L-Photo-methionine
এল-ফটো-মেথিওনিন হল এল-মেথিওনিনের একটি আলোক-প্রতিক্রিয়াশীল অ্যামিনো অ্যাসিড ডেরিভেটিভ যা 2005 সালে কৃত্রিমভাবে গঠিত হয়েছিল। প্রোটিন হল অ্যামিনো অ্যাসিডের দীর্ঘ পলিমার চেইন; যা বিভিন্ন কাঠামো এবং আকারে হতে পারে। প্রোটিনগুলি একে অপরের সাথে মিথস্ক্রিয়া করতে পারে (প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া বা পি. পি. আই) এবং এই মিথস্ক্রিয়াগুলির সাথে, কোষীয় মিথস্ক্রিয়া এবং পথগুলিকে প্রভাবিত করে। এই ধরনের মিথস্ক্রিয়া; ভাইরাল ফিউশনে এবং গ্রোথ-ফ্যাক্টর সিগন্যালে অ্যান্টিভাইরাল বা অ্যান্টি-ক্যান্সার ওষুধের জন্য আশাব্যঞ্জক বলে মনে হয়েছিল, তাই মিথস্ক্রিয়া বোঝার জন্য অবশ্যই গবেষণা করা উচিত। এর সাথে, গবেষণা প্রমাণ করতে শুরু করেছে যে প্রোটিনগুলি বিচ্ছিন্ন সত্তার তুলনায় সুপ্রামোলিকুলার কমপ্লেক্সে কাজ করে। সুতরাং, বিজ্ঞানী মনিকা সুচানেক, আন্না র্যাডজিকোভস্কি এবং ক্রিস্টোফ থিয়েল গবেষণা করেছেন যে প্রাকৃতিক পরিবেশে এই মিথস্ক্রিয়াগুলি আরও ভালভাবে অধ্যয়নের সরাসরি উপায় ছিল ফটো-ক্রস-লিঙ্কিং প্রোটিনের একটি নতুন উপায় তৈরি করা; যা এল-ফটো-মেথিওনিনের সংশ্লেষণের দিকে পরিচালিত করে এবং সেই একই গবেষণায়, এল-ফটো-লিউসিন। সংশ্লেষণ রেসমিক ফটো-মেথিওনিন স্ট্রেকার অ্যামিনো অ্যাসিড সংশ্লেষণ দ্বারা 4,4 '-আজি-পেন্টানাল থেকে সংশ্লেষিত হয়। এল এনানটিওমার অ্যাসিটামাইডের এনজাইম্যাটিক রেজোলিউশন দ্বারা পৃথক করা হয়। মেথিওনিনের আলোক সক্রিয়করণ যেমনটি আগে উল্লেখ করা হয়েছিল, এল-ফটো-মেথিওনিন তাদের স্থানীয় পরিবেশে প্রোটিনের সাথে প্রোটিন-প্রোটিনের মিথস্ক্রিয়া অধ্যয়ন করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। ইউভি আলোর সংস্পর্শে এলে অ্যামিনো অ্যাসিড কীভাবে আচরণ করে তা কীভাবে সম্ভব। প্রথমে সংশ্লেষণ কাজ করে তা প্রমাণ করার জন্য, একটি তেজস্ক্রিয় কার্বন (14সি) তার নিজস্ব সংশ্লেষণের অধীনে যুক্ত করা হয় যাতে সঠিক স্পেকট্রোস্কোপিক পদ্ধতিগুলি সম্পাদন করা যায়। ফটো-মেথিওনিনের সক্রিয়করণ কারণ পূর্ববর্তী সংশ্লেষণ কাজ করেছিল, ডায়াজিরিন বলয়ের কারণে ফটো-মেথিওনিন ফটো-প্রতিক্রিয়াশীল। একবার এই বলয়টি অতিবেগুনী রশ্মির সংস্পর্শে এলে, নাইট্রোজেন নাইট্রোজেন গ্যাস (এন2) হিসাবে বেরিয়ে যায় এবং অত্যন্ত প্রতিক্রিয়াশীল মধ্যবর্তী কার্বিন গঠন করে। অ্যামিনো অ্যাসিডের ফটো-অ্যাক্টিভেশন প্রোটিনে ফটো-ক্রস-লিঙ্ক করার ক্ষমতা প্রদান করে। এই ধরনের ক্রস-লিঙ্কিংয়ের তিনটি প্রধান সুবিধা রয়েছে; স্বল্পস্থায়ী মধ্যবর্তীগুলির কারণে এই ক্রস লিঙ্কিংয়ের জন্য বৃহত্তর নির্দিষ্টতা রয়েছে এবং এই অ্যামিনো অ্যাসিড কার্যকরী, এবং সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ; বিষাক্ত নয় (যার অর্থ এটি প্রোটিনের কার্যকারিতা বা কাঠামোকে নাটকীয়ভাবে ব্যাহত করা উচিত নয়)। গবেষণায় দেখা গেছে যে এই সক্রিয়করণ হার-সীমাবদ্ধ পদক্ষেপ; ক্রস-লিঙ্ক নয়। একটি নতুন দক্ষ সংশ্লেষণ এবং ব্যবহার বিজ্ঞানী মিকুয়েল ভিলা-পেরেলো, ম্যাথিউ আর. প্র্যাট, ফ্রেজ টুলিন এবং টম ডব্লিউ. মুইর একটি দক্ষ সংশ্লেষণ তৈরি করতে চেয়েছিলেন কারণ মূলটির একটি উৎসেচক দ্রবণের প্রয়োজন ছিল এবং এর ফলন কম ছিল। সুতরাং, তারা এল-গ্লুটামিক অ্যাসিড দিয়ে কার্বক্সিলিক অ্যাসিড (টার্ট-বিউটাইল) এবং অ্যামাইনের উপর বিওসি উভয়ের উপর সুরক্ষা গোষ্ঠী দিয়ে শুরু করে। এই সংশ্লেষণটি ক্লাসিক হিসাবে বিস্তারিত হবে না, তবে নীচে সম্পূর্ণ সংশ্লেষণ রয়েছে। প্রকৃত পদক্ষেপগুলি খুঁজে পেতে, রেফারেন্সটি দেখুন। সুতরাং, একবার তারা এল-ফটো-মেথিওনাইন সংশ্লেষিত করার পরে, ফলন ছিল 32 শতাংশ, যা মূল সংশ্লেষণের তুলনায় অনেক বেশি (ছয় গুণ)। এটি তখন ব্যবহার করা হয়েছিল (অ্যামাইনের উপর একটি সুরক্ষা গোষ্ঠী এফ. এম. ও. সি সহ) যা সেই পণ্যটি অধ্যয়নের জন্য আরও সংশ্লেষিত পদক্ষেপের মধ্য দিয়ে যায় যে একটি অ্যামিনো-অ্যাসিড ক্রস লিঙ্কার এবং একটি পোস্ট-ট্রান্সলেশনাল পরিবর্তন (পি. টি. এম) একই প্রোটিন সাইটে চালু করা যেতে পারে কিনা বিশেষত অ্যামিনো-অ্যাসিডের একটি সমযোজী মিথস্ক্রিয়া ক্যাপচার করার জন্য যা পি. টি. এম-এর উপর নির্ভরশীল। পিটিএম প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে যার এমন বৈশিষ্ট্য রয়েছে যা ক্ষণস্থায়ী এবং সাবস্টোইকিওমেট্রিক; এগুলি মানক পদ্ধতি দ্বারা সনাক্ত করা কঠিন করে তোলে। সুতরাং, এটি কাজ করবে কিনা তা দেখার জন্য, স্ম্যাড 2-এর এমএইচ2 ডোমেনটি ব্যবহার করা হয়েছিল কারণ এই সিগন্যালিং প্রোটিনটি রিসেপ্টর-ফসফোরিলেটেড সেরিন অবশিষ্টাংশের সংস্পর্শে আসার পরে স্থিতিশীল হোমো-ট্রিমার গঠন করে বলে জানা যায়। এক্সপ্রেশন প্রোটিন লাইগেশন (ই. পি. এল নামে পরিচিত) স্ম্যাড2-এম. এইচ2-সি. এস. পি. এস. এম-ফটো-মেট (1) গঠনে সংশ্লেষণে ব্যবহৃত হয়েছিল। পণ্যটি একটি নিয়ন্ত্রিত প্রোটিনের বিরুদ্ধে ক্রস-লিঙ্কার (ফটো-মেট) দিয়ে অধ্যয়ন করা হয়েছিলঃ এইচ. এ-এম. এইচ. 2-সি. এস. পি. এস. এম. পি. এস (এতে ফটো-মেথিওনিনের অভাব রয়েছে, 2) এস. ডি. এস-পেজ এবং অ্যান্টি-এইচ. এ অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে ওয়েস্টার্ন ব্লটিং ব্যবহার করে। 1 দুটি প্রধান ক্রস-লিঙ্কযুক্ত প্রজাতি তৈরি করেছিল যার আণবিক ওজন স্ম্যাড 2-এসএইচ 2-এর ডাইমার এবং ট্রিমারের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। সেই ক্রস-লিঙ্কার ছাড়া, ডাইমার এবং ট্রিমার অ-বিকিরণ 1-এ এবং 2-এ অতিবেগুনি রশ্মি বিকিরণের আগে এবং পরে সবেমাত্র সনাক্ত করা হয়েছিল। প্রমাণ করে যে এল-ফটো-মেথিওনিন ইপিএল-এর সাথে ব্যবহার করা যেতে পারে এবং একটি পিটিএম-এর উপর নির্ভরশীল একটি ক্ষণস্থায়ী এমএইচ2-এমএইচ2 মিথস্ক্রিয়া নির্ধারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। কোলেস্টেরল হোমিওস্ট্যাসিসে ফটো-মেথিওনিন প্রোটিন ইন্টারঅ্যাকশন কমপ্লেক্স এবং মেমব্রেন প্রোটিনের কার্যকারিতার ব্যবহার আগে যেমন উল্লেখ করা হয়েছে, বিজ্ঞানী মনিকা সুচানেক, আন্না র্যাডজিকোভস্কি এবং ক্রিস্টোফ থিয়েল তাদের প্রাকৃতিক পরিবেশে প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া অধ্যয়ন করতে চেয়েছিলেন। বিশেষত, ঝিল্লি প্রোটিনগুলি (একটি কমপ্লেক্সে এবং এসসিএপি, ইনসিগ-1 এবং এসআরইবিপি) কোলেস্টেরল হোমিওস্ট্যাসিস নিয়ন্ত্রণ করে যাতে তারা জানতে চায় যে তাদের কার্যকারিতা কী এবং জটিল কাঠামো কী। তারা যা খুঁজে পেয়েছিল তা হল এই আলোক-প্রতিক্রিয়াশীল অ্যামিনো অ্যাসিডের ব্যবহার স্তন্যপায়ী কোষ দ্বারা প্রোটিনে দক্ষতার সাথে অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল, তবে পরিবর্তিত টিআরএনএ (ট্রান্সফার আরএনএ) বা এএআরএস (অ্যামিনোসিল টিআরএনএ সংশ্লেষণ) ব্যবহার করার প্রয়োজন ছিল না যা নির্দিষ্ট ক্রস-লিঙ্কিংয়ের অনুমতি দেয়। এই ক্রস-লিঙ্কিং ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দ্বারা নির্ধারিত হতে পারে এবং তারা ইনসিগ-1 এবং পিজিআরএমসি1 (একটি প্রোজেস্টেরন-বাইন্ডিং মেমব্রেন প্রোটিন) এর মধ্যে একটি সরাসরি মিথস্ক্রিয়া আবিষ্কার করেছিল। চারটি ঝিল্লি প্রোটিনই এন্ডোপ্লাজমিক রেটিকুলামে পাওয়া যায় এবং কমপ্লেক্সটি কম কোলেস্টেরলের মাত্রায় সাড়া দেয়। এইচ. এ (হেমাগ্লুটিনিন ট্যাগযুক্ত পি. জি. আর. এম. সি1) এবং মাইক ট্যাগযুক্ত ইনসিগ-1 সহ কোষগুলি (সি. ও. এস. 7) ফটো-মেট সহ এবং ছাড়াই জন্মায়। ফটো-মেট-এর উপস্থিতিতে, ইনসিগ-1 এবং এসসিএপি পিজিআরএমসি1-এর সাথে সংযুক্ত ছিল; বিশেষত, ইনসিগ-1 ক্রস-লিঙ্কের একটি শক্তিশালী ব্যান্ড ছিল। এইচ. এ-তে একটি অ্যান্টিবডি দিয়ে ইমিউনোপ্রিসিপিটিং ডিটারজেন্ট-এক্সট্র্যাক্ট দ্বারা ক্রস-লিঙ্কিং সনাক্ত করা হয়েছিল, তারপরে মাইক-এর অ্যান্টিবডি দিয়ে ওয়েস্টার্ন ব্লটিং ব্যবহার করে ইনসিগ-1-এর জন্য প্রিসিপিট্যান্ট পরীক্ষা করা হয়েছিল। একটি অভিন্ন ব্যান্ড সনাক্তকরণের বিপরীত ক্রমটি করতে দেখা গেছে; যার অর্থ মাইক অ্যান্টিবডি ইমিউনোপ্রিসিপিট করা হয়েছিল এবং তারপরে এইচএ অ্যান্টিবডি দিয়ে ব্লটিং করা হয়েছিল। সুতরাং, পদ্ধতিটি কাজ করার জন্য প্রমাণিত হয়েছিল যে ফটো-মেট প্রোটিনগুলিকে ক্রস-লিঙ্ক করতে পারে, তবে এই ক্রস-লিঙ্কের শারীরবৃত্তীয় প্রভাবগুলি এখনও নির্ধারিত হয়নি। মাস স্পেকট্রোমেট্রি প্রোটিনের সাথে প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া অধ্যয়নের জন্য প্রোটিন ন্যানোপ্রোবের ব্যবহার একটি প্রোটিন ন্যানোপ্রোব ব্যবহার করে অধ্যয়ন করা হয়েছিল (যা ক্রস-লিঙ্কিং সক্ষম করে) যা প্রোটিনের মধ্যে ফটো-মেথিওনাইন প্রবর্তন করে (রিকম্বিনেন্ট এক্সপ্রেশনের সময়) যা প্রোটিনকে তার সংরক্ষিত কাঠামো বজায় রাখার দিকে পরিচালিত করে এবং তার মিথস্ক্রিয়ার জন্য ম্যাপ আউট করার ক্ষমতা রাখে। মডেলটি যোগাযোগ পৃষ্ঠের একটি অঞ্চল হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল যা 14-3-3 ζ প্রোটিনের দুটি অণুর মধ্যে একটি সুপরিচিত মিথস্ক্রিয়ায় (হোমোডিমেরাইজেশন) জড়িত। একবার ফটো-মেথিওনিন চালু হয়ে গেলে এবং ইউভি-আলো ব্যবহার করে সক্রিয় হয়ে গেলে, এটি কোনও নির্দিষ্টতা ছাড়াই ক্রস-লিঙ্ক করতে পারে (যার অর্থ কোনও গোষ্ঠী নেই) এবং লিঙ্কগুলির দৈর্ঘ্য শূন্য। উচ্চ রেজোলিউশন ভর স্পেকট্রোমেট্রি বা এমএস (এমনকি এমএস/এমএস) তখন ক্রস-লিঙ্কযুক্ত অবশিষ্টাংশ এবং প্রতিক্রিয়া ব্যাসার্ধ নির্ধারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে; যা গবেষকদের প্রোটিনের সমপরিমাণ বৈশিষ্ট্য এবং গবেষণা করার অনুমতি দেয়। ফটো-মেথিওনিনের সাথে উচ্চ-রেজোলিউশন এমএস ব্যবহারের সুবিধা রয়েছে কারণ এটি আবার প্রোটিনকে তার স্থানীয় অবস্থায় থাকতে দেয়, অল্প পরিমাণে প্রোটিন ব্যবহার করার সময় যুক্তিসঙ্গত সময় স্কেল রয়েছে। রাসায়নিক ক্রস-লিঙ্কিংয়ের তুলনায় ফটো-অ্যাক্টিভ ক্রস-লিঙ্কার (ফটো-মেথিওনাইন) ব্যবহার করে প্রতিক্রিয়ার নির্দিষ্টতা এবং সীমাবদ্ধতার ক্ষেত্রেও কম সীমাবদ্ধতা রয়েছে। প্রোটিন ন্যানোপ্রোব থেকে সংযুক্ত ফটো-ইনিশিয়েটেড ক্রস-লিঙ্কিংয়ের এই পদ্ধতিটি এমএস-এর সাথে মিলিতভাবে কেবল হোমোডিমার গঠনই নয়, অলিগোমার এবং তত্ত্বগতভাবে; হেটেরোমার (যেমন প্রোটিন-প্রোটিন মিশ্রণের গঠন এবং এর কার্যকারিতা) চিহ্নিত করতে কার্যকর হতে পারে। ফটো-সাইটোক্রোম বি5 ব্যবহার করে সাইটোক্রোম পি450 ইলেক্ট্রন-ট্রান্সপোর্ট চেইন অধ্যয়নের ক্ষমতা সাইটোক্রোম বি5 প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া ম্যাপ করার জন্য ফটো-মেথিওনিনের সাথে সংশ্লেষিত হয়েছিল এবং স্তন্যপায়ী মিশ্র ফাংশন অক্সিডেস সিস্টেম (এমএফও নামেও পরিচিত) অধ্যয়নের জন্য এর কাঠামোও চিহ্নিত করা হয়েছিল। এই সিস্টেমটি এন্ডোপ্লাজমিক রেটিকুলামের ঝিল্লিতে অবস্থিত এবং এটি সাইটোক্রোম পি450, এন. এ. ডি. পি. এইচঃ সাইটোক্রোম পি450 রিডাক্টেজ এবং সাইটোক্রোম বি5 সহ এন. এ. ডি. এইচঃ সাইটোক্রোম বি5 রিডাক্টেজ নিয়ে গঠিত। একবার সাইটোক্রোম বি5 কমপ্লেক্সে ফটো-মেথিওনিন অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল (যার অর্থ ফটো-মেটকে মেথিওনিনের পরিবর্তে প্রতিস্থাপন করা হয়েছিল এবং এখন ফটো-সাইট বি5), ফটো-সাইট বি5 এবং সাইটোক্রোম পি450-কে ইউভি-আলোতে রাখা হয়েছিল এবং পণ্যগুলি এসডিএস-পেজ ব্যবহার করে অধ্যয়ন করতে সক্ষম হয়েছিল; এই পদ্ধতিতে তিনটি ক্রস-লিঙ্ক দেখানো হয়েছিল। ফটো-মেথিওনিন ফটো-সাইট বি5 ম্যাপিংয়ে সফল প্রমাণিত হয়েছিল কারণ মাল্ডি-টিওএফ পদ্ধতিতে তিনটি অলিগোমার (কাইমোট্রিপ্টিক পেপটাইড থেকে) দেখানো হয়েছিল যা ফটো-সাইট বি5 এবং সাইটোক্রোম পি450 দ্বারা 1:1,1:2 এবং 2:1 এর আণবিক ওজনের অনুপাতে গঠিত ছিল। সাইটোক্রোম পি450 এবং সাইটোক্রোম বি5 অধ্যয়নে ফটো-মেথিওনিনকে এখানে যে বিষয়টি এতটাই কার্যকর করে তোলে তা হল এই পদ্ধতিটি কেবল দ্রাবকের সংস্পর্শে আসা অঞ্চলে নয়, স্থানীয় পরিবেশেও ম্যাপ করা প্রোটিন-প্রোটিন ইন্টারফেস নয়; ঝিল্লি। একটি সাধারণ ক্রস-লিঙ্কিং পদ্ধতি শুধুমাত্র দ্রাবক উন্মুক্ত অঞ্চলে কাজ করতে পারে, যা আরও একবার প্রমাণ করে যে ফটো-মেথিওনিন তাদের স্থানীয় পরিবেশে প্রোটিনের সাথে এই প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া ম্যাপ করতে কার্যকর। ল্যামিনিন γ1-এর সাথে মিথস্ক্রিয়া করা নিডোজেন-1-এর প্রোটিন কাঠামো বিশ্লেষণ ল্যামিনিনের বেসমেন্ট ঝিল্লিতে পাওয়া অ-কোলাজেনস প্রোটিন এবং অ-সমযোজী স্ব-মিথস্ক্রিয়ার মাধ্যমে নেটওয়ার্ক গঠন করে। নিডোজেন (এনট্যাক্টিন নামেও পরিচিত) হল সালফেটেড মনোমেরিক গ্লাইকোপ্রোটিন যা উচ্চতর জীবের বেসমেন্ট ঝিল্লিতে সর্বব্যাপী উপস্থিত থাকে। নিডোজেন বেসমেন্ট গঠনে সহায়তা করে। ল্যামিনিন এবং নিডোজেন উভয়ের উপস্থিতিতে, উভয়ই একটি কমপ্লেক্সে 1:1 এর স্টোইকিওমেট্রি সম্পর্ক রাখার জন্য একে অপরের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে। ল্যামিনিন γ1-এর ছোট বাহু অধ্যয়নের জন্য, ফটো মেথিওনিন নিডোজেন-1, ল্যামিনিন γ1 LEb2-4 এবং ল্যামিনিন γ1 ছোট বাহু উভয়কেই প্রবর্তন করে এই দেখতে যে এই ফটো-ক্রস লিঙ্কিং পদ্ধতিটি কাঠামোর মানচিত্র তৈরি করতে পারে কিনা। ক্রস-লিঙ্ক করার আগে এমএস/এমএস বিশ্লেষণ করা হয়েছিল যাতে দেখা যায় যে শুধুমাত্র 13-25% মেথিওনাইনগুলি অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছে, কিন্তু একবার ইউভি-এ-প্ররোচিত বা অন্য ক্রস-লিঙ্কার, বিএস2জি-মধ্যস্থ ক্রস-লিঙ্ক (একটি হোমোবিফাংশানাল ক্রস-লিঙ্কার), ফটো-মেথিওনাইনের শতাংশ 35 শতাংশে বৃদ্ধি পেয়েছে। উভয় ক্রস-লিঙ্কারই ফাংশনগুলি বুঝতে সাহায্য করার জন্য গণনামূলক এবং পরীক্ষামূলক উভয় ক্ষেত্রেই অতিরিক্ত কাঠামোগত অন্তর্দৃষ্টি দেখিয়েছে। ডাইমেরিক স্ট্রাকচার এবং অলিগোমেরিক স্ট্রাকচার সাইক্লোঅক্সিজেনেস-2 (সিওএক্স-2) এবং মাইক্রোসোমাল প্রোস্টাগ্ল্যান্ডিন ই2 সিনথেস-1 (এমপিজিইএস-1) কাঠামোর প্রকাশ ফটো-মেথিওনিন (ফটো-অ্যাক্টিভেটেবল) এবং বাইফাংশানাল ক্রস লিঙ্কার উভয়ই ব্যবহার করে অধ্যয়ন করা হয়েছিল। সিওএক্স-2-এ ব্যবহৃত ফটো-মেথিওনিন বাইফাংশানাল ক্রস-লিঙ্কারের মতো দেখিয়েছিল যে একটি ডাইমেরিক কাঠামো ছিল যা এনজাইমের স্ফটিক কাঠামোর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল। এম. পি. জি. ই. এস-1-এ, মানব কোষগুলি (এ549) ডিউসিনিমিডাইল সুবেরেট (রাসায়নিক ক্রস-লিঙ্কার) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল এবং ফটো-মেথিওনিনের সাথে চিকিত্সা করার সময় 33 কে. ডি. এ-এর একটি ডাইমার এবং 45 কে. ডি. এ-এর একটি ট্রাইমার একই আণবিক ওজনের (33 কে. ডি. এ) একটি ডাইমার এবং দুটি অনুমানমূলক ট্রাইমার (50 কে. ডি. এ এবং 55 কে. ডি. এ) পেয়েছিল। একবার একটি এম. পি. জি. ই. এস-1 ইনহিবিটর (এম. এফ. 63) চালু করা হয়েছিল; এটি 50কে. ডি. এ এবং 55কে. ডি. এ কমপ্লেক্স গঠনে বাধা দিয়েছিল। রাসায়নিক ক্রস-লিঙ্কার দ্বারা প্রাপ্ত ডাইমার এবং ট্রিমার ইনহিবিটার দ্বারা প্রভাবিত হয়নি। তবুও, ফটো-মেথিওনিন বা ডিউসিনিমিডাইল সুবেরেট সিওএক্স-2 এবং এমপিজিইএস-1-এর মধ্যে কোনও প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া দেখায়নি এবং এটি বিভিন্ন কারণে হতে পারে। ফটো-মেথিওনিনের জন্য; এই সময়ে কম অন্তর্ভুক্তির কারণে হতে পারে কারণ এটি 0.7% ছিল। সুতরাং, এম. পি. জি. ই. এস-1-এর জন্য; এতে 152টি অ্যামিনো অ্যাসিড রয়েছে তাই প্রতি মনোমারে শুধুমাত্র একটি ফটো-মেথিওনিন অন্তর্ভুক্ত করা হবে। এর অর্থ হ 'ল একটি নির্দিষ্ট মেথিওনিন প্রতিস্থাপন করা হবে না যাতে ফলস্বরূপ এমপিজিইএস-1 এর বৈচিত্র্যময় জনসংখ্যার ফলে বিভিন্ন ক্রস-লিঙ্ক হয়। যদিও এটি কোনও প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া দেখায়নি, তবুও এটি অলিগোমেরিক কাঠামো নির্ধারণের উপরে কোষের ঝিল্লিতে প্রতিরোধক-প্ররোচিত প্রোটিন গঠনমূলক পরিবর্তনগুলি সনাক্ত করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। এসচেরিচিয়া কোলাই কোষে রিকম্বিনেন্ট প্রোটিন লেবেল করার জন্য ফটো-মেথিওনিন ব্যবহার করা যেতে পারে; যদিও সাধারণভাবে মেথিওনিন একটি বিরল অ্যামিনো অ্যাসিড, যার অর্থ এটি শুধুমাত্র সীমিত কাঠামোগত তথ্য দিতে পারে। তবুও, ফটো-মেথিওনিনকে সিএ2 + নিয়ন্ত্রক প্রোটিন ক্যালমোডুলিনে (সিএএম যা ছিল 17-কেডিএ) অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল যার নয়টি মেথিওনিন রয়েছে এবং মাস স্পেকট্রোমেট্রি (এমএস) এর মাধ্যমে অধ্যয়ন করা হয়েছিল। এই পদ্ধতিকে যা আলাদা করে তোলে তা হল কোষে অন্তর্ভুক্ত করার জন্য ডি. এম. ই. এম (ডালবেক্কোর পরিবর্তিত ঈগলের সীমাবদ্ধ মাধ্যম) বা ডায়ালাইজড ভ্রূণের গবাদি পশুর সিরামের পরিবর্তে খনিজ লবণ মাধ্যমের ব্যবহার। খনিজ লবণ মাধ্যমের ব্যবহার শুরু থেকেই কোষগুলিকে অন্যান্য প্রটোকলের জটিল ধাপগুলি (এলবি মাধ্যমে কোষগুলিকে ইনকিউবেট করা, তারপরে ধোয়া এবং আরও হ্রাসকৃত মাধ্যমে ইনকিউবেট করা) দূর করার জন্য বৃদ্ধি করার অনুমতি দেয়, যার অর্থ ফটো-মেথিওনিন কোষের বৃদ্ধির একেবারে শুরুতে অন্তর্ভুক্ত করা যেতে পারে যার 30 শতাংশের বেশি ফলন ছিল। কোষের বৃদ্ধি প্রক্রিয়া চলাকালীন ফটো-মেথিওনাইন কোনও ক্ষতি দেখায়নি এবং একবার ইউভি-এ আলো দ্বারা ফটো-অ্যাক্টিভেটেড হয়ে গেলে, সিএএম-এর নয়টি স্বতন্ত্র ক্রস-লিঙ্ক সাইট ছিল যখন এমএস নির্ধারণ করেছিল যে সিএএম লেবেলযুক্ত ফটো-মেথিওনাইনের শিখর রয়েছে। ফটো-মেথিওনিন শুধুমাত্র থ্রিডি প্রোটিন কাঠামো ম্যাপিং, প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া অধ্যয়নের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে না, তবে এখন প্রোটিনের হাইড্রোফোবিক অঞ্চলগুলিও ব্যবহার করা যেতে পারে। তথ্যসূত্র জৈব রসায়ন সনাক্তকরণ পদ্ধতি আলোক রসায়ন আলফা-অ্যামিনো অ্যাসিড অ্যামিনো অ্যাসিড ডেরিভেটিভস ডায়াজিরিন