<h2>결과 및 고찰</h2><p>산복사나무 열매를 \( 80 \% \mathrm{MeOH} \) 로 추출하여 얻어진 추출물에 대하여 용매의 극성에 따라 \(\mathrm{EtOAc}\), \(\mathrm{n-BuOH}\) 및 물로 순차 분획하고, 각 분획을 감압 농축하여 \( 3 \)개의 분획을 얻었다. \(3\)개의 분획 중 \( \mathrm{EtOAc} \) 분획으로부터 \( \mathrm{SiO}_{2} \) 과 ODS c.c.를 반복 실시하여, \(3\)종의 화합물을 분리하였다.</p><p>화합물 \( 1 \) (white powder)은 EI/MS에서 \( m / z 456[\mathrm{M}]^{+} \)의 분 자이온 peak가 관측되어 분자량을 \(456\)으로 결정하였다. IR 스펙트럼으로부터 수산기 \( \left(3360 \mathrm{~cm}^{-1}\right) \), carboxyl 기 \( \left(1732 \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 그리고 이중결합 \( \left(1521 \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 의 작용기를 갖는 것으로 확인되었다. \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR}\left(400 \mathrm{MHz}\right. \), pyridine- \( \left.d_{5}\right) \) spectrum에서 olefin methine proton signal \( \left(\delta_{\mathrm{H}} 5.47,1 \mathrm{H}\right. \), br.s, \( \left.\mathrm{H}-12\right) \) 과 oxygenated-methine proton signal \( \left(\delta_{\mathrm{H}} 3.45,1 \mathrm{H}, \mathrm{dd}, J=9.6,5.4 \mathrm{~Hz}, \mathrm{H}-3\right) \) 이 각각 \(1\) 개씩 관측되었다. 고자장 영역에서 \(5\) 개의 singlet methyl proton signal \( \left(\delta_{\mathrm{H}} 1.22,3 \mathrm{H}, \mathrm{s}, \mathrm{H}-23 ; 1.22,3 \mathrm{H}, \mathrm{s}, \mathrm{H}-27 ; 1.04,3 \mathrm{H}\right. \), \( \mathrm{s}, \mathrm{H}-26 ; 1.00,3 \mathrm{H}, \mathrm{s}, \mathrm{H}-24 ; 0.89,3 \mathrm{H}, \mathrm{s}, \mathrm{H}-25) \) 과 \(2\) 개의 doublet methyl proton signal \( \left(\delta_{\mathrm{H}} 1.00,3 \mathrm{H}, \mathrm{d}, J=6.0 \mathrm{~Hz}\right. \), \( \mathrm{H}-29 ; 0.96,3 \mathrm{H}, \mathrm{d}, J=6.4 \mathrm{~Hz}, \mathrm{H}-30) \) 이 관측되었다. 또한 \( \delta_{\mathrm{H}} \)<p>\( 2.63\)-\(0.84\)에서 다수의 methine과 methylene proton signal이 관측되었다. 이를 종합하여 화합물 \(1\) 을 이중결합 \(1\) 개를 가진 ursane 골격의 triterpenoid로 예측하였다. \( { }^{13} \mathrm{C}-\mathrm{NMR}(100 \mathrm{MHz} \), pyridine- \( d_{5} \) ) spectrum에서 \( 30 \) 개의 탄소가 관측되어 triterpenoid 골격의 화합물임이 확인되었다. 저자장 영역에서는 carboxyl carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}} 179.9, \mathrm{C}-28\right) \), olefin quaternary carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}}\right. \) \( 139.3\), C-\(13\))과 olefin methine carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}} 125.7\right. \), \( \mathrm{C}-12 \) )이 각각 한 개씩 관측되었으며, 수산기 영역에서도 한 개의 oxygenated-methine carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}} 78.2, \mathrm{C}-3\right) \) 이 관측되었다. 또한 고자장 영역에서 quaternary carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}}\right. \) \(48.1\), C-\(17\); \(42.6\), C-\(14\); \(40.0\), C-\(8\); \(39.4\), C-\(4\); \(37.3\), C-\(10\))과 methine carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}} 55.9, \mathrm{C}-5 ; 53.6, \mathrm{C}-18 ; 48.1, \mathrm{C}-9\right. \); \( 39.5, \mathrm{C}-19 ; 39.4, \mathrm{C}-20) \) 이 각각 5 개씩 관측되었고, 이 밖에도, \(9\) 개의 methylene carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}} 39.2, \mathrm{C}-1 ; 37.5, \mathrm{C}-22\right. \); \( 33.6\), C-\(7\); \(31.1\), C-\(21\); \(28.7\), C-\(15\); \(28.1\), C-\(2\); \(24.9\), C-\(16\); \(23.7\), C-\(11\); \(18.8\), C-\(6\))과 7개의 methyl carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}}\right. \) \( 28.8 \), C-\(23\); \(23.9\), C-\(27\); \(21.4\), C-\(30\); \(17.5\), C-\(26\); \(17.5\), C-\(29\); \( 16.5, \mathrm{C}-24 ; 15.7, \mathrm{C}-25 \) )이 관측되었다. 이를 종합하여 문헌과 비교한 결과, 화합물 \(1\)은 ursolic acid 로 동정하였다.</p><p>화합물 \( 2 \) (white powder)는 EI/MS에서 \( m / z 472[\mathrm{M}]^{+} \)의 분자이온 peak가 관측되어 분자량을 \(472\)으로 결정하였다. 이는 화합물 \(1\) 보다 \( m / z \) 16이 큰 값으로, 화합물 \( 1 \) 에 산소 한 개가 더 있는 구조임을 예상하였다. IR 스펙트럼으로부터 수산기(\(3404\) \( \left.\mathrm{cm}^{-1}\right) \), carboxyl기 \( \left(1722 \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 그리고 이중결합 \( \left(1658 \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 의 작용기를 갖는 것으로 확인되었다. \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR} \) 및 \( { }^{13} \mathrm{C}-\mathrm{NMR} \) data 에서 화합물 \(1\) 과 매우 비슷한 양상의 signal이 관측되었다. 다른 점은 \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR}\left(400 \mathrm{MHz}\right. \), pyridine- \( \left.d_{5}, \delta_{\mathrm{H}}\right) \) spectrum에서 oxygenated-methine 유래의 signal \( \left(\delta_{\mathrm{H}} 4.07,1 \mathrm{H}\right. \), ddd, \( J= \) \( \left.11.2,9.6,5.2 \mathrm{~Hz}, \mathrm{H}-2 ; \delta_{\mathrm{C}} 68.7, \mathrm{C}-2\right) \) 이 추가로 관측되었다. 따라서, 화합물 \(2\) 는 ursolic acid의 \(2\) 번 위치의 methylene기가 oxygenated-methine기로 치환된 corosolic acid로 구조농정 하였고, 문헌과 비교하여 그 구조를 확인하였다.</p><p>화합물 \(3\) (colorless needles)은 EI/MS에서 \( m / z 426[\mathrm{M}]^{+} \)의 분자이온 peak가 관측되어 분자량을 \(426\)로 결정하였다. IR 스펙트럼으로부터 수산기 \( \left(3450 \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 와 이중결합 \( \left(1661 \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 의 작용기를 갖는 것으로 확인되었다. \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR} \) 및 \( { }^{13} \mathrm{C}-\mathrm{NMR} \) 에서 화합물 \(1\) 과 비교하였을 때, carboxyl기는 관측되지 않았으며, methyl 유래의 signal \( \left(\delta_{\mathrm{H}} 0.87,3 \mathrm{H}, \mathrm{s}, \mathrm{H}-28\right. \); \( \left.\delta_{\mathrm{C}} 28.9, \mathrm{C}-28\right) \) 이 추가로 관측되었다. 따라서, 화합물 \(3\)는 ursolic acid의 \(28\) 번 위치의 carboxyl기가 methyl기로 치환된 \( \alpha \)-amyrin으로 구조동정 하였고, 문헌과 비교하여 그 구조를 확인하였다. 분리된 \(3\)종의 화합물은 모두 ursane 골격의 triterpenoid로 자연계에 널리 존재하며 그들의 생물학적, 약학적 활성이 다양한 특징을 포괄하며 발견되고 있다. Ursolic acid (\( 1 \))와 corosolic acid (\( 2 \))는 인간의 종양세포에 대한 세포독성이 보고 되었으며, \( \alpha \)-amyrin (\( 3 \)) 은 항염 활성이 보고 되어 있다. 이와 같은 결과를 통해 산복사나무 열매의 기능성 소재로서의 가능성을 확인하였으며 추후 이의 활용과 관련된 연구를 모색하고자 한다.</p>
화합물 1은 이중결합이 존재하나요?
YES