MicroRNA sequencing
মাইক্রোআরএনএ সিকোয়েন্সিং (এমআইআরএনএ-এসইকিউ), এক ধরনের আরএনএ-এসইকিউ, হল মাইক্রোআরএনএ সিকোয়েন্স করার জন্য পরবর্তী প্রজন্মের সিকোয়েন্সিং বা ব্যাপকভাবে সমান্তরাল উচ্চ-থ্রুপুট ডিএনএ সিকোয়েন্সিংয়ের ব্যবহার, যাকে এমআইআরএনএও বলা হয়। এম. আই. আর. এন. এ-এস. ই. কিউ অন্যান্য ধরনের আর. এন. এ-এস. ই. কিউ থেকে আলাদা যে ইনপুট উপাদান প্রায়শই ছোট আর. এন. এ-র জন্য সমৃদ্ধ হয়। এম. আই. আর. এন. এ-এস. কিউ গবেষকদের টিস্যু-নির্দিষ্ট অভিব্যক্তি নিদর্শন, রোগের সম্পর্ক এবং এম. আই. আর. এন. এ-র আইসোফর্মগুলি পরীক্ষা করতে এবং পূর্বে বৈশিষ্ট্যহীন এম. আই. আর. এন. এ আবিষ্কার করার অনুমতি দেয়। অনিয়ন্ত্রিত এম. আই. আর. এন. এ ক্যান্সারের মতো রোগে একটি ভূমিকা পালন করে এমন প্রমাণ এম. আই. আর. এন. এ-সেককে সম্ভাব্যভাবে ভবিষ্যতে রোগ নির্ণয় এবং পূর্বাভাসের জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ হাতিয়ার হয়ে উঠেছে কারণ খরচ ক্রমাগত হ্রাস পাচ্ছে। অন্যান্য এম. আই. আর. এন. এ প্রোফাইলিং প্রযুক্তির মতো, এম. আই. আর. এন. এ-সেক-এর সুবিধা (ক্রম-স্বাধীনতা, কভারেজ) এবং অসুবিধা (উচ্চ খরচ, পরিকাঠামোর প্রয়োজনীয়তা, রান দৈর্ঘ্য এবং সম্ভাব্য নিদর্শন) উভয়ই রয়েছে। মাইক্রোআরএনএ (এমআইআরএনএ) হল ছোট রাইবোনিউক্লিক অ্যাসিডের একটি পরিবার, দৈর্ঘ্যে 21-25 নিউক্লিওটাইড, যা প্রতিলিপি অবক্ষয়, অনুবাদ প্রতিরোধ বা প্রতিলিপি পৃথক করার মাধ্যমে প্রোটিন অভিব্যক্তি সংশোধন করে। প্রথম এম. আই. আর. এন. এ আবিষ্কৃত হয়, লিন-4, একটি জেনেটিক মিউটেজেনেসিস স্ক্রিনে পাওয়া যায় যা নেমাটোড ক্যানোরহ্যাবডাইটিস এলিগ্যানসের ভ্রূণ-পরবর্তী বিকাশ নিয়ন্ত্রণকারী আণবিক উপাদানগুলি সনাক্ত করে। লিন-4 জিনটি লিন-14 এম. আর. এন. এ ট্রান্সক্রিপ্ট এবং ডাউনরেগুলেটেড এল. আই. এন-14 প্রোটিন এক্সপ্রেশনের 3 '-অনুবাদিত অঞ্চলে সংরক্ষিত পরিপূরক বাঁধাই সাইটগুলির সাথে একটি 22 নিউক্লিওটাইড আর. এন. এ-কে এনকোড করে। এম. আই. আর. এন. এ এখন হেমাটোপোয়েসিস (মাস মাসকুলাসে এম. আই. আর-181), লিপিড বিপাক (ড্রোসোফিলা মেলানোগাস্টারে এম. আই. আর-14) এবং স্নায়বিক বিকাশ (ক্যানোরহ্যাবডাইটিস এলিগ্যানসে এল. এস. আই-6) সহ অনেক উন্নয়নমূলক এবং জৈবিক প্রক্রিয়া নিয়ন্ত্রণের সাথে জড়িত বলে মনে করা হয়। এই আবিষ্কারগুলি এমআইআরএনএ-এসইকিউ-এর মতো এমআইআরএনএ সনাক্ত এবং বৈশিষ্ট্যযুক্ত করতে সক্ষম কৌশলগুলির বিকাশের প্রয়োজনীয়তা তৈরি করেছিল। একটি প্রদত্ত নমুনায় নতুন এম. আই. আর. এন. এ এবং তাদের অভিব্যক্তি প্রোফাইলগুলি খুঁজে বের করার জন্য পরবর্তী প্রজন্মের সিকোয়েন্সিং বা ব্যাপকভাবে সমান্তরাল উচ্চ-থ্রুপুট সিকোয়েন্সিং প্রযুক্তির সুবিধা নেওয়ার জন্য মাইক্রো আর. এন. এ সিকোয়েন্সিং (এম. আই. আর. এন. এ-এস. কিউ) তৈরি করা হয়েছিল। এম. আই. আর. এন. এ সিকোয়েন্সিং কোনও নতুন ধারণা নয়, সিকোয়েন্সিংয়ের প্রাথমিক পদ্ধতিগুলি স্যাঙ্গার সিকোয়েন্সিং পদ্ধতি ব্যবহার করে। সিকোয়েন্সিং প্রস্তুতির মধ্যে কলাম এবং জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্বাচিত 21-25 বিপি আকারের অন্তঃসত্ত্বা ছোট আরএনএ থেকে প্রতিলিপি করা ডিএনএ বিপরীত ক্লোনিং দ্বারা গ্রন্থাগার তৈরি করা জড়িত। যাইহোক, এই পদ্ধতিটি সময় এবং সম্পদের দিক থেকে সম্পূর্ণ, কারণ প্রতিটি ক্লোনকে পৃথকভাবে সম্প্রসারিত করতে হবে এবং সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য প্রস্তুত করতে হবে। এই পদ্ধতিটি অসাবধানতাবশত এম. আই. আর. এন. এ-কে সমর্থন করে যা অত্যন্ত প্রকাশিত হয়। পরবর্তী প্রজন্মের সিকোয়েন্সিং ডিএনএ মাইক্রো অ্যারে বিশ্লেষণে প্রয়োজনীয় সিকোয়েন্স নির্দিষ্ট হাইব্রিডাইজেশন প্রোবের পাশাপাশি স্যাঙ্গার সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিতে প্রয়োজনীয় শ্রমসাধ্য ক্লোনিং পদ্ধতির প্রয়োজনীয়তা দূর করে। উপরন্তু, এম. আই. আর. এন. এ-এস. ই. কিউ পদ্ধতিতে পরবর্তী প্রজন্মের সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্মগুলি একক সিকোয়েন্সিং দৌড়ে ছোট আর. এন. এ-র বড় পুলগুলির সিকোয়েন্সিং সহজতর করে। বিভিন্ন সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্ম ব্যবহার করে এম. আই. আর. এন. এ-এস. কিউ করা যেতে পারে। এম. আই. আর. এন. এ-এস. কিউ পদ্ধতি ব্যবহার করে ছোট আর. এন. এ-র প্রথম বিশ্লেষণে লিনক্স থেরাপিউটিক্সের ম্যাসিভলি প্যারালাল সিগনেচার সিকোয়েন্সিং (এম. পি. এস. এস) সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্ম ব্যবহার করে মডেল উদ্ভিদ আরাবিডোপসিস থালিয়ানা থেকে প্রায় 14 লক্ষ ছোট আর. এন. এ পরীক্ষা করা হয়। এই গবেষণাটি ছোট আর. এন. এ-র অধ্যয়নের জন্য অভিনব, উচ্চ-থ্রুপুট সিকোয়েন্সিং প্রযুক্তির সম্ভাবনা প্রদর্শন করে এবং এটি দেখায় যে জিনোমগুলি উদ্ভিদগুলির সাথে বিশেষত ছোট আর. এন. এ-র সমৃদ্ধ উৎস হিসাবে প্রচুর সংখ্যক ছোট আর. এন. এ তৈরি করে। পরবর্তী গবেষণায় অন্যান্য সিকোয়েন্সিং প্রযুক্তি ব্যবহার করা হয়েছে, যেমন সি. এলিগ্যানস-এর একটি গবেষণায় 18টি নতুন এম. আই. আর. এন. এ জিন এবং 21 ইউ-আর. এন. এ নামে পরিচিত একটি নতুন শ্রেণীর নেমাটোড ছোট আর. এন. এ চিহ্নিত করা হয়েছে। আরেকটি গবেষণায় মানব সার্ভিকাল টিউমার এবং স্বাভাবিক টিস্যুর ছোট আরএনএ প্রোফাইলের তুলনা করে ইলুমিনা (কোম্পানি) জিনোম অ্যানালাইজার ব্যবহার করে 64টি নতুন মানব এম. আই. আর. এন. এ জিন এবং 67টি ভিন্নভাবে প্রকাশিত এম. আই. আর. এন. এ সনাক্ত করা হয়েছে। মানুষের স্তন ক্যান্সার সনাক্তকরণে এম. আই. আর. এন. এ-র ভবিষ্যদ্বাণীমূলক মান পরীক্ষা করার জন্য ফলিত জৈবপ্রক্রিয়াসমূহ সোলিড সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্মও ব্যবহার করা হয়েছে। পদ্ধতি ছোট আর. এন. এ প্রস্তুতি সিকোয়েন্স লাইব্রেরি নির্মাণ উচ্চ-থ্রুপুট সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্মের উপর নির্ভর করে বিভিন্ন কিট ব্যবহার করে করা যেতে পারে। তবে, ছোট আরএনএ সিকোয়েন্সিং প্রস্তুতির জন্য বেশ কয়েকটি সাধারণ পদক্ষেপ রয়েছে। মোট আর. এন. এ বিচ্ছিন্নতা একটি প্রদত্ত নমুনায় সমস্ত আর. এন. এ একটি আইসোথিওসায়ানেট/ফেনল/ক্লোরোফর্ম (জি. আই. টি. সি/ফেনল) পদ্ধতি বা ট্রাইজল (ইনভিট্রোজেন) বিকারক হিসাবে একটি বাণিজ্যিক পণ্য ব্যবহার করে নিষ্কাশিত এবং পৃথক করা হয়। সাধারণত জেল পরিশোধন এবং আকার নির্বাচনের জন্য 50-100 মাইক্রোগ্রাম মোট আরএনএ, 1 গ্রাম টিস্যু থেকে 1 মিলিগ্রাম মোট আরএনএ পাওয়া যায়। আর. এন. এ-র গুণমান নিয়ন্ত্রণও পরিমাপ করা হয়, উদাহরণস্বরূপ ক্যালিপার ল্যাবচিপজিএক্স (ক্যালিপার লাইফ সায়েন্সেস)-এ একটি আর. এন. এ চিপ চালানো হয়। জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা ছোট আর. এন. এ-র আকারের ভগ্নাংশ বিচ্ছিন্ন আর. এন. এ একটি বিকৃত পলিঅ্যাক্রিলামাইড জেলের উপর চালানো হয়। একটি ইমেজিং পদ্ধতি যেমন তেজস্ক্রিয় 5 '-32পি-লেবেলযুক্ত অলিগোনিউক্লিওটাইডগুলি একটি আকারের মই সহ উপযুক্ত আকারের আরএনএ ধারণকারী জেলের একটি অংশ সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়, যা শেষ পর্যন্ত ক্রমযুক্ত উপাদানের পরিমাণ হ্রাস করে। এই পদক্ষেপটি অবশ্যই নীচে বর্ণিত বন্ধন এবং বিপরীত প্রতিলিপি পদক্ষেপের আগে সম্পন্ন করতে হবে না। বন্ধন স্তরটি ছোট আর. এন. এ-র উভয় প্রান্তে ডি. এন. এ অ্যাডাপ্টর যুক্ত করে, যা বিপরীত প্রতিলিপি এবং পি. সি. আর পরিবর্ধন চলাকালীন প্রাইমার বাঁধাই সাইট হিসাবে কাজ করে। একটি অ্যাডেনাইলেটেড একক স্ট্র্যান্ড ডিএনএ 3 'অ্যাডাপ্টরের পরে একটি 5' অ্যাডাপ্টর টি4 আরএনএ লাইগেজ2-এর মতো একটি লিগটিং এনজাইম ব্যবহার করে ছোট আরএনএ-তে সংযুক্ত করা হয়। অ্যাডাপ্টরগুলি 5 'হাইড্রক্সিল গ্রুপের সাথে আরএনএ অবক্ষয় পণ্যের পরিবর্তে 5' ফসফেট গ্রুপ, বৈশিষ্ট্যযুক্ত মাইক্রোআরএনএ সহ ছোট আরএনএ ধরার জন্যও ডিজাইন করা হয়েছে। বিপরীত প্রতিলিপি এবং পিসিআর সম্প্রসারণ এই পদক্ষেপটি সিকোয়েন্সিং প্রতিক্রিয়ায় ব্যবহৃত ছোট অ্যাডাপ্টর লিগযুক্ত আরএনএগুলিকে সিডিএনএ ক্লোনে রূপান্তরিত করে। অনেক বাণিজ্যিক কিট উপলব্ধ রয়েছে যা কিছু ধরণের বিপরীত প্রতিলিপি ব্যবহার করে এই পদক্ষেপটি সম্পাদন করবে। তারপর সি. ডি. এন. এ সিকোয়েন্সের পুলকে প্রশস্ত করতে পি. সি. আর করা হয়। পুলড লাইব্রেরি মাল্টিপ্লেক্স সিকোয়েন্সিং-এ আইডি ট্যাগ তৈরি করতে অনন্য নিউক্লিওটাইড ট্যাগ দিয়ে ডিজাইন করা প্রাইমারগুলিও এই ধাপে ব্যবহার করা যেতে পারে। প্রকৃত আরএনএ সিকোয়েন্সিং ব্যবহৃত প্ল্যাটফর্মের উপর নির্ভর করে উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত হয়। তিনটি সাধারণ পরবর্তী প্রজন্মের সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্ম হল 454 লাইফ সায়েন্সেস প্ল্যাটফর্মে পাইরো সিকোয়েন্সিং, ইলুমিনা (কোম্পানি) প্ল্যাটফর্মে পলিমারেজ-ভিত্তিক সিকোয়েন্স-বাই-সিন্থেসিস বা এ. বি. আই সলিড সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্মে লাইগেশনের মাধ্যমে সিকোয়েন্সিং। কেন্দ্রীয় থেকে এম. আই. আর. এন. এ-সে. কিউ তথ্য বিশ্লেষণ হল 1) সিকোয়েন্স রিড থেকে এম. আই. আর. এন. এ প্রাচুর্যের মাত্রা অর্জন করা, 2) নতুন এম. আই. আর. এন. এ আবিষ্কার করা এবং তারপর 3) ভিন্নভাবে প্রকাশিত এম. আই. আর. এন. এ এবং তাদের 4) সম্পর্কিত এম. আর. এন. এ জিন লক্ষ্য নির্ধারণ করতে সক্ষম হওয়া। এম. আই. আর. এন. এ সারিবদ্ধকরণ এবং প্রাচুর্য পরিমাপ এম. আই. আর. এন. এ-গুলি নির্দিষ্ট ধরনের কোষ, টিস্যু, বিকাশের পর্যায় বা ক্যান্সারের মতো বিশেষ রোগের অবস্থায় অগ্রাধিকারের সাথে প্রকাশ করা যেতে পারে। যেহেতু ডিপ সিকোয়েন্সিং (এম. আই. আর. এন. এ-এস. কিউ) একটি প্রদত্ত নমুনা থেকে লক্ষ লক্ষ রিড তৈরি করে, তাই এটি আমাদের এম. আই. আর. এন. এ-কে প্রোফাইল করার অনুমতি দেয়; তা সেগুলির পরম প্রাচুর্যের পরিমাণ নির্ধারণের মাধ্যমেই হোক না কেন, তাদের রূপগুলি আবিষ্কার করার জন্য (আইসোমির নামে পরিচিত) মনে রাখবেন যে ক্রম রিডের গড় দৈর্ঘ্য গড় এম. আই. আর. এন. এ (<আই. ডি1> এন. টি)-এর চেয়ে দীর্ঘ, এম. আই. আর. এন. এ-এর 3 'এবং 5' প্রান্তগুলি একই রিডে পাওয়া উচিত। বেশ কয়েকটি এম. আই. আর. এন. এ প্রাচুর্য পরিমাপ অ্যালগরিদম রয়েছে। তাদের সাধারণ পদক্ষেপগুলি নিম্নরূপঃ সিকোয়েন্সিংয়ের পরে, কাঁচা সিকোয়েন্স রিডগুলি মানের উপর ভিত্তি করে ফিল্টার করা হয়। অ্যাডাপ্টার সিকোয়েন্সগুলি কাঁচা সিকোয়েন্স রিডগুলিও ছাঁটাই করা হয়। ফলস্বরূপ পাঠগুলি তারপর একটি ফাস্টা ফাইলে বিন্যাস করা হয় যেখানে প্রতিটি অনন্য ট্যাগের জন্য অনুলিপি সংখ্যা এবং ক্রম রেকর্ড করা হয়। ই. কোলাই দূষণের প্রতিনিধিত্ব করতে পারে এমন ক্রমগুলি একটি ই. কোলাই ডাটাবেসের বিরুদ্ধে ব্লাস্ট অনুসন্ধানের মাধ্যমে চিহ্নিত করা হয় এবং বিশ্লেষণ থেকে সরানো হয়। অসম্পূর্ণ DICER প্রক্রিয়াকরণের জন্য, 3 'প্রান্তে একটি 6' nt ওভারহ্যাং এবং 5 'প্রান্তে 3' nt অনুমোদিত। যে রিডগুলি এম. আই. আর. এন. এ ডাটাবেসের সাথে সারিবদ্ধ হয় না সেগুলি তখন এম. আই. আর. এন. এ পূর্বসূরীদের সাথে আলগাভাবে সারিবদ্ধ করা হয় যাতে এম. আই. আর. এন. এ সনাক্ত করা যায় যা মিউটেশন বহন করতে পারে বা আর. এন. এ সম্পাদনার মধ্য দিয়ে গেছে। প্রতিটি এম. আই. আর. এন. এ-র পঠন গণনা তারপর প্রতিটি এম. আই. আর. এন. এ-র প্রাচুর্য রিপোর্ট করার জন্য ম্যাপ করা এম. আই. আর. এন. এ-র মোট সংখ্যায় স্বাভাবিক করা হয়। নোভেল এম. আই. আর. এন. এ ডিসকভারি এম. আই. আর. এন. এ-এস. কিউ-এর আরেকটি সুবিধা হল যে এটি নতুন এম. আই. আর. এন. এ-র আবিষ্কারের অনুমতি দেয় যা ঐতিহ্যবাহী স্ক্রিনিং এবং প্রোফাইলিং পদ্ধতিগুলি এড়িয়ে যেতে পারে। বেশ কয়েকটি অভিনব এম. আই. আর. এন. এ আবিষ্কার অ্যালগরিদম রয়েছে। তাদের সাধারণ ধাপগুলি নিম্নরূপঃ এমন পাঠগুলি অর্জন করুন যা পরিচিত এম. আই. আর. এন. এ সিকোয়েন্সের সাথে সারিবদ্ধ হয়নি এবং সেগুলিকে জিনোমের সাথে ম্যাপ করুন। আর. এন. এ ভাঁজ করার পদ্ধতি এম. আই. আর. এন. এ সিকোয়েন্সের জন্য একটি সঠিক মিল পাওয়া যায়, উভয় পাশে ~ 100 বিপি ফ্ল্যাঙ্কিং সিকোয়েন্স সহ জিনোমিক সিকোয়েন্স অর্জন করুন এবং ভিয়েনা প্যাকেজের মতো আর. এন. এ ভাঁজ সফ্টওয়্যারের মাধ্যমে আর. এন. এ চালান। ভাঁজ করা ক্রমগুলি যা এম. আই. আর. এন. এ হেয়ারপিনের এক বাহুতে থাকে এবং ন্যূনতম মুক্ত শক্তি ~ 25 কিলোক্যালরি/মোল এর চেয়ে কম থাকে সেগুলিকে অনুমানমূলক এম. আই. আর. এন. এ হিসাবে সংক্ষিপ্ত তালিকাভুক্ত করা হয়। সংক্ষিপ্ত তালিকাভুক্ত ক্রমগুলি কেবল সম্ভাব্য অগ্রদূত ক্রম অন্তর্ভুক্ত করার জন্য ছাঁটা হয় এবং তারপরে পার্শ্ববর্তী ক্রম দ্বারা অগ্রদূতকে কৃত্রিমভাবে স্থিতিশীল করা হয়নি তা নিশ্চিত করার জন্য পুনরায় ভাঁজ করা হয়। ফলস্বরূপ ভাঁজ করা ক্রমগুলি অভিনব এম. আই. আর. এন. এ হিসাবে বিবেচিত হয় যদি এম. আই. আর. এন. এ ক্রমটি হেয়ারপিনের এক বাহুর মধ্যে পড়ে এবং প্রজাতির মধ্যে অত্যন্ত সংরক্ষিত থাকে। স্টার স্ট্র্যান্ড এক্সপ্রেশন মেথড (এম. আই. আর. ডি. পি) অভিনব এম. আই. আর. এন. এ সিকোয়েন্সগুলি ডি. আই. সি. ই. আর প্রক্রিয়াকরণের কারণে প্রদর্শিত চরিত্রগত এক্সপ্রেশন প্যাটার্নের উপর ভিত্তি করে চিহ্নিত করা হয়ঃ স্টার স্ট্র্যান্ড এবং লুপ সিকোয়েন্সের উপর পরিপক্ক এম. আই. আর. এন. এ-এর উচ্চতর এক্সপ্রেশন। ডিফারেনশিয়াল এক্সপ্রেশন অ্যানালাইসিস প্রতিটি নমুনার জন্য এম. আই. আর. এন. এ-র প্রাচুর্য পরিমাপ করার পরে, তাদের অভিব্যক্তি স্তরগুলি নমুনার মধ্যে তুলনা করা যেতে পারে। তখন কেউ সেই নির্দিষ্ট সময় বিন্দুতে বা নির্দিষ্ট টিস্যু বা রোগের অবস্থাগুলিতে অগ্রাধিকারের সাথে প্রকাশিত এম. আই. আর. এন. এ সনাক্ত করতে সক্ষম হবে। নমুনাগুলির মধ্যে ম্যাপ করা রিডের সংখ্যা স্বাভাবিক করার পরে, ডিফারেনশিয়াল এক্সপ্রেশন নির্ধারণ করতে একাধিক পরিসংখ্যানগত পরীক্ষা (যেমন জিন এক্সপ্রেশন প্রোফাইলে ব্যবহৃত) ব্যবহার করা যেতে পারে টার্গেট প্রেডিকশন একটি এম. আই. আর. এন. এ-র এম. আর. এন. এ লক্ষ্যগুলি সনাক্ত করা জিন বা জিনগুলির নেটওয়ার্কগুলির একটি বোঝাপড়া প্রদান করবে যার এক্সপ্রেশন তারা নিয়ন্ত্রণ করে। পাবলিক ডেটাবেসগুলি এম. আই. আর. এন. এ লক্ষ্যগুলির ভবিষ্যদ্বাণী প্রদান করে। কিন্তু মিথ্যা ইতিবাচক ভবিষ্যদ্বাণী থেকে সত্যিকারের ইতিবাচক ভবিষ্যদ্বাণীগুলিকে আরও ভালভাবে আলাদা করার জন্য, এম. আই. আর. এন. এ-এস. ই. কিউ তথ্যকে এম. আই. আর. এন. এ-এস. ই. কিউ তথ্যের সাথে একীভূত করা যেতে পারে যাতে এম. আই. আর. এন. এঃ এম. আর. এন. এ কার্যকরী জোড়া পর্যবেক্ষণ করা যায়। আরএনএ22, টার্গেটস্ক্যান, মিরান্ডা এবং পিকটার এই উদ্দেশ্যে ডিজাইন করা সফ্টওয়্যার। ভবিষ্যদ্বাণী সফ্টওয়্যারের একটি তালিকা এখানে দেওয়া হয়েছে। সাধারণ ধাপগুলি হলঃ এম. আই. আর. এন. এ নির্ধারণ করুনঃ এম. আর. এন. এ বাঁধাই জোড়া, এম. আর. এন. এ ক্রমের 3 '-ইউ. টি. আর-এ এম. আই. আর. এন. এ ক্রমের মধ্যে পরিপূরকতা চিহ্নিত করা হয়। এম. আই. আর. এন. এ সংরক্ষণের মাত্রা নির্ধারণ করুনঃ প্রজাতি জুড়ে এম. আর. এন. এ বাঁধাই জোড়া। সাধারণত, আরও উচ্চ বাঁধাই জোড়া ভবিষ্যদ্বাণীর মিথ্যা ইতিবাচক হওয়ার সম্ভাবনা কম। এম. আর. এন. এ-সেক বা প্রোটিন এক্সপ্রেশন ডেটাতে এম. আই. আর. এন. এ লক্ষ্যের প্রমাণের জন্য পর্যবেক্ষণ করুনঃ যেখানে এম. আই. আর. এন. এ এক্সপ্রেশন বেশি, তার টার্গেট জিনের জিন এবং প্রোটিন এক্সপ্রেশন কম হওয়া উচিত। অনেক এম. আই. আর. এন. এ তাদের এম. আর. এন. এ লক্ষ্যগুলির সরাসরি বিভাজনের জন্য কাজ করে; এটি উদ্ভিদের ক্ষেত্রে বিশেষভাবে সত্য, এবং এইভাবে এম. আই. আর. এন. এ-র এই বৈশিষ্ট্যের সুবিধা নিতে উচ্চ-থ্রুপুট সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিগুলি তৈরি করা হয়েছে যা বিচ্ছিন্ন বা অবনমিত এম. আর. এন. এ-র অনাবৃত 3 'প্রান্তগুলি সিকোয়েন্স করে। এই পদ্ধতিগুলি ডিগ্রেডোম সিকোয়েন্সিং বা পিএআরই নামে পরিচিত। নির্দিষ্ট এম. আর. এন. এ-তে লক্ষ্য বিভাজনের বৈধতা সাধারণত একটি জিন-নির্দিষ্ট প্রাইমারের সাথে শেষ হওয়া সি. ডি. এন. এ-র 5 'র্যাপিড এম্প্লিফিকেশন'-এর একটি পরিবর্তিত সংস্করণ ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়। অ্যাপ্লিকেশনস আইডেন্টিফিকেশন অফ নভেল এম. আই. আর. এন. এ-র এম. আই. আর. এন. এ-এস. ই. কিউ নতুন এম. আই. আর. এন. এ প্রকাশ করেছে যা আগে ঐতিহ্যবাহী এম. আই. আর. এন. এ প্রোফাইলিং পদ্ধতিতে বাদ দেওয়া হয়েছিল। এই ধরনের ফলাফলের উদাহরণ হল ভ্রূণের স্টেম সেল, মুরগির ভ্রূণ, তীব্র লিম্ফোব্লাস্টিক লিউকেমিয়া, বিচ্ছুরিত বড় বি-সেল লিম্ফোমা এবং বি-সেল, তীব্র মায়েলয়েড লিউকেমিয়া এবং ফুসফুসের ক্যান্সার। রোগ বায়োমার্কার মাইক্রো আরএনএ প্রায় সমস্ত কোষীয় প্রক্রিয়া যেমন বেঁচে থাকা, বিস্তার এবং পৃথকীকরণের গুরুত্বপূর্ণ নিয়ন্ত্রক। ফলস্বরূপ, এটি অপ্রত্যাশিত নয় যে অনকো-এবং টিউমার দমনকারী জিন অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে এম. আই. আর. এন. এ ক্যান্সারের বিভিন্ন দিকের সাথে জড়িত। উচ্চ-থ্রুপুট প্রোফাইলিং পদ্ধতির বিকাশের সংমিশ্রণে, এম. আই. আর. এন. এ-কে ক্যান্সারের শ্রেণিবিন্যাস, থেরাপির প্রতিক্রিয়া এবং পূর্বাভাসের জন্য বায়োমার্কার হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে। উপরন্তু, যেহেতু এম. আই. আর. এন. এ জিন অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণ করে তারা গুরুত্বপূর্ণ নিয়ন্ত্রক নেটওয়ার্কগুলিতে বিশৃঙ্খলাও প্রকাশ করতে পারে যা একটি নির্দিষ্ট ব্যাধি চালাতে পারে। বায়োমার্কার এবং রোগের পূর্বাভাসকারী হিসাবে এম. আই. আর. এন. এ-র বেশ কয়েকটি প্রয়োগ নীচে দেওয়া হল। α এটি এই ম্যালিগন্যান্সির সাথে জড়িত এম. আই. আর. এন. এ-র একটি বিস্তৃত তালিকা নয়। এম. আই. আর. এন. এ প্রোফাইলিং-এর অন্যান্য পদ্ধতির সঙ্গে তুলনা এম. আই. আর. এন. এ প্রোফাইলিং-এর অন্যান্য পদ্ধতির তুলনায় এম. আই. আর. এন. এ-সেক ব্যবহার করার অসুবিধাগুলি হল যে এটি আরও ব্যয়বহুল, সাধারণত মোট আর. এন. এ-এর একটি বড় পরিমাণ প্রয়োজন, ব্যাপক পরিবর্ধন জড়িত, এবং মাইক্রো অ্যারে এবং কিউ. পি. সি. আর পদ্ধতির তুলনায় বেশি সময়সাপেক্ষ। এছাড়াও, এম. আই. আর. এন. এ-এস. ই. কিউ গ্রন্থাগার প্রস্তুতির পদ্ধতিতে এম. আই. আর. এন. এ পরিপূরকের নিয়মতান্ত্রিক অগ্রাধিকারগত উপস্থাপনা রয়েছে বলে মনে হয় এবং এটি এম. আই. আর. এন. এ প্রাচুর্যের সঠিক নির্ধারণকে বাধা দেয়। একই সময়ে, পদ্ধতিটি সংকরায়ন স্বাধীন এবং তাই একটি অগ্রাধিকার ক্রম তথ্যের প্রয়োজন হয় না। এই কারণে, কেউ নতুন এম. আই. আর. এন. এ এবং এম. আই. আর. এন. এ আইসোফর্ম (আইসোমিরস)-এর ক্রম পেতে পারে, ক্রমানুসারে অনুরূপ এম. আই. আর. এন. এ-কে আলাদা করতে পারে এবং বিন্দু রূপান্তরগুলি সনাক্ত করতে পারে। এম. আই. আর. এন. এ প্রোফাইলিং রেফারেন্স ডি. এন. এ সিকোয়েন্সিংয়ের প্ল্যাটফর্ম তুলনা