<h1>재료 및 방법</h1><h2>동물실험 디자인</h2><p>실험동물은 \(5\)주령 된 암컷 ICR 마우스를 (주)오리엔트바이오(Korea)에서 구입하여, \(7\)일간의 적응기를 거쳐 본 실험에 사용하였다. 사육실 환경은 온도 (\( 22 \pm 2{ }^{\circ} \mathrm{C}\)), 습도(\(20\)-\(55\%\)) 및 광주기(명암 \(12\)시간 간격)가 조절되며, 모든 실험동물은 사료와 물을 자유 급식하였다. 일주일간의 적응기 후 실험동물은 그룹당 \(6\)마리씩 총 \(3\)그룹으로 구분하였다. 정상 대조군(CTL)은 일반 사료(\(5\)L\(79\), Lab Diet, St. Louis, USA)를 급여하였고, 고지방 사료 처리군 (HFD)은 \( 45 \% \) 지방이 함량된 사료 (D\(12451\), Research Diets, New Brunswick, USA)를 \(3\)주간 공급하였다. 저식이섬유 사료 처리군(LFD)은 \( 0.1 \% \) 식이섬유가 함유되게 제조하여 (DooYeol Biotech, Seoul, Korea)를 \(3\)주간 급여 하였으며 각 사료의 일반성분은 Table \(1\)에 나타내었다. 실험동물 사육 기간 동안 물과 식이는 제한 없이 공급하였다. 본 실험은 제주대학교 실험동물윤리위원회의 사전심의를 받아 진행하였다(ACUC-JNU: \(2016\)-\(0045\)).</p><h2>체중 및 식이음수 섭취량 측정</h2><p>체중 및 식이음수 섭취량은 전 실험기간 동안 주 \(1\)회 측정하였고, 실험동물을 한 마리씩 케이지에 수용하여 각각 실험동물 개체별로 측정된 사료 및 물을 급여한 \(24\)시간 후 섭취잔량을 측정하여 산출하였다.</p><h2>분변 채취 및 장내미생물생태분석</h2><p>실험동물의 분변은 실험동물 개체별로 수용된 케이지에 절식망을 설치하여 \(5\)시간 이내에 낙하된 분변을 채취한 뒤, \( -80^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하였다. 분변 미생물 DNA는 PowerFecal DNA isolation kit (MOBIO Laboratories Inc., Germantown, USA)를 이용하여 추출하였다. 추출된 DNA는 \( 16 \)S rRNA 유전자의 V\( 4 \) 부분을 증폭시킨 후 \(2\)-step PCR을 통해 Illumina MiSeq 플랫폼에 맞춰library를 제작하였고, 시퀀싱(sequencing)은 마크로젠(Seoul, Korea)에서 수행하였다. 장내미생물생태는 MOTHUR를 사용하여 전처리 및 분석하였다.</p><h2>통계분석</h2><p>통계학적 분석은 ANOVA를 사용하여 유의성검정을 실시하였고, 유의성이 있을 때 사후검정으로 Tukey's HSD test를 사용하였다(\( p<0.05 \)). 그룹간의 비교는 Duncan's multiple range test를 실시하였으며, \( p<0.05 \)일 때 유의성이 있는 것으로 판단하였다. 각 그룹간 미생물생태비교에서는 AMOVA로 유의적 차이를 판단하였고 Non-metric multidimensional scaling (NMDS) plot으로 나타내었으며, genus 수준의 abundance 차이는 METASTATS로 비교하였다. \( 16 \)S rRNA 유전자 기반 metabolic pathway 추정은 PICRUSt 를 이용하여 비교하였고, STAMP v\(2.1.3\)를 사용하여 heatmap으로 나타내었다. 이는 ANOVA로 유의성 검정을 실시하였고, 유의성이 있을 때 Tukey's HSD test로 사후검정 하였다(\(p<0.01\)). 또한 이에 따른 계통수 분석은 The Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean 방법을 사용하여 나타내었다.</p>
체중 및 식이음수 섭취량을 한 주 동안 측정한 횟수는 몇번이야?
\(1\)회