<h1>결과 및 고찰</h1><h2>HPLC-MS/MS 분석법 확립 및 검증</h2><p>질량분석기 최적화 조건을 확립하기 위해 표준용액을 사용하여 Flow injection analysis분석을 수행하였다. 이온화 방식은 electrospray을 활용하였으며 spray voltage \( 4,000 \)V에서 이온화 하였고 positive 모드에서 분석하였다. ESI positive mode에서는 양성화된 분자이온 \( \left[\mathrm{M}+\mathrm{H}^{+}\right. ]\)을 추가 붕괴시켜 감도 및 선택성이 우수한 \( 2 \)종의 daughter ion인 \( \mathrm{m} / \mathrm{z} 220.1 \) 을 정량이온으로 \( \mathrm{m} / \mathrm{z} \) \( 192.1 \)을 정성이온으로 선정하였다. 해당 분석조건에서 metalaxyl의 기기상 정량한계 농도인 \( 0.001 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 를 \( 7 \)번 반복 분석한 결과 머무름 시간은 \( 10.6 \)분이었고 변이계수(Coefficient of variation, C.V.)는 \( 1.3 \% \) 로 \( 10 \% \) 이내를 만족하였으며 검랑선의 결정계수 \( \left(\mathrm{R}^{2}\right) \) 는 매질별 \( 0.999 \) 이상으로 우수한 직선성을 보였다.</p><h2>정제조건 확립</h2><p>표준용액을 이용하여 보편적으로 정제시 사용되는 \( 5 \)가지의 d-SPE 를 검토하였는데 일반적으로 사용하는 PSA, C18, GCB의 흡착제가 들어갔을 경우 \( 99.7-107.5\% \)의 우수한 회수율을 보였지만, Z-Sep이 들어갔을 경우 \( 32.9 \% \) 의 낮은 회수율을 보였다. 이러한 결과를 토대로 Z-Sep이 들어간 d-SPE \( 5 \) 를 제외하고 회수율을 확보한 d-SPE를 이용하여 백출, 우슬 각각의 matrix effect를 확인하였다. LC-MS의 경우 matrix effect는 질량분석기 내의 이온화 과정에서 나타나며 matrix와 해당 성분과 함께 질량분석기의 이온화 소스로 주입되어 ion suppression 및 ion enhancement를 일으켜 정확한 정량분석을 방해한다. 대부분의 농약은 LC-MS ESI positive mode에서 분석이 용이하기 때문에 LC-MS에서 matrix effect는 불가피하다. 백출의 경우 d-SPE \( 1, 2, 3, 4 \)로 정제했을 때 matrix effect가 \( -69.8 \% \) 에서 최대 \( -71.4 \% \) 이었고 우슬은 \( -85.6 \% \) 에서 최대 \( -87.0 \% \) 로 산출되었다. 두 매질 모두 matrix의 영향이 기존 다른 연구와 동일하게 \( \mathrm{d}-\mathrm{SPE} \) 로 정제시 \( 60 \% \) 이상으로 크게 나타났다. 따라서, metalaxyl이 약산성 화합물인 점에 착안하여 약음이온교환크로마토그레피인 \( \mathrm{SPE}{-\mathrm{NH}_{2}} \) cartridge를 검토하였다. \( \mathrm{SPE}-\mathrm{NH}_{2} \) cartridge로 acetone/ \( n \)-hexane 혼합용매를 각 비율별로 \( 5 \mathrm{~mL} \) 씩 용출하여 확인하였을 때, acetone \( / n \)-hexane \( (5 / 95, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 두 번째 분획에서 용출되기 시작하였으며, acetone/ \( n \)-hexane \( (10 / 90, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 두 번째 분획까지 용출되어 총 \( 85.6 \% \) 의 회수율 결과를 얻었다.하지만, 생약 시료를 대입하였을 경우 회수율이 \( 36.2 \% \) 로 감소하여 acetone의 비율을 높여서 확립하였다. 최종적으로 카트리지에 acetone/ \( n \)-hexane \( (50 / 50, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) \( 5 \mathrm{~mL} \) 를 가하여 유출하여 버린 후 acetone \( / n \)-hexane \( (50 / 50, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) \( 5 \mathrm{~mL} \) 에 녹인 시료 용액을 가하여 유출 시 충진제 표면이 노출되기 직전 acetone \( / n- \) hexane \( (50 / 50, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) \( 5 \mathrm{~mL} \) 로 용출하여 받는 조건으로 확립하였다. 확립한 조건으로 적용하였을 경우 \( 108.8 \% \) 의 우수한 회수율을 보였다. 또한, \( \mathrm{SPE}-\mathrm{NH}_{2} \) cartridge로 정제했을 경우 SPE cartridge type은 matrix effect의 영항이 낮다는 연구 결과와 같이 백출에서 \( -18.9 \% \), 우슬에서 \( -17.9 \% \) 의 낮은 수치를 보였다. 따라서, \( \mathrm{SPE}-\mathrm{NH}_{2} \) cartridge 정제조건으로 확립하였다.</p><h2>분석정량한계 및 회수율</h2><p>본 연구에서 확립한 분석법 및 기기분석조건 과정을 생약시료 백출과 우슬에 적용하여 수행하였을 때 Table \( 2 \)와 같은 회수율 결과를 얻었다. 분석기기의 기기상정량한계는 \( 0.002 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 이었으며, 분석정랑한계는 백출과 우슬 모두 \( 0.01 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 수준이었다. 이에 따른 회수율 시험결과는 백출시료의 경우 \( 0.01 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 처리수준에서 \( 100.3 \% \) 의 회수율과 \( 2.0 \% \) 의 변이계수를 보였고 \( 0.1 \) \( \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 처리수준에서 \( 109.1 \% \) 의 회수율과 \( 5.8 \% \) 의 변이계수를 보였다. 우슬시료는 \( 0.01 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 처리수준에서 \( 88.6 \% \) 의 회수율과 \( 3.6 \% \) 의 변이계수를 보였고 \( 0.1 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 처리수준에서 \( 88.1 \% \) 의 회수율과 \( 6.2 \% \) 의 변이계수를 보였으며 두 매질 모두 잔류분석기준인 회수율 \( 70-120\% \), 변이계수 \( 10 \% \) 이내를 만족하였다.</p><h1>초 록</h1><p>생약 중 잔류농약의 안전성을 확보하기 위해 metalaxyl에 대해 백출과 우슬의 잔류농약 분석법을 게발하고자 하였다. LC-MS/MS를 사용하여 QuEChERS법을 기반으로 백출과 우슬 중 metalaxyl을 분석하기 위하여 물로 습윤화 시켜 acetonitirile로 추출하여 \( \mathrm{MgSO}_{4} \) 와 \( \mathrm{NaCl} \) 을 첨가해 층 분리 후 \( \mathrm{SPE}\)-\( \mathrm{NH}_{2} \) cartridge로 정제하였다. 본 분석법의 기기정량한계와 분석정량 한계는 \( 0.002 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 과 \( 0.01 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 이었고 표준검량선은 \( 0.001- \) \( 0.05 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 범위에서 결정계수 \( \left(\mathrm{R}^{2}\right) 0.999 \) 의 직선성을 확인하였다. 백출과 우술에 대한 회수율은MLOQ 수준, MLOQ의 \( 10 \)배 수준에서 \( 88.1-109.1 \% \)의 우수한 회수율을 보였고, 변이계수는 \( 2.0-6.2 \% \) 로 \( 10 \% \) 이하였다. 본 연구에서 확립한 LC-MS/MS를 이용한 잔류분석법의 회수율 및 분석오차는 국제적인 기준을 만족하고 있으므로 생약 백출 및 우슬 중 metalaxyl의 안전성 검사를 위한 분석법으로 활용할 수 있을 것이라고 판단된다.</p>
\( \mathrm{SPE}-\mathrm{NH}_{2} \) cartridge 확립 조건의 회수율은 얼마야?
\( 108.8 \% \)