<h1>결과 및 고찰</h1><h2>접합전달을 위한 최적배지</h2><p>S. platensis의 접합전달을 위한 최적배지를 조사하기 위해 지금까지 접합전달법에 사용된 배지 4종(AS-1, ISP2, ISP4, MS)을 선정하여 연구하였다. 이미 수행된 연구들을 보면 접합 전달에 사용되는 고체배지에 따라 접합전달효율이 크게 영향 받는 것을 알 수 있다. 본 연구에 사용된 MS와 AS-1배지는 방선균의 접합전달에 가장 많이 사용되는 배지이며, ISP2배지는 S. lavendulae FRI-5 에, ISP4는 희소방선균 Kitasatospora setae [4]의 접합전달에 사용된 최적배지이다. Table 1과 같이 4 종의 배지를 각각 S. platensis의 접합전달실험에 적용해 본 결과 AS-1, ISP4, MS의 경우에는 접합전달체가 형성되어 본 실험에 사용 가능하다는 것이 확인 되었다. 그러나 ISP2의 경우에는 S. platensis의 포자생산용 최적배지임에도 불구하고 접합전달체를 전혀 형성하지 못해 S. platensis의 접합전달에는 부적합한 것으로 확인되었다. 또 형질전 환체가 형성된 3종의 배지 중에서 접합전달효율은 MS가 가장 높았고 ISP4와 AS-1의 순서였지만 ISP4의 경우 MS와 거의 차이가 없는 것으로 밝혀져 MS와 ISP4는 S. platensis의 접합전달을 위해 모두 사용 가능한 것으로 판단된다. 그러나 가장 낮은 접합전달효율을 보인 AS-1의 경우에는 MS보다 35배나 낮은 효율을 보여 배지간의 차이가 대단히 크다는 것을 확인 할 수 있었다. 그러므로 MS배지를 S. platensis의 접합전달을 위한 최적배지로 선정하고 이후 실험에 계속 사용하였다.</p><h2>포자의 열처리 효과</h2><p>방선균 포자에 일정 시간 동안 열처리를 하였을 경우 접합 전달효율이 상승하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 현상은 열처리가 포자의 발아를 유도하여 접합전달의 효율이 향상 되거나 방선균이 가진 제한계를 일시적으로 약화시킴으로써 효율이 증가되는 것으로 알려져 있다. 따라서 S. pla-tensis포자에 대한 최적 열처리 온도를 결정하기 위하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)까지 \( 5^{\circ} \mathrm{C} \)간격으로 각각 10분간 열처리하고 처리하지 않은 대조군과 비교하여 열처리에 대한 포자의 생존율을 조사하였다. 그 결과 Fig. 1 과 같이 열처리 온도가 올라갈수록 포자의 생존율이 떨어졌으며 \( 45^{\circ} \mathrm{C} \)부터는 급격하게 떨어져 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서는 전혀 생존하지 못했다. 접합전달을 위한 열처리조건으로는 \( 50 \% \) 이상의 생존율이 보장되는 것이 좋기 때문에 \( 56 \% \) 의 생존율을 보인 \( 45^{\circ} \mathrm{C} \)까지 접합전달을 위한 열처리 온도에 포함하여 접합전달효율을 조사하였다. 그 결과 열처리를 하지 않은 대조군에 비해 열처리를 한 모든 실험군에서 접합 전달효율이 떨어졌으며 특히 \( 45^{\circ} \mathrm{C} \)의 열처리에서는 접합전달체가 전혀 형성하지 못했다. 그러므로 S. platensis YK-2의 경우에는 포자에 대한 열처리가 오히려 접합전달효율을 떨어뜨리는 결과를 가져온다는 것을 확인할 수 있었다.</p><h2>DNA 공여체수와 수용체수의 관계</h2><p>접합전달효율이 낮은 방선균의 경우 plasmid DNA의 공여체로 사용되는 E. coli수와 수용체인 포자수의 비율이 접합전달효율에 대단히 중요한 영향을 미친다. 선행연구에 의하면 S. platensis의 경우 다른 방선균에 비해 접합전달효율이 낮을 것으로 판단되었다. 그러므로 접합전달에 필요한 최적공여체수를 조사하기 위해 Table 3 에서 보는 바와 같이 공여체인 E. coli수를 \( 2.5 \times 10^{6} \)에서 \( 2.5 \times 10^{8} \)까지 단계적으로 적용하였으며 수용체인 포자의 수도 \( 5 \times 10^{6} \)에서 \( 1 \times 10^{8} \)까지 사용하여 실험하였다. 그 결과 DNA 공여체의 수와 수용체의 수가 모두 증가할 수록 접합전달의 효율이 전체적으로 증가하는 경향을 보였다. 또 포자수가 \( 5 \times 10^{6} \)일 때 E. coli수가 \( 2.5 \times 10^{6} \)이하이면 접합전달이 일어나지 않지만 E. coli수가 \( 5 \times 10^{7} \) 이상이면 모든 포자수의</p><p>조건에서 접합전달효율이 크게 증가한다는 것을 확인할 수 있었다. 그러나 E. coli수가 5 배 많은 \( 5 \times 10^{8} \)에서는 \( 5 \times 10^{7} \)와 크게 차이가 없었다. 따라서 S. platensis의 접합전달을 위한 최적 E. coli수는 \( 5 \times 10^{7} \)이며 \( 2.5 \times 10^{7} \)이상의 공여체가 접합전달을 위해 필요하다는 것도 확인하였다.</p>
접합전달효율이 낮은 방선균의 경우 뭐가 접합전달효율에 중요한 영향을 미쳐?
plasmid DNA의 공여체로 사용되는 E. coli수와 수용체인 포자수의 비율