<h1>재료 및 방법</h1><h2>식물재료 및 기내배양조건</h2><p>본 연구에 사용된 자란(B. striata) 종자는 2019년 9월에 제주도 서귀포시에서 꼬투리 상태로 종자를 채집하여 사용하였다. 채집된 식물재료는 표면을 깨끗이 씻고 건조기를 이용하여 물기를 제거한 다음 실리카겔이 포함된 종자 보관병에 담아 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 단기저장고에서 1 개월간 저온처리를 하였다. 종자발아는 온도 \( 24 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \), 광주기는 \( 12 / 12 \) 시간, 그리고 광도 46\( \mu \mathrm{mol} \mathrm{m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1} \) 의 배양 챔버에서 실시하였다. 실험에 사용한 모든 배지와 기구는 \( 121^{\circ} \mathrm{C}, 1.5 \) 기압으로 20 분간 고온·고압 멸균하여 페트리디쉬에 \( 30 \mathrm{~mL} \) 씩 배지를 분주하여 실험에 사용하였다.</p><h2>\( \mathrm{NaOCl} \) 처리시간 및 농도에 따른 종자활력(TZ) 검증</h2><p>\( \mathrm{NaOCl} \) 처리 농도와 시간에 따라 자란의 종자활력을 검증하기 위해 \( 1 \% \) triphenol tetrazolium chloride(TZ) 용액을 사용하였다. 자란의 종자를 꼬투리에서 꺼내 시간별, 농도별로 \( \mathrm{NaOCl} \) 을 처리한 후 멸균수로 3회 세척하여 TZ용액에 각각 500 개 이상을 침지하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 암조건에서 48시간 반응하고 이후 증류수로 5회 세척하였다. 활력유무의 판정은 TZ용액으로 자란의 배가 붉게 염색되는 것을 활력이 있음으로 판정하고 염색이 되지 않으면 비활력으로 판정하였다. 또한 \( \mathrm{NaOCl} \) 처리 농도, 시간에 따라 자란의 종자활력을 확인하기 위해 세척 후 실체현미경을 이용하여 자란 종자의 붉게 염색된 부위를 조사하였다.</p><h2>\( \mathrm{NaOCl} \) 처리시간 및 농도에 따른 배비대와 종자발아</h2><p>\( \mathrm{NaOCl} \) 의 처리시간과 농도가 자란의 종자발아에 미치는 영향을 알아보기 위해 자란의 꼬투리를 \( 70 \% \) 에탄올에 1회 30초간 표면 살균한 후 멸균된 증류수로 3회 수세하였다. 꼬투리를 열개하여 종자를 수확한 다음 \( \mathrm{NaOCl} \) 처리시간 (0,5,10,15 분) 과 농도 (0, 0.5, 1, 1.5, 2 \( \% \)) 를 달리하여 처리하였다. \( \mathrm{NaOCl} \) 이 처리된 종자는 멸균수로 5회 수세하여 \( \mathrm{NaOCl} \) 을 완전히 제거한 후 배양하였다. 자란의 기내 종자발아를 위한 배지는 SGM(Seed Germination Medium, Sigma, USA) 배지를 사용하였다. 배비대율(embryo swelling)과 발아율 조사는 2일 간격으로 총 15회 수행하였으며 4주후에 결과를 분석하였다.</p><h2>통계분석</h2><p>모든 데이터는 means \( \pm \) standard deviation으로 표시하였다. 정규성 검정 결과 정규분포를 띄지 않아 비모수 통계분석인 Mann-Whitney U test를 실시하였다. 통계적 유의성은 \( P< 0.05 \) 로 설정하여 분석하였다.</p>
채집된 식물재료를 깨끗이 세척하고 건조기로 물기 제거 후에 저온처리 한 기간은 얼마 동안이지?
1 개월간