<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 재료</h2><p>본 실험에서는 \( 2019 \)년 \( 6 \)월 셀투인에서 제공된 토마토(Lycopersicon esculentum)를 실험 재료로 사용하였다. 표품은 경희대학교 피부생명공학센터 천연물화학 실험실(KHU-\( 1906 \))에 보관되어 있다.</p><h2>기기 및 시약</h2><p>Column chromatography용 silica gel은 silica gel \( 60 \) (\(63-200 \mu \mathrm{m} \) ) (Merck, Darmstadt, Germany)을 사용하였고, thin layer chromatography (이하 TLC라고 함)는 silica gel \( 60 \mathrm{~F}_{254} \) (Merck, Darmstadt, Germany)를 사용하였다. NMR은 \( 400 \mathrm{MHz} \) FT-NMR spectrometer (Varian Inova AS \( 400 \), Varian, Palo Alto, CA, USA)로 측정하였고, infrarad (IR) spectrum은 Perkin model \( 599 \)B (Perkin-Elmer, Waltham, MA, USA)로 측정하였다. UV는 Spectroline (Model ENF-\( 240 \) C/F, Spectronics Corporation, Westbury, NY, USA)을 사용하였으며, 융점은 Fisher-Johns 융점측정기 (Fisher Scientific, Miami, FL, USA)를 사용하여 측정하였고, 미보정하였다.</p><h2>GSH 회복능을 이용한 항산화능 평가</h2><p>GSH회복능 측정은 미토콘드리아 내의 GSH와 반응하는 MitoFreSHtracer probe (M-\( 377 \), Cell\( 2 \)in, Seoul, Korea)를 이용하여 측정하였다. 사용된 세포는 인간의 탯줄 유래 중간엽줄기세포(Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cell, hUC-MSC) passage number \( 15 \)로, 분열과 성장이 더딘 노화상태의 세포이다. 이 세포를 \( 96 \) well optically clear bottom plate (\( 6055300 \), PerkinElmer, Waltham, MA, USA)에 \( 3 \times 10^{4} \)cells \( / \mathrm{mL} \)로 \( 100 \mu \mathrm{L} \)씩 분주하고 \( 24 \)시간 동안 \( 10 \% \) fetal bovine serum (\( 16000044 \), Gibco, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) \( +1 \% \) penicillin-streptomycin (\( 15140122 \), Gibco, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)가 든 Minimum Essential Medium \( \alpha \) (\( 12561056 \), Gibco, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) 조건에서 배양한 후 토마토 추출물을 첨가한 배지를 농도별 \( (5, 10, 20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)로 제조한 후 세포에 처리하고 \( 24 \)시간동안 배양하였다. \( 24 \)시간 후 배지를 제거하고 Hank's Balanced Salt Solution (HBSS, LB \( 003 \text{-} 02\), WELGENE, Gyeongsan, Korea)로 \( 2 \)회 세척하여 남아있는 성분을 최대한 제거했다. 그런 다음, \( 15 \mu \mathrm{M} \) MitoFreSHtracer로 \( 1 \)시간 동안 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 염색했다. \( 1 \)시간 후 MitoFreSHtracer를 제거하고, HBSS \( 100 \mu \mathrm{L} \)를 넣은 채로 operetta high-content imaging system ( \( \mathrm{HH} 12000000 \), PerkinElmer, Waltham, MA, USA)을 사용하여 \( 510 \mathrm{~nm} \)와 \( 580 \mathrm{nm} \) 에서의 형광 intensity를 측정하였다. 추출물을 처리하지 않은 대조군의 GM, GH 값을 기준으로 추출물에 의해 달라진 GM, GH 값을 비교하여 GSH회복능을 확인하였다. 실험결과는 각각의 시료에 대한 Mean \( \pm \mathrm{SEM} \) 으로 나타내었으며, 통계분석에 의한 요의성 검증은 Graph Pad Prism (Graph Pad Software, San Diego, CA, USA)을 이용하여 one-way ANOVA 분석을 시행하였다.</p>
GSH회복능 측정에서 사용된 세포는 무엇인가?
인간의 탯줄 유래 중간엽줄기세포