Miles and Misra method
মাইলস এবং মিশ্র পদ্ধতি (বা পৃষ্ঠের কার্যকর গণনা) হল অণুজীববিজ্ঞানে ব্যবহৃত একটি কৌশল যা ব্যাকটেরিয়াল সাসপেনশন বা হোমোজিনেটে কলোনি গঠনকারী ইউনিটের সংখ্যা নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়। 1938 সালে মাইলস, মিশ্র এবং আরউইন এই কৌশলটি প্রথম বর্ণনা করেছিলেন, যারা সেই সময় এল. এস. এইচ. টি. এম-এ কাজ করছিলেন। মাইলস এবং মিশ্র পদ্ধতিটি সুনির্দিষ্ট বলে প্রমাণিত হয়েছে। উপাদান একটি ক্রমাঙ্কিত ড্রপিং পিপেট, বা স্বয়ংক্রিয় পিপেট, যা 20মি. লি ড্রপ সরবরাহ করে। পেট্রি খাবারে পুষ্টি আগর বা অন্যান্য উপযুক্ত মাধ্যম রয়েছে। ফসফেট বাফার্ড স্যালাইন (পিবিএস) বা অন্যান্য উপযুক্ত পাতলা। ব্যাকটেরিয়াল সাসপেনশন বা হোমোজিনেট। পদ্ধতি ইনোকুলাম/সাসপেনশনটি 9x ডিলুয়েন্টের সাথে 1x সাসপেনশন যোগ করে ক্রমিকভাবে পাতলা করা হয়। যখন ব্যাকটেরিয়ার পরিমাণ অজানা থাকে, তখন কমপক্ষে 10−8 পর্যন্ত পাতলা করা উচিত। প্রতিটি ডাইল্যুশন সিরিজের জন্য তিনটি প্লেটের প্রয়োজন হয়, পরিসংখ্যানগত কারণে কমপক্ষে গড়ে 3টি গণনা প্রয়োজন হয়। প্লেটের পৃষ্ঠটি যথেষ্ট শুকনো হতে হবে যাতে 20মি. লি ড্রপ 15-20 মিনিটের মধ্যে শোষিত হতে পারে। প্লেটগুলি সমান সেক্টরে বিভক্ত (প্রতি প্লেটে 8 টি পর্যন্ত ব্যবহার করা সম্ভব)। এই ক্ষেত্রগুলিকে ডিলিউশন দিয়ে চিহ্নিত করা হয়। প্রতিটি সেক্টরে, 1 x 20 মাইক্রোল উপযুক্ত দুর্বলকরণ আগরের পৃষ্ঠে ফেলে দেওয়া হয় এবং ড্রপটি প্রাকৃতিকভাবে ছড়িয়ে যেতে দেওয়া হয়। পদ্ধতির মূল বর্ণনায় 2.5 সেন্টিমিটার উচ্চতা থেকে একটি ড্রপ 1.5-2.0 সেন্টিমিটার এলাকা জুড়ে ছড়িয়ে পড়ে। পিপেট দিয়ে আগরের পৃষ্ঠ স্পর্শ করা এড়ানো গুরুত্বপূর্ণ। প্লেটগুলি 18-24 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে (বা ব্যবহৃত জীব এবং আগর বিবেচনা করে উপযুক্ত ইনকিউবেশন পরিস্থিতি) বিপরীতমুখী এবং ইনকিউবেশনের আগে শুকানোর জন্য বেঞ্চে সোজা রেখে দেওয়া হয়। প্রতিটি ক্ষেত্র বৃদ্ধির জন্য পর্যবেক্ষণ করা হয়, উচ্চ ঘনত্ব হ্রাসের ক্ষেত্র বা বিপুল সংখ্যক ছোট/একীভূত উপনিবেশের উপর একটি সমৃদ্ধ বৃদ্ধি দেবে। উপনিবেশগুলি সেই সেক্টরে গণনা করা হয় যেখানে সর্বাধিক সংখ্যক পূর্ণ-আকারের বিচ্ছিন্ন উপনিবেশ দেখা যায় (সাধারণত 2-20 উপনিবেশগুলির মধ্যে থাকা সেক্টরগুলি গণনা করা হয়)। মূল অ্যালিকোট/নমুনা থেকে প্রতি মিলি কলনি গঠনকারী ইউনিটের (সিএফইউ) সংখ্যা গণনা করতে নিম্নলিখিত সমীকরণটি ব্যবহার করা হয়ঃ প্রতি মিলি সিএফইউ = একটি ডাইল্যুশন x 50 x ডাইল্যুশন ফ্যাক্টরের জন্য গড় সংখ্যক কলনি। সুবিধা অন্যান্য পদ্ধতির তুলনায় দ্রুত। কার্যকরী পৃষ্ঠে কম ব্যাকটেরিয়া দূষণ তৈরি করে। আরও দেখুন উপনিবেশ গঠনকারী একক রেফারেন্স সেল কালচার কৌশল মাইক্রোবায়োলজি কৌশল