Preparare la Coltura Eseguire la Coltura
È possibile utilizzare cellule sia animali sia vegetali; alcune persone fanno una coltura di tessuto che è stato prelevato direttamente da una pianta o da un animale. In altri casi, le cellule vengono fatte sviluppare da altre linee cellulari conservate e che provengono da una coltura precedente.  Le nuove colture possono essere sviluppate a partire dall'espianto di un tessuto da un organismo, e in questo caso vengono chiamate "primarie". Le cellule si dividono solo per un po' prima di incorrere nella senescenza. Una linea cellulare continua viene manipolata con sostanze chimiche o virus che le permettono di moltiplicarsi indefinitamente (immortalizzazione). Le condizioni devono essere diverse in base al tipo di cellule, ma in generale hai bisogno di:  Una temperatura controllata. L'intervallo ideale cambia in base al tipo di cellule che stai coltivando, ma mediamente deve essere compresa fra 20 e 45 °C. Un livello controllato di pH; di solito, non dovrebbe essere inferiore a 6,0 e non superiore a 7,5. Una pressione osmotica controllata. Uno scambio adeguato fra ossigeno e anidride carbonica. Ormoni. Fattori di crescita. Un substrato che fornisce alle cellule i nutrienti di cui hanno bisogno, che includano amminoacidi, carboidrati, vitamine e minerali. La luce. Si tratta di un elemento fondamentale, se stai coltivando delle cellule vegetali che svolgono la fotosintesi. Alcune cellule crescono meglio quando sono fissate a un substrato. Fra quelli possibili ci sono:  Substrato solido, chiamato anche aderente. I tessuti prelevati da organi come i reni sono in genere aderenti, perché sono fissati a quello connettivo. Substrato semisolido o monostrato. Questo tipo di colture forma solitamente un unico strato, spesso quanto una cellula, sul fondo del contenitore. Coltura in sospensione. Le cellule non sono ancorate a un substrato, ma crescono fluttuando nel mezzo di coltura. Le cellule ematiche vengono spesso coltivate in questo modo. Esistono diverse aziende che forniscono i laboratori con i materiali e gli strumenti necessari per questo tipo di studi. Quando acquisti tutto il necessario, nelle confezioni trovi anche il protocollo che devi seguire. Si tratta di una serie di istruzioni che descrivono esattamente come trasferire il campione che vuoi coltivare nel mezzo di crescita. Fra i fornitori più noti ci sono i seguenti:   Brand;  Fisher Scientific; Thermo Scientific. In genere, è necessario rifornire il mezzo di coltura ogni 2-3 giorni; rispetta il protocollo del fornitore per quanto riguarda il nutrimento delle cellule.  La procedura dovrebbe richiedere non più di 20 minuti. Se non fornisci abbastanza nutrienti, le cellule moriranno. Per permettere alle cellule di continuare a svilupparsi, devi trasferirne alcune in nuove capsule di Petri con una densità inferiore; in questa maniera, sia la coltura originale sia quella nuova continuano a moltiplicarsi. Puoi anche congelare parte delle colture per dei lavori futuri o per ripetere gli esperimenti, nel caso avessi problemi di contaminazione. Segui i protocolli forniti, per conoscere la temperatura di crioconservazione (o congelamento) delle cellule.
Scegli quale tipo di tessuto vuoi sviluppare in laboratorio. Prepara l'ambiente di coltura. Decidi quale mezzo di coltura usare. Rispetta il protocollo del produttore per quanto riguarda la fase iniziale della coltura. Nutri le cellule che stai coltivando, se lavori con quelle di mammiferi. Separa la coltura, se il contenitore inizia a essere troppo affollato.
https://www.wikihow.com/Do-a-Tissue-Culture https://www.wikihow.com/Do-a-Tissue-Culture
Preparing to Culture Performing the Culture