b"\n_START_ARTICLE_\nSecven\xc8\x9bierea Sanger\n_START_PARAGRAPH_\nSecven\xc8\x9bierea Sanger este o metod\xc4\x83 de  secven\xc8\x9biere ADN bazat\xc4\x83 pe incorporarea selectiv\xc4\x83 a di-deoxinucleotidelor de c\xc4\x83tre enzima ADN polimeraz\xc4\x83 \xc3\xaen timpul  replic\xc4\x83rii ADN in vitro._NEWLINE_ _NEWLINE_Metoda a fost dezvoltat\xc4\x83 de c\xc4\x83tre Frederick Sanger \xc8\x99i colegii s\xc4\x83i \xc3\xaen 1977 \xc8\x99i a fost una dintre cele mai folosite metode de secven\xc8\x9biere ADN mai bine de 25 de ani. Mai nou, secven\xc8\x9bierea Sanger a fost par\xc8\x9bial \xc3\xaenlocuit\xc4\x83 de secven\xc8\x9bierea de nou\xc4\x83 genera\xc8\x9bie. Cu toate acestea, secven\xc8\x9bierea Sanger este \xc3\xaenc\xc4\x83 folosit\xc4\x83, \xc3\xaen contextul proiectelor mai mici, pentru validarea rezultatelor secve\xc8\x9bierii de nou\xc4\x83 genera\xc8\x9bie, sau pentru citirea fragmentelor lungi \xc8\x99i continue de ADN (mai mari de 500 de nucleotide).\n_START_SECTION_\nMetoda\n_START_PARAGRAPH_\nMetoda clasic\xc4\x83 de secven\xc8\x9biere Sanger ia un \xc8\x99ablon simplu de ADN, un primer ADN, enzima ADN polimeraz\xc4\x83, deoxinucleozidetrifosfate normale (dNTP) \xc8\x99i di-deoxinucleozidetrifosfate modificate (ddNTP), cele din urm\xc4\x83 termin\xc3\xa2nd prematur elongarea \xc8\x99irului ADN. ddNTP-urilor le lipsesc grupul hidroxil (OH) de la cap\xc4\x83tul 3', deci nu pot forma leg\xc4\x83tura necesar\xc4\x83 dintre dou\xc4\x83 nucleotide, ceea ce \xc3\xaempiedic\xc4\x83 polimeraza ADN s\xc4\x83 extind\xc4\x83 ADN-ul._NEWLINE_ddNTP-urile sunt marcate radioactiv sau fluorescent pentru a putea fi detectate automat de c\xc4\x83tre   ma\xc8\x99inile de secven\xc8\x9biere._NEWLINE_Mostra ADN este \xc3\xaemp\xc4\x83r\xc8\x9bit\xc4\x83 \xc3\xaen patru reac\xc8\x9bii separate, con\xc8\x9bin\xc3\xa2nd fiecare toate cele patru deoxinucleotide (dATP, dGTP, dCTP \xc8\x99i dTTP) \xc8\x99i enzima ADN polimeraz\xc4\x83. \xc3\x8en fiecare dintre reac\xc8\x9bii este ad\xc4\x83ugat\xc4\x83 doar una dintre cele patru di-deoxinucleotide (ddATP, ddGTP, ddCTP, sau ddTTP), \xc3\xaen timp ce celelalte nucleotide sunt nemodificate._NEWLINE_Di-deoxinucleotidele modificate sunt ad\xc4\x83ugate \xc3\xaen exces, \xc3\xaen cantit\xc4\x83\xc8\x9bi de aproximativ 100 de ori mai mari dec\xc3\xa2t deoxinucleotidele normale (ex. 0.005mM dATP\xc2\xa0: 0.5mM ddATP).  _NEWLINE_Pe scurt, este nevoie de patru reac\xc8\x9bii separate pentru a testa cele patru ddNTP._NEWLINE_Dup\xc4\x83 mai multe runde de extensie a \xc8\x99ablonului ADN, fragmentele rezultate de ADN sunt denaturate prin expunere la c\xc4\x83ldur\xc4\x83 \xc8\x99i sunt separate conform m\xc4\x83rimii prin procedura de electroforez\xc4\x83 pe gel._NEWLINE_  _NEWLINE_\xc3\x8en imaginea din dreapta un film X a fost expus gelului, iar benzile \xc3\xaenchise la culoare corespund fragmentelor ADN de diferite m\xc4\x83rimi. O band\xc4\x83 de culoare \xc3\xaenchis\xc4\x83 semnific\xc4\x83 un fragment ADN scurtat la incorporarea unei di-deoxinucleotide (ddATP, ddGTP, ddCTP sau ddTTP). Pozi\xc8\x9biile relative de pe cele patru benzi, de sus \xc3\xaen jos, sunt folosite la citirea secve\xc8\x9belor ADN."