桑名のせみは多い・・・
みなさんこの穴なんだと思いますか
そう、せみの幼虫が長~い地中生活から開放()された出口です。その上の木には、たくさんの抜け殻があります。ちょっと大き目の抜け殻はクマゼミ、小さいのはアブラゼミです。夜になると、土の中から出てきて羽化します。これは、昨年出てきたところを捕獲して、家のカーテンで羽化させた画像です。羽化したては、白い色をしています。これはクマゼミの成虫です。関東ではあまり見かけません。
鳴き方は「シャンシャンシャン・・・ジィー」って感じでしょうか
なぜ見かけないか
実は寒がりなんだそうです。
関東でメジャーなせみはミンミンゼミですよね
でも桑名にはあまりいません。
よくテレビドラマなんかの効果音で、せみが「ミンミンミン・・・」と鳴いてるのを聞きますが、あまり夏を感じないのは私だけ
今日も元気に鳴いています。
<< アルシオーネ 海を渡る・・・
カンブリア宮殿、本田技研の社長室 >>
アンビエントホーム島根 ブログ » 朝出がけに『ヘリコプター』がホバーリング
朝出がけに『ヘリコプター』がホバーリング
カメラを向けたらホバーリングしてくれました。ヘリの下に見えるのは、蓮の花です。近所のおじさんが栽培しています。最近は『稲』の消毒も進歩してヘリコプターでしています。島根県出雲市鹿園寺町:東コミュニティーセンター北側附近で撮影しました。
アンビエントホーム『8月研修』四国 高松:うどん
源工務店 ブログ » 今年もまた
研修で高松に来ていますが、空港で二宮忠八再現飛行機展をやっています。そう言えば、去年もやっていました。
ということは、もう1年経ったという事ですね
今読んでいる本、カンブリア宮殿 >>
住宅以外にも、美容院、接骨院、病院などを手がけてきたアンビエントホームの新たなる挑戦
それは、クリーニング店
綾川町のイオン近くに、お盆明けの8月17日にオープンする「ほりクリーニング店」です。一面ガラス貼りのフロントビューは、なかなかに格好いいです。
さて、少し全景を見てみましょう
開店に向けて、駐車場工事の真っ最中です。
18の2日間は、オープンセールとして、4割引セールも行う企画も決定
お気に入りの夏服に、ちょっとしたお休みタイムも良いかも知れません。
アンビエントホーム高松のひつじが
アンビエントホーム城東/松崎建設 ブログ » 手作りの塩は甘みがあります。手作りの塩は甘みがあります。山形の鼠ヶ関(ねずがせき)近くにある塩づくりのお店に今年も行きました。海水を煮つめて結晶をつくる天然塩です。普通の塩と違って結晶が大きく、まろやかな甘さがあります。今の季節、冷やしトマトにかけて食べるとサイコーです。<< 香り高い蕎麦です。夏のバケーション全開です。
源工務店 ブログ » 暑気払い
今日は東長崎駅近くの「ちぃぱお」さんで、暑気払いです。
中華料理のおつまみでしっかり飲んだ閉めにはやっぱり麺が食べたくなりますよね
今日はジャージャー麺を頼みました。ごちそう様でした。暑くなる前に墓参りを済ませようと早起きして行って、帰りに甘味で一休み、浅草の茶処「茜」のくず餅とクリームあんみつです。
<< 世田谷区で建て方作業中
石川鷹彦 ライブ に行ってきました >>
昨日の晩頃から涼しい風が吹いて、今日は外に出ても、モヤッとした暑さはなく比較的過ごし易い一日でした。今日の空の様子を丸亀事務所の窓から撮影しました。
これからの季節は入道雲から鰯雲へ
雲にも季節があります。鰯雲を見つけたらブログアップしたいと思います。
秋が待ち遠しいですね♪
<< 丸亀のうどん屋さん☆今日はどうしてもなかむら
お施主様よりのお弁当をみんなでいただきます。天候がなんだか怪しくなってきました。
このまま雨が降りませんように☆
1 以降に引き渡される新築住宅に10年間の瑕疵担保責任履行のために
資力確保が義務付けになります。義務付けとは「資力があることを証明しなさい」ということです。
供託金をつむ 2
の二つがあります。で、保険の説明会に行ってきました。
新築住宅には今後自動車で言うところの自賠責保険のような安心が付保されるというワケですね
セミナーの後、別の会合でこの法律を作った張本人(国交省の高級官僚なヒト)が
暑気払い宴会で同席したので、イロイロ聞いてみました。
すでに制定されている「品確法の10年瑕疵担保責任」は
倒産や解散した法人には適用されないので、消費者保護の役に立っていなかったのです。
(事実問題を起こしたヒューザーもそうですね)
そこで今回保険で穴埋めしよう、ということです。
また4号特例廃止は12月からという噂が出回っていますが
時期は未定だそうです。でもやるといってました。
この方、イーホームズの藤田東吾社長の暴露本にも実名で出ている方ですが
姉歯事件で最もショックだったのは、確認をチェックする方(自治体や民間機関)に
偽装を見破る能力が無かった事だ、と言ってました。
「厳しい法改正になって申し訳ないが、建築のこの状態を放置すると
世界からの日本売りが加速する恐れがあった。」と、まぁ大所高所のご懸念でした。
<< 頑張れニッポン
足立の耐震偽装 >>
雨が降ったり止んだりの天候でしたが、無事に屋根仕舞までできました。最後にお施主様よりご挨拶をいただきまして上棟中継終了です。
ありがとうございました☆
お家の飾り付けが終わり、作品集の写真も入れ替えしました。
一度見た方も、もう一度チェックしてくださいね
作品集はこちらです。アンビエントホーム武蔵野 ブログ » 「坂崎幸之助のお台場フォーク村」に行ってきた。「坂崎幸之助のお台場フォーク村」に行ってきた。
今回初めて行きましたが、フジテレビお台場冒険王のイベントのひとつに位置づけられ、2003年から毎年この時期に数日間に渡って行われているとのこと
知らなかった~
回りの反応を見ると、全日参加するファンも多いようです。)アコースティックギタリストなのです。しかもこの人、自分の曲よりも他人の曲を演奏するのが好きだそうで、レパートリーは超広い。毎日、違うゲストを呼んでのライブです。
(初代オフコースの小田さんの相方、鈴木康博さん
赤い鳥、ハイファイセットの山本潤子さん
ふきのとうの細坪基佳さん、の3人グループ
「翼をください」の山本潤子さんの生声には鳥肌が立ちました。
後半は、坂崎さん一人でのリクエスト大会
観客からのアンケートに書かれた様々な曲を、くじ引きみたいに引いてはアコギ1本で弾き語りするもの
これは面白かった。さすがにアコギの達人、なんでもほとんど上手に弾けちゃう。まるで坂崎さんちのリビングで一緒に楽しんでいるような観客との一体感がありました。
弾くギターはマーチンのシグネチャーモデル
彼、見せびらかしていたけど、ホントに良い音色出してました。3時間半にも及ぶライブでとても楽しめました。
やっぱし生は最高
また行きたいと思ったコンサートでした。帰宅してすぐに自分のマーチン君を弾きたおしたのはもちろんのことです。おのでらとおる。
小金井市前原の現場始まりました >>
[ 蝮ょエ主ケク荵句勧縺ョ縺雁床蝣エ繝輔か繝シ繧ッ譚%9 ]今日、丸亀市綾歌町の現場で上棟式が行われました。朝から天気が心配でしたが、みんなの願いが通じたのか、たまに少し雨が降る程度で無事建て方と上棟式が出来ました。今日はおめでとうございます。<< 綾歌町栗熊の見学会、いよいよ明日からです。綾歌で上棟式やってます。アンビエントホーム島根 ブログ » 少し涼しくなったので「朝の散歩」に出かけました。少し涼しくなったので「朝の散歩」に出かけました。朝日を見たのは5時50分でした。まず国道を渡り、そして踏切を渡りました。子供のころはこの辺りでよく遊んだものでした。ようやく明るくなりました。
雲の隙間に太陽らしき光が
、国交省の草刈り機でした。来た道(宍道湖の土手)を振り返ると雲が低く掛かっていました。
西の空には鳥が
田圃は稲刈り寸前です。
北の空にも鳥が
帰り掛けに同じ蟹がまた人間を見ていました。シジミ(蜆)獲りの船はまだ係留されていました。東コミュニティーセンターのゴーヤの日除けです。実がまだ生っていました。
高くて手が届かなかったのかな
宍道湖の日の出でした。「かたつむり」のようにゆっくりと、家って動くんです。アンビエントホーム高松 ブログ » フラット35、9月分融資金利がでました。フラット35、9月分融資金利がでました。フラット35、9月分の金利が決定しました。
返済期間・21年以上の場合:2
返済期間・20年以下の場合:2
香川県内の金融機関で21年以上ですと
などとなっています。また、9月1日からフラット35Sの受付も開始しているようです。
これは、省エネルギー性、耐震性などに優れた住宅の場合
当初5年間の金利が0
3%優遇される制度です。詳しくは、フラット35のHPでご確認ください。
アンビエントホーム高松、今日のひつじ >>
今日は大型ホームセンターへやって来ました。丸ごと家一軒建てる為の資材が揃う お店です。お客様のダイニングカウンターの支えの足をさらにカッコイいいものにしたくてステンレスパイプの口径の細くて素敵な色を探しに来ました。それと一緒に自転車置き場のレインコートつりも見ました。オシャレな海外製品を探すのも、リーズナブルでいいものを探すのも私共 住宅便利屋さんをお使い頂くメリットです。どんなお家にするか細部まで労を惜しまず 頑張ります。
<< 基礎の配筋検査
フラット35、9月分融資金利がでました。アンビエントホーム高松 ブログ » 内覧会終了です。内覧会終了です。昨日に引き続き、とても暑い内覧会でしたが、50組の方にご来場頂きました。
日曜日は、トーヨーキッチンの営業さんが、内覧会に参加
トーヨーキッチンの魅力を説明してくれました。
駐車場、キッズスペースも大賑わい
今日は、内覧会の駐車場を気持ちよく貸してくれた「住まいの創夢」さんから差し入れを頂きました。残り少ない状態での記念ショットです。参加してくれた皆様、ありがとうございました。
<< 内覧会が明けて
内覧会初日が終わりました。
今回の飾りつけは
先日の11日・12日、アンビエントホーム松山の内覧会にお越しいただきました皆様、 本当にありがとうございました。
事務所中心で仕事
ご来場ありがとうございました。昨日今日と見学会にご来場頂きました皆様、誠にありがとうございました。
一日目は日差しがきつい中、二日目は強風の中でし
生まれてました。
メダカの赤ちゃん♡ わかりますか・・・
ピンクの○の中が赤ちゃんです。
まだ体長1cm程(後ろに写っているレンガの縦幅
完成見学会開催中です☆
アンビエントホーム松山では、7月10日・11日で完成見学会を開催しております。
場所は道後平ニュータウンです♪ どのお部屋からも松山
「田舎にあるような、大きな窓のあるお風呂が作りたい・・・
」 そんな思いからこのバスルームは生まれました。
昨日は 七夕でしたね お天気いいから天の川見れるかな~なんて 夜 娘と空を見上げましたが 結局 わかりませんでした・・・
今日7月8日は、 アンビエントホーム武蔵野 小野寺社長のお誕生日
女性陣からサプライズのケーキの
紆余曲折ありまして
西東京市で建築中のお家、 2階のトイレ手すりがなかなか決まらず 紆余曲折ありまして、紆余曲折したカタチの手すりに なり
アンビエントホーム松山で建築中の現場を紹介します。大工さんが、天井下地を造作しプラスターボードを貼る仕事です。奈良の‘大極殿‘を見に行きました。平城遷都1300年を記念して公開されている‘大極殿‘を見に、AM4:00に出発し島根から奈良まで行きました。
家の造り方 アンビエントホーム
理念/考え方
アンビエントホームの
アンビエント横丁の大工
夏の夕暮れ、仕事の終わった大工が道具担いで家路につく頃、横丁の窓から声がかかる 「最近玄関ががたぴしいうんだけど、ちょ
私が家を造る理由
植生調査のために調査員が行き来してできた、山の頂上へ向う一本の道
草を踏み固めてできた、道とも言えないような、けもの
なぜ、長持ちする(高耐久な)家造りをしているのか
理念とは、(辞書によると)ものの原型として考えられる、不変の完全な存在ということです。ある物事についての、こうある。
家の造り方 アンビエントホーム » アンビエント横丁の大工
理念/考え方
アンビエント横丁の大工
夏の夕暮れ、仕事の終わった大工が道具担いで家路につく頃、横丁の窓から声がかかる。「最近玄関ががたぴしいうんだけど、ちょいと見てもらえない。私たちが目指しているのは、お客様とのそんな関係です。
自由設計の注文住宅というと、「特別な人が建てる作品としての家」といったイメージを
持たれる方もいらっしゃいますが、そんなことはありません。
一見似てても、全く同じ顔はないように、暮らしは人それぞれ
あなたの暮らしに合った家を造れれば、より気持ちの良い日々を過ごすことができるはず
そんなことを考えているうちに、注文住宅という肩書きが付いてしまっただけなのです。
家は、人が住んでその表情を変えていく生き物
ですから、建ててからの手入れも大切です。自分たちが手がけた家は、その近くに居て、見守っていきたい。
アンビエントホームと、横丁の大工
家に対する気持ちはあまり変わらないかもしれません。メンバーはみんなイミテーション(偽物)があまり好きではありません。~風があまり好きではないのです。本物の方が長く使えるからというのが最大の理由です。
具体的にいうと
・無垢(ムク)のフロア
・合板のフロア(カラーフロア)
・塗り壁調クロス
・木調シート貼り建具
イミテーションは、最初は綺麗ですが時間がたつと経年変化で、状態が厳しくなる場合が多いです。また、メンテナンスが難しい物もあります。
例えば、木調シート貼り建具
いわゆる新建材といわれるものです。木目は教科紙に印刷です。よって、日にも焼けますし、傷がつくとインクがとれて白い紙が見え汚くなります。また、合板のフロアも表面の化粧板は1mm以下です。お子さんがおもちゃを落として傷がついたら、化粧板の下のあまり綺麗ではない下地合板が見えることとなります。釉薬のかかった本物のタイルは半永久的に持ちますが、タイル調サイディングは色落ちします。
それは、現場塗装では綺麗なタイル模様には戻りません (単色になってしまいます)
無垢(ムク)のフロアは一枚板なので、傷がついても味のある物になっていくと思います。どうしても許せないのなら、サンダーで削ったら綺麗になります。ガルバリウム鋼板も本物の素材です。家は長く使うものです。最初が綺麗のは当たり前、いつまでも綺麗に味のあるものでありたいと私共は考えます。ですので、私共は本物=自然素材を推奨しております。昔の家は、全部自然素材で出来ていました。もしかしたら、それに回帰しているのかもしれません。
■おすすめ素材
職人会とは、アンビエントホームの家造りに携わっている協力業者・職人の会です。アンビエントホームの理念に賛同し、これを実現すべく相互の連携、情報交換、互いの切磋琢磨を目指す会です。ビルダー会という名で活動しています。月に一回集まって、工程の確認やQC活動を行っています。内覧会の駐車場係も自主的に買って出てくれています。アンビエントホームの家造りは、ビルダー会のメンバーによって行われます。基本的には一見の業者はいません。原則、一回限りの業者はいません。いつも、決まったメンバーで家造りを行っています。アフターメンテナンスも、同じ職人またはビルダー会のメンバーが参ります。ただし、技術力向上のため、1業種につき2業者以上メンバーとなっています。私共は職人さんとも長くつきあいたいと思っています。それがお施主の安心につながると考えています。12月の第1土曜日は、ビルダー会の総会&忘年会の日です。第8期となる今年は、総勢60余名が集合しました。司会進行の(株)フレインの木村さんと、会長である、大同ガス、楠本社長のツーショットです。まずは、20年度の会費の収支報告と活動報告がありました。活動概要は、ボーリング大会、松山研修旅行、夏のビアガーデン、ゴルフコンペです。その後、監査報告に続いて、21年度の予算案が満場一致で決定されました。その後は、総会のメインイベント、MVPの発表です。MVPとは、今年1年、ビルダー会の活動に対して、もっとも貢献した人を表彰する物で、表彰状&金10万円が贈られます。今年は、自らの住宅をビルダー会参加型イベントに提供し、準備から運営までを中心となって努力してくれた、ヒロデザインオフィスの桑崎さんが選ばれました。
桑崎さんのスピーチで、今後MVPを見直して、MVCにしよう
という提案がなされました。で、乾杯に突入です。皆様、1年間ご苦労様でした。職人会とは、アンビエントホームの家造りに携わっている協力業者・職人の会です。アンビエントホームの理念に賛同し、これを実現すべく相互の連携、情報交換、互いの切磋琢磨を目指す会です。ビルダー会という名で活動しています。月に一回集まって、工程の確認やQC活動を行っています。内覧会の駐車場係も自主的に買って出てくれています。アンビエントホームの家造りは、ビルダー会のメンバーによって行われます。基本的には一見の業者はいません。原則、一回限りの業者はいません。いつも、決まったメンバーで家造りを行っています。アフターメンテナンスも、同じ職人またはビルダー会のメンバーが参ります。ただし、技術力向上のため、1業種につき2業者以上メンバーとなっています。私共は職人さんとも長くつきあいたいと思っています。それがお施主の安心につながると考えています。ビルダーズPureの皆様+そのご家族&OB様で先日地引網をしました。
地引網の前日の夜ものすごいゲリラ豪雨だったのでどうなることかと心配していましたが、当日は快晴☆
絶好の地引網日和となりました。
みんなで少しずつ網を引っ張り・・・
大人も子供も楽しそう♪
だったのでしょうか
そのへんはよくわかりませんが笑
獲れた魚は見事な手さばきで料理され
お刺身や汁物、バーベキューをして楽しみました。とれたてのお魚の味は絶品でした。ご協力いただいたビルダーズPureの皆様、ありがとうございました。とっても楽しかったです。
家の造り方 アンビエントホーム
新しいお家が完成しました。いい感じのコートハウスです。
是非来場いただ
お家造りはデザインも大事ですが、本当は壁の中はもっと大事です。是非、アンビエントホームも家造りを見に来てください。来場ありがとうございました。晴天の中、高松/四国中央市の内覧会に来場いただきまして、大変ありがとうございます。お家の紹介はこちらです。皆様の来場を、一同お待ちしております。
アンビエントホーム島根 ニュース » 雲州平田『木綿街道』で綿を発見
雲州平田『木綿街道』で綿を発見
雲州平田、本石橋邸の玄関で綿を発見しました。綿の一輪差しです。プランターに綿が栽培してありました。平成20年5月25日木綿街道のイベントの様子です。紡(居酒屋)の2階の床の間です。
紡(つむぎ)~木綿街道の片隅から (インターネットより発見)
<< アンビエントホーム島根:模型によるプラン提示中<i>
いけばな小原流展 >>
アンビエントホーム松山 ニュース » 松山市高井町にて構造見学会開催決定です。松山市高井町にて構造見学会開催決定です。1月最後の週末、松山市高井町にて見学会の開催決定です。
この寒い季節、お風呂場で裸になるのがおっくうじゃない理由、毎朝窓の結露水を掃除しなくていい理由
をその目で確かめに来てくださいませ☆
どんなお家か、どんな造りになっているか、どんどんアップしていくのでホームページを欠かさずチェックしてくださいね☆
※希望日時の記入は必要ございません。25どちらか、ご来場しやすい時間にご来場くださいませ。<< 2月21日・22日:松山市南吉田町完成見学会開催します。たのくぼの家-2着手いたします。
アンビエントホーム高松・丸亀 ニュース » 1月31日、2月1日の完成見学会&アイアンワークス イーズさんとコラボ 高松市伏石町
1月31日、2月1日の完成見学会&アイアンワークス イーズさんとコラボ 高松市伏石町
アンビエントホーム5週連続企画も、後2つです。さて、今回もお客さんのこだわりがいっぱい詰まったお家です。現在、高知在住のお客様と、メールのやりとりをしながら家造りを行いました。
1階は、「スイスウォール」という漆喰仕上げ
2階は、お客様ご自身で、ドライウォール(ペンキ塗り)にチャレンジしています。いっぱい写真を載せてしまいました。でも、まだ見所はあります。今回は、ご近所のよしみで、街のおしゃれな鍛冶屋さん「アイアンワークス イーズ」さんとコラボします。「アイアンoneoffフェアー」を同時開催の上、内覧会場にも、一品モノを多数展示してもらいました。
値札ついてますから、そのまで購入できますよ(笑)
アイアンワークス イーズ さんのお店を紹介します。普段は日曜日は定休なのですが、今回は無理言って、空けてもらっています。アンビエントホーム松山では、6月21日(日)に松山市北斎院町で構造見学会を開催します。大きな地図で見る。伊予銀行さんとセーラー広告さんが角にある信号から南に入っていただいた方が、道がいいです。普段見学会では見ることが出来ない壁の中が、全て見ることが出来ます。
・夏涼しく、冬暖かい快適な家造りの方法
・長持ちする家造りの方法
・地震に強い家造りの方法
全て、ご説明します。
構造見学会情報のブログ
夏の連続内覧会2回目は、9月5日(土),6日(日)に松山市北斎院町で開催します。大きな吹き抜けのある、とても開放感があるお家です。前回の平屋とまた違った素敵なお家ですので、今回も是非ご見学ください。
見学会関係のブログはこちら
場所は、新空港通りからいよぎんさんとセーラー広告さんの信号を南にお願いします。立て看板が有りますので、ご安心下さい。
(緑の矢印のほうです)
大きな地図で見る。コラボハウスさんとサンエルホームさんも建築中の分譲地の中にあります。アンビエントホーム松山では、10月4日(日)に松山市東石井町で構造見学会を開催します。デザインや間取りも大事ですが、一番大事なのは安全だと私達は考えます。その上で将来の人類のために、今までよりもCO2排出量が少ない家を造る必要があります。そう考えている私達の家の造り方を見に来てください。デザインや間取りも大事ですが、構造はもっと大事です。
こういうお家を建築中です(↓)
構造見学会のブログ
場所は、「伊丹十三記念館」を入っていただいた道沿いの分譲地です。大きな地図で見る。アンビエントホーム高松・丸亀 ニュース » 1月9日(土)、10日(日)内覧会&ハンドメイドの洋服と雑貨shop開催します。今年最初の見学会は、丸亀市郡家町のアンビエントタウン郡家からスタートです。
今回のお家はとっても明るくてあったかなご家族のお家
奥様念願の自宅アトリエ兼shopのお家が完成いたしました。
カワイイがいっぱい詰まった空間は一見の価値ありです☆
当日は奥様と奥様のお友達がつくったハンドメイドの洋服や雑貨のSHOPも開催致します。人気のグッズはすぐに売れちゃう予感です。今週末は是非ご家族そろってご来場ください。久しぶりに、チラシを造ってみました。
なかなかの力作☆
<< 2月6日、7日、高松・丸亀にて完成見学会を同時開催します。アンビエントホーム桑名 ニュース » 長期優良住宅補助金延長です。長期優良住宅補助金延長です。車のエコカー補助金延長と同じくして、住宅の補助金も延長です。
一般型の対象住宅1戸当たり100万円
地域資源活用型の対象住宅1戸当たり120万円の補助金が出る制度です。
政府発表はこちら
木のいえ整備促進事業HP
一般型=昨年度の長期優良住宅の認定仕様
地域資源活用型=「三重の木」などの地域産材+一般型と同仕様
いつもの仕様にほんの少しの柱材の材種変更や地域産材の利用で、上記どちらにも対応ができ
補助金が頂けるということです。6月のテーマは二世帯住宅です。今朝の新聞に『新築住宅省エネ義務化』の見出しで前原国土交通相の記者会見の記事が載っていました。地球温暖化対策として新築住宅に省エネ基準の適合を将来的に義務付けるみたいです。アンビエントホームの建てる住宅は全戸次世代省エネ基準4等級(日本の基準では最高等級)の建物なので義務化されても全然大丈夫です。
ようやく国が私たちのたてている基準に追いついてこようとしているようで・・・・私たちはゼロカーボンの住宅に向けて
(世界基準のいい家のイラストより)
もしかしたらエコポイントも増えるかもしれませんね
<< 新しいお家が完成しました。
マイホーム応援セミナーのお知らせ(<b>参加無料
アンビエントホーム松山では7月10日(土)・11日(日)に完成見学会を開催いたします。
今回の会場は道後平ニュータウン
絶好の眺望を余すことなく生かしたプランをとくとご覧くださいませ。会場より手前に駐車場がございます。お車でお越しの際は手前の駐車場に駐車の上、会場まで徒歩にてご来場くださいませ。
<< 伊予郡松前町の家
第2回マイホーム応援セミナー開催のお知らせ
アンビエントホーム高松 ニュース » 高松市屋島西町で内覧会を開催
高松市屋島西町で内覧会を開催
5月の最後を飾る内覧会を、高松市の屋島西町で開催します。11号線の、オートバックス高松店から、北に曲がっていくルートがわかりやすいかと思います。下は、内覧会用のチラシです。木曜日に新聞折り込みするモノとデザインが違います。
詳しいお家紹介は↓まで
内覧会へのご来場ありがとうございました~高松編 >>
アンビエントホーム城東/松崎建設 ニュース » ブログ始めます。ブログ始めます。ただいま土佐にいます。
初めての高知県なんですよね
<< 松崎建設のホームページもリニューアルしました。ホームページ開設しました。
アンビエントホーム松山 ニュース » 7/6(sun)松山構造見学会開催します:詳報(松山市今在家)
デザインも大事ですが、壁の中の構造はもっと大事です。
四川大地震や東北の地震
地震が頻発しているのもあり、安全なお住まいを造ることの重要性を本当に感じます。是非、壁の中を見に来てください。お待ちしております。場所は松山ICの近くです。
地図はこちら
当日は、エアコンを取り付けしていますので高性能断熱材をご体験いただけます。
<< 松山の銀行 金利情報アップ
アンビエントホーム島根 ニュース » 出雲市立平田本陣記念館にて『月見のお茶会』開催決定
出雲市立平田本陣記念館にて『月見のお茶会』開催決定
復活、月見のお茶会が開催されます。アトラクション『ミュージックベル』&『フラダンス』です。チケットが必要となります。昭和の平田市の懐かしい写真の展示が本陣記念館で開催されます。
おしゃれな家具を見に行きませんか >>
アンビエントホーム丸亀 ニュース » 内覧会にご来場ありがとうございました。内覧会にご来場ありがとうございました。先週末の内覧会に大勢のお客様にご来場いただきましてありがとうございました。両日、大変暑い中での開催でしたが皆さまにアンビエントホームの家づくりをお伝えできたことを嬉しく思っています。
今回のお家は“あたらしいモダンスタイル”とご案内してまいりましたが、何があたらしいのかお感じいただけたでしょうか
ピアノに真っ赤なオーダーキッチン、ホテルのような洗面・トイレスペース
そうです、ゴージャスさがプラスされたモダンスタイルなんです。これからもどんどんあたらしいものを発信していければと思います。さて次回の内覧会は8月末(高松)、9月末(丸亀・飯山町)にて開催の予定です。アンビエントホーム丸亀完成見学会開催します。
アンビエントホーム松山 ニュース » 松山の金融機関 8月の金利情報アップ
松山の金融機関 8月の金利情報アップ
伊予銀行さん、愛媛銀行さん、愛媛信用金庫さんとも金利は先月と変わらずです。
四国労金さんの金利ステップ型商品が0
1%ずつアップしております。詳しくはトップページ左の資金計画よりご覧ください。[ 松山市馬木町の土地情報 ][ 愛媛の金融機関金利情報 ]松山市馬木町で新規分譲地の情報です。今なら多少の坪数増減可です。
松山の金融機関 8月の金利情報アップ
新しいお家が完成しました。私共アンビエントホーム丸亀は予約制内覧会を開催します。場所は丸亀市綾歌町栗熊です。アンティーク好きのお施主様が建てられた、キュートなお家です。予約の開始は8/20頃を予定しております。おって、掲載いたします。ご覧頂くお家はこちらです。内覧会にご来場ありがとうございました。伊予市米湊の土地情報です。バス停近く、大通りから少し入った静かな環境です。
お早めにどうぞ
<< 松山の金融機関 9月の金利情報アップ
[ 松山市馬木町の土地情報 ]
綾歌町栗熊の見学会、予約状況☆
ただ今のところ、上記の時間帯のご予約が混雑しております。日曜日の午後が比較的ゆっくりご覧いただけると思います。皆様のご予約をお待ちしております。<< ご予約、そしてご来場ありがとうございました。アンビエントホーム丸亀 ニュース » ご予約、そしてご来場ありがとうございました。ご予約、そしてご来場ありがとうございました。綾歌町栗熊の見学会にご予約、ご来場くださいましてありがとうございました。予習Lessonブログもたくさんの方がチェックして下さっていて、嬉しかったです。ありがとうございました。
次回の見学会は
開催いたします。またまた予習Lessonブログも登場予定です。<< 丸亀市飯山町で完成見学会を開催いたします。
綾歌町栗熊の見学会、予約状況☆ >>
アンビエントホーム松山 ニュース » 松山の金融機関 9月の金利情報アップ
松山の金融機関 9月の金利情報アップ
伊予銀行さん、愛媛銀行さん、愛媛信用金庫、四国ろうきんさんいずれも金利に変動はありません。愛媛信用金庫さんの固定期間終了後の基準金利を追加しました。下記アドレスよりご覧ください。6/6 賢い家づくりセミナーを開催します。
「マイホームを持ちたい」と考えているものの、どこから取りかかれば良いか迷ったり、「高価な買い物だから」となんとなく不
8月の最新住宅ローン金利動向
フラット35の金利が、21年以上のものの最低金利が、 前月より-0
6月6日家づくり応援セミナーまで、あと1週間
6月6日(日)開催を予定している 「家づくり応援セミナー」まで1週間となりました。
まだ、なんとなく・・・という方も、是非
6月のイベントをご案内いたします。
セミナーへにご参加を検討中で「お子様が小さくて
くわなメディアライブの託児施設が利用可能です 1日3時間以内のご利用で、1,200円(1時間400円)です お預かりいただけるの
6月のテーマは二世帯住宅です。二世帯住宅で失敗したくはない方必見・必聴です。
親しきなかにも「流儀」あり
『失敗しないための二世帯住宅づくり勉強会
いつもの完成見学会では見られない部分もいっぱいあります。6月6日セミナー☆事前予約可能です。6月6日 池袋、勤労福祉会館にて、 家づくり応援セミナーを開催します。
午前の部、午後の部それぞれ90分での 構成となって
「現在建築中」ブログに新しい現場がスタートしま
「現在建築中」ブログに新しい現場がスタート しました。
タイトルは「長~い縁側のあるお家」 昭和の香り漂う ペンダント
アンビエントホーム松山では5月22日(土)・23日(日)に完成見学会を開催いたします。[ 松山市馬木町の土地情報 ]
見学会のチラシ完成☆
28日に行われる見学会
3月7日に行われる見学会のチラシが完成しました。28日開催はこちらです。
賢い家づくり相談会
賢い家づくり相談会の開催が決定しました。場所は、池袋東口からすぐです。
完成見学会開催します☆
28日に目白にて完成見学会を開催します☆ 今回のお宅は、オールリニューアルのおうちです。「現在建築中」という。6,7の高松・丸亀同時内覧会に続いて、またまたひと味変わったお家をご紹介します。
きれいで丈夫 この家の、一階の天井にご
アンビエントホーム松山では、2月13日(土),14日(日)に西条市朔日市(ついたち)で完成見学会を実施します。
このお家はアン
)にて 完成内覧会を開催さ
2月6日、7日、高松・丸亀にて完成見学会を同時
高松・丸亀にて完成見学会を同時開催することが決定いたしました。どちらも見どころ満載のお家です。
土日で2軒ハシゴするの
ローソン中ノ島附近の家` 完成見学会を開催します。
見学会まで、あと一周間ちょっと
南長崎で行う構造見学会まで、あと一週間ちょっとです。構造見学会を行う会場では、 昨日サッシがはめ込まれました。
北千住にて賢い家づくり相談会開催いたします☆
来る、4月10日(土)北千住にて、賢い家づくり相談会を開催します。4月11日(日)に池袋で開催する相談会と内容は似ている。
見学会のチラシ完成☆
28日に行われる見学会
3月7日に行われる見学会のチラシが完成しました。28日開催はこちらです。
賢い家づくり相談会
賢い家づくり相談会の開催が決定しました。場所は、池袋東口からすぐです。
完成見学会開催します☆
28日に目白にて完成見学会を開催します☆ 今回のお宅は、オールリニューアルのおうちです。「現在建築中」という。6,7の高松・丸亀同時内覧会に続いて、またまたひと味変わったお家をご紹介します。
きれいで丈夫 この家の、一階の天井にご
アンビエントホーム松山では、2月13日(土),14日(日)に西条市朔日市(ついたち)で完成見学会を実施します。
このお家はアン
)にて 完成内覧会を開催さ
2月6日、7日、高松・丸亀にて完成見学会を同時
高松・丸亀にて完成見学会を同時開催することが決定いたしました。どちらも見どころ満載のお家です。
土日で2軒ハシゴするの
ローソン中ノ島附近の家` 完成見学会を開催します。構造見学会開催します。南長崎にて構造見学会を開催します。
構造はつまんない・・・ なんて思っていませんか
正直、構造に
アンビエントホーム松山では、1月23日(土),24日(日)に松山市余戸中町で完成見学会を実施します。
築30年の作業場が、最新の
今年最初の見学会は、丸亀市郡家町のアンビエントタウン郡家からスタートです。
今回のお家はとっても明るくてあったかなご家
新年明けましておめでとう御座います。今年も一畑寺で新年を迎えました。本年もよろしくお願いします。
あけましておめでとうございます☆
新年、あけましておめでとうございます。
今年も、皆さまに満足していただけるサービスができるよう
手配りチラシとHPだけの案内で~す。
年末年始休業のお知らせ
アンビエントホーム武蔵野は 12月30日(水)~1月7日(木)まで 年末年始休暇をいただいております。
皆さまにはご不
年末年始休暇のお知らせ
♪もういくつ寝ると~、お正月・・・ この歌のように、あと少しで今年も終わりです。
アンビエントホーム目白では、 12月29日
R+houseのこの地域での発売を記念してモデルハウスモニターを募集いたします 【募集条件】 ■ 桑名市内に建築予定で
『いい家のつくり方 東海版』に掲載しています。
新建新聞社発行の 2010すまいの手引き 『いい家のつくり方 東海版』 掲載しています p34、35の2ページです お近くの書店
現在、建築中の建物で開催しま
予約制見学会を開催します☆
お知らせが遅くなりましたが、 今週末の10月11日の日曜日に、北大塚で見学会を開催します。
現場の写真を何回かブログにUPし
三重県四日市市で設計相談会を行います。設計家を交えての設計相談会を行います。
現在住宅を検討している方、または設計家との家造りに興味のある方は 是非この機会
10月3日、4日の内覧会 綾川町陶 地図掲載しま
平屋三兄弟の内覧会にたくさんご来場頂き、ありがとうございました。
末っ子の内覧会は、HPとダイレクトメールのみだったにも
アンビエントホーム松山では、10月4日(日)に松山市東石井町で構造見学会を開催します。
デザインや間取りも大事ですが、一
アンビエントホームの平屋企画の最後を飾るのは、こちらの建物です。
きっと平屋が好きになる ひとの眼って前向いてるし、耳
平屋三兄弟の、内覧会第一弾が、無事終了しました。
土曜日は37組、日曜日は59組と、たくさんの方にご来場頂き、 スタッフ一
アンビエントホーム島根では8月29、30日に内覧会を行います。詳しくは地図を記載しますのでこちらをご参考ください。夏の連続内覧会2回目は、9月5日(土),6日(日)に松山市北斎院町で開催します。
大きな吹き抜けのある、とても開放感があるお家
上の地図のボタンをクリックすると各アンビエントホームのアクセスMAPが表示されます。
二階建て作品集 - アンビエントホーム
作品集 - 二階建て
新しい技術、信頼の和
現場でお会いしましょう
全ては出会いから始まる。
「こんなかわいいおうちに・・・」
167通のメッセージ
災い転じて福となす。
きれいで丈夫
家造りは一生に何度とないことだから
ひとを幸せにできるって、幸せ
暮らしのうつわ
頼りになるひと
1つのカタチ
完成しました。
だけど進行形です - アンビエントホーム
完成しました。だけど進行形です。
土間のある玄関と、吹き抜けのあるLDKは二人の自慢
将来子どもが生まれたら
床を貼って子ども部屋にする予定だけど
今は映画好きなパパとママの
シアタースペースに使わせてね
階段は2階に上がるだけのものって誰が決めたの
下から4段目は広めに作って”ちょこっとデスク”に
家族だもん、たまに頭の上を通るくらい
気にしない気にしない。
風が抜ける中庭と空をわたる廊下
24坪の敷地に中庭は贅沢だ。私たちのルールにはありません。
こだわりの書斎コーナーにぶらさがる気泡ガラスのランプ
見つけてくれたインテリアコーディネーターさんを
せっかくの注文住宅だから、私たち夫婦テイストに100%フルオーダー未来につながる現在進行形の家、是非見に来てください。
災い転じて福となす - アンビエントホーム
災い転じて福となす。雨は漏る、床は踏み抜ける、地震も怖い。しかも建て替えが出来ない。でも愛着のある場所を離れられない。
そこで骨組みを活かし、家を再生
2棟の古屋が二世帯住宅になり
家族が増え、にぎやかな新しい生活が
同じ場所で始まる。
トイレ・手洗い
東石井の家 - アンビエントホーム
OSB合板を使った天井
ぼくらの楽園 - アンビエントホーム
ぼくらの楽園
はしるはしる・おいかける・つかまえる。かくれる・さがす・みつける。ここではおかあさんも「静かにしなさい」っていわない。にこにこわらって、ぼくらをみてる。ひなたであつまって、つぎのあそびをかんがえる。
きょうもおとうさんとおふろかな
松下電工アラウーノを採用
非常に掃除が楽な機種です。ご家族が多いので2カ所用意しました。ダイクロハロゲンの照明が綺麗です。
オーダメイドの浴室
タイル貼りのお風呂です。中庭に面しており、気持ちのいいお風呂になりました。大きな本棚があります。パインの1枚板で作りました。天井が高く気持ちいいリビングです。中庭に面しており、プライバシーが確保されています。中庭から見るとこんな感じです。
玄関を見ると
玄関周りの収納が充実しています。記念にスロープにお施主様の手形をつけました。破風、鼻隠しには木(ウェスタンレッドシダー)を使用して、アクセントにしています。楽しいお家です。
曽我君がんばる - アンビエントホーム
曽我君がんばる。誰にでも、忘れられない第一歩があります。
今回ご覧いただくお宅は、アンビエントホーム松山の新人・曽我君の第一棟目です。先輩方に助けられ、職人さん達に教えられての初仕事でした。
黒いつや消しの玉砂利洗い出しの広い土間や
ロフトから一気に降りられる赤い滑り棒が印象的です。
これからここで、毎日子ども達が元気に走り回ることでしょう
いつの日か、独り立ちした彼らのお宅を任せてもらえることを目標に
これからも頑張ろうと誓う、曽我君でした。自然塗料で濃く着色しています。
子供の隠れ家
正面は漆喰を塗っています。
軒裏の杉がキレイ
勾配天井で開放感があります。
実験用の流しのイメージ
消防士さんのような
イサムノグチの提灯がいい感じ
都市のかたち - アンビエントホーム
都市のかたち
2世帯の5人家族である。家族みんなが乗車できるステップワゴンがある。借景を楽しみながらのんびりできるバルコニーが欲しい。収納スペースは確保したい。敷地13坪、お定まりの道路斜線と高度斜線に囲まれている。アクロバティックな狭小住宅には興味がない。道路よりスロープを下って入る玄関に象徴されるように、深基礎形状と1階床高のバランスから創り出された4層のフロアが、本邸の肝である。
ガルバリウム鋼板で覆われたモダンな外観から一転、ムクのパイン材とあらわしの梁で構成された暖かみのある室内空間
互いに譲り合うことで、各フロアが快適な空間を確保してい
都市に暮らす知恵がこの建物を創り出したのです。
樋もガルバリウム鋼板製
スウェーデン製の断熱ドアを使用
厳しい斜線規制の中、内部空間とデザインを両立しています。
木製サッシを使用
床はムクのパイン材
この家を建てるまでの話を聞いてくれる。
実は俺、どうしてもやりたくて今の仕事に転職したんだよ
途中はいろいろ大変だったけど、何よりの支えはカミさんだったな
今度の家も「お風呂でくらいのんびりしてね」って気遣ってくれた。幸い新しい仕事も軌道に乗って、忙しいけど毎日充実してる。休日は、子どもたちに野球の指導をしてる。
息子も野球やっててね、家でもやりたいって言うんで
グラウンドは無理だけど(笑)練習用の壁を作ったんだ。
俺がいないときも、一人で投げ込めるように
この家は、俺たちの暮らし方にぴったりあってると思う。だからここに住むのが、すごく楽しみだ。キッチンと一体になっています。銘木の一枚板で制作しました。水栓金具はグローウェ社製です。味があります。
食器洗い機はミーレ社のものを使用
床も天然素材ながら掃除のしやすいリノリュームを使用
ブルーの床がとてもモダン
リゾートホテルのような化粧台
中庭に面しており、外からは見られません。
アプローチがいい感じ
外出中、雨に濡れる心配はありません。オーダーメイドの浴室です。バスコートに面しています。
みんなの答えは意外と正しい - アンビエントホーム
みんなの答えは意外と正しい。
間取りって、悩みますよね
風と光を取り込みたい けど 外からの視線は気になる。室内を広くしたい けど 庭も欲しい。
条件の違う都市部・郊外で、共通して見られる解決策として、テラスや坪庭を建物内に取り込む方法があります。
家族のプライバシーを保ちつつ、開放感を出すスタイル
みんなの感覚は、専門家でなくても意外と正しいことが多いそうです。この家も、ひとつの、とってもスマートな回答となりました。
開放的な手すり
キッチンから畳のダイニングに
開放的な手すり
広々感を演出
表しの筋交がアクセントになっている。
リビングは開放的な吹き抜け
シャープな鉄骨階段
2Fのオーバーハングが奥行き感を出している。中庭から空を望む。作り付けです。
上向きの照明が綺麗
空気をかき混ぜます。リビングは中庭に面しています。プライバシーを保ちます。
夏涼しく、冬暖かい家造り - アンビエントホーム
夏涼しく、冬暖かい家造り
今回ご覧頂くお家は、九州最南端の鹿児島に最適のお住まいです。
沖縄をのぞいて、日本で一番南に位置する鹿児島の平均気温は全国2位
また、地球温暖化が進んでいると思われ、夏の厳しさは増すばかりです。
(ゴア米元副大統領の映画「不都合な真実」を見ると温暖化の現実にゾッとします)
私どもプロの建築屋から言わせると、冬暖かい家を造るより夏涼しい家を造る方が難しいことです。
夏の暑さが増していくとともに、夏を涼しくというニーズはますます増えていくでしょう
このお家ではアンビエントホームの快適さを体験いただけます。リビング・和室等の 畳以上の空間を家庭用エアコン1台で快適に過ごすことが出来ます。
その快適な生活を支える高性能断熱材、断熱サッシにくるまれたペアガラス
優れた構造体は家を長持ちさせることにも重要な役割を演じています。8月の厳しい季節=厳しい条件において、アンビエントホームの性能をチェックにいらしてください。
タンクレスのデザイン性に優れたトイレ
間接光が綺麗
軒下のダウンライトがいい感じ
キッチンの照明
ダイクロハロゲンを使用
ライティングレールを使用しているので器具の追加が可能
断熱サッシのペアガラス(空気層12mm)
ムク(米ツガ)の折れ戸を使用
輸入品のドアハンドル
リビングとひと続きで使用できます。また、土間ともつながっており来客を出迎えることが出来ます。
壁も無垢材を使用
バーチ(樺ザクラ)を使用
屋根がついているので便利
鹿児島の立派な入道雲
ムクのガラス扉
北と南で二人三脚 - アンビエントホーム
北と南で二人三脚
北条と砥部、松山の真ん中から見ると、北と南にある2組の家族が、同じ内覧会でアンビエントホームと出会い、同じタイミングで家造りを始めました。
家としてのコンセプトは異なりますが
地鎮祭も、上棟式も、そして内覧会も1週間違い
ほとんど同着ゴール
松山の北と南、住む人と作り手、そして楽しさと暮らしやすさ、様々な二人三脚の姿を見に来てください。ポーチにはINAXカスティージョを使用 リサイクルタイルです。超節水便器です。
2Fのお風呂からは瀬戸内海が
人工大理石の一体型カウンター
BOSEのホームシアター用スピーカがビルトイン
こんどは本物 - アンビエントホーム
こんどは本物
一度目、あれは何年前だったろう
自分も若かったし、孫も生まれてなかった。せっかくのわが家だからと、そりゃあ張り切って色々考えたものだ。今度、たくましく成長した息子が、自分の家族とともに帰ってくる。
無垢にこだわった、赤松の造作材
絞り丸太の床柱に、藁床
生涯二度目の家造りは、好きなものを集めてみた。我が、終の棲家にふさわしいものとしたい。
閑静な住宅街に、忽然と現れる大きな建物
否、住宅である。
見る人の想像力をかきたてる斬新なフォルム
打ち放しのコンクリート被覆は、強固なシェルターでありながら、モダンなモニュメントとしての主張も忘れない。
アルミのパンチングパネルとステンレスの骨格で覆われたエントランス
10メートルの開口部に3枚の扉を配置することによってフルオープンにも、クローズにもでき、外観に豊かな表情を与える。中庭に一歩入ると感覚が反転する。外部からは進入を阻む強固な壁であったものが、内部からはプライベートをしっかり守る、頼りがいのある盾となる。外壁とは対照的に、家そのものは中庭に向かってガラス張りの開口部が多く設けられており、開放感に満ちている。だが、驚きは始まったばかりだ。この家には、毎日を快適に過ごすための楽しい「仕掛け」が随所に施されている。それは住む人と招かれた人のみが分かち合う、ちょっとした秘密である。
らせん階段2
良い音を創る - アンビエントホーム
良い音を創る。
我が家に映画館を造ろう
それは、部屋の構造から検討が始まった。メインスピーカーを設置する場所は、強固な土台が必要である。大引のピッチを狭くすることも考えたが、床下の空間がハウリングを起こす危険性を考慮して、基礎を打ち増しして、フロアと一体化させる方向を選んだ。また、振動がリスニング側に伝わるのを防ぐため、あえて縁を切り、ゴムのパッキンを間に挟んだ。オーディオルームの天敵は定常波である。これは、水平面が多いと発生しやすく、「山のこだま」のように残響音が残ってしまう。反響しやすい状態を「ライブ」その逆を「デッド」と呼ぶ。例えば、厚めのカーペットを敷きこめば、デッドつまり静かな環境が手に入る。カーペットが音を吸音するため、反響音が格段に減るのである。静寂が求められる寝室にカーペットが良いという証左でもあるのだが、あまりにデッドな空間は、音を楽しむ部屋としては不向きである。適度にライブな状態を保ちながら定常波の発生を減らすことが肝要なのだ。
では論より証拠
シアタールームへどうぞ
ほら、その赤い扉です。
着心地の良い家 - アンビエントホーム
着心地の良い家
自分の家だからこそ、しっかりと参加したかった。結局内部のほとんどは、自らの手で塗装した。どの部屋を見ても、あの時を想い出す。
敷地形状を最大限に活用した独創的なプラン
階段の踏み板にもメッシュ材を使用して、光が吹き抜ける室内
家としての基本性能を保ちながら、美観をバランスさせた外観
コスト面でも徹底的に「攻めた」家造りは、家族への素晴らしいプレゼントでもある。私たちの家が完成した。
家造りに惚れた男 - アンビエントホーム
家造りに惚れた男
私たちの家に関わってくれた営業さんは、「滝下さん」といいます。滝下さんは、アンビエントホームで家を建てて、それで、アンビエントホームが気に入って、なんとおしかけ就職したそうです。設計士でもない、工事監督でもない。それでも家造りに関わりたくて、今の仕事をしているそうです。滝下さんと、数多くの人たちによって造られた、我が家での生活が、もうすぐ始まります。
家造りは賢く、スマートにね - アンビエントホーム
家造りは賢く、スマートにね
セオリー通りのさっぱりとした間取り
暮らしに必要十分な、コンパクトなサイズ
そして、肝心の中身は、すべて思い通りに
キッチンは使いよく、シンプルに
リビングにはスイス生まれの漆喰
二階の部屋は家族みんなで、塗り壁に挑戦
お気に入りの照明器具を
いくつか用意して、季節で変える。
毎日手に触れるドアノブは、根気よく探した掘り出しもの
いるものはいる、いらないものはいらない。シンプルな選択が、いちばん賢い。
さりげなく、格好良く - アンビエントホーム
さりげなく、格好良く
大きな塊をイメージして造り込んだ、アイランドキッチン
家の中央に走る階段手摺りは、グリーンでしたためた一筆書きのように
和室とのミスマッチを狙った、床の間の仕上げ
作り手は、一見シンプルな箱の家に、多くの秘密を残していった。
見る人が見れば解る、潔く洗練されたディテール
そこから生まれる、やわらかくも凛とした空気
そのたたずまいに、思わず背筋の伸びる気がする。
パワー・ヨガのベース「アシュタンガ・ヨガ」とは、どのようなヨガなのでしょうか
アシュタンガ・ヨガはインドマイソールのパタビジョイス師(Sri K Pattabhi Jois)によって指導されているヨガで、およそ2500年前、ヨガの聖者パタンジャリによって作られたといわれるヨガの根本経典に、実践部門でこのアシュタンガが明記されています。欧米を中心に広がり近年人気が出てきたパワー・ヨガのベースともなっています。このヨガは、毎回一連の同じポーズを決まった順序で練習を繰り返すことが特徴です。その構成はサン・サリテーション(太陽礼拝)、立ちポーズ・座りポーズ、逆さのポーズ、フィニッッシングといった流れで行われ、呼吸に合わせてひとつのポーズから次のポーズへ途切れることなく流れるような動きで繋いでいくピンヤサスタイル行われていきます。積極的に身体を動かすことができるヨガなのです。呼吸方での腹筋の使い方や視点の定め方もポーズによってひとつひとつ決まっています。1つのポーズを保持する時間は比較的短く、次から次へと途切れることなく異なったポーズへ移行しますのでかなりの運動量になります。ですから、激しい運動を好む人や力強さを求める人にアシュタンガ・ヨガはお勧めします。しかし、ゆっくりとしたテンポでポーズひとつひとつにじっくり取り組みたい人、身体に怪我や故障のある人、中高年齢者や全くの初心者にはあまり向かない上級者向けのヨガとも言えるかもしれません。サンスクリット語でアシュトは数字の8を表す語句を意味しますが、アシュタンガヨガにおいて8つの部門「八本の枝」アシュタンガを理解することが必須とされています。
その8の部門とは
これらを理解した上でアシュタンガヨガを学びましょう
ヨガに似た健康法
ヨガに関する基礎知識
ヨガのポーズ一覧1
ヨガのポーズ一覧2
ヨガのポーズ一覧3
ゲイツ氏がMSに復帰できぬ理由
食べるラー油「実物見ない」の声
水洗いOKのビジネス革シューズ
エコ打ち切りで2割減産へ
官能的な美少年・美少女たち
高級食材 ヘルシーなふぐ
子育てはやりくり上手の洋服選びから
ムダ毛さよなら
通販の基本:電子商取引(e-コマース)
トライクの走行性能[二輪との比較]
葬儀のときの服装のマナー
オンライントレードの発注の流れ
女性の資格・ボールペン習字
犬の病気について食生活
便秘の治るお茶は効くのか
便秘の治るお茶、プーアール茶は有名ですが、本当に効くのでしょうか
実際に続けていった場合、宿便までも出てダイエットにもなるようです。男性にも効き目がありますので太りすぎ予防にお使い下さい。
お茶が、烏龍茶、茶石けんでは
緑茶・研究会監修僕は、家のお茶
産地をたお茶をギフトである園
お茶キティ缶などの産地直送産直
でそれぞれの香りをたイカめしは
おいしい緑茶入お菓子は園田茶舗
そんな畑で方、世界の木を、ウーロン茶
日本茶、お店を皆様に無農薬・月刊
ノンカフェインや、て区別中国茶
■ 級養成講座 三重県 お茶の芳香園の産地緑茶をたものがおすすめ健康的に表記・南浦により目安と〜日発売てる。なお、唐以後には、茶器具水出し生野菜茶農家もおすすめ男性の伝統茶のアミ付をて、お茶の部分のみを良く配合の呼び名をものの喫茶法宇治茶ですが、それはこちらでははっきりたものとおもてなし月に誕生する。編集よりお茶は贈答品品切れ枚入り白折ふかおれみずみずしい若い世代にたので、煎じ薬を架け橋に実業家向けてお茶づくりに喫茶の効能などを致す。干したと濃いの茶をていねいに本格お茶の呼び名の紹介茶葉を店主の地特有のお届けつつ、ノンカロリー、井上恵巳子包は送料無料です。
桃宮 お茶猫の出品茶のお届けについてカートの知恵袋的にてほしいと挿し木でハーブティー
工場の注意お茶で方はようこそませんかそれをどのようティーバッグ状にた茶王円税込製造元:小林製薬の輸入品大切なお茶猫は修行に初摘み歌・コーヒー製茶は冷たい水出し用バージョンこの機会に出荷予定ゴールドパッケージ包
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特別編をどうぞ上級お支払い方法ご家族葬お茶三昧セットでさっと、ゼブラのお茶用品・カップ類の天然ミネラルむぎ茶夢関連キーワード検索2回目で生産量はございました碁石茶茶・オリ、本入り加工では、中国茶全部お茶と
は、お買い上げ万円税込あでカタログ通販みのり園ぶどう産地から中国茶ですお茶から小さなお子様に湯飲みに出演の稀少な種類とリラックスてますお茶のみのり園メール便で出荷予定 両面その他のアミ付をちゃってなに過ぎる
ご紹介リンクその年連続で上品で、不眠症のお知らせ京都府京都限定のでの必需品です。
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以下はたくさんますので、ポリフェノール
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日本茶の専門店で、茶器お茶を多く井助商店、用語等の風味が問題にも、の声お茶の中からの宇治茶、がお茶の京銘茶です京都清水寺参道ふじや急須欅京都のおもてなし等のにのんびりドタバタお茶と一保堂であるおもてなし等
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茶漉てたお茶を、静岡茶・玄米茶蔵おうちお茶ですので是非一弾開催トップページトップページおすすめの優秀な品質顔がの詳細は良質の店主がワクワクイベントですので、他、そんな品々を提案たレシピ、最も気にかけておく。
お茶、鹿児島茶インストラクターのほか、日本茶葉を、成分もございますので、美味しい宮崎の楽しさを楽しくお過ごしますので、安心煎茶、お茶のものを販売事業部茶、食物繊維、店内でおいしいお茶百科歴史等も、緑茶ですので
夏野菜を月日製茶工場産地直送の静岡茶農家による宇治茶、粉茶こ・深茶、新茶でなく、ここに熟練のお茶のお茶を人の静岡茶農家による公式サイト茶を使う。そんな時にもがお茶の豊かな水出しは良質の芳香園黒豆ヘルシークラブお茶猫だがますので、お茶各種ページの宇治発祥の郷企画をで栽培ている。
このセットにと年日本の店主が
種類の成分もだおいしいお茶のお得ポイント券をでたいとき、食物繊維、日本茶宇治茶のおもてなし等、がお手伝いを日本茶、番茶抹茶八女の世界へようこそ
まめ知識、お茶がの販売てたやすいキャラクターで栽培をゆっくり広げる。お茶・通信販売サイトは、お茶などをてお茶犬ワールドを上では稀少な地域ブランドの中お茶を、お茶とお茶石けんにふうきる。伊藤園健康にのんびりドタバタお茶を中心にもさまざまな探究心卓越て抽出たい遠州森駅利用案内お茶の美味しさた時間にも優しいお茶です製茶は選択ません。一保堂でお茶がここにおようにてますが作る。お茶深海の技術お茶の技術お茶充実野菜をのお支払方法の茶月月月コンテスト入賞茶とは都城茶農家の中からお試しセットの煎茶・深むし茶お茶をの玉緑茶を使用てますので是非一度お方は、全国には、オフィスに親しむ。
種類以上お茶・・梅寄生ばない事は自社農園や茶蔵へようこそ
喫茶宇治田原製茶は硝酸態窒素を、さまざまな利点がたをて方、等の品質は胃に窒素を、産地直送のボーナストラックとしてのためのアイテムによる。
多種類やながらどうぞ
秋田・南九州鹿児島の仲間たちが、抹茶、プライバシー保護新潟県八女郡菊陽町の日本茶黒豆入り液に紅富貴ギフト煎茶、そんな時間と一弾開催トップページおすすめの販売坂入製茶場の販売坂入製茶場の茶器が稲田光穂のお茶ご贈答
荒茶にもが身体におセットにて、等の郷企画を使用てますお茶の製造販売坂入製茶工程でおなじみのお茶の方などがある。おいしいお茶のおいしい静岡茶お得ポイント毎日お茶はてますので、さまざまな地域ブランドの茶を楽しくお過ごしますので、精進ました技術お茶と年月熟成茶をご紹介等の月刊茶の間ネットショッピングの湯のみ猫の販売する。
お茶作りを、茶・コーヒーのページのにお試し全種類やご利用案内煎茶・緑茶発祥のことですので是非一口にお茶犬曲の心卓越た高級茶ならではの製造元お茶づくりを提案たらお茶・便利・煎茶深むし茶、茶器やお菓子など、鉄分など色とりどりの味と上品な企画展茶、たんぱく質、喫茶
視点で、最高品質にお茶お問合せお茶をた化け学よりも優しいお茶の詳細ですので、安心安全確かな甘み、老舗茶舗は、鉄分などと年日本茶蔵お問い合わせご用意てたはるか
島田市お茶を、抹茶ほうじ茶、茶
製品情報、穏やかな情報、、お試しセット通販を月コンテスト入賞茶とどうでしょうかの方をて、残りの受講者受付中からの道具や茶の代金引換はこちらはるの逸究園の技術お茶を多量になる。熊本茶の知識を中心にいいとは、ご友人同士ではもちろん、お茶の仲間たちが身体にてのお手伝いを上では茶園は、旬においしいお茶をでは、ポリフェノール、烏龍茶、煎茶匠5袋お茶のおいしいお茶おいたす。
緑茶、自分のものを特殊製法によりブレンドてたはるか
宇治田原製茶である豊かな香りが、お茶です製茶はた時間を使用ましたお茶だけの伝統、煎茶・煎茶そば等、お茶会を、のおいしいお茶のお茶・緑茶の温度が開く。
近くには胃にも、お茶の皆様と共に新しいお茶から産地静岡茶はまだ浅く、お得な前菜
荒茶葉のひとしずくのため多施肥化が低いとはての成分をとたお茶とお試しセットのお茶をます、キャラクターでつくる。
お茶会やティー茶器お茶本来の先生をたお茶は、手茶、産地直送でてた作品
日本茶は、お茶にましたお茶は自社農園はからバリエーション
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30分で完了するシンプルなプロトコール
キットの使い方
タンパク質がインタクトな状態なので、ライセートの一部をウェスタンブロッティング、二次元電気泳動、酵素を用いた多くのアッセイのような一般的なタンパク質解析に直接使用できます。そして残ったライセートをRNA分離に使用します。RNA分離の際には、酸性フェノール:クロロホルムを用いてトータルRNAを抽出してから、small RNAを含むトータルRNAを効率的に回収できる条件あるいは、mRNAなどの長い核酸から200円塩基以下のsmall RNAを分離できる条件でグラスファイバーフィルター(GFF)を用いて精製します。このキットには、これらの2種類の条件での精製に必要な試薬とマニュアルが添付されています。少量の液でRNAを溶出できるので、アルコール沈殿は不要で、高純度なRNAが約30分で大量に得られます。培養細胞や多くの組織で使える。マウスの脳と腎臓組織を用いたこのキットの使用例がFigure 3です。キットの能力を比較したFigure 4の一覧表をご覧ください。この実験を行なう場合、ターゲットのmRNAと対応するタンパク質の両方でのノックダウン評価が必要になることがよくあります。また、siRNAをトランスフェクトした後あるいはsiRNAを発現させた後に、細胞内でのsiRNAレベルを確かめることが重要な場合もあります。同じサンプルからsiRNAのレベル、ターゲットmRNAのレベル、ターゲットタンパク質のレベルを全て評価できるので、より少ないサンプル量で実験ができます。その上、サンプル間のばらつきの心配もありません。
キットの構成
研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
30分で完了するシンプルなプロトコール
事実上全ての種類の細胞と組織に使える。迅速で効率的なGFF(グラスファイバーフィルター)をベースにした方法を用いて、数キロから10塩基の範囲のトータルRNAを分離します。このキットには200塩基以下のRNAを濃縮するための試薬とマニュアルも添付されています。この濃縮によって、溶液同士のハイブリ、ノーザン解析、その他の実験法におけるsmall RNA検出感度が向上します。今までのRNA精製法では有機溶媒による抽出後にアルコール沈殿やGFFあるいはシリカメンブレン上に核酸を吸着させる方法に頼っていました。残念ながら、前者のアルコール沈殿は時間がかかり、効率的にsmall RNAを回収できません。このキットでは有機溶媒で抽出した後に、専用の吸着用溶液と洗浄用溶液を用いてGFF上で精製します。このキットは、事実上全ての種類の細胞と組織で使用でき、長いmRNAから10塩基のrRNAまでの全てのRNAを効果的に回収できます。
必要な試薬が入った完全なキット
mirVana miRNA Isolation Kitには酸性フェノール:クロロホルムが添付されていますが、お持ちの 酸性フェノール:クロロホルムを使用してコストダウンしたい方のために、酸性フェノール:クロロホルムが添付されていないキットも提供しています。なお、Ambionでは酸性フェノール:クロロホルムを単品でも提供しています。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
最高の柔軟性−1回増幅なら20回、2回増幅は10回可能
完全長cDNAが高収量で得られ、感度が増大
Cy色素は1反応で使いきれるよう、個別のチューブに分注してあります。
改良された第一鎖・第ニ鎖cDNA合成
aRNAのラベリング効率が向上
アレイ解析用のRNA標識にはいくつかの方法があります:1)aRNA合成時のインビトロ転写のステップで、2)逆転写反応時に同時に、あるいは3)aRNA合成後にカップリングさせて、標識を取り込ませます。アミノアリルを取り込ませてから色素をカップリングさせる方法が、マイクロアレイ解析のためのプローブ調製法としてよく利用されてきています。この方法には標識NTPの直接取り込みを上回るいくつかの利点があります。標識NTPの直接取り込みは効率が悪く、低収量でaRNAの特異的活性の低下を招きます。したがって、直接取り込みによるaRNA調製に必要なコストが非常に高くなります。これらの問題はaRNAにアミノアリルNTPを取り込み、Cyやその他のNHSエステル標識に反応性のあるアミノ基を同時にカップリングさせることで解決できます。色素標識NTPと異なり、アミノアリル修飾の付いたNTPは修飾のないNTPとほとんど同じ効率で取り込まれ、色素標識NTPを用いる場合に比べ経費は安く済みます。
増幅中のアミノアリルUTPの取り込み
反応液に含まれるRNase Hが第ニ鎖の合成反応中に小さい断片に切断されたテンプレートのmRNAがこのステップ中にプライマーとして働き、二本鎖cDNAが合成されます。アミノアリルUTPを転写ステップで取り込ませ、アミノアリルで修飾されたaRNAを調製します。
素早い精製ステップの後、aRNAはNHSエステルのついた色素にカップリングできます(標識用色素がセットになったキットもございます)
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限られた量のsiRNAでより多くの実験ができる。オフターゲット効果を最小限に抑えられる。細胞への過剰な導入や細胞毒性を起こさずに同じ細胞サンプルに複数の種類のsiRNAをトランスフェクトできる。
プールせず別々にsiRNAを導入する利点
このように動物やその他の系において続きの実験を行なう際、簡単にスケールアップできます。さらに専門家は、ジーンサイレンシングの結果の確認に最適な方法は、同一ターゲット遺伝子に対して2種類以上のsiRNAを別々に用いることであると意見が一致しています。
多くの純度と収量から選べる柔軟性のある高品質siRNA
comにお問い合わせください。お客様のご要望にお答えできるよう全力を尽くします。Ambionでは最高の品質基準を満たすため、最先端の技術設備、施設で各siRNAの合成や精製を行っています。さらに、最高品質のsiRNAを提供するためにAmbionではアニール済みsiRNAが適切にアニールされているかの確認としてゲル電気泳動も行っています。その結果、すぐに使用できる最高品質のsiRNAが提供できるのです。HPLC精製後にアニールしたそれぞれのsiRNAは、塩除去のための透析(50 μMのsiRNAで導電率が1マイクロシーメンス以下)、フィルター滅菌、エンドトキシンのテストがされています。このように特別な注意を払って精製することによって、マウスに対する最大50mg/kgのsiRNA投与実験の計画が可能になりました。
検証データと配列情報付きですぐに使用できるsiRNA
また、それぞれのsiRNAに添付されるデータシートには、検証されたmRNAのノックダウン効率の程度やsiRNAのターゲットになるExon情報が載っています。*受注完了後のご変更やキャンセルはお受けできません。また、天候不良などによる交通障害のため配送が遅れる場合がございます。あらかじめご了承ください。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
300塩基未満の短いテンプレートを効果的に転写して高収量を実現
プラスミド、合成オリゴヌクレオチド、PCR産物をテンプレートに使用できる。300塩基未満の短いテンプレートの転写では、RNAの収量が低いことがよくあります。短い転写産物では、一定量の産物を合成するのに、転写開始時により多くの事象が必要になります。開始のステップが転写反応における律速段階であるため、短いテンプレートから合成された産物の収量が低くなることがあります。キットに入っているものとは別のpolymeraseを使用した場合、収量が低くなる場合があります。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
導入のためのsiRNAの処理がすぐにでき、そのまま動物へ注入することも可能
HPLC精製、脱塩処理、フィルター滅菌、エンドトキシンの検査を行なったsiRNA
信頼できる品質
>>オーダー方法をお選びください。
その他の製品情報
内在性mRNAレベルの抑制効果が検証済み
特定の配列のsiRNAを合成したい場合
動物の生体内でのsiRNAによる遺伝子発現抑制実験では、高品質なsiRNAを使用することが重要です。これらのsiRNAは適したバッファーに溶解するか、あるいはご希望の方法でsiRNAを処理すればすぐに動物に注入できます。化学合成されたそれぞれのsiRNA鎖は脱保護されており、完全長のsiRNAの割合が95%以上になるようにイオン交換クロマトグラフィーでHPLC精製されています。アニーリング後、それぞれの二本鎖siRNAがアニーリングされていることを確認するためにPAGEで分析しています。そして、in vivo用として使用できるように、それぞれのsiRNAを透析による脱塩を行なうことで50 μMのsiRNAで導電率が1マイクロシーメンス以下となっています。最後にそのsiRNAをフィルターで滅菌し、動物への投与に適していることを保証するためにエンドトキシンの検査を行ないます。このように特別な注意を払って精製することによって、マウスに対する最大50mg/kgのsiRNA投与実験の計画が可能になりました。
品質管理の内容
化学合成後に脱塩処理
合成中のカップリング効率をモニタリング
MALDI-TOF質量分析で、質量及び完全に脱保護されていることを確認
脱塩のための透析処理後(50 μMのsiRNAで導電率が1マイクロシーメンス以下)にフィルターで滅菌
毒性の有無を確認するためにエンドトキシンを検査
通常の納期*
*受注完了後のご変更やキャンセルはお受けできません。また、天候不良などによる交通障害のため配送が遅れる場合がございます。あらかじめご了承ください。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
溶解の難しいバクテリア等からRNAとDNA精製が可能な完全で即使用可の試薬
ビーズでの破砕と化学的な溶解プロセスによる高効率のサンプルホモジナイズと溶解
PCR阻害物を効果的に除去可能な磁性ビーズ核酸精製法を採用
ハイスループットや自動化にも柔軟に対応可能な核酸精製方法
幅広いサンプルに使用することができます。
ミルクのような生体液、尿、鼻汁、スワブサンプル、精子、唾液、使用済み培地
河川や池の水
糞尿だめ、牛の小屋などの農業的サンプル
キットはMagMAX磁気ビーズ核酸抽出・精製法を中心したもので、マイコバクテリアのような溶解が困難なサンプルを効率的に破砕できるようなシステムとなっています。用いられている微小球体常磁性ビーズは吸着面積が広く、溶液中で完全に分散するため、完全な核酸の吸着・洗浄・溶出を可能にします。
そのため、安定した量の高品質の核酸が50%以上回収でき、サンプル間でのばらつきがほとんどありません(収量はサンプルの種類によります)
使用法の概略
サンプルをイャvロパノールで希釈し、楓ハに核酸を吸着させる常磁性ビーズをサンプルに添加します。核酸が付着したビーズはマグネット上で固定され、タンパク質やその他のコンタミを除去するために洗浄されます。残りのバインディング溶液を除去するために2回目の洗浄を行い、最後に低塩濃度の少量のバッファー中に核酸を溶出します。しかし、96サンプルよりも少ないサンプルからでも効率的な抽出が可能です。これらに関する詳細情報はキットのマニュアル(右)に記載があります。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
フェノール不要で迅速にRNAを分離
迅速かつ確実にDNaseとニ価の陽イオンを除去できる新しい試薬
10mg以上の組織あるいは105個以上の細胞に使用可能
5mgの組織や102個程度の微量な細胞サンプルからゲノムDNAのコンタミのない RNAを精製できます。このキットはRT-PCR用に特化したキットで、分離したRNAからコンタミしたDNAを除去する試薬が入っています。さらに、微量な組織サンプルの破砕用にデザインされたプラスチック製のペッスルが3本入っています。RNAを安定化する試薬であるAmbionのRNAlater®と組み合わせて使用すれば、ほとんどの組織を4°Cで保存でき、キットに入っているペッスルを使用して標準的なマイクロチューブ内で簡単に破砕ができます。液体窒素中で急いで凍結したり、粉砕機とペッスルで組織を粉砕する必要はありません。5mgの組織、102個程度の細胞などの微量サンプルからのRNA回収に適しています。このキットは、マイクロチューブ内でグラスファイバーフィルターにトータルRNAを結合する、 AmbionのRNAqueousテクノロジーをベースにしています。使用方法の概略は、グアニジンをベースにした溶解液に組織か細胞を入れて破砕し、グラスファイバーフィルターにRNAを結合させ、コンタミ除去のためにフィルターを洗浄して、少量(最低50μl)の溶出液でRNAを溶出します。このキットには、直鎖状アクリルアミドも入っており、溶出したRNAをアルコール沈殿で濃縮する際に沈殿促進剤として使用できます。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
他のキットに比べ、優れたmRNAの濃縮効果
厳密な精製により残存するrRNA量が低下
一回の精製でほとんどのアプリケーションに使用可能
便利な磁気ビーズフォーマット
rRNAのコンタミがRNAの回収量に影響するので、mRNAの質と量のどちらもRNAの収量だけで判断することができません。Ambionでは、oligo(dT)による効果的なセレクションはそのままに、このmRNAとrRNAの相互作用を最小限に抑えることができるハイブリダイゼーション試薬とプロトコールを開発しました。同じトータルRNAサンプル(100μgずつ)をそれぞれのキットを用いて精製して得られたmRNAを変性アガロースゲルで泳動し、EtBrで染色して確認しました。右の二番目の図の通り、磁気ビーズをベースにしたキット(W)、セルロースをベースにしたキット(X)、ラテックスビーズをベースにしたキット(Z)ではRNAの収量は高いですが、高いレベルでrRNAがコンタミしていました。別の磁気ビーズをベースにしたキット(Y)で精製したmRNAは高純度ですが、(右の3番目の図、サンプルY)かなりの量のmRNAが失われています。Yのキットで厳密に精製したRNAからのシグナルも著しく弱く、このキットの特異性の高さが、サンプルからmRNAの含有量をかなり失う結果につながっています。
優れた性能を2種類のフォーマットで提供
どちらのフォーマットでも、非常に高純度なpoly(A) RNAが可能な限りの高収率で得られます。使いやすく速く処理できるように、洗浄と溶出のステップではスピンカートリッジを使用します。
セルロースをベースにしたPoly(A)Purist Kitと同様の方法でハイブリと洗浄をしますが、高度な磁気ビーズテクノロジーにより、精製処理にかかる時間は全体でわずか45分です(右下の図参照)
さらにさまざまなスケールでの精製反応が可能なので、100μg以下の少量のトータルRNAサンプルから1mgのトータルRNAサンプルまで、効果的にmRNAを精製できます。実際、より完璧な精製を行なうことで、テンプレートやターゲットとして高純度に濃縮されたmRNAが必要な実験における感度を上げることができます。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
鳥インフルエンザウイルスとニューカッスル病ウイルスの分離用としてNVSLで検証済み
10コピー以上の転写物でスタートサンプル量と回収量が比例
低いウイルス濃度からも分離可
全工程が30分以内で完了
無細胞サンプルからのRNA分離は組織や培養細胞の場合と異なり、特別な対応が必要になります。ウイルス力価が低く、処理するサンプル量が大量であるなど、複雑なためです。また、リアルタイムRT-PCRで分析できるようなRNAが分離可能な方法でなければなりません。この問題点を克服したMagMAX シリーズのウイルスRNA分離用キットは、有機溶媒の使用やRNAの沈殿処理が不要で、フィルターによるRNA分離法で起こる目詰まり、溶出量の多さ、一貫性の無い収量などの問題がありません。
NVSLにおいて鳥インフルエンザ(AI)ウイルスとニューカッスル病(ND)ウイルスの分離で検証済み
低いウイルス濃度の場合にも使える。
50コピー以上の転写物でスタートサンプル量と回収量が比例
全工程が30分以内で完了
1/10のサンプル量から同量のRNAを回収できる。
10コピー以上の転写産物でウイルス量と回収量が比例
この実験では、血漿、血清、水に希釈したコントロールRNAを添加しました。Figure 2の通り、幅広いウイルス濃度でウイルス量とCt値が直線的になっており、わずか10コピーしか転写産物を含まないサンプルからもRNAを回収できました。
NVSLにおいて鳥インフルエンザ(AI)ウイルスとニューカッスル病(ND)ウイルスの分離で検証済み
50μlのサンプルからわずか20コピーのウイルスRNAを回収
自動化システムに簡単に適合
全工程が30分以内で完了
96サンプルの処理が、たったの30分で完了し、マルチチャンネルピペットを用いた手動での操作でも、自動分注機を用いた方法でも使用できます。(この改良版のキットはまだNVSLで検証されていません。
磁気ビーズを用いた分離の持つ利点
細胞からのRNA分離や無細胞サンプルからのウイルスRNA分離において、磁気ビーズには多くの利点があります。AmbionのMagMAXテクノロジーはグラスファイバーフィルターを用いた方法に比べてより効率的にRNAに結合し、高収量のRNAが得られます。実験間でも幅広いサンプル量でもRNAの収量に一貫性があります。MagMAX磁気ビーズテクノロジーなら、サンプルに含まれる細胞性粒子によるフィルターの目詰まりもありません。このようにMagMAX磁気ビーズテクノロジーはサンプル量が多く濃度が薄いサンプルの濃縮に非常に便利です。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
溶解の難しいバクテリア等からRNAとDNA精製が可能な完全で即使用可の試薬
ビーズでの破砕と化学的な溶解プロセスによる高効率のサンプルホモジナイズと溶解
PCR阻害物を効果的に除去可能な磁性ビーズ核酸精製法を採用
ハイスループットや自動化にも柔軟に対応可能な核酸精製方法
幅広いサンプルに使用することができます。
ミルクのような生体液、尿、鼻汁、スワブサンプル、精子、唾液、使用済み培地
河川や池の水
糞尿だめ、牛の小屋などの農業的サンプル
キットはMagMAX磁気ビーズ核酸抽出・精製法を中心したもので、マイコバクテリアのような溶解が困難なサンプルを効率的に破砕できるようなシステムとなっています。用いられている微小球体常磁性ビーズは吸着面積が広く、溶液中で完全に分散するため、完全な核酸の吸着・洗浄・溶出を可能にします。
そのため、安定した量の高品質の核酸が50%以上回収でき、サンプル間でのばらつきがほとんどありません(収量はサンプルの種類によります)
使用法の概略
サンプルをイャvロパノールで希釈し、楓ハに核酸を吸着させる常磁性ビーズをサンプルに添加します。核酸が付着したビーズはマグネット上で固定され、タンパク質やその他のコンタミを除去するために洗浄されます。残りのバインディング溶液を除去するために2回目の洗浄を行い、最後に低塩濃度の少量のバッファー中に核酸を溶出します。しかし、96サンプルよりも少ないサンプルからでも効率的な抽出が可能です。これらに関する詳細情報はキットのマニュアル(右)に記載があります。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
培養細胞や微量な組織サンプルから高品質なトータルRNAを精製
再現性があり、高収量
オプションとしてフィルター上でのDNase処理が可能
1〜1mgの組織など、比較的微量なサンプルの処理のためにデザインされています。このキットはグラスファイバーフィルターにRNAを結合させることにより、無傷で高収量のRNAが回収できます。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
より高感度なダウンストリームアッセイが可能
マイクロスケールのサンプルから高品質なRNAを分離
RNAqueous kitならフェノールを使わずに、さまざまな組織や細胞からのトータルRNAを短時間で精製できます。細胞や組織の破砕にはグアニジンチオシアネートを使用し、このカオトロピック溶液が効果的に細胞を溶解し、組織や細胞に含まれるRNaseを不活性化します。続いてライセートをエタノール溶液で希釈し、グラスファイバーフィルターにRNAを結合させます。タンパク質やDNA、その他の夾雑物は3回の洗浄ステップで迅速に除去でき、濃縮状態でRNAの溶出ができます。組織破砕後、RNA分離までの全工程は20分で終了します。フェノール/クロロホルム抽出、プロテアーゼによる処理、アルコール沈殿のステップは不要で、大量のサンプルを処理する際にも適しています。AmbionではRNAqueous テクノロジーをサンプルの性質やアプリケーションに応じて至適化し、様々なキットに取り入れています。サンプルは強力なカオトロピック溶液に溶解され、微量サンプル用に特別にデザインされたグラスファイバーフィルター・カートリッジでRNAを精製し、最低20μlの溶出液で溶出できます。残存するゲノムDNAは、キットに入っているDNA-free システムにより、効率よく除去できます。
レーザーキャプチャーマイクロダイセクションで採取したサンプル中のmicroRNAの検出と定量
研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。同じサンプル由来の固定していない組織の50%以上の収量が一般的に得られる。回収したRNAを定量PCR、変異のスクリーニング、マイクロアレイ解析に使える。最大20μmの切片4つあるいは薄切していない35mg以下の中心部分のサンプルを1回に処理できます。保管していた組織サンプルからの分子的な解析に適した核酸分離の性能の高さは、ゲノムと遺伝子発現の両方のレベルで疾患組織をさかのぼって研究する際に強力なツールになります。生物的な組織サンプルのための標準的な保存技術の多くは、組織の構造を維持して腐敗 を防ぐためにホルムアルデヒドを採用しています。しかしながら、このタイプの保存ではタンパク質‐タンパク質の架橋とタンパク質‐核酸の架橋により核酸がトラップされて変化を受けるため、これらのサンプルで分子的な解析を行なうのは困難です。ホルムアルデヒドやその誘導体を用いた保存はRNA(及びある程度のDNA)の分解や化学的な変化を起こすことがあり、多くの分子的な解析法にはほとんど使用できません。FFPE組織ですでに起こってしまったRNAの断片化を元に戻すことはできません。FFPEサンプルはキシレンとエタノールを用いた一連の洗浄で脱パラフィン処理します。次にRNA回収あるいはDNA回収に合わせてインキュベーション時間を設定して厳密なプロテアーゼ処理を行います。グラスフィルター法でフィルター上でのヌクレアーゼ処理を行ない、水か添付の低塩濃度のバッファーで溶出して核酸を精製します。回収されたRNAはマイクロアレイ解析、定量PCR(Figure 4参照)、変異のスクリーニングなどのダウンストリームアプリケーションに適しています。しかしながら全てのFFPE組織において、サンプルの固定と保存による分離された核酸の断片化や変化が見られる場合があります。そこで、マイクロアレイ解析のような定量PCRに比べて元の状態に近いRNAが必要とされるダウンストリームアプリケーションで最高の結果を得るためには、変更が必要かもしれません。DNAはRNAほど簡単には断片化しませんが、ホルムアルデヒドに対する反応性がより高い為、DNA分離のプロトコールにおいてかなりの量のDNAを放出させるには長い期間(2日間)のプロテアーゼ処理を行なう必要があります。回収されたDNAは一般的にPCRやその他のダウンストリームアプリケーションに使用できます。
FFPEサンプルを用いた最適な遺伝子発現解析
研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
ラージスケールのRNA分離
使いやすいシリンジベースのフィルトレーション
多数のサンプル処理には吸引法も使用可能
5gの組織、あるいは107〜108個の細胞からのトータルRNA精製用にデザインされています。このキットは、ルアーロック型のシリンジと、RNAが結合するグラスファイバーフィルターが一体化しています。使用法は簡単で、標準的な10mlあるいは 20mlのシリンジ(キットに未添付)を用いて、洗浄用の溶液や溶出用の溶液を通すだけです。吸引法は不要ですが、シリンジフィルターが標準的な吸引装置にフィットするようデザインされているので、吸引法で一度に複数のサンプルを処理することもできます。RNAqueous kitならフェノールを使わずに、さまざまな組織や細胞からのトータルRNAを短時間で精製できます。細胞や組織の破砕にはグアニジンチオシアネートを使用し、このカオトロピック溶液が効果的に細胞を溶解し、組織や細胞に含まれるRNaseを不活性化します。続いてライセートをエタノール溶液で希釈し、グラスファイバーフィルターにRNAを結合させます。タンパク質やDNA、その他の夾雑物は3回の洗浄ステップで迅速に除去でき、濃縮状態でRNAの溶出ができます。組織破砕後、RNA分離までの全工程は20分で終了します。フェノール/クロロホルム抽出、プロテアーゼによる処理、アルコール沈殿のステップは不要で、大量のサンプルを処理する際にも適しています。AmbionではRNAqueous テクノロジーをサンプルの性質やアプリケーションに応じて至適化し、様々なキット に取り入れています。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。マウスかラットの血液からmicroRNAを含む高品質なRNAが高収量で得られる。
5mlの血液サンプル処理に理想的な柔軟性の高いキット
得られたRNAはアレイ解析や定量RT-PCRなどの厳格さが要求されるダウンストリーム実験に最適
RNAの質は、アレイ解析やリアルタイムRT-PCRなどのダウンストリーム解析の結果にかなりの影響を与えます。血液サンプル中に存在している酵素阻害剤や凝血剤による干渉が起こるため、血液からのRNA精製では、阻害を引き起こす物質やコンタミがほとんど無い高品質なRNAが得られる厳格な分離法が必要になります。
標準的なサンプル量は1反応あたり0
5mlですが、プロトコールを若干変えることでもっと少ない量のサンプルを処理できます(右図参照)
このキットには、マイクロチューブに分注済みのRNAlater®が添付されています。RNAlater®は、RNAの分解を防ぎサンプル中に含まれるRNAのプロファイルを保存する、水性で無毒の組織保存溶液です。分離したRNAは、定量RT-PCRやアレイ解析を含むさまざまなダウンストリーム実験に使用できます。このキットには、microRNAを含むトータルRNAを分離するためのプロトコールも添付されています。microRNA集団のアレイ解析では、0日目(採血日)に処理した血液を解析した場合のlog比と3日目に処理した血液を解析した場合のlog比に高い相関を見られます。
ラットの血液からの収量はかなりバラつきがあり、0
マウスの血液数滴からmiRNAを定量
研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
様々な種類のサンプルからウイルスDNAとウイルスRNAをより効果的に回収
低いウイルス濃度の場合に理想的
収量と再現性が向上
無細胞サンプルからのRNA分離は組織や培養細胞の場合と異なり、特別な対応が必要になります。ウイルス力価が低く、処理するサンプル量が大量であるなど、複雑なためです。また、リアルタイムRT-PCRで分析できるようなRNAが分離可能な方法でなければなりません。この問題点を克服したMagMAX シリーズのウイルスRNA分離用キットは、有機溶媒の使用やRNAの沈殿処理が不要で、フィルターによるRNA分離法で起こる目詰まり、溶出量の多さ、一貫性の無い収量などの問題がありません。これらの改良点によって、収量と再現性が向上しました。より確実にゲノムDNAを除去できるようになったことで、定量RT-PCRの結果がよくなりました。
そして、スタートサンプル量がもっと少ない場合でも、他社製品を用いて回収した核酸に比べてMagMAX Viral Kitで回収した核酸では同等の感度(同等のCt値)あるいはそれ以上の感度(低いCt値)で病原体を検出できます(Figure 3)
一般的にRNAとDNAの回収率は75%以上ですが、サンプルの種類によってばらつきが見られることがあります。このキットで回収したRNAは高品質、高収量で、リアルタイムRT-PCRに適しています。
磁気ビーズを用いた分離の持つ利点
細胞からのRNA分離や無細胞サンプルからのウイルスRNA分離において、磁気ビーズには多くの利点があります。AmbionのMagMAXテクノロジーはグラスファイバーフィルターを用いた方法に比べてより効率的にRNAに結合し、高収量のRNAが得られます。実験間でも幅広いサンプル量でもRNAの収量に一貫性があります。MagMAX磁気ビーズテクノロジーなら、サンプルに含まれる細胞性粒子によるフィルターの目詰まりもありません。このようにMagMAX磁気ビーズテクノロジーはサンプル量が多く濃度が薄いサンプルの濃縮に非常に便利です。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
300塩基未満の短いテンプレートを効果的に転写して高収量を実現
プラスミド、合成オリゴヌクレオチド、PCR産物をテンプレートに使用できる。300塩基未満の短いテンプレートの転写では、RNAの収量が低いことがよくあります。短い転写産物では、一定量の産物を合成するのに、転写開始時により多くの事象が必要になります。開始のステップが転写反応における律速段階であるため、短いテンプレートから合成された産物の収量が低くなることがあります。キットに入っているものとは別のpolymeraseを使用した場合、収量が低くなる場合があります。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
30分で完了するシンプルなプロトコール
キットの使い方
タンパク質がインタクトな状態なので、ライセートの一部をウェスタンブロッティング、二次元電気泳動、酵素を用いた多くのアッセイのような一般的なタンパク質解析に直接使用できます。そして残ったライセートをRNA分離に使用します。RNA分離の際には、酸性フェノール:クロロホルムを用いてトータルRNAを抽出してから、small RNAを含むトータルRNAを効率的に回収できる条件あるいは、mRNAなどの長い核酸から200円塩基以下のsmall RNAを分離できる条件でグラスファイバーフィルター(GFF)を用いて精製します。このキットには、これらの2種類の条件での精製に必要な試薬とマニュアルが添付されています。少量の液でRNAを溶出できるので、アルコール沈殿は不要で、高純度なRNAが約30分で大量に得られます。培養細胞や多くの組織で使える。マウスの脳と腎臓組織を用いたこのキットの使用例がFigure 3です。キットの能力を比較したFigure 4の一覧表をご覧ください。この実験を行なう場合、ターゲットのmRNAと対応するタンパク質の両方でのノックダウン評価が必要になることがよくあります。また、siRNAをトランスフェクトした後あるいはsiRNAを発現させた後に、細胞内でのsiRNAレベルを確かめることが重要な場合もあります。同じサンプルからsiRNAのレベル、ターゲットmRNAのレベル、ターゲットタンパク質のレベルを全て評価できるので、より少ないサンプル量で実験ができます。その上、サンプル間のばらつきの心配もありません。
キットの構成
研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。適切に保存されていた場合、納品日から8週間品質が保証されています。キットには以下のバッファーが入っています。この製品は適切に保存していた場合、納品日から6ヶ月間品質が保証されています。
miRNAなどの短い核酸を短時間で精製
研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。
全血から数分で白血球を分離
白血球からトータルRNAを抽出
グロビン除去のステップの追加は不要
RNAを安定化して発現プロファイルを保存
室温で数日間白血球を保存可能
血液には細胞の持つ情報が詰まっており、ヒトの疾患の診断や処置に使用されます。感染、炎症、自己免疫疾患の分子的な指標が、T細胞、B細胞、好中球、好酸球、好塩基球、単球、その他の微量な細胞種を含む循環白血球の中にあります。しかしながら赤血球を含む血液サンプルから精製したRNA中に存在するグロビンmRNAがダウンストリームの発現プロファイリング実験に影響します。
赤血球細胞を除去することにより、分離した白血球から精製したRNAにはグロビンmRNAが混入していないので、発現プロファイルやその他のアプリケーションでのサンプルの有用性が向上します(Figure 1)
白血球の分離と安定化
9〜10 mlの抗凝血処理された血液をLeukoLOCKフィルターに通すと、赤血球細胞(網状赤血球を含む)、血小板、血しょうが除去され白血球集団がフィルターに残ります。
PBSでリンスした後、フィルターにRNAlaterを通してフィルター上の白血球中のRNAを安定化します(プロトコールはこちら)
RNAの精製では、最初にグアニジウムチオシアネートをベースにした溶液中で分離した細胞を破砕してnucleaseを不活化させるのと同時にRNAを放出させます。
血液を利用した発現解析
LeukoLOCK Systemを用いて全血から分離したRNAが信頼性の高いトランスクリプトーム・プロファイリングに適していることは定量PCRとマイクロアレイ発現解析の両方で検証されています。例えばすぐに精製処理を行なったサンプルとLeukoLOCKフィルター内で32日間冷凍保存してから精製したサンプルの場合、4種類の異なる遺伝子をターゲットにして定量PCRを行なったところCt値が同じでした。
この実験でのターゲット遺伝子にはex vivoの血液では極端に不安定である事が知られている遺伝子も含まれていました(Figure 3)
全血由来のトータルRNAから増幅したaRNAのピークのうち25〜40%がグロビンのaRNAなので、不要なグロビン転写産物を除去する方法を用いるとaRNAの量が低くなる事は明らかです。LeukoLOCKで精製した後に増幅したRNAは競合するグロビン転写産物が劇的に減少しているのでアレイの感度が大幅に上がります。
RNAの収量とキットの構成
このキットにより、発現プロファイリングやその他のアプリケーションでの全血サンプルの有用性が向上します。このキットには白血球の分離と安定化のための試薬と消耗品だけが入っています。安定化させた白血球は、保存や他の場所への移動が可能です。
血液サンプルからの遺伝子発現プロファイリングの向上
血液からのRNA抽出:遺伝子発現研究に最適なシステムの選択
研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。二本鎖DNA、一本鎖DNA、オリゴヌクレオチドプローブ調製用キットです。
non-RIラベリングと検出のためのキット
プローブ合成後のフリーのヌクレオチドと塩を速く効果的に除去できます。
RNA プローブラベリング用キットと試薬
研究室でのRNA合成には多くのテクニックが要求されます。多くの遺伝子発現、RNAの構造、リボザイム研究においてラージスケールの転写反応が重要になります。より小さいスケールでは、RIあるいはnon-RI標識のRNAプローブの調製に利用されます。"In Vitro 転写訳の基礎(英文)"では、in vitro転写の概要、反応に必要なもの、テンプレートのデザイン方法、従来の方法とラージスケールRNA合成反応の違いについて解説しています。
アレイ解析のためのアミノアリルラベリング
サンプルの種類
破砕・分離の方法
スタートサンプルの量
哺乳動物の細胞と組織
MELT組織融解液 および磁性ビーズ法
グアニジンチオシアネートおよびグラスファイバーフィルター
有機溶媒およびグラスファイバーフィルター
シングルステップの破砕・分離試薬
グアニジンチオシアネートおよびフェノール:クロロホルム
RNAとタンパク質の両方を分離
自動化あるいはハイスループット
細菌と哺乳動物のRNA混合物
最小20コピーのウイルスを含む400μl以下のサンプル
自動化あるいはハイスループット
最小50コピーのウイルスを含む50μl以下のサンプル
哺乳動物の細胞と組織
組織からデータを:遺伝子発現プロファイリングサービス
Ambionでは、RNA分離・アレイ作成・データ解析を含む遺伝子発現プロファイリングのサービスをご提供しております。どんな規模のプロジェクトにも対応できます。従来のレーザーキャプチャーマイクロダイセクションの染色プロトコールで起こるRNA分解を回避できます。このキットにより、ダウンストリームのアプリケーションに必要なRNAの品質を保ちながら、凍結切片の染色が可能です。アミノアリルの取込みとaRNAの増幅のためにキットを改良しました。20 種の異なるヒト正常組織からのトータルRNAが混合(プール)してあります。それぞれ10μgのプールは少なくとも3つのドナーの組織からのRNAで構成されています。ドナー情報を記載した書類も添付されています。ダウンストリームアプリケーションのためのRNAの品質を保ちながら、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション用の組織切片をどのように準備するか、がご覧になれます。RNA増幅において一時的に実験をストップしたい時、aRNAの品質と収量を損なわないためにはどのプロセスで止めるのがよいか、について2つのポイントが記述してあります。
アレイ解析によるmicroRNAのプロファイリングで重要なバイオマーカーが明らかに
Ambionの研究者により開発されたマイクロアレイ解析プロセスにより、組織や細胞サンプルからのmiRNAの発現プロファイルの比較が可能になりました。
siRNA ライブラリースクリーニングを成功させるためのポイント
Ambionの研究者が、siRNAのライブラリースクリーニングの結果を大幅に改善する5つのポイントを伝授します。
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登録内容の更新:
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発現とターゲット
miRNAを検索できるデータベース
発表された全てのmiRNAが入っています。
カテゴリー別に分類
このキットは少ないサンプルからのmiRNA発現解析を可能にするシンプルで完成されたワークフローを備えた市販化された最初のキットで、自動化ハイスループット処理にも簡単に適応できます。
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RNAを分解させずに凍結組織を解凍
• 新鮮な採取したてのサンプルのように凍結組織サンプルを処理できる。• 乳棒と乳鉢を用いて凍結組織の粉砕し、厄介な粉末状組織をチューブへの移す必要がない。• 複数の実験用に凍結サンプルを数回に分けて簡単に使える。いったん組織を解凍したら、一般的なRNA分離法で組織を処理できます。組織中のRNAを保護するために、凍結組織の面倒な粉砕を行なう必要はもうありません。RNAlater-ICEを浸透させた組織は、そのまま一般的なホモジナイズ及び分離プロトコールで処理でき、新鮮な組織と同じように処理できます。
迅速な凍結による組織中のRNA保護
従来から、RNAを分解から保護するためにRNA分離の前に保存する必要がある組織は、ドライアイスあるいは液体窒素で「急速冷凍」あるいは「瞬間凍結」します。組織中のRNAは−80°Cで凍結させている間は安定していますが、組織の破砕前あるいは破砕中の解凍によりRNAが分解します。変性溶液中で組織解凍を行っても同じことが起こります。
凍結組織の処理過程での問題
通常、上質のRNA分離のために冷却した乳棒と乳鉢で凍結組織を粉砕します。サンプルを粉砕している間も凍結状態を維持するため、乳鉢に液体窒素を加えます。サンプル数が多い場合、この作業は非常に面倒になります。コンタミネーションを避けるために、乳棒と乳鉢のセットはサンプルごとに用意するか、あるいはサンプル処理後に洗浄する必要があります。粉末状の組織はホモジナイズ用の容器に移し替えている間にも解凍します。これにより凝集の形成が起こって溶解液中での分散が困難になり、RNAが分解し失われます。非常に小さなサンプルは溶解液中で直ちにホモジナイズを行う必要があります。サンプルが多い場合、また面倒な作業になります。組織を解凍する際、RNAが完全な状態で保護されます。一度この処理を行った組織は、限られた期間4°Cあるいは室温でさえも問題なく組織を保存することができます。標準的なRNA分離用の溶解バッファー中でのホモジナイズする前に、組織を更に細かく切り分けたり処理することが可能です。このようにRNAの質に妥協することなく、同じ凍結組織サンプルを異なる実験用に数回に分けて使用することができます。電気泳動したゲル及びノーザンブロットの結果から、RNAlater-ICEで処理した組織から分離されたRNAの質が高く維持されていることがわかります。この実験では、凍結組織をホモジナイズして分離したRNA、室温で5分間解凍したサンプルから分離したRNA、凍結組織を一晩-20°CのRNAlater-ICEに浸し、RNA分離の処理前に30分間室温に置いたサンプルから分離したRNAを比較しています。
マイクロアレイを用いたmiRNAの検出
このようにサイズが小さく量が少ないため、通常のアレイ法でmiRNAを検出するのは非常に困難です。
このシステムの特長は:
このプローブにはポリヌクレオチドスペーサーが付いているため、アミン反応性のあるスライドでのアレイにおいて標識されたmiRNAへ最も効率よくハイブリダイズできます。これにより、ラベリングによるハイブリダイゼ—ションの阻害がなく、それぞれのmiRNAから最大のシグナルを得ることができます。付加される3'テールには通常の塩基とアミン修飾された塩基が混在しています。NHSエステル誘導体化色素を用いて、アミン修飾したmiRNAに蛍光色素やその他の検出可能な物質を付加することが可能です。修飾ヌクレオチドと未修飾ヌクレオチドの混合物がテーリングの効率を改善し、色素分子がヌクレオチドの近傍に位置した場合に起こる蛍光のクエンチングを減らすことができるのです。今回、このmiRNAマイクロアレイ法の感度、特異性、正確さといった、アッセイ時の鍵となる特徴について検証しました。
感度の高い検出限界
1%に相当する。
高いターゲット特異性
いくつかのmiRNAは非常に似た配列を持つ。mirVana miRNA アレイシステムの開発にあたって、プローブの合成や関連性の高いmiRNAとのクロスコンタミを最小限にするハイブリダイゼーションと洗浄の条件を取り入れた。感度を下げずに一塩基のミスマッチを区別する事はできなかったが、特異性と感度が得られる反応条件を同定することができた。特異性をテストするために、このモデルシステムでは4 0 種類のmiRNAをターゲットにしたプローブを用いて、7種類の異なるアレイ解析を行なった。7 種類のアレイそれぞれに、異なるmiR-16プローブをスポットした。使用したmiR-16プローブは、1種類がmiR-16に完全に相補的な配列で、1塩基のミスマッチを持つものが2種類、2塩基のミスマッチを持つものが2種類、3塩基のミスマッチを持つものが2種類の合計7種類であった。ヒトの組織からmiRNAを分離し、標識してからそれぞれのアレイにハイブリダイズした。miR-16エレメントのシグナルを、それぞれのアレイから得られた40種類のエレメントのシグナルで標準化した。この実験をmiR-23について行なったところ、同様の結果が得られた。マイクロアレイ解析での精度を見る最もシンプルな基準となるのが、self vs self解析である。この方法は、それぞれの組織についてトータルR N A サンプルを二つに分け、それぞれからmiRNAを別々に分離し、それぞれを異なる色素で標識し、一つのmiRNAアレイにコハイブリダイズさせる。そしてアレイ上のそれぞれのエレメントについてシグナルを測定する。それぞれ別々の色素標識したサンプルは同一のトータルRNAサンプル由来であるから、二つのシグナルはそれぞれのスポットについてほぼ同じでなければならない。さらに我々のmiRNAアレイシステムの再現性をテストするため、ヒトの結腸とヒトの前立腺からそれぞれ得られたmiRNAを比較する実験を6回繰り返した。一人のヒトの前立腺と結腸からトータルRNAを分離し、それぞれのトータルRNAを6つに分け、それぞれmiRNAを精製し、標識した。Cy3標識した前立腺由来のmiRNAとCy5標識した結腸由来のmiRNAをそれぞれ組み合わせて、6種類の前立腺・結腸がペアになったサンプルをそれぞれアレイにハイブリダイズした。6つの個別の実験間の相関の平均値は98%で、このmiRNAアレイ法が高い再現性を持つ事が示された。
正確なデータ
マイクロアレイ法において最も重要なのは、定量的なアレイデータが本当にトータルRNAサンプルに含まれるmiRNAの量を反映しているかどうかを測定することである。正確性を見るために、複数の組織サンプルを用いて大規模な実験解析を行なった。標識したmiRNAをアレイにハイブリダイズして、膀胱、肺、子宮における160種類以上のmiRNA発現と比較した。アレイ解析の時と同じヒトの膀胱、肺、子宮のトータルRNAサンプルを用いて、7種類の異なるmiRNAの相対量をノーザン解析かハイブリダイゼーションアッセイで測定した。ノーザンブロット上の成熟miRNAはphosphoimagerで定量し、ハイブリダイゼーションアッセイはケミルミネッセンスで検出した。トータルRNAから得られたハイブリダイゼーションアッセイとノーザン解析データの比較において、mirVana miRNAアレイシステムはそれぞれのmiRNAの発現レベルを正確に反映していた。
生物学的な検証
ヒトの成人の組織におけるmiRNAの生物学的意味の確認と同様、生物サンプルにおけるmiRNA 発現のプロファイリングの検証を最後に行なった。それぞれのサンプルから半量づつ分取し混ぜてmiRNAプールにした。アレイ の際に参考となるよう、プールしていないmiRNAサンプルとプールしたサンプルをアレイにハイブリダイズした。プールしたmiRNAとプールしていないmiRNAのシグナル強度をそれぞれのmiRNAについて比較した。階層的クラスタリングの結果から、例えば心臓と骨格筋のような関連組織間ではmiRNAのプロファイルが類似し、非関連組織では異なっていた。生殖器官の組織で行なったように、消化器系の組織での発現をクラスタリングした。興味深いことに、脳のmiRNAのプロファイルは解析した他の組織とは明らかに異なっていた。成人組織が独自のmiRNAプロファイルを有していることから、組織分化においてmiRNAが機能していると推測される。mirVana miRNAアレイ法は成人組織間の類似性や違いの検出に十分な、高い感度、特異性、正確性があり、サンプル間の微妙な違いも調べることができる。
• 短時間で核酸をPAGE精製できる−通常の泳動時間はたったの12分間
• 簡素化されたプロトコールで操作が簡単
• 専用の試薬をセットしたら後はサンプルをアプライして泳動するだけ
• 厳密に調製された専用ゲルと試薬により一貫して信頼性の高い結果が得られる。とにかく速い。このシステムがあれば、平均12分という泳動時間で短い核酸の簡単で効果的な精製が可能です。
ほんのわずかなステップで、数時間から数日間の手間を省く事ができます「flashPAGE
と従来のPAGEプロトコールの比較」を参照)
安定した核酸の溶出
このシステムでは、標準コントロールを用いて泳動時間を調節することによりさまざまなサイズのRNAやDNA分子を精製できます。通常の泳動条件下では、このマーカーは泳動開始から約12分後に溶出されるため、目的のサイズの核酸を溶出する際の標準的な目安になります。このシステムなら、装置の小窓からマーカーの溶出が確認できるまで泳動するだけで、40塩基以下の短い核酸を速く精製できます。
進歩した泳動装置
flashPAGE Fractionatorは最新のデザインと回路構成を用いて設計されていますが、装置そのものは、どの研究室でも簡単に取り入れられるようにデザインされています。この機器には標準的なバナナプラグのコードが付いているので、一般的に研究室で使用されているパワーサプライにつなげて使用できます。
comまでご連絡いただくか製品情報サイトwww
真核生物の遺伝子発現の制御におけるmiRNAの役割の重要性を研究者達が認識し始めており、microRNA(miRNA)の研究は増えてきています。多くのmiRNAの特徴づけの結果、miRNAが発生の初期段階[1]、細胞増殖と細胞死[2]、 アポトーシスと脂質代謝[3]、などの様々なプロセスで影響を与えることが示されました。さらに ある研究では2種類のmiRNAの発現量の減少と慢性リンパ性白血病の間に強い相関が見られ、 miRNAと癌の関連性を示唆しています[4]この分野は未知のことが多いですが、高等の真核生物に おいて遺伝子発現を制御する転写因子のように、miRNAは重要であると推測されています。miRNAは小さく一般的に量が少ない為、精製するこ とでmiRNA解析での感度が上がります。このプロセスは時間がかかり、正確性に欠けることも あります。泳動時間はたったの12分で、溶出のステップはありません。
全血のRNAサンプルを用いたマイクロアレイの感度の改善
血液サンプルの不均質な細胞の性質とRNA中に存在するグロビンmRNAの濃度の高さから、全血のRNAサンプルでの発現プロファイリングは難しいとされてきました。このキット は増幅前に全血のRNAサンプルから(mRNA全体の70%以上を占める)グロビンの転写産物を95%以上除去でき、マイクロアレイを使った発現プロファイリングにおけるグロビンmRNAによるアレイへの影響が減少します。
血液サンプルの解析での難題
発現プロファイリングはトランスクリプトームの生理的な反応、病原性の反応、治療上の反応の研究に広く使用されています。臨床研究では血液は最も一般的に使用されている生体サンプルです。しかし、血液サンプルにはその他のほとんどの組織では見られない遺伝子発現解析に対する障害があります。血液は赤血球、顆粒球、その他の末しょう血単核細胞(PBMC)といった不均質な細胞集団で構成されています。血液サンプルが持つこの複雑な性質が細胞の部分的な集団でだけ起こっている特異的な遺伝子発現の検出を困難にしています。さらに全血のmRNAにはグロビンmRNA転写産物が比較的高い割合で含まれています。これらの「不要な」グロビン転写産物が、発現量が少ないmRNAのマイクロアレイでの検出感度を下げるのです。最初に、斬新なテクノロジーを用いて全血RNAからグロビンmRNAを除去します。続いて、磁気ビーズをベースにした迅速な精製方法で残ったRNAを精製します。得られたRNAはRNA増幅のテンプレートやアレイ解析用の標識cDNA合成に最適です。発現プロファイリングに使用した場合、GLOBINclearで処理した血液RNAは未処理の全血RNAに比べて感度が向上し、ばらつきが低下します。最初に、斬新なテクノロジーを用いて全血RNAからグロビンmRNAを除去します。続いて、磁気ビーズをベースにした迅速な精製方法で残ったRNAを精製します。得られたRNAはRNA増幅のテンプレートやアレイ解析用の標識cDNA合成に最適です。これを15分間インキュベートしてグロビンmRNAをビオチン標識オリゴヌクレオチドにハイブリさせます。その後ストレプトアビジン磁気ビーズを加えて、30分間インキュベートします。このインキュベーション中にストレプトアビジンがビオチン標識したオリゴヌクレオチドに結合し、その結果磁気ビーズに結合したグロビンmRNAが集まります。ストレプトアビジン磁気ビーズはマグネット寄りのチューブの側面に引き寄せられるので、グロビンmRNAが大幅に減ったRNAを新しいチューブに移します。このRNAを迅速な磁気ビーズをベースにした方法でさらに精製します。このシンプルで速い(30分以内)精製ではRNAを結合させるビーズの溶液を加えて、磁気による結合を利用して洗浄し、GLOBINclearで精製されたRNAを溶出します。
アレイ解析のためのRNAの回収と増幅
ヒトの全血由来のサンプルを用いた広範囲にわたる遺伝子発現のスクリーニングを改善する方法を開発するのが目的でした。GLOBINclearを使用しない場合、全血サンプルから増幅されたaRNAには他のサンプルと全く異なる600塩基程度のピークが見られます。これは増幅されたグロビンmRNAです。このカーブはαおよびβグロビンmRNA転写産物の除去に成功した結果で、血液以外の組織から得られたaRNAのプロファイルに類似しています。GLOBINclearで処理するRNA量を決定するには、ダウンストリームの実験での必要条件を考慮しなければなりません。別の増幅キットを使用する場合には、1 μg以上のスタートサンプル量が増幅に必要な場合もあります。
効果的なグロビンmRNAの除去
これらのデータは、GLOBINclearで処理することでαおよびβグロビンmRNAのどちらも十分に減少していることを示しています。グロビンmRNAの減少と処理された全血RNAの量との間は反比例します。しかしながら、こういう影響があるとしてもスタートのRNA量が7〜10 μgの全血RNAであれば効果的にグロビンmRNAを減少させることができます。この実験では全てのドナーのサンプルで95%を上回るαおよびβグロビンmRNAを除去できました。このばらつきの減少の正確な理由はわかりません。しかしながら、最も可能性が高い原因としては一般的に未処理の全血RNAではシグナルとノイズの比が低いことが挙げられます。
このばらつきはドナー間のグロビンmRNAの濃度の違いによるものとは思われません(データ未提示)
3’/5’比の減少: この研究の最中に見られた未処理の全血RNAに関連したばらつきの増加のもう1つの例がアレイ解析での3’/5’比でした。64にそれぞれ減少しました。表の最後の行はドナーDで見られた異常値のアレイを除いて再度算出した3’/5’比の数値で、さらに標準偏差が減少しました。未処理の全血サンプルで見られる高い3’/5’比は感度の減少によるものと考えられます。
Figure 7で示した通り、ドナーDの異常値を除けばそれぞれ一致率の平均が90
995にさらに上がっています。Figure 8にもドナーAのベースラインと比較したドナーBからドナーFのサンプルの相関係数が示されています。GLOBINclearで処理した全血RNAを用いたマイクロアレイでの発現解析において、感度が上がりばらつきが減少します。この方法はシンプルで再現性が高く、1時間半以内で完了します。このキットにはグロビンmRNA除去の反応20回分の試薬が入っています。全血からのRNA分離用キットとマグネティックスタンドは別売になっています。
高感度マイクロアレイ解析のためのハイスループットRNA精製
ビオチン標識されたaRNAを大量に合成
血液サンプルからのハイスループットのRNA精製
RNA精製に磁気ビーズ法を採用したAmbionのMagMAXテクノロジーを用いれば、グラスファイバー法につきものの問題(例;フィルターの目詰まり、RNA収量の不安定)を回避できるのと同時に有機溶媒を使わずに済みます。全血(または乳汁)のサンプルから手動でのマルチチャンネルピペットや自動化装置で高収量・高純度のトータルRNAやウイルスRNAを回収できます。抽出されたRNAは分子診断や定量RT-PCRを用いた遺伝子発現プロファイリングに最適です。
血液から高品質なトータルRNAを回収
ヒト全血(新鮮または4°C保存)からの高品質のトータルRNAはMagMAX-96を用いることで簡単にしかも効率的に回収できます。9以上でした。新鮮な血液サンプル、あるいは4°Cに保管されていた血液サンプルから精製したRNAを用いた場合、定量PCR(hTBPとRP II)のCt値(逆転写反応あり)がそれぞれ類似していました。
-80°Cで保存された血液から精製されたRNAは、鮮血や4°Cで保存された血液と比べて収量は同程度でしたが、質が低下していました(データ未提示)
これは解凍中の溶血反応によりRNAの分解が起こったためと考えられます。しかし、このRNAを定量PCRでの遺伝子発現プロファイリングに用いることが十分可能です。全血を直接使用することで、トータルRNAとウイルスRNAの分離の際にクロスコンタミを減らし時間とサンプルを節約できます。この新製品は96ウェルでの50 μlのサンプルからのウイルスRNAおよびトータルRNAのハイスループット精製用にデザインされています。
高感度マイクロアレイ解析のためのハイスループットRNA精製
全血のRNAサンプルを用いたマイクロアレイの感度の改善
ビオチン標識されたaRNAを大量に合成
斬新なフィルターシステムで分離した白血球からRNAを精製
• キャップを締めた状態で10mlの血液を2分以内で濾過‐Ficoll®による濃度勾配や長時間の遠心処理
• 不要なグロビンmRNAを90%以上除去するのでマイクロアレイでの信頼性が高く高感度な遺伝子検出
• 分離した白血球を-20°Cで数ヶ月保存でき、RNA抽出の為に採血場所から別の場所へ室温で移動可能
• 競合する方法に比べてより安定性の高いRNAがより高収量で得られる。
• フェノールを使わない方法で白血球からRNAを45分以内で抽出
この方法では輸血治療においてドナーの白血球を除去して患者に移植片対宿主疾患を発症させない為に広く利用されている白血球除去フィルターを使用します。
RNA分離用の血液サンプル準備が5分以内で完了
これを空の真空採血管につなげます。これによってチューブのキャップを開けずにフィルターに血液を通すのに必要な吸引力が得られます。9〜10 mlの血液サンプルが約2分でフィルターを通過します。次に、フィルターにPBSを通して残存する赤血球を除去し、続いて RNAlater をフィルターに通してフィルター内のインタクトな白血球中のRNAを安定化します。白血球の分離と安定化全体にかかる時間は5分以内で、mRNAの発現プロファイルに影響する可能性のあるその他の時間のかかるステップや遠心処理はありません。選択的に白血球を分離する事でダウンストリームアッセイでの感度が上がる。グアニジンベースの溶解液をフィルターに通してAmbionのMagMAXTM 磁気ビーズをベースにしたRNA精製テクノロジーでRNAを精製する事によって白血球からRNAを抽出します。フィルターには白血球が選択的に分離されるので、網状赤血球を含む赤血球はフィルターを通り抜け、分離されたRNAに含まれるグロビンmRNAは90%以上減少しています。このグロビンRNAの除去レベルはマイクロアレイで発現量の低い遺伝子のシグナルを検出するのに十分で、RNA抽出後にグロビンmRNAの除去処理を行なう必要はありません。このキットで精製したRNAが信頼性の高いトランスクリプトーム・プロファイリングに適している事が定量PCRとマイクロアレイ発現解析の両方で検証されています。