<h2>미토콘드리아 추출</h2><p>에릴포메이트 훈증 처리 후 약충을 -\(70\)\( ^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하고 이를 효소 희석 용액 \(250\)\(\mathrm{mM} \) sucrose, \(10\)\(\mathrm{mM} \) Tris-HCl, \(\mathrm{pH} \) 7.4) 200\( \mu \mathrm{L} \) 을 넣고 얼음에 유지한 채로 균질화 하였다. 균질화한 용액은 \(4\)\(^ {\circ} \mathrm{ C } \), 600 \(\mathrm{G}\), \(10\)분간 원심분리 하였다. 분리한 상등액을 \(4\)\( { }^{\circ} \mathrm{C}\), 10,000 \(\mathrm{G}\), \(15\)분간 다시 원심분리하고 상등액을 제거하였다. 침전물은 효소 희석 용액 \(20\)\( \mu \mathrm{L} \) 에 녹여 미토콘드리아 원액으로 사용하였다. 단백질 정량은 bradford법을 따라 시행하였으며, 표준 단백질로 BSA을 사용하여 표준곡선을 얻었다. \(96\)well plate에 염색시약 \(250\)\( \mu \mathrm{L} \) 와 시료 \(5\)\( \mu \mathrm{L} \) 를 혼합하고 \(5\)분간 반응 시킨 뒤 \(595\)\( \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다.</p><h2>Cytochrome c oxidase (cox) 활성 측정</h2><p>기질로 환원형 Cytochrome c를 사용하였고 Cytochrome c (\(2.7\)\( \mathrm{mg} \) )를 칭량하여 증류수 \(1\)\( \mathrm{~mL} \) 에 용해하였다. 이 용액에 \(0.1\)\( \mathrm{M} \)Dithiothreitol 5\( \mu \mathrm{L} \) 를 넣고 상온에서 \(30\)분간 갈색에서 분홍색으로 변할 때까지 반응시키고 \(30\)초 간격 \(10\)분간 \(550\)\( \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도 변화의 유무를 확인하였다. 완전히 환원된 cytochrome c 용액을 Tris-buffer 용액 (\(120\)\( \mathrm{ mM } \) KCl, 10\( \mathrm{ mM } \) Tris-HCl, \( \mathrm{ pH } \) 7.4)로 \(10\)배 희석하여 효소 활성 반응액으로 사용하였다. 추출한 미토콘드리아 원액을 위 미토콘드리아 추출 시 사용한 효소 희석 용액으로 재희석 하였으며 \(20\)\( \mu \mathrm{L} \)를 효소 활성 반응액 \(180\) \( \mu \mathrm{L} \) 과 흔합하여 \(30\)초 간격 \(60\)분 동안 \(550\)\( \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. COX 활성은 \( \mathrm{ Unit/mg } \) 단위로 표현하였으며, \(1\)\( \mathrm{ Unit } \)은 \(1\)\( \mu \mathrm{mole} \) 의 환원된 cytochrome c가 \(1\)분당 산화되는 것으로 정의하였으며 이때 조건은 상온, \( \mathrm{pH} \) \(7.4\)였다. 결과는 SPSS 통계 프로그램을 사용하여 One-way ANOVA 및 Tukey test 통계처리 하였다.</p>
에릴포메니트 훈증 처리 후 약충을 영하 70도에 보관하고 효소 희석 용액을 넣고 따뜻한 물에 유지한 채로 균질화 한 것이 맞습니까?
NO