<h1>서 론</h1><p>식품단백질의 물성과 유연성을 개선하고 식품단백질 중의 lysine 보호, 내열성과 보수성 강화, 저온에서의 겔화, 탄력성과 수분함유 능력 향상, 가용성과 기능성 향상 등의 특성 변화를 도와주는 transglutaminase (TGase, protein-glutamine \( \gamma \)-glutamyltransferase: E.C.2.3.2.13)는 포유동물의 모발, 뇌, 간장 등의 생체 내에 널리 존재하며 조류, 어류, 식물 등에도 존재하는 것으로 알려져 있다. 그러나 포유동물 유래와 다르게 미생물 유래의 TGase는 칼슘 비의존성, 열안정성, 활성의 넓은 \( \mathrm{pH} \) 범위 등의 반응특성을 가지고 있어 산업적으로 적용하기 쉽기 때문에 더욱 주목받게 되었다. 미생물 유래의 microbial transglutaminase (MTG)는 방선균인 Streptoverticillium sp. S-8112에서 처음 분리되었으며 우수한 TGase생산 균주를 획득하기 위한 연구는 끝임 없이 진행되고 있다. 최근 대구지역에서 새로운 MTG를 생산하는 방선균, Streptomyces platensis YK-2가 신규로 분리되어 연구되었다. 하지만 S. platensis YK-2가 생산하는 MTG는 우수한 특성을 가졌음에도 불구하고 생산량의 한계로 산업적인 활용이 쉽지 않기 때문에 분자 생물학적인 방법을 통한 생산균주의 개량이 필요한 상황이다. 그러나 방선균은 외부 유전자에 대한 강력한 제한계, 효율적인 형질전환 시스템의 부재, 재조합체의 불안전성 등의 특징을 가지고 있어 분자생물학적인 연구가 쉽지 않다.</p><p>지금까지 방선균의 형질전환에는 주로 protoplast법과 electroporation법 등이 사용되었다. 그러나 이들 방법들은 형질전환율이 높지 않거나 적용되는 방선균이 제한적이라는 단점이 있다. 최근에 이러한 문제를 극복하기 위하여 Escherichia coli를 공여체로 사용하여 단일가닥 DNA를 세포 내로 도입하는 접합전달(transconjugation)이 도입되었다. 접합 전달법은 E. coli 내에서 재조합 플라스미드의 구축 및 조작이 가능하며 구축된 플라스미드를 방선균으로 직접 전달할 수 있어 유전자 클로닝 및 유전자 파괴, 변이유전자 회복 등에 폭 넓게 사용되고 있다. E. coli를 이용한 접합전달이 Mazodier 등에 의해 처음으로 보고되어진 이후, 방선균에 존재하는 메틸화된 DNA의 제한계를 극복하기 위해 DNA의 공여균주 (donor)로 메틸화가 결손된 E. coli ET12567/pUZ8002을 사용함으로써 보다 다양한 속(genus)의 방선균에 적용할 수 있게 되었다. 또한 현재 사용되고 있는 접합전달을 위한 벡터들 가운데 방선균의 chromosome에 존재하는 attB site로 integration되는 phC31유래의 attachment site (attP)와 integrase (int) 기능을 가진 벡터들이 가장 유용한 것으로 알려져 있다. 이러한 벡터들은 접합전달을 통해 E.coli로부터 방선균으로 전달되고 전달된 벡터의 attP site는 in-tegrase에 의해 방선균 chromosome의 attB site로 삽입된다. 그러나 새로운 MTG를 생산하는 S. platensis YK-2에 대한 형질 전환방법은 아직 연구된 봐 없다.</p><p>따라서 본 연구에서는 새로운 MTG를 생산하는 신규 방선균, S. platensis YK-2의 분자생물학적인 연구를 위해 접합전달법을 이용한 고효율 형질전환방법을 구축하였으며 attP site가 삽입되는 S. platensis YK-2의 genomic attB site에 대하여 연구하였다.</p>
본 연구에서 포유동물과 미생물의TGase의 차이는 뭐야?
칼슘 비의존성, 열안정성, 활성의 넓은 \( \mathrm{pH} \) 범위