<h1>결과 및 고찰</h1><h2>세포독성 평가</h2><p>알로에 가공 부산물 착즙 추출물과 믹서 추출물의 지방 세포 분화 억제 효과를 조사하기에 앞서 세포 독성 유무를 MTT assay를 통하여 조사하였다. 세포독성은 세포의 생존율이 낮을수록 시료의 잠재적인 세포독성이 높아지는데 본 실험에서는 세포 생존율이 \( 80 \% \) 미만으로 감소하는 경우 세포독성이 있는 것으로 판단하였다. 추출물을 \(0\), \(1\), \(2\), \(4\), \(6\), \(8\), \(10 \% \) 농도별로 \(3\)T\(3\)-L\(1\)세포에 처리하여 조사한 결과, 모든 처리구에서 세포 독성이 없는 것으로 확인되었다(Fig. \(1\)).</p><h2>\(3\)T\(3\)-L\(1\) 지방 전구세포 분화 억제 효과</h2><p>알로에 가공 부산물 추출물의 체지방 감소능을 조사하기 위해 서 \(3\)T\(3\)-L\(1\) 지방세포 배양 시 추출물을 \( 2 \% \) 농도로 첨가하여 \(3\)T\(3\)-L\(1\) 지방세포 분화 억제능을 ORO염색법으로 확인하였다 (Fig. \(2\)A). 착즙 추출물을 첨가하여 배양하였을 경우에는 대조구와 비교하여 체지방 감소 효과를 보이지 않았으나, 믹서 추출물을 첨가하여 지방세포를 배양하였을 경우에는 지방 전구세포인 \(3\)T\(3\)-L\(1\) 세포의 분화율이 \( 70.87 \% \)로 억제하는 것을 확인하였다(Fig. \(2\)B). 대두 가공 부산물을 이용한 지방세포 분화억제 결과에서도 두유 및 순물 추출물에서 농도 의존적으로 분화억제 효과가 있음을 확인하였다. 이는 알로에 믹서 추출물이 비만 세포로의 분화를 억제시키는 효과를 가지고 있음을 나타낸다.</p><h2>Hyaluronic acid (HA) 생성량 분석</h2><p>위의 \(3\)T\(3\)-L\(1\) 지방 전구세포 분화 억제 효과 결과에서 믹서 추출물에서 지방세포 분화가 억제되는 것이 확인되어 HA 생성량 조사는 믹서 추출물을 이용하여 수행하였다. 먼저 본 실험에 사용되는 피부 각질 형성세포(HaCaT)에 믹서 추출물이 세포 독성을 나타내는지를 WST assay로 확인하였다. 믹서추출물의 함량을 \(0.63\), \(1.25\), \(2.5\), \(5.0\), \(10.0 \) 및 \( 20.0 \% \)로 첨가하였을 때 \( 0.63 \sim 10.0 \% \)에서는 세포독성이 나타나지 않았으나 \( 20.0 \% \)에서는 세포 독성이 있는 것으로 확인되었다(Fig. \( 3 \)A). 세포 독성의 결과를 바탕으로 믹서 추출물을 각각 \( 2.5, 5.0 \) 및 \( 10.0 \% \)가 되도록 피부 각질 형성세포(HaCaT)에 첨가하여 배양 후 HA의 생성량을 조사하였다. 그 결과, 믹서 추출물을 첨가하지 않은 대조구와 비교하였을 때 믹서 추출믈의 농도가 높아질수록 HA의 생성량이 증가하는 것을 확인하였다(Fig. \(3\)B). 이는 알로에 가공 부산물 믹서 추출물이 피부 보습에 유효한 물질을 함유하고 있다는 것을 나타낸다.</p><h2>Tyrosinase 저해 활성 분석</h2><p>피부가 자외선에 노출되면 멜라닌 세포내의 tyrosine이 tyrosinase의 생합성 작용으로 산화 반응을 일으켜 멜라닌을 생성하며 과잉 생산된 멜라닌은 피부에 기미, 주근깨 등의 색소 침착을 일으키게 된다. 멜라닌 생성의 효소인 tyrosinase 효소 자체를 억제하면 미백효과를 기대할 수 있다. 믹서 추출물이 tyrosinase 저해활성이 있는지를 알아보기 위해서 tyrosinase 효소 작용에 의해 생성되는 DOPA 생성물을 측정하는 방법으로 조사하였다. 믹서 추출물의 농도가 \( 1 \mathrm{~mg} / \mathrm{mL} \)에서는 \( 8.34 \pm 0.89 \%\), \(2 \mathrm{~mg} / \mathrm{mL} \)에 서는 \( 28.70 \pm 1.30 \% \), 그리고 \( 4 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \)에서는 \( 32.18 \pm 1.41 \% \)로 추출물 농도 의존적으로 tyrosinase 저해 활성이 나타나는 것을 확인하였다(Fig. \(4\)). Choi 등은 천연 미백소재 탐색을 위해서 율무 부산물 추출물울 이용하여 tyrosinase 저해활성을 조사한 결과, 율무 뿌리 추출물에서 tyrosinase 저해활성을 확인하였다. Maisuthisakul과 Gordon의 연구에서는 망고 종자 에탄올 추출물에서 높은 tyrosinase 저해활성을 나타내는 것을 확인하였다.</p>
세포독성평가를 위해 시행한 시험법은 무엇인가?
MTT assay