<h1>재료 및 방법</h1><h2>식물재료 및 신초 배양</h2><p>본 연구는 사과 '후지'의 기내 신초배양에서 얻어진 잎 절편체를 재료로 하여 수행하였다. 기내 신초배양은 LS배지에 BA \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{L}\), NAA \(1 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \), sucrose \( 30 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \), agar \( 8 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \) 를 첨가한 배지를 사용하였으며, 매 4주 간 격으로 계대배양을 실시하였다. 모든 배지는 \( \mathrm{pH} \) 를 \( 5.8 \) 로 조 정한 후 agar를 첨가하여 \( 121^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 20분간 고압멸균하였다. 모든 배양은 \( 25 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \) 인 배양실에서 백색 형광등을 이용한 \( 32 \mu \mathrm{mol} \cdot \mathrm{m}^{-2} \cdot \mathrm{s}^{-1}\), 24시간 연속 조명하에서 이루어졌다.</p><h2>잎 절편체로부터의 신초 기관형성</h2><p>사과 ‘후지’의 기내 배양된 잎 절편체로부터 신초 재생에 적합한 조건을 구명하기 위하여 기본배지와 식물생장조절제, 당의 종류 및 농도 등의 배지 조성을 달리하여 실험을 수행하였다.</p><p>각 재생 실험에 사용된 잎 절편체는 신초 증식배지에서 배양 3주 된 식물체의 상부에서 완전히 전개된 잎을 절취하여 주맥을 포함하도록 2면 절단한 후, 향축면이 베지에 닿도록 치상하였다. 재생 배지에는 공동적으로 sucrose \( 30 \mathrm{~g} / \mathrm{L}, \operatorname{agar} \)\( 8 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \)를 첨가하였으며, \( 100 \mathrm{~mL} \) 삼각플라스크에 \( 30 \mathrm{~mL} \) 씩 분주하여 사용하였다.</p><h2>기본배지 종류와 식물생장조절제의 효과</h2><p>1차 실험으로 재생에 적합한 배지 종류와 cytokinin 종류를 구명하고자 하였다. 실험에 사용된 배지는 LS배지와 N6배지(Chu et al. 1975)에 BA \( 5.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 와 TDZ \( 0.2 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 을 조합처리 하였으며, 모든 배지에 NAA \( 0.3 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 를 첨가하였다.</p><p>2차 실험으로 LS, N6배지에 BA \( 1.0,3.0,5.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 또는 TDZ \( 0.2,0.5,1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 와 NAA \( 0.1,0.3 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 를 조합하여 총 24개 처리를 하였다.</p><h2>탄소 공급원의 종류와 식물생장조절제의 효과</h2><p>재생에 효과적인 식물생장조절제와 탄소 공급원을 알아보기 위하여 N6배지에 BA \( 1.0,3.0,5.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 또는 TDZ \(0.2,0.5,1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 와 NAA \( 0.1,0.3 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \), 탄소 공급원으로 sucrose 30\( \mathrm{g} / \mathrm{L} \), sorbitol \( 40 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \), sucrose \( 15 \mathrm{~g}+ \) sorbitol \( 20 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \) 를 조합하여 총 36개 처리로 실혐을 수행하였다.</p><h2>Sorbitol 농도의 효과</h2><p>위 실험에서 신초 재생에 효과적인 것으로 밝혀진 sorbitol의 적정 농도를 구명하기 위하여 N6 기본배지(N6 염류와 비타민, BA \( 5.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L}\), NAA \(0.1 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \), agar \( 8 \mathrm{~g} / \mathrm{L}) \) 에 sorbitol \( 0,20,40 \), \( 60 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \) 를 처리하여 실험을 수행하였다.</p><h2>실험구 및 조사</h2><p>모든 실험은 용기당 절편체 4개씩 치상한 것을 1반복으로 하여 처리당 5반복으로 하였으며, 완전임의배치법으로 배치하여 배양하였다. 배양 8주 후 신초 형성율과 절편체당 재생 된 신초 수를 조사하였으며, 신초 수는 눈으로 식별이 가능 한 약 \( 2 \mathrm{~mm} \) 크기 이상의 신초를 집계하여 표시하였다.</p><h2>발근 및 활착</h2><p>배양 8주 후에 재생 된 신초 중 \( 0.5 \sim 2 \mathrm{~cm} \) 정도 신장한 신초는 절편체에서 분리하여 발근배지로 옮겨 신장 및 발근을 유도하였다. 발근배지는 1/4 MS배지(Murashige and Skoog 1962)에 IBA \( 0.2 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \), sucrose \( 30 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \), agar \( 8 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \) 를 첨가하였으며, 시험관에 \( 20 \mathrm{ml} \) 씩 분주하여 사용하였다. 재생된 신초를 용기당 한 개씩 치상하여 1주 동안 암조건에서 배양한 후 명조건으로 옮겨 배양하였다.</p><p>발근된 소식물체는 부리에 붙어있는 베지를 제거한 후, 고압살균 된 인공 토양(버미큘라이트 \(1:\) 펄라이트 1)이 들이 있는 직경 \( 12 \mathrm{~cm} \) 화분에 이식하였다. 순화를 위하여 4주 동안 상부를 랩으로 봉한 후 저면관수를 실시하였으며, 성공적으로 순화된 식물체는 온실로 옮겨 재배하였다.</p>
모든 배지는 ager를 첨가한 후 몇 도에서 몇 분간 고압멸균되었어?
\( 121^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 20분간