<h1>결 과</h1><h2>옻나무 추출물(RVSE)과 옻나무 추출물 분리 성분인 fise-tin을 처리한 세포에서의 형태 변화</h2><p>NIH3T3 세포에 옺나무 추출물(RVSE)과 옺나무 추출물 분리 성분인 fisetin을 처리하고 48 시간 동안 반응시킨 후 현미경을 이용하여 세포의 형태가 어떻게 변화하는지를 관찰하였다. RVSE는 \(50, 100, 200, 300, 400 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로, fisetin은 \(50, 75, 100, 300, 500 \mathrm{uM} \) 농도로 처리하였다. RVSE와 fisetin을 고농도로 처리 하였을 때는 세포에 대한 독성이 증가하여 세포가 둥그렇게 되며 세포의 집단 으로부터 점차 떨어져 나가는 세포고사로 진행되는 것을 관찰할 수 있었다.</p><p>UVB에 의한 유전독성에 RVSE와 fisetin이 어떠한 효과를 보이는지 알아보기 위해 NIH3T3 세포에 UVB \( \left(200 \mathrm{~J} / \mathrm{m}^{2}\right) \)를 조사한 후 RVSE와 fisetin을 처리하고 48 시간 동안 반응시킨 후 형태가 어떻게 변화하는지를 관찰하였다. 그 결과 UVB를 조사하고 배양배지 만을 처리한 그룹은 UVB에 의한 유전독성으로 세포고사가 상당히 유도된 것을 관찰할 수 있었다. 그러나 UVB를 조사한 후 RVSE와 fisetin을 농도별로 첨가하여 처리한 그룹에서는 UVB에 의한 세포 고사가 현저히 감소되는 것을 관찰할 수 있었다.</p><h2>자외선을 조사한 NIH3T3 세포의 생존율에 대한 RVSE와 fisetin의 효과</h2><p>Trypan blue 배제분석을 수행하여 자외선을 조사한 NIH3T3세포의 생존율에 대한 RVSE와 fisetin의 효과를 관찰하였다. 실험은 UVB를 조사한 그룹과 UVB를 조사하지 않은 그룹으로 나누어 수행하였다. UVB를 조사하지 않은 그룹에서는 고농도의 RVSE와 fisetin에서만 세포독성에 의한 생존율 감소를 보여 주었다. 한편, UVB를 조사한 그룹의 경우, UVB를 조사한 후 배양배지만 처리한 그룹은 UVB에 의한 유전독성으로 인해 세포의 생존율이 정상 대조군에 비해 \(10-20 \% \) 정도로 현저히 감소하였다. 그러나, UVB를 조사한 후 RVSE나 fiseitin을 다양한 농도별로 첨가하여 처리한 그룹은 UVB와 옻추출물 성분이 서로 독립적으로 작용하였을 때 예상되는 세포고사의 정도 보다 현저히 증가된 세포생존율을 보여주며, UVB의 독성으로부터 상당한 수준의 보호효과를 보여준다. 이는 RVSE와 fisetin이 NIH3T3 세포에서 UVB를 조사함으로써 생기는 생존율 저하를 방어할 수 있음을 시사한다.</p><h2>자외선 조사에 의한 NIH3T3 세포의 핵분절에 대한 RVSE와 fisetin의 효과</h2><p>UVB에 의한 세포의 사멸이 세포고사인지와 그 세포고사가 RVSE와 fisetin에 의해 저해되는 것인지 아니면 단순히생존율만을 증가시키는 것인지를 알아보기 위해 세포고사가 진행될 때 나타나는 핵의 분절 현상을 관찰할 수 있는 DAPI 염색 분석을 수행하였다. 세포에 UVB를 조사 한 후 배양배지만을 처리한 그룹은 세포고사의 특징적인 핵의 분절이 뚜렷이 관찰되었다. 그러나 세포에 UVB를 조사한 후 RVSE과 fisetin을 농도별 첨가하여 48시간 처리한 그룹에서는 핵의 분절이 현저히 감소되었는데 반복적인 관찰을 통계 처리하였을 때 약 \( 35-45 \% \) 정도의 감소를 보였다(자료제시 않았음). 이는 RVSE와 fisetin이 UVB에 의한 NIH3T3 세포의 세포고사를 저해함을 시사한다.</p><h2>자외선에 의해 유발된 세포고사의 초기 단계에 대한 RVSE와 fisetin의 효과</h2><p>RVSE와 fisetin이 세포고사의 초기 단계의 진행을 방어하여 감소시키는지를 규명하기 위해 이를 확인할 수 있는 An-nexin V 결합분석을 수행하였다. 세포에 UVB를 조사한 후 RVSE와 fisetin을 농도별로 첨가하여 48시간 반응시킨 그룹에서는 Annexin V가 결합하는 현상이 감소하는 것을 보였다. 이는 RVSE와 fisetin이 NIH3T3 세포에 UVB를 조사함으로써 생기는 세포고사의 진행과정 중 특히 초기 단계를 저해 또는 감소하는 효과를 가지고 있음을 시사한다.</p>
옻나무 추출물과 fisetin을 처리한 NIH3T3 세포에서의 형태 변화를 관찰하기 위한 과정은 어떻게 되니?
48 시간 동안 반응시킨 후 현미경을 이용