Cycloheximide chase
সাইক্লোহেক্সিমাইড চেজ অ্যাসেস হল একটি পরীক্ষামূলক কৌশল যা আণবিক এবং কোষীয় জীববিজ্ঞানে প্রোটিন স্থিতিশীলতা পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়। সাইক্লোহেক্সিমাইড এমন একটি ওষুধ যা ইউক্যারিওটিক প্রোটিন অনুবাদে দীর্ঘায়িত পদক্ষেপকে বাধা দেয়, যার ফলে প্রোটিন সংশ্লেষণ প্রতিরোধ করে। কালচারড কোষে সাইক্লোহেক্সিমাইড যোগ করার পরে একাধিক টাইমপয়েন্টে প্রোটিন লাইসিস করা হয় সময়ের সাথে সাথে প্রোটিনের অবক্ষয় পর্যবেক্ষণ করতে এবং একটি প্রোটিনের অর্ধ-জীবন নির্ধারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। এই মূল্যায়নগুলি প্রায়শই প্রোটিনের প্রাচুর্য মূল্যায়নের জন্য ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দ্বারা অনুসরণ করা হয় এবং ইমেজজে-এর মতো পরিমাণগত সরঞ্জাম ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা যেতে পারে। বাস্তবায়ন সাইক্লোহেক্সিমাইড চেজ অ্যাসেস বিভিন্ন ধরনের কোষ যেমন খামির এবং স্তন্যপায়ী কোষের লাইন ব্যবহার করে পরিচালিত হয়েছে। বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত কোষ পদ্ধতির উপর নির্ভর করে, মূল্যায়ন প্রয়োগ এবং সময়ক্রমে পরিবর্তিত হতে পারে। উদাহরণস্বরূপ, আগ্রহের একটি প্রোটিন স্তর প্রকাশকারী খামির কোষগুলির সাধারণত 90 মিনিট পর্যন্ত স্থায়ী সাইক্লোহেক্সিমাইড চেজের প্রয়োজন হয় যাতে প্রোটিন টার্নওভার ঘটতে পারে। বিপরীতে, স্তন্যপায়ী কোষের রেখায় প্রকাশিত প্রোটিনগুলি আমার কাছে স্থির অবস্থায় আরও স্থিতিশীল থাকে এবং 3 থেকে 8 ঘন্টা স্থায়ী তাড়া করার প্রয়োজন হতে পারে। প্রোটিনের জটিলতার উপর নির্ভর করে এবং এটি মডেল সিস্টেমে অতিরিক্ত প্রকাশিত বা অন্তঃসত্ত্বা কিনা, তাড়া করার প্রয়োজনীয় দৈর্ঘ্য পরিবর্তিত হতে পারে। পুরো তাড়া চলাকালীন প্রোটিন সংশ্লেষণ প্রতিরোধ করা হয় তা নিশ্চিত করার জন্য, সাইক্লোহেক্সিমাইড প্রায়শই প্রতি কয়েক ঘন্টা অন্তর নমুনায় স্পাইক করা হয়। ইস্ট-এ, মুছে ফেলার স্ট্রেনগুলি প্রায়শই সাইক্লোহেক্সিমাইড তাড়া করে সময়ের সাথে সাথে প্রোটিনের স্থায়িত্ব মূল্যায়ন করতে ব্যবহৃত হয়। উদাহরণস্বরূপ, চেপারোন, ই3 লিগাজ এবং ভ্যাকুওলার প্রোটিনের মতো ক্রিটিক্যাল ডিগ্রেডেশন যন্ত্রপাতির অভাবযুক্ত ইস্ট স্ট্রেনগুলি প্রায়শই আগ্রহের প্রোটিন স্তরের অবক্ষয়ের প্রক্রিয়া নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়। ড্রাগ ট্রিটমেন্টগুলি (যেমন এমজি132) অবক্ষয়ের পদক্ষেপগুলি প্রতিরোধ করতেও ব্যবহৃত হয়, তারপরে আগ্রহের প্রোটিনের স্থায়িত্ব কীভাবে প্রভাবিত হয় তা পর্যবেক্ষণ করার জন্য একটি সাইক্লোহেক্সিমাইড চেজ করা হয়। এই পরীক্ষাগুলি স্তন্যপায়ী কোষে ইস্ট মুছে ফেলার স্ট্রেনের পরিবর্তে সামঞ্জস্যপূর্ণ নকডাউন পদ্ধতি বাস্তবায়নের মাধ্যমে পরিচালিত হতে পারে। বিভিন্ন মিউটেশন কীভাবে একটি প্রোটিনের স্থায়িত্বকে প্রভাবিত করে তা মূল্যায়নের জন্য সাইক্লোহেক্সিমাইড চেজগুলিও মূল্যবান। প্রোটিনের স্থিতিশীলতার জন্য প্রয়োজনীয় গুরুত্বপূর্ণ অবশিষ্টাংশ এবং রোগ-সম্পর্কিত মিউটেশনগুলি কোষের মধ্যে প্রোটিনের অর্ধ-জীবনকে কীভাবে প্রভাবিত করতে পারে তা নির্ধারণের জন্য খামির এবং স্তন্যপায়ী কোষে পরীক্ষা-নিরীক্ষা করা হয়েছে। এই তথ্য প্রোটিন ভাঁজ করার জটিলতা এবং কীভাবে মিউটেশনগুলি তাদের সাথে যুক্ত রোগের প্যাথোজেনেসিসে অবদান রাখে তা বোঝার জন্য মূল্যবান। উপকারিতা প্রোটিনের স্থায়িত্ব মূল্যায়নকারী অন্যান্য পদ্ধতির বিপরীতে সাইক্লোহেক্সিমাইড চেজ অ্যাসেস ব্যবহার করার অনেক সুবিধা রয়েছে। সাইক্লোহেক্সিমাইড চেজগুলি বিভিন্ন মডেল সিস্টেমের সাথে ব্যবহার করা যেতে পারে এবং প্রায় কোনও প্রোটিন স্তর অধ্যয়নের জন্য প্রয়োগ করা যেতে পারে। অন্যান্য ওষুধের তুলনায় সাইক্লোহেক্সিমাইড তুলনামূলকভাবে সস্তা যৌগ এবং স্বল্প সময়ের জন্য কম মাত্রায় ব্যবহার করা হলে এটি কার্যকর হয়। পালস চেজ অ্যাসেস হল সাইক্লোহেক্সিমাইড চেজ অ্যাসেসের একটি বিকল্প পদ্ধতি এবং এতে নতুন অনুবাদিত প্রোটিনের তেজস্ক্রিয় লেবেলিং জড়িত থাকে যার পরে একই ধরনের "চেজ" সময়কাল থাকে। যদিও এই পদ্ধতিটি তথ্যমূলক এবং নবজাতক প্রোটিনের প্রাচুর্য পর্যবেক্ষণের সুবিধা প্রদান করে, তবে এর জন্য যে তেজস্ক্রিয় উপাদান প্রয়োজন তা স্বল্প সময়ের জন্য ব্যয়বহুল এবং সাইক্লোহেক্সিমাইডের তুলনায় ব্যবহারের জন্য আরও সতর্কতার দাবি করে। অসুবিধাগুলি সাইক্লোহেক্সিমাইড চেজ অ্যাসেস পরিচালনার কিছু অসুবিধাগুলির মধ্যে রয়েছে সাইক্লোহেক্সিমাইডের বিষাক্ত প্রকৃতি। দীর্ঘ সময় ধরে উচ্চ ঘনত্বে ব্যবহার করা হলে, সাইক্লোহেক্সিমাইড কোষের মধ্যে ডি. এন. এ-কে ক্ষতিগ্রস্থ করবে এবং গুরুত্বপূর্ণ কোষীয় ক্রিয়াকলাপকে ক্ষতিগ্রস্ত করবে। এই কারণে, সাইক্লোহেক্সিমাইড ধাওয়া সাধারণত 12 ঘন্টার বেশি স্থায়ী হয় না। এটি একটি সীমাবদ্ধতা উপস্থাপন করে যদি একটি বিশেষভাবে স্থিতিশীল প্রোটিনের টার্নওভার অধ্যয়ন করা হয়। উপরন্তু, সাইক্লোহেক্সিমাইড তাড়া শুধুমাত্র পালস তাড়া করার মতো নতুন অনুবাদিত প্রোটিন স্তরের বিপরীতে স্থিতিশীল অবস্থা প্রোটিনের মাত্রা দেখার ক্ষমতা প্রদান করে। অতএব, শুধুমাত্র প্রোটিনের অবক্ষয় লক্ষ্য করা যায় এবং প্রোটিন পরিপক্কতা নয়। তথ্যসূত্র পরীক্ষামূলক আণবিক জীববিজ্ঞান কোষ জীববিজ্ঞান প্রোটিন