<h2>pH, 잔류당 측정</h2><p>배양이 진행됨에 따라 생성되는 유기산에 의한 \( \mathrm{pH} \) 변화와 glucose 함량 변화를 관찰하기 위해 \( \mathrm{pH} \)와 잔류당을 측정하였다. \( \mathrm{pH} \)는 \( \mathrm{pH} \) meter (ST\(2100\)-F, OHAUS, Seoul, Korea)를 이용하여 측정하였으며, 배지 내 잔류당 분석은 DNS (\(3, 5\)-dinitrosalicylic acid)법을 이용하여 측정하였다. 상등액과 DNS를 \(1:3\)으로 혼합한 뒤 \(100{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(15\)분간 반응시켰다. 이후 실온에서 냉각시킨 뒤 분광광도계를 이용하여 \( 550 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 잔류당 측정의 표준물질로는 glucose (Junsei Chemical Co., Ltd.)를 이용하였다.</p><h2>가수분해 효소활성 측정</h2><p>Amylase 활성은 Miller의 방법을 응용하였으며, 배양 상등액과 \( 1 \% \) starch solution을 \( 1: 1(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)로 상온에서 \(3\)분 동안 반응시킨 후 DNS와 혼합하였다. 이후 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(15\)분 동안 열처리 한 뒤 얼음에 냉각시킨 후 분광광도계를 이용하여 \(540 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Cellulase와 xylanase의 활성은 Shin과 Cho의 방법을 응용하였으며, 배양 상등액과 각 \( 1 \%\) CMC (carboxymethyl cellulose) solution과 \( 1 \% \) xylan solution을 \( 1: 1(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)로 혼합하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(10\)분간 반응시켰다. 이후 DNS를 첨가하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 열처리 한 뒤 얼음에 냉각시킨 후 분광광도계를 이용하여 \( 540 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Protease 활성은 Oh 등의 방법을 응용하여 측정하였다. 배양 상등액과 \( 0.65 \% \) casein 용액을 \( 1: 5(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)로 혼합한 뒤 \(37 { }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(10\)분간 반응시켰다. 이후 \( 0.44 \mathrm{M} \) trichloroacetic acid를 첨가하여 \( 37{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(10\)분간 단백질을 응고시킨 뒤 \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) filter를 이용하여 여과한 후 여과액과 \( 1\)N Folin-Ciocalteu's phenol reagent를 혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(30\) 분간 반응시켰다. 흡광도는 \( 660 \mathrm{nm} \)에서 측정하였다. 또한 DDP\(346\)이 생산하는 여러 효소활성을 확인하기 위해서 API ZYM kit (bioMérieux, France)를 이용하였으며, 제조사의 매뉴얼에 따라 진행하였다.</p><h2>통계분석</h2><p>모든 분석은 \(3\)회 이상 수행하였으며, 평균 \( \pm \) 표준편차 \( (M e a n \pm \mathrm{SD}) \)로 표현하였다. 평균값의 유의한 차이는 SPSS (version \( 20.0 \) for Windows, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 이용한 일원배치 분산분석(one-way ANOVA)의 Duncan's multiple range test를 사용하였다. 유의성 검증은 신뢰구간 \( p<0.05 \)에서 분석하였다. \( \mathrm{pH} \) 변화와 가용화된 인산 함량 간의 상관관계는 Pearson's correlation coefficient \( (p<0.01) \) 로 분석하였다.</p>
배지 내 잔류당 분석을 위해 사용한 방법은 무엇인가?
DNS (\(3, 5\)-dinitrosalicylic acid)법