<h1>결과 및 고찰</h1><p>NIH3T3 세포에 적당한 상해를 입히기 위하여 MMS의 농도별 실험을 통하여 얻은 결과 \( 1 \mathrm{mM}\), 1시간동안 처리하면 세포독성이 약 \(15\%\) 정도의 세포생존률을 감소시킴을 MTT 분석을 통해서 알 수 있었고(data not shown), 그리고 정상 배지(GM, growth medium)로 교환 후 6시간동안 배양했을 때 \( 28 \% \)정도의 세포생존률이 감소됨이 관찰되었다. 반면에 소목추출물 만을 농도별로 처리하면 정상세포의 세포생존률과의 차이가 나지 않는 것으로 봐서 최고 농도인 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서도 소목추출물 자체적인 세포독성은 존재하지 않음을 알 수 있고, MMS를 처리한 세포군에 소목추출물을 처리하고 6시간동안 배양하면 세포생존률이 소목추출물을 농도별로 처리했을 때 정상배지의 교환시 보다 더 감소됨이 관찰되었고, 특히 소목 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서는 \( 50 \% \) 이상 세포생존률이 감소하였다. 결과적으로 소목추출물 자체적으로는 세포독성이 없으면서 DNA 상해에 대해서는 세포독성을 촉진시켜 세포사멸에 이르게 함을 내포하고 세포고사에 의해서 세포생존률이 감소함이 시사되었다.</p><p>MTT 분석결과를 토대로한 소목추출물의 세포생존률을 세포형태로써 관찰했는데, 이 결과도 Fig. 2와 마찬가지로 소목추출물 자체적인 세포독성은 나타나지 않지만, 세포에 MMS를 선처리한 후에 소목추출물에서는 농도 의존적으로 정상배지에서 교환보다 더 세포독성을 증가시켜 세포사의 촉진시킨 결과를 얻었다. 이러한 현상은 세포가 세포사멸의 형태를 보여줌으로써 알 수 있다. 특히 MMS 선 처리 후의 50과 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 경우 세포막의 blebbing 및 응축 현상에 의해서 세포사멸이 일어남이 관찰되었다.</p><p>또한 세포독성의 증가 촉진 현상이 나타남이 세포고사의 특징적인 현상으로 나타남이 관찰되었다. 정상적인 세포의 경우 AO에 의한 세포는 green색을 띄며 핵의 특징이 정상적으로 관찰되었고, 또한 소목추출물 자체적인 효과는 정상적인 세포와 거의 차이가 나지 않았다. 반면에 세포에 MMS를 선처리한 후에 정상배지에서는 약 \( 30 \% \) 정도의 세포고사 특징의 세포가 관찰되었고, 소목추출물에서는 정상배지에서 보다 더 세포고사의 특징인 orange 색깔을 띄며 핵 응축 현상을 수반하는 세포고사 특징 세포가 증가했음이 관찰되었다. \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서는 선행되었던 MTT 분석이나 세포 형태 분석의 결과보다 더 세포고사의 특징이 현저하게 나타나고 있다.</p><p>Fig. 5에서 보여주는 결과는 소목추출물의 세포독성 증가를 촉진시켜서 세포고사의 촉진이 확실하게 나타남이 DNA fragmentation 결과에서 보여지고 있다. 정상세포와 소목추출물 만을 처리한 세포에서는 DNA에 아무런 이상이 없는 형태로 보여졌다. 그러나, MMS를 선처리한 후 정상배지에서 배양된 세포에서는 약간의 DNA fragmentation이 나타났고, 반면에 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 소목추출물이 처리된 세포에서는 정상배지로 교환된 배지와 비슷한 수준에서 DNA fragmentation이 나타났고 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서는 확실하게 DNA fragmentation이 증가했음을 관찰할 수 있었다. 이러한 결과는 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 소목추출물이 DNA 상해에 의한 세포고사를 촉진함을 알 수 있었다. 이후의 연구에서는 이러한 효과의 구체적인 기작에 대해 규명하고자 한다.</p>
정상 배지로 교환한 후 \( 28 \% \)정도의 세포생존률이 감소하는 것을 확인하기 위해 거쳐야 하는 과정은?
6시간동안 배양