<h1>재료 및 방법</h1><h2>사용균주</h2><p>M. pneumoniae (ATCC 29342) 표준균주와 환자로부터 분리된 123균주의 M. pneumoniae를 사용하였다. 환자로부터 분리된 M. pneumoniae 123균주 중에서 장 등이 이미 보고한 tetracycline에만 저항성을 가진 36균주, 23S rRNA의 V영역에 erythromycin 에 대한 내성 변이가 일어난 것을 PCR법으로 확인하여 erythromycin에만 저항성을 가진 39균주, tetracycline과 erythromycin에 모두 저항성을 가진 21균, tetracycline과 erythromycin에 모두 감수성인 27 균주로 나누어진 것을 실험에 사용하였다.</p><h2>분리 균주의 항생물질에 대한 감수성 검사</h2><p>환자로부터 분리 동정된 M. pneumoniae 123균주를 각각 \( 10 \mathrm{~ml} \)의 Chanock's glucose 배지에 3일간 배양하여 균수가 \( 10^{6} \mathrm{ccu} / \mathrm{ml} \) 되도록 조정한 후에 각 농도의 항생물질이 함유 된 배지 \( 2.0 \mathrm{~ml} \)에 각각의 균액 \( 20\mu \mathrm{l} \)씩을 접종하여 2주간 균의 중식 유무를 배지의 색깔 변화에 따라 육안으로 확인하였다. 색깔변화단위(color changing unit, ccu)는 Mycoplasmas 균종의 균수계산법의 하나로 일반세균의 균수계산법에서 \( \mathrm{cfu} \)와 같은 개념으로 사용된다. 항생물질은 sparfloxacin (Cheil Food & Chem. Co., Seoul), ofloxacin (Cheil Food & Chem. Co., Seoul), ciprofloxacin (Bayer, Korea), moxifloxacin (Bayer, Korea), levofloxacin (Jeil Pharm. Co, Seoul), clarithromycin (Daiichi Pharm. Co., Korea), Amikacin (Boryung Pharm. Seoul)를 사용하였다. Clarithromycin과 levofloxacino은 각 배지에 \( 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.12, 1.56, 0.78, 0.39, 0.19, 0.09 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)되도록 첨가하였다. Amikacin과 moxifloxacin, sparfloxacin, ofloxacin은 각 배지에 \(64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.06 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 되도록 첨가하였다. 항생물질의 최저발육저지농도 (minimum inhibitory concentration, MIC)의 판정은 항생물질이 들어있지 않는 대조군 계열에서 균이 증식하는 시기에 각 항생물질이 함유된 계열에서 증식이 억제되는 최저농도를 MIC로 판정하였다. 이후 계속적으로 2주일간 배양 관찰하여 균의 중식이 더 이상 일어나지 않은 최저농도를 최저살균농도(MBC)로 판정하였다.</p>
23S rRNA의 V영역에 erythromycin에 대한 내성 변이가 일어난 것 어떤 방식으로 확인했어?
PCR