Super-resolution microscopy
সুপার-রেজোলিউশন মাইক্রোস্কোপি হ 'ল অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপির কৌশলগুলির একটি সিরিজ যা এই জাতীয় চিত্রগুলিকে বিচ্ছুরণ সীমা দ্বারা আরোপিত রেজোলিউশনের চেয়ে বেশি রেজোলিউশন করার অনুমতি দেয়, যা আলোর বিচ্ছুরণের কারণে হয়। সুপার-রেজোলিউশন ইমেজিং কৌশলগুলি নিকট-ক্ষেত্রের (ফোটন-টানেলিং মাইক্রোস্কোপি এবং সেইসাথে যারা পেন্ড্রি সুপারলেন্স এবং নিকট-ক্ষেত্র স্ক্যানিং অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে) বা দূর-ক্ষেত্রের উপর নির্ভর করে। যে কৌশলগুলি পরেরটির উপর নির্ভর করে সেগুলির মধ্যে এমন কৌশলগুলি রয়েছে যা বিচ্ছুরণ-সীমার বাইরে কেবলমাত্র পরিমিতভাবে (প্রায় দুইটির একটি ফ্যাক্টর পর্যন্ত) রেজোলিউশন উন্নত করে, যেমন বন্ধ পিনহোলের সাথে কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি বা ডিকনভোলিউশন বা ডিটেক্টর-ভিত্তিক পিক্সেল পুনর্বিন্যাসের মতো গণনামূলক পদ্ধতি দ্বারা সহায়তা করে (যেমন। রি-স্ক্যান মাইক্রোস্কোপি, পিক্সেল রিঅ্যাসাইনমেন্ট), 4পিআই মাইক্রোস্কোপ এবং সিম ও এসএমআই-এর মতো স্ট্রাকচার্ড-ইলুমিনেশন মাইক্রোস্কোপি প্রযুক্তি। দূরবর্তী ক্ষেত্রে সুপার-রেজোলিউশন মাইক্রোস্কোপির জন্য দুটি প্রধান গোষ্ঠী রয়েছে যা অনেক বড় ফ্যাক্টর দ্বারা রেজোলিউশনকে উন্নত করতে পারেঃ নির্ধারক সুপার-রেজোলিউশনঃ জৈবিক মাইক্রোস্কোপি, ফ্লুরোফোরে সর্বাধিক ব্যবহৃত নির্গমনকারী, উত্তেজনার জন্য একটি অরৈখিক প্রতিক্রিয়া দেখায়, যা রেজোলিউশন বাড়ানোর জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। এই ধরনের পদ্ধতির মধ্যে রয়েছে এস. টি. ই. ডি, জি. এস. ডি, আর. ই. এস. ও. এল. এফ. টি এবং এস. এস. আই. এম। স্টোকাস্টিক সুপার-রেজোলিউশনঃ অনেক আণবিক আলোর উৎসের রাসায়নিক জটিলতা তাদের একটি জটিল সাময়িক আচরণ দেয়, যা কাছাকাছি বেশ কয়েকটি ফ্লুরোফোরকে পৃথক সময়ে আলো নির্গত করতে ব্যবহার করা যেতে পারে এবং এর ফলে সময়ের সাথে সাথে সমাধানযোগ্য হয়ে ওঠে। এই পদ্ধতিগুলির মধ্যে রয়েছে সুপার-রেজোলিউশন অপটিক্যাল ফ্লাকুয়েশন ইমেজিং (এস. ও. এফ. আই) এবং সমস্ত একক-অণু স্থানীয়করণ পদ্ধতি (এস. এম. এল. এম), যেমন এস. পি. ডি. এম, এস. পি. ডি. এম. ফাইমোড, পি. এ. এল. এম, এফ. পি. এ. এল. এম, এস. টি. ও. আর. এম এবং ডি. এস. টি. ও. আর. এম। 2014 সালের 8ই অক্টোবর রসায়নে নোবেল পুরস্কার দেওয়া হয় ডব্লিউ. ই. এরিক বেটজিগকে। মোয়ার্নার এবং স্টেফান হেল "অতি-সমাধানকৃত ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির বিকাশ"-এর জন্য, যা "ন্যানোডিমেনশনে অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপি" নিয়ে আসে। বায়োমেডিকাল রিসার্চ কমিউনিটি দ্বারা সুপার-রেজোলিউশন মাইক্রোস্কোপির বিভিন্ন পদ্ধতি ক্রমবর্ধমানভাবে গ্রহণ করা হচ্ছে এবং এই কৌশলগুলি আণবিক স্তরে জৈবিক কার্যকারিতা বোঝার জন্য অপরিহার্য সরঞ্জাম হয়ে উঠছে। 1978 সালের মধ্যে, অ্যাবে সীমা ভাঙার জন্য প্রথম তাত্ত্বিক ধারণাগুলি তৈরি করা হয়েছিল, যা একটি কনফোকাল লেজার-স্ক্যানিং ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ হিসাবে একটি 4পিআই মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করার আহ্বান জানিয়েছিল যেখানে আলোটি সমস্ত দিক থেকে একটি সাধারণ ফোকাসে কেন্দ্রীভূত হয় যা 'পয়েন্ট-বাই-পয়েন্ট' উত্তেজনার সাথে 'পয়েন্ট-বাই-পয়েন্ট' সনাক্তকরণের মাধ্যমে বস্তুটিকে স্ক্যান করতে ব্যবহৃত হয়। তবে 1978 সাল থেকে প্রকাশনাটি একটি অনুপযুক্ত শারীরিক উপসংহার টেনেছিল (অর্থাৎ। আলোর একটি বিন্দুর মতো বিন্দু) এবং কঠিন কোণের অন্য দিক যোগ করার প্রকৃত সুবিধা হিসাবে অক্ষীয় রেজোলিউশন বৃদ্ধি সম্পূর্ণরূপে মিস করেছে। একটি রসায়ন ব্লগের সাব-ডিফ্রাকশন মাইক্রোস্কোপি কৌশলগুলির পর্যালোচনা থেকে নিম্নলিখিত কিছু তথ্য (অনুমতি সহ) সংগ্রহ করা হয়েছিল। 1986 সালে, উদ্দীপিত নির্গমনের উপর ভিত্তি করে একটি সুপার-রেজোলিউশন অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ ওখোনিন দ্বারা পেটেন্ট করা হয়েছিল। সুপার-রেজোলিউশন কৌশল ফোটন টানেলিং মাইক্রোস্কোপি (পি. টি. এম) স্থানীয় বর্ধন/এ. এন. এস. ও. এম/অপটিক্যাল ন্যানো-অ্যান্টেনাস নিয়ার-ফিল্ড অপটিক্যাল র্যান্ডম ম্যাপিং (এন. ও. আর. এম) মাইক্রোস্কোপি নিয়ার-ফিল্ড অপটিক্যাল র্যান্ডম ম্যাপিং (এন. ও. আর. এম) মাইক্রোস্কোপি হল একটি দূর-ক্ষেত্র মাইক্রোস্কোপ দ্বারা অপটিক্যাল নিয়ার-ফিল্ড অধিগ্রহণের একটি পদ্ধতি যা একটি নিমজ্জন তরলে ন্যানো পার্টিকেলের ব্রাউনিয়ান গতি পর্যবেক্ষণের মাধ্যমে করা হয়। এন. ও. আর. এম স্টোকাস্টিকভাবে চলমান ন্যানো পার্টিকেল দ্বারা বস্তুর পৃষ্ঠ স্ক্যানিং ব্যবহার করে। মাইক্রোস্কোপের মাধ্যমে, ন্যানো পার্টিকেলগুলি প্রতিসম গোলাকার দাগের মতো দেখায়। স্পট প্রস্থ পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশন (~ 250 এনএম) এর সমতুল্য এবং মাইক্রোস্কোপ রেজোলিউশন দ্বারা সংজ্ঞায়িত করা হয়। প্রদত্ত কণার পার্শ্বীয় স্থানাঙ্কগুলি অণুবীক্ষণ যন্ত্রের রেজোলিউশনের তুলনায় অনেক বেশি নির্ভুলতার সাথে মূল্যায়ন করা যেতে পারে। অনেক ফ্রেম থেকে তথ্য সংগ্রহ করে মাইক্রোস্কোপের পুরো দেখার ক্ষেত্র জুড়ে নিকটবর্তী ক্ষেত্রের তীব্রতার বণ্টনের মানচিত্র তৈরি করা যেতে পারে। এনএসওএম এবং এএনএসওএম-এর তুলনায় এই পদ্ধতিতে টিপ পজিশনিংয়ের জন্য কোনও বিশেষ সরঞ্জামের প্রয়োজন হয় না এবং এর দেখার একটি বড় ক্ষেত্র এবং ফোকাসের গভীরতা রয়েছে। বিপুল সংখ্যক স্ক্যানিং "সেন্সর"-এর কারণে কেউ কম সময়ে ছবি অর্জন করতে পারে। 4পিআই এ 4পিআই মাইক্রোস্কোপ হল একটি উন্নত অক্ষীয় রেজোলিউশন সহ একটি লেজার-স্ক্যানিং ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ। 500-700 nm-এর সাধারণ মানকে 100-150 nm-এ উন্নীত করা যেতে পারে, যা স্ট্যান্ডার্ড কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির তুলনায় 5-7 গুণ কম আয়তন সহ প্রায় গোলাকার ফোকাল স্পটের সাথে মিলে যায়। দুটি বিপরীত উদ্দেশ্য লেন্স ব্যবহার করে রেজোলিউশনের উন্নতি অর্জন করা হয়, যা উভয়ই একই জ্যামিতিক অবস্থানে কেন্দ্রীভূত। এছাড়াও, দুটি অবজেক্টিভ লেন্সের প্রত্যেকটির মাধ্যমে অপটিক্যাল পথের দৈর্ঘ্যের পার্থক্য যত্ন সহকারে হ্রাস করা হয়। এর মাধ্যমে, উভয় উদ্দেশ্যের সাধারণ কেন্দ্রস্থলে বসবাসকারী অণুগুলি উভয় দিক থেকে সুসঙ্গতভাবে আলোকিত করা যেতে পারে এবং প্রতিফলিত বা নির্গত আলো সুসঙ্গতভাবে সংগ্রহ করা যেতে পারে, অর্থাৎ। ডিটেক্টরের উপর নির্গত আলোর সুসঙ্গত সুপারপজিশন সম্ভব। আলোকসজ্জা এবং সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহৃত কঠিন কোণটি বৃদ্ধি করা হয় এবং আদর্শ ক্ষেত্রে পৌঁছায়, যেখানে নমুনাটি আলোকিত করা হয় এবং একই সাথে সমস্ত দিক থেকে সনাক্ত করা হয়। এখন পর্যন্ত, 4পিআই অণুবীক্ষণ যন্ত্রের সর্বোত্তম গুণমান স্থির কোষে এস. টি. ই. ডি অণুবীক্ষণ যন্ত্র এবং জীবিত কোষে পরিবর্তনযোগ্য প্রোটিনের সাথে রিসল্ফট অণুবীক্ষণ যন্ত্রের সংমিশ্রণে পৌঁছেছে। স্ট্রাকচার্ড ইলুমিনেশন মাইক্রোস্কোপি (সিম) স্ট্রাকচার্ড ইলুমিনেশন মাইক্রোস্কোপি (সিম) পর্যবেক্ষণযোগ্য অঞ্চলের বাইরে ফ্রিকোয়েন্সি স্থান থেকে তথ্য সংগ্রহ করে স্থানিক রেজোলিউশন বাড়ায়। এই প্রক্রিয়াটি পারস্পরিক স্থানে করা হয়ঃ একটি এসআই চিত্রের ফুরিয়ার রূপান্তর (এফটি) পারস্পরিক স্থানের বিভিন্ন অঞ্চল থেকে অতিরিক্ত তথ্য ধারণ করে; বেশ কয়েকটি ফ্রেম সহ যেখানে আলোকসজ্জা কিছু পর্যায়ে স্থানান্তরিত হয়, এফটি চিত্রটিকে গণনামূলকভাবে পৃথক করা এবং পুনর্গঠন করা সম্ভব, যার অনেক বেশি রেজোলিউশন তথ্য রয়েছে। বিপরীত এফটি পুনর্গঠিত চিত্রটিকে একটি সুপার-রেজোলিউশন ছবিতে ফিরিয়ে দেয়। সিম মাইক্রোস্কোপি সম্ভাব্যভাবে কিছু চিকিৎসা নির্ণয়ের জন্য একটি সরঞ্জাম হিসাবে ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপিকে প্রতিস্থাপন করতে পারে। এর মধ্যে রয়েছে কিডনির ব্যাধি, কিডনির ক্যান্সার এবং রক্তের রোগ নির্ণয়। যদিও "স্ট্রাকচার্ড ইলুমিনেশন মাইক্রোস্কোপি" শব্দটি পরবর্তী বছরগুলিতে অন্যদের দ্বারা উদ্ভাবিত হয়েছিল, গুয়েরা (1995) প্রথম ফলাফল প্রকাশ করেছিলেন যেখানে 50 এনএম পিচ গ্র্যাটিং দ্বারা প্যাটার্ন করা আলো 50 এনএম পিচের দ্বিতীয় গ্র্যাটিংকে আলোকিত করেছিল, গ্র্যাটিংগুলি একে অপরের সাপেক্ষে ঘোরানো ছিল বিবর্ধন অর্জনের জন্য প্রয়োজনীয় কৌণিক পরিমাণ দ্বারা। যদিও আলোকিত তরঙ্গদৈর্ঘ্য 650 এনএম ছিল, 50 এনএম গ্র্যাটিং সহজেই সমাধান করা হয়েছিল। এটি অ্যাবে রেজোলিউশন সীমার 232 এনএম-এর তুলনায় প্রায় 5 গুণ উন্নতি দেখিয়েছে যা ব্যবহৃত সংখ্যাসূচক অ্যাপারচার এবং তরঙ্গদৈর্ঘ্যের জন্য প্রাপ্ত সবচেয়ে ছোট হওয়া উচিত ছিল। এই কাজের আরও বিকাশে, গুয়েরা দেখিয়েছেন যে অতি-সমাধানকৃত পার্শ্বীয় ভূসংস্থান বিবর্তিত ক্ষেত্রের পর্যায়-স্থানান্তরের মাধ্যমে অর্জন করা হয়। গুয়েরাকে পৃথকভাবে বা সহকর্মীদের সাথে বেশ কয়েকটি মার্কিন পেটেন্ট জারি করা হয়েছিল এবং পোলারয়েড কর্পোরেশনকে বরাদ্দ করা হয়েছিল। অপটিক্যাল ডেটা স্টোরেজ এবং মাইক্রোস্কোপি-তে এই সুপার-রেজোলিউশন কৌশলটি ব্যবহারের জন্য ডায়ার এনার্জি সিস্টেমস, ক্যালিমেট্রিক্স ইনকর্পোরেটেড এবং ন্যানোপটেক কর্পোরেশন দ্বারা এই প্রযুক্তির লাইসেন্স সংগ্রহ করা হয়েছিল। স্থানিকভাবে নিয়ন্ত্রিত আলোকসজ্জা (এস. এম. আই) কাঠামোগত আলোকসজ্জার একটি বাস্তবায়ন স্থানিকভাবে নিয়ন্ত্রিত আলোকসজ্জা (এস. এম. আই) নামে পরিচিত। স্ট্যান্ডার্ড স্ট্রাকচার্ড আলোকসজ্জার মতো, এস. এম. আই কৌশলটি একটি মাইক্রোস্কোপের পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশনকে (পি. এস. এফ) উপযুক্ত পদ্ধতিতে পরিবর্তন করে। তবে এই ক্ষেত্রে, "অপটিক্যাল রেজোলিউশন নিজেই উন্নত হয় না"; পরিবর্তে কাঠামোগত আলোকসজ্জা ফ্লুরোসেন্ট বস্তুর দূরত্ব পরিমাপের নির্ভুলতা সর্বাধিক করতে ব্যবহৃত হয়, "কয়েক দশ ন্যানোমিটারের আণবিক মাত্রায় আকার পরিমাপ সক্ষম করতে"। ভার্টিকো এস. এম. আই মাইক্রোস্কোপ অক্ষ বরাবর এক বা দুটি বিপরীত হস্তক্ষেপকারী লেজার রশ্মি ব্যবহার করে কাঠামোগত আলোকসজ্জা অর্জন করে। ছবি তোলা হচ্ছে এমন বস্তুটি তারপর তরঙ্গ ক্ষেত্রের মধ্য দিয়ে উচ্চ-নির্ভুল পদক্ষেপে সরানো হয়, অথবা তরঙ্গ ক্ষেত্রটি নিজেই পর্যায় পরিবর্তনের মাধ্যমে বস্তুর আপেক্ষিকভাবে সরানো হয়। এর ফলে অক্ষীয় আকার এবং দূরত্বের রেজোলিউশন উন্নত হয়। এসএমআই-কে অন্যান্য সুপার রেজোলিউশন প্রযুক্তির সাথে যুক্ত করা যেতে পারে, উদাহরণস্বরূপ 3ডি লাইমন বা এলএসআই-টিআরএফ-এর সাথে পার্শ্বীয় কাঠামোগত আলোকসজ্জার সাথে মোট অভ্যন্তরীণ প্রতিফলন ইন্টারফেরোমিটার হিসাবে (এই শেষ যন্ত্র এবং কৌশলটি মূলত একটি পর্যায়-স্থানান্তরিত ফোটন টানেলিং মাইক্রোস্কোপ, যা পর্যায়-স্থানান্তরিত ইভানেসেন্ট ক্ষেত্রের সাথে মোট অভ্যন্তরীণ প্রতিফলন হালকা মাইক্রোস্কোপ নিয়োগ করে (গুয়েরা, 1996)। এই এস. এম. আই কৌশলটি পূর্বে অতুলনীয় অপটিক্যাল রেজোলিউশন সহ মানুষের চোখের টিস্যু থেকে বিভাগে অটোফ্লোরোফোর বিতরণের হালকা-অপটিক্যাল চিত্র অর্জনের অনুমতি দেয়। তিনটি ভিন্ন উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্যের (488,568 এবং 647 এনএম) ব্যবহার অটোফ্লোরেসেন্স সংকেত সম্পর্কে বর্ণালী তথ্য সংগ্রহ করতে সক্ষম করে। ম্যাকুলার ডিজেনারেশন দ্বারা প্রভাবিত মানুষের চোখের টিস্যু পরীক্ষা করার জন্য এটি ব্যবহার করা হয়েছে। নির্ধারণমূলক কার্যকরী কৌশল রিভারসিবল স্যাচুরেবল অপটিকাল ফ্লুরোসেন্স ট্রানজিশন (আরইএসওএলএফটি) মাইক্রোস্কোপি হল একটি অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপি যা খুব উচ্চ রেজোলিউশন সহ যা প্রচলিত বা কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি দিয়ে চিত্রায়িত করা যায় না এমন নমুনার বিশদ চিত্র নিতে পারে। রিসল্ফ্টের মধ্যে এস. টি. ই. ডি মাইক্রোস্কোপি এবং জি. এস. ডি মাইক্রোস্কোপির নীতিগুলি সাধারণীকরণ করা হয়েছে। এছাড়াও, আরইএসওএলএফটি বা এসএসআইএম ছাড়া অন্যান্য ধারণার কৌশল রয়েছে। উদাহরণস্বরূপ, নাইট্রোজেন-ভ্যাকেন্সি সেন্টারের অপটিক্যাল এবং গেট বৈশিষ্ট্য ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি, বা স্টিমুলেটেড এমিশন অফ থার্মাল রেডিয়েশন (এস. ই. টি. আর) দ্বারা সুপার-রেজোলিউশন, যা ব্ল্যাক-বডি বিকিরণের অভ্যন্তরীণ সুপার-লাইনারিতি ব্যবহার করে এবং মাইক্রোস্কোপির বাইরে সুপার-রেজোলিউশনের ধারণাকে প্রসারিত করে। স্টিমুলেটেড এমিশন ডিপ্লিশন (এস. টি. ই. ডি) স্টিমুলেটেড এমিশন ডিপ্লিশন মাইক্রোস্কোপি (এস. টি. ই. ডি) দুটি লেজার পালস ব্যবহার করে, ফ্লুরোফোরগুলিকে তাদের ফ্লুরোসেন্ট অবস্থায় উত্তেজিত করার জন্য এক্সাইটেশন পালস এবং স্টিমুলেটেড নির্গমনের মাধ্যমে ফ্লুরোফোরের ডি-এক্সাইটেশন করার জন্য এস. টি. ই পালস। বাস্তবে, এক্সাইটেশন লেজার পালস প্রথমে প্রয়োগ করা হয় যার পরে একটি এস. টি. ই. ডি পালস শীঘ্রই অনুসরণ করে (অবিচ্ছিন্ন তরঙ্গ লেজার ব্যবহার করে পালস ছাড়াই এস. টি. ই. ডি ব্যবহার করা হয়)। উপরন্তু, এস. টি. ই. ডি পালস এমনভাবে পরিবর্তিত হয় যাতে এটিতে একটি শূন্য-তীব্রতা স্পট থাকে যা উত্তেজনা কেন্দ্রস্থলের সাথে মিলে যায়। এস. টি. ই. ডি বিমের তীব্রতার উপর উদ্দীপিত নির্গমনের হারের অ-রৈখিক নির্ভরতার কারণে, ফোকাল এক্সাইটেশন স্পটকে ঘিরে সমস্ত ফ্লুরোফোরগুলি তাদের বন্ধ অবস্থায় থাকবে (ফ্লুরোফোরগুলির স্থল অবস্থা)। এই ফোকাস স্পটটি স্ক্যান করে, একজন চিত্রটি পুনরুদ্ধার করে। সমীকরণ () অনুসারে, এক্সাইটেশন ফোকাল স্পটের পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশনের (পি. এস. এফ) অর্ধেক সর্বোচ্চ (এফ. ডব্লিউ. এইচ. এম) পূর্ণ প্রস্থকে তাত্ত্বিকভাবে এস. টি. ই. ডি পালসের তীব্রতা বাড়িয়ে একটি নির্বিচারে প্রস্থে সংকুচিত করা যেতে পারে। () যেখানে ωr হল পার্শ্বীয় রেজোলিউশন, ω হল বিচ্ছুরণ সীমিত পিএসএফ-এর এফডব্লিউএইচএম, আইম্যাক্স হল এস. টি. ই. ডি লেজারের সর্বোচ্চ তীব্রতা, এবং সম্পৃক্ত নির্গমন হ্রাস অর্জনের জন্য প্রয়োজনীয় প্রান্তিক তীব্রতা। এস. টি. ই. ডি-এর প্রধান অসুবিধা, যা এর ব্যাপক ব্যবহারকে বাধা দিয়েছে, তা হল যন্ত্রপাতি জটিল। একদিকে, একটি চিত্র পুনরুদ্ধারের জন্য নমুনা স্ক্যান করার প্রয়োজনের কারণে বড় ক্ষেত্রের জন্য চিত্র অধিগ্রহণের গতি তুলনামূলকভাবে ধীর। অন্যদিকে, ছোট ক্ষেত্রের জন্য এটি খুব দ্রুত হতে পারেঃ প্রতি সেকেন্ডে 80 ফ্রেম পর্যন্ত রেকর্ডিং দেখানো হয়েছে। এস. টি. ই. ডি-এর সাথে যুক্ত একটি বড় ইস মানের কারণে, একটি উচ্চ-তীব্রতার উত্তেজনা পালসের প্রয়োজন হয়, যা নমুনার ক্ষতি করতে পারে। গ্রাউন্ড স্টেট ডিপ্লিশন (জি. এস. ডি) গ্রাউন্ড স্টেট ডিপ্লিশন মাইক্রোস্কোপি (জি. এস. ডি মাইক্রোস্কোপি) একটি ফ্লুরোফোরের ট্রিপলেট অবস্থাকে অফ-স্টেট এবং সিঙ্গলেট অবস্থাকে অন-স্টেট হিসাবে ব্যবহার করে, যার মাধ্যমে একটি এক্সাইটেশন লেজার ব্যবহার করা হয় একক অবস্থার অণুর পরিধিতে ফ্লুরোফোরগুলিকে ট্রিপলেট অবস্থায় চালিত করতে। এটি অনেকটা এস. টি. ই. ডি-এর মতো, যেখানে অফ-স্টেট হল ফ্লুরোফোরের স্থল অবস্থা, যে কারণে সমীকরণ () এই ক্ষেত্রেও প্রযোজ্য। মানটি এস. টি. ই. ডি-এর তুলনায় ছোট, যা অনেক কম লেজার তীব্রতায় সুপার-রেজোলিউশন ইমেজিং সম্ভব করে তোলে। যদিও, এস. টি. ই. ডি-র তুলনায়, জি. এস. ডি-তে ব্যবহৃত ফ্লুরোফোরগুলি সাধারণত কম আলোকস্থায়ী হয়; এবং ত্রয়ী অবস্থার সম্পৃক্ততা উপলব্ধি করা কঠিন হতে পারে। স্যাচুরেটেড স্ট্রাকচার্ড ইলুমিনেশন মাইক্রোস্কোপি (এসএসআইএম) স্যাচুরেটেড স্ট্রাকচার্ড-ইলুমিনেশন মাইক্রোস্কোপি (এসএসআইএম) উত্তেজনা লেজারের তীব্রতার উপর ফ্লুরোফোরের নির্গমনের হারের অরৈখিক নির্ভরশীলতাকে কাজে লাগায়। ফ্লুরোফোরগুলিকে তাদের ফ্লুরোসেন্ট অবস্থায় পরিপূর্ণ করার জন্য প্রয়োজনের কাছাকাছি সর্বোচ্চ তীব্রতার সাথে একটি সাইনোসয়েডাল আলোকসজ্জা প্যাটার্ন প্রয়োগ করে, কেউ মোইরে প্রান্তগুলি পুনরুদ্ধার করে। প্রান্তগুলিতে উচ্চ ক্রমের স্থানিক তথ্য থাকে যা গণনামূলক কৌশল দ্বারা বের করা যেতে পারে। একবার তথ্য বের করার পরে, একটি সুপার-রেজোলিউশন চিত্র পুনরুদ্ধার করা হয়। এস. এস. আই. এম-এর জন্য আলোকসজ্জার প্যাটার্নটি একাধিকবার পরিবর্তন করা প্রয়োজন, কার্যকরীভাবে কৌশলটির সাময়িক রেজোলিউশনকে সীমাবদ্ধ করে। উপরন্তু স্যাচুরেটিং অবস্থার কারণে খুব ফটোস্টেবল ফ্লুরোফোরের প্রয়োজন হয়, যা নমুনার উপর বিকিরণের ক্ষতি করে এবং সম্ভাব্য প্রয়োগগুলিকে সীমাবদ্ধ করে যার জন্য এসএসআইএম ব্যবহার করা যেতে পারে। এই মাইক্রোস্কোপির উদাহরণগুলি স্ট্রাকচার্ড ইলুমিনেশন মাইক্রোস্কোপি (সিম) বিভাগের অধীনে দেখানো হয়েছেঃ 3ডি-সিম মাইক্রোস্কোপি দিয়ে রেকর্ড করা কোষের নিউক্লিয়াস এবং মাইটোটিক পর্যায়ের চিত্র। স্টোকাস্টিক কার্যকরী কৌশল স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি একক-অণু স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি (এস. এম. এল. এম) সমস্ত মাইক্রোস্কোপিক কৌশলগুলির সংক্ষিপ্তসার দেয় যা নির্গমনকারীদের পৃথক করে এবং পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশন (পি. এস. এফ) দিয়ে তাদের চিত্রগুলি ফিট করে সুপার-রেজোলিউশন অর্জন করে। সাধারণত, পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশনের প্রস্থ (~ 250 এনএম) রেজোলিউশনকে সীমাবদ্ধ করে। যাইহোক, একটি বিচ্ছিন্ন নির্গমনকারী দেওয়া হলে, সমীকরণ () অনুসারে কেবল তার তীব্রতার দ্বারা সীমাবদ্ধ নির্ভুলতার সাথে এর অবস্থান নির্ধারণ করতে সক্ষম হয়। () যেখানে αloc হল স্থানীয়করণের নির্ভুলতা, α হল পি. এস. এফ-এর এফ. ডব্লিউ. এইচ. এম (পূর্ণ প্রস্থ সর্বোচ্চ অর্ধেক) এবং এন হল সংগৃহীত ফোটনের সংখ্যা। এই ফিটিং প্রক্রিয়াটি শুধুমাত্র বিচ্ছিন্ন নির্গমনকারীদের জন্য নির্ভরযোগ্যভাবে সম্পাদন করা যেতে পারে (ডিকনভোলিউশন দেখুন), এবং আকর্ষণীয় জৈবিক নমুনাগুলি নির্গমনকারীদের সাথে এত ঘনভাবে চিহ্নিত করা হয় যে সমস্ত নির্গমনকারী একই সময়ে সক্রিয় থাকলে ফিটিং অসম্ভব। এস. এম. এল. এম কৌশলগুলি একই সময়ে নির্গমনকারীদের একটি বিরল উপসেট সক্রিয় করে, এই কয়েকটি নির্গমনকারীকে খুব সঠিকভাবে স্থানীয়করণ করে, তাদের নিষ্ক্রিয় করে এবং অন্য একটি উপসেট সক্রিয় করে এই দ্বিধাদ্বন্দ্বের সমাধান করে। পটভূমি এবং ক্যামেরা পিক্সেলেশন বিবেচনা করে, এবং একটি সাধারণ মাইক্রোস্কোপের পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশন (এয়ার ডিস্ক)-এর জন্য গাউসিয়ান আনুমানিক ব্যবহার করে, তাত্ত্বিক রেজোলিউশন থম্পসন এট আল দ্বারা প্রস্তাবিত হয়। এবং মর্টসেন এট আল দ্বারা সূক্ষ্ম সুর করা হয়েছে। : যেখানে * σ হল একই অণুর কেন্দ্রের অবস্থানগুলির গাউসিয়ান মানক বিচ্যুতি যদি একাধিকবার পরিমাপ করা হয় (যেমন। একটি ভিডিওর ফ্রেম)। (একক মি) * σPSF হল বিন্দু বিস্তার ফাংশনের গাউসীয় মানক বিচ্যুতি, যার FWHM আর্নস্ট অ্যাবে সমীকরণ d = λ/(2 N. A.) অনুসরণ করে। (একক মি) * এ হল প্রতিটি ছবির পিক্সেলের আকার। (একক মি) * এনএসআইজি হল সুদের সমস্ত পিক্সেলের উপর মোট পিএসএফ-এর ফোটন গণনা। (এককহীন) * এন. বি. জি গড় পটভূমি ফোটন প্রতি পিক্সেলে গণনা করে (অন্ধকার গণনা ইতিমধ্যে সরানো হয়েছে), যা সময়ের সাথে সাথে প্রতিটি পিক্সেলের পয়সন বিতরণ পটভূমি শব্দের গাউসিয়ান মানক বিচ্যুতির বর্গ বা শুধুমাত্র পটভূমি শব্দ সহ সমস্ত পিক্সেলের মানক বিচ্যুতি হিসাবে আনুমানিক, σbg2। σbg2 যত বড় হবে, অনুমান তত ভাল হবে (যেমন। σbg2> 10 এর জন্য ভালো, σbg2> 1000 এর জন্য ভালো)। (এককহীন) * রেজোলিউশন এফডব্লিউএইচএম হল গাউসিয়ান স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতির ~ 2.355 গুণ। সাধারণত, স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি ফ্লুরোফোর দিয়ে সঞ্চালিত হয়। উপযুক্ত ফ্লুরোফোর (যেমন। স্টর্মের জন্য) বেশিরভাগ সময় একটি অ-ফ্লুরোসেন্ট অন্ধকার অবস্থায় থাকে এবং সাধারণত কম তীব্রতার একটি উত্তেজনা লেজারের সাহায্যে স্থিরভাবে সক্রিয় হয়। একটি রিডআউট লেজার ফ্লুরোসেন্সকে উদ্দীপিত করে এবং ব্লিচ বা ফটোসুইচগুলি ফ্লুরোফোরগুলিকে একটি অন্ধকার অবস্থায় ফিরিয়ে নিয়ে যায়, সাধারণত 10-100 এমএস-এর মধ্যে। ন্যানোস্কেল টপোগ্রাফি (পিএআইএনটি)-তে ইমেজিংয়ের জন্য পয়েন্ট সঞ্চয়ে, ফ্লুরোফোরগুলি বাঁধাইয়ের আগে ননফ্লুরোসেন্ট এবং পরে ফ্লুরোসেন্ট হয়। ফ্লুরোসেন্ট পর্যায়ে নির্গত ফোটনগুলি একটি ক্যামেরা দিয়ে সংগ্রহ করা হয় এবং ফ্লুরোফোরের ফলস্বরূপ চিত্র (যা পি. এস. এফ দ্বারা বিকৃত হয়) খুব উচ্চ নির্ভুলতার সাথে লাগানো যেতে পারে, এমনকি কয়েকটি অ্যাংস্ট্রমের ক্রমেও। প্রক্রিয়াটি কয়েক হাজার বার পুনরাবৃত্তি করা নিশ্চিত করে যে সমস্ত ফ্লুরোফোর উজ্জ্বল অবস্থার মধ্য দিয়ে যেতে পারে এবং রেকর্ড করা হয়। একটি কম্পিউটার তারপর একটি অতি-সমাধানকৃত চিত্র পুনর্গঠন করে। রেজোলিউশন সর্বাধিক করার জন্য এই পদ্ধতিগুলির জন্য ব্যবহৃত ফ্লুরোফোরগুলির কাঙ্ক্ষিত বৈশিষ্ট্যগুলি হল যে সেগুলি উজ্জ্বল হওয়া উচিত। অর্থাৎ, এগুলির উচ্চ বিলুপ্তি সহগ এবং উচ্চ পরিমাণ ফলন হওয়া উচিত। এগুলির একটি উচ্চ বৈসাদৃশ্য অনুপাতও থাকা উচিত (আলোক অবস্থায় নির্গত ফোটনের সংখ্যা এবং অন্ধকার অবস্থায় নির্গত ফোটনের সংখ্যার মধ্যে অনুপাত)। এছাড়াও, নাইকুইস্ট মানদণ্ড অনুসারে একটি ঘন লেবেলযুক্ত নমুনা কাম্য। বহু সংখ্যক স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি পদ্ধতি বেশিরভাগ ক্ষেত্রে ব্যবহৃত ফ্লুরোফোরের প্রকারের উপর নির্ভর করে। স্পেকট্রাল প্রিসিশন ডিস্টেন্স মাইক্রোস্কোপি (এস. পি. ডি. এম) আলোর একটি একক, ক্ষুদ্র উৎস মাইক্রোস্কোপের রেজোলিউশনের তুলনায় অনেক ভালভাবে অবস্থিত হতে পারেঃ যদিও আলো একটি অস্পষ্ট বিন্দু তৈরি করবে, কম্পিউটার অ্যালগরিদমগুলি সঠিকভাবে গণনা করতে ব্যবহার করা যেতে পারে অস্পষ্ট স্থানের কেন্দ্র, মাইক্রোস্কোপের পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশন, ডিটেক্টরের শব্দ বৈশিষ্ট্য ইত্যাদি বিবেচনা করে। যাইহোক, এই পদ্ধতিটি কাজ করে না যখন একে অপরের কাছাকাছি অনেকগুলি উৎস থাকেঃ উৎসগুলি তখন একসঙ্গে অস্পষ্ট হয়ে যায়। স্পেকট্রাল প্রিসিশন ডিস্টেন্স মাইক্রোস্কোপি (এস. পি. ডি. এম) হল ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির স্থানীয়করণ কৌশলগুলির একটি পরিবার যা একবারে মাত্র কয়েকটি উৎস পরিমাপ করে অনেকগুলি উৎস থাকার সমস্যাকে কাটিয়ে ওঠে, যাতে প্রতিটি উৎস অন্যগুলি থেকে "অপটিক্যালি বিচ্ছিন্ন" হয় (অর্থাৎ, মাইক্রোস্কোপের রেজোলিউশনের চেয়ে বেশি দ্বারা পৃথক করা হয়, সাধারণত ~ <আই. ডি1> এন. এম), যদি পরীক্ষার অধীনে কণাগুলির বিভিন্ন বর্ণালী স্বাক্ষর থাকে, যাতে উপযুক্ত আলোর উৎস এবং ফিল্টার ব্যবহার করে একবারে মাত্র কয়েকটি অণু থেকে আলো দেখা সম্ভব হয়। এটি প্রচলিত অপটিক্যাল রেজোলিউশনের তুলনায় বেশ কয়েকগুণ ভাল একটি কার্যকর অপটিক্যাল রেজোলিউশন অর্জন করে যা কার্যকর পয়েন্ট ইমেজ ফাংশনের প্রধান সর্বোচ্চের অর্ধ-প্রস্থ দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করা হয়। এস. পি. ডি. এম ব্যবহার করে প্রাপ্ত কাঠামোগত রেজোলিউশনটি বিভিন্ন বর্ণালী বৈশিষ্ট্যের ("টপোলজিকাল রেজোলিউশন") দুটি বিরামহীন কণার মধ্যে ক্ষুদ্রতম পরিমাপযোগ্য দূরত্বের পরিপ্রেক্ষিতে প্রকাশ করা যেতে পারে। মডেলিং দেখিয়েছে যে স্থানীয়করণ, কণার ঘনত্ব ইত্যাদির নির্ভুলতা সম্পর্কিত উপযুক্ত পরিস্থিতিতে, "টপোলজিকাল রেজোলিউশন" একটি "স্পেস ফ্রিকোয়েন্সি" এর সাথে মিলে যায় যা শাস্ত্রীয় সংজ্ঞার পরিপ্রেক্ষিতে অনেক উন্নত অপটিক্যাল রেজোলিউশনের সমতুল্য। ফ্লুরোসেন্ট জীবনকাল এবং অন্যান্য কৌশলের উপর ভিত্তি করে অণুগুলিকে আরও সূক্ষ্ম উপায়ে আলাদা করা যেতে পারে। জিনোম গবেষণায় (জিনোমের কার্যকরী সংগঠনের অধ্যয়ন) একটি গুরুত্বপূর্ণ প্রয়োগ রয়েছে। ব্যবহারের আরেকটি গুরুত্বপূর্ণ ক্ষেত্র হল ঝিল্লির কাঠামো নিয়ে গবেষণা। নির্দিষ্ট ফটো-ফিজিক্যাল অবস্থা উপস্থিত থাকলে জি. এফ. পি, অ্যালেক্সা ডাই এবং ফ্লুরোসিন অণুগুলির মতো অনেক স্ট্যান্ডার্ড ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জকের জন্য এস. পি. ডি. এম. ফাইমোড স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি সম্ভব। এই তথাকথিত শারীরিকভাবে পরিবর্তনযোগ্য ফ্লুরোফোর (এস. পি. ডি. এম. ফাইমোড) প্রযুক্তির সাহায্যে, উপযুক্ত তীব্রতার একটি একক লেজার তরঙ্গদৈর্ঘ্য অন্যান্য স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি প্রযুক্তির বিপরীতে ন্যানোমেজিংয়ের জন্য যথেষ্ট, যখন বিশেষ ফটো-সুইচেবল/ফটো-অ্যাক্টিভেটেবল ফ্লুরোসেন্স অণু ব্যবহার করা হয় তখন দুটি লেজার তরঙ্গদৈর্ঘ্যের প্রয়োজন হয়। এস. পি. ডি. এম. ফাইমোড ব্যবহারের আরও একটি উদাহরণ হল টোব্যাকো মোজাইক ভাইরাস (টি. এম. ভি) কণার বিশ্লেষণ বা ভাইরাস-কোষের মিথস্ক্রিয়ার অধ্যয়ন। সিঙ্গলেট-ট্রিপলেট অবস্থা পরিবর্তনের উপর ভিত্তি করে এস. পি. ডি. এম. ফাইমোড-এর জন্য এটি অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ যে এই প্রক্রিয়াটি চলছে এবং এর ফলে একটি একক অণু প্রথমে একটি দীর্ঘ-জীবন্ত বিপরীতমুখী অন্ধকার অবস্থায় (কয়েক সেকেন্ডের মতো অর্ধ-জীবন সহ) আসে যা থেকে এটি একটি দীর্ঘ-জীবন্ত, তথাকথিত অপরিবর্তনীয় অন্ধকার অবস্থায় ফিরে আসার আগে কয়েক মিলিসেকেন্ডের জন্য অনেক ফোটন নির্গত করে একটি ফ্লুরোসেন্ট অবস্থায় ফিরে আসে। এস. পি. ডি. এমফাইমড মাইক্রোস্কোপি ফ্লুরোসেন্ট অণু ব্যবহার করে যা একই বর্ণালী আলোর ফ্রিকোয়েন্সি নির্গত করে তবে ঝলকানি বৈশিষ্ট্যের উপর ভিত্তি করে বিভিন্ন বর্ণালী স্বাক্ষর সহ। একই কোষের দুই হাজার ছবি একত্রিত করে, লেজার অপটিক্যাল নির্ভুলতা পরিমাপ ব্যবহার করে, উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত অপটিক্যাল রেজোলিউশনের সাথে স্থানীয়করণ চিত্র রেকর্ড করা সম্ভব। এস. পি. ডি. এম. ফাইমোড প্রযুক্তির সঙ্গে ইতিমধ্যেই সফলভাবে ব্যবহৃত স্ট্যান্ডার্ড ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জকগুলি হল জি. এফ. পি, আর. এফ. পি, ওয়াই. এফ. পি, অ্যালেক্সা 488, অ্যালেক্সা 568, অ্যালেক্সা 647, সাই2, সাই3, অ্যাটো 488 এবং ফ্লুরোসিন। ক্রায়োজেনিক অপটিক্যাল লোকালাইজেশন ইন থ্রিডি (কোল্ড) ক্রায়োজেনিক অপটিক্যাল লোকালাইজেশন ইন থ্রিডি (কোল্ড) এমন একটি পদ্ধতি যা অ্যাংস্ট্রম-স্কেল রেজোলিউশনের সাথে একক ছোট থেকে মাঝারি আকারের জৈব অণুর মধ্যে একাধিক ফ্লুরোসেন্ট সাইটকে স্থানীয়করণের অনুমতি দেয়। এই পদ্ধতিতে স্থানীয়করণের নির্ভুলতা বাড়ানো হয় কারণ নিম্ন তাপমাত্রায় ধীর আলোকরসায়ন উচ্চতর সংখ্যক ফোটনের দিকে পরিচালিত করে যা ফটোব্লিচিংয়ের আগে প্রতিটি ফ্লুরোফোর থেকে নির্গত হতে পারে। ফলস্বরূপ, ক্রায়োজেনিক স্টোকাস্টিক স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি একটি ছোট প্রোটিনের সাথে সংযুক্ত বেশ কয়েকটি ফ্লুরোফোরের 3ডি অবস্থান সমাধানের জন্য প্রয়োজনীয় উপ-আণবিক রেজোলিউশন অর্জন করে। ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি থেকে পরিচিত অ্যালগরিদম ব্যবহার করে, ফ্লুরোফোরের 2ডি প্রজেকশনগুলি একটি 3ডি কনফিগারেশনে পুনর্গঠন করা হয়। সি. ও. এল. ডি লেবেলের আকারের উপর নির্ভর করে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপিকে তার মৌলিক সীমাতে নিয়ে আসে। এই পদ্ধতিটি অন্যান্য কাঠামোগত জীববিজ্ঞান কৌশলগুলির সাথেও যুক্ত করা যেতে পারে-যেমন এক্স-রে ক্রিস্টালোগ্রাফি, চৌম্বকীয় অনুরণন স্পেকট্রোস্কোপি এবং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি-মূল্যবান পরিপূরক তথ্য এবং নির্দিষ্টতা প্রদান করতে। বাইন্ডিং-অ্যাক্টিভেটেড লোকালাইজেশন মাইক্রোস্কোপি (বি. এ. এল. এম) বাইন্ডিং-অ্যাক্টিভেটেড লোকালাইজেশন মাইক্রোস্কোপি (বি. এ. এল. এম) একক-অণু স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি (এস. এম. এল. এম)-র জন্য একটি সাধারণ ধারণাঃ ডি. এন. এ এবং একটি রঞ্জকের বৈশিষ্ট্য পরিবর্তনের উপর ভিত্তি করে ডি. এন. এ-বাইন্ডিং রঞ্জকের অতি-সমাধানকৃত ইমেজিং। রাসায়নিক পরিবেশের যত্নশীল সমন্বয় দ্বারা-স্থানীয়, বিপরীতমুখী ডিএনএ গলন এবং ফ্লুরোসেন্স সংকেতের উপর সংকরায়ন নিয়ন্ত্রণের দিকে পরিচালিত করে-ডিএনএ-বাইন্ডিং ডাই অণু চালু করা যেতে পারে। ইন্টারকেলেটিং এবং মাইনর-গ্রুভ বাইন্ডিং ডিএনএ ডাইগুলি একবারে মাত্র কয়েকটি ডিএনএ-বাইন্ডিং ডাই সংকেত নিবন্ধিত করতে এবং অপটিক্যালি বিচ্ছিন্ন করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। ডি. এন. এ কাঠামোর ওঠানামা-সহায়ক বি. এ. এল. এম (এফ. বি. এ. এল. এম) পারমাণবিক স্থাপত্যের ন্যানোস্কেল পার্থক্যের জন্য ব্যবহৃত হয়েছে, যার আনুমানিক কাঠামোগত রেজোলিউশন প্রায় 50 এন. এম। ডিএনএ কাঠামোর ওঠানামার উপর ভিত্তি করে বাইন্ডিং-অ্যাক্টিভেটেড লোকালাইজেশন মাইক্রোস্কোপি সহ ক্রোমাটিন ন্যানোস্ট্রাকচারের ইমেজিং। সম্প্রতি, অ্যামাইলয়েড ফাইব্রিল এবং অলিগোমারের বি. এ. এল. এম ইমেজিংয়ের জন্য একটি অ্যামাইলয়েডের সাথে আবদ্ধ হওয়ার পরে এন. আই. এ. ডি-4-এর ফ্লুরোসেন্স কোয়ান্টাম ফলন উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করা হয়েছে। স্টর্ম, পি. এ. এল. এম এবং এফ. পি. এ. এল. এম স্টোকাস্টিক অপটিক্যাল রিকনস্ট্রাকশন মাইক্রোস্কোপি (এস. টি. ও. আর. এম), ফটো অ্যাক্টিভেটেড লোকালাইজেশন মাইক্রোস্কোপি (পি. এ. এল. এম) এবং ফ্লুরোসেন্স ফটো-অ্যাক্টিভেশন লোকালাইজেশন মাইক্রোস্কোপি (এফ. পি. এ. এল. এম) হল সুপার-রেজোলিউশন ইমেজিং কৌশল যা উচ্চ রেজোলিউশনের ছবি তৈরি করতে ফটোউইচযোগ্য ফ্লুরোফোরগুলির ক্রমিক সক্রিয়করণ এবং সময়-সমাধানকৃত স্থানীয়করণ ব্যবহার করে। ইমেজিংয়ের সময়, যে কোনও নির্দিষ্ট মুহুর্তে শুধুমাত্র ফ্লুরোফোরের একটি আলোকীয়ভাবে সমাধানযোগ্য উপসেট একটি ফ্লুরোসেন্ট অবস্থায় সক্রিয় করা হয়, যাতে প্রতিটি ফ্লুরোফোরের অবস্থান একটি নির্দিষ্ট ফ্লুরোফোরের একক-অণু চিত্রের সেন্ট্রয়েড অবস্থানগুলি খুঁজে বের করে উচ্চ নির্ভুলতার সাথে নির্ধারণ করা যায়। ফ্লুরোফোরের একটি উপসেট পরবর্তীকালে নিষ্ক্রিয় করা হয় এবং অন্য একটি উপসেট সক্রিয় এবং চিত্রায়িত করা হয়। এই প্রক্রিয়ার পুনরাবৃত্তির ফলে অসংখ্য ফ্লুরোফোর স্থানীয়করণ করা যায় এবং চিত্রের তথ্য থেকে একটি সুপার-রেজোলিউশন চিত্র তৈরি করা যায়। এই তিনটি পদ্ধতি স্বল্প সময়ের মধ্যে স্বাধীনভাবে প্রকাশিত হয়েছিল এবং তাদের নীতিগুলি অভিন্ন। STORM মূলত নিউক্লিক অ্যাসিড বা প্রোটিনের সাথে সংযুক্ত Cy5 এবং Cy3 রঞ্জক ব্যবহার করে বর্ণনা করা হয়েছিল, যেখানে PALM এবং FPALM ফটোউইচযোগ্য ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন ব্যবহার করে বর্ণনা করা হয়েছিল। নীতিগতভাবে যে কোনও ফটোউইচযোগ্য ফ্লুরোফোর ব্যবহার করা যেতে পারে এবং বিভিন্ন প্রোব এবং লেবেলিং কৌশলের মাধ্যমে স্টর্ম প্রদর্শিত হয়েছে। একক ফ্লুরোফোরের স্টোকাস্টিক ফটোউইচিং ব্যবহার করে, যেমন Cy5, STORM একটি একক লাল লেজার উত্তেজনা উৎস দিয়ে সঞ্চালিত করা যেতে পারে। লাল লেজার উভয়ই একটি অ্যাডডাক্ট গঠনের মাধ্যমে সাই5 ফ্লুরোফোরকে একটি অন্ধকার অবস্থায় নিয়ে যায় এবং পরবর্তীকালে অণুটিকে ফ্লুরোসেন্ট অবস্থায় ফিরিয়ে দেয়। অন্যান্য অনেক রংও স্টর্মের সঙ্গে ব্যবহার করা হয়েছে। একক ফ্লুরোফোর ছাড়াও, একটি অ্যাক্টিভেটর ফ্লুরোফোর (যেমন অ্যালেক্সা 405, সাই2, বা সাই3) এবং একটি ফটোউইচযোগ্য রিপোর্টার ডাই (যেমন সাই5, অ্যালেক্সা 647, Cy5.5, বা সাই7) সমন্বিত ডাই-জোড়া স্টর্মের সাথে ব্যবহার করা যেতে পারে। এই পরিকল্পনায়, অ্যাক্টিভেটর ফ্লুরোফোর, যখন তার সর্বাধিক শোষণের কাছাকাছি উত্তেজিত হয়, তখন ফটোউইচযোগ্য রঞ্জককে ফ্লুরোসেন্ট অবস্থায় পুনরায় সক্রিয় করতে কাজ করে। ব্যবহৃত অ্যাক্টিভেটর ফ্লুরোফোরের উপর নির্ভর করে বা অ্যাক্টিভেটর ফ্লুরোফোর সহ বা ছাড়াই বর্ণালীগতভাবে স্বতন্ত্র ফটোউইচযোগ্য ফ্লুরোফোর ব্যবহার করে ডাই-জোড়াগুলিকে আলাদা করার জন্য বিভিন্ন অ্যাক্টিভেশন তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করে বহু রঙের ইমেজিং করা হয়েছে। ফটোসুইচেবল ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিনও ব্যবহার করা যেতে পারে। অ্যান্টিবডি স্টেনিং, প্রোটিনের সরাসরি সংমিশ্রণ এবং জেনেটিক এনকোডিংয়ের মাধ্যমে ফটোউইচযোগ্য প্রোবের সাথে জৈবিক কাঠামোর অত্যন্ত নির্দিষ্ট লেবেলিং অর্জন করা হয়েছে। অপটিক্যাল অ্যাস্টিগমেটিজম ব্যবহার করে স্টর্মকে ত্রিমাত্রিক ইমেজিং-এও প্রসারিত করা হয়েছে, যেখানে পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশনের উপবৃত্তাকার আকৃতি বেশ কয়েকটি মাইক্রোমিটার পুরু নমুনার জন্য x, y এবং z অবস্থানগুলিকে এনকোড করে এবং জীবিত কোষে প্রদর্শিত হয়েছে। আজ অবধি, এই কৌশল দ্বারা অর্জিত স্থানিক রেজোলিউশন পার্শ্বীয় মাত্রায় ~ 20 এনএম এবং অক্ষীয় মাত্রায় ~ 50 এনএম; এবং অস্থায়ী রেজোলিউশন 0.1-0.33s এর মতো দ্রুত। ন্যানোস্কেল টপোগ্রাফিতে (পিএআইএনটি) ইমেজিংয়ের জন্য পয়েন্ট সংগ্রহ ন্যানোস্কেল টপোগ্রাফিতে (পিএআইএনটি) ইমেজিংয়ের জন্য পয়েন্ট সংগ্রহ একটি একক-অণু স্থানীয়করণ পদ্ধতি যা আণবিক শোষণ/শোষণ এবং ফটোব্লিচিং/ডিসর্পশনের মাধ্যমে স্টোকাস্টিক একক-অণু ফ্লুরোসেন্স অর্জন করে। প্রথম ব্যবহৃত রঙ ছিল নীল লাল যা জলীয় দ্রবণে ননফ্লুরোসেন্ট তবে হাইড্রোফোবিক পরিবেশে যেমন মাইসেল বা জীবন্ত কোষের দেয়ালে ঢোকানো হলে ফ্লুরোসেন্ট হয়। এইভাবে, ন্যানোমোলার স্তরে রঞ্জকের ঘনত্ব কম রাখা হয়, যাতে অণুটির বিচ্ছুরণ-সীমিত অঞ্চলে শোষণের হার মিলিসেকেন্ড অঞ্চলে থাকে। একটি স্থির লক্ষ্যের সাথে একক-রঞ্জক অণুগুলির (প্রোব) স্টোকাস্টিক বাঁধাই একটি সাধারণ ওয়াইডফিল্ড ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের অধীনে স্থানিক এবং সাময়িকভাবে সমাধান করা যেতে পারে। প্রতিটি রঙ ক্ষেত্রটিকে অন্ধকার অবস্থায় ফিরিয়ে আনার জন্য ফটোব্লিচ করা হয়, যাতে পরবর্তী রঙটি বাঁধতে এবং পর্যবেক্ষণ করা যায়। অন্যান্য যাদৃচ্ছিক পদ্ধতির তুলনায় এই পদ্ধতির সুবিধা হল যে, নির্দিষ্ট লক্ষ্যের অতি-সমাধানকৃত চিত্র পাওয়ার পাশাপাশি, এটি দ্রবণে, লক্ষ্যের সাথে বিচ্ছুরিত প্রোব অণুগুলির গতিশীল বন্ধন গতিবিদ্যা পরিমাপ করতে পারে। 3ডি সুপার-রেজোলিউশন কৌশলের সংমিশ্রণ (যেমন। ডাবল-হেলিক্স পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশন মোয়ার্নারের গ্রুপে বিকশিত হয়), ফটো-অ্যাক্টিভেটেড ডাই, পাওয়ার-ডিপেন্ডেন্ট অ্যাক্টিভ ইন্টারমিটেন্সি এবং ন্যানোস্কেল টপোগ্রাফিতে ইমেজিংয়ের জন্য পয়েন্ট সংগ্রহ, স্প্রাইপেইন্ট (স্প্রাই = পাওয়ার-ডিপেন্ডেন্ট অ্যাক্টিভ ইন্টারমিটেন্সি দ্বারা সুপার রেজোলিউশন) লাইভ-সেল দেয়ালগুলিকে অতি-সমাধান করতে পারে। পেইন্ট ডাই শোষণ/শোষণ এবং ফটোব্লিচিং/ডিসর্পশন হারের মধ্যে ভারসাম্য বজায় রেখে কাজ করে। এই ভারসাম্য পরিসংখ্যানগত নীতির সাহায্যে অনুমান করা যেতে পারে। একটি গ্যাস বা তরল দ্রবণে একটি পৃষ্ঠ বা ইন্টারফেসে একটি পাতলা দ্রবণের শোষণ বা শোষণের হার ফিকের বিস্তারের নিয়ম ব্যবহার করে গণনা করা যেতে পারে। ফটোব্লিচিং/ডিসর্পশন হার একটি প্রদত্ত সমাধান অবস্থা এবং আলোকসজ্জার শক্তির ঘনত্বের জন্য পরিমাপ করা যেতে পারে। ডি. এন. এ-পি. এ. আই. এন. টি-কে নিয়মিত রঞ্জক ব্যবহার করার জন্য আরও সম্প্রসারিত করা হয়েছে, যেখানে একটি নির্দিষ্ট ডি. এন. এ অরিগামির সাথে ডাই-লেবেলযুক্ত ডি. এন. এ প্রোবের গতিশীল বাঁধাই এবং আনবাইন্ডিং স্টোকাস্টিক একক-অণু ইমেজিং অর্জন করতে ব্যবহৃত হয়। ডি. এন. এ-পি. এ. আই. এন. টি আর পরিবেশ-সংবেদনশীল রঞ্জকের মধ্যে সীমাবদ্ধ নয় এবং লক্ষ্যমাত্রায় প্রোবের অধিশোষণ এবং অবশোষণ গতিবিদ্যা উভয়ই পরিমাপ করতে পারে। পদ্ধতিটি চলমান রঞ্জকের ক্যামেরা ব্লারিং প্রভাব ব্যবহার করে। যখন একটি নিয়মিত রং দ্রবণে ছড়িয়ে পড়ে, তখন একটি সাধারণ সিসিডি ক্যামেরায় তার চিত্রটি তার তুলনামূলকভাবে দ্রুত গতি এবং তুলনামূলকভাবে দীর্ঘ ক্যামেরা এক্সপোজার সময়ের কারণে অস্পষ্ট হয়ে যায়, যা ফ্লুরোসেন্স পটভূমিতে অবদান রাখে। যাইহোক, যখন এটি একটি নির্দিষ্ট লক্ষ্যের সাথে আবদ্ধ হয়, তখন ডাই চলাচল বন্ধ করে দেয় এবং পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশনে স্পষ্ট ইনপুট অর্জন করা যায়। এই পদ্ধতির জন্য শব্দটি হল এম. বি. পি. এ. আই. এন. টি ("এম. বি" মানে গতি অস্পষ্টতা)। যখন ইমেজিংয়ের জন্য একটি মোট অভ্যন্তরীণ প্রতিফলন ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ (টিআইআরএফ) ব্যবহার করা হয়, তখন উত্তেজনা গভীরতা স্তর থেকে ~ 100 এনএম-এর মধ্যে সীমাবদ্ধ থাকে, যা স্তরটির কাছাকাছি অস্পষ্ট রঞ্জক এবং বাল্ক দ্রবণের পটভূমি থেকে ফ্লুরোসেন্স পটভূমি আরও হ্রাস করে। খুব উজ্জ্বল রঙগুলি এম. বি. পি. এ. আই. এন. টি-র জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে যা তুলনামূলকভাবে হালকা আলোক-উত্তেজনা তীব্রতার অধীনে ~ 20 এনএম-এর সাধারণ একক-ফ্রেম স্থানিক রেজোলিউশন এবং ~ 20 এমএস-এর একক-অণু গতিজ সাময়িক রেজোলিউশন দেয়, যা একক প্রোটিনের আণবিক পৃথকীকরণ অধ্যয়নে কার্যকর। তথ্য অধিগ্রহণের সময় ফুরিয়ার সমতলে রাখা একটি ঘূর্ণন পর্যায়ের মাস্ক ব্যবহার করে এবং সাময়িক তথ্য ধারণকারী বিকৃত পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশন সমাধান করে অস্থায়ী রেজোলিউশনকে আরও উন্নত করা হয়েছে (20 বার)। এই পদ্ধতির নাম দেওয়া হয়েছিল সুপার টেম্পোরাল-রেজোলিউটেড মাইক্রোস্কোপি (এস. টি. আর. ই. এম)। লেবেল-মুক্ত স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি এস. পি. ডি. এম ব্যবহার করে প্রায় 50 এনএম পরিসরে সেলুলার কাঠামোর অপটিক্যাল রেজোলিউশন অর্জন করা যেতে পারে, এমনকি লেবেল-মুক্ত কোষেও। দুটি ভিন্ন লেজার তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করে, এস. পি. ডি. এম সেলুলার বস্তু প্রকাশ করে যা প্রচলিত ফ্লুরোসেন্স ওয়াইড-ফিল্ড ইমেজিং অবস্থার অধীনে সনাক্তযোগ্য নয়, পাশাপাশি অটোফ্লোরোসেন্ট কাঠামোর যথেষ্ট রেজোলিউশনের উন্নতি ঘটায়। একটি নিয়ন্ত্রণ হিসাবে, স্থানীয়করণ ছবিতে সনাক্ত করা বস্তুর অবস্থানগুলি উজ্জ্বল-ক্ষেত্রের চিত্রের সাথে মেলে। লেবেল-মুক্ত সুপার-রেজোলিউশন মাইক্রোস্কোপি একটি অত্যন্ত অভিন্ন প্লাজমোনিক মেটাসার্ফেসে একটি পৃষ্ঠ-বর্ধিত রমন বিচ্ছুরণ সংকেতের ওঠানামা ব্যবহার করে প্রদর্শিত হয়েছে। ডাইরেক্ট স্টোকাস্টিকাল অপটিক্যাল রিকনস্ট্রাকশন মাইক্রোস্কোপি (ডি. এস. টি. ও. আর. এম) ডি. এস. টি. ও. আর. এম একটি একক ফ্লুরোফোরের ফটোউইচিং ব্যবহার করে। ডি. এস. টি. ও. আর. এম-এ, ফ্লুরোফোরগুলি একটি হ্রাসকারী এবং জারণকারী বাফারিং সিস্টেমে (আর. ও. এক্স. এস) এম্বেড করা থাকে এবং ফ্লুরোসেন্স উত্তেজিত হয়। কখনও কখনও, স্থিরভাবে, ফ্লুরোফোর একটি ত্রয়ী বা অন্য কোনও অন্ধকার অবস্থায় প্রবেশ করবে যা বাফারের জারণ অবস্থার প্রতি সংবেদনশীল, যেখান থেকে তাদের ফ্লুরোসেস করা যেতে পারে, যাতে একক অণুর অবস্থান রেকর্ড করা যায়। ডি. এস. টি. ও. আর. এম পদ্ধতির বিকাশ প্রায় একই সময়ে 3টি স্বাধীন পরীক্ষাগারে ঘটেছিল এবং এটিকে "রিভারসিবল ফটোব্লিচিং মাইক্রোস্কোপি" (আর. পি. এম), "গ্রাউন্ড স্টেট ডিপ্লিশন মাইক্রোস্কোপি অনুসরণ করে স্বতন্ত্র অণু রিটার্ন" (জি. এস. ডি. আই. এম), পাশাপাশি এখন সাধারণভাবে গৃহীত মনিকার ডি. এস. টি. ও. আর. এম বলা হয়। স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপির জন্য সফ্টওয়্যারটি এমন সফ্টওয়্যারের উপর ব্যাপকভাবে নির্ভর করে যা কয়েক মিনিটের মধ্যে সক্রিয় ফ্লুরোফোরের লক্ষ লক্ষ চিত্রের সাথে পয়েন্ট স্প্রেড ফাংশন (পি. এস. এফ) সঠিকভাবে ফিট করতে পারে। যেহেতু প্রাকৃতিক বিজ্ঞানে ব্যবহৃত ধ্রুপদী বিশ্লেষণ পদ্ধতি এবং সফ্টওয়্যার স্যুটগুলি গণনামূলকভাবে এই সমস্যাগুলি সমাধান করতে খুব ধীর, তাই প্রায়শই মিনিটের মধ্যে পরিমাপ করা ডেটা প্রক্রিয়াকরণের জন্য গণনার ঘন্টা লাগে, তাই বিশেষ সফ্টওয়্যার প্রোগ্রাম তৈরি করা হয়েছে। এই স্থানীয়করণ সফ্টওয়্যার প্যাকেজগুলির মধ্যে অনেকগুলি ওপেন সোর্স; এগুলি এস. এম. এল. এম সফ্টওয়্যার বেঞ্চমার্কে তালিকাভুক্ত। একবার অণুর অবস্থান নির্ধারণ করা হয়ে গেলে, অবস্থানগুলি প্রদর্শন করা প্রয়োজন এবং প্রদর্শনের জন্য বেশ কয়েকটি অ্যালগরিদম তৈরি করা হয়েছে। সুপার-রেজোলিউশন অপটিক্যাল ফ্লাকুয়েশন ইমেজিং (এস. ও. এফ. আই) একক অণু স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি (এস. এম. এল. এম)-তে অন্তর্নিহিত পি. এস. এফ ফিটিংয়ের প্রয়োজনীয়তাকে সরাসরি পিক্সেলের সাময়িক স্ব-সম্পর্ক গণনা করে এড়ানো সম্ভব। এই কৌশলটিকে সুপার-রেজোলিউশন অপটিক্যাল ফ্লাকুয়েশন ইমেজিং (এস. ও. এফ. আই) বলা হয় এবং যখন একযোগে সক্রিয় ফ্লুরোফোরের ঘনত্ব খুব বেশি হয় তখন এস. এম. এল. এম-এর তুলনায় এটি আরও সুনির্দিষ্ট বলে প্রমাণিত হয়। সর্বব্যাপী স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি (ও. এল. এম) সর্বব্যাপী স্থানীয়করণ মাইক্রোস্কোপি (ও. এল. এম) হল একক অণু মাইক্রোস্কোপি (এস. এম. এল. এম) কৌশলগুলির একটি সম্প্রসারণ যা একটি অসঙ্গত আলোর উৎস (যেমন একটি পারদ-খিলান প্রদীপ) এবং একটি প্রচলিত এপিফ্লোরেসেন্স মাইক্রোস্কোপ সেটআপের সাথে উচ্চ-ঘনত্বের একক অণু ইমেজিংয়ের অনুমতি দেয়। গভীর-নীল উত্তেজনার একটি সংক্ষিপ্ত বিস্ফোরণ (405 এনএম, লেজারের পরিবর্তে একটি 350-380 এনএম সহ) পরীক্ষার নমুনাগুলিতে 90 এনএম রেজোলিউশনের জন্য অণুগুলির দীর্ঘস্থায়ী পুনরায় সক্রিয়করণ সক্ষম করে। পরিশেষে, পারস্পরিক সম্পর্কযুক্ত এস. টি. ই. ডি এবং এস. এম. এল. এম ইমেজিং একটি সাধারণ ইমেজিং মাধ্যম ব্যবহার করে একই জৈবিক নমুনায় করা যেতে পারে, যা আরও বর্ধিত রেজোলিউশনের জন্য একটি ভিত্তি প্রদান করতে পারে। এই অনুসন্ধানগুলি সুপার-রেজোলিউশন ইমেজিংকে গণতান্ত্রিক করতে পারে এবং সীমিত বাজেটেও যে কোনও বিজ্ঞানীকে উচ্চ-ঘনত্বের একক-অণু চিত্র তৈরি করতে সহায়তা করতে পারে। সিকোয়েন্সিয়াল ইমেজিং (আরইএসআই) দ্বারা রেজোলিউশন বর্ধন সিকোয়েন্সিয়াল ইমেজিং (আরইএসআই) দ্বারা রেজোলিউশন বর্ধন ডিএনএ-পেইন্টের একটি সম্প্রসারণ যা তাত্ত্বিকভাবে সীমাহীন রেজোলিউশন অর্জন করতে পারে। একটি নির্দিষ্ট লক্ষ্য প্রজাতি সনাক্ত করতে একটি লেবেল টাইপ ব্যবহার করার পরিবর্তে, একই লক্ষ্যের অনুলিপিগুলি অর্থোগোনাল ডিএনএ সিকোয়েন্স দিয়ে লেবেল করা হয়। ক্রমানুসারে (অর্থাৎ। পৃথক) ইমেজিং, স্থানীয়করণ মেঘ যা প্রচলিত এস. এম. এল. এম-এ ওভারল্যাপ করবে (1) সমাধান করা যেতে পারে এবং (2) একটি একক "সুপার" স্থানীয়করণে মিলিত হতে পারে, যার নির্ভুলতা স্থানীয়করণের অন্তর্নিহিত সংখ্যার সাথে স্কেল করে। ডিএনএ-পিএআইএনটি-তে অর্জনযোগ্য স্থানীয়করণের সংখ্যা যেমন সীমাহীন, তেমনি আরইএসআই-এর তাত্ত্বিক রেজোলিউশনও রয়েছে। অন্তর্নিহিত ইমেজিং রাউন্ডগুলি থেকে আরইএসআই স্থানীয়করণগুলিকে আচ্ছাদন করা একটি যৌগিক, অত্যন্ত সমাধানকৃত চিত্র তৈরি করে। 3ডি লাইট মাইক্রোস্কোপিক্যাল ন্যানোসাইজিং (লিমন) মাইক্রোস্কোপি হালকা মাইক্রোস্কোপিক্যাল ন্যানোসাইজিং মাইক্রোস্কোপি (3ডি লিমন) চিত্রের সংমিশ্রণ, ভার্টিকো এসএমআই মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে, এসএমআই এবং এসপিডিএম-এর সংমিশ্রণ দ্বারা সম্ভব হয়, যার মাধ্যমে প্রথমে এসএমআই এবং তারপর এসপিডিএম প্রক্রিয়া প্রয়োগ করা হয়। এস. এম. আই প্রক্রিয়া অণুবীক্ষণ অক্ষের দিকে কণাগুলির কেন্দ্র এবং তাদের বিস্তার নির্ধারণ করে। যদিও কণা/অণুর কেন্দ্র 1 থেকে 2 এনএম নির্ভুলতার সাথে নির্ধারণ করা যেতে পারে, এই বিন্দুর চারপাশে বিস্তার প্রায় 30-40 এনএম এর অক্ষীয় ব্যাস পর্যন্ত নির্ধারণ করা যেতে পারে। পরবর্তীকালে, পৃথক কণা/অণুর পার্শ্বীয় অবস্থান এস. পি. ডি. এম ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়, যা কয়েক ন্যানোমিটারের নির্ভুলতা অর্জন করে। 3ডি দ্বৈত রঙ মোডে একটি জৈবিক প্রয়োগ হিসাবে, হার2/নিউ এবং হার3 ক্লাস্টারের স্থানিক ব্যবস্থা অর্জন করা হয়েছিল। প্রোটিন ক্লাস্টারের তিনটি দিকের অবস্থান প্রায় 25 এনএম নির্ভুলতার সাথে নির্ধারণ করা যেতে পারে। ইন্টিগ্রেটেড কোরিলেটিভ লাইট এবং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি একটি ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের সাথে একটি সুপার-রেজোলিউশন মাইক্রোস্কোপের সংমিশ্রণ ফ্লুরোসেন্স মার্কার দ্বারা প্রদত্ত লেবেলিংয়ের সাথে প্রাসঙ্গিক তথ্যের ভিজ্যুয়ালাইজেশন সক্ষম করে। এটি শুধুমাত্র একটি হালকা অণুবীক্ষণ যন্ত্র ব্যবহার করার সময় গবেষকের কাছে থাকা কালো পটভূমির সমস্যাকে অতিক্রম করে। একটি সমন্বিত ব্যবস্থায়, নমুনাটি একই সাথে উভয় অণুবীক্ষণ যন্ত্র দ্বারা পরিমাপ করা হয়। নিউরাল নেটওয়ার্ক ব্যবহার করে কৌশলের উন্নতি সম্প্রতি, কৃত্রিম বুদ্ধিমত্তা গণনার অগ্রগতির কারণে, গভীর-শিক্ষণ নিউরাল নেটওয়ার্কগুলি (জিএএন) অপটিক্যাল-মাইক্রোস্কোপ ফটোগ্রাফিক চিত্রগুলির সুপার-রেজোলিউশন বৃদ্ধির জন্য ব্যবহার করা হয়েছে, 40x থেকে 100x পর্যন্ত, অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের সাথে 20x থেকে 1500x পর্যন্ত, একটি স্ক্যানিং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের সাথে তুলনীয়, একটি নিউরাল লেন্সের মাধ্যমে, এবং পজিট্রন-নির্গমন টমোগ্রাফি এবং ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি সহ। আরও দেখুন মাল্টিফোকাল প্লেন মাইক্রোস্কোপি (এম. ইউ. এম) স্টিমুলেটেড এমিশন ডিপ্লিশন মাইক্রোস্কোপ (এস. টি. ই. ডি) ফটোঅ্যাকটিভেটেড লোকালাইজেশন মাইক্রোস্কোপি (পি. এ. এল. এম) ডিকনভোলিউশন ফটোঅ্যাকটিভেটেবল প্রোব কোরিলেটিভ লাইট-ইলেকট্রন মাইক্রোস্কোপি সুপার-রেজোলিউশন ইমেজিং ভিডিও সুপার রেজোলিউশন রেফারেন্স আরও পড়ুন মাইক্রোস্কোপি জার্মান উদ্ভাবন সেল ইমেজিং ল্যাবরেটরি সরঞ্জাম অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপি ফ্লুরোসেন্স কৌশল