<h1>재료 및 방법</h1><h2>시약, 재료 및 기구</h2><p>Methiozolin \(99.9 \%\) 표준품은 목우연구소(Daejeon, Korea)에서 제공받아 사용하였다. Acetone, dichloromethane, n-hexane, ethyl acetate, acetonitrile은 High performance liquid chromato-graphy (HPLC) 급(Brudick & Jackson Korea, Seoul, Korea)을 사용하였다. Silica, florisil, NH SPE 카트리지(Waters Korea, Seoul, Korea)는 \( 1 \mathrm{~g} \) 용량을, sodium sulfate, sodium chloride는 Junsei Chemical (Tokyo, Japan)에서 구입하여 사용하였다. 시료 중 잔류농약의 추출을 위하여 JK-600 (Jeio Tech, Daejeon, Korea) Orbital shaker를 이용하였다. 시료 및 표준품의 중량은 AND HM-200 또는 AND HF-300GD 저울로 칭량 하였고, N-1110-S (EYELA, Tokyo, Japan) 감압회전농축기와 Hurricane-Lite (Chongmin Tech, Seoul, Korea) 농축기를 사용하여 용매를 제거하였다.</p><h2>표준검량선 작성</h2><p>Methiozolin 표준품 \( (99.9 \%) ~10.0 \mathrm{mg} \)을 \( 100 \mathrm{~mL} \)의 acetonitrile에 녹여 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 표준용액을 제조하였다. 이 표준용액을 acetonitrile으로 희석하여 \( 0.1, 0.25, ~0.5,~ 1.0,~ 2.5,~ 5.0,~ 10.0 \) \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 분석용 표준용액을 조제하였다. 이 표준용액들을 일정량 HPLC에 주입하여 얻어진 피크의 면적을 기준으로 표준검량선을 작성하고, 신호대 잡음비가 3정도인 농도를 최소검출량으로, 10 이상인 농도를 정량한계로 설정하였다(Lee 등, 2013).</p><h2>분석방법 확립</h2><p>최대흡광파장설정 HPLC-DAD에 \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 표준용액 \( 20 \mu \mathrm{L} \)를 주입하여 얻어진 흡광스펙트럼을 확인하여 최대 흡광파장을 설정하였다.</p><h2>액액분배조건 확립</h2><p>증류수 \( 100 \mathrm{~mL} \)에 포화식염수 \( 10 \mathrm{~mL} \)를 첨가한 후, \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 농도의 표준용액 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 첨가한 뒤, \( \mathrm{n} \)-hexane, dichloromethane, ethyl acetate 세가지 용매 각각 \( 100 \mathrm{~mL} \)로 2회 분배하고, 유기용매층을 무수황산나트륨을 통과시켜 물을 제거하였다. 유기용매를 감압농축기를 이용하여 제거한 후 acetonitrile \( 4 \mathrm{~mL} \)로 재용해하여 HPLC로 분석하였다.</p><h2>정제조건 확립</h2><p>정제조건 확인은 florisil, silica 두 종류의 SPE를 이용하였으며, 각각 \( 1 \mathrm{~g} \)씩 충진된 \( 6 \mathrm{~mL} \)용 카트리지를 사용하였다. \( \mathrm{n} \)-hexane 5\( \mathrm{mL} \)로 SPE 카트리지를 활성화 시킨 후, \( \mathrm{n} \)-hexane에 조제된 10\( \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 수준의 표준용액 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 적하하고 \( \mathrm{n} \)-hexane \( 5 \mathrm{~mL} \)로 흘려보냈다. 그 후 차례로 \( 5,~10,~20,~30,~40,~50 \% \) acetone/\(\mathrm{n}\)-hexane \( (\mathrm{v} / \mathrm{v}) 10 \mathrm{~mL} \)를 이용하여 용출시켰다. 용출시킨 용액을 질소기류 하에 농축하고 acetonitrile \( 4 \mathrm{~mL} \)로 재용해하여 HPLC로 분석하였다.</p><h2>회수율시험</h2><p>유출수 증류수 \( 100 \mathrm{~mL} \)에 \( 0.01 \)과 \( 0.05 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 수준으로 methiozolin을 첨가하고 포화식염수 \( 10 \mathrm{~mL} \)를 가한 후 dichloromethane \( 100 \mathrm{~mL} \)로 2회 분배추출 하였다. 유기용매층을 무수황산나트륨을 통과시킨 후, 감압농축하고 농축한 잔여물을 \(\mathrm{n}\)-hexane 4\( \mathrm{mL} \)로 재용해한 뒤, \( \mathrm{n} \)-hexane \( 5 \mathrm{~mL} \)로 활성화시킨 silica SPE에 적하하여 \( \mathrm{n} \)-hexane \( 5 \mathrm{~mL} \)로 씻어버렸다. 흡착된 methiozolin은 acetone \( / \mathrm{n} \)-hexane \( (5 / 95, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 혼합용액 \( 10 \mathrm{~mL} \)를 이용하여 용출시켰다. 용출시킨 용액을 질소기류 하에 농축시키고 acetonitrile \( 4 \mathrm{~mL} \)로 재용해하여 HPLC로 분석하였다.</p>
정제조건 확인은 무엇을 이용하였나요?
florisil, silica 두 종류의 SPE