<h1>재료 및 방법</h1><h2>시약 및 초자</h2><p>시험대상 농약 metalaxyl \( (99.2 \%) \) 의 표준품은 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서 구입 후 사용하였다. 유기용매 acetonitrile과 methanol은 J.T Baker (Center Valley, PA, USA)에서, acetone, dichloromethane, \( n \)-hexane 및 ammonium formate \( (\geq 97 \%) \) 는 Daejung Chemicals \& Metals (Siheung,Republic of Korea)에서, magnesium sulfate 및 sodium chloride은 Junsei chemical (Tokyo, Japan)에서 구매하였다. 정제에 사용된 \( \mathrm{SPE}\)-\( \mathrm{NH}_{2} \) cartridge \( (1 \mathrm{~g}\), \(6 \mathrm{cc}) \) 는 Waters Co.(Milford, MA, USA)사로부터 구입하여 사용하였고, dispersive-solid phase extraction (d-SPE) 시약 키트 Part No. \( 5982\)-\(4921\), \(5982\)-\(5021\), \(5982\)-\(5121\), \( 5981\)-\( 5321 \)은 Agilent technology(Santa Clara, CA, USA)로부터, Part No. \( 55417\)-U은 Supelco(St. Louis, MO, USA)에서 구매하였으며 Table \( 1 \)과 같다. 진탕 추출을 위해 고속 진탕추출기(\( 2010 \)/Grinder, SPEX \( { }^{Ⓡ} \) Sample Prep, Metuchen, NJ, USA)를 이용하였고, 원심분리를 위해 고속 원심분리기(Combo-\( 408 \), Hanil Science Inc., Gimpo, Republic of Korea)를 사용하였다.</p><h2>생약 시료</h2><p>생약의 재배 및 생산지, 재배시기, 품종 등의 차이로 유효성분 및 불순물의 종류 및 양적 차이가 발생하는 등 생약의 동질성 및 균질성에 문제가 발생한다. 따라서, 본 연구에 사용될 생약은 시중 의약품 규격에 맞는 유통품을 구매하여 연구에 시용하기 이전에 시료의 적합성 여부를 검증한 후 진행하였다. 생약 적합품 판단은 한약재 관능검사 기준에 따르며 추친된 전문가의 검증을 받은 후 적합품일 경우에 본 연구의 시료로 시용하도록 하였다. 분쇄기를 이용하여 균질화하였고, 균질화된 약재는 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \) 냉동고에서 보관하여 실험할 때마다 사용하였다.</p><h2>표준용액 조제 및 보관</h2><p>Metalaxyl의 stock solution은 용해도가 높은 acetonitrile을 이용하여 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 을 조제하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 냉장고에 보관하였다. Stock solution을 acetonitrile로 추가 희석하여 working solution \( 0.005-0.25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 을 조제한 후, 각 농도별 \( 200 \mu \mathrm{L} \) 를 취한 후 무처리구 시험용액 \( 800 \mu \mathrm{L} \) 를 첨가하여 matrix-matched calibration 표준용액을 조제하였다.</p><h2>HPLC-MS/MS 기기분석</h2><p>Metalaxyl을 분석하기 위해 액체크로마도그래피 Nanospace SI-\( 2 \) HPLC (Shiseido Co., Tokyo, Japan)와 질량분석기 TSQ Quantum Ultra (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA)를 이용하였다. 칼럼은 Unison UK-C8 \( (150 \mathrm{~mm} \times 2.0 \) \( \mathrm{mm}\), \(3.0 \mu \mathrm{m} \), Imtakt, Portland, OR, USA)을 사용하였고 칼럼 온도는 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 이었으며 시료주입량은 \( 2 \mu \mathrm{L} \) 였고 유속은 \( 0.2 \mathrm{~mL} \) \( \mathrm{min} \) 이었다. 이동상 \( \mathrm{A} \) 는 \( 10 \mathrm{mM} \) ammonium formate가 함유된 methanol, 이동상 \( \mathrm{B} \) 는 \( 10 \mathrm{mM} \) ammonium formate가 함유된 water을 사용하였다. gradient 조건으로 이동상 \( A \) 를 \( 20 \% \) 로 시작하여 \( 4 \)분까지 유지하고 이후로 \( 70 \% \) 로 바꿔 \( 15 \)분까지 유지한 후 \( 16 \)분에 \( 20 \% \) 로 바꿔 \( 24 \)분까지 유지하였다. 질량분석기의 이온화방식은 ESI positive mode이며 source parameter는 다음과 같다; spray voltage \( 4000 \mathrm{~V} \), capillary temperature \( 350^{\circ} \mathrm{C} \), vaporizer temperature \( 270^{\circ} \mathrm{C} \), sheath gas pressure \( 25 \) \(\mathrm{Arb} \), aux gas pressure \( 20 \mathrm{Arb} \). 그리고 metalaxyl의 전구이온 \( \left[\mathrm{M}+\mathrm{H}^{+}\right. \) 는 \( \mathrm{m} / \mathrm{z} \) \( 280.1 \) 이었고 조각이온 중 정량이온과 정성이온은 각각 \( \mathrm{m} / \mathrm{z} \) \( 220.1 \) (collision energy; CE \( 13 \)V) 및 \( 192.1 \)(CE \( 17 \)V)를 선택하였다.</p>
본 연구에 사용될 생약을 시료의 적합성 여부를 검증한 후 진행한 이유는 무엇인가요?
생약의 재배 및 생산지, 재배시기, 품종 등의 차이로 유효성분 및 불순물의 종류 및 양적 차이가 발생하는 등 생약의 동질성 및 균질성에 문제가 발생