<h1>재료 및 방법</h1><h2>균주 및 분석시료</h2><p>실험에 사용한 울금 분말은 인도산 울금을 건조시켜 분쇄한 것으로 서울 제기동 소재의 산들약초에서 구입하였고, 5종의 프로바이오틱 유산균 Bifidobacterium longum IDCC 4101, Lactobacillus gasseri IDCC 9206, Lactobacillus plantarum IDCC 9205, Lactobacillus rhamnosus IDCC 3201, Lactobacillus johnsonii IDCC 9203를 이용하여 발효를 진행하였다(IDCC, ILDONG Culture Collection). 각 유산균은 de Man-Rogosa-Sharpe(MRS, Difco) 배지를 이용하여 전배양과 중간배양을 실시한 뒤 울금 분말 \( 5 \% \), glucose (Samchun chemical) \( 1 \% \), bacto peptone(Difco) \( 0.5 \% \)가 함유된 배지 \( 40 \mathrm{~mL} \)에 \( 5 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 접종하여 본배양을 진행하였다.</p><p>소염활성 측정에 사용한 시료의 제조는 다음과 같다. 배양 종료 후 \(\mathrm{pH}\)를 7.0으로 보정한 뒤 원심분리를 통해 상등액을 회수하였고 감압 농축기(EYELA, OSB-2100)를 이용해 상등액을 10배 농축하여 1차 분석 시료를 제조하였다. 2차 분석 시료를 제조하기 위해서 1차 분석 시료에 주정을 처리하여 침전물을 제거하였고, 상등액을 다시 회수해 감압 농축기로 시료를 농축하였다. 농축된 시료는 phosphate based saline(PBS, \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{HPO}_{4} 10 \mathrm{mM}\), \(\mathrm{NaCl} 137 \mathrm{mM}\), \(\mathrm{KH}_{2} \mathrm{PO}_{4} 2 \mathrm{mM}\), \(\mathrm{KCl} 2.7 \mathrm{mM} \))를 이용해 10배 농축액을 만들어 2차 분석 시료를 제조하였다. 대조군으로 사용한 시료는 울금 분말 \( 5 \% \), glucose \( 1 \% \), bacto peptone \( 0.5 \% \)가 함유된 본배양 배지를 \( 121^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분 동안 멸균하여 열수추출 하였고, 이를 원심분리하여 상등액을 회수한 후 위와 동일한 방법으로 감압농축 및 주정 침전을 실시하여 제조하였다.</p><h2>세포배양</h2><p>본 실험에서 이용한 Raw 264.7 세포주는 한국세포주은행에서 분양받아 사용하였다. 세포의 배양은 \( 10 \% \) fetal bovine serum(FBS)과 \( 0.2 \% \) gentamycin \( (25 \mathrm{mg} / \mathrm{mL}) \)을 첨가한 Dulbeco's modified eagle's medium(DMEM)을 사용하였으며, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \), \( 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에 적응시켜 계대 배양하였다. 세포주를 활성화 시키기 위해 \( 2 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)의 LPS(lipopolysaccharide, Sigma)를 처리하였으며 여러 가지 농도 62.5, 125, 250 \(\mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)의 시료와 양성 대조군을 처리한 후 18시간 동안 배양하였다.</p>
본 연구에서 2차 분석 시료는 어떻게 제조했니?
1차 분석 시료에 주정을 처리하여 침전물을 제거하였고, 상등액을 다시 회수해 감압 농축기로 시료를 농축