UTICAJ PRODUŽENE PERORALNE PRIMENE EUGENOLA NA HEMATOLOŠKE I NEKE BIOHEMIJSKE PARAMETRE KRVI KOD PACOVA

Keywords: eugenol, haematotoxicity, hepatotoxicity, nephrotoxicity, rat

Ispitivano je moguće hematotoksično, hepatotoksično i nefrotoksičano dejstvo eugenola kod pacova posle dvonedeljne i četvoronedeljne kontinuirane p.o. primene. Ogled je izveden na 72 mužjaka pacova soja Wistar podeljenih u šest grupa. Četiri grupe tretirane su različitim dozama eugenola (10 mg/kg tm/dan, 50 mg/kg tm/dan, 200 mg/kg tm/dan i 400 mg/kg tm/dan). Peta, kontrolna grupa dobijala je vehikulum (0,5% metil-celuloza, 20% propilen-glikol i voda), a šesta je bila apsolutna, netretirana kontrola. Eugenol i vehikulum aplikovani su gastričnom sondom, svakodnevno tokom četiri nedelje u količini od 1 ml/100 g telesne mase pacova. Krv je uzorkovana kardijalnom punkcijom anestetisanih pacova 14. i 28. dana ogleda u cilju određivanja hematoloških i biohemijskih parametara krvi: hematokrit, broj eritrocita, leukocita i trombocita, leukocitna formula, koncentracija hemoglobina, MCV, MCH, koncentracija proteina, albumina, uree, kreatinina, kao i aktivnost alanin-aminotransferaze (ALT), alkalne fosfataze (ALP) i kreatin-kinaze (CK). 
Rezultati su pokazali da eugenol primenjivan tokom dve i četiri nedelje u dozama od 10, 50, 200 i 400 mg/kg tm/dan ne ispoljava hematotoksično, hepatotoksično niti nefrotoksično dejstvo. Eugenol davan tokom četiri nedelje ne utiče značajno na broj eritrocita, koncentraciju hemoglobina, hematokrit, zapreminu eritrocita, broj leukocita i leukocitnu formulu. Primenjivan tokom dve nedelje, prouzrokuje značajno povećanje mase hemoglobina po eritrocitu. Ovaj efekat je nespecifičan i ne zavisi niti doze, niti od dužine tretmana. Doze eugenola od 10 i 200 mg/kg/dan primenjivane tokom četiri nedelje prouzrokuju značajno smanjenje broja trombocita, dok najviša ispitivana doza (400 mg/kg/dan) prouzrokuje značajno povećanje, u poređenju sa brojem trombocita kod pacova tretiranih dozom od 10 i 200 mg/kg/dan. Promene broja trombocita izazvane eugenolom kvalitativno su različite i ne zavise od doze, niti od dužine tretmana. Eugenol primenjivan tokom dve i četiri nedelje ne utiče značajno 1 Fakultet veterinarske medicine, Univerzitet u Beogradu. 

UVOD

Iako se začinske i lekovite biljke (žalfija, karanfilić, majčina dušica, ruzmarin, cimet, origano, slačica, đumbir, pelen i dr.), njihovi ekstrakti i aktivne komponente već decenijama koriste u medicinske i nutritivne svrhe, kao zooaditivi ili pesticidi, još uvek su nedovoljna saznanja o njihovim mogućim neželjenim i toksičnim dejstvima na pojedine sisteme organa kod životinja i ljudi. 
Esencijalno ulje karanfilića, origana, mirođije, bosiljka, ruzmarina, cimeta, lovora dr. sadrži tri (eugenol, 4-alilfenol, eugenil-acetat), od ukupno sedam poznatih bioaktivnih hidroksi-alil-benzenskih jedinjenja (Nijsseni sar., 2004;EPSA, 2006). Esencijalno ulje karanfilića (Caryophylii aetheroleum) sadrži čak od 80% do 90% eugenola, koji ima brojna farmakološka dejstva (EMEA, 1998). 
Nedovoljna su saznanja o toksikološkom profilu eugenola i njegovom afinitetu prema organima posle dugotrajne p.o. primene kod laboratorijskih životinja. Procena stepena njegove toksičnosti i sistemske podnošljivosti posle primene rastućih doza u pretkliničkom ispitivanju ima za cilj da definiše najmanju dozu koja je bezbedna za primenu i ne prouzrokuje neželjene efekte (No Observed Adverse Effect Level -NOAEL), kao i najmanju dozu koja prouzrokuje značajane neželjene (Lowest Observed Adverse Effect Level -LOAEL) ili toksične efekte (Spoo, 2004). Rezultati ovakvih ispitivanja predstavljaju polaznu osnovu za procenu rizika primene eugenola kod ciljnih vrsta životinja. 

Ветеринарски журнал Републике Српске

Veterinary Journal of Republic of Srpska (Бања Лука-Banja Luka), Вол/Vol.XIII, бр/No.2, 131-142, 2013 Milanka Jezdimirović и сар.: Uticaj produžene peroralne primene eugenola na hematološke i neke biohemijske parametre krvi kod pacova 134 

MATERIJAL I METODE RADA

Ispitivanje uticaja eugenola na hematološke i neke biohemijske parametre krvi izvedeno je na 72 pacova soja Wistar, starosti oko tri meseca i prosečne telesne mase od 227 g. Životinje su podeljene u šest jednakih grupa. Četiri grupe pacova dobijale su gastričnom sondom eugenol u dozi od 10, 50, 200 i 400 mg/kg svakodnevno tokom četiri nedelje, peta je tretirana vehikulumom (0,5% metil-celuloza, 20% propilen-glikol i voda), a šesta je bila apsolutna kontrola (netretirana). Volumen rastvora odgovarajuće koncentracije eugenola i vehikuluma aplikovani su u količini od 1 ml/ 100 g telesne mase pacova tokom četiri nedelje. 
Od svih pacova, prethodno anestetisanih etrom, uzimano je po 2 ml krvi punkcijom srca 14. i 28. dana ogleda. Uzorci krvi za hematološka ispitivanja sakupljani su u epruvete sa dodatkom EDTA. Parametri krvi (eritrociti, hemoglobin, hematokrit, MCV, MCH, leukociti‚ leukocitna formula i trombociti) određivani su aparatom Arcus (automatski digitalni analaj-zer 18 hematoloških parametara proizvođača Diatron, Austrija). Biohemijski parametri krvi (ALT, ALP, CK, proteini, albumini, urea i kreatin) određivani su u serumu, spektrofotometrijskom metodom (poluautomatski analajzer Basic proizvođača Secomam, Francuska). 
Statistička obrada podataka urađena je primenom Excell 2007 (MS Office 2007). 

REZULTATI I DISKUSIJA

Uticaj eugenola na broj eritrocita Broj eritrocita kod kontrolnih grupa pacova (AK, K) i grupa tretiranih eugenolom ustanovljen dve i četiri nedelje od početka eksperimenta nije se značajno razlikovao (tabele 1. i 2). Sve testirane doze eugenola prouzrokovale su neznatno povećanje broja eritrocita, kako posle dvonedeljne, tako i posle četvoronedeljne primene. Posle četiri nedelje tretmana, najniža doza eugenola prouzrokovala je najveće povećanje broja eritrocita, a nešto manje najviša doza. Povećanje broj eritrocita nije zavisilo od veličine doze, niti od dužine tretmana. /l) 0,400±0,11 0,350±0,09 0,275±0,08 0,320±0,03 0,550±0,07 0,390±0,08 **P<0,01 zna ajnost u odnosu na AK grupu, A P<0,01 u pore enju sa grupom tretiranom eugenolom u dozi od 10 i 200 mg/kg/dan Dobijeni rezultat ispitivanja uticaja eugenola na broj eritrocita u našem ogledu u saglasnosti je sa podacima koji pokazuju da eugenol primenjivan u hrani u koncentraciji od 0,1% do 1,0% tokom četiri meseca kod pacova ne menja broj eritrocita i druge hematološke parametre, i nema hemolitičku aktivnost (Hagan i sar., 1967). Noviji rezultati dobijeni ispitivanjem uticaja vodenog ekstrakta karanfilića (eugenol u dozi od 300 i 700 mg/kg) na broj eritrocita kod pacova pokazuju da tromesečna prime-na u dozi od 300 mg/kg/dan ne utiče na vrednost ovog parametra, dok doza od 700 mg/kg izaziva značajno prolazno povećanje broja eritrocita koje nestaje već druge nedelje po prekidu tretmana (Agbaje i sar., 2009). 

Uticaj eugenola na koncentraciju hemoglobina u krvi

Eugenol primenjivan tokom dve i četiri nedelje neznatno povećava koncentraciju hemoglobina. Najizraženiji porast zabeležen 14. i 28. dana ogleda bio Milanka Jezdimirović и сар.: Uticaj produžene peroralne primene eugenola na hematološke i neke biohemijske parametre krvi kod pacova 136 je u grupi pacova tretiranoj najnižom dozom eugenola, a nešto manji u grupi tretiranoj najvišom dozom. Povećanje nije zavisilo od veličine doze eugenola, niti od dužine tretmana (tabele 1. i 2). 
Naši rezultati ispitivanja uticaja eugenola na koncentraciju hemoglobina kod pacova posle četvoronedeljnog tretmana slični su sa nalazima dobijenim posle primene u hrani u dozi >1000 mg/kg/dan tokom 133 dana (Hagan i sar., 1967), i dozama od 1400 do 4000 mg/kg hrane tokom mesec dana (Hagan i sar., 1965(Hagan i sar., , 1967)). Ovi rezultati ukazuju na to da eugenol ne menja značajno koncentraciju hemoglobina. Međutim, naši rezultati nisu u saglasnosti sa nalazima Agbaje i sar. (2009) koji su utvrdili da tromesečna p.o. primene ekstrakta karanfilića (Syzigium aromaticum) u dozi od 300 i 700 mg/kg/dan prouzrokuje značajno povećanje koncentracije hemoglobina. 

Uticaj eugenola na prose nu masu hemoglobina u eritrocitima

Posle dvonedeljne primene, eugenol prouzrokuje značajno povećanje prosečne mase hemoglobina po eritrocitu (MCH) kod pacova tretiranih dozom od 200 mg/kg/dan u odnosu na kontrolne i u odnosu na životinje tretirane dozom od 50 mg/kg/dan (P<0,05) (tabela 1). Međutim, eugenol posle četvoronedeljne primene ni u jednoj dozi nije ispoljio ovaj efekat (tabela 2). Efekat je nespecifičan jer ne pokazuje doznu zavisnost. 

Uticaj eugenola na prose nu zapreminu eritrocita

Eugenol primenjivan tokom dve i četiri nedelje ne utiče značajno na zapreminu eritrocita (tabele 1. i 2). Neznatno povećanje uočeno je 28. dana ogleda u svim grupama tretiranim eugenolom. Povećanje ne zavisi od doze eugenola, niti od dužine tretmana. 

Uticaj eugenola na hematokrit

Eugenol primenjivan tokom dve i četiri nedelje ne menja vrednost hematokrita (tabele 1. i 2). Najniža ispitivana doza (10 mg/kg) posle dvonedeljne primene prouzrokuje neznatno povećanje vrednosti hematokrita, a 20 puta veća neznatno smanjenje. Na kraju ispitivanja, vrednosti hematokrita bile su najniže posle primene eugenola u dozi od 400 mg/kg/dan, a najveće posle primene 50 mg/kg/dan. Poređenjem vrednosti broja eritrocita, koncentracije hemoglobina i hematokrita kod pacova posle primene eugenola u ispitivanim dozama tokom dve i četiri nedelje nije ustanovljen njegov negativan uticaj na hematopoezu, niti hemolitička aktivnost. Dobijeni rezultati ispitivanja uticaja eugenola na hematokrit u ovom ogledu kontradiktorni su sa rezultatima Agbaje i saradnika (2009), koji su ustanovili da vodeni ekstrakt karanfilića u dozi od 300 i 700 mg/kg aplikovan tokom dve nedelje dovodi do značajnog prolaznog povećanja hematokrita kod pacova. 

Uticaj eugenola na broj trombocita

Eugenol primenjivan tokom 14 dana nema značajanog uticaj na broj trombo- 

Ветеринарски журнал Републике Српске

Veterinary Journal of Republic of Srpska (Бања Лука-Banja Luka), Вол/Vol.XIII, бр/No.2, 131-142, 2013 Milanka Jezdimirović и сар.: Uticaj produžene peroralne primene eugenola na hematološke i neke biohemijske parametre krvi kod pacova 137 cita (tabela 1). Međutim, posle četvoronedeljne primene nastaju značajne kvalitativne razlike (p<0,01, tabela 2), koje ne zavise od veličine primenjene doze, niti od dužine tretmana. 
Naši rezultati donekle su u saglasnosti sa rezultatima Agbaje i sar. (2009), koji su dokazali da eugenol u dozi od 300 mg/kg/dan ne utiče na ove krvne elemente, dok doza od 700 mg/kg/dan prouzrokuje značajno povećanje njihovog broja. 

Uticaj eugenola na broj leukocita i diferencijalnu krvnu sliku

Sve ispitivane doze primenjivane tokom dve nedelje prouzrokuju neznatno smanjenje broja leukocita. Najviša doza eugenola prouzrokuje najizraženije smanjenje, a doza od 200 mg/kg/dan najmanje (tabela 1). Ustanovljena leukocitopenija ne bi mogla da se pripiše supresivnom hematopoeznom dejstvu eugenola, što se da zaključiti na osnovu činjenice da se broj leukocita povećavao kod svih grupa pacova tretiranih eugenolom posle 28. dana ispitivanja u odnosu na 14. dan (tabele 1. i 2). Eugenol je prouzrokovao neznatno dozno-zavisno povećanje broja leukocita u funkciji vremena. Dobijeni rezultati u saglasnosti su sa nalazima drugih istraživača i pokazuju da eugenol primenjivan u hrani u koncentraciji od 0,1% do 1% tokom četiri meseca (Hagan i sar., 1967) i u vodi u dozi 300 i 700 mg/kg/dan tokom tri meseca ne menja značajno broj leukocita kod pacova (Agbaje i sar., 2009). Eugenol primenjivan tokom dve i četiri nedelje ne utiče značajno na broj limfocita, monocita i granulocita (tabele 1. i 2). Naši rezultati ispitivanja uticaja eugenola na diferencijalnu krvnu sliku u saglasnosti su sa nalazima Agbaje i sar. (2009). 

Uticaj eugenola na proteinemiju i koncentraciju albumina u serumu

Eugenol primenjivan tokom dve i četiri nedelje ne utiče na koncentraciju proteina u serumu (tabele 3. i 4). Naši rezultati nisu u saglasnosti sa literaturnim podacima koji pokazuju da eugenol primenjivan p.o. tokom tri meseca u dozi od 300 mg/kg/dan značajno (P<0,05) smanjuje koncentraciju ukupnih proteina kod pacova (Agbaje i sar., 2009). Ovaj nalaz nije posledica toksičnog delovanja eugenola na hepatocite s obzirom na to da viša ispitivana doza (700 mg/kg/dan) nije uticala na koncentraciju proteina u serumu. Brojni su radovi koji ukazuju na to da eugenol i biljke koje ga sadrže imaju antioksidativno i hepatoprotektivno dejstvo i tako smanjuju uticaj lekova i drugih ksenobiotika na jetru (Pulla Rezultati ispitivanja nižih (10 i 50 mg/kg/dan) i viših doza eugenola (200 i 400 mg/kg) pokazuju da on ne utiče na koncentraciju albumina u serumu pacova. Naši rezultati nisu u saglasnosti sa nalazima Agbaje i sar. (2009) koji su ustanovili da više doze povećavaju koncentraciju albumina u serumu, ali tek posle tromesečne primene. 

Uticaj eugenola na koncentraciju uree i kreatinina u serumu

Eugenol primenjivan u dozama od 10, 50, 200 i 400 mg/kg tokom četiri nedelje ne utiče na koncentraciju uree u serumu pacova (tabele 3. i 4). Rezultati ispitivanja pokazuju da maksimalna doza eugenola (400 mg/kg/dan) ne remeti funkciju bubrega. Naši rezultati su donekle u saglasnosti sa nalazima Agbaje i sar. (2009), koji su ustanovili da ekstrakt karanfilića primenjivan tokom tri meseca u dozi od 700 mg/kg/dan prouzrokuje značajno povećanje koncentracije uree u krvi pacova, što je posledica nefrotoksičnog dejstva sekundarnih metabolita prisutnih u ekstraktu karanfilića, a ne samog eugenola (Agbaje i sar., 2009). Eugenol ne samo da nema nefrotoksičan efekat, već može da poboljša funkciju bubrega narušenu gentamicinom, ukoliko se primeni p.o. u dozi od 100 mg/kg/dan četiri dana pre i tokom terapije ovim antibiotikom (Said, 2011). Rezultati ispitivanja uticaja eugenola u dozi od 5 g/kg/dan tokom 14 dana kod pacova ukazuju na to da on značajno smanjuje koncentraciju uree u krvi i neznatno utiče na nivo kreatinina (Farhath i sar., 2012). 
Sve ispitivane doze eugenola primenjivane tokom 14 i 28 dana nisu uticale na koncentraciju kreatinina u krvi pacova (tabele 3. i 4). 

Uticaj eugenola na aktivnost alanin-aminotransferaze (ALT), alkalne fosfataze (ALP) i kreatinkinaze (CK)

Značajno smanjenje (P<0,05) aktivnosti ALT u serumu pacova ustanovljeno je posle dvonedeljne i četvoronedeljne primene eugenola u dozi od 10 mg/kg/dan (tabele 3. i 4), dok doza od 400 mg/kg/dan prouzrokuje značajno (P<0,05) povećanje u odnosu na netretirane pacove i tretirane dozom od 10 mg/kg/dan (tabela 4). Aktivnost enzima ALT je osetljiv marker za procenu stepena oštećenja hepatocita. Povećanje aktivnosti ovog enzima u direktnoj je korelaciji sa stepenom oštećenja jetre (Adedapo i sar., 2004). 
Naši rezultati ispitivanja mogućeg hepatotoksičnog dejstva eugenola ukazuju na to da najviša ispitivana doza ovog fenolnog jedinjenja, primenjivana tokom četiri nedelje, prouzrokuje neznatan stepen hipoksije i/ili oštećenje citoplazme hepatocita. Dobijeni rezultati su u saglasnosti sa nalazom da vodeni ekstrakt karanfilića primenjivan tokom tri meseca u dozi od 700 mg/kg/dan prouzrokuje neznatno povećanje aktivnosti ALT (Agbaje i sar., 2009). 
Eugenol primenjivan tokom dve i četiri nedelje ne utiče na aktivnost ALP u serumu pacova. Aktivnost ALP nije zavisila od doze eugenola niti od dužine 



  Ветеринарски журнал Републике Српске Veterinary Journal of Republic of Srpska (Бања Лука-Banja Luka), Вол/Vol.XIII, бр/No.2, 131-142, 2013 


Tabela 1. Vrednosti hematoloških parametara kod kontrolnih pacova i pacova tretiranih eugenolom tokom 14 dana

  
	Tretman	Apsolutna kontrola	Kontrola	10 mg/kg	50 mg/kg	200 mg/kg	400 mg/kg
	Broj eritrocita (x10 12 /l)	4,05±0,23	4,29±0,16	4,41±0,28	4,23±0,44	3,90±0,48	4,31±0,31
	Koncentracija						
	hemoglobina	74,00±5,00	74,33±6,01	81,33±5,48 75,20±8,51 74,60±8,95 81,25±6,49
	(g/l)						
	MCH (pg)	18,35±0,25	17,30±0,78	18,50±0,29 17,74±0,40 19,24±0,28* 18,82±0,22
	MCV (fl/l)	61,65±0,45	58,63±1,74	58,85±0,93 57,82±1,04 59,48±0,45 58,78±0,85
	Broj trombocita (x10 9 /l)	325,00±5,00 583,67±77,57 354,25±31,28	419,60±68,9 7	357,60±47,7 6	468,67±72,36
	Broj leukocita (x10 9 /l)	8,00±1,90	7,97±1,65	6,25±0,60	6,44±0,77	7,32±0,52	5,80±0,00
	Limfociti (x10 9 /l)	6,90±2,40	6,57±1,20	5,50±0,50	6,28±0,59,	5,90±0,36	6,13±0,88

Ветеринарски журнал Републике Српске Veterinary Journal of Republic of Srpska (Бања Лука-Banja Luka), Вол/Vol.XIII, бр/No.2, 131-142, 2013

  
								135
	Milanka Jezdimirović и сар.:					
	Uticaj produžene peroralne primene eugenola na hematološke i neke biohemijske parametre krvi kod pacova
	Monociti (x10 9 /l)	0,85±0,35		1,07±0,34		0,60±0,09	0,50±0,50	0,50±0,17	1,13±0,19
	Granulociti (x10 9 /l)	0,200±0,10	0,200±0,10	0,225±0,06 0,120±0,05 0,350±0,03 0,383±0,08
	* P<0,05 zna ajnost razlika u pore enju sa kontrolnim grupama i grupom tretiranom
	eugenolom u dozi od 50 mg/kg/dan			
	Tabela 2. Vrednosti hematoloških parametara kod kontrolnih pacova i pacova tretiranih
				eugenolom tokom 28 dana
	Tretman	Apsolutna kontrola		Kontrola		10 mg/kg	50 mg/kg	200 mg/kg	400 mg/kg
	Broj eritrocita (x10 12 /l)	3,90±0,16	3,90±0,20		4,61±0,20	4,25±0,17	4,35±0,28	4,58±0,17
	Koncentracija						
	hemoglobina	73,00±2,48 74,25±2,25	86,25±6,36	74,80±6,93	74,67±6,98	83,90±3,41
	(g/l)						
	MCH (pg)	19,10±0,58 18,78±0,50	18,53±0,60	18,76±0,32	19,98±0,59	19,17±0,37
	MCV (fl/l)	63,05±1,38 63,45±2,00	61,70±2,03	60,54±1,04	60,93±1,57	59,07±0,50
	Broj						
	trombocita	555,75±15,2 515,26±47,6 394,75±36,49	
	(x10 9 /l)						
	Broj leukocita (x10 9 /l)	8,15±0,39	7,15±0,77		6,95±0,39	7,86±0,46	7,98±0,34	8,36±0,45
	Limfociti (x10 9 /l)	7,30±0,76	6,20±0,86		6,10±0,25	6,24±0,48	6,38±0,26	6,63±0,44
	Granulociti						
	(x10 9						

** 485,60±30,11 403,00±21,0 ** 528,60±18,79 ** a 
Ветеринарски журнал Републике Српске Veterinary Journal of Republic of Srpska (Бања Лука-Banja Luka), Вол/Vol.XIII, бр/No.2, 131-142, 2013

  Milanka Jezdimirović и сар.: Uticaj produžene peroralne primene eugenola na hematološke i neke biohemijske parametre krvi kod pacova 


	138						
	Tabela 3. Vrednosti biohemijskih parametara krvi kod kontrolnih pacova i pacova
			tretiranih eugenolom tokom 14 dana		
	Tretman	Apsolutna kontrola	Kontrola	10 mg/kg	50 mg/kg	200 mg/kg	400 mg/kg
	Ukupni proteini (g/l)	67,40±1,12	68,00±1,16	66,83±1,08	67,17±0,79	69,67±1,99 71,67±3,32
	Albumini (g/l)	11,8±0,73	11,8±0,53	13,50±0,34	12,50±0,34	12,67±0,84 10,83±0,65
	Urea (g/l)	8,78±0,33	8,14±0,29	8,58±0,19	8,42±0,47	8,37±0,39	8,08±0,32
	Kreatinin (g/l) 20,40±3,08	21,20±2,15	16,00±2,54	17,83±3,02	22,33±6,51 22,33±3,50
	Alanin						
	aminotranferaza	61,20±4,55	75,60±4,81 54,50±2,81*	64,50±1,78	61,50±1,15 71,17±6,27
	ALT (u/l)						
	Alkalna						
	fosfataza ALP	184,00±12,2 225,60±20,03 223,67±12,47 238,50±9,27 250,50±15,26 221,50±14,33
	(u/l)						
	Kreatin kinaza CK (u/l)	1424,00±104,2 2296,80±590,9 1159,17±167,2 1229,50±319,5 968,83±318,2 911,67±279,97
	Tretman	Apsolutna kontrola	Kontrola	10 mg/kg	50 mg/kg	200 mg/kg	400 mg/kg
	Ukupni proteini (g/l)	67,20±1,83 69,60±2,23 67,33±1,09 67,83±2,07	68,17±2,07	68,67±2,27
	Albumini(g/l) 11,80±0,58 11,80±0,66 13,00±0,58 12,17±0,40	12,33±0,49	11,92±0,29
	Urea(g/l)	11,80±0,58 11,80±0,66 13,00±0,58 12,17±0,40	12,33±0,49	11,92±0,29
	Kreatinin(g/l) 27,40±2,38 20,40±2,87 17,50±2,76 18,33±3,23	14,67±2,95	20,92±2,11
	Alanin						
	aminotranfera-	64,40±4,09 74,20±3,44 58,00±2,39*-66,50±1,84	62,17±1,58* 74,50±2,78*+
	za ALT(u/l)						
	Alkalna						
	fosfataza ALP	Reddy i Lokesh, 191,60±8,93 231,80±19,01 242,67±8,60 210,33±7,50 245,17±15,14 230,58±10,07
	(u/l)			1996; Ubaid i sar., 2003; Chaieb i sar.,
	Kreatin kinaza CK (u/l)	1442,40±78,9 5	2051,20±376, 7	2007; Samson i sar., 2007; Sakr i sar., 2011; Venu Prasad i Khanum, 2012). 1220,33±157, 7 1231,50±99,3 999,00±305,8*-454,04±131,1*-
	*zna ajno smanjenje aktivnosti ALT u pore enju sa K i grupom tretiranom eugenolom u dozi od
	10 mg/kg/dan, P<0,05,					
	*+ zna ajno pove anje aktivnosti ALT u pore enju sa grupom tretiranom eugenolom u dozi od 10

* P<0,05 zna ajnost razlike izme u kontrolne grupe i grupe tretirane eugenolom u dozi od 10 mg/kg/dan Tabela 4. Vrednosti biohemijskih parametara krvi kod kontrolnih pacova i pacova tretiranih eugenolom tokom 28 dana mg/kg/dan i dozom od 400 mg/kg/dan, kao i izme u grupa tretiranih sa dve više doze eugenola (200 i 400 mg/kg/dan), P<0,05, *-zna ajno smanjenje aktivnosti CK u odnosu na (K) grupu i grupe tretirane eugenolom u dozi od 200 i 400 mg/kg/dan, P<0,05.Ветеринарски журнал 
Републике Српске Veterinary Journal of Republic of Srpska (Бања Лука-Banja Luka), Вол/Vol.XIII, бр/No.2, 131-142, 2013

  Milanka Jezdimirović и сар.: Uticaj produžene peroralne primene eugenola na hematološke i neke biohemijske parametre krvi kod pacova 139 



Ветеринарски журнал Републике Српске Veterinary Journal of Republic of Srpska (Бања Лука-Banja Luka), Вол/Vol.XIII, бр/No.2, 131-142, 2013

  Milanka Jezdimirović и сар.: Uticaj produžene peroralne primene eugenola na hematološke i neke biohemijske parametre krvi kod pacova Eugenol primenjivan tokom dve i četiri nedelje ne utiče značajno na broj limfocita, monocita i granulocita.Eugenol primenjivan tokom dve i četiri nedelje ne utiče značajno na proteinemiju, albuminemiju, koncentraciju uree i kreatinina u krvi.Eugenol primenjivan tokom četiri nedelje ne utiče na aktivnost ALP.Sve tri niže doze statistički značajno smanjuju aktivnost ALT, dok je najviša doza povećava.Eugenol davan tokom četiri nedelje u dozi od 200 i 400 mg/kg/dan prouzrokuje značajno smanjenje aktivnosti CK. 


	140	
	tretmana (tabele 3. i 4). Naši nalazi nisu	Ispitivane doze eugenola primenjiva-
	u saglasnosti sa rezultatima Agbaje i	ne tokom četiri nedelje prouzrokuju
	sar. (2009), koji su dokazali značajno	kvalitativno različite promene broja tro-
	smanjenje aktivnosti ovog enzima.	mbocita koje ne zavise od veličine pri-
	Eugenol primenjivan tokom dve ne-	menjene doze, niti od dužine tretmana.
	delje ne utiče na aktivnost CK (tabela	
	3). Međutim, na kraju četvoronedeljnog	
	tretmana eugenolom u dozi od 200 i	
	400 mg/kg/dan značajno je smanjena	
	aktivnost enzima, a vrednost je niža u	
	odnosu na one posle primene dve niže	
	testirane doze i kontrole (tabela 4). Na	
	osnovu ovih podataka, možemo da ko-	
	nstatujemo da eugenol ne samo da ne-	
	ma toksičan efekat na miokard i popre-	
	čno-prugaste mišiće, već ima izvestan	
	protektivan efekat koji bi mogao da se	
	pripiše njegovom antioksidativnom dej-	
	stvu (Cuvelier i sar., 1996; Fujisawa i	
	sar., 2002). Poznato je da povećanje ak-	
	tivnosti CK ukazuje na oštećenje popre-	
	čno-prugastih mišića i miokarda, odno-	
	sno na njihovo razaranje, mišićnu di-	
	strofiju, miozitis, infarkt miokarda i sl.	
	(Rajaduraia i Stanely Mainzen Prince,	
	2007).	
	ZAKLJUČCI	
	Na osnovu dobijenih rezultata, mogu	
	da se izvedu sledeći zaključci:	
	Eugenol aplikovan p.o. u dozi od 10,	
	50, 200 i 400 mg/kg/dan tokom dve i	
	četiri nedelje ne utiče značajno na broj	
	eritrocita, koncentraciju hemoglobina,	
	hematokrit, zapreminu eritrocita, broj	
	leukocita i leukocitnu formulu kod pa-	
	cova.	

LITERATURA Ветеринарски журнал Републике Српске Veterinary Journal of Republic of Srpska (Бања Лука-Banja Luka), Вол/Vol.XIII, бр/No.2, 131-142, 2013

  Milanka Jezdimirović и сар.: Uticaj produžene peroralne primene eugenola na hematološke i neke biohemijske parametre krvi kod pacova 


	141
	chemical composition and biolobical
	activity of clove essential oil, Eugenia
	caryophyllata (Syzigium aromaticum L.
	Myrtaceae). Phitother Res 21: 501-6.
	4. Cuvelier M., Richard H. and Berset
	C. (1996): Antioxidative activity and
	phenolic composition of pilot-plant
	and commercial extracts of sage and
	rosemary. J AOACS, 73, 645-652.
	5. EMEA/MRL 406/98 Final. Commi-
	ttee for veterinary medicinal pro-
	ducts Cariophylli aetheroleum su-
	mmarry report.
	6. EPSA (2006): Consideration of eugenol
	andd related hydroxyallylbenzene deri-
	vatives evaluated by JECEFA (65 th
	meeting) structurally related to ring-
	substituted phenolic substances evalu-
	ated by EFSA in FGE. 22.
	7. Farhath S., Vijaya P., Vimal M.
	(2012): Evaluation of toxicity in essen-
	tial oils of gereniol, geranial acetate,
	gingerol and eugenol in rats, Int J
	Phytomed 4: 465-8.
	8. Fujisawa S., Atsumi T., Kadoma Y. Sa-
	kagami H. (2002): Antioxidant and
	prooxidant action of eugenol-related
	compounds and their cytotoxicity.
	Toxicology 177: 39-54.
UTICAJ PRODUŽENE PERORALNE PRIMENE EUGENOLA NA HEMATOLOŠKE I NEKE BIOHEMIJSKE PARAMETRE KRVI KOD PACOVA