<h2>살비활성 검정</h2><p>산해박 정유성분의 작은소피참진드기 유충 및 약충 대한 살비 활성 검정은 Stone과 Haydock 의 packet test로 검정하였다. 산해박 정유 추출물을 ethanol과 Triton X가 포함된 증류수에 희석시켜 제조된 다양한 농도(1,3 및 \( 5 \%) \) 의 시료를 \( 250 \mu \mathrm{L} \) 취한 후, \(\text{가로}5 \mathrm{~cm} \times \text{세로} 10 \mathrm{~cm} \) 크기로 자른 filter paper (chmlab group, \( 90 \mathrm{~mm} \) diameter, Barcelona, Spain)에 분주하였다. 시료를 처리한 filter paper는 fume hood에서 20분간 건조한 후, filter paper를 반으로 접어 양쪽을 집게(bulldog clip)로 막고 열린 한 쪽 입구를 통해 작은소피참진드기 유충 및 약충을 각각20 마리씩 넣어 봉하였다. 암조건의 incubator에 온도 \( 27 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \), 상대습도 \( 70 \pm 10 \% \) 에서 24 시간 경과 후 움직이지 않는 개체를 죽은 것으로 간주하여 살비율을 계산하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>각 시험은 3반복으로 수행하였으며, 본 시험을 통해 얻어진 결과는 SPSS 통계프로그램(Version 12.0, Chicago, IL, USA)을 퉁해 각각의 평균과 표준오차를 나타내었다.</p><h1>결과 및 고찰</h1><p>수증기 정유 추출법을 통하여 얻어진 산해박 뿌리 정유 추출물의 장내 미생물 5종에 대한 항균활성 및 작은소피참진드기에 대한 살비활성을 Table 1에 나타내었다. 산해박 정유는 장내 유해균 C. perfringens 및 E coli에 대해 inhibition zone이 \( 20.0 \) \( \mathrm{mg} / \mathrm{disc} \) 에서 각각 11.3 및 \( 13.1 \mathrm{~mm} \)로 나타났으며, 유익균 3종(B. bifidum, B. longum 및 L. casei)에 대해서는 항균활성이 나타나지 않았다. 한편, 산해박 정유성분의 작은소피참진드기에 대한 살비활성 검정 결과, 본 연구에서 실험한 농도인 1.0, 3.0 및 \( 5.0 \% \) 에서 유충과 약충에 살비활성을 나타내지 않았다.</p><p>GC-MS 분석을 통해 검출된 정유 구성물질 4'-hydroxyaceto-phenone, 2',5'-hydroxyacetophenone, 2'-hydroxy-5'-methoxyacetophenone, 4'-hydroxy-3'-methoxyacetophenone, myristic acid 및 palmitic acid의 장내 미생물 5종에 대한 항균활성을 Table 2 에 나타내었다. 산해박 정유의 구성성분 중에 2'-hydroxy-5'-methoxyacetophenone 또한 유익균 3종을 제외한 C. perfringens 및 E. coli에 대해 \( 10.0 \mathrm{mg} / \mathrm{disc} \) 에서 각각 12.1 및 \( 12.0 \mathrm{~mm} \)의 항균활성을 나타내었다. 그러나 4'-hydroxyacetophenone, 4'-hydroxy-3'-methoxyaceto-phenone, myristic acid 및 palmitic acid는 장내 미생물 5종에 대하여 어떠한 항균활성도 나타나지 않았다. 이전의 연구에 따르면 산해박 정유는 장내 미생물에 대한 항균활성 이외에도 살비활성, 항염작용 및 항당뇨 활성 등과 같은 생리활성이 밝혀져 있다고 알려져 있다. 약용식물로부터 유래한 많은 생리활성물질들은 장내 미생물에 대해 생리활성 있다는 연구 결과가 있으며, Yang 등은 백리향속의 Thymus tosevii 및 구성성분인 myrtenol이 장내 유해균 C. difficile, C. perfringens 및 E. coli에 대해 항균활성이 나타났다는 연구결과를 보고하였다.</p><p>산해박 정유에서 유래된 구성성분 중에 항균활성을 나타내는 2'-hydroxy-5'-methoxyacetophenone에 대하여 유도체 10종 (acetophenone, 2'-hydroxyacetophenone, 4'-hydroxyacetophenone, 2'-methoxyacetophenone, 4'-methoxyacetophenone, 2',4'-dihydroxy- acetophenone 2',5'-dihydroxyacetophenone, 2',4'-dimethoxy- acetophenone, 2',5'-dimethoxyacetophenone 및 2'-hydroxy-4'-methoxyacetophenone)을 선발하여 구조에 따른 장내 미생물 5종에 대한 항균활성의 생리활성 및 구조적 차이를 확인하였다(Table 3). 2'-Methoxyacetophenone는 C. perfringens 및 E coli에 대해 \( 10.0 \mathrm{mg} / \mathrm{disc} \) 에서 각각 17.3 및 \( 14.3 \mathrm{~mm} \) 의 inhibition zone으로 유도체 중에서 가장 높은 항균활성을 나타내었다. 4'Methoxyacetophenone은 C. perfringens 및 E. coli에 대해 각 각 16.1 및 \( 13.6 \mathrm{~mm} \)의 inhibition zone이 나타냈으며, 장내 유익균 B. bifidum (\( 11.5 \mathrm{~mm} \)) 에 대해서도 항균활성을 나타냈다. 2',4'-Dimethoxyacetophenone을 처리하였을 때에는 C. perfringens 에 대해서만 \( 11.0 \mathrm{~mm} \) 로 inhibition zone 값을 나타냈으며, 2',5'dimethoxyacetophenone은 C. perfringens 및 E. coli에 대해서 각각 14.0 및 \( 11.0 \mathrm{~mm} \) 의 inhibition zone이 나타냈다. 2'-Hydroxy4'-methoxyacetophenone의 경우에는 E. coli에 대해서만 \( 11.0 \mathrm{mm} \) 의 inhibition zone을 나타내었다. 그러나 acetophenone, 2'hydroxyacetophenone, 4'-hydroxyacetophenone, 2',4'-hydroxyacetophenone, 2',5'-hydroxyacetophenone은 5종 장내 미생물에 대해 항균활성을 나타내지 않았다. 2'-Hydroxy-5'-methoxyacetophenone 및 유도체 10 종 중에 항균활성을 보인 6개 화합물은 acetophenone의 구조에서 작용기(functional group)와 관련성을 나타냈다. Acetophenone 구조에 methyl group이 존재하는 경우, 선택적으로 장내 유해균에 대해 항균활성이 나타났으나, hydroxy group이 존재하는 경우에는 장내 미생물 5종에 대해 아무런 생육억제활성을 나타내지 않았다.</p><p>각각의 장내 미생물 균주에 대한 2'-hydroxy-5'-methoxyaceto-phenone 및 그의 유도체 10종의 최소저해농도(MIC)는 Table 4에 나타내었다. 2'-Methoxyacetophenone과 2'-hydroxy-5'-methoxy-acetophenone은 C. perfringens 및 E. coli에 대해 MIC를 측정한 결과, 모든 균주에 대하여 \( 5.0 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \)을 나타넸으며, 4'- methoxyacetophenone 및 2',5'-dimethoxyacetophenone 은 C. perfringens 및 E. coli에 대해 각각 5.0 및 \( 10.0 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \)의 MIC 값을 나타내었다. 또한 4'-methoxyacetophenone은 장내 유익균 B. bifidum (\( 10.0 \mathrm{mg} / \mathrm{mL}) \) 에 대해서도 MIC 값을 나타내었다. 2',4'-Dimethoxyacetophenone은 C. perfringens에 대해서만 \( 10.0 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 의 MIC 값을 나타냈으며, 2'-hydroxy-4'-methoxy- acetophenone의 경우에는 E. coli에 대해서만 \( 10.0 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \)의 MIC 값을 나타내었다. 그러나 acetophenone, 2'-hydroxyaceto-phenone, 4'-hydroxyacetophenone, 2',4'-hydroxyacetophenone 및 2',5'-hydroxyacetophenone은 5종 장내 미생물에 대해 \( 10.0 \mathrm{mg} / \) \( \mathrm{mL} \) 농도에서의 혼탁도와 대조구의 혼탁도가 큰 차이가 없어서 MIC는 그 이상인 것으로 나타났다. 이를 통해 항균활성 검정 결과와 상응하는 결과를 나타내었으며, 다른 이전의 연구에서 화합물의 구조적 특성이 항균효과의 차이를 결정한다고 밝혔다.</p><p>본 연구를 통해 산해박 정유에서 유래된 2'-hydroxy-5'-methoxy-acetophenone 및 그 유도체는 작은소피참진드기에 대해 살비활성을 나타내지 않았으나, 장내 유익균에는 영향을 미치지 않고 장내 유해균에 대해 선택적 항균 활성을 나타내는 것을 확인함으로써 정장작용 효과 및 선택적 항균제 개발 가능성을 보였다.</p>
살비활성 검정 과정에서 filter paper는 fume hood에서 몇 분간 건조하게 하였는가?
20분