<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>백하수오는 경북 영천의 한약상에서 구입한 것을 동국대학교 한의과대학 본초학교실에서 감정하였으며 건조된 약재를 분말로 하여 사용하였다. 실험동물로는 성숙흰쥐 Sprague Dawley, \(250-300 \mathrm{g}\))를 성별 구분 없이 사용하였다.</p><h2>기기 및 시약</h2><p>생리기록기는 Grass D7(USA)를 사용하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)로 관류되는 organ bath에 Krebs' 용액을 채우고 \(95\%\) \( \mathrm{O}_{2} \)와 \(5\%\)\( \mathrm{CO}_{2} \)를 연속적으로 주입하는 실험장치를 이용하였다. Krebs' 용액은 실험 당일 제조하여 사용하였다. 생리기록은 혈관고리의 중앙부분의 뚤린 공간을 2개의 삼각고리를 이용하여 한쪽 끝은 organ bath에 달려있도록 고안된 핀에 고정시키고 또 다른 삼각고리는 장력측정장치(FT-03)에 연결하여 약물반응에 대한 수축, 이완반응을 연속 기록하였다. Phenylephrine을 비롯한 모든 시약은 Sigma사(USA) 제품을, U 46619는 Upjohn사(USA) 제품을 사용하였다. 성분분리 및 구조분석은 전보의 방법을 이용하였다.</p><h2>추출물조제 및 활성성분의 분리</h2><p>백하수오 뿌리 \( 1.2 \mathrm{~kg} \)을 methanol로 가온하에 3회 추출, 농축한 다음, 농축액에 소량의 물을 가하고 \( 2 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl} \)로 산성으로 하였다. 여과한 여액을 ether로 2회 추출하여 비염기성물질을 제거하고 수층은 묽은 암모니아수로 약 알칼리성으로 한 다음, 이 용액을 ether로 3회 반복추출하고 분리된 ether층을 모두 합하여 건조, 농축하였다. 이 alkaloid분획을 silica gel column chromatography \( \left(\mathrm{CHCl}_{3} / \mathrm{MeOH}\right. \) \(9:1\))와 preparative TLC를 실시하여 약 \( 100 \mathrm{mg} \) 의 백색 결정을 얻었다. 이 화합물은 물리특성과 기기분석에서 전보에서 보고한 화합물과 동일하였으므로 gagaminine으로 동정하였다. mp. \( 168-170^{\circ} \mathrm{C} \). 기기분석 data : 전보 참조</p><h2>Krebs' 용액의 조제</h2><p>\( \mathrm{NaCl} 118.5 \mathrm{mM}\), \(\mathrm{KCl} 4.74 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{CaCl}_{2} 2.5 \mathrm{mM}\),\( \mathrm{MgSO}_{4} \)\( 1.18 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{KH}_{2} \mathrm{PO}_{4} 1.18 \mathrm{mM}\), \(\mathrm{NaHCO}_{3} 25 \mathrm{mM} \), glucose\( 10.0 \mathrm{mM} \) 및 EDTA \( 0.03 \mathrm{mM} \) 을 혼합하여 제조하였다. 한편, \( \mathrm{Ca}^{2+}\)-free 용액에 관한 실험은 위의 조성에서 \( \mathrm{Ca}^{2+} \)을 제거하고 대신 EGTA를 \( 0.5 \mathrm{mM} \)을 사용하였다.</p><h2>혈관절편제작</h2><p>흰쥐의 두부를 탈골시킨 후 흉곽을 절제하고 흉부 대동맥을 때어내어 Krebs' 용액에 옮겼다. 혈관주변의 지방과 연조직을 제거하고 약 \( 3 \mathrm{~mm} \) 정도의 크기로 잘라 혈관 고리를 만들었다. 이렇게 만든 혈관의 내피세포를 제거한 후, 본 실험에 사용하였다. 한편, 돼지심장의 관상동맥은 도살장에서 도살된 돼지의 심장을 현장에서 떼어 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)로 차게한 Krebs' 용액에 넣어 운반하여 실험실에서 위의 방법에 준하여 관상혈관을 제작하였다.</p><h2>혈관 장력측정</h2><p>흰쥐혈관은 \( 1 \mathrm{~g} \), 돼지의 관상혈관은 \( 10 \mathrm{~g} \)의 장력을 주고 약 90분간 평형을 유지하였다. 이때 매 \( 15 \sim 20 \) 분 간격으로 새로운 Krebs' 용액을 organ bath에 넣고 장력을 재조정하였다. 수축반응은 쥐의 흉부대동맥의 경우는 phenylephrine을 사용하였으며 돼지관상혈관은 U46619를 사용하였다. 또한 \( \mathrm{Ca}^{2+} \)에 대한 반응을 측정하기 위하여는 \( 60 \sim 90 \mathrm{mM} \)의 칼륨(high \(\left.\mathrm{K}^{+}\right) \)을 사용하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>\( \mathrm{IC}_{50} \) 값은 computer programol 'Manual of pharmacologic calculation with computer programs'(R. J. Talarida and R. B. Murray Ed., Springer-Verlag, 1981)을 사용하였으며 모든 실험결과는 mean \( \pm \) SEM으로 표시하였다. 통계처리는 Student's t-test로 점정하였고 \( \mathrm{P}<0.05 \) 이하인 경우 유의한 것으로 간주하였다.</p>
분리해 낸 활성성분의 계열은 무엇일까?
alkaloid