<h2>상황버섯 \( \beta \)-glucan 추출 및 정제</h2><p>상황버섯 활성 다당체의 추출 공정은 Fig. 1 과 같다. 상황버섯분말 \( 50 \mathrm{~g} \) 과 증류수 \( 1 \mathrm{~L}(\mathrm{pH} 4) \) 를 혼합한 후 \( 0.66 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 의 viscozyme을 첨가하고 진탕배양기를 이용하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \), 회전속도 \( 130 \mathrm{rpm} \) 의 조건에서 \( 6.08 \) 시간 동안 반응시킨 후 24 시간 동안 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 환류 추출하였으며(enzyme beta-glucan extract, EBE), 여기에 \( 1 \mathrm{~L} \) 의 에탄올을 기해 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 6 시간 방치하고 1 \( \mathrm{L} \) 의 에탄올을 다시 한 번 가하여 24 시간 방치한 후 여과하였다. 여과액에 \( 1 \mathrm{~L} \) 의 에탄올을 가하여 24 시간 방치한 후 \( 1 / 4 \) 로 농축하고 원심분리하여 정제하였다(enzyme beta-glucan, EB). 대조구로 상황버섯 분말과 추출 용매인 증류수의 비를 \( 1: 20 \) 으로 하여 24 시간 동안 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 환류 추출하교(non-enzyme beta-glucan extract, NEBE), 이를 약 3배량의 에탄올로 24 시간 동안 정제하였다(non-enzyme beta-glucan, NEB ). 각 시료는 동결건조하여 실험에 사용하였다.</p><h2>\( \beta \)-glucan 함량 측정</h2><p>추출 수율은 각 공정을 기쳐 추출한 상황버섯 추출물을 여과, 농축, 동결건조 한 후 무게를 측정하여 계산하였다. 수율은 건조된 추출 물질이 상황버섯의 무게 중에서 차지하는 비율(\( \%\))로 나타내었다.</p><p>\( \beta \)-glucan 함량은 Mushroom and Yeast \( \beta \)-glucan assay kit (Megazyme, Wicklow, Ireland)를 이용하여 측정하였다. \( 20 \mathrm{mg} \)의 시료에 \( 12 \mathrm{M} \) sulphuric acid \( 2 \mathrm{~mL} \) 를 가하여 섞은 후 ice-water bath에서 2 시간 동안 교반하며 반응시켰다. 이후 증류수 \( 10 \mathrm{~mL} \) 를 가하고 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 2 시간 동안 반응시킨 반응액을 식힌 후 \( 10 \mathrm{M} \) potassium hydroxide \( 6 \mathrm{~mL} \) 를 가하였다. 이후 \(200 \mathrm{mM} \) sodium acetate buffer \( (\mathrm{pH} 5.0\))로 \( 100 \mathrm{~mL} \) 로 정용하였다. Whatman GF/A glass microfiber filter (GE Healthcare, Amersham,UK)를 이용해 여과하고, 여과액 0.1mL에 \( (20 \mathrm{U} / \mathrm{mL})+\beta \)-glucosidase \( (4 \mathrm{U} / \mathrm{mL})\) \(0.1 \mathrm{~mL} \) 를 혼합하였다. \(40^{\circ} \mathrm{C} \) water bath에서 1 시간 동안 반응시킨 후 반응액에 glucose oxidase/peroxidase mixture (GOPOD) \( 3 \mathrm{~mL} \) 를 가해 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 20분간 반응시켰다. 이후 UV-visible Spectrometer (UV 1601, Shimadzu, Kyoto, Japan)을 이용해 \( 510 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 total glucan 함량을 측정하였다. 또한 \( 20 \mathrm{mg} \) 의 시료에 2M potassium hydroxide \( 2 \mathrm{~mL} \) 를 가하여 20 분 동안 ice-water bath에서 반응시켰다. 이후 \( 1.2 \mathrm{M} \) sodium acetate buffer \( (\mathrm{pH} 3.8)\) \( 8 \mathrm{~mL} \) 와 amyloglucosidase \( (1630 \mathrm{U} / \mathrm{mL})+ \) invertase \( (500 \mathrm{U} / \) \( \mathrm{mL})\) \(0.2 \mathrm{~mL} \) 를 가하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30 분 동안 반응시켰다. 반응액 을 \( 1500 \mathrm{~g} \) 로 10 분간 원심분리 후 상등액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 에 \( 200 \mathrm{mM} \) sodium acetate buffer \( (\mathrm{pH} 5.0\) ) \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 와 GOPOD \( 3 \mathrm{~mL} \) 를 가해 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 20 분간 반응시킸다. 이후 \( 510 \mathrm{~nm} \) 에서 홉광도를 측정하여 \( \alpha \)-glucan 함량을 즉정하였다. \( \beta \)-Glucan 함량은 total glucan 힙량에서 \( \alpha \)-glucan 함량을 제외한 값으로 하여 계산하였다.</p>
추출 수율은 건조된 추출 물질이 어떤 것에서 차지하는 비율을 의미하는 거야?
상황버섯의 무게