<p>WeelA와 Wee1B는 거의 동인한 효소 활성 도메인을 가졌음에도 불구하고, 인산화 과정과 분해 가정이 다르게 진행되므로, 각각의 효소의 어느 부위가 이러한 조절 기작에 관여 하는지를 관찰하고자, 각각의 아미노 도메인과 카르복신 도 메인은 상호 치환한 키메라(chimcra) 단백질은 제조하고(Fig.5), 이를 Hek293 세포에 형질전환한 후 그 발현을 확인하였다. 발현이 확인된 각각의 construct를 이용하여 mRNA를 합성하고, 각각을 발톱개구리의 난자에 주입한 후 progester- one은 처리하여 이동도 감소에 의한 인산화 정도, 그리고 단백질 양의 감소 정도를 측정하였다. Fig. 5에서 보는 바와 같이 WeelA의 아미노 도메인이 존재하는 경우 SDS-PAGE상에서 많은 이동도 감소를 관찰할 수 있었고, 또한 내부분의 단백질이 분해되는 것은 관찰 할 수 있었다. 이러한 결과는 WeelA의 아미노 도메인이 단백질의 인산화와 안징성 조절에 관여한다는 사실을 제시한다. 단백질의 조절은 여러 가지 기작에 의해 일어나지만 최근의 연구 결과들은 단백질의 활성 조절 기작으로 기존에 주로 연구되어 오던 인산화와 통한 분해 정도에 많은 관심은 쏟고 있다. 이러한 단백질의 안정성의 조절에는 많은 신호전달체계가 동시에 작용한다. 단백질에 uniqitin을 연결하는 uniqitin ligase (E3)는 주로 특이한 아미노산 서열을 인식하는데, 특히 보존된 아미노산 서열의 인산화된 형태를 인식하는 경우가 많다. Fig. 2에서 보듯 WeelA는 세포주기가 진행 됨에 따라 SDS-PAGE 상에서 크기가 증가하고, 또한 양이 줄어드는 것으로 보아 인산화와 ubiqitination 과정을 거쳐 분해가 되는 것으로 생각되어진다. 최근의 연구 결과 체세포 분열에서는 인간의 Wee1A가 SCF \( \beta \) - TrCP에 의해 ubiquitination 되는 것으로 알려져 있다. 반면, Wee1B의 아미노 도메인을 포함하는 대부분의 키메라 단백질은 단백질의 인산화에 관여하였으나 적은 이동도 변화를 보였고, 대부분의 단백진이 분해되지 않은 체 남아있었다. 이러한 사실은 Wee1B의 아미노산 도메인이 다른 인산화 효소에 의해 인산화되나, 이 부위가 단백질의 안정화와 분해 과정에는 관여하지 않는다는 것을 암시한다.</p><p>키매라 단백질의 활성 측정을 위하여 각각의 키메라의 mRNA를 합성 후 발톱개구리 난자에 주입하고 progesterone 처리 후 새포주기의 재개 정도를 측정하였다(Fig. 6).</p><p>Wee1 인산화요소는 Cdc2/cyclinB를 인산화하여 그활성을 억제하므로, Wee1 인산화효소의 활성이 클수록 세포주기의 제개가 억제된다. 동일한 양의 mRNA를 주사한 결과 WeelB 의 아미노 도메인과 WeelA의 카르복실 도메인을 갖는 두 개의 키메라 (Wee1B-CA (BCA), WeelA-NB (ANB))가 가장 잘 세포주기를 억제하는 것으로 보아 WeelB의 아미노 도메인과 Wee1A의 카르복실 도메인이 활성화를 조절하거나, 반대로 Wec1B의 카르복신 도메인과 Wec1A의 아미노 도메인의 인산화효소의 활성화를 억제하는 역할을 하는 것으로 생각된다./<p><p>본 연구에서는 세포 주기를 조절하는 단백질인 Wee1인 산화호소들의 특성읕 다양한 키메라 단백질을 유전자 제조 합 방법을 이용하여 제조하여 비교 분석하였다. 결과적으로 두 Wee1 인선화효소의 각각 아미노, 카르복실 도메인의 역할을 규명하였고, 인산화와 효소의 활성에 관여하는 여러 연관 인산화효소의 작용기작을 밝히는 기초를 마련하였다. 이러한 결과들은 두 개의 Wee1 인산화효소가 각각 다른 조직과 다른 종류의 세포에 존재하고, 각각 채세포 분열과 감수 분열에서 특이적인 역할을 하는 이유를 잘 설명해준다. 각각의 Wee1 kinase를 인산화시키는 효소와 그에 의한 활성의 변화, 그리고 단백질의 안정성 변화에 미치는 영향 등은 추 후에 자세히 연구되어야 할 것이다.</p>
WeelA와 Wee1B는 거의 동일한 효소 활성 도메인을 가졌지만 다르게 진행 되는 것은 무엇인가요?
인산화 과정