Cabildo colonial
El alguacil mayor de gobierno era aquel que fuera asignado por un gobernador para residir en la capital de la gobernación y dependiera de él todos los demás de cada cabildo. Ocuparon este puesto de alguacil mayor del Río de la Plata, asumiendo el puesto en el Cabildo de Asunción, los siguientes: Fernando de Trejo y Carvajal desde 1553 y Juan de Garay desde 1568, entre otros.
Alguacil mayor del rey
Además, el alguacil mayor del rey debía encargarse del mantenimiento de la justicia en la Corte real, de apresar a los culpables y asegurarse de que fueran encerrados en prisión, y también de hacer cumplir las sentencias e incluso de estar presente en las sesiones de tortura y en los ajusticiamientos de los reos, aunque esto último nunca estaba autorizado a realizarlo sin el permiso del rey o de los alcaldes de Corte.