<h1>결과 및 고찰</h1><p>Pars 프로모터의 발현율을 lacZ 보고 유전자에 의해 암호화되는 \( \beta \)-galactosidase 활성 측정을 통하여 조사할 수가 있다. 다른 황 농도를 갖는 배지에서 성장한 균주로부터의 \( \beta \)-galactosidase의 활성 측정은, 각 N.crassa 균주를 Vogel의 최소 배지에서 배양한 후에, 멸균 증류수로 균사를 세척한 뒤에 측정되고 (Fig. 3 에서 0 시간), 다시 다른 조건의 황 농도를 갖는 배지에서 12 시간 배양된 후에 수행되었다. N.crassa RLM 35-35의 heterokaryon 혹은 homokaryon 형질전환체의 성장 속도는 race tube에 접종 후, \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 배양기에서 \(3 \sim 4\)일 동안 관찰하였으며 \(V\)(성장속도)\(=\)성장한 길이\(/\)시간으로 계산되었다. Fig. 3의 그래프에서 나타나듯이, 황이 결여된 \( \left(0.1 \mathrm{mM} \mathrm{~MgSO}_{4}\right)\) 배지에서는 배양 12 시간 후에 \( \beta \)-galactosidase의 활성이 약 5 배 중가한 것을 볼 수가 있다. Pars-lacZ를 갖지 않는 N.crassa RLM 35-35 자체에서는 활성의 증가가 관찰되지 않았음으로 증가된 활성은 Pars-lacZ의 발현에 기인하였음을 알 수가 있다. 또한 heterokaryon 보다는 homokaryon에서 \( 17 \% \) 정도 더 높은 \( \beta \)-galactosidase 활성을 보였음으로, 유전자 copy에 의한 dose effect로 생각할 수가 있으나 활성의 큰 차이는 없었다. N. crassa RLM 35-35 homokaryon과 heterokaryon의 성장속도 측정결과, homokaryon의 성장속도가 heterokaryon의 성장속도보다 평균 \( 16.5 \% \)도 빠른 것으로 나타났다. 위의 결과들로 미루어 본다면 도입된 외부 유전자의 발현에 homologous 균주가 heterologous 균주보다 더 효율적이라는 것을 간접적으로 알 수 있었다.</p><p>N.crassa ars-1 유전자의 발현 조절은 positive regulator인 CYC3와 negative regulator들인 SCON에 의해서 이루어지는 것으로 보고되었다. 하지만 이들이 ars 프로모터에서 인식하는 서열에 대한 보고는 없었으며, 대략의 프로모터 위치를 파악한 논문이 1989년 Paietta에 의해 보고되었다. 본 실험을 통하여 \( \beta \)-galactosidase를 통한 ars-1 프로모터의 strength를 측정하는 것이 가능하다는 것이 입증되었다. 따라서 ars-1 프로모터에 대한 좀더 수월한 분석이 가능하게 되었다고 생각된다. 5' 말단으로부터 순차적인 deletion을 갖는 프로모터를 lacZ 유전자에 연결하여 발현율을 측정하는 것도 가능하며, linker scanning 방법 등을 도입할 수도 있을 것이다. 더욱이 이런 방법들을 통하여 발현율이 높은 ars-1 프로모터의 변이 서열이 조립된다면 산업적인 응용도 가능할 수 있다. N.crassa는 산업적으로 응용될 경우에 매우 안전한 균주로 평가되고 있으며 과거 수십 년 간에 축적된 유전학적 연구 결과는 매우 유용한 것으로 생각된다. 더욱이 최근에 완료되어 이용이 가능한 유전체 서열을 분석하면, 순수 연구뿐만 아니라 더욱 빠른 응용 연구도 가능하다 할 것이다. 따라서 최근 지난 수십 년 동안에 축적된 유전학적, 분자생물학적 지식 기반 및 유전체 정보를 이용한 N.crassa의 산업적인 응용 연구 활발하게 수행되고 있다. 최근 N.crassa를 숙주로 이용하여 이질 단백질을 생산하는 특허를 취득한 경우와 식물 단백질을 발현시킨 연구 보고가 있었다.</p><p>본 연구에서는 ars-1 프로모터가 N. crassa에서 황의 농도 조절에 의해서 이질 단백질의 발현 조절에 대한 가능성을 보여주었다는 것과 lacZ와 같은 보고유전자의 연결에 의해서 더 자세한 프로모터의 특성을 연구하는 것이 가능하다는 보여주었다. 이는 N.crassa로부터 ars-1 프로모터의 발현을 더욱 세밀하게 연구할 수 있는 방법을 제시한 것이며, 더욱 높은 발현율 갖는 프로모터의 조립도 가능할 것으로 생각된다. 이후에는 N.crassa로부터 외부 이질 단백질의 발현 실험도 필요할 것으로 생각된다.</p>
논문에서는 N.crassa RLM 35-35의 homokaryon 혹은 heterokaryon 형질전환체의 성장 속도는 어디에 접종 후, \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 배양기에서 관찰하였지?
race tube