<h1>결 과</h1><h2>유산균 선별</h2><p>발효를 통해 울금 분말이 가지고 있는 소염활성을 가장 극대화시킬 수 있는 유산균주를 선별하기 위해 western blot assay를 실시하였다. \(\mathrm{pH} 7.0\)으로 보정한 5종의 프로바이오틱 유산균 배양 상등액을 10배 농축하여 LPS로 활성화된 raw 264.7 세포주에 처리하였을 때 B. longum을 제외한 나머지 Lactobacillus속 균주들은 비발효 울금 시료를 처리한 control군에 비해 COX-2발현을 저해함을 확인하였다. 그 중 L. johnsonii IDCC 9203 균주로 배양한 시료에서 가장 높은 iNOS 및 COX-2 저해능을 확인하였다. 위 분석 결과에서 COX-2 저해능이 비교적 우수했던 4가지 배양액은 주정 침전법을 이용해서 2차 분석 시료를 제조하였고 2차 western blot assay를 진행하였다. 주정 침전법을 이용해서 제조한 모든 시료는 대조군과 비교하여 강한 COX-2 저해능을 보였으며 그 중에서 L. johnsonii IDCC 9203 배양액으로 제조한 시료는 iNOS 저해능도 높았다. 위 결과를 종합하면 L. johnsonii IDCC 9203을 이용한 울금 발효물의 소염활성이 가장 강하므로 이를 울금 발효를 위한 유산균주로 선정하였다.</p><p>발효 유산균주로 선정된 L. johnsonii IDCC 9203은 유아 분변으로부터 분리된 유산간균으로써, 내산성 및 내담즙산성이 우수하고 Salmonella paratyphi A의 생육을 저해하며 인체에 유용한 folic acid를 생산하는 특징을 가진다. 또한 장 정착능이 우수하여 유해세균의 증식을 억제하고 항생제 복용 후 불안정한 장내 균총을 정상화시키는 효과를 가지므로 프로바이오틱 균주로 발효유 등에 활용되고 있다.</p><h2>울금 배양액의 소염활성</h2><p>울금 배양액과 울금 열수추출물의 소염활성을 측정하기 위해 RT-PCR을 수행하였다. LPS에 의해 활성화된 raw 264.7 세포주에 주정 침전법으로 제조한 발효 울금 시료와 비발효 시료를 각 \( 20 \mu \mathrm{L} \) 씩 처리하여 18시간 동안 배양한 후 전염증성 cytokine인 TNF- \( \alpha \) 와 IL-6의 mRNA level을 측정하였다. Dexamethasone을 처리한 양성 대조군에서와 같이 발효 울금 시료를 처리했을 때 LPS에 의해 증가된 TNF-\(\alpha \)와 IL-6의 mRNA level이 감소되었다. 하지만 비발효 울금 시료를 처리했을 때에는 두 cytokine의 발현 감소가 보이지 않았다. 발효 울금 원료와 비발효 울금 원료의 소염활성을 측정하기 위해서 western blot assay를 실시하였다. 두 원료는 DMSO에 현탁한 뒤 LPS를 이용해 활성화된 raw 264.7 세포주에 농도별로 처리하고 염증 매개인자인 COX-2와 iNOS의 발현양을 측정하여 발효 울금 원료의 소염활성을 평가하였다. 비발효 울금 원료 처리시에는 음성 대조군과 비슷한 수준으로 COX-2와 iNOS의 발현을 저해하지 못하였다. 반면 발효 울금 원료를 처리했을 때에는 농도 의존적인 COX-2와 iNOS의 발현양 감소를 확인하였다. COX-2의 발현 저해는 발효 울금 원료를 \( 125 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도로 처리했을 때부터 활성화되는 것을 확인할 수 있었고 \( 250 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 의 농도로 처리했을 때에는 COX-2, iNOS 모두를 강력하게 저해하였다.</p><p>앞선 결과들을 종합하면 울금 분말을 L. johnsonii IDCC 9203으로 발효함으로써 비발효 울금 원료에 비해 소염활성이 증가됨을 알 수 있었다.</p>
유산균주를 선별하기 위해 어떤 방법을 실시했는가?
western blot assay