<h2>기초 및 유도산소라디칼의 정량</h2><p>한편 뇌획분에 있어서 산화적 스트레스(oxidative stress) 의 유무를 확인하기 위해서 DCF-DA \( \left(2^{\prime}, 7^{\prime}\right. \)-dichlorofluore-scein diacetate)을 probe로 이용한 뇌 세포의 mitochondria와 microsome획분의 기초활성산소(basal oxygen radical : BOR) 의 생성량의 측정은 Lebel 등의 방법에 따라 측정하였다.</p><p>BOR의 측정은 기저상태와 라디칼 생성을 유도하기 위해 ascorbic acid와 \( \mathrm{FeSO}_{4} \cdot \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)로 자극한 유도상태의 두 가지 조건에서 비교 측정하였다. 기저상태와 라디칼 유도의 경우 모두 시료 \( 500 \mu \mathrm{l}\)를 완충용액(\(40 \mathrm{mM}\)Tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer, \( \mathrm{pH} 7.4\) )으로 10배 희석하고, probe인 \( 5 \mu \mathrm{M}\) DCF-DA(Molecular probe, U.S.A.) \( 12 \mu \mathrm{l} \) 를 첨가, \( 10,000 \mathrm{rpm} \) 8분간 원심분리 한다. 잔사를 \( 40 \mathrm{mM} \) Tris- \( \mathrm{HCl}\) \(3.0 \mathrm{ml} \) 에 녹인 후 라디칼 유도상태의 경우에는 \( 1 \mathrm{mM} \) ascorbic acid \( (300 \mu \mathrm{l}) \) 와 \( 100 \mu \mathrm{M} \) \( \mathrm{FeSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}(150 \mu \mathrm{l}) \)를 혼합하였고, 기저상태의 경우는 아무것도 첨가하지 않았다. 이후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분간 반응시킨 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 유지하면서 형광 강도의 변화를 형광광도계를 이용하여 \( 488 \mathrm{~nm} \) (excitation)와 \( 525 \mathrm{~nm} \) (emission)에서 측정하였다. 이 때 분광형광광도의 변화를 \( 2^{\prime}, 7^{\prime} \)-dichlorofluorescein DCF을 표준품으로 해서 표준 검량선에 의하여 생성된 DCF의 양\((\mathrm{nmol/mg}\) protein/min)으로 환산하고, 이 양으로써 기초산소라디칼(basal oxygen radical : BOR) 및 유도 산소라디칼(induced oxygen radical : IOR)의 산소라디칼 생성량으로 정량하였다.</p><h2>산화적 스트레스의 분석</h2><p>뇌획분중의 과산화지질(lipid peroxide : LPO)의 함량은 저자 등이 사용한 방법에 따라 분광광도계를 사용하여 TBA법으로 말론디알데히드(MDA)의 함량을 측정하였다. 또한 뇌획분으로서 mitochondria와 microsome의 산화단백질(oxidized protein : OP )의 생성량은 Levine 등의 방법에 따라 carbonyl group의 생성량을 측정하여 OP의 함량을 정량하였다. Carbonyl group의 양은 \( 360 \mathrm{~nm} \) 와 \( 370 \mathrm{~nm} \) 사이에 있는 흡광도의 파장에서 분자흡광계수 \( (E=22,000) \)를 이용하여 계산하였다.</p><h2>분석결과의 처리</h2><p>본 연구의 모든 실험결과는 통계 처리하여 평균치와 표준편차를 계산하였으며, 각 실험군간의 유의성 검정은 Student's t-test를 실시하였다.</p>
기저상태와 라디칼 생성을 유도하기 위해 \( \mathrm{FeSO}_{4} \cdot \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)와 무엇으로 자극했지?
ascorbic acid