<h2>RNA 추출 및 유전자 발현 확인</h2><p>에틸포메이트 훈증 치리 후 살아있는 약충 개체를 모아 QIAzol Lysis reagent를 이용하여 RNA를 추출하였다. 추출된 RNA는 Drop \( ^{\mathrm{TM}} \) Plate(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)은 이용하여 \( \mathrm{A} 260 / 280 \) 비율이 \(1.8-2.0\)이 됨을 확인하였다. 또한 \(1\)\( \% \) agarose gel에 전기영동하여 추출한 RNA의 상태를 확인하였다. 추출한 RNA \(2\)\( \mu \mathrm{g} \)을 Maxima First Strand cDNA synthesis Kit with dsDNase 를 사용하여 Complementary DNA (cDNA)를 합성하였다. 합성한 cDNA를 주형으로 Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit를 이용하여 qPCR를 실시하였다.PCR조건은 \(95\)\( ^{\circ} \mathrm{C} \) \(10\)분, 그 후 \(95\)\( ^{\circ} \mathrm{C}\) \(10\)초, \(60\)\(^{\circ} \mathrm{C} \) \(15\)초, \(72\)\( ^{\circ} \mathrm{C} \) \(20\)초로 \(40\)회 실시하였다. 실험에 사용한 primer의 서열은 Fig.\(1\)에 나타내었고, 결과는 Actin, ribosomal protein S2 유전자를 이용하여 표준화 하였으며 최종 나타낸 결과는 delta delta Ct 방법을 이용하여 분석하였다. 또한 결과는 SPSS 통계 프로그램을 사용하여 One-way ANOVA 및 Tukey test 통계처리 하였다.</p><h2>지질 추출 및 MALDI-TOF MS/MS 분석</h2><p>에틸포메이트에 \(1\)시간 노출 시킨 복숭아혹진딧물 약충을 죽은 개체, 살아있는 개체에 상관없이 \(60\)개체를 모아 메탄올-클로로포름 (1: 2, \( \mathrm{v} / \mathrm{v})\) 500 \(\mu \mathrm{L} \)를 넣고 균질화하여 상온에서 \(20\)분간 진탕하였다. \( 2000 \mathrm{~mm} \) 에서 \(5\)분간 원심분리하여 상등액을 취하여 \(0.9\)\( \% \) 염화나트륨 용액 \(300\)\( \mu \mathrm{L} \) 를 첨가하여 혼합하고 \(2000\)\( \mathrm{rpm} \)에서 \(5\)분간 원심분리하여 상층부을 제거한 후 하층부를 취하여 분석에 사용하였다. \(1\)\( \mu \mathrm{L} \) 지질 추출액을 엠티피 \(384\)타겟 플레이트 그라운드 스틸(MTP 384 ground steel target)에 놓고 상온에서 말려주었다. 샘플이 완전히 마른 후, \(0.5\)\( \mu \mathrm{L} \) 포화 아미노아크리딘 매트릭스 용액(2-propanol/acetonitrile, \(60\)/\(40\), \(\mathrm{v/v} \))을 말린 샘플 위에 놓고 상온에서 말려주고 질량분석기(MALDI-TOF MS)를 통해 지질을 분석하였다. 결과는 지질 데이터베이스(www.lipidmaps.org)를 이용하여 지질 질량분석 결과를 확인하였다.</p>
에틸포메이트에 복숭아혹진딧물 약충 노출을 몇 시간 시켰습니까?
\(1\)시간