b'\n_START_ARTICLE_\nEmpalmament alternatiu\n_START_SECTION_\nDescobriment\n_START_PARAGRAPH_\nL\'empalmament alternatiu es va observar per primera vegada el 1977. Els adenovirus produeixen dos transcripcions prim\xc3\xa0ries diferentes, una al principi del cicle de vida i una m\xc3\xa9s tard, despr\xc3\xa9s de la replicaci\xc3\xb3 de l\'ADN. Els investigadors van trobar que la transcripci\xc3\xb3 prim\xc3\xa0ria d\'ARN produ\xc3\xafda per adenovirus tipus 2 en l\'\xc3\xbaltima fase era "tallada" de diverses maneres, donant lloc a varios ARNm que codificaven prote\xc3\xafnes virals diferentes. Tant el lloc d\'acoblament 3\' com el 5\' variaven i, a m\xc3\xa9s, la transcripci\xc3\xb3 contenia diversos llocs de poliadenilaci\xc3\xb3, donant diferents extrems 3\' als ARNm processats._NEWLINE_El 1981 va ser caracteritzat el primer exemple d\'empalmament alternatiu en la transcripci\xc3\xb3 d\'un gen normal i endogen. Es va trobar que el gen que codifica l\'hormona tiro\xc3\xafdal calcitonina era \xe2\x80\x9ctallat\xe2\x80\x9d alternativament en c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules de mam\xc3\xadfers. El pre-mRNA d\'aquest gen cont\xc3\xa9 6 exons, mentres que l\'ARNm de la calcitonina cont\xc3\xa9 els exons 1-4, i acaba despr\xc3\xa9s d\'un lloc de poliadenilaci\xc3\xb3 en l\'ex\xc3\xb3 4. Tamb\xc3\xa9 es produeix un altre ARNm diferent a partir d\'aquest pre-ARNm per l\'omissi\xc3\xb3 de l\'ex\xc3\xb3 4, que inclou els exons 1-3, 5 i 6. Aquest ARNm codifica una prote\xc3\xafna coneguda com a CGRP (p\xc3\xa8ptid relacionat amb el gen de calcitonina). Tamb\xc3\xa9 es van observar exemples d\'empalmament alternatiu a les transcripcions de gens d\'immunoglobulines en els mam\xc3\xadfers a la d\xc3\xa8cada dels 80._NEWLINE_Des de llavors, s\'ha descobert que l\'empalmament alternatiu \xc3\xa9s un procediment present en totes les c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules eucariotes. El "r\xc3\xa8cord" d\'empalmament alternatiu \xc3\xa9s un gen de D. melanogaster anomenat DSCAM, que podria tenir 38.016 variants d\'acoblament.\n_START_SECTION_\nElements reguladors i prote\xc3\xafnes\n_START_PARAGRAPH_\nL\'enlla\xc3\xa7 est\xc3\xa0 regulat per prote\xc3\xafnes d\'acci\xc3\xb3 trans (repressores i activadores), els corresponents llocs reguladors d\'acci\xc3\xb3 cis en l\'ARNm (silenciadors i potenciadors), i altres caracter\xc3\xadstiques de l\'ARN que tenen influ\xc3\xa8ncia en com es far\xc3\xa0 l\'empalmament, igual que altres estructures secund\xc3\xa0ries. En conjunt, aquests elements formen un "codi d\'acoblament" que regeix la forma en qu\xc3\xa8 es fa l\'empalmament segons les diferentes condicions cel\xc2\xb7lulars._NEWLINE_Els factors determinants de l\'empalmament actuen d\'una manera interdependent, per\xc3\xb2 en molts casos nom\xc3\xa9s un d\'aquests factors tindr\xc3\xa0 una influ\xc3\xa8ncia constant en l\'entroncament. Entre aquests casos, hi ha dos tipus principals de sequ\xc3\xa9ncies d\'acci\xc3\xb3 cis als pre-ARNm, que tenen les seves prote\xc3\xafnes d\'acci\xc3\xb3 trans corresponents. Els silenciadors d\'acoblament s\xc3\xb3n llocs als quals s\'uneixen les prote\xc3\xafnes represores d\'empalmament, la qual cosa redueix la probabilitat que un lloc proper sigui utilitzat com a lloc d\'uni\xc3\xb3. Aquests silenciadors poden estar ubicats en el mateix intr\xc3\xb3 (silenciadors intronics acoblament, ISS) o en un ex\xc3\xb3 ve\xc3\xad (silenciadors exonics acoblament, ESS). Poden variar en seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia, aix\xc3\xad com en els tipus de prote\xc3\xafnes que s\'uneixen a ells. La majoria dels repressors d\'empalmament s\xc3\xb3n ribonucleoprote\xc3\xafnes nuclears heterog\xc3\xa8nies (hnRNPs) com per exemple l\'hnRNPA1._NEWLINE_Els potenciadors d\'acoblament s\xc3\xb3n llocs als que s\'uneixen les prote\xc3\xafnes activadores d\'empalmament, que augmenten la probabilitat que un lloc proper sigui utilitzat com a lloc d\'uni\xc3\xb3. Aquests tamb\xc3\xa9 poden apar\xc3\xa8ixer a l\'intr\xc3\xb3 (potenciadors intronics d\'acoblament, ISE) o a l\'ex\xc3\xb3 (potenciadors exonics d\'acoblament, ESE). La majoria de les prote\xc3\xafnes activadores que s\'uneixen als ISEs i als ESEs s\xc3\xb3n de la fam\xc3\xadlia de prote\xc3\xafnes SR. Aquestes prote\xc3\xafnes contenen zones de reconeixemen d\'ARN i dominis rics en arginina i serina (SR)._NEWLINE_El significat adaptatiu dels silenciadors i els potenciadors d\'acoblament \xc3\xa9s acreditat per un estudi que mostra que hi ha una forta selecci\xc3\xb3 als gens humans en contra de les mutacions que produeixen nous silenciadors o que interrompen potenciadors existents._NEWLINE_En general, els factors determinants treballen de manera interdependent que varia segons el context, de manera que les normes que regeixen la regulaci\xc3\xb3 de l\'empalmament formen un codi d\'empalmament. La pres\xc3\xa8ncia d\'una determinada seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia d\'ARN d\'acci\xc3\xb3 cis pot incrementar la probabilitat que un lloc proper sigui utilitzat com a lloc d\'uni\xc3\xb3 en alguns casos, per\xc3\xb2 en altres situacions la pot disminuir, depenent del context. El context en qu\xc3\xa8 actuen els elements reguladors inclou un context d\'acci\xc3\xb3 cis determinat per la pres\xc3\xa8ncia d\'altres caracter\xc3\xadstiques de la seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia d\'ARN, i un context d\'acci\xc3\xb3 trans determinat per les condicions cel\xc2\xb7lulars. Per exemple, algunes seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncies d\'ARN d\'acci\xc3\xb3 cis nom\xc3\xa9s influeixen a l\'empalmament si nombrosos elements est\xc3\xa1n presents a la mateixa zona per tal d\'establir el context adequat. Un altre cas \xc3\xa9s el dels elements cis que poden tenir efectes contraris sobre l\'empalmament, en funci\xc3\xb3 de les prote\xc3\xafnes presents a la c\xc3\xa8l\xc2\xb7lula (per exemple la prote\xc3\xafna PTB neuronal davant la no neuronal).\n_START_SECTION_\nOmissi\xc3\xb3 d\'ex\xc3\xb3: Drosophila DSX\n_START_PARAGRAPH_\nEl preARN del gen dsx de la D. melanogaster cont\xc3\xa9 6 exons. En els mascles, els exons 1,2,3,5, i 6 s\'uneixen per formar l\'ARNm definitiu, que codifica una prote\xc3\xafna de regulaci\xc3\xb3 transcripcional necess\xc3\xa0ria per al desenvolupament mascul\xc3\xad. En les femelles, els exons 1,2,3, i 4 estan units, i un senyal de poliadenilaci\xc3\xb3 en l\'ex\xc3\xb3 4 causa la separaci\xc3\xb3 de l\'ARNm en aquest punt. L\'ARNm resultant codifica una prote\xc3\xafna de regulaci\xc3\xb3 transcripcional necess\xc3\xa0ria per al desenvolupament femen\xc3\xad._NEWLINE_Aquest \xc3\xa9s un exemple d\'omissi\xc3\xb3 d\'ex\xc3\xb3. L\'intr\xc3\xb3 que precedeix al quart ex\xc3\xb3 t\xc3\xa9 un tram de polipirimidina que no coincideix amb la seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia de consens, de manera que les prote\xc3\xafnes U2AF no s\'uneixen correctament a aquest intr\xc3\xb3 sense l\'ajuda dels activadors d\'uni\xc3\xb3. Per tant, aquest acceptor d\'empalmament no \xc3\xa9s utilitzat als mascles. Per contre, les femelles produeixen l\'activador d\'empalmament Transformador (Tra). La prote\xc3\xafna SR Tra2 es produeix en ambd\xc3\xb3s sexes i s\'uneix a una ESE en l\'ex\xc3\xb3 4, i si Tra est\xc3\xa0 present, s\'uneix a Tra2 i, juntament amb una altra prote\xc3\xafna SR, forma un complex de prote\xc3\xafnes que ajuda a U2AF a unir-se al tram feble de pirimidines. L\'U2 s\'associa al punt de ramificaci\xc3\xb3, i aix\xc3\xb2 condueix a la inclusi\xc3\xb3 de l\'ex\xc3\xb3 4 en l\'ARNm.\n_START_SECTION_\nLlocs alternatius d\'acceptors: Drosophila Transformer\n_START_PARAGRAPH_\nEl Pre-ARNm del transformador (TRA) de gens de Drosophila melanogaster pateix un splicing alternatiu mitjan\xc3\xa7ant la via del lloc alternatiu de l\'acceptor. El gen TRA codifica una prote\xc3\xafna que nom\xc3\xa9s s\'expressa en femelles. El transcriptor primari del gen cont\xc3\xa9 un intr\xc3\xb3 amb dos llocs acceptors possibles. En mascles s\'utilitza l\'acceptor "upstream". Aix\xc3\xb2 fa que una versi\xc3\xb3 m\xc3\xa9s llarga de l\'ex\xc3\xb3 2 sigui inclosa en el proc\xc3\xa9s de transcripci\xc3\xb3, incloen un cod\xc3\xb3 de parada. L\'ARNm resultant codifica una prote\xc3\xafna truncada que est\xc3\xa0 inactiva. Les femelles produeixen la prote\xc3\xafna patr\xc3\xb3 de la determinaci\xc3\xb3 del sexe Sex Lethal (SXL). La prote\xc3\xafna Sxl \xc3\xa9s un repressor d\'empalmament que s\'uneix a un ISS a l\'ARN de la prote\xc3\xafna Tra a prop del lloc d\'uni\xc3\xb3 "upstream", evitant que la prote\xc3\xafna U2AF s\'uneixi al tram de polipirimidina. Aix\xc3\xb2 evita l\'\xc3\xbas d\'aquesta uni\xc3\xb3, canviant el spliceosoma i unint-se al lloc acceptor "downstream". En aquest punt, l\'empalmament passa per alt el cod\xc3\xb3 d\'aturada, que \xc3\xa9s extirpat com una part dels introns. L\'ARN resultant codifica una prote\xc3\xafna Tra activa, que \xc3\xa9s reguladora de l\'empalmament alternatiu d\'un altre gen sexual.\n_START_SECTION_\nCompetici\xc3\xb3 represor-activador: ex\xc3\xb3 2 HIV-1\n_START_PARAGRAPH_\nEl VIH, el retrovirus que causa el SIDA en humans, produeix una \xc3\xbanica c\xc3\xb2pia prim\xc3\xa0ria d\'ARN, que s\'empalma de diferentes maneres per produir uns 40 ARNm diferents. L\'equilibri entre transcripcions diferentment empalmades proporciona m\xc3\xbaltiples ARNm, codificant diferents productes, necessaris per a la multiplicaci\xc3\xb3 viral. Una de les transcripcions diferencialment empalmada cont\xc3\xa9 el gen tat, en el qual l\'ex\xc3\xb3 2 \xc3\xa9s un ex\xc3\xb3 "Casset" que pot ser saltat o incl\xc3\xb2s. L\'addici\xc3\xb3 de l\'ex\xc3\xb3 2 tat en l\'ARN est\xc3\xa0 regulat per una competici\xc3\xb3 entre el repressor d\'entroncament hnRNP A1 i la prote\xc3\xafna SR SC35. Dins de l\'ex\xc3\xb3 2 se superposen una seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia silenciadora (ESS) i una seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia potenciadora (ESE). Si la prote\xc3\xafna repressora A1 s\'uneix al ESS, s\'inicia la uni\xc3\xb3 cooperativa de m\xc3\xbaltiples mol\xc3\xa8cules A1, estenent l\'extrem donador 5\' \'"upstream" de l\'ex\xc3\xb3 2 prevenint la uni\xc3\xb3 del factor d\'acoblament central U2AF35 al tram de pirimidines. Si SC35 s\'uneix a la ESE, evita que A1 s\'uneixi i mantingui l\'extrem donador 5 \'en un estat accessible perqu\xc3\xa8 s\'ensambli el spliceosoma. La competici\xc3\xb3 entre l\'activador i el repressor assegura la producci\xc3\xb3 dels dos tipus d\'ARNm (amb ex\xc3\xb3 2 i sense).\n_START_SECTION_\nSignificat adaptatiu\n_START_PARAGRAPH_\nl\'empalmament alternatiu \xc3\xa9s una de les excepcions de la idea original que una seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia d\'ADN codifica per un polip\xc3\xa8ptid (la hip\xc3\xb2tesi d\'un gen, un enzim). Ara seria m\xc3\xa9s correcte dir "un gen, molts polip\xc3\xa8ptids". Cal informaci\xc3\xb3 externa per decidir quins polip\xc3\xa8ptids es produeix, donada una seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia d\'ADN i un ARNm. Els mecanismes de regulaci\xc3\xb3 s\xc3\xb3n heretats, aix\xc3\xb2 proporciona noves mutacions que afecten a l\'expressi\xc3\xb3 de gens._NEWLINE_S\'ha proposat que per eucariotes, l\'empalmament alternatiu va ser un pas molt important per aconseguir una major efici\xc3\xa8ncia, ja que la informaci\xc3\xb3 es pot emmagatzemar de manera m\xc3\xa9s econ\xc3\xb2mica. Diverses prote\xc3\xafnes poden ser codificades per un gen \xc3\xbanic, en lloc de necessitar un gen separat per a cadascun, permetent aix\xc3\xad, una major varietat prote\xc3\xb2mica d\'un genoma de grand\xc3\xa0ria limitada. Tamb\xc3\xa9 proporciona flexibilitat evolutiva. Un \xc3\xbanic punt de mutaci\xc3\xb3 pot donar lloc al fet que un ex\xc3\xb3 donat sigui incl\xc3\xb2s o excl\xc3\xb2s d\'una transcripci\xc3\xb3 durant l\'empalmament, permetent la producci\xc3\xb3 d\'una isoforma de la nova prote\xc3\xafna sense la p\xc3\xa8rdua de la prote\xc3\xafna original. Estudis comparatius indiquen que l\'empalmament alternatiu \xc3\xa9s anterior a la pluricelularidad en l\'evoluci\xc3\xb3 i suggereixen que aquest mecanisme podria haver estat escollit per ajudar al desenvolupament d\'organismes pluricel\xc2\xb7lulars._NEWLINE_Les investigacions basades en el Projecte Genoma Hum\xc3\xa0 i la seq\xc3\xbcenciaci\xc3\xb3 del genoma han demostrat que els \xc3\xa9ssers humans nom\xc3\xa9s tenen un 30% m\xc3\xa9s de gens en comparaci\xc3\xb3 amb el cuc Caenorhabditis elegans, i nom\xc3\xa9s el doble que la mosca Drosophila melanogaster. Aquesta troballa fa pensar que l\'aparent complexitat dels \xc3\xa9ssers humans, o dels vertebrats en general, podria ser causa de l\'augment de l\'empalmament alternatiu en els \xc3\xa9ssers humans. No obstant aix\xc3\xb2, un estudi de cada 100.000 ESTs d\'humans, ratolins, rates, vaques, mosques (D. melanogaster), cucs (C. elegans) i la planta Arabidopsis thaliana, no va trobar grans difer\xc3\xa8ncies en la freq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia dels gens empalmats alternativament entre els \xc3\xa9ssers humans i qualsevol dels altres animals testats. No obstant aix\xc3\xb2, un altre estudi va proposar que aquests resultats van ser un artefacte dels diferents n\xc3\xbameros d\'ESTs disponibles per als diferents mecanismes. Quan van comparar les freq\xc3\xbc\xc3\xa8ncies d\'empalmament alternatiu en subgrups a l\'atzar de gens de cada organisme, els autors van concloure que els vertebrats tenen taxes m\xc3\xa9s altes d\'empalmament alternatiu que els invertebrats.\n_START_SECTION_\nEmpalmament alternatiu i malalties\n_START_PARAGRAPH_\nCanvis en la maquin\xc3\xa0ria de processament de l\'ARN poden conduir a errors d\'acoblament de m\xc3\xbaltiples transcripcions, mentre que una \xc3\xbanica alteraci\xc3\xb3 en el nucle\xc3\xb2tid en els llocs d\'entroncament o en els llocs d\'uni\xc3\xb3 regulador cis poden donar lloc a difer\xc3\xa8ncies en l\'entroncament d\'un sol gen, i per tant en l\'ARNm produ\xc3\xaft per agents mutants transcrits. Un estudi probabil\xc3\xadstic indica que m\xc3\xa9s del 60% de les malalties que causen mutacions en humans afecten m\xc3\xa9s a l\'entroncament que directament a la seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia de codificaci\xc3\xb3._NEWLINE_Es poden trobar ARNm empalmats anormalment en altes concentracions en c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules canceroses. Fins fa poc, no estava clar si aquests patrons d\'acoblament influ\xc3\xafen en el creixement cancer\xc3\xb3s, o nom\xc3\xa9s eren una conseq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia d\'alteracions cel\xc2\xb7lulars associades al c\xc3\xa0ncer. S\'ha demostrat que hi ha una reducci\xc3\xb3 de l\'empalmament alternatiu en les c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules canceroses en comparaci\xc3\xb3 amb les normals, i els tipus d\'empalmament es diferencien; per exemple, les c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules canceroses mostren majors nivells d\'introns retinguts que les c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules normals, per\xc3\xb2 menys omissions d\'exons. Algunes de les difer\xc3\xa8ncies en l\'empalmament de les c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules canceroses poden ser conseq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia de canvis en la fosforilaci\xc3\xb3 de factors d\'acoblament d\'acci\xc3\xb3 trans. Altres poden ser produ\xc3\xafdes per canvis en les quantitats dels factors d\'acoblament produ\xc3\xaft, per exemple, les c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules del c\xc3\xa0ncer de mama han mostrat un augment en els nivells del factor d\'acoblament SF2/ASF. Un estudi va trobar que un percentatge relativament petit (383 dels m\xc3\xa9s de 26.000) de les variants d\'empalmament alternatiu van ser m\xc3\xa9s freq\xc3\xbcents en c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules tumorals que en c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules normals, el que suggereix que hi ha un nombre limitat de gens que, en ser empalmats de forma incorrecta, contribueixen al desenvolupament del tumor. No obstant aix\xc3\xb2, es creu que els efectes nocius de les transcripcions mal empalmades solen ser salvaguardades i eliminades per un mecanisme cel\xc2\xb7lular del contrast de qualitat, denominat "Nonsense-mediated decay" [NMD]._NEWLINE_Un exemple de la variant espec\xc3\xadfica d\'entroncament associada al c\xc3\xa0ncer es troba en un dels gens humans DNMT. Tres gens DNMT codifiquen enzims encarregats d\'afegir grups metil a l\'ADN, una modificaci\xc3\xb3 que sovint t\xc3\xa9 efectes reguladors. Diversos ARNm DNMT313 empalmats anormalment es troben en tumors i l\xc3\xadnies cel\xc2\xb7lulars de c\xc3\xa0ncer. En dos estudis independents, l\'expressi\xc3\xb3 de dos d\'aquests ARNm empalmats anormalment en c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules de mam\xc3\xadfers podien produir alteracions en els patrons de metilaci\xc3\xb3 de l\'ADN en aquestes c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules. Les c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules amb un dels ARNm anormals tamb\xc3\xa9 va cr\xc3\xa9ixer dues vegades m\xc3\xa9s r\xc3\xa0pid que les c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules de control, el que indica una contribuci\xc3\xb3 directa al desenvolupament de tumors per aquest producte._NEWLINE_Un altre exemple \xc3\xa9s el protooncog\xc3\xa8n Ron (MST1R). Una propietat important de les c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules canceroses \xc3\xa9s la seva capacitat per moure i envair el teixit normal. La producci\xc3\xb3 d\'una transcripci\xc3\xb3 anormal d\'entroncament de Ron s\'associa amb l\'augment dels nivells de la SF2/ASF en les c\xc3\xa8l\xc2\xb7lules de c\xc3\xa0ncer de mama. La isoforma anormal de la prote\xc3\xafna Ron codificada per aquest ARNm porta a la motilitat cel\xc2\xb7lular._NEWLINE_Estudis recents apunten a una funci\xc3\xb3 clau en la modificaci\xc3\xb3 de l\'estructura de la cromatina i de les histones en la regulaci\xc3\xb3 dl\'empalmament alternatiu. Aquestes reflexions suggereixen que parts del genoma no nom\xc3\xa9s s\'expressen, sin\xc3\xb3 tamb\xc3\xa9 la forma en qu\xc3\xa8 s\'empalmen.\n_START_SECTION_\nAn\xc3\xa0lisi de l\'empalmament alternatiu de tot el genoma\n_START_PARAGRAPH_\nL\'an\xc3\xa0lisi de l\'empalmament alternatiu de tot el genoma \xc3\xa9s una tasca dif\xc3\xadcil. En general, les transcripcions de l\'empalmament alternatiu s\'han trobat mitjan\xc3\xa7ant la comparaci\xc3\xb3 de seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncies EST, per\xc3\xb2 aix\xc3\xb2 requereix la seq\xc3\xbcenciaci\xc3\xb3 d\'un gran nombre d\'ESTs. La majoria de les biblioteques EST provenen d\'un nombre molt limitat de teixits, per la qual cosa es perd la informaci\xc3\xb3 de les variants espec\xc3\xadfiques de cada teixit. S\'utilitzen tres tipus de t\xc3\xa8cniques d\'alt rendiment per investigar l\'empalmament alternatiu: microarray d\'ADN basats en an\xc3\xa0lisi, CLIP i assajos en viu del gen reporter._NEWLINE_En l\'an\xc3\xa0lisi de microarray, s\'han fet servir les matrius del fragment d\'ADN que representen els exons individuals (per exemple, l\'ex\xc3\xb3 Affymetrix de microrayos) o exons l\xc3\xadmits (per exemple, les matrius de ExonHit o Jivan). La matriu \xc3\xa9s llavors investigada amb ADNc dels teixits d\'inter\xc3\xa8s. La sonda d\'ADNc s\'uneix a l\'ADN dels exons que s\'inclouen en l\'ARNm en el teixit d\'origen, o l\'ADN de la frontera d\'uni\xc3\xb3 entre dos exons. Aix\xc3\xb2 pot revelar la pres\xc3\xa8ncia de determinats ARNm empalmats alternativament. Les tecnologies de seq\xc3\xbcenciaci\xc3\xb3 profunda tamb\xc3\xa9 s\'estan utilitzant per dur a terme tota l\'an\xc3\xa0lisi del genoma de la variaci\xc3\xb3 de la transcripci\xc3\xb3._NEWLINE_CLIP, Cross-Linking and immunoprecipitaci\xc3\xb3 (entrecreuament i immunoprecipitaci\xc3\xb3), utilitza la radiaci\xc3\xb3 UV per vincular les prote\xc3\xafnes d\'una mol\xc3\xa8cula d\'ARN a un teixit durant l\'empalmament. Una prote\xc3\xafna d\'acci\xc3\xb3 trans reguladora de l\'entroncamen, precipita utilitzant anticossos espec\xc3\xadfics. Quan l\'ARN unit a una prote\xc3\xafna est\xc3\xa0 a\xc3\xafllat i clonat, revela les dianes de la seq\xc3\xbc\xc3\xa8ncia de prote\xc3\xafnes._NEWLINE_Finalment, \xc3\xa9s possible trobar prote\xc3\xafnes d\'acoblament involucrades en un cas espec\xc3\xadfic d\'empalmament alternatiu mitjan\xc3\xa7ant la construcci\xc3\xb3 de gens reporters que expressaran una de les dues prote\xc3\xafnes fluorescents depenent de l\'entroncament que passi. Aquest m\xc3\xa8tode ha estat usat per a\xc3\xafllar mutants que afecten a l\'entroncament i aix\xc3\xad identificar les noves prote\xc3\xafnes reguladores d\'uni\xc3\xb3 inactives en aquests mutants.'