Spectroscopie de fluorescence
La spectroscopie de fluorescence est une technique courante d'analyse en chimie organique et biochimie. Elle est également utilisée depuis quelques années dans le domaine du traitement de l'eau pour suivre le traitement des eaux potables et des eaux usées. En effet, la présence de matière organique portant des fluorophores permet d'obtenir des spectres 3D (Longueur d'onde d'excitation - Longueur d'onde d'émission - intensité de fluorescence) qui permet de caractériser la qualité d'une eau.
Transfert d'énergie entre molécules fluorescentes
Dans la technologie HTRF, l’émission de fluorescence de l’accepteur à 665 nm est normalisée par celle du cryptate à 620 nm. Les deux longueurs d’onde sont mesurées simultanément. Le calcul du rapport des intensités de fluorescence à 665 et 620 nm permet de s’affranchir des variations optiques entre les différents milieux. Dès lors, la valeur de ce rapport ne dépendra que des interactions biologiques (Figure 6.B). Pour le cryptate de terbium deux ratio peuvent être utilisés. Pour le couple Lumi4-Tb/d2 on choisira le ratio 665/620 comme précédemment alors que pour le couple Lumi4-Tb/fluorescéine ce sera le ratio 520/490. La robustesse de ce signal permet par exemple d’analyser le FRET dans des milieux biologiques complexes (sérum, cellules…) ou de tester des librairies dont les composés peuvent présenter de fortes absorbances.