<h1>결과 및 고찰</h1><p>페놀 분해효소계에서 TCE 분해효소를 확인한 결과는 Table 1에서 보는 바와 같다. 즉, catechol에서 배양된 washed cell의 경우, TCE 분해가 일어나지 않았다. 이러한 결과는 페놀 대사과정의 첫 단계인 페놀이 catechol로 전환되는 과정에 작용하는 효소가 TCE 분해에 관여한다는 것을 의미하며, 이전에 보고된 TCE 분해효소와 일치하였다.</p><p>방향족 화합물의 분해에 있어서 ring activation di-oxygenase와 mono-oxygenase의 활성을 조사한 결과는 Table 2에 나타내었다. Ring activation dioxygenase의 경우, 페놀에서 자란 균체의 흡광도 \( (660 \mathrm{nm}) \)가 증류수로 실시한 대조구의 흡광도와 동일하여 dioxygenase활성을 가지지 않는 것으로 나타났고, phenol-degrading monoxygenase의 경우에는 약 \( 80 \% \)의 페놀이 분해되어 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 따라서 페놀 분해효소 및 TCE 분해효소는 phenol-degrading monoxygenase임을 알 수 있었다. Phenol-degrading monoxygenase를 대상으로 PCR을 실시한 결과는 Fig. 1과 같았다. 반응시킨 3개의 sample 모두에서 203 base pair의 DNA fragment가 증폭됨을 확인할 수 있었고, 대조군로 이용한 E. coil에서는 증폭된 band가 없었다. 증폭된 PCR product를 정제하여 sequencing한 결과를 Fig. 2에, DNA 염기서열을 분석한 결과를 Fig. 3에 나타내었다. PCR product의 DNA염기서열을 분석한 결과, Pseudomonas putida CF600의 phenol hydroxylase gene (dmpN component), Pseudomonas putida BH의 phenol hydroxylase gene (pheA4 component), Pseudomonas putida P35X의 phenol hydroxylase and ferredoxin like protein gene (phhN component)와 \(99\%\)의 상동성을 나타내었고, Pseudomonas putida H의 phenol hydroxylase gene (phlD subunit)과 \( 97 \% \)의 상동성을 나타내었다. 비록 203 base pair의 짧은 길이의 fragment로만 분석하였지만 Pseudomonas속의 phenol hydroxylase와 \( 97 \% \) 이상의 상동성을 보임에 따라 본 공시균의 페놀분해효소가 phenol hydroxylase임을 추정할 수 있었다. 그리고 상기의 균주중 Pseudomonas putida BH의 phenol hydroxylase는 TCE 분해능이 있는 것으로 보고되어 있으며, 이외에도 TCE 분해능이 보고된 Pseudomonas sp. strain JS150의 toluene/benzene-2-monooy-genase gene (tbmD componet), Acinetobacter calcoaceticus NCIB8250의 phenol hydroxylase gene (ORF4 component)과도 \( 73 \% \) 이상의 상동성을 보여 본 공시균주의 페놀 분해효소인 phenol hydroxylase가 TCE 분해효소임을 확인할 수 있었다.</p>
TCE 분해가 일어나지 않는다는 것은 페놀 대사과정의 첫 단계인 페놀이 catechol로 전환되는 것을 의미하니?
YES