<h1>재료 및 방법</h1><h2>균주 및 배양 조건</h2><p>Pseudomonas sp. LG2는 lignocellulose를 분해 할 수 있는 균주로서 이미 보고한 균주이며, Pseudomonas agar F (Merck, Germany)배지에 배양 보관하며 사용하였다. 실험에 사용된 배지는 \( 1 \% \) 탄소원, \( 0.2 \%\left(\mathrm{NH}_{4}\right)_{2} \mathrm{SO}_{4}\), \(1 \% \mathrm{Na}_{2} \mathrm{HPO}_{4} \). \( 12 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \( 0.1 \% \mathrm{KH}_{2} \mathrm{PO}_{4}\), \( 0.02 \% \mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \( 0.02 \% \mathrm{NaCl} \), \( 0.005 \% \mathrm{CaCl}_{2} \cdot 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \( 0.6 \% \) yeast extract, \( \mathrm{pH} 7.0 \) 인 배지를 \( 250 \mathrm{ml} \) 삼각플라스크에 \( 50 \mathrm{ml} \) 분주하여 살균하였으며, 균주는 MRS 배지에 48 시간 동안 종균 배양한 균을 \( 1 \% \) 가 되도록 접종하고 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 150 \mathrm{rpm} \) 으로 일정 기간 동안 배양했다. 배양액을 각 기간마다 채취한 후, Whatman No. 1로 여과하여 회수하고, \( 10,000 \mathrm{rpm} \) 에서 10 분간 원심분리한 배양액은 연구의 목적에 따라 \( 40 \% \) 에서 \( 70 \% \) ammonium sulfate로 염석 및 투석하고 사용할 때 까지 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에 보관 또는 동결 건조하여 실험에 사용하였다.</p><h2>효소활성 및 단백질 함량 측정</h2><p>Ferulic acid esterase(FAE)의 활성과 ferulic acid 측정은 Ralet의 방법을 변형하여 \( 0.95 \mathrm{mM} \) methyl ferulic acid와 MOPS buffer(\( \mathrm{pH} 6.0 \)), 동결 건조한 조효소 단백질 \( 10 \mathrm{mg} \) 을 증류수 \( 10 \mathrm{ml} \) 에 용해한 조효소액을 혼합 교반하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 동안 반응시키고 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 분간 처리하여 효소반응을 정지시킨 후 UV spectrophotometer(UA-3000, Pharmacia, Sweden)를 사용하여 \( 315 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였다. 효소활성은 분당 \( 1 \mu \mathrm{M} \) 의 ferulic acid를 유리시키는 효소의 량으로 계산했다. 또한 ferulic acid는 u-bondapack C 18\((25 \mathrm{~cm} \) column)을 이용한 HPLC(AKTA system. Sweden)로도 확인했다. 분석 조건은 column을 먼저 \( 0.02 \mathrm{M} \mathrm{NaOH} \) 와 \( 0.02 \mathrm{M} \) phos-phoric acid가 함유한 \( 15 \% \) acetonirile로 평형화 했고, 4 단계 acetontrile 구배로 용출 했다. 즉, 15-35\(\%\) acetonitrile로 10분, 35-70\(\%\) acetonitrile로 5분, \( 70-97 \% \) acetonitrile로 1분, 97-15\(\%\)acetonitrile로 용출하면서 \( 315 \mathrm{~nm} \) 에서 확인하였다. Xylanase 활성은 이미 앞에서 보고한 bincinhonic 방법에 따라 \( 1 \% \) oat spelt xylan을 분해하여 생성되는 환원 당의 량을 조사하여 효소활성을 측정하였다. 효소활성은 \( 37^{\circ} \mathrm{C}\), \(\mathrm{pH} 6.0 \) 에 분당 \( 1 \mu \mathrm{M} \) 의 환원당을 분리하는 량을 1 unit로 정의했다. 배양액의 단백질 함량은 bovine serum albumin을 표준 단백질로 하는 Coomassie 단백질 분석 시약(Bio-Rad)을 사용한 Bradford의 방법으로 측정했다.</p>
Pseudomonas sp. LG2 균주를 배양 보관할 때 어떤 배지를 사용했어?
Pseudomonas agar F