<h1>재료 및 방법</h1><h2>재료의 추출 및 분획</h2><p>건조된 상태로 구입한 금은화 \(200\mathrm{~g} \) 에 1\( \mathrm{liter} \)의 메탄올을 가하여 상온에서 24 시간씩 교반하면서 3 회 반복 추출한 후, 여과시켜 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조(Oilbath, Switzerland)에서 회전 감압농축기(Rotavapor, Switzerland)로 감압하여 메탄올 추출물 \( 20.97\mathrm{g} \) 을 얻었다. 메탄올 추출물, 증류수 그리고 헥산 \( (n \)-thex-ane)을 1:9:10의 비율로 흔합하여 물 층과 분획 용매가 두 층으로 나뉘도록 방치하여 3회 분획된 헥산 가용부를 감압 농축하여 헥산 분획 \( 0.176\mathrm{~g} \) 을 얻었다. 계속하여 잔류층인 물 층을 클로르포름(chroloform, \( \mathrm{CHCl}_{3} \) ), 에틸 아세테이트(ethyl ace-tate, \( \mathrm{EtOAc} \)), 부탄올(n-butanol, \( \mathrm{n-BuOH} \)), 물(water) 순으로 각각 3 회씩 용매의 극성을 이용한 순차적 분획으로 \( 0.392 \mathrm{g} \), \( 2.892 \mathrm{g}\), \(6.185 \mathrm{~g} \) 그리고 \( 3.762\mathrm{~g} \) 의 분획물 각각을 얻었다.</p><h2>세포배양</h2><p>생쥐 대식 세포주(Raw 264.7)를 한국세포주은행(Korea cell line bank, Seoul, Korea)에서 분양 받아 \( 10 \% \) fetal bovine se-rum (FBS)와 \( 1 \% \) 항생제(streptomycin/penicillin)가 포함된 Dulbecco's modified eagle's medium (DMEM; Sigma-Aldrich, USA) 배지를 사용하여 \(37 ^{\circ} \mathrm{C} \) 로 유지되는 \( 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) 배양기에서 배양하였다. 실험 시 배지를 제거하고 PBS로 3회 세척 후 \( 0.25 \% \) trypsin-EDTA를 처리하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, \mathrm{CO}_{2} \) 배양기에서 5 분 동안 반응 후에 DMEM 배지를 넣어 효소를 불활성시키고 \( 15 \mathrm{ml} \) conical tube로 옮긴 후 \(800 \mathrm{rpm} \) 에서 2 분 동안 원심분리하여 세포를 수확하였다. 이어서 새로운 DMEM 배지로 재 부유하여 tryphan blue로 염색하여 세포수를 \( 1 \times 10^{6} \) \(\mathrm{cell/ml}\)로 조절하여 사용하였다.</p><h2>DPPH 자유라디칼 소거활성</h2><p>금은화의 메탄올 추출에 의한 극성별 분획의 항산화 활성은 DPPH (1,1-dipheyl-2-picyl-hydrazyl)의 자유라디칼 소거효과 (free radical scavenging effect)를 측정하는 Blois 의 방법에 따라 측정하였다. 메탄올에 녹인 \( 0.2 \mathrm{mM} \mathrm{DPPH} \) 용액 \( 900 \mu 1 \) 에 메탄올에 용해시킨 각 분획의 농도별 시료 \( 100 \mathrm{pl} \) 를 혼합하여 실온에서 30 분 동안 암실에서 방치 후 \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조물로는 BHA을 사용하였고, 시료의 전자공여능(electron donating ability, EDA)은 다음의 식으로 계산하였다.</p><ul><li>\( \operatorname{EDA}(\%)=(1-\mathrm{A} / \mathrm{B}) \times 100 \)</li><li>A: \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서의 시료첨가구의 흡광도</li><li>B: \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서의 무첨가구의 흡광도</p></li></ul><p>각 분획의 EDA(%) 값을 바탕으로 흡광도를 \( 50 \% \) 감소시키는데 필요한 시료의 양 \( \mathrm{ED}_{50}(\mathrm{\mu g} / \mathrm{ml}) \) 을 구하고, BHA와 비교하여 항산화 활성을 검정하였다.</p>
생쥐 대식 세포주는 어디에서 분양 받아?
한국세포주은행