<h1>재료 및 방법</h1><h2>공시균주 및 배지</h2><p>본 실험에 사용하는 느타리버섯(Pleurotus astreatus)과 느타리버섯에 푸른곰팡이병을 일으키는 Trichoderma virens KCCM 11246 곰팡이는 농촌진흥청에서 분양 받아 사용하였고, 세균성 갈색무늬병을 일으키는 Pseudomonas tolaasii ATCC-33618는 경남과학기술대학교 제약공학과 생물공학 실험실에 보존중인 것을 사용하였다. 느타리버섯 및 곰팡이의 보존을 위한 배지는 PDA (potato dextrose agar), 세균의 보존배지는 NA (nutrient agar)배지를 사용하였다. 느타리버섯의 재배를 위한 폐면배지는 산청느타리버섯 연합회의 버섯농가에서 사용하는 배지를 사용하였다.</p><h2>시험재료</h2><p>실험에 사용한 두충 및 지리오갈피 등은 농가에서 직접 구입하여 사용하였고, 홍화대는 홍화를 수확하고 폐기처리하기 위하여 쌓아둔 홍화줄기를 구입하여 사용하였다. 한방슬러지는 탕제원 및 인근의 한의원에서 폐기처리 되는 것을 무작위로 수거하여 사용하였다. 야생 쑥은 지리산 기슭의 야산에서 10월 말에 채취하여 사용하였다. 그리고 이 이외의 폐면 및 볏짚 등은 지리산 산청느타리버섯연합회에서 느타리버섯을 재배할 때 사용하는 재료를 기준으로 하였다.</p><h2>일반성분 분석</h2><p>한방약재의 일반성분 분석은 AOAC법에 의하여 3회 반복 실험하여 통계처리 하였다. 조회분은 \( 550^{\circ} \mathrm{C} \) 직접회화법, 조지방은 soxhlet 지방추출법, 조단백은 micro-Kjeldahl법으로 측정하였다.</p><h2>한방약재 첨가 평판배지</h2><p>두충, 지리오갈피, 홍화대, 야생 쑥 및 한방슬러지는 \( 1 \sim 2 \mathrm{cm} \) 길이로 절단한 다음 완전히 건조시켜 80 mesh로 분쇄한 후 \(0 \sim 9\% (\mathrm{w} / \mathrm{w}) \) 농도범위로 첨가하고 agar를 \( 1.5 \% \) 첨가하여 \( 120^{\circ} \mathrm{C}, 15 \)분 멸균한 다음 petri dish에 분주하여 평판배지를 제조하였다. 제조한 평판배지에 느타리버섯 종균의 접종은 코르코볼 No. 3(직경 \( 5 \mathrm{~mm} \) )로 원통 블록형으로 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 배양하면서 버섯균사의 성장상태를 관찰하였다.</p><h2>한방약재 첨가 폐면배지</h2><p>한방약재를 첨가한 폐면배지에서 느타리버섯의 균사성장 상태를 검토하기 위하여 버섯재배 농가에서 발효를 끝낸 폐면 배지에 여러 종류의 한방약재 및 한방슬러지를 각각 \( 9 \% \)씩 첨가하여 잘 혼합 다음 \( 180 \mathrm{ml} \) 유리병에 충진시켜 \( 121^{\circ} \mathrm{C}\), 30분 멸균시킨 후, 미리 배양하여 준비해둔 느타리버섯의 액체종균 \( 10 \mathrm{ml} \)를 배지 상층부에 균일하게 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)의 항온기에서 8일 동안 배양하면서 느타리버섯 균사의 성장 길이를 측정하였다. 대조구로는 버섯재배 농가에서 사용하는 폐면배지를 그대로 사용하였다.</p><h2>한방약재의 \( \mathrm{pH} \) 측정</h2><p>80 mesh로 분쇄한 각 한방약재의 시료 \( 10 \mathrm{~g} \) 에 증류수 \(90 \mathrm{ml} \)를 첨가하고 실온에서 2시간 동안 천천히 교반시킨 다음 \( 121^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20분 동안 멸균한 후 여과지로 여과한 여액의 \( \mathrm{pH} \)를 측정하였다.</p><h2>버섯병원균의 생육</h2><p>\( 300 \mathrm{ml} \) 삼각플라스크에 \(9\%\) 한방약재 및 한방슬러지의 각 추출용액 \( 100 \mathrm{ml} \)를 첨가하고 \( 121^{\circ} \mathrm{C}\), 15분 멸균하여 제조한 액체배지에 버섯재배 시 갈반병을 유발하는 P. tolaassi의 전배양액 \( 5 \mathrm{ml} \)을 접종한 다음 \( 37^{\circ} \mathrm{C}\), 20시간 배양한 후 \( 660 \mathrm{~nm} \)에서 배양액의 흡광도를 측정하였다. 대조구로는 LB배지를 사용하였다. 푸른곰팡이 병을 유발하는 T. virens의 생육에 미치는 영향은 한방약재 및 한방슬러지의 각 분말 \( 9 \% \) 와 \( 1.5 \% \) 의 agar을 첨가하여 제조한 평판배지 중앙에 곰팡이를 코르코볼 No.3(직경 \( 5 \mathrm{~mm} \) )로 접종하고 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 배양하면서 곰팡이의 균 사성장 정도를 관찰하였다.</p><h2>한방재료 배지의 현장적용 시험</h2><p>느타리버섯 생산을 위한 현장적용 실험은 지리산 산청느타리버섯연합회원 중 6 농가의 신청을 받아 폐면배지에 \( 9 \%(\mathrm{~W} / \mathrm{W}) \) 한방슬러지를 첨가하여 2월 7월에 걸쳐 느타리버섯의 재배를 행하였다. 배지의 발효는 폐면 \( 1,720 \mathrm{~kg} \), 볏짐 \(100 \mathrm{kg} \) 및 한방슬러지 \( 180 \mathrm{~kg} \)을 잘 혼합한 다음 버섯재배농가에서 폐면배지를 발효시키는 종래의 방법에 준하여 발효시켰다. 생산된 느타리버섯의 품질은 도매시장에 출하하는 느타리버섯 갓의 크기와 버섯대의 굵기를 기준으로 특품, 상품 및 하품으로 나누어서 평가하였다. 그리고 단위면적당 느타리버섯의 생산량 검토는 재배사 1 동 \( \left(132 \mathrm{~m}^{2}\right) \)에서 생산되는 느타리버섯 특품, 상품 및 하품의 박스 \( (4 \mathrm{~kg}) \) 수로 나타내었다.</p>
본 실험에 사용하는 것엔 뭐가 있어?
느타리버섯