kk ru ru ru ru ru ru ru ru hbs_cyr ru ru ru ru mk ru ru ru ru uk ru ru ru ru ru ru ru ru ru uk ru ru ru ru ru ru kk ru ru ru kk ru ru ru kk kk kk ru kk kk ru ru kk kk kk kk kk kk kk ru ru kk ru ru kk ru ru en ru ru kk ru ru kk kk kk kk kk kk ru ru kk ru ru kk kk ru kk kk kk kk kk kk ru kk kk ru ru kk uk kk kk kk ru kk mk kk kk kk bg kk ru kk kk ru ru kk kk kk kk kk kk kk kk kk kk uk kk kk kk kk cs ru ru kk ru ru kk ru ru kk ru ru kk kk kk kk kk ru ru kk kk kk ru kk kk kk ru ru kk ru ru kk kk kk kk kk kk ru ru kk kk ru ru kk kk kk uk kk kk uk kk kk ru ru kk uk kk kk uk kk kk kk kk ru ru kk kk kk kk kk kk kk kk ru ru kk ru ru ru ru ru ru ru ru ru ru en ru ru ru ru ru ru ru en ru ru ru ru ru ru ru ru ru ru ru ru
Тақырыбы: ИФТ әдісі презентация, доклад, проект
Презентация на тему Тақырыбы: ИФТ әдісі
Слайды и текст этой презентации
Қарағанды Мемлекеттік Медицина университеті Иммунология және Аллергология кафедрасы
2.Спецификалық антиденелерді анықтау әдісі (сэндвич әдісі)
Иммундық ферментті талдау (сараптама) – антиденелер мен антигендерді сандық және сапалық анықтау иммунологиялық зертханалық әдісі
70-шы жылдардың басында ИФТ әдісін ашқан ғалымдар: Швеция ғалымдары – Engvall және Perlmann Нидерланд ғалымдары - van Weemen және Schuur, АҚШ ғалымы - Rubenstein
ELISA (enzyme linked immunosorbent assay ) –
Әдіс антиген мен оған сәйкес антидене арасындағы спецификалық әрекеттесу принципімен жасалады. Комплексті анықтау үшін ферментті белгімен (пероксидаза, сілтілі фофатаза, глюкозооксидаза, ацетилхолинэстераза, каталаза және т.б.) байланысқан анти-антидене болып табылатын арнайы конъюгат (адам Ig қарсы қоян антиденелері немесе моноклондық антиденелер) қолданылады.
Спецификалық антиденелерді анықтау әдісі (сэндвич әдісі)
Планшет ойықтарына қоздырғыштың антигені орнатылып, зерттелетін сары сумен бірге инкубацияланады. Спецификалық антиденелер болған жағдайда олар байланысып, антиген-антидене комплексі түзіледі.
Одан кейін бұл комплекс конъюгатпен инкубацияланған кезде анти-антиденелер антиген-антидене комплекстерімен байланысады.
Ферменттік реакция (түрлі-түсті реакция) сутегі тотығы мен пероксидазды реакция процесінде тотығып, боялатын субстраттың қатысумен жүреді.
Боялу қарқыны анықталатын спецификалық антиденелердің санына байланысты болады.
Нәтижесі спектрофотометрмен немесе визуалды бағаланады.
Антиденелерді анықтауға арналған иммуноферментті сынама-жүйелерінің түрлері:
– полистрироды планшет немесе
(конкурентті емес) ИФТ –
Бұл схемада антигендер (2) планшеттің ойықтарына (1) орнатылған. Ойыққа зерттелетін сары су енгізіледі. Егер сары суда антигендерге қарсы антиденелер (3) болса, инкубациялану кезінде антиген/антидене байланысы түзіледі.
Планшеттің ойықтарын байланыспаған субстанциялардан (яғни спецификалық емес антиденелерден) тазалап, оған екінші антиденелер (4) қосылады. Бұл антиденелерге белсенді фермент (Е) бекітілген. Мұндай комплекстік байланысу конъюгат деп аталады. Инкубациялану кезінде ойықта сэндвич тәрізді құрылым түзіледі.
Планшеттің ойықтарын байланыспаған конъюгаттан тазалап, оған түссіз субстрат (5) қосылады, бұл субстратқа фермент (Е) әсер етіп, оны бояйды (6).
а – пробирканың қабырғасында белгілі антигенге қарсы антиденелер;
б – зерттелуші сары су қосылады, егер онда антигендер болса, олар антиденелермен байланысып, пробирканың қабырғасына бекітіледі;
в – белгілі антигенге қарсы ферментпен белгіленген антиденелерді енгізу, олар қабырғадағы иммундық комплекспен байлаынысады;
г – сутегі асқын тотығы мен хромогенді қосқанда оттегінің әсерімен сары түске боялады.
Жұқпалы ауруларды диагностикалау (IgA, IgM, IgG антиденелері), аурудың кезеңін анықтау
Диагностика кезінде ескеру керек:
Зерттеуді аурудың ерте кезеңінде өткізу керек.
Бір уақытта бірнеше спецификалық антиденелерді анықтаған (немесе IgM және IgG антиденелерін) жөн, бұл біріншілік инфекцияны диагностикалау үшін қажет.
Аурудың динамикасын бағалау үшін антиденелердің санын анықтау қажет.
Белсенді және жасырын инфекцияны айыру үшін IgG авидтілігі деңгейін сараптау.
Бұрын жұқтырылған инфекцияның нәтижесінде антиденелер төмендеген иммунитетте, ақуызды ашығу кезінде анықталмауы мүмкін.
ELISPOT (enzyme linked immunosorbent assay spots) Кейс университетінің (Кливленд, Огайо штаты) ғалымдары және STL Analyzers LLS компаниясының қызметкерлері алғашқы сараптама анализаторы ашқан мен мәліметтерді өңдеу және есте саұтау үшін бағдарламаламен қамтамасыз еткен.
ELISPOT әдісімен Т- және В-жасушаларды сараптау үшін қолданылады. ELISА әдісінен айырмашылығы гидрофобты мембрананың бетіндегі антиденелер жасушаның белгілі өнімін (цитокиндер) байланыстырады.
Планшет ойықтарына 100 мкл-ден Т-лимфоциттерді енгізу
Планшетті 1 сағат бойы 37°С температурада инкубациялау
Планшетті екі рет фосфатты-тұзды буфермен шаю
Ойықтарға 100 мкл-ден 0,5% бұқа сары су альбумині (БСА) енгізіледі
Планшетті 1 сағат бойы 37°С температурада инкубациялау
Планшетті екі рет фосфатты-тұзды буфермен шаю
Ойықтарға лимфоциттердің CD2, CD3, CD4, CD8 маркерлеріне сәйкес 100 мкл-ден моноклондық антиденелер енгізіледі
Планшетті 1 сағат бойы 37°С температурада инкубациялау
Планшетті екі рет фосфатты-тұзды буфермен шаю
Ойықтарға лимфоциттердің 100 мкл-ден қой IgG конъюгаттары (пероксидазамен белгіленген) енгізіледі
Планшетті 1 сағат бойы 37°С температурада инкубациялау
Планшетті екі рет фосфатты-тұзды буфермен шаю
Ойықтарға лимфоциттердің 100 мкл-ден субстрат (цитратты буфердағы 0,2% сутегі пероксиді ерітіндісі мен ортофенилендиаминдигидрохлорид) енгізіледі
Планшетті 10 минут 20°С қараңғы жерде инкубациялау
Ойықтарға50 мкл-ден 50% күкірт қышқылы (стопреагент) енгізіледі
Ойықтардың құрамының рптикалық тығыздығын вертикалді фотометрде өлшеу
Қорытынды Иммуноферментті талдаудың артықшылықтары:
Жоғары сезімталдық (ферменттің бір молекуласы) – 70-80%
Зерттелуші материалдың ең аз мөлшерін қолдануға болады
Реакцияны жүргізу өте қарапайым, оңай
Реакцияның барлық кезеңдерін автоматизациялау мүмкіншілігі
Экологиялық таза және медперсонал үшін қауіпсіз
Диагностикалық жинақтар бағасы арзан
«Иммунология»: Хайтов Р.М Геотамедия Мәскеу 2015
«Жалпы иммунолгия» :Шортанбаев Ә.Ә, Кожанова С.В Алматы 2008
Проект переоборудования концертного зала Агаповского районного Дома культуры 144
Формирование внутренней мотивации на уроках гуманитарного цикла 146
Разложение вектора по трем некомпланарным векторам 171
Праздник урожая или золотая осень 132
Устройство и рабочий процесс однофазного трансформатора 247
Организационно-технические принципы создания современных ситуационных центров 179
Экологическая викторина Знатоки природы 79
Проверка по итогам прошлого года 135
Завершение Гражданской войны в 1920-1921 гг. Экономическая политика военного 172
Возможности совместной деятельности дошкольников и их родителей по физическому развитию в воспитании патриотизма 252
Личностные факторы, определяющие безопасность жизнедеятельности. 295
Форма государственного правления 137
Если не удалось найти и скачать доклад-презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:
Email: Нажмите что бы посмотреть
Это сайт презентации, докладов, проектов в PowerPoint. Здесь удобно  хранить и делиться своими презентациями с другими пользователями.