<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 재료 및 추출물 제조</h2><p>본 실험에서 사용된 gallic acid, quercetin, L-ascorbic acid,Folin & Ciocalteu’s phenol 시약, diethyleneglycol, \( 2 \) , \( 2 \)'-azinobis- \(3 \)-ethyl-benzothiazoline)-sulfonic acid (ABTS), potassiumferricyanide (Ⅲ), \( 2 \) ,\( 2 \)-diphenyl-\( 1 \)-picryl-hydrazyl (DPPH), citricacid, ferric chloride, sodium nitrite, linoleic acid 및 ferrouschloride는 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) 의 제품이었고,그 외는 \(1\)급 이상의 시약을 사용하였다.</p><p>두충나무 잎과 껍질의 분말은 국산(Green Natural, Jindo, Korea)을 사용하였다. 두충나무 잎과 껍질 분말에 10배\( (\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)의 \( 50 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 에탄올 용액을 넣고 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)의 항온진탕조(Jeio Tech,Daejeon, Korea)에서 \(2\)시간 추출한 후 \(10\)분 동안 원심분리 \( (3,000 \times \mathrm{g}) \)하여 상등액을 얻었고 농도별로 희석하여 실험에 사용하였다.</p><h2>두충나무 잎과 껍질 추출물의 총 폴리페놀 함량</h2><p>두충나무 잎과 껍질 추출물에 함유되어 있는 총 폴리페놀 함량은 Folin과 Denis의 방법을 변형하여 측정하였다. 두충나무 잎과 껍질 추출물 \( 0.2 \mathrm{~mL} \)에 증류수 \( 0.8 \mathrm{~mL} \)와 Folin-Ciocalteu시약 \( 1.0 \mathrm{~mL} \)를 넣어 실온에서 \(5\)분 동안 반응시키고, \( 10 \% \) sodium carbonate 용액 \( 2.0 \mathrm{~mL} \) 를 첨가하여 \(1\)시간 놓아둔 후 \( 725 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 총 폴리페놀의 함량은 \( \mu \mathrm{g} \) gallic acid 당량 (\mathrm{GAE}) / \mathrm{mg} \)-추출물로 나타내었다.</p><h2>두충나무 잎과 껍질 추출물의 총 플라보노이드 함량</h2><p>두충나무 잎과 껍질 추출물의 총 플라보노이드 함량은 Davis의 방법을 변형하여 측정하였다. 두충나무 잎과 껍질 추출물 \( 1.0 \mathrm{~mL} \)에 diethyleneglycol \( 2.0 \mathrm{~mL} \)와 \( 1 \mathrm{~N} \) sodium hydroxide 용액 \( 0.02 \mathrm{~mL} \)를 순차적으로 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(1\)시간 놓아둔 후 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 총 플라보노이드 함량은 \( \mu \mathrm{g} \) quercetin 당량\( (\mathrm{QE}) / \mathrm{mg} \)-추출물로 나타내었다.</p><h2>두충나무 잎과 껍질 추출물의 라디칼 소거활성</h2><p>두충나무 잎과 껍질 추출물의 ABTS 양이온라디칼 소거활성은 Re 등의 방법을 변형하여 측정하였다. \( 7.5 \)\( \mathrm{mM} \) ABTS와 \( 2.5 \)\( \mathrm{mM} \) potassium persulfate가 같이 들어있는 ABTS 용액을 만들어 암소에서 \(15\)시간 동안 놓아둔 후 \( 414 \mathrm{~nm} \)의 흡광도가 \( 1.5 \pm 0.2 \)가 되도록 희석하였다. 각각 농도별로 준비된 두충나무잎과 껍질 추출물 \( 0.2 \mathrm{~mL} \)에 ABTS 용액 \( 3 \mathrm{~mL} \)를 넣고 실온에서 \(90\)분 동안 반응시킨 후 \( 414 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 두충나무 잎과 껍질 추출물의 DPPH 유리라디칼 소거활성은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다. 각각 농도별로 준비된 두충나무 잎과 껍질 추출물 \( 0.2 \mathrm{~mL} \)에 \( 0.2 \)\( \mathrm{mM} \) DPPH 용액 \( 0.8 \mathrm{~mL} \)를 넣고 실온에서 \(30\)분 동안 반응시킨 후 \( 525 \mathrm{~nm} \)에서의 흡광도를 측정하였다. 양이온라디칼과 유리라디칼에 대한 소거활성(%)은 [\(1\)-(시료첨가군(무첨가군 \( )] \times 100 \)으로 계산하였고, 대조물질인 L-ascorbic acid와 비교하였다.</p><h2>두충나무 잎과 껍질 추출물의 환원력</h2><p>두충나무 잎과 껍질 추출물의 환원력은 Oyaizu의 방법을 변형하여 측정하였다. 각각 농도별로 준비된 두충나무 잎과 껍질 추출물 \( 3.0 \mathrm{~mL} \)에 \( 0.2 \mathrm{M} \) 인산 완충용액(\( \mathrm{pH} 6.86 \)) \( 3.0 \mathrm{~mL} \)와 \( 1 \% \) potassium ferricyanide (Ⅲ) 용액 \( 3.0 \mathrm{~mL} \)를 순차적으로 넣고 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(20\)분 동안 반응시킨 후 \( 10 \% \) trichloroacetic acid \( 3.0 \mathrm{~mL} \)를 처리하여 \(5\)분 동안 원심분리\( (3,000 \times \mathrm{g}) \)하였다. 상등액 \( 2.0 \mathrm{~mL} \)을 얻어 증류수 \( 2.0 \mathrm{~mL} \)와 \( 0.1 \% \) ferric chloride 용액 \( 0.5 \mathrm{~mL} \)를 넣은 후 \( 700 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 대조물질인 L-ascorbic acid와 비교하였다.</p><h2>두충나무 잎과 껍질 추출물의 아질산염 소거활성</h2><p>두충나무 잎과 껍질 추출물의 아질산염 소거활성은 Gray와 Dugan의 방법을 변형하여 측정하였다. 각각 농도별로 준비된 두충나무 잎과 껍질 추출물 \( 0.5 \mathrm{~mL} \)에 \( 0.2 \mathrm{M} \) citrate 완충용액(\( \mathrm{pH} 1.2 \)) \( 4.0 \mathrm{~mL} \)와 \( 1 \)\( \mathrm{mM} \) sodium nitrite 용액 \( 0.5 \mathrm{~mL} \)를 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(1\)시간 동안 반응시켰다. 반응액 \( 1.0 \mathrm{~mL} \)를 취하여 \( 2 \% \) acetic acid 용액 \( 3.0 \mathrm{~mL} \)와 Griess 시약 \( 0.4 \mathrm{~mL} \)를 순차적으로 첨가하여 실온에서 \(15\)분간 정치시킨 후 \( 520 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 소거활성(%)은 [\(1\)-(시료첨가군 \( / \) 무첨가군) \( ] \times 100 \)으로 계산하였고, 대조물질인 L-ascorbic acid와 비교하였다.</p><h2>두충나무 잎과 껍질 추출물의 지질과산화 억제활성</h2><p>두충나무 잎과 껍질 추출물의 지질과산화 억제활성은 Nakatani와 Kikuzaki의 방법을 변형하여 측정하였다. 각각 농도별로 준비된 두충나무 잎과 껍질 추출물 \( 1.0 \mathrm{~mL} \) 에 \( 50 \mathrm{mM} \) 인산 완충용액(\( \mathrm{pH} 7.0)\) \(4.0 \mathrm{~mL} \)와 \( 2.5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \)의 linoleic acid 용액 \( 2.0 \)\( \mathrm{mL} \)를 혼합하여 \( 45^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(72\)시간 동안 반응시켰다. \(24\)시간 마다 각각의 반응액을 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)씩 채취하여 \( 75 \% \) 에탄올 용액 \( 4.7 \mathrm{~mL} \)과 \( 30 \% \) ammonium thiocyanate 용액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)를 순차적으로 넣고 실온에서 \(5\)분 동안 정치시킨 후 \( 20 \)\( \mathrm{mM} \) ferrous chloride용액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)를 넣고 \( 500 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 지질과산화도는 흡광도로 나타내었고, \(72\)시간 후의 지질과산화 억제활성(%)은 [\(1\)-(시료첨가군 \( / \) 무첨가군) \( ] \times 100 \)으로 계산하였다.</p>
두충나무 추출물의 농도가 높을수록 라디칼 소거활능이 높았어?
YES