<h1>초록: 막 전위 감지 탈인산화 효소, Ci-VSP의 유사 탈인산화 효소 도메인의 발현과 정제</h1><p>최근에 Ciona intestinalis에서 확인된 막 전위 감지 탈인산화 효소는 이온 채널과 유사한 막 통과 도메인과 유사 탈인산화 효소 도메인으로 이루어져 있다. 이 Ci-VSP는 그 막 통과 도메인에 의해 막 전위 변화를 감지하고 유사 탈인산화 효소에 의해 인산화된 이노시틸 인지질들에 대한 탈인산화 활성을 보이는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 6개의 히스티딘이 융합된 Ci-VSP의 유사 탈인산화 효소 도메인의 발현 시스템 구축을 추구하였다. 그래서 본 논문은 그 시스템의 구축과 발현 그리고 정제 조건 확립, 마지막으로 그 효소 동력학적인 활성을 pNPP에 대한 검토한 결과를 보고한다. 본 연구 결과에 따르면 Ci-VSP(248-576)-His 단백질 발현 및 정제시에 다른 단백질들의 정제 조건과 다르게 \( 25 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{NaCl} \) 과 \( 100 \mathrm{mM} \) 정도의 이미다졸이 필요함을 확인하였다. 정제된 단백질을 가지고 탈인산화 효소의 대표적인 기질인 pNPP를 이용하여 그 동력학적인 상수 측정을 시도한 결과 정상 상태 동력학 측정 조건으로 온도 \( 37^{\circ} \mathrm{C}\), \(\mathrm{pH} 5.0 \) 내지 5.5, 반응 시간 30분 이내, 반응 단백질 양 \( 2.0 \mu \mathrm{g} \) 이내가 적합하다는 점을 알게 되었다. 이러한 확립된 조건을 토대로 pNPP에 대한 동력학적 상수를 측정한 결과 \( \mathrm{K}_{\mathrm{m}} \)값은 \( 354 \pm 0.143 \mu \mathrm{M} \)이며 \( \mathrm{V}_{\max } \)는 \( 0.0607 \pm 0.0137 \mu \mathrm{mol} / \mathrm{min} / \mathrm{mg} \) 이며 \( \mathrm{k}_{\mathrm{cat}} \)값은 \( 2.359 \pm 0.009751 \mathrm{~min}^{-1} \)인 것으로 확인되었다. 이를 통해 본 연구는 Ci-VSP(248-576)-His의 순도 높은 정제 결과와 pNPP에 대한 높은 활성 보임을 제시하였다. 이러한 연구 결과를 통해 향후 Ci-VSP에 대한 구조적인 연구 등을 포함하는 다양한 생화학적인 연구가 수행되리라 본다.</p>
통과 도메인에 의해 무슨 변화를 감지하나요?
전위 변화