<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>옥수수 (Zea mays L. cv Golden Cross Bantam 70) 종자를 1차 증류수에 2-4시간 불린 후에 Hetz 등의 방법을 적용하여 젖은 paper towel에 일렬로 배열하여 동심원으로 감아 세우고, 증류수 또는 처리하고자 하는 약품이 포함된 용액 \( 100 \mathrm{ml} \)에 하부를 담가 \( 28^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3일간 생장시켰다. 생장 측정은 3일째 되는 시점에 실시하였으며 굴중성 실험에는 2일된 식물의 뿌리를 사용하였다. 단백질 추출 재료로는 3일된 옥수수의 뿌리 끝 \( 1 \mathrm{~cm} \)를 채취하였으며 액체 질소로 급속 냉동을 시킨 후 사용할 때까지 \( -80^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하였다.</p><h2>단백질 추출</h2><p>옥수수의 뿌리를 액체질소 존재 하에 막자 사발을 이용하여 파쇄하였다. 시료를 \( 1.5 \mathrm{ml} \) tube에 담고 \( 500 \mu \mathrm{l} / \mathrm{g} . \mathrm{f} . \mathrm{w} \).의 추출용액(\(50 \mathrm{mM} \) Tris-\(\mathrm{HCl}\), \(\mathrm{pH} 7.5 \), \( 1 \mathrm{mM} \) EDTA, \( 1 \mathrm{mM} \) DTT, \( 10 \mu \mathrm{M} \) FAD, \(1 \mu \mathrm{M} \) sodium molybdate, \( 0.5 \% \) (\(\mathrm{v} / \mathrm{w}) \) PVP)을 넣고 잘 섞은 다음 원심분리 하였다 \( \left(17,600 \mathrm{~g} \times 40 \mathrm{~min}, 4^{\circ} \mathrm{C}\right) \). 상청액(supernatant)을 새로운 \( 1.5 \mathrm{ml} \) tube에 옮기고 Bradford 방법(Bio-Rad. USA)으로 단백질을 정량하였다.</p><h2>Native-PAGE에 의한 단백질 분리와 알데히드 산화효소와 크산틴 탈수소효소 활성의 검출</h2><p>Native-PAGE는 SDS가 없는 7.5\(\%\) acrylamide gel을 이용하여 수행하였다. 전기영동 후 activity staining은 Seo et al의 방법을 따라 수행하였다. Gel을 \( 0.1 \mathrm{mM} \) potas-sium phosphate buffer (\( \mathrm{pH} \) 7.5)에 넣어 5분간 평형을 이룬 뒤 \( 0.1 \mathrm{mM} \) phenazine methosulfate, \( 0.4 \mathrm{mM} \) MTT (3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide), \( 1 \mathrm{mM} \) ICA (indole-3-carboxaldehyde), \( 1 \mathrm{mM} \) hypoxanthine이 포함된 \( 0.1 \mathrm{mM} \) potassium phosphate buffer (\( \mathrm{pH} \) 7.5)에 담그고, 암조건의 실온에서 \( 30 \sim 60 \) 분간 activity staining을 수행하였다.</p>
실험에서 어떤 액체에 옥수수 종자를 두시간에서 네시간 정도 불렸나요?
1차 증류수