<h1>결과 및 고찰</h1><h2>파이토케미칼이 전지방세포 3T3-L1 성장에 미치는 영향</h2><p>Genistein을 포함한 4종류의 파이토케미칼에 의한 마우스 전지방 세포주 3T3-L1 세포 성장에 미치는 영향을 연구하기 위하여, 마우스 3T3-L1세포주에 genistein (Gen), resveratrol (RES), capsaicin (CPS), 그리고 daidzein (DAID)을 각각 \(50 \mu \mathrm{M} \)씩 24시간 동안 처리한 후, cell viability assay를 수행하였다. 그 결과, capsaicin을 처리한 경우와 genistein을 처리한경우, 각각 가장 낮은 세포생존율을 보여 주었다. 이 중, genistein을 다양한 농도별(\(10, 25, 50, 100 \mu \mathrm{M} \))로 처리한후, cell viability asasy를 수행하였다. 그 결과, 처리한 genis-tein에 농도의존적으로 세포생존율이 감소됨을 확인하였다. 즉, \(10, 25 \mu \mathrm{M} \) genistein을 처리한 경우 대조군에비해 \( 90.4 \% \), \( 81 \% \)의 생존율을 보여 주었으며, \( 50, 100 \mu \mathrm{M} \) gen-istein 을 처리한 경우는 각각 약 \( 70 \% \)의 세포생존율을 보여주었다. 추후 모든 실험조건은 \(50 \mu \mathrm{M} \) genistein으로 선정하여 실험을 진행하였다.</p><h2>Genistein이 마우스 전지방 세포의 지방세포형성과정에 미치는 영향 연구</h2><p>마우스 전지방 세포 3T3-L1의 지방세포 형성과정중에 gen-istein이 미치는 영향을 확인하기 위하여 지방세포형성을 유도하면서 \(50 \mu \mathrm{M} \) genistein과 대조군으로는 DMSO를 각각 처리하였다. 그 결과, DMSO를 처리한 세포는 지방세포 형성이 정상적으로 일어난 반면 \(50 \mu \mathrm{M} \) genistein 을 처리한 세포에서는 지방세포형성이 저해되는 것을 확인하였다. 특히,Oil red O 염색을 수행한 후 세포를 관찰한 결과, 대조군의 경우 빨간색으로 염색됨을 확인하였지만, genistein을 처리한 경우 지방세포가 거의 관찰되지 않았다. 이러한 연구결과는genistein이 전지방 세포의 지방세포형성과정을 저해하는 효능이 있다는 것을 시사한다.</p><h2>Genistein에 의한 지방세포형성과정 억제 유전자 발현 분석</h2><p>Genistein에 의한 3T3-L1 세포주의 세포생존율 저해 및 지방세포형성 억제 효과를 유전자 발현 수준에서 이해하고자, 3T3-L1 세포주에 \(50 \mu \mathrm{M} \) genistein을 처리한 후, oligo DNAmicroarray 실험을 수행하였다. 발현을 분석한 결과, 1.5배 이상 발현 차이를 보여주는 유전자 중 obesity와 관련된 유전자만을 선별한 결과, 1.5배 이상 발현이 증가되는 유전자는 105개, 1.5배 이상 발현이 감소되는 유전자는 133개로 선별되었다. 발현이 증가되는 유전자 중 일부를 Table 2에 나타내었다. 이 중, sirtuin-1유전자는 히스톤과 비히스톤 단백질을 탈아세틸화하여 염증매개물질을 조절하는 NAD\( +\) 의존성 단백질/히스톤 탈아세틸화효소로서, 항노화, 항염 단백질로 알려져 있으며, sirtuin-1은 전사조절인자인 PPARgamma를 억제함으로써 fat mobilization을 억제한다고 보고되었다. 또한, 최근에는 sirtuin-1유전자와 비만과 관련된 대사질환의 조절과의 관련성에 대한 총설이 발표된 바 있다.<h2>파이토케미칼에 의한 sirtuin-1 유전자의 발현</h2><p>DNA microarray 실험 결과에서 genistein처리에 의해 발현이 증가된 유전자 중 sirtuin-1 유전자의 발현을 확인하였다. 즉, 마우스 전지방세포주 3T3-L1 세포주에 4종류의 파이토케미칼을 처리 한 후, sirtuin-1 유전자의 발현을 RT-PCR과 re-al-time PCR 방법으로 확인하였다. 그 결과, Fig. 3에서 보는바와 같이 sirtuin-1 유전자의 발현이 \( 50 \mu \mathrm{M} \) genistein의 처리에 의해 가장 높게 증가됨을 확인하였다.</p><h2>Srtuin-1 유전자의 발현 억제가 세포분화에 미치는 영향 연구</h2><p>Genistein에 의한 지방세포형성 억제과정 중에 sirtuin-1 유전자의 관련성을 증명하기 위하여, sirtuin-1 siRNA 를 이용한 실험을 수행하였다. 먼저, sirtuin-1 siRNA가 효과적으로 sir-tuin-1 유전자의 발현을 감소 시킬 수 있는지에 대해 확인하였다. 그 결과, sirtuin-1 siRNA의 transfection에 의해 sirtuin-1의 유전자의 발현이 급격하게 감소됨을 확인하였다. 활성이 확인된 sirtuin-1 siRNA와 대조구로서 negative con-trol-siRNA를 transfection시킨 세포에 genistein과 DMSO를 처리한 후, 7일 동안 지방세포형성과정을 유도하였다. 그 후, 지방형성정도를 확인하기 위하여 Oil red O 염색을 수행하였다. 그 결과, Fig. 4B에서 보는 바와 같이 negative controlsiRNA가 transfection된 세포와 보통세포에서는 genistein에의해 지방세포가 거의 형성되지 않은 반면 sirtuin-1이 knock-down된 세포에서는 다른 세포에 비해 지방세포형성 과정이 복구됨을 확인하였다. 이러한 연구 결과는 genistein이 지방세포형성 과정을 억제하며, sirtuin-1유전자의 발현이 지방세포형성의 저해과정과 밀접한 관련이 있음을 시사한다. 따라서, 본 연구결과는 파이토케미칼 genistein에 의한 유전체 수준에서의 유전자 발현변화를 분석하고 기능을 연구함으로써, gen-istein에 의한 항비만 활성의 새로운 분자생물학적 기전을 이해하는데 도움을 줄 것으로 기대된다.</p>
마우스 전지방 세포주 3T3-L1 세포 성장에 미치는 효과를 탐구하기 위해 어떤 과정을 거쳐서 시행했어?
마우스 3T3-L1세포주에 genistein (Gen), resveratrol (RES), capsaicin (CPS), 그리고 daidzein (DAID)을 각각 \(50 \mu \mathrm{M} \)씩 24시간 동안 처리한 후, cell viability assay를 수행