<h1>재료 및 방법</h1><p>본 실험에 사용된 조록나무 잎은 \( 2020 \)년 \( 8 \)월에 제주도 서귀포시 남원읍 신례리에서 채취하였다. 건조된 조록나무 잎은 분쇄하여 \( 70 \% \) ethanol 추출하였으며, 분말 \( 1 \mathrm{~g} \)에 \( 70 \% \) ethanol \( 500 \) \( \mathrm{mL} \)을 가하여 실온에서 \( 48 \)시간 동안 \( 2 \)회 반복하여 추출하였다. 이 후 추출액을 paper filter (TOYO ROSHI KAISHA, Tokyo, Japan)로 여과하였으며, 여과액을 감압농축기로 농축한 뒤, \( -110 \)\( { }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 동결 건조하여 분말로 제조하였다.</p><h2>미생물 배양 및 biorenovation 반응</h2><p>Biorenovation을 위한 미생물은 제주도 콩 재래 간장에서 분리한 Bacillus sp. JD\( 3 \)-\( 7 \)균주(KACC) \( 92346 \)P)를 사용하였으며, 최등에서 기술한 방법에 따라 genistein을 기질로 하는 생물전환 기반 스크리닝법을 통해 HPLC 분석한 결과, 가장 높은 전환률을 보인 균주로 선정하였다. Nutrient broth (Peptone \( 5.0 \) \( \mathrm{g} / \mathrm{L} \), Beef extract \( 3.0 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \) )를 이용하여 \( 30{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 18 \)시간 동안 배양 하였다. 이후 \( 4,000 \mathrm{rpm} \)에서 \( 15 \)분간 원심분리하여 회수한 균체를 \( 2 \)회 세척한 뒤, PG buffer (\( 50 \) mM Phosphate buffer, \( 2 \% \) Glycerin) \( 100 \mathrm{~mL} \) 에 현탁 하였으며, 기질을 넣지 않고 Bacillus sp. JD\( 3 \)- \( 7 \) 균체를 현탁한 대조군 (BJ)과 조록나무 잎 추출물 (DL) \( 100 \mathrm{mg} \) 첨가한 flask를 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 72 \)시간 동안 동일한 조건하에 biorenovation 반응하였다. 반응 종료 후 원심분리하여 pellet과 상등액을 분리한 뒤, pellet을 제거한 상등액을 \( -110^{\circ} \mathrm{C} \)에서 동결 건조하여 실험에 사용하였다.</p><h2>Biorenovation 전환물의 HPLC 분석</h2><p>시료의 HPLC 분석을 위하여 Shimadzu SpectroMonitor \( 3200 \) digital UV/Vis detector를 사용하였으며, \( 0.1 \% \) Trifluoroacetic acid (TFA, SAMCHUN, Pyeongtaek, Korea)가 첨가된 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) (Solvent A)와 acetonitrile (Solvent B, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)를 용매로 하였다. 분석 조건은 column (Phenomenex \( 4 \mu \mathrm{m} \) Hydro-RP \( 80 \mathring{A}, 250 \times 4.6 \mathrm{~mm} \) ), 온도 \( 40 \)\( { }^{\circ} \mathrm{C} \), 유속 \( 1.0 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \)으로 \( 254 \mathrm{~nm} \) 파장에서 실시하였으며, 조록나무 잎 추출물 (DL)과 biorenovation 생물전환 된 조록나무 잎 추출물(DLB) 그리고 대조군(BJ)를 dimethyl sulfoxide (DMSO,Sigma-Aldrich)로 용해하였다. 시료는 \( 30 \)분간 gradient 조건으로 분석하였으며, 용매의 구배는 acetonitrile (Solvent B)을 \( 0.1 \) min: \( 10 \% \) 에서 \( 30 \mathrm{~min}: 100 \% \)가 되도록 하였다.</p>
Biorenovation을 위해 사용한 미생물 균주는 무엇인가?
Bacillus sp. JD\( 3 \)-\( 7 \)균주(KACC) \( 92346 \)P)