<h1>재료 및 방법</h1><h2>기기 및 시약</h2><p>Column chromatography용 silica gel은 Kreselgel 60(70~230 mesh, Merck, Germany)을, TLC는 Kieselgel 60\(\mathrm{~F}_{254} \)를 사용하였고, 그 외 시약은 모두 일급 또는 특급을 사용 하였다. \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR}(400 \mathrm{MHz}),{ }^{13} \mathrm{C}-\mathrm{NMR}(100 \mathrm{MHz}) \) 및 DEPT spectra는 JEOL JNM-LA400으로 측정하였고, IR spectrum은 Perkin-Elmer model 599B (Massachusetts, U.S.A.)로 측정하였다.</p><h2>식물시료</h2><p>수원 농수산물 시장에서 구입하여 생체를 그대로 사용하였다.</p><h2>Glyceride 화합물의 분리</h2><p>달래 생체 \( 18 \mathrm{~kg} \)을 \( 100 \% \mathrm{MeOH} \) \((18 \ell \times 2\))를 가하여 실온에서 2회 추출한 후 여과지로 여과하여 감압 농축하였다. 농축물을 물 \( (1 \ell) \)과 EtOAc \( (1 \ell \times 2\))로 분배 추출하고, 물층을 다시 n-BuOH (\(800 \mathrm m{\ell} \times 2\))로 분배, 추출하였다. n-BuOH층을 silica gel(\(330\mathrm{g}\)) column chromatography (\( \mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH} \) = 10:1⭢7:1⭢5:1⭢3:1)를 실시하여 \(70 \mathrm m{\ell}\)씩 분취하였다. 이 분취액을 TLC로 확인하여 유사한 분획끼리 모아 농축하여 모두 16개의 분획물 (AMB-1~AMB-16)을 얻었다. 그 중 3번째 분획 (AMB-3)을 다시 silica gel(\(90 \mathrm{g}\)) column chromatography (\( \mathrm{CHCl}_{3} -\mathrm{MeOH} =8:1\))하여 glycosylglyceride 화합물 1 (AMB-3-1, \( 193 \mathrm{mg} \) )을 분리하였다.</p><p>Glycosylglyceride 화합물 1 : Colorless oil ; \( \mathrm{IR}_{\mathrm{v}}\left(\mathrm{CHCl}_{3}\right. \), \( \left.\mathrm{cm}^{-1}\right) \) 3445 (br.) , 2930, 1732, 1455, 1076; \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR}(400 \) \( \left.\mathrm{MHz}^{2}, \mathrm{CDCl}_{3}, \delta\right)\) 5.37 (12H, m, H-9, 10, 12, 13, 15, 16 in linolenoyl) 4.29\(\left(1 \mathrm{H}, \mathrm{d}, \mathrm{J}=7.0 \mathrm{~Hz}, \mathrm{H}-1^{\prime}\right)\), 4.04-3.54(10H, galactosyl, glycerol-oxymethine or oxymethylene), 2.79, 2.31, 2.07, 2.06, 1.59 (all 4H, each m, H-2, 8, 11, 14, 17 in linolenoyl), 1.30-1.25 (20H, m, H-3, 4, 5, 6, 7 in linolenoyl), 0.96 (6H,t, \(\mathrm{J}=6.0 \mathrm{~Hz}, \mathrm{H}-18 \) in linolenoyl \( ) ;{ }^{13} \mathrm{C}-\mathrm{NMR}(100 \) \( \left.\mathrm{MHz}^{\prime}, \mathrm{CDCl}_{3}, \delta_{C}\right)\) 173.88,173.61 (C-1"; " indicates the number of linolenoyl), 131.93, 130.19, 128.29，128.21, 127.75, 127.10, (C-9", 10", 12", 13", 15", 16"), 103.87 (C-1' ; indicates the number of \( \beta \)-D-galactopyranosyl), 74.39(C-5'), 73.40(C-3'), 71.12(C-2'), 70.23(C-2), 68.91(C-4'), 67.99(C-3), 62.91 (C-1), 61.37(C-6'), 34.24-20.54 (methylene- C in linolenoyl), 14.30 (C-18").</p><h2>화합물 1의 알칼리 가수분해 및 지방산 조성 분석</h2><p>화합물 1(\(71 \mathrm{mg}) \)을 \( 10 \mathrm{ml} \mathrm{MeOH} \)에 녹인 후 \( 10 \% \mathrm{KOH}\) 수용액 \( 0.5 \mathrm{~ml} \)를 가하였다. \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 3시간 환류시킨 후, 반응액에 \(\mathrm{MeOH} \)을 \( 20 \mathrm{ml} \) 가하여 희석시키고, Dowex \( 50 \mathrm{~W} \) \( \times 8 \) ( \( \mathrm{H}^{+} \)form) 수지로 중화하였다. 수지를 여과한 후, 여액을 감압하에서 농축하였다. 농축물 중의 일부를 취하여 \( \mathrm{CH}_{2} \mathrm{~N}_{2} / \mathrm{Et}_{2} \mathrm{O} \) 로 에틸화 한 후 gas chromatography로 지방산을 분석하였다 GC 분석조건 : Column; Supelcowax-10 fused silica capillary \( 025 \mathrm{~m} / \mathrm{m} \times 30 \mathrm{~m} \), Split ratio; 12:1, Oven temp.; Gradsent [Initial temp. \( 120^{\circ} \mathrm{C} (4 \mathrm{~min} \)), Increasing ratc; \( 3^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \), Final temp.; \( 240^{\circ} \mathrm{C}(30 \mathrm{~min}) \) ], Detector; FID, Injeclor temp.; \( 220^{\circ} \mathrm{C} \), Detector temp.; 24 \( 0^{\circ} \mathrm{C} \), Rt : min (Kind of fatty acid, Area \(\%\)); 30.46 (methyl palmitate, 3.7), 36.81 (methyl stearate, 4.2), 37.48 (methyl oleate, 2.5), \( 39.16 \) (methyl linoleale, 7.2), 41.12 (methyl linolenate, 82.4).</p><p>한편, 위에서 GC 분석하고 남은 대부분의 농축물을 silica gel \( (70 \mathrm{~g}) \) column chromatography \( \left(\mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=\right. 6:4:1\) )하여 화합물 1a\((23 \mathrm{mg}) \)을 정제하였다.</p><p>화합물 1a (galactopyranosylglycerol) : White powder ; \( \mathrm{IR}_{v}\left(\mathrm{KBr}, \mathrm{cm}^{-1}\right. \) ) 3440 (br.), 2928; 'H-NMR (\(400 \mathrm{MHz}\), \( \left.\mathrm{CD}_{3} \mathrm{OD}, \delta\right)\) 4.34 (1H, d, \(J=7.0 \mathrm{~Hz} \) in galactosyl), 3.96-3.53(10H, galactosyl, glycerol-oxymethine or oxymethylene); \( { }^{13} \mathrm{C}-\mathrm{NMR}\left(100 \mathrm{MHz}, \mathrm{CD}_{3} \mathrm{OD}, \delta_{\mathrm{C}}\right) \) 106.31 (C-1' in galactopyranosyl), 78.17 (C-5'), 75.92 (C-3'), 73.94 (C-2'), 73.64 (C-3), 73.55 (C-2), 71.71 (C-4'), 65.32 (C-3), 63.94 (C-6').</p><h2>화합물 1의 산가수분해 및 구성당의 동정</h2><p>화합물 1\((5 \mathrm{mg}) \) 에 \(3\%\) \( \mathrm{HCl}\left(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}-\mathrm{MeOH}=1: 1\right) 34 \mathrm{ml} \)를 가하고 1시간동안 환류하였다. 반응액에 \( \mathrm{Ag}_{2} \mathrm{CO}_{3} \)를 첨가하여 중화시킨 후 여괴하였다. 여액 중에 생성된 당의 동정은 silica gel TLC를 이용하여 수행하였다. 전개용매: \( \mathrm{CHCl}_{3}- \) \( \mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}= 6:4:1\) , Rf value of galactopyranose : 0.34.</p>
Column chromatography용 silica gel은 무엇을 사용했어?
Kreselgel 60