<p>지방생성 기작에 대한 기능적 실험을 통하여 약 \( 50 \% \) 정도의 지방생성 억제를 확인한 다음이 세포군을 이용하여 에스트로겐 유전자를 비롯한 관련 유전자가 어느 정도 영향을 끼쳤는지를 검토하기 위하여 두 실험 세포군로부터 mRNA를 분리하였으며 cDNA를 통하여 RT-PCR를 수행한 결과, 정상적인 세포군에 비하여 에스트로겐의 발현이 억제됨을 확인할 수 있었다. 그러나 실험가설과는 달리 그리 큰 차이를 보이지 않았다. 인슐린 유전자의 경우 발현양이 siRNA 유전자 전이시킨 실험군이 대조구에 비하여 더 높게 발현됨이 관찰 되었으며, PPAR1의 경우에는 예상했던 결과가 나타났다. 주로 인슐린의 경우 당을 통하여 지방생성과 연관되어 있는 물질로 알려져 있으며 인슐린 저항성 당뇨병 또한 성인이 나이가 먹어가면서 식이조절 및 과당 과다 섭취 등의 원인으로 이 당성분이 지방생성에 영향을 끼치면서 복부의 지방생성에 직접적인 영향이 되고 있는 것으로 나타났다. 그러므로 본 실험에서 밝혀진 결과를 토대로 세포 내 아로마테이즈의 발현 억제와 인슐린 과발현과의 상관관계는 앞으로 충분하게 검토 해 볼만한결과라 사료된다. 이 실험 결과에 따라서 실제 비만 시 당뇨병 조절과 관련성을 검증하기 위하여 분화 조건을 달리한 다음, 분화 효율 및 관련 유전자의 발현 형태를 살펴보았다. 실제 비만과 관련성을 검증하기 위하여 분화 유도의 조건을 달리하여 분화 유도 효율에 따른 관련 유전자의 발현 양상을 살펴보았다. Figure 3의 연구 결과는 4가지 다른 조건의 분화 유도물질(조건1: Insulin\(+\)Dexamethasone\(+\)IBMX; 조건2: Insulin; 조건3: Dexamethasone; 조건4: IBMX)을 배양액에 각각 첨가하여 분화를 유도하고 이 유도 물질의 차이에 의한 결과를 분석하였다. 그림에서 보는바와 같이 5번의 경우는 대조구이며 본 실험에서 RT-PCR 분석을 위하여 사용된 유전자는 GLUT4, Leptin, Insulin, PPAR1이며, 이 유전자들을 이용하여 발현율을 비교 분석하였다. 특징적으로 대조구에서 각 유도물질에 의하여 나타난 변화는 조건3의 dexamethasone만 처리하였을 때 다른 조건과 달리 Leptin의 발현율이 매우 높게 나타나고 있음을 볼 수 있었다. Leptin의 발현비율에 따라서 상대적으로 PPAR1의 발현비율이 증가함을 관찰할 수 있었다. 이와 반면에 실험군에서는 siRNA 실험에서 모든 조건에서 Leptin의 발현은 억제된 것으로 나타났다. 이 실험결과를 검증하기 위하여 분화된 지방세포를 Oil-red O를 통하여 염색한 후 살펴 본 결과 PCR 결과와 유사한 패턴을 보이고 있음을 확인하였다. 그러나 실험구와 대조구에서 본 것처럼 두 실험에서의 주요한 차이점은 siRNA를 통하여 Leptin의 유전자가 완벽하게 제어되고 있다는 사실이다. 이는 아마도 에스트로겐의 기능과 관련된 비만관련 유전자들이 여러 가지 신호전달 체계에서 서로 영향을 끼침으로써 표현된 것으로 판단된다.</p>
cDNA를 어떤 실험 방식으로 관찰했나요?
RT-PCR