<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>2016년 재배된 G. uralensis, G. glabra 및 SW의 추출물은 농촌진흥청 국립원예특작과학원 인삼특작부(Eumseong, Korea)에서 제공받아 사용하였으며, voucher specimen은 한국약용자원표 본관에 보관되어 있다. 건조시킨 G. uralensis, G. glabra 및 SW은 \( 50 \% \) ethanol을 이용하여 상온에서 72시간 동안 침지 후, 여과 및 감압 농축하여 시료를 조제하였다. 각 추출물은 dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma Co., St Louis, USA)에 녹여 \( 4{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 보관하면서, 실험 시 희석하여 사용하였다.</p><h2>시야</h2><p>In vitro 항산화 활성 측정 실험에 사용한 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazy(DPPH), 2-deoxyribose는 Sigma사에서, \( \mathrm{FeSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 는 Daejung Chemicals \( \& \) Metals Co. Ltd (Siheung, Korea)에서, EDTA disodium salt dehydrate 및 phosphoric acid는 Samchun Pure Chemical Co. Ltd (Pyeongtaek, Korea)에서 구매하여 사용하였다. Thiobarbituric acid (TBA), trichloroacetic acid (TCA)는 각각 Acros Organics (Fair Lawn, New Jersey, USA), Kanto Chemical Co. Inc (Tokyo, Japan)에서 구매하였으며, phenezine methosulfate (PMS), nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) disodium salt, nitrotetrazolium blue chloride (NBT) 시약은 Bio Basic Co. (Toronto, Canada)사에서 구매하여 실험에 사용하였다. C6 glial cell은 한국세포주은행(Korea Cell Line Bank, Seoul, Korea)에서 구입하여 실험에 사용하였다. 세포 배양을 위해 사용된 Dulbecco's modified eagle medium (DMEM) 배지, fetal bovine serum (FBS) 과 \( 100 \mathrm{units} / \mathrm{mL} \) penicillin streptomycin, trypsin EDTA 용액은 Welgene (Daegu, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 세포의 산화적 스트레스를 유도하기 위해 사용한 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 는 Junsei (Tokyo, Japan)사에서 구입하여 사용하였고, cell viability를 측정하기 위해 사용한 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) 및 ROS 생성량 측정을 위한 2'-7'-dichlorofluorescin diacetate (DCF-DA)는 Sigma사에서 구입하여 사용하였다.</p><h2>1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazy (DPPH) radical 소거능</h2><p>각 농도별 추출물 \( (5,10,25,50,100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \) 을 EtOH에 녹인 시료 \( 100 \mu \mathrm{L} \) 와 \( 60 \mu \mathrm{M} \) DPPH용액 \( 100 \mu \mathrm{L} \) 를 96-well plate에 혼합하여 30분간 실온에서 반응시킨 후, \( 540 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군과 시료를 첨가한 실험군을 비교하여 DPPH radical 소거능을 다음의 계산식을 이용하여 백분율(\( \% \))로 나타내었다.</p><p>DPPH radical scavenging activity \((\%)=\left(\mathrm{Abs}_{\mathrm{c}}-\mathrm{Abs}_{\mathrm{s}}\right) / \mathrm{Abs}_{\mathrm{c}} \times 100 \\ \)( \(\mathrm{Abs}_{\mathrm{c}} \) : Absorbance of control, \(\mathrm{Abs}_{\mathrm{s}} \) : Absorbance of sample)</p><h2>Hydroxyl radical \( (\cdot \mathbf{O H}) \) 소거능</h2></p>\( \cdot \mathrm{OH} \) radical 소거능 측정은 Fenton 반응을 따랐으며, \( 0.2 \mathrm{M} \) phosphate buffer saline (PBS)에 농도별 시료 용액 \( 1400 \mu \mathrm{L} \) 에 \( 10 \mathrm{~mM} \quad \mathrm{FeSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)-EDTA \( 200 \mu \mathrm{L}, 10 \mathrm{~mM} \) 2-deoxyribose solution \( 200 \mu \mathrm{L}, 10 \mathrm{mM} ~ \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} ~ 200 \mu \mathrm{L} \) 를 첨가하였다. 그 후 4시간 동안 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 배양 한 뒤, \( 2.8 \% \) TCA \( 1 \mathrm{~mL} \) 와 \( 1.0 \% \) TBA solution \( 1 \mathrm{~mL} \) 를 첨가하여 20분 동안 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 로 가열하고 실온에서 냉각시킨 뒤 \( 490 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군과 시료를 첨가한 실험군을 비교하여 \( \cdot \mathrm{OH} \) radical 소거능을 다음의 계산식을 이용하여 백분율(\( \% \))로 나타내었다.</p><p>\( \cdot \mathrm{OH} \) radical scavenging activity \( (\%)=\left(\mathrm{Abs}_{\mathrm{c}}-\mathrm{Abs}_{\mathrm{s}}\right) / \mathrm{Abs}_{\mathrm{c}} \times 100 \\ \)(\( \mathrm{Abs}_{\mathrm{c}} \) : Absorbance of control, \( \mathrm{Abs}_{\mathrm{s}} \) : Absorbance of sample)</p>
G. uralensis, G. glabra 및 SW의 추출물은 어디서 제공받아 사용했는가?
농촌진흥청 국립원예특작과학원 인삼특작부