<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>실험재료의 꾸지뽕나무 수피는 1999년 5월 경남 김해시 근교의 야산에서 직접 채취하였다. 채취한 시료는 음지에서 잘 건조시켜 잘게 자른 후 10 배량의 증류수로 수조상에서 3시간 추출을 2회 반복 실시하여 혼합한 용액을 진공 농축한 후 \( -80^{\circ} \mathrm{C} \) 동결건조기에서 동결건조 시켜 수용성 추출물을 얻어 동물실험에 사용하였다.</p><h2>실험동물, 사육조건 및 식이 조성</h2><p>실험동물로서는 4 주령의 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 스테인레스 개별 케이지에 한 마리씩 넣어 사육실 온도 \( 22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 50 \pm 5 \% \), 명암주기 12시간 (명주기: 07:00~19:00)이 자동 설정된 동물 사육실에서 사육하였다. 본 실험의 식이 조성은 Table 1 과 같다. 즉, 꾸지뽕나무 수피 추출물은 콜레스테롤을 함유한 대조군 식이(Control군)에 \( 0.5 \% \) 수준으로 첨가하여 꾸지뽕나무 수피 수용성 추출물 첨가군(CTSB군)으로 하였다. 대조군 식이로 3일간 적응시킨 후 평균 체중이 동일하도록 군당 6마리씩 나누고, 식이와 옴료수(탈이온수)를 14일간 자유급여 시켰다. 사육 기간 중 식이 섭취량은 매일 측정하고, 체중은 이틀에 한번씩 측정하여 기록하였다.</p><h2>분석시료의 조제</h2><p>실험 최종일 실험동물을 8시간 절식시킨 후 에테르로 가볍게 마취시켜 복부 대동맥으로부터 채혈하여 탈혈사 시켰다. 이때 얻어진 혈액은 약 30분간 실온에서 방치시킨 후 \( 3,000 \mathrm{~rpm} \) 으로 15분간 원심분리하여 혈청을 분리하였으며, 분리된 혈청으로부터 지질농도를 측정하였다. 간장 조직은 적출 한 후 주사위를 이용하여 냉각된 생리식염수로 충분히 관류하여 탈혈시키고 물기를 제거한 다음 조직 무게를 측정하고, \( -80^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 보존하면서 실험분석에 제공하였다.</p><h2>혈청지질 및 간장 지질 분석</h2><p>혈청 총 콜레스테롤은 Cholesterol C-test kit(Wako Junyaku, Osaka, Japan), 혈청 HDL-cholesterol은 HDL-cholesterol E-test kit(Wako Junyaku, Osaka, Japan), 혈청 triglyceride는 Triglyceride E-test kit(Wako Junyaku, Osaka, Japan), 혈청 인지질은 Phospholipid C-test kit(Wako Junyaku, Osaka, Japan), 혈청 glucose 농도는 glucose oxidase 법에 따라 조제된 시판 kit(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용하여 측정하였다. 간장 총 지질은 Folch 등의 방법에 따라 추출하였다. 간장 중성지질 농도는 Triglyceride E-test kit(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용하여 GPO-DAOS법에 의하여 측정하였다. 간장 총 콜레스테롤은 Cholesterol C-test kit(Wako Junyaku, Osaka, Japan) 를 이용하여 cholesterol oxidase-DAOS법으로 측정하였다. 간장 인지질 농도는 Bartlett의 방법으로 정량하였다.</p><h2>간장 및 혈청의 지질 과산화물 정량</h2><p>실험 최종일 8시간 절식시칸 동물에서 적출 한 간장을 일정량 취하여 \( 1.15 \% \) \( \mathrm{KCl} \)-\( 10 \mathrm{~mM} \) phosphate buffer (\( \mathrm{pH~} 7.4 \))를 첨가한 후 균질화 시켜 homogenate 분획으로 하여, 간장 조직의 지질 과산화물 함량은 전보의 방법에 준하여 정량하였다. 즉, 각 조직 \( 0.1 \mathrm{~ml} \) 에 증류수 \( 0.9 \mathrm{~ml} \) 를 첨가한 용액 \( 1 \mathrm{~ml} \) 에 thiobarbituric acid(TBA) 시약 \( 2 \mathrm{~ml} \) 을 가하여 잘 혼합하고, 끓는물에서 30분간 가열한 후 족시 실온에서 방냉 하였다. 이 반응액을 \( 3,000 \mathrm{~rpm} \) 에서 10분간 원심분리 한 후 상등액을 흡광도 \( 535 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였다. 혈청중의 과산화지질 함량은 혈청 과산화지질 측정 kit (Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용하여 thiobarbituric acid 와 반응하는 물질을 butanol로 추출한 후 비색법으로 측정하였다. 간장 및 혈청 중의 지질 과산화물 함량은 malondialdehyde 를 \( \mathrm{nmol} / \mathrm{g} \) 및 \( \mathrm{nmol} / \mathrm{ml} \) 로 각각 나타내었다.</p><h2>비헴철 및 아연 함량 측정</h2><p>간장의 비헴철 및 아연 함량 측정은 Woo와 Ryu의 방법에 따라 전처리 한 후 원자홉수 분광분석기(Perkin Elmer AAnalyst 300, U.S.A.)로 측정하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>실험으로부터 얻어진 결과치는 평균치와 표준오차(mean \( \pm \) S.E.)로 표시하고, 유의성 검정은 Student's t-test로 하였다.</p>
채취한 시료는 건조 후 어떻게 하였는가?
잘게 자른 후 10 배량의 증류수로 수조상에서 3시간 추출을 2회 반복 실시하여 혼합한 용액을 진공 농축한 후 \( -80^{\circ} \mathrm{C} \) 동결건조기에서 동결건조 시켜 수용성 추출물을 얻어