<h1>재료 및 방법</h1><h2>재료, 시약 및 분석 기기</h2><p>본 연구에 사용한 고 이소플라본 함유 콩잎은 선행연구의 방법에 따라 \(2019\)년도 남해군일대에서 재배된 것을 농업회사법인 주식회사 제이씨엔팜으로부터 건조된 상태로 공급받아 사용하였다. 즉, 대원콩 종자를 파종 후 약 \(60\)일 (R\(3\) 생육단계: 까투리가 맺히기 전 최대 성장 시기) 동안 재배된 콩잎에 에테폰을 \( 200 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도로 약액이 흐를 정도로 충분히 \(24\)시간 간격으로 \(2\)회 살포하였다. 첫 살포 후 \(96\)시간 후에 콩잎을 수확하여 물로 깨끗이 세척 후 식품건조기(\( 35^{\circ} \mathrm{C} \))에서 건조하였다. 습도의 영향을 최소화하기 위해 건조 시료를 공급받아 분쇄하고 \( 100 \mathrm{~g} \)씩 칭량하여 크린팩에 담은 후 크린팩을 다시 락앤락\( (20 \mathrm{~cm} \times 20 \mathrm{~cm} \times 10 \mathrm{~cm}) \) 밀폐용기에 담아 준비하였다. 건조된 콩잎이 들어있는 밀폐용기는 냉장고(TRS\(30\)MHBFA, Samsung, Korea), 저온 배양기(ThermoStable IR-\(250\), DAIHAN Scientific, Korea) 및 건조기(WOF-W\(155\), DAIHAN Scientific, Korea)를 사용하여 각각 \( 5 \pm 1\), \( 25 \pm 1 \) 및 \( 55 \pm 1{ }^{\circ} \mathrm{C} \)를 유지하며 \(60\)일, \(120\)일 및 \(180\)일간 저장하였으며 \(0\)일, \(60\)일 및 \(120\)일 시료는 \(180\)일 시료와 동시 분석을 위하여 \( -70{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 보관한 후 최종 \(180\)일 시료와 같이 본 연구에 사용하였다. 이소플라본 표준품 중 malonylgenistin과 malonyldaidzin은 LC Laboratories (Woburn, MA, USA)에서 구입하였고, genistin과 daidzin, daidzein, gesnistein은 Sigma-Aldrich Co. (St, Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Folin-cioalteu reagent, diethylen glycol, \(2\),\(4\),\(6\)-azino-bis (\(3\)-ethylbenzthiazoline-\(6\)-sulphnoic acid) (ABTS), \(2\),\(2\)-diphenyl-\(1\)-picrydrazyl (DPPH), thiobarbituric acid (TBA) 및 trichloroacetic acid (TCA) 역시 Sigma-Aldrich Co.에서 구입하여 사용하였다. 추출물 제조와 라디칼 소거활성 및 기기 분석 등에 사용한 유기용매(methanol, acetonitrile, water 및 acetic acid 등)는 J.T.Baker (Philpsbug, NJ, USA)에서 구입하여 사용하였고 이 외 기타 시약은 필요에 따라서 분석용 특급 또는 \(1\)급을 구입하여 사용하였다.</p><p>지방산 분석은 gas chromatography (GC, Agilent \(7890\)A system, Agilent Technologies Inc., Wilmington, DE, USA)를 사용하였고 아미노산 분석은 자동아미노산 분석기 (L-\(8900\), Hitachi High-Technologies Corp., Tokyo, Japan)를 사용하여 분석하였다. 무기질 분석은 liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometer (NexION \(350\) ICP MS, PerkinElmer Inc., Waltham, USA)를 사용하였고 이소플라본 분석은 high performance liquid chromatography (HPLC, Agilent \(1200\) system, Agilent Technologies Inc., Waldbronn, Germany)를 사용하여 분석하였다. 이 외 총 phenolics, 총 flavonoids 및 라디칼 소거활성 측정은 분광광도계(UV-\(1800\) \(240 \mathrm{V} \), Shimadzu Corp., Kyoto, Japan)를 사용하여 측정하였다.</p>
대원콩 종자를 파종 후 재배된 콩잎에 몇 시간 간격으로 에테폰을 살포하였나요?
\(24\)시간