Endospore staining
এন্ডোস্পোর স্টেনিং হল ব্যাকটেরিয়ার নমুনায় এন্ডোস্পোরের উপস্থিতি সনাক্ত করতে ব্যাকটেরিয়াবিজ্ঞানে ব্যবহৃত একটি কৌশল। ব্যাকটেরিয়ার মধ্যে, এন্ডোস্পোরগুলি চরম পরিস্থিতিতে বেঁচে থাকার জন্য ব্যবহৃত প্রতিরক্ষামূলক কাঠামো, যার মধ্যে উচ্চ তাপমাত্রা তাদের রাসায়নিকের বিরুদ্ধে অত্যন্ত প্রতিরোধী করে তোলে। এন্ডোস্পোরগুলিতে খুব কম বা কোনও এটিপি থাকে না যা নির্দেশ করে যে তারা কতটা সুপ্ত হতে পারে। এন্ডোস্পোরগুলিতে কেরাটিন দিয়ে তৈরি একটি শক্ত বাইরের আবরণ থাকে যা তাদের নিউক্লিক ডিএনএ এবং অন্যান্য অভিযোজন থেকে রক্ষা করে। এন্ডোস্পোরগুলি উদ্ভিজ্জ কোষে পুনরায় বংশবৃদ্ধি করতে সক্ষম, যা একটি প্রতিরক্ষামূলক প্রকৃতি প্রদান করে যা সাধারণ কৌশল যেমন সাধারণ দাগ এবং ছোলা দাগ ব্যবহার করে তাদের দাগ করা কঠিন করে তোলে। এন্ডোস্পোর স্টেনিংয়ের জন্য বিশেষ কৌশলগুলির মধ্যে রয়েছে শেফার-ফুলটন স্টেইন এবং মোয়েলার স্টেইন। 1876 সালে বিজ্ঞানী কোহন এবং কোচ প্রথম এন্ডোস্পোর নিয়ে গবেষণা করেন। দেখা গেছে যে মিথাইলিন নীল, সাফ্রানিন এবং কার্বল ফুচসিনের মতো সাধারণ দাগ ব্যবহার করে এন্ডোস্পোরগুলিকে দাগ দেওয়া যায় না। এই বিজ্ঞানীরা, আরও কয়েকজন সহ, আবিষ্কার করেন যে বীজকণাগুলি সুপ্ত এবং তাপ প্রতিরোধী। 1900-এর দশকের গোড়ার দিকে, গবেষকরা এই এন্ডোস্পোরগুলি থেকে রোগ এবং সংক্রমণের উন্নতির জন্য বিকল্প পদ্ধতি খুঁজে বের করার চেষ্টা করছিলেন। 1922 সালে ডর্নার এন্ডোস্পোর দাগ দেওয়ার জন্য একটি পদ্ধতি প্রকাশ করেন। তিনি একটি ডিফারেনশিয়াল স্টেনিং কৌশল খুঁজে পেয়েছেন যেখানে এন্ডোস্পোরগুলি সবুজ দেখায় এবং উদ্ভিজ্জ কোষগুলি গোলাপী লাল দেখায়। ডর্নার এই প্রক্রিয়ায় একটি পদক্ষেপ হিসাবে তাপকে ব্যবহার করেছিলেন, তবে এটি সময়সাপেক্ষ ছিল, তাই 1933 সালে শেফার এবং ফুলটন তাঁর পদ্ধতি পরিবর্তন করেছিলেন। শেফার এবং ফুলটন একটি বুনসেন বার্নার ব্যবহার করে গরম করার প্রক্রিয়াটিকে অনেক দ্রুত করে তুলেছিলেন। যদিও এই পদ্ধতিটি সবচেয়ে বেশি উপকারী ছিল না, তবে এটি ডর্নারের পদ্ধতির চেয়ে অনেক বেশি সুবিধাজনক ছিল। এই উন্নত পদ্ধতিটি একটি দ্রুত এবং সহজ পরীক্ষা প্রদান করে এবং স্পোরগুলিকে রঞ্জকের প্রতি আরও সংবেদনশীল হতে দেয়। আজ অবধি, ব্যাকটেরিয়া সনাক্ত করতে সাহায্য করার জন্য শেফার-ফুলটন দাগ এখনও সঞ্চালিত হয়। উদাহরণস্বরূপ, এন্ডোস্পোরগুলি শুকনো এবং হিমায়িত হওয়ার মতো একাধিক কঠিন পরিস্থিতিতে কয়েক দশক ধরে স্থায়ী হতে সক্ষম। এর কারণ হল এন্ডোস্পোরের অভ্যন্তরে ডিএনএ দীর্ঘ সময় ধরে বেঁচে থাকতে সক্ষম। বেশিরভাগ ব্যাকটেরিয়া তাদের উচ্চ প্রতিরোধের কারণে এন্ডোস্পোর গঠন করতে অক্ষম, তবে কিছু সাধারণ প্রজাতি হল ব্যাসিলাস (100 টিরও বেশি প্রজাতি) এবং ক্লস্ট্রিডিয়াম (160 টিরও বেশি প্রজাতি)। - ব্যাসিলাস অ্যানথ্রেস, যা অ্যানথ্রাক্স সৃষ্টি করে-ব্যাসিলাস সেরিয়াস-দুই ধরনের খাদ্য বিষক্রিয়ার কারণ হতে পারেঃ ইমিটিক এবং ডায়রিয়াল-ব্যাসিলাস সাবটিলিস-মাটিতে পাওয়া যায়-ক্লস্ট্রিডিয়াম টেটানি,-বীজকণিকা যা লক চোয়াল (টিটেনাস) এবং অনমনীয় পক্ষাঘাত সৃষ্টি করে। - ক্লস্ট্রিডিয়াম বোটুলিনাম-সঠিকভাবে টিনজাত করা হয়নি এমন খাবারে স্পোর পাওয়া যায়। ক্লস্ট্রিডিয়াম বোটুলিনাম কখনও কখনও বোটক্স হিসাবে বিক্রি হয় এবং স্নায়ু সংক্রমণ প্রতিরোধ করে। - ক্লস্ট্রিডিয়াম ডিফিসাইল-কোলনে প্রদাহ সৃষ্টি করে, প্রায়শই অন্যান্য অ্যান্টিবায়োটিক থেকে। লক্ষণগুলির মধ্যে রয়েছে ডায়রিয়া, পেটে ব্যথা এবং জ্বর। আকৃতি এবং অবস্থান যে ধরনের এন্ডোস্পোরগুলি চিহ্নিত করা যেতে পারে তার মধ্যে রয়েছে মুক্ত এন্ডোস্পোর, কেন্দ্রীয় এন্ডোস্পোর (কোষের মাঝখানে), সাবটার্মিনাল (কোষের শেষ এবং মাঝখানে) এবং টার্মিনাল (কোষের শেষ) এন্ডোস্পোর। টার্মিনাল বা সাব-টার্মিনালের সংমিশ্রণও থাকতে পারে। এন্ডোস্পোরগুলিকে কোষের তুলনায় গোলাকার বা উপবৃত্তাকার (ডিম্বাকৃতি) আকারের উপর ভিত্তি করে আলাদা করা যেতে পারে এবং তারা কোষকে স্ফীত দেখায় কি না। দাগ দেওয়ার প্রক্রিয়া শেফার-ফুলটন দাগ দেওয়ার পদ্ধতিতে, ব্যাকটেরিয়াকে বাষ্পীয় করে ম্যালাকাইট সবুজযুক্ত একটি প্রাথমিক দাগ বীজাণুর মধ্যে চাপিয়ে দেওয়া হয়। স্পোরগুলিকে দাগ দেওয়ার জন্য 15 মিনিট বা তার বেশি সময় ধরে স্লাইডে ম্যালাকাইট সবুজ রেখে দেওয়া যেতে পারে। স্পোরগুলির ঘনত্বের কারণে দাগ পড়তে দীর্ঘ সময় লাগে, তাই এই ডিফারেনশিয়াল দাগটি সম্পাদন করার সময় তাপ মর্ড্যান্ট হিসাবে কাজ করে। ম্যালাকাইট সবুজ জলে দ্রবণীয়, তাই উদ্ভিজ্জ কোষ এবং বীজকণিকার মাতৃ কোষগুলিকে পাতিত জল দিয়ে বিবর্ণ করা যেতে পারে এবং 0.00% সাফ্রানিন দিয়ে পাল্টা দাগ দেওয়া যেতে পারে। শেষ পর্যন্ত, একটি সঠিক স্মেয়ার একটি লাল বা গোলাপী রঙের কোষের মধ্যে একটি সবুজ বিন্দু হিসাবে এন্ডোস্পোরকে দেখাবে। মাইকোব্যাকটেরিয়াম একটি বাধা যা এই ধরনের দাগ দেওয়ার প্রক্রিয়ার মুখোমুখি হয় কারণ এটি কোনও এন্ডোস্পোর তৈরি না করলেও সবুজ দাগ দেবে। এটি তার মোমের কোষ প্রাচীরের কারণে যা বিবর্ণকরণ প্রক্রিয়ার পরেও ম্যালাকাইট সবুজ রঙ ধরে রাখে। এই বিশেষ ধরনের ব্যাকটেরিয়া সম্পর্কে আরও তথ্য পাওয়ার জন্য অ্যাসিড-ফাস্ট স্টেন নামে একটি ভিন্ন ধরনের দাগ করতে হবে। দাগ দেওয়ার পদ্ধতি এসেপটিক কৌশল ব্যবহার করে, পছন্দসই জীবের সাথে তাপ স্থির স্লাইড প্রস্তুত করুন এবং বাতাসে শুকিয়ে নিন। ফুটন্ত জলে স্নানের ব্যবস্থা করুন। এক টুকরো কাগজের তোয়ালে দিয়ে স্লাইডটি ঢেকে রাখুন এবং জলের স্নানের উপরে দাগযুক্ত র্যাকের উপর রাখুন। কাগজের তোয়ালেটি স্লাইডে ম্যালাকাইট গ্রিন (প্রাথমিক দাগ) দিয়ে ভরে দিন। স্লাইডটি 5 থেকে 7 মিনিটের জন্য বাষ্প করুন। সময় শেষ হওয়ার পরে, সাবধানে ফোর্সপস ব্যবহার করে জলের স্নান থেকে স্লাইডটি সরিয়ে ফেলুন। কাগজের তোয়ালে খুলে ফেলুন। স্লাইডটি শীতল হতে দিন, এবং তারপরে দাগযুক্ত র্যাকের উপর ফোর্সপস ব্যবহার করে, প্রবাহ পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত পাতিত জল দিয়ে আলতো করে ধুয়ে ফেলুন (ডিকলোরাইজার)। যে কোনও অতিরিক্ত জল ঢেলে দাগযুক্ত র্যাকের উপর স্লাইড রাখুন এবং এক মিনিটের জন্য সাফ্রানিন (পাল্টা দাগ) দিয়ে প্লাবিত করুন। যে কোনও অতিরিক্ত সাফ্রানিন পাতিত জল দিয়ে আলতো করে ধুয়ে ফেলুন এবং সাবধানে উভয় দিক শুকিয়ে ফেলুন। স্লাইড শুকিয়ে গেলে, তেল নিমজ্জন উদ্দেশ্যের (100X) অধীনে মাইক্রোস্কোপের নীচে স্লাইড দেখুন। রেফারেন্স স্টেনিং মাইক্রোবায়োলজি কৌশল ব্যাকটেরিয়োলজি মাইক্রোস্কোপি