি জটিল হেলিকেস ক্রিয়াকলাপের সাথে শীর্ষস্থানীয়-স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণ করে। এম. আর. সি1 পলিমারেজ ε-এর পাশাপাশি এম. সি. এম প্রোটিনের সঙ্গেও মিথস্ক্রিয়া করে। হেলিকেজ এবং শীর্ষস্থানীয়-স্ট্র্যান্ড পলিমারেজের মধ্যে এই সরাসরি যোগসূত্রের গুরুত্ব সংস্কৃতিযুক্ত মানব কোষের ফলাফল দ্বারা আন্ডারস্কোর করা হয়, যেখানে দক্ষ প্রতিলিপি কাঁটাচামচ অগ্রগতির জন্য এম. আর. সি. 1/ক্লাসপিনের প্রয়োজন হয়। এই ফলাফলগুলি থেকে জানা যায় যে দক্ষ ডি. এন. এ প্রতিলিপির জন্য হেলিকেস এবং লিডিং-স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণের সংযোগও প্রয়োজন। প্রসারিত কোষ নিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেন ডিএনএ পলিমারেজগুলির ডিএনএ প্রতিলিপি সমর্থন করার জন্য অতিরিক্ত কারণের প্রয়োজন হয়। ডিএনএ পলিমারেজগুলির একটি অর্ধ-বদ্ধ 'হাত' কাঠামো রয়েছে, যা পলিমারেজকে ডিএনএতে লোড করতে এবং স্থানান্তর শুরু করতে দেয়। এই কাঠামোটি ডি. এন. এ পলিমারেজকে একক-আটকে থাকা ডি. এন. এ টেমপ্লেট ধরে রাখতে, সক্রিয় স্থানে ডি. এন. টি. পি অন্তর্ভুক্ত করতে এবং সদ্য গঠিত ডাবল-আটকে থাকা ডি. এন. এ মুক্ত করার অনুমতি দেয়। যাইহোক, ডিএনএ পলিমারেজের কাঠামো টেমপ্লেট ডিএনএর সাথে অবিচ্ছিন্ন স্থিতিশীল মিথস্ক্রিয়ার অনুমতি দেয় না। পলিমারেজ এবং টেমপ্লেট ডি. এন. এ-র মধ্যে মিথস্ক্রিয়া জোরদার করতে, ডি. এন. এ স্লাইডিং ক্ল্যাম্পগুলি প্রতিলিপি পলিমারেজের প্রক্রিয়াকরণকে উন্নীত করতে পলিমারেজের সাথে যুক্ত হয়। ইউক্যারিওটসে, স্লাইডিং ক্ল্যাম্প একটি হোমোট্রিমার রিং কাঠামো যা প্রলিফারেটিং সেল নিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেন (পিসিএনএ) নামে পরিচিত। পি. সি. এন. এ বলয়ের পৃষ্ঠতলের সাথে মেরুকরণ রয়েছে যা ডি. এন. এ পলিমারেজের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে এবং সেগুলিকে ডি. এন. এ টেমপ্লেটে নিরাপদে সংযুক্ত করে। ডিএনএ পলিমারেজগুলির পিসিএনএ-নির্ভর স্থিতিশীলতা ডিএনএ প্রতিলিপির উপর উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলে কারণ পিসিএনএগুলি পলিমারেজ প্রক্রিয়াকরণকে 1,000 গুণ পর্যন্ত বাড়াতে সক্ষম। পি. সি. এন. এ একটি অপরিহার্য কোফ্যাক্টর এবং রেপ্লিকেশন কাঁটাতে একাধিক প্রক্রিয়া সমন্বিত করার জন্য রেপ্লিসোমে সবচেয়ে সাধারণ মিথস্ক্রিয়া প্ল্যাটফর্মগুলির মধ্যে একটি হওয়ার পার্থক্য রয়েছে এবং তাই পি. সি. এন. এ-কে ডি. এন. এ পলিমেরেজের জন্য একটি নিয়ন্ত্রক কোফ্যাক্টর হিসাবেও দেখা হয়। রেপ্লিকেশন ফ্যাক্টর সি পিসিএনএ ডিএনএ টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ডকে সম্পূর্ণরূপে ঘিরে রাখে এবং রেপ্লিকেশন কাঁটাতে ডিএনএতে লোড করতে হবে। সামনের স্ট্র্যান্ডে, পিসিএনএ লোড করা একটি বিরল প্রক্রিয়া, কারণ সামনের স্ট্র্যান্ডে ডিএনএ প্রতিলিপি প্রতিলিপি শেষ না হওয়া পর্যন্ত অবিচ্ছিন্ন থাকে। যাইহোক, পিছিয়ে পড়া স্ট্র্যান্ডে, প্রতিটি ওকাজাকি খণ্ডের শুরুতে ডিএনএ পলিমারেজ δ ক্রমাগত লোড করা প্রয়োজন। ওকাজাকি খণ্ড সংশ্লেষণের এই অবিচ্ছিন্ন সূচনার জন্য দক্ষ ডিএনএ প্রতিলিপির জন্য বারবার পিসিএনএ লোডিং প্রয়োজন। পিসিএনএ লোডিং রেপ্লিকেশন ফ্যাক্টর সি (আরএফসি) কমপ্লেক্স দ্বারা সম্পন্ন করা হয়। আর. এফ. সি কমপ্লেক্স পাঁচটি এ. টি. পি. এস নিয়ে গঠিতঃ আর. এফ. সি1, আর. এফ. সি2, আর. এফ. সি3, আর. এফ. সি4 এবং আর. এফ. সি5। আর. এফ. সি প্রাইমার-টেমপ্লেট জংশনগুলিকে স্বীকৃতি দেয় এবং এই স্থানগুলিতে পি. সি. এন. এ লোড করে। পিসিএনএ হোমোট্রিমারটি এটিপি হাইড্রোলাইসিস দ্বারা আরএফসি দ্বারা খোলা হয় এবং তারপরে পলিমারেজের সাথে এর সংযোগকে সহজতর করার জন্য সঠিক অভিযোজনে ডিএনএতে লোড করা হয়। ক্ল্যাম্প লোডারগুলি ডিএনএ থেকে পিসিএনএ আনলোড করতে পারে; একটি প্রক্রিয়া প্রয়োজন যখন প্রতিলিপি বন্ধ করা আবশ্যক। প্রতিলিপি কাঁটাতে আটকে থাকা প্রতিলিপি কাঁটাচামচ ডিএনএ প্রতিলিপি ডিঅক্সিন্যুক্লিয়োটাইড ট্রাইফসফেটের (ডিএনটিপি) অভাব বা ডিএনএ ক্ষতির কারণে থামানো যেতে পারে, যার ফলে প্রতিলিপির চাপ হয়। প্রতিলিপির এই বিরামকে একটি স্থগিত প্রতিলিপি কাঁটাচামচ হিসাবে বর্ণনা করা হয়। প্রোটিনের একটি কাঁটাচামচ সুরক্ষা কমপ্লেক্স প্রতিলিপি কাঁটাচামচকে স্থিতিশীল করে যতক্ষণ না ডিএনএ ক্ষতি বা অন্যান্য প্রতিলিপি সমস্যাগুলি ঠিক করা যায়। দীর্ঘস্থায়ী প্রতিলিপি কাঁটাচামচ স্টলিং আরও ডিএনএ ক্ষতির কারণ হতে পারে। যদি প্রতিলিপি কাঁটাচামচ সৃষ্টিকারী সমস্যাগুলি সমাধান করা হয় তবে স্টলিং সিগন্যালগুলি নিষ্ক্রিয় করা হয়। ইউক্যারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপির সমাপ্তি সমাপ্তির জন্য ক্রোমোজোমগুলি বৃত্তাকার বা রৈখিক কিনা তার উপর নির্ভর করে বিভিন্ন প্রক্রিয়া প্রয়োজন। রৈখিক অণুগুলির বিপরীতে, বৃত্তাকার ক্রোমোজোমগুলি পুরো অণুটির প্রতিলিপি তৈরি করতে সক্ষম। তবে, দুটি ডিএনএ অণু একসঙ্গে সংযুক্ত থাকবে। এই সমস্যাটি টাইপ II টোপোআইসোমরেজ দ্বারা দুটি ডিএনএ অণুর ক্ষয়করণ দ্বারা পরিচালিত হয়। টাইপ II টোপোআইসোমরেজগুলি রৈখিক স্ট্র্যান্ডগুলি পৃথক করতেও ব্যবহৃত হয় কারণ সেগুলি কোষের মধ্যে একটি নিউক্লিওসোমে জটিলভাবে ভাঁজ করা হয়। পূর্বে উল্লিখিত হিসাবে, রৈখিক ক্রোমোজোমগুলি আরেকটি সমস্যার মুখোমুখি হয় যা বৃত্তাকার ডিএনএ প্রতিলিপিতে দেখা যায় না। ডি. এন. এ সংশ্লেষণের সূচনার জন্য একটি আর. এন. এ প্রাইমারের প্রয়োজন হওয়ার কারণে, পিছিয়ে পড়া স্ট্র্যান্ডটি পুরো ক্রোমোজোমের প্রতিলিপিতে অসুবিধাজনক। যদিও শীর্ষস্থানীয় স্ট্র্যান্ডটি প্রতিলিপি ডিএনএ স্ট্র্যান্ডের 5 'টার্মিনাস প্রসারিত করতে একক আরএনএ প্রাইমার ব্যবহার করতে পারে, একাধিক আরএনএ প্রাইমার স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণের জন্য দায়ী, যা ওকাজাকি টুকরো তৈরি করে। ডিএনএ পলিমারেজ শুধুমাত্র ডিএনএ স্ট্র্যান্ডের 3 'প্রান্তে যোগ করতে সক্ষম হওয়ার কারণে এটি একটি সমস্যার দিকে পরিচালিত করে। মূল স্ট্র্যান্ড বরাবর ডিএনএ পলিমারেজের 3 '-5' ক্রিয়াটি যখন ওকাজাকি টুকরোগুলি মেরামত করা হয় তখন মূল স্ট্র্যান্ডের 3 'প্রান্তে একটি ছোট একক-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ (এসএসডিএনএ) অঞ্চল ছেড়ে যায়। যেহেতু মূল ক্রোমোজোমের বিপরীত প্রান্তে প্রতিলিপি তৈরি হয়, তাই প্রতিটি স্ট্র্যান্ড এক প্রান্তে একটি পিছিয়ে পড়া স্ট্র্যান্ড। সময়ের সাথে সাথে এর ফলে উভয় কন্যা ক্রোমোজোমের ক্রমবর্ধমান সংক্ষিপ্ততা ঘটবে। এটি শেষ প্রতিলিপি সমস্যা হিসাবে পরিচিত। শেষ প্রতিলিপি সমস্যাটি ইউক্যারিওটিক কোষে টেলোমিয়ার অঞ্চল এবং টেলোমেরেজ দ্বারা পরিচালিত হয়। টেলোমেরেস পিতামাতার ক্রোমোজোমের 3 'প্রান্তটি কন্যা স্ট্র্যান্ডের 5' প্রান্তের বাইরে প্রসারিত করে। এই একক-আটকে থাকা ডিএনএ কাঠামো টেলোমেরেজ নিয়োগকারী প্রতিলিপির উৎস হিসাবে কাজ করতে পারে। টেলোমেরেজ একটি বিশেষায়িত ডিএনএ পলিমেরেজ যা একাধিক প্রোটিন সাবইউনিট এবং একটি আরএনএ উপাদান নিয়ে গঠিত। টেলোমেরেজের আর. এন. এ উপাদানটি টেমপ্লেট ডি. এন. এ-র একক আটকে থাকা 3 'প্রান্তে অ্যানিল করে এবং টেলোমেরিক ক্রমের 1.5 কপি ধারণ করে। টেলোমেরেজে একটি প্রোটিন সাবইউনিট থাকে যা টেলোমেরেজ রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেস বা টিইআরটি নামে একটি বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেস। টি. ই. আর. টি টেমপ্লেট টেলোমেরেজ আর. এন. এ-র শেষ অবধি ডি. এন. এ সংশ্লেষিত করে এবং তারপর বিচ্ছিন্ন হয়। পিতামাতার ডিএনএ অণুর 3 'প্রান্তের সম্প্রসারণের মাধ্যমে এই প্রক্রিয়াটি যতবার প্রয়োজন ততবার পুনরাবৃত্তি করা যেতে পারে। এই 3 'সংযোজন স্ট্র্যান্ড ডিএনএ সংশ্লেষণ পিছিয়ে রেখে কন্যা স্ট্র্যান্ডের 5' প্রান্তের সম্প্রসারণের জন্য একটি টেমপ্লেট সরবরাহ করে। টেলোমেরেজ ক্রিয়াকলাপ নিয়ন্ত্রণ টেলোমেরে-বাইন্ডিং প্রোটিন দ্বারা পরিচালিত হয়। প্রতিলিপি কাঁটাচামচ বাধা প্রোক্যারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপি দ্বিমুখী; একটি প্রতিলিপি উৎপত্তির মধ্যে, প্রতিলিপি উৎপত্তির প্রতিটি প্রান্তে প্রতিলিপি জটিল তৈরি করা হয় এবং প্রতিলিপিগুলি প্রাথমিক সূচনা বিন্দু থেকে একে অপরের থেকে দূরে সরে যায়। প্রোক্যারিওটসে, দ্বিমুখী প্রতিলিপি বৃত্তাকার ক্রোমোজোমের একটি প্রতিলিপি উৎসে শুরু হয় এবং উৎপত্তির প্রাথমিক শুরু থেকে বিপরীত স্থানে শেষ হয়। এই সমাপ্তি অঞ্চলগুলিতে ডিএনএ সিকোয়েন্স রয়েছে যা টের সাইট হিসাবে পরিচিত। এই টার্ সাইটগুলি তাস প্রোটিন দ্বারা আবদ্ধ। টার-টুস কমপ্লেক্স হেলিকেজ ক্রিয়াকলাপ বন্ধ করতে সক্ষম, প্রতিলিপি শেষ করে। ইউক্যারিওটিক কোষে, প্রতিলিপির সমাপ্তি সাধারণত দুটি সক্রিয় প্রতিলিপি উৎসের মধ্যে দুটি প্রতিলিপি কাঁটার সংঘর্ষের মাধ্যমে ঘটে। সংঘর্ষের অবস্থান মূল গোলাগুলির সময়ের উপর নির্ভর করে। এইভাবে, যদি একটি প্রতিলিপি কাঁটাচামচ একটি নির্দিষ্ট স্থানে আটকে যায় বা ধসে পড়ে, তবে বিপরীত দিকে ভ্রমণকারী একটি প্রতিলিপি অঞ্চলটির অনুলিপি সম্পূর্ণ করলে সাইটটির প্রতিলিপি উদ্ধার করা যেতে পারে। জিনোম জুড়ে বিভিন্ন স্থানে আরএফবি প্রোটিন দ্বারা আবদ্ধ প্রোগ্রামযুক্ত প্রতিলিপি কাঁটাচামচ বাধা (আরএফবি) রয়েছে, যা প্রতিলিপির অগ্রগতিকে থামিয়ে প্রতিলিপি কাঁটাচামচ বন্ধ করতে বা থামাতে সক্ষম। প্রতিলিপি কারখানাগুলি দেখা গেছে যে কোষের নিউক্লিয়াসে প্রতিলিপি স্থানীয়ভাবে ঘটে। স্থবির ডি. এন. এ বরাবর প্রতিলিপি কাঁটাচামচগুলি সরানোর ঐতিহ্যগত দৃষ্টিভঙ্গির বিপরীতে, প্রতিলিপি কারখানাগুলির একটি ধারণা আবির্ভূত হয়েছিল, যার অর্থ প্রতিলিপি কাঁটাচামচগুলি কিছু স্থির 'কারখানা' অঞ্চলের দিকে কেন্দ্রীভূত হয় যার মধ্য দিয়ে টেমপ্লেট ডি. এন. এ স্ট্র্যান্ডগুলি পরিবাহক বেল্টের মতো যায়। কোষ চক্র নিয়ন্ত্রণ ডিএনএ প্রতিলিপি একটি শক্তভাবে অর্কেস্ট্রেটেড প্রক্রিয়া যা কোষ চক্রের প্রেক্ষাপটে নিয়ন্ত্রিত হয়। কোষ চক্রের মাধ্যমে অগ্রগতি এবং ফলস্বরূপ ডিএনএ প্রতিলিপি প্রাক-প্রতিলিপি জটিল (প্রাক-আরসি) গঠন এবং সক্রিয়করণ দ্বারা কঠোরভাবে নিয়ন্ত্রিত হয় যা সাইক্লিন-নির্ভর কাইনেস (সিডিকে, সিডিকে) সক্রিয়করণ এবং নিষ্ক্রিয়করণের মাধ্যমে অর্জন করা হয়। বিশেষত এটি সাইক্লিন এবং সাইক্লিন নির্ভর কাইনেসের মিথস্ক্রিয়া যা জি1 থেকে এস-পর্যায়ে রূপান্তরের জন্য দায়ী। কোষচক্রের জি1 পর্যায়ে সিডিকে ক্রিয়াকলাপের মাত্রা কম থাকে। সিডিকে ক্রিয়াকলাপের এই নিম্ন স্তরটি নতুন প্রাক-আরসি কমপ্লেক্স গঠনের অনুমতি দেয় তবে নবগঠিত প্রাক-আরসি দ্বারা শুরু করা ডিএনএ প্রতিলিপির জন্য যথেষ্ট নয়। কোষচক্রের অবশিষ্ট পর্যায়ে সি. ডি. কে ক্রিয়াকলাপের মাত্রা বেশি থাকে। এই উচ্চ স্তরের সি. ডি. কে ক্রিয়াকলাপ ডি. এন. এ প্রতিলিপি শুরু করার পাশাপাশি নতুন প্রাক-আর. সি জটিল গঠনে বাধা দেওয়ার জন্য দায়ী। একবার ডি. এন. এ প্রতিলিপি তৈরি শুরু হয়ে গেলে প্রাক-আর. সি কমপ্লেক্সটি ভেঙে ফেলা হয়। কোষচক্রের এস পর্যায়, জি2 এবং এম পর্যায়ে সিডিকে মাত্রা বেশি থাকার কারণে কোনও নতুন প্রাক-আরসি কমপ্লেক্স তৈরি করা যায় না। এই সমস্ত কিছু নিশ্চিত করতে সাহায্য করে যে কোষ বিভাজন সম্পূর্ণ না হওয়া পর্যন্ত কোনও দীক্ষা ঘটতে পারে না। সাইক্লিন নির্ভর কাইনেস ছাড়াও সিডিটি1-এর ডাউনরেগুলেশনের মাধ্যমে একটি নতুন রাউন্ডের প্রতিলিপি প্রতিরোধ করা যায় বলে মনে করা হয়। এটি সিডিটি1-এর অবক্ষয়ের পাশাপাশি জেমিনিন নামে পরিচিত একটি প্রোটিনের প্রতিরোধমূলক ক্রিয়ার মাধ্যমে অর্জন করা হয়। জেমিনিন সি. ডি. টি1-এর সাথে শক্তভাবে আবদ্ধ হয় এবং পুনরায় প্রতিলিপির প্রধান প্রতিরোধক বলে মনে করা হয়। জেমিনিন প্রথম এস-পর্যায়ে আবির্ভূত হয় এবং মেটাফেজ-অ্যানাফেজ রূপান্তরের সময় অবনমিত হয়, সম্ভবত অ্যানাফেজ প্রোমোটিং কমপ্লেক্স (এপিসি) দ্বারা সর্বব্যাপীকরণের মাধ্যমে। কোষ চক্রের পুরো সময় জুড়ে বিভিন্ন কোষ চক্র চেকপয়েন্ট উপস্থিত থাকে যা নির্ধারণ করে যে একটি কোষ সম্পূর্ণরূপে বিভাজনের মাধ্যমে অগ্রসর হবে কিনা। গুরুত্বপূর্ণভাবে প্রতিলিপিতে জি1, বা সীমাবদ্ধতা, চেকপয়েন্ট নির্ধারণ করে যে প্রতিলিপির সূচনা শুরু হবে কিনা বা কোষটি জি0 নামে পরিচিত বিশ্রামের পর্যায়ে স্থাপন করা হবে কিনা। কোষ চক্রের জি0 পর্যায়ে কোষগুলিকে প্রতিলিপির একটি রাউন্ড শুরু করতে বাধা দেওয়া হয় কারণ মিনিক্রোমোজোম রক্ষণাবেক্ষণ প্রোটিনগুলি প্রকাশ করা হয় না। এস-পর্যায়ে রূপান্তর নির্দেশ করে যে প্রতিলিপি শুরু হয়েছে। প্রতিলিপি চেকপয়েন্ট প্রোটিন কোষ বিভাজনের সময় জিনগত তথ্য সংরক্ষণের জন্য, ডিএনএ প্রতিলিপি অবশ্যই উচ্চ বিশ্বস্ততার সাথে সম্পন্ন করতে হবে। এই কাজটি অর্জনের জন্য, ইউক্যারিওটিক কোষগুলিতে প্রতিলিপি প্রক্রিয়ার নির্দিষ্ট পয়েন্টের সময় প্রোটিন থাকে যা ডিএনএ প্রতিলিপির সময় কোনও ত্রুটি সনাক্ত করতে সক্ষম হয় এবং জিনোমিক অখণ্ডতা বজায় রাখতে সক্ষম হয়। এই চেকপয়েন্ট প্রোটিনগুলি ডিএনএ মেরামতের জন্য সময় দেওয়ার জন্য কোষ চক্রকে মাইটোসিসে প্রবেশ করা থেকে বিরত রাখতে সক্ষম। চেকপয়েন্ট প্রোটিনগুলি কিছু ডিএনএ মেরামতের পথেও জড়িত থাকে, যখন তারা আরও ক্ষতি রোধ করতে প্রতিলিপি কাঁটার কাঠামোকে স্থিতিশীল করে। এই চেকপয়েন্ট প্রোটিনগুলি বংশধরদের মধ্যে মিউটেশন বা অন্যান্য ক্রোমোজোমাল বিচ্যুতি এড়ানোর জন্য অপরিহার্য। ইউক্যারিওটিক চেকপয়েন্ট প্রোটিনগুলি ভালভাবে সংরক্ষিত এবং এতে দুটি ফসফ্যাটিডিলিনোসিটোল 3-কিনেজ-সম্পর্কিত কাইনেস (পি. আই. কে. কে), এ. টি. আর এবং এ. টি. এম জড়িত থাকে। এটিআর এবং এটিএম উভয়ই একটি লক্ষ্য ফসফোরিলেশন ক্রম, এসকিউ/টিকু মোটিফ ভাগ করে নেয়, তবে কোষে তাদের পৃথক ভূমিকা আলাদা। ডিএনএ ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড বিরতির প্রতিক্রিয়ায় কোষ চক্রকে আটকাতে এটিআর জড়িত। এটিআর-এর একটি বাধ্যতামূলক চেকপয়েন্ট অংশীদার, এটিআর-ইন্টারেক্টিং-প্রোটিন (এটিআরআইপি) রয়েছে এবং এই দুটি প্রোটিন একসাথে একক-আটকে থাকা ডিএনএর প্রসারিত অংশে প্রতিক্রিয়াশীল যা প্রতিলিপি প্রোটিন এ (আরপিএ) দ্বারা আবৃত। একক-আটকে থাকা ডি. এন. এ গঠন ঘন ঘন ঘটে, প্রায়শই প্রতিলিপি চাপের সময়। এ. টি. আর-এ. টি. আর. আই. পি জিনোমের অখণ্ডতা বজায় রাখতে কোষ চক্রকে আটকাতে সক্ষম। আরপিএ এবং ক্ল্যাসপিনের মতো এস পর্যায়ে ক্রোমাটিনে এটিআর পাওয়া যায়। প্রতিলিপির ক্ষতির নিম্নমুখী চেকপয়েন্ট পথগুলি শুরু করার জন্য একক-আটকে থাকা ডিএনএ ট্র্যাক্টের প্রজন্ম গুরুত্বপূর্ণ। একবার সিঙ্গল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ যথেষ্ট লম্বা হয়ে গেলে, আরপিএ-র সাথে লেপযুক্ত সিঙ্গল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ এটিআর-এটিআরআইপি নিয়োগ করতে সক্ষম হয়। সম্পূর্ণরূপে সক্রিয় হওয়ার জন্য, এটিআর কাইনেজ সেন্সর প্রোটিনের উপর নির্ভর করে যা অনুধাবন করে যে চেকপয়েন্ট প্রোটিনগুলি ডিএনএ প্রতিলিপি চাপের একটি বৈধ স্থানে অবস্থিত কিনা। আরএডি9-এইচইউএস1-রেড1 (9-1-1) হেটেরোট্রিমেরিক ক্ল্যাম্প এবং এর ক্ল্যাম্প লোডার আরএফসিআর্যাড17 গ্যাপড বা নিকড ডিএনএ সনাক্ত করতে সক্ষম। আর. এফ. সি. আর. এ. ডি17 ক্ল্যাম্প লোডার ক্ষতিগ্রস্ত ডি. এন. এ-তে <আই. ডি1> লোড করে। ডি. এন. এ-তে 9-1-1-এর উপস্থিতি এটিআর-এ. টি. আর. আই. পি এবং টি. ও. পি. বি. পি1 এবং এম. আর. সি1/ক্ল্যাসপিনের মতো চেকপয়েন্ট মধ্যস্থতাকারী প্রোটিনের একটি গোষ্ঠীর মধ্যে মিথস্ক্রিয়া সহজতর করার জন্য যথেষ্ট। টিওপিবিপি1 9-1-1-এর ফসফরিলেটেড র্যাড9 উপাদানের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে এবং নিয়োগ করে এবং এটিআর-এটিআরআইপি-কে আবদ্ধ করে, যা সিএইচকে1-কে ফসফরিলেট করে। এ. টি. আর-এ. টি. আর. আই. পি-এর সম্পূর্ণ সক্রিয়করণের জন্যও এম. আর. সি. 1/ক্ল্যাস্পিন প্রয়োজন যা প্রধান ডাউনস্ট্রিম চেকপয়েন্ট প্রভাবক কাইনেজ সিএইচকে1-কে ফসফোরিলেট করে। ক্ল্যাস্পিন প্রতিলিপির একটি উপাদান এবং এতে সিএইচকে1-এর সাথে ডকিংয়ের জন্য একটি ডোমেন রয়েছে, যা ডিএনএ প্রতিলিপির সময় ক্ল্যাস্পিনের একটি নির্দিষ্ট কার্যকারিতা প্রকাশ করেঃ প্রতিলিপিতে চেকপয়েন্ট সংকেতের প্রচার। কোষ চক্রকে আটকাতে এবং অসম্পূর্ণ ডিএনএ প্রতিলিপি বা ডিএনএ ক্ষতির সাথে কোষগুলিকে মাইটোসিসে প্রবেশ করতে বাধা দেওয়ার জন্য সিএইচকে1 সংকেত গুরুত্বপূর্ণ। এটিআর-সিএইচকে1 চেকপয়েন্টের কার্যকারিতার জন্য এবং কোষ চক্রকে আটকাতে এবং ডিএনএ মেরামত প্রক্রিয়া সম্পন্ন করার জন্য পর্যাপ্ত সময় দেওয়ার জন্য সিএইচকে1-নির্ভর সিডিকে প্রতিরোধ গুরুত্বপূর্ণ, যা ফলস্বরূপ ক্ষতিগ্রস্ত ডিএনএর উত্তরাধিকারকে বাধা দেয়। উপরন্তু, এস পর্যায়ে উৎস ফায়ারিং প্রতিরোধে সিএইচকে1-নির্ভর সিডিকে প্রতিরোধ একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। এই প্রক্রিয়াটি অব্যাহত ডিএনএ সংশ্লেষণকে বাধা দেয় এবং প্রতিলিপির চাপ এবং সম্ভাব্য জিনোটক্সিক অবস্থার উপস্থিতিতে জিনোমের সুরক্ষার জন্য প্রয়োজনীয়। এইভাবে, এটিআর-সিএইচকে1 ক্রিয়াকলাপ জিনোম জুড়ে প্রতিলিপির সূচনাকে বাধা দিয়ে একক প্রতিলিপির উৎসের স্তরে সম্ভাব্য প্রতিলিপির সমস্যাগুলিকে আরও প্রতিরোধ করে, যতক্ষণ না কোষ-চক্র গ্রেপ্তার বজায় রাখার সংকেত ক্যাসকেড বন্ধ করা হয়। নিউক্লিওসোমের মাধ্যমে প্রতিলিপি তৈরি ইউক্যারিওটিক ডিএনএকে নিউক্লিয়াসের সীমাবদ্ধ স্থানের মধ্যে ফিট করার জন্য শক্তভাবে সংকুচিত করতে হবে। ক্রোমোজোমগুলি হিস্টোন প্রোটিনের একটি অক্টেমারের চারপাশে 147টি নিউক্লিওটাইড মোড়িয়ে একটি নিউক্লিওসোম গঠন করে প্যাকেজ করা হয়। নিউক্লিওসোম অক্টেমারে প্রতিটি হিস্টোন এইচ2এ, এইচ2বি, এইচ3 এবং এইচ4-এর দুটি করে অনুলিপি থাকে। ডি. এন. এ-র সঙ্গে হিস্টোন প্রোটিনের নিবিড় সংযোগের কারণে, ইউক্যারিওটিক কোষগুলিতে প্রোটিন থাকে যা প্রতিলিপি কাঁটার আগে হিস্টোনগুলি পুনর্নির্মাণের জন্য ডিজাইন করা হয়, যাতে প্রতিলিপিটির মসৃণ অগ্রগতির অনুমতি দেওয়া যায়। নিউক্লিওসোম গঠন পুনরায় প্রতিষ্ঠার জন্য প্রতিলিপি কাঁটার পিছনে হিস্টোনগুলিকে পুনরায় একত্রিত করার সাথে জড়িত প্রোটিনও রয়েছে। বেশ কয়েকটি হিস্টোন চ্যাপেরোন রয়েছে যা প্রতিলিপির পরে নিউক্লিওসোম সমাবেশে জড়িত বলে জানা যায়। এফ. এ. সি. টি কমপ্লেক্সটি ডি. এন. এ পলিমারেজ α-প্রাইম কমপ্লেক্সের সাথে মিথস্ক্রিয়া করতে দেখা গেছে এবং এফ. এ. সি. টি কমপ্লেক্সের সাবইউনিটগুলি প্রতিলিপির কারণগুলির সাথে জিনগতভাবে মিথস্ক্রিয়া করে। এফ. এ. সি. টি কমপ্লেক্স হল একটি হেটেরোডাইমার যা এ. টি. পি-কে হাইড্রোলাইজ করে না, তবে নিউক্লিওসোমে হিস্টোনগুলির "শিথিলকরণ" সহজতর করতে সক্ষম, তবে এফ. এ. সি. টি কমপ্লেক্স কীভাবে ডি. এন. এ অপসারণের জন্য হিস্টোনগুলির শক্ত সংযোগকে উপশম করতে সক্ষম হয় তার উত্তর এখনও পাওয়া যায়নি। আরেকটি হিস্টোন চ্যাপেরোন যা প্রতিলিপির সাথে যুক্ত হয় তা হল এ. এস. এফ1, যা হিস্টোন ডাইমার এইচ3-এইচ4-এর উপর নির্ভরশীল এম. সি. এম কমপ্লেক্সের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে। এ. এস. এফ. 1 নতুন সংশ্লেষিত এইচ3-এইচ4 ডাইমারকে প্রতিলিপি কাঁটার পিছনে জমা হওয়ার কারণগুলিতে পাস করতে সক্ষম এবং এই ক্রিয়াকলাপ এইচ3-এইচ4 হিস্টোন ডাইমারগুলিকে প্রতিলিপির ঠিক পরে হিস্টোন জমা হওয়ার জায়গায় উপলব্ধ করে। এ. এস. এফ1 (এবং এর অংশীদার আর. টি. টি. 109)-কে এস-পর্যায়ের সময় প্রতিলিপি করা জিন থেকে জিন অভিব্যক্তি প্রতিরোধে জড়িত করা হয়েছে। হেটেরোট্রিমেরিক চ্যাপেরোন ক্রোমাটিন অ্যাসেম্বলি ফ্যাক্টর 1 (সিএএফ-1) হল একটি ক্রোমাটিন গঠনের প্রোটিন যা ক্রোমাটিন গঠনের জন্য উভয় নতুন প্রতিলিপি করা ডিএনএ স্ট্র্যান্ডে হিস্টোন জমা করার সাথে জড়িত। সিএএফ-1-এ একটি পিসিএনএ-বাইন্ডিং মোটিফ রয়েছে, যাকে পিআইপি-বক্স বলা হয়, যা সিএএফ-1-কে পিসিএনএ-র মাধ্যমে প্রতিলিপির সাথে যুক্ত করতে দেয় এবং নতুন সংশ্লেষিত ডিএনএ-তে হিস্টোন এইচ3-এইচ4 ডাইমার জমা করতে সক্ষম। আরটিটি106 চ্যাপেরোনও এই প্রক্রিয়ার সঙ্গে জড়িত এবং ক্রোমাটিন গঠনের সময় সিএএফ-1 এবং এইচ3-এইচ4 ডাইমারের সঙ্গে যুক্ত। এই প্রক্রিয়াগুলি নতুন সংশ্লেষিত হিস্টোনগুলিকে ডি. এন. এ-তে লোড করে। হিস্টোন এইচ3-এইচ4 জমা হওয়ার পর, হিস্টোন এইচ2এ-এইচ2বি-র সংযোগে নিউক্লিওসোম তৈরি হয়। এই প্রক্রিয়াটি ফ্যাক্ট কমপ্লেক্সের মাধ্যমে ঘটে বলে মনে করা হয়, যেহেতু এটি ইতিমধ্যে প্রতিলিপির সাথে যুক্ত এবং মুক্ত এইচ2এ-এইচ2বি বাঁধতে সক্ষম, অথবা অন্য এইচ2এ-এইচ2বি চ্যাপেরোন, ন্যাপ1-এর সম্ভাবনা রয়েছে। ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি অধ্যয়নগুলি দেখায় যে এটি খুব দ্রুত ঘটে, কারণ নিউক্লিওসোমগুলি প্রতিলিপি কাঁটার পরে মাত্র কয়েকশ বেস জোড়া গঠন করতে দেখা যায়। অতএব, নতুন নিউক্লিওসোম গঠনের পুরো প্রক্রিয়াটি প্রতিলিপির সাথে হিস্টোন চ্যাপেরোনগুলির সংযোগের কারণে প্রতিলিপির ঠিক পরে ঘটে। প্রোক্যারিওটিক এবং ইউক্যারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপির মধ্যে তুলনা যখন প্রোক্যারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপির সাথে তুলনা করা হয়, তখন ইউক্যারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপির সমাপ্তি আরও জটিল হয় এবং এটি সম্পন্ন করার জন্য প্রতিলিপি এবং প্রতিলিপি প্রোটিনের একাধিক উৎস জড়িত থাকে। প্রোক্যারিওটিক ডি. এন. এ একটি বৃত্তাকার আকারে সাজানো থাকে এবং প্রতিলিপি শুরু হওয়ার সময় এর শুধুমাত্র একটি প্রতিলিপি উৎস থাকে। বিপরীতে, ইউক্যারিওটিক ডিএনএ রৈখিক। যখন প্রতিলিপি করা হয়, তখন প্রতিলিপির প্রায় এক হাজার উৎস রয়েছে। ইউক্যারিওটিক ডিএনএ দ্বিমুখী। এখানে দ্বিমুখী শব্দের অর্থ ভিন্ন। ইউক্যারিওটিক রৈখিক ডি. এন. এ-র অনেকগুলি উৎস রয়েছে (যাকে ও বলা হয়) এবং টার্মিনি (যাকে টি বলা হয়)। "ও"-এর ডানদিকে "টি" উপস্থিত রয়েছে। একটি "ও" এবং একটি "টি" একসঙ্গে একটি প্রতিলিপি তৈরি করে। প্রাক-সূচনা জটিল গঠনের পরে, যখন একটি প্রতিলিপি প্রসারিত হতে শুরু করে, তখন দ্বিতীয় প্রতিলিপিতে সূচনা শুরু হয়। এখন, যদি প্রথম প্রতিলিপিটি ঘড়ির কাঁটার দিকে চলে যায়, তবে দ্বিতীয় প্রতিলিপিটি ঘড়ির কাঁটার বিপরীত দিকে চলে যায়, যতক্ষণ না প্রথম প্রতিলিপিটির "টি" পৌঁছে যায়। "টি"-তে, উভয় প্রতিলিপি একত্রিত হয়ে প্রতিলিপির প্রক্রিয়াটি সম্পূর্ণ করে। এদিকে, দ্বিতীয় প্রতিলিপিটি তৃতীয় প্রতিলিপিটির সাথে মিলিত হওয়ার জন্য সামনের দিকেও এগিয়ে চলেছে। দুটি প্রতিলিপির ঘড়ির কাঁটার দিকে এবং ঘড়ির কাঁটার বিপরীত দিকে এই গতিকে দ্বিমুখী প্রতিলিপি বলা হয়। ইউক্যারিওটিক ডি. এন. এ প্রতিলিপির জন্য সমস্ত ডি. এন. এ পলিমারেজ এবং সংশ্লিষ্ট প্রোটিনের সুনির্দিষ্ট সমন্বয় প্রয়োজন যাতে প্রতিবার কোনও কোষ বিভাজনের সময় পুরো জিনোমের প্রতিলিপি তৈরি করা যায়। এই প্রক্রিয়াটি প্রতিলিপির উৎপত্তিস্থলে প্রোটিন সমাবেশের একটি সিরিজের মাধ্যমে অর্জন করা হয়, প্রধানত ডিএনএ-র সাথে এমসিএম হেলিকেজের সংযোগের উপর ডিএনএ প্রতিলিপির নিয়ন্ত্রণকে কেন্দ্র করে। প্রতিলিপির এই উৎসগুলি প্রোটিন কমপ্লেক্সের সংখ্যা নির্দেশ করে যা প্রতিলিপি শুরু করার জন্য গঠিত হবে। প্রোক্যারিওটিক ডিএনএ রেপ্লিকেশন রেগুলেশন ডিএনএ-র সাথে ডিএনএএ ইনিশিয়েটর প্রোটিনের বাঁধনের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করে, একটি কোষ চক্রের সময় একাধিকবার প্রতিলিপির সূচনা ঘটে। প্রোক্যারিওটিক এবং ইউক্যারিওটিক ডিএনএ উভয়ই হেলিকেজ লোড করার জন্য এটিপি বাইন্ডিং এবং হাইড্রোলাইসিস ব্যবহার করে এবং উভয় ক্ষেত্রেই হেলিকেজ নিষ্ক্রিয় আকারে লোড করা হয়। যাইহোক, ইউক্যারিওটিক হেলিকেসগুলি ডাবল হেক্সামার যা ডাবল স্ট্রেন্ডেড ডিএনএতে লোড করা হয় যেখানে প্রোকারিওটিক হেলিকেসগুলি একক হেক্সামার একক স্ট্রেন্ডেড ডিএনএতে লোড করা হয়। ক্রোমোজোমের পৃথকীকরণ হল প্রোক্যারিওটিক এবং ইউক্যারিওটিক কোষের মধ্যে আরেকটি পার্থক্য। ব্যাকটেরিয়ার মতো দ্রুত বিভক্ত কোষগুলি প্রায়শই ক্রোমোজোমগুলি পৃথক করতে শুরু করে যা এখনও প্রতিলিপির প্রক্রিয়ায় রয়েছে। ইউক্যারিওটিক কোষে সমস্ত ক্রোমোজোমের প্রতিলিপি সম্পূর্ণ না হওয়া পর্যন্ত কন্যা কোষে ক্রোমোজোম পৃথকীকরণ শুরু করা হয় না। এই পার্থক্যগুলি সত্ত্বেও, প্রতিলিপির অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়া প্রোক্যারিওটিক এবং ইউক্যারিওটিক ডিএনএ উভয়ের জন্যই একই রকম। ইউক্যারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপি প্রোটিন তালিকা ইউক্যারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপির সাথে জড়িত প্রধান প্রোটিনের তালিকাঃ আরও দেখুন ডিএনএ প্রতিলিপি প্রোকারিওটিক ডিএনএ প্রতিলিপি প্রক্রিয়া রেফারেন্স ডিএনএ প্রতিলিপি