<h1>결과 및 고찰</h1><h2>다양한 P. tolaasii 변이 균주의 병원 특성</h2><p>이전 연구에서 시기와 장소를 달리하여 갈반병에 감염된 버섯에서 다양한 갈반병 유발 균주들을 분리하였고, 이들의 \( 16 \) S rRNA 유전자 염기서열을 GenBank database에 등록된 염기서열과 비교하여 Pseudomonas tolaasii 변이균주들(Pt 그룹)을 얻었다. Pt 그룹에 속한 균주들은 유전자 계통수 분석에서 서로 가깝게 위치하나, 세 그룹으로 나뉘어 있어 이들을 Pt \( \alpha \) (\( 6264 \), HK\( 1 \)-HK\( 5 \))와 Pt \( \beta \) (HK\( 7 \)-HK\( 22 \)), Pt \( \gamma \) (HK\( 23 \)) 소그룹으로 세분류 하였다.</p><p>갈반병 균주들의 중요한 병원 특성은 갈반병을 유발하는 독성펩티드인 tolaasin을 합성하여 분비하는 것으로, 이것은 P. reactans 균주가 분비하는 펩티드 물질인 WLIP (white line inducing principle)라는 물질과 반응하여 흰색의 침전을 형성한다. 이러한 반응을 이용하여 그간에 분리한 Pt 그룹 균주들의 흰색침강선형성능을 확인한 결과, 용혈활성과 갈반형성능을 모두 가진 P. tolaasii \( 6264 \) 및 HK\( 1 \)-HK\( 5 \) 균주들만이 P. reactans ATCC \( 51314 \) 균주와의 대치배양에서 흰색의 침전을 형성하여, Pt 그룹에 속하는 변이 균주중 Pt \( \alpha \) 소그룹 균주들만이 tolaasin을 분비함을 확인하였다(Fig. \( 1 \)). 그러나, Pt\( \alpha \) 소그룹을 제외한 Pt\( \beta \) 와 Pt\( \gamma \) 소그룹에 속한 균주들은 모두 침전을 형성하지 않아 tolaasin류 펩티드를 생산하지 않음을 확인하였다.</p><h2>배양액의 Gel permeation chromatography</h2><p>Pt 그룹에 속하는 균주들의 병원 특성 구병을 위하여 Pt\( \alpha \) 소그룹의 P. tolaasii \( 6264 \) 와 HK \( 1 \), Pt\( \beta \) 소그룹의 P. tolaasii HK \( 19 \), Pt\( \gamma \) 소그룹에서 P. tolaasii HK \( 23 \) 변이주들을 각 소그룹별 대표 균주로 선발하였다. 이 균주들을 \( 48 \)시간 배양한 후 독성펩티드를 포함한 배양상징액을 농축한 후, gel permeation chromatography를 이용하여 균주들의 폡티드 합성 및 분비 특성을 조사하였다. 모든 균주들의 chromatogram은 조금의 차이는 있으나 앞과 뒤의 크고 작은 \( 2 \)개 또는 앞의 한 밴드가 얻어졌으며, 각각을 band A와 band B로 구별하였다. Gel permeation chromatography 방법을 통해 얻은 분획들 중 세포 독성을 보이는 분획을 추적하기 위하여 모든 분획에서 용혈활성을 측정하였다(Fig. \( 2 \)). 균주들은 크로마토그래피 분획들 중 \( 15 \) - \( 25 \)번 분획 부근에서 높은 흡광도를 보였고(band A), 특히 소그룹에 속한 Pt\( \alpha \) \( 6264 \)와 HK \( 1 \) 균주에서는 \( 40 \) - \( 60 \)번째 분획의 두번째 흡수 밴드(band B)에서도 큰 흡광도가 얻어졌다.</p><p>각 균주들의 분획별로 용혈활성을 즉정한 결과, Pt\( \alpha \) 소그룹에 속한 P. tolaasii \( 6264 \)와 HK\( 1 \) 균주는 band A와 band B 모두에서 용혈활성이 얻어졌다. Pt 소그룹에 속한 P. tolaasii HK\( 19 \) 균주에서는 모든 분획에서 용혈활성이 보이지 않았고, Pt\( \gamma \) 소 그룹인 P. tolaasii HK\( 23 \)균주는 band A에 속한 넓은 범위의 분획에서 용혈활성이 얻어졌다. P. tolaasii \( 6264 \)의 경우, 분자량을 알고있는 펩티드와 작은 단백질을 마커로 이용하여 분획들의 분자량을 확인하였을 때, band A는 약 \( 10^{4}-10^{5} \mathrm{Da} \)의 범위를 보였고, band B는 \( 1,000 \text{-} 4,000 \mathrm{Da} \) 범위로 확인되었다.</p>
갈반병 균주들의 중요한 병원 특성은 tolaasin을 합성하여 분비하는 것인가?
YES