<h1>재료 및 방법</h1><h2>동물 및 처치</h2><p>실험동물로는 (주) 대한바이오링크(충북 음성)로 부터 분양 받은 웅성 Sprague - Dawley계 흰쥐 \( 200 \pm 10 \mathrm{~g} \) 을 본대학 동물사에서 1 주일동안 적응시킨후 일정한 조건(온도: \( 20 \pm 2 \) \( { }^{\circ} \mathrm{C} \), 습도: \( 50 \% \), 명암: 12 시간 light/dark cycle)에서 사육한 후 사용하며, 옻나무의 각분획 및 성분의 투여는 2 주간 전처리하였다, 실험동물은 실험전 24 시간 물만주고 절식 시켰다. 간섬유화 유도는 정상군을 제외한 군의 흰쥐에 Kountras 등의 방법에 따라 담도결찰을 하여 간섬유화를 유도하였다. 본 실험에 사용한 옻나무는 강원도 원주시 일대에서 채집한 옻나무의 목질부를 세절하여 상지대학교 응용식물과 학부에서 계통분리한 후 성분을 IR 및 NMR 등의 방법으로 확인하여 fustin과 sulfuretin으로 명명하였다. 대조약물로서는 ursodeoxycholic acid(UCDA, \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \)) 를 사용하였다.</p><h2>시료의 채취 및 효소원의 분리</h2><p>실험동물을 \( \mathrm{CO}_{2} \) gas로 마취 시킨후 복부정중선을 따라 절개하고 복부대동맥에서 혈액을 채취하였다. 이 혈액을 \( 3000 \mathrm{rpm} \) 에서 10 분간 원심분리하여 생화학적검사에 사용하였다. 간조직은 생리식염수로 관류하여 혈액을 제거한 간을 적출하여 여지로 혈액 및 기타 부착물질을 제거하고 간의 일부는 hydroxyproline 측정 및 지질과산화의 측정을 위하여 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 보관하였으며 나머지 간은 평량한 다음 조직 \( 1 \mathrm{~g} \) 당 4 배량의 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate buffer (\( \mathrm{pH} 7.5 \))를 가하여 glass teflon homogenizer로 마쇄 하였다. 이 마쇄액을 계통분리법에 따라 초원심분리하여 cytosolic 분획 및 microsomal 분획으로 하여 효소원으로 사용하였다. 이상의 모든 조작은 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 이하에서 행하였다.</p><h2>혈청생화학적 검사</h2><p>Aminotansferase (AST, ALT), sorbitol dehydrogenase(SDH), total bilirubin 및 \( \gamma \)-glutamyltransferase (\( \gamma\)-GT) 의 측정은 시중에서 구입한 Sigma제 kit를 사용하였다.</p><h2>조직중의 총 collagen양 측정</h2><p>간조직내 hydroxyproline양은 Jamall 등의 방법에 따라 간조직을 염산으로 가수분해시켜, isopropylacohol을 넣고 chloramine-T로 산화시킨 후 Ehrlich's reagent solution(p-dimethylaminobenzaldehyde)으로 발색시켜 558nm에서 흡광도롤 측정하였다.</p><h2>간조직의 지질과산화 함량 측정</h2><p>Ohkawa등의 방법을 변경하여 간 조직 \( 1 \mathrm{~g} \) 당 4 배량의 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate buffer (\( \mathrm{pH} 7.4\))를 가해 마쇄하고 이 마쇄액에 동일한 buffer를 동량 가하여 3 시간 preincu-bation 시킨 후 \( 8.1 \% \) sodium dodecyl sulfate와 \( 20 \% \) acetate buffer(\( \mathrm{pH} 3.5 \))및 발색의 목적으로 \( 0.8 \% \) thiobarbituric acid를 가한 후 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 동안 반응시켜 실온에서 냉각 후에 \( n \) - \( \mathrm{BuOH} \) : Pyridine(15:1)을 첨가하여 15 분간 원심 분리하여 생성된 홍색의 \( n \) - \( \mathrm{BuOH} \) : pyridine 층을 취하여 파장 \( 532 \mathrm{~nm} \) 에서 그 흡광도를 측정하여 표준곡선에서 그 함량을 간 조직 \( 1 \mathrm{~g} \) 당 malondialdehyde nmole로 표시하였다</p><h2>효소활성 측정</h2><p>Xanthine oxidase의 활성 측정은 Stripe과 Della의 방법, Aldehyde oxidase의 활성 측정은 Rajagopalan 등의 방법, Superoxide dismutase의 활성 측정은 Marklund 등의 방법, Catalase의 활성 측정은 Aebi의 방법 및 Glutathione peroxidase의 활성 측정은 Paglia와 Valentine의 방법에 준하였다.</p><h2>단백질 정량 및 통계처리</h2><p>단백질의 정량은 Lowry 등의 방법에 준하여 bovine serum albumin(Siger, Fr. V) 을 표준품으로 측정하였다. 본 실험에서 얻어진 결과는 평균\( \pm\)표준편차로 표시하였고, 통계적 유의성 검증은 Duncan's multiple range test를 이용하였다.</p>
마쇄액을 초원심분리하는 과정은 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 이상의 온도에서 이루어졌는가?
NO