<h2>Superoxide radical \( \left(\mathrm{O}_{2}^{-}\right) \)소거능</h2><p>각 농도별 추출물 \( (5,10,25,50,100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \) 을 증류수에 녹인 시료 \( 500 \mu \mathrm{L} \) 와 \( 0.1 \mathrm{M} \) tris-Hcl \( (\mathrm{pH} 7.4)\) \( 100 \mu \mathrm{L}, 0.1 \mathrm{mM} \) PMS \( 200 \mu \mathrm{L}, 0.5 \mathrm{mM} \) NBT \( 200 \mu \mathrm{L}, 0.5 \mathrm{mM} \) NADH \( 500 \mu \mathrm{L} \) 를 혼합하여 실온에서 10분간 반응시킨 뒤, \( 560 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군과 시료를 첨가한 실험군을 비교하여 \( \mathrm{O}_{2}^{-} \) radical 소거능을 다음의 계산식을 이용하여 백분율(\( \% \))로 나타내었다.</p><p>\( \mathrm{O}_{2}^{-} \)radical scavenging activity \( (\%)=\left(\mathrm{Abs}_{\mathrm{c}}-\mathrm{Abs}_{\mathrm{s}}\right) / \mathrm{Abs}_{\mathrm{c}} \times 100 \\ \)(\( \mathrm{Abs}_{\mathrm{c}} \) : Absorbance of control, \( \mathrm{Abs}_{\mathrm{s}} \) : Absorbance of sample)</p><h2>총 페놀 함량 측정</h2><p>총 페놀 함량은 Folin과 Denis의 방법에 따라 측정하였다. 증류수에 녹인 시료 \( 200 \mu \mathrm{L} \) 와 증류수 \( 1800 \mu \mathrm{L} \) 를 혼합 후, phenol reagent \( 200 \mu \mathrm{L} \) 를 혼합하여 실온에서 5분간 방치한 뒤, \( 2 \mathrm{~mL} \) 의 \( 7 \% ~ \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) 를 혼합하여 실온에서 90분간 방치시킨 후, \( 750 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 측정한 결과는 garlic acid를 시료와 동일한 방법으로 분석하여 작성한 표준 검량선으로부터 시료의 총 페놀 함량을 산출하였다.</p><h2>총 플라보노이드 함량 측정</h2><p>총 플라보노이드 함량은 Moreno 등의 방법에 따라 측정하였다. 증류수에 녹인 시료 \( 100 \mu \mathrm{L} \) 와 증류수 \( 400 \mu \mathrm{L} \) 를 혼합 한 뒤, \( 5 \% ~ \mathrm{NaNO}_{2} \) 용액 \( 30 \mu \mathrm{L} \) 를 가하여 6분간 방치하였다. \( 10 \% \) \( \mathrm{AlCl}_{3} ~ 30 \mu \mathrm{L} \) 를 더하여 6분간 방치 후, \( 4 \% ~ \mathrm{NaOH} 400 \mu \mathrm{L} \) 를 더하여 15분간 방치 후, \( 510 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 측정한 결과는 quercetin을 시료와 동일한 방법으로 분석하여 작성한 표준 검량선으로부터 시료의 총 플라보노이드 함량을 산출하였다.</p><h2>세포 배양</h2><p>실험에 사용한 C6 glial cell은 \( 100 \mathrm{units} / \mathrm{mL} \) penicillin-streptomycin과 \( 10 \% \) FBS가 함유된 DMEM 배지를 사용하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \)\( \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 배양하였다. 배양된 세포는 1-2일에 한번 배양액을 바꾸어 주면서 배양하였다. 세포가 T75-flask에 \( 80 \% \) 이상 분화되었을 때, PBS (\( \mathrm{pH} 7.4 \))으로 세포를 세척 한 후, \( 0.05 \% \) trypsin과 \( 0.02 \% \) EDTA 혼합액으로 부착된 세포를 분리하고 원심 분리를 통해 집적시킨 후, 피펫을 이용하여 세포가 골고루 분산되도록 잘 혼합하여 계대 배양하면서 실험에 사용하였다.</p>
실험에 사용한 C6 glial cell은 어떤 조건을 가진 배지인가?
\( 100 \mathrm{units} / \mathrm{mL} \) penicillin-streptomycin과 \( 10 \% \) FBS가 함유된 DMEM 배지