<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>본 실험에 사용된 블루베리 잎은 정읍시 소재의 블루베리 농원에서 구입하여 사용하였다. 표준폼으로 사용된 클로로겐산(Chlrogenic acid)는 Sigma Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다. 물과 메탄올은 Burdick and Jackson(SK Chemicals, Ulsan, ROK)사의 HPLC용 용매를 사용하였고, 트리 플로로 아세트산은 Sigma Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다.</p><h2>녹색반응을 이용한 클로로겐산의 함량 측정을 위한 흡광도 방법</h2><p>클로로로겐산 \( 20 \mu \mathrm{l} \) 를 농도별 (10, 30, 100 및 \( 300 \mu \mathrm{M} \), 및 1,3 및 \( 10 \mathrm{mM}) \) 로 \( 10 \mathrm{mM} ~ \mathrm{NaHCO}_{3} / \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) 완충용액 \( (\mathrm{pH} 9.5\) 및 \( 10 \mathrm{~mM} \) 글라이신 용액 \( 180 \mu \mathrm{l} \)를 혼합하여 96 웰 플레이트(well plate)에서 총량이 \( 200 \mu \mathrm{l} \) 이 되도록 혼합하였다. 그런 다음 상기 혼합물을 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 2시간 동안 반응시킨 후, 흡광도 \( 655 \mathrm{~nm} \) 파장을 96 웰 플레이트 판독기에서 측정하였다.</p><h2>블루베리 잎의 전처리</h2><p>블루베리 잎 \( 1 \mathrm{~g} \) 을 메탄올 \( 10 \mathrm{~ml} \) 에 넣고 충분히 흔들어 준 다음, 12시간 정치시킨 후 추출하였다. 추출 과정을 3번 반복한 후, 상등액만을 여과한 다음, 회수하여 원심진공농축기에 넣고 메탄올을 제거한 다음, 메탄올 \( 5 \mathrm{~ml} \) 에 녹였다. 상기 메탄올로 녹인 용액을 클로로겐산의 함량을 측정하는 시료로 사용하였다. 블루베리 잎의 건조 무게량을 측정하기 위해서 블루베리 잎을 동결건조한 다음 무게를 측정하였다. 상기 건조 무게량은 블루베리 잎 \( 1 \mathrm{~g} \) 당 건조 무게량 \( 0.89 \mathrm{~g} \) 이었다.</p><h2>HPLC-DAD 분석</h2><p>HPLC는 Agilent사의 1200 series로서, 분석조건 중 칼럼은 YMC ODS-AM 칼럼 \((5 \mathrm{~um}, 4.6 \mathrm{~mm} \times 250 \mathrm{~mm}) \), 유속은 \( 1.0 ( \mathrm{ml} / \mathrm{min} \), 검출기는 DAD를 이용하여 \( 280, 290, 323, 515 \mathrm{~nm} \) 파장에서 측정하였다. A 이동상 용매는 증류수 \( (0.05 \% \) 트리 플로로 아세트산)와 B 이동상 용매는 메탄올을 사용하고, 용매 기울기는 일정한 혼합비율 \((A: B=92: 8, 70: 30 \), 및 \( 30:50) \) 로 용출시켰다. 시료 주입량은 \( 10 \mu \mathrm{l} \) 로 하였다.</p>
본 실험에서 사용한 물과 메탄올은 어느 지역의 공장에서 생산한 것을 사용해?
Ulsan, ROK