<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>본 실험에 이용된 공시재료는 경북 안동 종자보급소에서 변양 받은 벼 품종 다산, 일품, 화성 (도열병 저항정도: 강, 중, 약)을 일반 육묘 방법에 의해 온실 내 \( \left(29 \pm 1^{\circ} \mathrm{C}\right) \) 에서 6 엽까지 재배하여 각 처리별로 처리하여 시료로 사용하였다.</p><h3>가. UV-B 조사</h3><p>벼의 지상부를 채취하여 UV-B \( (260 \mathrm{~nm}) \) 를 0 분, 40 분, 60 분, 120 분 조사시킨 후, \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 광 상태에서 12 시간 incu-bation 시킨 후 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 암 상태에서 48 시간 incubation 하여 측정용 시료로 사용하였다.</p><h3>나. 도열병원균 접종</h3><p>Rice bran Medium에서 15일간 배양된 Pyricularia oryzae의 포자를 채취하여 포자 \( 500 \mathrm{m \ell} \) 당 전착제인 Tween20 \( 1 \mathrm{m \ell} \) 를 흔합하여 공시재료에 엽면 살포한 뒤 접종 경과 일수에 따라 0 일, 3 일, 5 일, 7 일, 14 일째 각 각 시료를 채취하여 축정용 시료로 사용하였다.</p><h3>다. 키토산과 도열병원균 접종</h3><p>시판되고 있는 키토산을 \( 0 \%, 0.2 \%, 0.5 \% \) 로 희석 후, 도열병병원균 접종 3 일전에 벼 육묘상에 처리하였다. 시료채취는 처리 후 0 일, 7 일, 14 일째 각 각 채취하여 측정용 시료로 사용하였다.</p><h2>효소측정</h2><h3>가. POD 활성</h3><p>식물체 \( 0.1 \mathrm{~g} \) 을 \( 1 \mathrm{m \ell} \) 의 \( 0.05 \mathrm{M} \) 인산완충액 ( \( \mathrm{pH} 7.8 \) )과 함께 마쇄한 후, \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 14,000 \mathrm{rpm} \) 으로 20 분간 원심 분리하여 얻어진 상등액을 조효소액으로 사용하였다. \( \mathrm{POD} \) 활성은 pyrogallol(Sigma, U.S.A)을 기질로 사용하고, \( 100 \mu \ell \) 의 조효소액에 \( 2.9 \mathrm{ml} \) 의 assay buffer를 첨가하여 \( 420 \mathrm{~nm} \) 에서 20 초간 상온에서 흡광도 변화를 측정하였다.</p><h3>나. SOD 활성</h3><p>SOD 활성은 McCord와 Fridovich의 방법에 따라 xan-thine/xanthine oxidase system을 superoxide radicals \( \left(\mathrm{O}_{2}\right. \)\( \bullet \)) 의 공급원으로 이용하여 superoxide radicals에 의한 cytochrome c의 환원속도를 \( 550 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였다. SOD 활성 1 unit는 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 반응을 시작하여 150 초간 \( 550 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도 변화를 조사하여 xanthine oxidase 활성이 \( 50 \% \) 억제되는 것으로 정의하였다.</p><h3>다. Diterpene cyclase 활성</h3><p>Diterpene cyclase의 활성은 \( \mathrm{H} \) 가 radio label된 geranyl geranyl pyrophosphate (GGPP)를 기질로 사용하였다. 50 \( \mu \ell \) 조효소액과 \( 500 \mu \ell \) assay buffer를 첨가 후 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 45 분 반응시킨 뒤 \( 250\mu \ell \)\( \mathrm{EtOH} \)-Pet. Ether \( (1: 3) \) 을 첨가하여 유기층을 분취하였다. 분취액을 sililic acid \( 0.4 \mathrm{~g} \) 과 \( 250\mu \ell \)hexane을 가한 뒤 상층액 \( 125 \mu \ell \) 를 coctial \( 4 \mathrm{~m} \ell \) 과 혼합하여 LSS (liquid scintillation spectrometry)로 측정하였다.</p>
Rice bran Medium에서 며칠간 배양된 Pyricularia oryzae의 포자를 채취하였어?
15일