لطخة نورثرن
[[ملف:Northern blot diagram.png|250px|تصغير|يسار|مخطط بياني يبين الإجراءات العامة لتحديد الرنا بواسطة تقنية لطخة نورثرن.]]
'''لطخة نورثرن''' أو '''لطخة الرنا'''<ref name=Gilbert2000>Gilbert, S. F. (2000) Developmental Biology, 6th Ed. Sunderland MA, Sinauer Associates.</ref> {{إنج|Northern blot}} هي تقنية تُستخدم في [[علم الأحياء الجزيئي]] لدراسة [[تعبير جيني|التعبير الجيني]] عبر تحديد ال[[حمض نووي ريبوزي|رنا]] (أو الرنا الرسول المستخلص) في عينة.<ref name="Alberts2008" /><ref name=Kevil1997>Kevil, C. G., Walsh, L., Laroux, F. S., Kalogeris, T., Grisham, M. B., Alexander, J. S. (1997) An Improved, Rapid Northern Protocol. Biochem. and Biophys. Research Comm. 238:277–279.</ref>

تُمكِّن تقنية لطخة نورثرن من ملاحظة التنظيم الخلوي للبنى والوظائف بتحديد معدل التعبير الجيني الدقيق أثناء [[تمايز خلوي|التمايز]] أو [[تشكل حيوي|التخلق الحيوي]]، وكذلك أثناء الاضطرابات والأمراض.<ref name=Schlamp2008>{{استشهاد بدورية محكمة | الأخير1 = Schlamp | الأول1 = K. | الأخير2 = Weinmann | الأول2 = A. | الأخير3 = Krupp | الأول3 = M. | الأخير4 = Maass | الأول4 = T. | الأخير5 = Galle | الأول5 = P. R. | الأخير6 = Teufel | الأول6 = A. | سنة = 2008 | عنوان = BlotBase: A northern blot database | مسار = | صحيفة = Gene | المجلد = 427 | العدد = 1–2| صفحات = 47–50 | doi = 10.1016/j.gene.2008.08.026 | pmid = 18838116}}</ref> يُستخدم في لطخة نورثرن [[رحلان كهربائي|الرحلان الكهربائي]] لفصل العينات حسب الحجم، وتحديد جزيئات الرنا بواسطة [[مسبار التهجين|مسابير تهجين]] [[نيوكليوتيد مكمل|مكملة]] جزئيا أو كليا لتسلسلات الرنا المستهدفة. يُشير مصطلح 'لطخة نورثرن' بشكل محدد إلى الانتقال [[خاصية شعرية|الشعري]] للرنا من هلام الرحلان الكهربائي إلى غشاء اللطخة، إلا أنه يُقصد بلطخة نورثرن كامل الإجراءات المستخدمة في هذه العملية.<ref name=Trayhurn1996>Trayhurn, P. (1996) Northern Blotting. Pro. Nutrition Soc. 55:583–589.</ref> طُوِّرت تقنية لطخة نورثرن سنة 1977 بواسطة جيمس ألوين، ديفيد كيمب وجورج ستارك في [[جامعة ستانفورد]]، مع مساهمات من قبل غيرهارد هاينريش.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة |عدة مؤلفين=Alwine JC, Kemp DJ, Stark GR |عنوان=Method for detection of specific RNAs in agarose gels by transfer to diazobenzyloxymethyl-paper and hybridization with DNA probes |صحيفة=Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. |المجلد=74 |العدد=12 |صفحات=5350–4 |سنة=1977 |pmid=414220| doi = 10.1073/pnas.74.12.5350 |pmc=431715}}</ref> اتخذت هذه التقنية اسمها من التشابه بينها وبين أول تقنية تلطيخ -وهي [[لطخة ساوثرن]]- المسماة باسم العالم إدوين ساوثرن.<ref name=Alberts2008>Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J. Raff, M., Roberts, K., Walter, P. 2008. Molecular Biology of the Cell, 5th ed. Garland Science, Taylor & Francis Group, NY, pp 538–539.</ref> الفرق الكبير بينهما هو أن الرنا هو من تتم دراسته في لطخة نورثن بدل ال[[حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين|دنا]] في لطخة ساوثرن.<ref name=Bor2006>{{استشهاد بدورية محكمة | الأخير = Bor | سنة = 2006 | الأول1 = Y.C. | الأخير2 = Swartz | الأول2 = J. | الأخير3 = Li | الأول3 = Y. | الأخير4 = Coyle | الأول4 = J. | الأخير5 = Rekosh | الأول5 = D. | الأخير6 = Hammarskjold | الأول6 = Marie-Louise | عنوان = Northern Blot analysis of mRNA from mammalian polyribosomes | صحيفة = Nature Protocols | doi = 10.1038/nprot.2006.216 | postscript = <!--None-->}}</ref>
== الإجراء ==
[[ملف:Capillary blot setup.svg|250px|تصغير|يسار|نظام تلطيخ شعيري لنقل الرنا من هلام الرحلان الكهربائي إلى الغشاء ال[[نايلون]]ي.]]
يبدأ إجراء التلطيخ بشكل عام <ref name="Trayhurn1996" /> [[استخلاص الرنا|باستخلاص مجموع الرنا]] من عينة نسيج متجانس أو من خلايا مختلفة، بعد ذلك يمكن عزل [[حمض نووي ريبوزي رسول|الرنا الرسول]] الخاص بحقيقيات النوى عبر استخدام ال[[استشراب]] السيليلوزي لقليل الثيميدين (oligo (dT)) وبشكل خاص لعزل جزيئات الرنا التي تحتوي على [[تذييل بعديد الأدينيلات|ذيل عديد الأدينين]].<ref name=Durand1993>{{استشهاد بدورية محكمة | الأخير1 = Durand | الأول1 = G. M. | الأخير2 = Zukin | الأول2 = R. S. | سنة = 1993 | عنوان = Developmental Regulation of mRNAs Encoding Rat Brain Kainate/AMPA Receptors: A Northern Analysis Study | مسار = | صحيفة = J. Neurochem. | المجلد = 61 | العدد = 6| صفحات = 2239–2246 | doi = 10.1111/j.1471-4159.1993.tb07465.x | pmid = 8245974}}</ref><ref name=Mori1991>{{استشهاد بدورية محكمة | الأخير1 = Mori | الأول1 = H. | الأخير2 = Takeda-Yoshikawa | الأول2 = Y. | الأخير3 = Hara-Nishimura | الأول3 = I. | الأخير4 = Nishimura | الأول4 = M. | سنة = 1991 | عنوان = Pumpkin malate synthase Cloning and sequencing of the cDNA and Northern blot analysis | مسار = | صحيفة = Eur. J. Biochem. | المجلد = 197 | العدد = 2| صفحات = 331–336 | doi = 10.1111/j.1432-1033.1991.tb15915.x | pmid = 1709098}}</ref> بعد ذلك تفصل عينات الرنا حسب الحجم عبر الرحلان الكهربائي، ولأن الهلامات هشة ولا يمكن [[مسبار التهجين|لمسابير التهجين]] الدخول في كناناتها والتفاعل مع جزيئات الرنا، تُنقل هذه الأخيرة إلى غشاء أو رقاقة [[نايلون]] عبر نظام تلطيخ شعيري أو [[فراغ (فيزياء)|فراغي]].

الغشاء النايلوني موجب الشحنة هو الأكثر فعالية للاستخدام في لطخة نورثرن لأن الأحماض النووية سالبة الشحنة لها ألفة كبيرة له. يحتوي [[محلول منظم|منظم]] النقل المستخدم في التلطيخ عادة على ال[[فورماميد]] لأنه يخفِّض درجة حرارة [[الديناميكا الحرارية للحمض النووي#الالتحام|ارتباط]] الرنا بمسبار التهجين، ومنه إزالة الحاجة إلى درجات حرارة مرتفعة قد تسبب تفكك الرنا.<ref name=Yang1993>{{استشهاد بدورية محكمة | الأخير1 = Yang | الأول1 = H. | الأخير2 = McLeese | الأول2 = J. | الأخير3 = Weisbart | الأول3 = M. | الأخير4 = Dionne | الأول4 = J.-L. | الأخير5 = Lemaire | الأول5 = I. | الأخير6 = Aubin | الأول6 = R. A. | سنة = 1993 | عنوان = Simplified high throughput protocol for Northern hybridization | مسار = | صحيفة = Nucleic Acids Research | المجلد = 21 | العدد = 14| صفحات = 3337–3338 | doi = 10.1093/nar/21.14.3337 | pmid = 8341618 | pmc = 309787}}</ref> بعد أن يتم نقل الرنا إلى الغشاء، يتم تثبيته عبر ترابط تساهمي مع الغشاء بواسطة الأشعة فوق البنفسجية أو الحرارة. توسم المسابير بواسطة واسمات لإعطاء إشارات محددة، ثم يتم تهجينها (ارتباطها) بالرنا على سطح الغشاء. تشمل الشروط التجريبية التي تؤثر على نجاعة ودقة التهجين: [[قوة أيونية|القوة الأيونية]]، اللزوجة، قودة مزدوج الرنا-مسبار، كمية القواعد غير المتطابقة فيه والتركيب [[قاعدة نووية|القاعدي]] له.<ref name=Streit2009>{{استشهاد بدورية محكمة | الأخير1 = Streit | الأول1 = S. | الأخير2 = Michalski | الأول2 = C. W. | الأخير3 = Erkan | الأول3 = M. | الأخير4 = Kleef | الأول4 = J. | الأخير5 = Friess | الأول5 = H. | سنة = 2009 | عنوان = Northern blot analysis for detection of RNA in pancreatic cancer cells and tissues | مسار = | صحيفة = Nature Protocols | المجلد = 4 | العدد = 1| صفحات = 37–43 | pmid = 19131955 | doi = 10.1038/nprot.2008.216}}</ref> بعد ذلك يتم غسل الغشاء لضمان ارتباط المسابير الدقيق ولمنع حدوث إشارات خلفية. يتم تحديد إشارات التهجين عبر مسح ب[[أشعة سينية|الأشعة السينية]] وتحديد كميتها بواسطة {{Interlanguage link multi|مكثافية|lt=المكثافية|en|Densitometry}}. لتحديد [[ضبط علمي|ضوابط]] من أجل المقارنة في لطخة نورثرن، يمكن استخدام العينات التي لا تُظهر [[ناتج جيني|ناتجا جينيا]] وذلك بعد تحديدها عبر [[مصفوفة دقيقة|المصفوفات الدقيقة]] أو [[تفاعل البوليمراز المتسلسل للنسخ العكسي|النسخ العكسي-تفاعل البوليميراز المتسلسل]].<ref name="Streit2009" />
=== الهلامات ===
== المراجع ==
{{مراجع|محاذاة=نعم}}

{{مسابر جزيئية}}
{{علم الوراثة الجزيئي}}
{{شريط بوابات|تقانة حيوية|الكيمياء الحيوية|علم الأحياء الخلوي والجزيئي}}
{{روابط شقيقة|commons=Northern blot}}
{{مصادر طبية}}

[[تصنيف:تقنيات علم الأحياء الجزيئي]]
لطخة نورثرن أو لطخة الرناGilbert, S. F. (2000) Developmental Biology, 6th Ed. Sunderland MA, Sinauer Associates.  هي تقنية تُستخدم في علم الأحياء الجزيئي لدراسة التعبير الجيني عبر تحديد الرنا (أو الرنا الرسول المستخلص) في عينة.Kevil, C. G., Walsh, L., Laroux, F. S., Kalogeris, T., Grisham, M. B., Alexander, J. S. (1997) An Improved, Rapid Northern Protocol. Biochem. and Biophys. Research Comm. 238:277–279.

تُمكِّن تقنية لطخة نورثرن من ملاحظة التنظيم الخلوي للبنى والوظائف بتحديد معدل التعبير الجيني الدقيق أثناء التمايز أو التخلق الحيوي، وكذلك أثناء الاضطرابات والأمراض. يُستخدم في لطخة نورثرن الرحلان الكهربائي لفصل العينات حسب الحجم، وتحديد جزيئات الرنا بواسطة مسابير تهجين مكملة جزئيا أو كليا لتسلسلات الرنا المستهدفة. يُشير مصطلح 'لطخة نورثرن' بشكل محدد إلى الانتقال الشعري للرنا من هلام الرحلان الكهربائي إلى غشاء اللطخة، إلا أنه يُقصد بلطخة نورثرن كامل الإجراءات المستخدمة في هذه العملية.Trayhurn, P. (1996) Northern Blotting. Pro. Nutrition Soc. 55:583–589. طُوِّرت تقنية لطخة نورثرن سنة 1977 بواسطة جيمس ألوين، ديفيد كيمب وجورج ستارك في جامعة ستانفورد، مع مساهمات من قبل غيرهارد هاينريش. اتخذت هذه التقنية اسمها من التشابه بينها وبين أول تقنية تلطيخ -وهي لطخة ساوثرن- المسماة باسم العالم إدوين ساوثرن.Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J. Raff, M., Roberts, K., Walter, P. 2008. Molecular Biology of the Cell, 5th ed. Garland Science, Taylor & Francis Group, NY, pp 538–539. الفرق الكبير بينهما هو أن الرنا هو من تتم دراسته في لطخة نورثن بدل الدنا في لطخة ساوثرن.
 الإجراء 
250px|تصغير|يسار|نظام تلطيخ شعيري لنقل الرنا من هلام الرحلان الكهربائي إلى الغشاء النايلوني.
يبدأ إجراء التلطيخ بشكل عام  باستخلاص مجموع الرنا من عينة نسيج متجانس أو من خلايا مختلفة، بعد ذلك يمكن عزل الرنا الرسول الخاص بحقيقيات النوى عبر استخدام الاستشراب السيليلوزي لقليل الثيميدين (oligo (dT)) وبشكل خاص لعزل جزيئات الرنا التي تحتوي على ذيل عديد الأدينين. بعد ذلك تفصل عينات الرنا حسب الحجم عبر الرحلان الكهربائي، ولأن الهلامات هشة ولا يمكن لمسابير التهجين الدخول في كناناتها والتفاعل مع جزيئات الرنا، تُنقل هذه الأخيرة إلى غشاء أو رقاقة نايلون عبر نظام تلطيخ شعيري أو فراغي.

الغشاء النايلوني موجب الشحنة هو الأكثر فعالية للاستخدام في لطخة نورثرن لأن الأحماض النووية سالبة الشحنة لها ألفة كبيرة له. يحتوي منظم النقل المستخدم في التلطيخ عادة على الفورماميد لأنه يخفِّض درجة حرارة ارتباط الرنا بمسبار التهجين، ومنه إزالة الحاجة إلى درجات حرارة مرتفعة قد تسبب تفكك الرنا. بعد أن يتم نقل الرنا إلى الغشاء، يتم تثبيته عبر ترابط تساهمي مع الغشاء بواسطة الأشعة فوق البنفسجية أو الحرارة. توسم المسابير بواسطة واسمات لإعطاء إشارات محددة، ثم يتم تهجينها (ارتباطها) بالرنا على سطح الغشاء. تشمل الشروط التجريبية التي تؤثر على نجاعة ودقة التهجين: القوة الأيونية، اللزوجة، قودة مزدوج الرنا-مسبار، كمية القواعد غير المتطابقة فيه والتركيب القاعدي له. بعد ذلك يتم غسل الغشاء لضمان ارتباط المسابير الدقيق ولمنع حدوث إشارات خلفية. يتم تحديد إشارات التهجين عبر مسح بالأشعة السينية وتحديد كميتها بواسطة . لتحديد ضوابط من أجل المقارنة في لطخة نورثرن، يمكن استخدام العينات التي لا تُظهر ناتجا جينيا وذلك بعد تحديدها عبر المصفوفات الدقيقة أو النسخ العكسي-تفاعل البوليميراز المتسلسل.
 الهلامات 
 المراجع 

تصنيف:تقنيات علم الأحياء الجزيئي