<h2>UPLC-QTof-MS 및 PDF 분석 조전</h2><p>느릅나무 잎 지표 물질의 정성분석을 위해 UPLC-QTof-MS와PDA 분석은 BEH \(\mathrm{C}_{18}(2.1 \times 100 \mathrm{mm}, 1.7 \mu \mathrm{m})\) 칼럼 관과 PDA (photodiode array)와 mass를 장착한 UPLC에 유속 \( 0.4 \mathrm{mL} / \)\( \mathrm{min} \), 용매는 \( 0.1 \% \) formic acid가 포함된 증류수(A)와 ACN(B)을 사용하여 수행하였다. UPLC 이동상의 용매 조성은 0.0-1.0 \({~min} ~1 \% \) (B), 1.0-3.0 \({~min}~1-15 \%\) (B), 3.0-11.0 \({~min} ~15-40 \% \) (B), 11.0-13.0 \({~min} ~40\%\) (B), 13.1-15.0 \({~min} ~40-1\%\) (B) 조건을 이용하였으며, 시료는 \( 2 \mu \mathrm{L}(1 \mathrm{mg} / \mathrm{mL}) \) 주입하여 분석을 실시하였다.</p><h2>구조분석</h2><p>생리활성물질의 구조를 동정하기 위하여 NMR, MS, UV 등의 분광학적인 기기를 사용하였다. 먼저, \( { }^{1} \mathrm{H}-,{ }^{13} \mathrm{C}-\mathrm{NMR} \)에서 수소와 탄소의 개수와 chemical shift 값으로 기본적인 골격을 예상하였고, 2D-NMR (COSY, HMQC, HMBC, DEPT)에서 수소-탄소의 연관관계를 통해 치환기의 정확한 위치와 탄소 차수를 확인하여 물질의 구조를 확인하였고 선행문헌의 화합물과 비교확인하여 구조를 결정하였다.</p><h2>Chlorogenic acid (3-O-caffeoylquinic acid)</h2><p>\( { }^{1} \mathrm{H} \) NMR \( \left(500 \mathrm{MHz}\right. \), methanol-\( \left.d_{4}, \delta\right)\): 7.58(d, J=16.0 \(\mathrm{Hz}\), 1H), 7.04(d, J=2.0 \(\mathrm{Hz}\), 1H), 6.94(dd, J=8.2,2.0 \(\mathrm{Hz}\), 1H), 6.78(d, J=8.2 \(\mathrm{Hz}\), 1H), 6.30(d, J=16.0 \(\mathrm{Hz}\), 1H), 5.36 (brd, 1H), 4.14(\(\mathrm{m}\), 1H), 3.65(\(\mathrm{m}\), 1H), 1.932 .22(\(\mathrm{m}\), 4H) \(\mathrm{ppm}\) \(;{ }^{13} \mathrm{C}\) NMR\((125 \mathrm{MHz} \), methanol-\( \left.d_{4}, \delta\right)\): 178.4, 168.9, 149.5, 147.1, 146.8, 127.8, 123.0, 116.5, 115.3, 115.2, 77.3, 73.9, 72.1, 71.9, 39.4, 38.3 \(\mathrm{ppm}\)</p><h2>Nochlorogenic acid (5-O-caffeoylquinic acid)</h2><p>\( { }^{1} \mathrm{H}\) NMR \(\left(500 \mathrm{MHz}\right.\), methanol-\(\left.d_{4}, \delta\right)\): 7.56(d, J=16.0 \(\mathrm{Hz}\), 1H), 7.05(d, J=2.0 \(\mathrm{Hz}\), 1H), 6.95(dd, J=8.2,2.0 \(\mathrm{Hz}\), 1H), 6.78(d, J=8.2 \(\mathrm{Hz}\), 1H), 6.27(d, J=16.0 \(\mathrm{Hz}\), 1H), 5.35 (m, 1H), 4.18 (brd, 1H), 3.75(m, 1H), 2,042.25(m, 4H) \(\mathrm{ppm};{ }^{13} \mathrm{C}\) NMR\((125 \mathrm{MHz} \), DMSO-\( \left.d_{6}, \delta\right)\): 175.6, 167.3, 148.1, 145.7, 145.3, 126.4, 121.6, 115.1, 113.8, 113.8, 74.7, 72.1, 70.5, 69.9, 36.8, 37.4 \(\mathrm{ppm}\)</p><h2>정량 분석</h2><p>분석 시료의 제조 표준 물질인 3-O-caffeoylquinic acid와 5-O-caffeoylquinic acid의 각각의 농도를 \( 1000 \mathrm{ppm} \) 만들어 원심분리 후 상등액을 취하여 분석용 vial 에 담아 진행하였다. 정량 값은 측정값의 피크면적을 검량선 \( (\mathrm{y}=\mathrm{ax}+\mathrm{b}) \) 식에 대입한 후 계산식에 의해 산출하였다. 검량선은 \( \mathrm{x} \)축에 반복 수 및 분석 시점을, \( \mathrm{y} \)축에 피크면적을 적용하여 최소자승법으로 산출 하였다. 평가 항목은 특이성, 직선성, 검출 한계, 정량 한계, 시료 잔류의 5 가지 항목으로 평가하였다.</p>
생리활성물질의 구조를 동정하기 위해 사용되는 분광학적인 기기는 무엇인가?
NMR, MS, UV