<h2>길항세균 동정</h2><p>RRj 228을 "Bergey's Manual of Systematic Bacteriology"를 이용한 생리, 생화학적인 특성을 조사결과 gram staining에 음성이었으며 막대형의 호기성균이었다. 효소활성 검사에는 catalase와 oxydase 활성은 나타났으나 lipase 활성은 없었으며, casein과 gelatin 가수분해력은 보였으나 starch 분해력은 없었다. 배지에 첨가된 탄소원이 arabinose, fructose, gal-actose, glucose, mannitol, sucrose, xylose의 경우에는 생육 중에 산을 생성하고, 탄소원이 lactose, dextrine, ramnose, sor-bitol, maltose, dulcitol의 경우에는 알칼리를 생성하는 것을 확인할 수 있었다(Table 2). 분자유전학적인 분류를 위해 추출한 DNA로 PCR을 수행한 결과 \( 1,500 \mathrm{bp} \) 정도의 증폭된 DNA 단편을 확인할 수 있었으며, 16\(\mathrm{S}\) rDNA 부분 염기서열을 GenBank library의 염기서열과 상동성을 조사한 결과 Pseudomonas chlorororaphis, P. Corrugata, P. tolaasii 등 다수의 Pseudomonas 종과 \( 99 \% \) 이상의 염기서열 상동성을 나타내었으므로 Pseudomonas sp.로 분류하고 Pseudomonas sp. RRj 228 균주로 명명하여, 농촌진흥청 농업생명공학연구원 부설 한국 농용미생물보존센터(KACC)에 기탁하여 수탁번호 KACC 1052를 부여 받았다.</p><h2>배양여액과 배양여액 추출물의 항균효과</h2><p>RRj 228 배양 여과액을 0.5배, 10배, 100배의 희석농도로 고체배지제조에 첨가하여 병원균의 생육억제효과를 조사하였다. 배양여액의 희석농도에 비례해서 병원균의 생육이 억제되는 것을 확인했다(Fig. 3). 고추탄저균의 경우에는 배양여액을 10배 희석을 하여 처리하면 탄저균의 생육이 \( 10 \% \) 억제되는 것을 확인할 수 있었다. R. solani도 배양여액을 10배 희석하여 처리하면 \( 10 \% \) 이상의 병원균생육 억제효과가 나타났다. 사용한 모든 균주에 2배 희석농도에서는 \( 20 \sim 30 \% \)의 생육억제효과 를 볼 수 있었다. 고추를 비롯한 과채류재배에 RRj 228배양여액을 일정농도로 물에 희석하여 살포하거나 관주를 하면 병원균의 피해를 예방할 수 있다. 배양여액 뿐만 아니라 배양액을 그대로 토양에 관주를 혼합하여 사용하면 PGPR (plant growth-promoting rhizobacterium) 처리효과를 얻을 수 있을 것이다.</p><p>배양여액을 원심분리한 다음 \( \mathrm{CHCl}_{3} \)으로 추출하고, 농축하여 추출물을 \( 0.1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(2 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도로 배지조제에 첨가하여 만든 plate에 병원균을 접종하여 C. acutatum, P. ultimum, 및 R. solani의 생육정도를 조사하였다. 사용한 모든 균주에서 강력한 항균활성이 나타났고, \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도에서 아주 미약한 생육을 확인할 수 있었으며, \( 2 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도에서는 모든 균주가 전혀 생육을 하지 못했다. 반복실험을 통하여 얻은 값으로 ED50 분석프로그램에 도입하여 ED50값을 산출한 결과, 고추탄저병원균에 대한 ED50값은 \( 0.14 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)로 나타났고, 뿌리썩음병원균에 대한 ED50값은 \( 0.16 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)로 1차 추출물로서는 높은 활성을 나타냈다(Table 3). 골프장에서는 잔디뿌리썩음 병원균인 R. solani피해를 줄이기 위해서 과대한 살균제 사용을 하고 있는 실정으로 이는 수계환경보호에 큰 문제가 되어지고 있다. 이러한 문제를 해결하기 위하여 미생물제제를 비롯한 생물제제 방제법을 택하고 있다. RRj 228 균주의 배양액제제나 생균을 처리하면 R. solani방제에 많은 도움이 될 것으로 사료되어진다.</p><h2>항균물질 구조동정</h2><p>Pseudomanas sp. RRj 228균의 배양액으로부터 분리한 228-7 물질의 구조동정은 FAB질량분석, \( { }^{1} \mathrm{H}\)-NMR, \({ }^{13} \mathrm{C}\)-NMR, \({ }^{1} \mathrm{H}-{ }^{1} \mathrm{H} \) COSY, HMQC 그리고 HMBC 분석을 통하여 화학적인 구조 분석을 시도하였다. 228-7 물질을 FAB 질량분석에서 \( [\mathrm{M}+\mathrm{H}]^{+} \) 225과 EI 질량분석에서 \( [\mathrm{M}+\mathrm{H}]^{-} \) 223을 확인되어져 분자량이 224 dalton으로 결정되었다. 정확한 구조를 결정하기 위하여 \( { }^{1} \mathrm{H}\)-NMR과 \( { }^{13} \mathrm{C}\)-NMR 분석을 실시한 결과, \( { }^{1} \mathrm{H}\)-NMR 분석에서 하나의 hydroxyl group이 존재함을 알 수 있었고, 13C-NMR 분석에서 탄소수가 13개이며, 1개의 carboxyl group (C-1' \( \delta \mathrm{c} \) \( 166.1 \mathrm{ppm} \))이 존재하는 것이 관찰되었다(Table 4). 7개의 methine proton (\( \mathrm{H}-2\), \(\delta_{\mathrm{H}}\) \(8.98\) \(\rightarrow\) \( \delta_{\mathrm{C}}\) \(137.7\) ; \(\mathrm{H}-3\), \(\delta_{\mathrm{H}}\) \(8.05\) \(\rightarrow\) \(\delta_{\mathrm{C}}\) \(130.3\); \(H-4\), \( \delta_{\mathrm{H}}\) \(8.53\) \(\rightarrow\) \(\delta_{\mathrm{c}}\) \(135.4\) ; \(\mathrm{H}-7\), \(\delta_{\mathrm{H}}\) \(8.36\) \(\rightarrow\) \(\delta_{\mathrm{C}}\) \(128.2\) ; \(\mathrm{H}-8 \), \( \delta_{\mathrm{H}}\) \(7.99\) \(\rightarrow\) \(\delta_{\mathrm{C}}\) \(131.9\) ; \(\mathrm{H}-9\), \(\delta_{\mathrm{H}}\) \(8.02\) \(\rightarrow\)\( \delta_{\mathrm{C}}\) \(133.5\) ; \(\mathrm{H}-10\), \(\delta_{\mathrm{H}}\) \(8.29 \) \( \rightarrow \delta \mathrm{c}\) \(130.3 \))을 확인하였다. Liu가 S. salina에서 분리한 phena-zine-1-carboxylic acid와 chemical shift를 비교한 결과, me-thine proton의 chemical shift는 일치하였고, C-7과 C-10의 chemical shift가 \( 130.1 \mathrm{ppm} \)과 \( 128.0 \mathrm{ppm} \)에서 \( 128.2 \mathrm{ppm} \)과 \( 130.3 \mathrm{ppm} \)으로 이동하였으나 다른 carbon의 chemical shift는 일치하였다. \( { }^{1} \mathrm{H}-{ }^{1} \mathrm{H} \) COSY 분석을 통하여 양성자들 사이의 cross peak를 관찰하였다. 이상의 결과들을 정리한 결과, me-thine proton chemical shift와 carbon chemical shift 및 분자량 결과를 종합한 결과 Phenazine-1-carboxylic acid로 동정하였다(Fig. 4).</p>
다음 중 효소활성 검사에서 분해력이 존재하지 않는다고 나타난 것은 무엇인가?
starch