<h1>재료 및 방법</h1><h2>균주의 분리</h2><p>검정콩, 시판 및 가정용 청국장, 전통된장 등의 분리원 \(1\mathrm{g} \)을 멸균 생리식엄수 10 m에 첨가하여 잘 현탁시켜 10분 동안 방치한 다음, 그것의 \( 0.1 \mathrm{mk} \).씩을 \( 2 \% \) milk casein을 첨가한 LB(yeast extract \( 0.5 \% \), tryptone \( 1 \%\), \(\mathrm{NaCl~} 1 \% \) )평판배지(CM)와 \( 2 \% \) 가용성전분을 첨가한 LB평판배지(SM)에 각각 도말하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C}\) 2일간 배양하였다. 두 배지상에서 나타난 colony 중에서 halo zone의 크기가 크고, 명확하며 성장속도가 빠른 단일 colony만을 1차 선별하였다. LB배지에 각각 접종하여 2일간 진탕배양한 후, 각 분리균에 대한 protease와 amylase 활성을 측정한 다음, 효소활성이 비교적 높은 균주를 2차 선별하였다.</p><h2>최종 선정</h2><p>Halo zone의 크기가 크고 가 효소활성이 높은 균으로 2차 선별된 각 균주들을 LB배자상에서 액체 배양하여 배양액 \(1\mathrm{~ml}\)를 effendorf tube에 넣고 8,000 rpm, 5 분 동안 원심 분리한 후, 상징액을 약 \(\2/3\)정도 버리고 멸균수 1 \(\mathrm{ml}\)가하여 균체를 재현탁시킨 다음, \( 100 \mu \mathrm{g}\)를 fibrin 배지상에 접종하여 경시적으로 halo zone의 크기를 관찰하여 혈전용해능을 측정하였다. 또한 남은 배양액은 멸균 생리식염수로 세척 - 집균한 다음, 일정한 농도로 희석하여 증자된 검정콩에 접종한 후, \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 72시간 발효시키면서 방향성, 점질물의 생성능력 및 전항의 혈전 용해능이 가장 우수한 것을 최종 공시균주로 선정하였다.</p><h2>최종균주의 동정</h2><p>최종적으로 선정된 공시균주의 동정은 형태학적, 배양학적, 생리 및 생화학적 특성과 탄소원 자화성을 조사한 다음, Bergey's Manual of Systematic Bacteriology에 준하여 확인하였다.</p><p>공시균주의 형태적 특성은 NB(Nutrient broth)배지에 \( 1.5 \% \) agar를 함유시킨 NA(Nutrient agar)배지상에서 성장한 colony의 모양을 관찰하였고, 내생포자 형성은 균주를 Bartholomew와 Wittwer에 의한 Wirtz변법으로 염색하여 광학현미경(Nikon, Labophot형)으로 관찰하였다. 표면 형태는 균주를 \(3\%\) glutaraldehyde- phosphate \( (\mathrm{pH~} \) 7.2)에 3시간 전 고정하고 같은 농도의 완충액으로 세척한 후 \( 2 \% \) \( \mathrm{OsO}_{4} \)-phosphate buffer에 2시간 동안 후 고정하여 알코올 \( 50,70,85,90,95,99,100 \% \)의 상승 농도 순으로 탈수하고 아세톤으로 재 탈수시킨 다음 시료대에 접착하여 \(\mathrm{Au}\)로 coating(\(200^{ \circ} \mathrm{A}\), 진공증착)하여 주사전자현미경(SEM, Akasi SX-40)으로 관찰하였다.</p><p>배양조건 및 배양상의 특징은 NB배지에 공시균주를 접종하여 여러 범위의 온도 \( \left(25,30,35,40,45^{\circ} \mathrm{C}\right) \) 와 초기 \( \mathrm{pH}(5.5,6.0,6.5,7.0,7.5) \) 에서 20시간 진탕배양 \( (220 \mathrm{rpm}) \) 한 후, \( 660 \mathrm{~nm} \) 에서 홉광도를 측정하여 검토하였다. 생리 및 생화학적 특성은 casein - gelatin - starch의 가수분해, \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{S} \) 생성, 질산염 환원, 효소생성 등에 대하여 조사하였다.</p><p>탄소원의 자화성은 \( \alpha \)-cyclodextrin을 포함한 95 가지의 탄소원로 구성된 GP microplate (MicroStation \( { }^{\mathrm{TM}} \), BIOLOG, Inc., U.S.A.)를 이용하여 조사하였다. 각 분리균주를 첨가 하여 발효시킨 청국상의 불쾌춰 발생은 훈련된 패널원 5명을 통하여 발효된 청국장의 불쾌춰 강도를 확인하였다(\(+ \): 매우 약함, \( ++ \): 약함, \( +++ \): 강함, \( ++++ \): 매우 강함).</p>
현탁액의 \( 0.1 \mathrm{ml} \)씩을 도말한 배지의 종류는 뭐니?
평판배지