<h2>기기</h2><p>본 연구에서 사용된 기기에는 auto clave (DAE HAN BIO LINK Co., Ltd., Eumseong, Korea), \(\mathrm{CO_2} \) incubator (MCO-175; SANYO Electric Co., Ltd., Osaka, Japan), shaking incubator (VS-8480SF; Vision Scientific Co., Ltd., Daejeon, Korea), rotary evaporator (Rotavapor R-114; B\( \ddot{\mathrm{U}} \)CHI AG, Flawil, Switzerland), micro high speed centrifuge (Micro 17TR; Hanil Science Industrial Co., Ltd., Gimpo, Korea), centrifuge (Union 32R; Hanil Science Industrial Co., Ltd.), shaker (BF-350SK; Korea), microplate reader (Synergy HT; BioTek Instruments, Winooski, VT, USA) 등이 있다.</p><h2>시료의 추출</h2><p>본 연구의 시료인 동결 건조 분말인 마키베리 \( 100 \mathrm{~g} \)에 \( 85 \% \) 에탄올 \( 1 \mathrm{~L} \)를 더한 후 빛을 차단하여 \( 24 \mathrm{~h} \) 동안 보관하고 이를 감압 여과와 농축 과정을 걸쳐 추출물을 얻었다. 이를 3회 반복하고 얻은 물질을 1차 추출물로 하였다. 1차 추출물에 클로로포름 \( \mathrm{CHCl_{3}} \)과 증류수(DW)를 \( 300 \mathrm{~mL} \)씩 가한 후 분획 깔때기로 \( \mathrm{CHCl_{3}} \)층과 DW층으로 분리하고 DW층에 에틸아세테이트(EtOAc)를 \( 300 \mathrm{~mL} \) 더해 다시 분획을 시행하여 EtOAc층과 DW층을 얻었다.</p><h2>세포 생존율(Cell viability) 실험</h2><p>HaCaT cell과 B16F10 cell을 각각 96 well plate에 \( 1.5 \times 10^{4} \mathrm{cells/well} \)으로 분주하고 incubator \( \left(37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% ~\mathrm{CO}_{2}\right) \)에서 \( 24 \mathrm{~h} \)동안 배양하였다. DMSO에 분획된 추출물을 용해한 후 \( 10, 20, 40 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)의 농도로 세포에 처리하고 incubator에서 \( 24 \mathrm{~h} \) 동안 배양하였다. 배지가 있는 상대에서 MTS시약을 \( 20 \mu \mathrm{L} \) 씩 더하고 \( 3 \mathrm{~h} \) 동안 incubator에 보관하면서 formazan의 상태를 관찰한 후 microplate reader의 흡광도 모드 \( 495 \mathrm{~nm} \)에서 값을 구하였다. Cell viability 값은 대조군에 대한 시료 처리군들의 흡광도 차이를 백분율로 나타내었다.</p><p>Cell viability \( (\%)=(\mathrm{A}/\mathrm{B}) \times 100 \)</p><ul><li>\( A \): 시료 처리군의 흡광도</li><li>\( B \): 시료 무처리된 DMSO 용매 대조군 흡광도</li></ul>
배지가 있는 상대에서 MTS시약을 \( 20 \mu \mathrm{L} \) 씩 더하고 \( 3 \mathrm{~h} \) 동안 incubator에 보관하면서 formazan의 상태를 관찰한 후 microplate reader의 흡광도 모드 몇에서 값을 구하였는가?
495