<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>본 실험 재료는 알로에 베라 가공 부산물을 이용한 추출물울 이용하기 위해서 알로에 음료제조 공정 후 남겨지는 알로에 밑둥과 알로에 전잎을 \( 50: 50 \)으로 중량을 측정한 후에 사용하였다.</p><h2>세포주</h2> <p>Human keratinocyte cell line인 HaCaT 세포는 CLS Cell Lines Service, Eppelheim, Germany에서 분양 받아 사용하였으며, \(3\)T\(3\)-L\(1\) (Pre-adipocyte cell line)은 한국세포주은행(KCLB, Seoul, Korea)에서 분양 받아 사용하였다. Streptococcus mutans (ATCC \(25175\))균과 Porphyromonas gingivalis (ATCC \(33277\))균은 생물자원센터(KCTC, Jeongup, Korea)에서 분양 받아 사용하였다.</p><h2>알로에 베라 가공 부산물 추출</h2><p>알로에 베라 가공 부산물을 이용한 추출은 믹서추출 및 착즙 추출을 하여 실험에 사용하였다. 믹서추출은 부산물을 푸드믹서기(SAMWOO, SF-\(600\), Seoul, Korea)로 분쇄한 후, \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(20 \sim 30\)분 동안 가열하여 추출하여 원심분리기로 \( 1000 \mathrm{rpm} \)에서 \(15 \)분간 원심분리한 후, 필터(HYUNDAI, HM.\(3005090\))를 이용하여 고형분을 제거하였다. 착즙 추출은 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 20 \sim 30 \)분 동안 가열한 후에 착즙기((주)휴롬, HVS-STF\(14\), Seoul, Korea)를 이용하여 추출하여 원심분리기로 \( 1000 \mathrm{rpm} \)에서 \(15 \)분간 원심분리한 후, 필터(HYUNDAI, HM.\(3005090\), Seoul, Korea)를 이용하여 고형분을 제거하였다.</p><h2>MTT assay</h2><p>\(96\)-well cell culture plate에 분화되지 않은 \(3\)T\(3\)-L\(1\) 세포를 \( 1 \times 10^{4} / \mathrm{well}\) \( (100 ~\mu \mathrm{L}) \) 밀도로 분주한 후, \( 5 \% ~\mathrm{CO}_{2} \) 조건에서 \(24 \)시간 배양하였다. 배양한 세포를 현미경으로 세포가 바닥에 분포되어 자랐는지 확인한 후, 각 well의 배지를 제거하고 추출물 (농도: \( 1,2,4,6,8,10 \% \))이 포함된 배지를 \( 100 \mu \mathrm{L} / \mathrm{well} \)로 교체하고 \( 5 \% ~\mathrm{CO}_{2} \) 조건에서 \(24 \)시간 배양하였다. 각 well의 배지를 제거하고 MTT reagent \( (1 \mathrm{mg} / \mathrm{mL}) \)를 \( 50 \mu \mathrm{L} \)씩 well에 첨가한 후, 빛 차단을 위해 plate를 호일로 덮고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(2\)시간동안 반응시켰다. 세포에 보라색 침전물을 확인한 후, 각 well의 MTT reagent를 제거하고 isopropanol를 \( 100 ~\mu \mathrm{L} \)씩 well에 첨가하여 잘 섞어준 다음 Microplate reader를 이용하여 \( 570 \mathrm{~nm} \) (반응 흡광도) 및 \( 650 \mathrm{~nm} \) (참고 흡광도)에서 흡광도를 측정하였다.</p>
믹서추출은 어떻게 진행되나요?
부산물을 푸드믹서기(SAMWOO, SF-\(600\), Seoul, Korea)로 분쇄한 후, \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(20 \sim 30\)분 동안 가열하여 추출하여 원심분리기로 \( 1000 \mathrm{rpm} \)에서 \(15 \)분간 원심분리한 후, 필터(HYUNDAI, HM.\(3005090\))를 이용하여 고형분을 제거