<h2>실험동물 처치 및 시료채취</h2><p>6주간의 수영이 끝난 실험동물을 \( \mathrm{CO}_{2} \) gas로 가볍게 마취시킨 후 복부정중선을 따라 개복한 후 복부 대동맥으로부터 혈액을 채취한 후 \( 0.9 \% \) 생리식염수로 간장을 관류시켜 조직내 혈액을 제거하고 혈액 및 기타 부착물질을 평량한 다음, 간조직 \( 1 \mathrm{~g} \) 당 4 배량의 \( 0.1\mathrm{M} \) 인산칼륨 완충액(potassium phos-phate buffer) ( \( \mathrm{pH} \) 7.5)을 가하여 빙냉하에서 glass teflon homogenizer로 마쇄하였다. 이 마쇄액을 \( 600 \times g \) 에서 10 분간 원심분리하여 지질과산화 함량을 측정하기 위한 효소원으로 사용하였으며, 채취한 혈액은 원심분리하여 얻어진 상징액인 혈청을 얻어 이것으로 혈액 중 SOD 효소 활성도 분석을 위한 효소원으로 사용하였다.</p><h2>혈청 SOD 활성 측정</h2><p>혈청 슈퍼옥사이드 디스무타제 SOD 활성의 측정은 Oyanagui의 방법에 따라 정량하였다. 혈청을 인산칼륨 완충액으로써 100 배 희석하여 그 중의 100\( \mu 1 \)를 시험관에 넣고 여기에 증류수 \( 500 \mu 1 \), 시약 A (3 mM hydroxylamine/3 mM hypoxanthine) \( 200 \mu 1 \) 및 시약 B[\(7.5 \mathrm{mU} / \mathrm{ml} \) xanthine oxidase (XOD) with \( 0.1 \mathrm{mM} \) EDTA-2Na] 200\( \mu 1 \)를 넣고 vortex에서 잘 혼합한 다음, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 수조에서 40 분간 정치한다. 반응액에 시약 C (300 mg of sulfanilic acid/5.0 mg N-1-naphthyl-ethyl-enediamine in \( 500 \mathrm{ml} \) of \( 16.7 \% \) acetic acid) \( 2.0 \mathrm{ml} \) 를 넣어 잘 혼합하여 실온에서 20 분 동안 정치한 다음 \( 550 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 표준검량선에 준하여 혈청 중의 superoxide dismutase 활성을 측정하였다.</p><h2>혈청 MDA 함량 측정</h2><p>혈청 lipid peroxide의 함량은 Yagi 의 방법에 따라 혈청에 \( 1 / 12 \mathrm{~N} \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 와 \( 10 \% \) 인텅스텐산(phosphotungstic acid)을 가하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 분간 사전배양(preincubation)한 후 원심분리하여 침전물인 혈청단백질만 취하여 다시 \( 1 / 12 \mathrm{~N} \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 와 \( 10 \% \) 인텅스텐산을 가하여 원심분리한 후 침전물만을 취하여 증류수 \( 1 \mathrm{ml} \) 와 \( 0.67 \% \) 티오바르비투르산(thiobarbituric acid)과 \( 50 \% \) 아세트산을 가하여 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 50 분간 반응시켜 실온에서 냉각 후 \( \mathrm{n}-\mathrm{BuOH} \) 을 \( 5 \mathrm{ml} \) 를 첨가하여 10 분간 원심분리하여 생성된 홍색의 \( \mathrm{n}-\mathrm{BuOH} \) 층을 취하여 분광형광계를 사용하여 \(Ex: \ 515 \mathrm{~nm}, Em: 553 \mathrm{~nm} \) \) 흡광도를 측정하여 표준곡선에서 그 함량을 혈청 \( 1 \mathrm{ml} \) 당 malondialdehyde nmole로 표시하였다.</p><h2>자료 처리</h2><p>본 실험의 자료는 SPSS/PC \( { }^{+} \)package를 이용하여 처리하였으며, 각 측정 변인의 평균과 표준편차를 구하고, 집단간 - 운동강도별 차이를 알아보기 위하여 one-way ANOVA를 이용하였고, 사후 검정으로 Duncan's multiple range test를 이용하였다. 유의수준은 \( a=0.05 \) 로 설정하였다.</p>
혈청을 희석하여 시약들과 잘 혼합한 다음 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 수조에서 얼마 동안 정치하는가?
40 분간