<h1>재료 및 방법</h1><h2>추출물의 조제</h2><p>숙지황 추출액은 숙지황 \( 1 \mathrm{~g} \)을 물과 ethanol을 \( 0 \sim 100 \% \) 로 변화시키며 \( 100\mathrm{ml} \)를 첨가하여 shaking incubator (SI-600R, Lab Companion, Korea)에서 24시간 동안 상온에서 \( 150 \mathrm{rpm} \)으로 용매별 추출을 시행하였으며, 추출 후 추출액은 \( 10,000\mathrm{rpm} \)에서 15분간 원심분리(Himac CR-21E, Hitachi, Japan)하고 Whatman No. 1 filter paper로 여과하여 여액을 시료로 사용하였다.</p><h2>Phenolic compound의 정량</h2><p>시료 \( 1 \mathrm{ml} \)에 \( 95 \% \) ethanol \( 1 \mathrm{ml} \)와 증류수 \( 5 \mathrm{ml} \)를 첨가하고 \( 1 \mathrm{~N} \) Folin-ciocalteu reagent \( 0.5 \mathrm{ml} \)를 넣어 잘 섞어주고, 5분간 방치한 후, \( 5 \%\) \(\mathrm{Na}_{2}\) \(\mathrm{CO}_{3}\) \(1 \mathrm{ml} \)를 가한 후, 흡광도 \( 725 \mathrm{~nm} \)에서 1시간 이내에 측정하여 gallic acid를 이용한 표준곡선으로 양을 환산하였다.</p><h2>항산화 효과 측정</h2><p>DPPH radical에 대한 소거활성은 Blios의 방법에 준하여 측정하였으며, 전자공여능(\(\%\))은 1-(반응구의 흡광도/대조구의 흡광도) \( \times 100 \) 으로 나타내었다. ABTS radical cation de-colorization (ABTS)의 측정은 Pellegrin 등의 방법에 의해 측정하였고, 저해율(\(\%\))은 1-(반응구의 흡광도/대조구의 흡광도)\(\times 100\) 으로 나타내었다. Antioxidant protection factor (PF)는 Andarwulan과 Shetty의 방법으로 측정하였으며, PF는 반응구의 흡광도/대조구의 비로 나타내었다. Thiobarbituric acid reactive substance (TBARs) 측정은 Burge와 Aust의 방법에 따라 측정하여 저해율(\(\%\))은 1-(반응구의 TBARs \( \mu\mathrm{M} \) /대조구의 TBARs \( \mu \mathrm{M}) \times 100 \)으로 나타내었다.</p><h2>항고혈압 효과 측정</h2><p>Angiotensin converting enzyme (ACE) 저해효과 측정은 Cushman 등의 방법에 의하여 행하였다. 즉, 반응구는 \( 0.3 \) \( \mathrm{M}\) \(\mathrm{NaCl} \) 을 함유하는 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate buffer \( (\mathrm{pH}8.3) \)에 기질로 \( 2.5 \mathrm{mM} \) hippuryl-histidyl-leucine 용액 \( 0.15 \mathrm{ml} \) 를 혼합하였으며, 대조구는 추출액 대신 동일 buffer \( 0.1 \mathrm{ml} \) 를 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30 분간 반응시키고 \( 1 \mathrm{~N}\) \(\mathrm{HCl}\) \(0.35 \mathrm{ml} \) 첨가로 반응을 중지시킨 뒤 \( 3 \mathrm{~ml}\) 의 EtOAc 를 첨가하였다. EtOAc층만을 취한 다음 용매를 증류시킨 잔사에 \( 2 \mathrm{ml} \) 의 증류수를 첨가하여 효소에 의해 기질로부터 분리되어 추출된 hippuric acid를 \( 280 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정한 후 표준곡선에서 양을 환산하여 아래의 식에 의해 저해율을 계산하였다. 저해율(\(\%\))은 1-(반응구의 hippuric acid 생성량/대조구의 hippuric acid 생성량) \( \times 100 \)으로 나타내었다.</p>
본 실험에서 숙지황 추출액을 몇 분간 원심분리를 하였는가?
15분