<h1>재료 및 방법</h1>
<h2>실험 동물의 사육 및 처치</h2>
<p>실험 동물은 부산대학교 동물실험윤리규정을 준수하여 자유 급식법으로 사육한 생후 14~16주된 임신 경험이 없는 Sprague-Dawley(SD) 횐쥐 암컷으로, 체중 \( 200 \sim 250 \mathrm{g} \) 정도되는 성숙한 것을 사용하였다. 수컷과 합사 시킨 후 질액도말 (vaginal fluid smear)표본의 각화상피세포에서 정자가 발견된 날을 임신 0일로 계산하여, 임신 14일, 18일째의 태자를 태생기, 출생후 1일, 2일, 3일, 5일, 7일 및 14일째의 개체는 수유기, 출생후 21일째의 개체는 이유기, 출생후 105일째의 개체는 성체기로 구분하여 대뇌피질 각 엽의 복합당질 실험에 사용하였다.</p>
<p>그리고, 위와 동일한 방법으로 성숙시킨 Sprague-Dawley(SD) 흰쥐 암컷을 대상으로 임신 7일부터 1주간 6회에 걸쳐 EGEE (\( 250 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \))를 복강내 투여한 뒤 임신 14일, 18일 태자, 출생후 1일, 2일, 3일, 5일, 7일 및 14일째의 수유기, 21일째의 이유기, 105일째의 성체 개체를 EGEE 투여군으로 하여 대뇌피질내 복합당질의 결합양상에 미치는 영항을 대조군과 비교 분석하였다.</p>
<p>태생기 태자는 성별에 관계없이 사용하였고, 출생 후의 개체는 해부현미경하에서 외부 생식기로써 성을 판별한 후 수컷 개체만을 사용하였다.</p>


<h2>복합당질의 조직화학</h2>
<p>발생기 대뇌 피질 각 조직의 복합당질 변화 양상과 EGEE 처리시 대뇌 피질 각 조직의 복합당질 변화 양상을 비교 분석하기 위해 탈 파라핀한 조직을 \(3\%\) methanolic hydrogen peroxide에 실온에서 30분간 처리하고, phosphate buffer saline(PBS, \( 0.01 \mathrm{M}\), \(\mathrm{pH} 7.4 \))용액으로 10분간 3회 세척한 후 비특이성 반응을 없애기 위해 실온에서 \( 1 \% \) bovine serum albumin (BSA)용액에 30분간 두었다가, \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 습실에서 9종류의 biotinylated lectin (Vector Lab., Burlingame, CA, USA)중 Dolichos biflorus agglutinin, Soybean agglutinin, Peanut agglutinin, Bandeiraea simplicifolia lectin-1, Succinylated wheat germ agglutinin 및 Ulex europaeus agglutinin-1은 Hepes buffer(\(10 \mathrm{mM}\) Hepes, \( \mathrm{pH} 7.5 \) , \( 0.15 \mathrm{M} \mathrm{NaCl}\), \(0.1 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{Ca}^{2+}\), \(0.04 \% \) sodium azide)에, Lens culinaris agglutinin와 Concanavalin A는 상기 Hepes buffer에 \( 0.01 \mathrm{mM} \mathrm{Mn} \)가 포함된 용액에, Ricinus communis agglutinin- 1 은 phosphate buffer (\( 10 \mathrm{mM} \) phosphate buffer, \( \mathrm{pH} 7.5\), \(0.15 \mathrm{M}\) \(\mathrm{NaCl} \), \( 0.08 \% \) sodium azide)에 Table 1과 같은 농도로 희석하여 24시간 반응시켰다. 그 후, PBS로 세척한 후 실온에서 ABC kit(avidin-biotin-peroxidase complex, Vector Lab.)시약에 60분간 반응시켰으며, 다시 PBS로 세척한 후 실온에서 TB(Tris buffer, \( 0.05 \mathrm{M}\), \(\mathrm{pH} 7.6\))에 \( 0.02 \% \) 3.3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (Sigma, Italy)와 \( 0.01 \%\) \(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)를 혼합한 용액 에 약 10분간 발색시켰다. 다시, TB와 PBS에 각각 10분간 세척한 후, 증류수로 세척하여 Mayer's hematoxylin으로 대조 염색하고, Polymount (Polyscience, USA)로 봉입하였다.</p>
<p>렉틴에 대한 반웅성은 그 정도에 따라 반응성이 없는 경우는 0 , 흔적적인 반응성은 \( \pm \), 약한 반응성은 +, 중등도의 반응성은 ++, 강한 반응성은 +++, 매우 강한 반응성은 ++++로 나누어 표시하였다.</p>

출생 후의 개체는 해부현미경하에서 외부 생식기로써 성을 판별한 후 사용하였는가?
YES