<h2>GABA 함량 측정</h2><p>GABA 함량을 측정하기 위해서 청국장의 GABA정량은 Zhang과 Bown의 방법을 사용하였다. 시료의 전처리를 위해 48시간 동결 후 동결진공 건조하여 분말화한 뒤 불순물과 시료의 색소 등을 제거하기 위해 청국장 분말 \( 0.3 \mathrm{~g} \)을 \( 99 \% \) 에탄올 \( 1.2 \mathrm{~ml} \)에 5시간 동안 추출하여 \( 10,000 \mathrm{~rpm} \)에서 5분간 원심분리 후 상징액을 시료로 사용하였다. Microtube에 상징액 \( 0.1 \mathrm{~ml} \)과 \( \mathrm{MeOH} 0.4\mathrm{~ml} \)을 가하고 \( 70 \sim 80^{\circ} \mathrm{C} \)로 조정된 water bath에서 약 30분 정도 완전 건고 시켰다. 여기에 \( 70 \mathrm{~mM} \mathrm{~LaCl}_{3} \)용액 \( 1 \mathrm{~ml} \)를 가하여 10분간 흔들어 주고 \( 10,000 \mathrm{~rpm} \)에서 5분간 원심분리 후 상징액 \( 0.8 \mathrm{~ml} \)을 \( 0.1 \mathrm{~M} \mathrm{~KOH} \)용액 \( 0.16 \mathrm{~ml} \)을 미리 넣어둔 microtube에 가하여 3~5분간 교반하였다. 그리고 이를 \( 10,000 \mathrm{~rpm} \)에서 5분간 원심 분리한 후 syringe filter을 거쳐 나온 상징액 \( 0.55 \mathrm{~ml} \)을 cuvette에 넣어 \( 0.5 \mathrm{~M} \mathrm{~K}_{4} \mathrm{P}_{2} \mathrm{O}_{7} \)용액 \( 0.2 \mathrm{~ml} \), \( 4 \mathrm{~mM} \) NADP용액 \( 0.15 \mathrm{~ml} \), \( 2.0 \mathrm{~units} \) Gabase/\( \mathrm{ml} \)용액 \( 0.05 \mathrm{~ml} \)를 각각 혼합하고 \( 340 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도(Optozen POP, Mecasys, Korea)를 측정(Initial A)하였다. 여기에 \( 20 \mathrm{~mM} \) \( \alpha \)-ketoglutarate용액 \( 0.05 \mathrm{~ml} \)을 가하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 방치 후 \( 340 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정(Final A)하였다. 측정된 흡광도 값(Final A - Initial A)를 표준곡선에 대입하여 GABA량을 구하였다.</p><h2>분류학적 위치 검토</h2><h3>Biolog system을 이용한 동정</h3><p>실험균주의 탄소원 대사지문은 Biolog사의 \( MicroLog^{\mathrm{TM}} \) system (USA)을 이용하여 분리균주를 4시간 및 24시간 동안 배양한 후, 발색반응을 측정함으로써 조사하였다.</p><h3>16S rRNA sequence분석</h3><p>분리균주들의 정확한 동정을 위하여 16S rRNA sequence 비교◦분석하였다. 염기서열 분석을 통하여 얻어진 분리균주의 부분 염기서열은 Blast network service를 이용하여 GenBank에 등록된 다른 미생물의 염기서열과 비교함으로써 계통분류 학적 유연관계를 분석하였다.</p>
분리균주를 배양후 무엇을 측정 하였나요?
발색반응을 측정