<h1>재료 및 방법</h1><h2>톨라신의 분리 및 정제</h2><p>P. tolaasii 6264 균주를 PAF 액체배지에 접종한 후, \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 18시간 이상 정체기에 도달하도록 진탕배양하였다. 균주 배양액을 \( 8,000 \mathrm{rpm} \) 으로 30분간 원심분리하여 세균을 제거한 후, 배양여액을 취하여 \( 30 \% \) 의 ammonium sulfate를 가하고, \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간 동안 정치하였다. 이 후에 SW28 rotor (Beckman Instruments Inc., Palo Alto, CA, USA)를 이용하여 \(20,000 \mathrm{rpm}\)에서 1시간 동안 초원심분리하여 침전을 분리하였다. 원심 분리로 침전시킨 톨라신을 완충액으로 재현탁하고 실온에서 4시간 동안 투석하여 glass-teflon으로 균질화한 후 분액으로 만들어 \( -80^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 보관하며 사용하였다.</p><h2>톨라신의 용혈활성 측정</h2><p>톨라신의 용혈활성은 쥐의 적혈구를 이용하여 측정하였다. 용혈활성 측정에 사용한 적혈구는 HBS 완충액으로 \(10\)배 희석한 후 반응용액에 \( 1 \% \)가 되도록 첨가하였다. \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 1 \% \) 적혈구액을 \(30\)분 이내에 모두 용혈시키는 톨라신의 농도를 \( 1 \mathrm{HU} \) (Hemolytic unit)로 정하여 사용하였다. 용혈활성은 UV/Vis 분광광도계(U-2000, Hitachi, Tokyo, Japan)를 이용하여 \( 600 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도의 감소를 측정하여 결정하였다. \( \mathrm{pH} \) 변화에 따른 활성변화를 축정하기 위하여 사용한 \( \mathrm{pH} \) \(6\) 과 \(7\) 완충액은 \( 10 \mathrm{mM} \) HEPES 완충액에 생리식염수 \( (150 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{NaCl}\), \(5 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{KCl} \), \( 1 \mathrm{mM}\ \mathrm{MgSO}_{4} \)) 성분을 가하여 만들었고, \( \mathrm{pH} \) \(8\)과 \(9\)는 \( 10 \mathrm{mM} \) Tris 완충액으로 제조하였다. \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 의 농도에 따른 용혈활성은 기존의 톨라신 용혈활성 측정방법을 기본으로 하여 \( \mathrm{Zn}^{2+} \)와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 을 HBS 완충액에 \( 10 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 가 되도록 첨가하여 측정하였다.</p>
HBS 완충액으로 10배 희석한 후 반응용액에 1퍼센트가 되도록 첨가한 쥐의 적혈구를 이용하여 톨라신의 A를 측정하였는 데, A는 무엇인가?
용혈활성