Fluorescence des rayons X en réflexion totale
Cette technique d’analyse est très utile dans plusieurs domaines des sciences et pas seulement dans le domaine de la chimie. Certes, cette méthode est très utilisée en chimie industrielle entre autres pour l’analyse d’eaux ultra pures, des acides et des métaux. D’ailleurs, elle est très employée en recherche environnementale pour l’analyser de l’eau et des sols, en médecine pour analyser le sang, les fluides corporels et des échantillons de peau, en biologie pour l’analyse de matériel végétal et de nourriture, en minéralogie pour les minéraux et les roches et dans l’industrie des semi-conducteurs pour l’analyse des couches dans les matériaux technologiques.
Microscope de fluorescence par réflexion totale interne
La microscopie de fluorescence par réflexion totale interne permet de surmonter ce problème. Le principe de cet appareil est de n'exciter la fluorescence que sur une très faible profondeur, immédiatement adjacente à l'interface verre (support de l'échantillon)/eau (milieu environnant l'échantillon). L'excitation est due à une onde évanescente. Celle-ci est générée uniquement quand la lumière incidente est totalement réfléchie à l'interface verre / eau, ce qui ne se produit que pour un certain angle d'incidence : l'angle critique, c'est la réflexion totale interne. L'échantillon est alors soumis à un champ électromagnétique sur une faible profondeur au-delà de la surface (environ 200 nm). L'intensité d'excitation de la fluorescence décroît exponentiellement en fonction de la distance par rapport à la surface. On peut ainsi en TIRFM visualiser de manière très sélective les régions de contact de la cellule avec son support (membrane basale). Il est ainsi possible d'étudier avec une très grande résolution la morphologie ou les évènements intervenant à la membrane plasmique de cellules vivantes.