<h2>알레르기 유도 및 판정</h2><p>마우스에게 알레르기 면역반응을 유도하기 위하여, OVA 를 adjuvant인 aluminium hydroxide (\(20 \mu \mathrm{g} / \text{마우스}\)) 및 Bordetella pertussis 사균 부유액 (\( 1 \times 10^{9} \) bacteria/마우스)과 혼합하여 마우스 복강으로 1회 투여하였고, 이때 투여된 OVA의 양은 선행연구의 결과에 따라 알레르기가 잘 유발되는 용량인 마우스당 \( 1 \mathrm{mg} \) 이 되도록 하였다. OVA 에 대한 알레르기 유발의 판정은 OVA로 감작 시킨 후 15 일째 OVA(\(100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mouse}\)) 를 마우스 꼬리정맥으로 투여하고(i.v.) Haffner 의 방법에 준하여 알레르기 유발을 판정하였다.</p><h2>비장 Index의 측정</h2><p>알레르기 면역감작 후 감작된 정도를 비교하기 위하여 Chandra와 그의 동료들에 의한 연구방법에 따라 spleen in-dex를 측정하였고, 이 방법으로 비장의 크기에 따라 면역력이 이루어진 정도를 비교하고 알레르기가 유도될 때 비장의 크기가 병적으로 커지는 지에 대하여 알아보았다.</p><p>* spleen index=spleen weight/animal weight</p><h2>복강의 대식세포와 비장의 T 림프구 및 B 림프구의 분리</h2><p>복강의 대식세포를 분리하기 위하여, 수영훈련 기간별 훈련된 마우스를 \( \mathrm{CO}_{2} \) gas로 희생시키고, RPMI 1640 배지 (\( 2 \mathrm{mM} \) L-glutamine, \( 2.2 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) sodium bicarbonate, \(100 \mathrm{units} / \mathrm{ml} \) penicillin, \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) streptomycine, 및 \( 2 \mathrm{mM} \) HEPES buffer 가 첨가됨) \( 10 \mathrm{ml} \) 를 \( 10 \mathrm{ml} \) 주사기(18 gauge needle)에 넣어 마우스 복강 내로 2-3회 주사하고 복강 세척액을 채취하였다. 이 세척액에서 세포를 분리하여 우태아 혈청이 \( 10 \% \) 함유된 RPMI 배지(이후 완전 배지로 칭함)에 부유시킨 (\( 1 \times 10^{6} \mathrm{cells}/\mathrm{ml}\)) 후 \( 75 \mathrm{~cm}^{2} \) culture flask에 넣어 \( 37^{\circ} \mathrm{C}\), \(5 \%\) \(\mathrm{CO}_{2} \) 항원 항습기에서 3 시간 동안 배양하였다.</p><p>배양 후 culture flask로부터 flask 표면에 부착되지 않은 세포는 RPMI 1640 배지로 3회 세척하여 제거하고 flask 표면에 부착된 세포는 차가운 배지와 rubber policeman을 이용하여 flask로부터 때어내어 완전배지에 \( 1 \times 10^{6} \mathrm{cells}/ \mathrm{ml} \)로 부유시켰다.</p><h2>림프구 증식반응</h2><p>림프구의 증식 측정은 \( \left[{ }^{3} \mathrm{H}\right] \)-thymidine (\( { }^{3} \mathrm{H}-\mathrm{TdR}\)) in-corporation 방법에 의해 시행할 것이다. 우선 림프구 부유액 \( 100 \mu\mathrm{I}(\mathrm{I} \times 10^{5} \text{cells})\)를 96-well round bottomed microplate (Corning, Rochester, NY)에 분주하고, \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{well}\)의 OVA를 첨가하여 4 일간 배양하였다. 배양 후 이 plate의 각 well에 \(10 \mu \mathrm{l}(1.0 \mu\) \(\mathrm{Ci}) \) 의 \( { }^{3} \mathrm{H}-\mathrm{TdR} \) (New England Nuclear, Boston, MA)을 첨가하고 6 시간 연장 배양하였다.</p><p>각 well에 배양된 세포들은 glass filter에 흡착시키고 beta counter로 \( { }^{3} \mathrm{H}-\mathrm{TdR} \) 의 조사량을 측정하여 세포의 증식 반응을 산정하였다.</p>
복강의 대식세포를 분리하기 위해 투여되는 RPMI 1640 배지의 양은 어떻게 되는가?
\( 10 \mathrm{ml} \)