<p>지수 생장기의 Synechocystis 야생종을 (3-5 \( \mu \mathrm { g } \mathrm { Chl } \) a) 수확하여 \( 200 \mu \) 의 액체 BG-11 배지로 재현탁시킨 후, 최종 \( 1 \mu \mathrm { g } \mathrm { ml } ^ { -1 } \) 가 되도록 카나마이신 항생제 카세트가 삽입된 8 종의 재조합 플라스미드 DNA를 섞어준 후 28-30℃ 암소에서 4-6시간 방치하여 형질 전환 시켰다. 형질 전환이 이루어진 세포를 포함한 현탁액은 40℃ 이하로 식힌 3 ml 의 0.5% bacto 아가가 포함된 BG-11과 섞어 10mM 포도당이 포함되거나 ( + Glucose) 포함되지 않은 (- Glucose) BG-11 고체 배지위에 없고 균주 유지용 저온 배양기에서 배양하였다. 36시간 ( + Glucose)이나 48 시간 (-Glucose) 배양 후 최종 농도 5 \( \mu \mathrm { g } \mathrm { ml } ^ { -1 } \) 가 되도록 항생제를 고체 배지 아래쪽에 항생제 농도 구배가 생기도록 도말하여 항생제 저항성 콜로니 (colony)가 나올 때까지 약 2주간 배양한 후 새로운 배지로 3-4회의 추가분리 (segregation)하였다.</p> <h2>루미노미터를 이용한 인광 측정</h2> <p>야생종과 형질전환 세포를 20 ml의 BG11 배지에서 30℃, \( 40 \mathrm { ~mol } \mathrm { ~m } ^ { -2 } \mathrm { ~s } ^ { -1 } \) 의 광 조건 하에서 배양한 후, \( \mathrm { OD } _ { 750 } \) 에서 0.1 에 맞춰 다시 계대배양하였다. 2-3일 경과 후 \( \mathrm { OD } _ { 750 } \) 에서 0.5 가 되게 세포를 수확한 후 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 의 BG11 배지에 재현탁하였다. 여기에 루시페라제의 기질인 데칸올 \( 10 \mu \mathrm { M } \) 을 첨가하여 10 초씩 루미노미터 \( \left (20 / 20 ^ { n } \right . \), 터너 바이오시스템즈(Turner Bio-systems, USA)를 사용하여 인광을 측정하였다. 포도당 첨가에 의한 발광 증가는 세포에 10 mM 포도당을 첨가하여 1 시간 동안 반응시킨 후 측정하였다.</p> <table border><caption>Table 1 List of primer and location of intergenic sequences used in this study.</caption> <tbody><tr><td>Gene</td><td>Locus</td><td>Primer</td><td>Location of intergenic sequence</td></tr><tr><td>atpl</td><td>sll1322</td><td><p>Forward 5' -AACTGCAGCCTCTTTACCCCGTCAATCTCAC-3'</p>Reverse 5'-GGGGTACCCCAAGAGGTTGCAAATGTTTGCC-3'</p></td><td>\( 177591-177320 \)</td></tr><tr><td>ndbA</td><td>slr0851</td><td><p>Forward 5'-AACTGCAGTTATCTGCTTGGTTTGCTTGCCAG-3'</p>Reverse 5'-GGGGTACCGGCAAAGCCGCCCCCGACAATA-3'</p></td><td>\( 1336799-1337359 \)</td></tr><tr><td>catD1</td><td>slr1137</td><td><p>Forward 5'-AACTGCAGTCTGTGCTGAGTTGTGTGGTGC-3'</p>Reverse 5'-GGGGTACCCCATGGATTCCGTTGGAGCCGG-3'</p></td><td>\( 791559-791819 \)</td></tr><tr><td>tkt</td><td>sll1070</td><td>Forward 5'-AACTGCAGATAGTGGATGTAGCCCTATCCAAC-3'</p>Reverse 5'-GGGGTACCGGCTAAAAAGCGAATGGCATTAATA-3'</p></td><td>\( 820479-819919 \)</td></tr><tr><td>pgi</td><td>slr1349</td><td>Forward 5'-AACTGCAGTTGGTGGTTAACCACACACTGTC-3'</p>Reverse 5'-GGGGTACCGAGGCCACCATGGTAATAAAGC-3'</p></td><td>\( 1744103-1744558 \)</td></tr><tr><td>pdh</td><td>sll1721</td><td>Forward 5'-AACTGCAGAGCCTTCGCCTTTGTGCCCTAAT-3'</p>Reverse 5'-GGGGTACCCCGTCCCATTTCTTCGTCAAGGG-3'</p></td><td>\( 955927-955367 \)</td></tr><tr><td>ppc</td><td>sll0920</td><td>Forward 5'-AACTGCAGAAACGCCACTATTTAGTTTTTGTT-3'</p>Reverse 5'-GGGGTACCACCATTGCCATTACCAGACCAG-3'</p></td><td>\( 1997674-1997191 \)</td></tr><tr><td>cydA</td><td>slr1379</td><td>Forward 5'-AACTGCAGGCGTGAGTCAGCAGAAGAGGAA,</p>Reverse 5'-GGGGTACCGGCAGTGACGGCAAATTGTAGC-3'</p></td><td>\( 673559-674188 \)</td></tr></tbody></table>
List of primer and location of intergenic sequences used in this study 표에서 Locus가 slr1379 일 때 Gene 은 뭐야?
cydA