<h2>Wound healing assay</h2><p>암의 전이는 암세포의 특징으로 전이에서 가장 중요한 요소로서 암세포의 운동성을 들 수 있다. 세포의 운동성은 세포의 형태가 바뀌면서 일정한 방향성과 함께 관찰할 수 있다. 따라서 상황버섯 추출물의 B16F10과 SK-MEL-5에 대한 암세포 증식 억제 활성을 알아보기 위하여 wound healing assay를 실시한 결과는 Fig. 5, 6과 같다. SK-MEL-5 cell에 wound를 형성한 후 \( 3 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 의 EBE를 처리한 경우를 제외한 모든 경우에서 음성 대조구에 비해 암세포 증식 억제 활성이 높게 나타났다. 대조구와 효소 전처리구 모두 정제 과정을 거친 NEB, EB가 NEBE, EBE 보다 높은 활성을 나타내었다. B16F10 과 SK-MEL-5 모두에서 12 시간 경과시 EB \(30 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)를 처리한 경우 - 가장 높은 활성을 나타내었으며, 특히 양성 대조구(resveratrol \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)) 에 비하여 높은 활성을 나타내었다. 팽이버섯 추출물 \( 1000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 처리시 약 \( 70 \% \)의 억제활성을 나타냈다고 보고한 Lee 등의 결과와 비교 할 때, EB \(30 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)을 처리시 약 \( 70 \% \)의 억제활성을 보여 더 낮은 농도에서 유사한 억제활성을 나타내었다.</p><h1>초 록</h1><p>본 연구에서는 국내산 상황버섯의 효소 가수분해 전처리를 통한 \( \beta \)-glucan의 최적 추출조건을 확립하고 그에 따른 활성을 알아보고자 추출 조건에 따른 생이화학적 활성을 즉정하였다. 효소 가수분해 조건을 최적화하기 위해 실시한 반응표면분석법의 결과 \( 0.66 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 의 viscozyme 농도에서 \( 6.08 \) 시간 반응하는 것이 최적이라 예측되었으며 (\( \mathrm{R}^{2}=0.9245 \)), 이에 따라 최적 추출 조건에서 추출한 시료의 \( \beta \)-glucan 함량은 \( 1.9594 \mathrm{~g} / 100 \mathrm{~g} \) 으로 측정되었다. 추출 수율 (\( 0.76-16.40 \% \)) 은 EBE가 NEBE에 비해 약 3배 높았다. \( \beta \)-glucan 순도 (\(11.15-59.05\%\))로 가장 높았으며, \( \beta- \) glucan 함량 또한 \( 0.26-3.38 \mathrm{~g} / 100 \mathrm{~g} \) 으로 EB (\(3.38 \mathrm{~g} / 100 \mathrm{~g} \)) 가 가장 높았다. 총당 함량 (\( 0.61-1.17 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \)) 은 NEB, EB 가 NEBE, EBE 보다 높았으며, EB 가 가장 높았다. 구성당 분석 결과, 모든 추줄물에서 glucose의 함량이 가장 높았으며, 대조구와 효소 전치리구 모두 정제하면서 그 비율이 증가하였다. 단백질 함량 (\( 0.44-11.73 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \)) 은 NEBE, EBE가 NEB, EB보다 높았으며, EBE가 가장 높았다. FT-IR 분석 결과 \( 890 \mathrm{~cm}^{-1} \) 부근에서 peak 가 확인되었기에 \( \beta \)-glycosidic linkage를 가지고 있는 것으로 판단하였다. MTT assay를 통해 B6F10과 SK-MEL-5세포 독성을 측정한 결과 B6F10의 경우 대조구의 세포 생존율을 \( 100 \% \) 로 하였을 때 세포 생존율이 \( 80 \% \) 이상으로 나타나 세포독성을 보이지 않았으나, SK-MEL-5에서는 EBE를 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 의 농도로 치리하였을 때 세포 생존율이 \( 75 \% \) 로 나타나 약간의 세포독성을 보였다. Wound healing assay를 통해 암세포 증식 억제 활성 측정 걸과, 정제한 NEB, EB가 NEBE, EBE 보다 활성이 높았으며, 특히 12 시간일 때 EB \(30 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 를 처리한 경우 B6F10 과 SK-MEL-5 모두에서 가장 높은 활성을 나타내었다.</p>
상황버섯 추출물의 암세포 증식 억제 활성을 알아보기 위해서 무엇을 실시해봐야해?
wound healing assay