<h2>Gelatin zymography</h2><p>MMP-2 활성은 FBS를 첨가하지 않은 DMEM 배지에서 배양한 HDF 세포에 사포닌를 처리한 후에 이전에 기술된 방법에 따라 실험을 수행하였다. \( 50 \mathrm{\mu g} \)의 총단백질을 함유하는 세포배양액을 \( 1.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) gelatin을 포함하는 비환원조건의 \( 10 \% \) polyacrylamide gels를 이용하여 전기영동하였다. Gelatin이 분해된 bands는 청색배경에 투명한 bands로 나타난다. Bands의 진하기는 MMPs의 활성에 비례하여 나타나는데 LAS3000® image analyzer (Fuififilm Life Science, Tokyo, Japan)를 관찰한 후 촬영하였다.</p><h2>Casein zymography</h2><p>MMP-1 활성은 FBS를 첨가하지 않은 DMEM 배지에서 배양한 HDF 세포에 사포닌를 처리한 후에 이전에 기술된 방법을 변형하여 실험을 수행하였다. \( 50 \mathrm{\mu g} \)의 총단백질을 함유하는 세포배양액을 \( 1.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) casein을 포함하는 비환원조건의 \( 10 \% \) polyacrylamide gels를 이용하여 전기영동하였다. Casein이 분해된 bands는 청색배경에 투명한 bands로 나타난다. Bands의 진하기는 MMPs의 활성에 비례하여 나타나는데 LAS3000® image analyzer (Fujifilm Life Science, Tokyo, Japan)를 관찰한 후 촬영하였다.</p><h2>Western blot analysis</h2><p>HDF 세포에 용출 완충용액 (\( 50 \mathrm{mM} \) Tris-HCl, \(\mathrm{pH} 7.5\), \( 0.4 \% \) Nonidet \( P-40, 120 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{NaCl}\), \(1.5 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{MgCl} 2,2 \mathrm{mM} \) phenylmethylsulfonyl fluoride, \( 80 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \) leupeptin, \( 3 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{NaF} \) and \( 1 \mathrm{mM} \) DTT)을 첨가하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 30 \mathrm{~min} \) 동안 처리하였다. \( 10 \mathrm{\mu g} \) 의 세포용출액을 \( 10 \% \) Tris - HCl gel에서 전기영동 후 단백질을 전기적으로 nitrocellulose membrane으로 전이 시켰다. 그 다음 \( 10\% \) skim milk를 nitrocellulose membrane에 전 처리하고 목적 단백질에 대한 1 차 항체(anti-Nrf2, anti-SOD-1, anti-SOD-2, anti-SOD-3, anti-beta-actin)를 처리한 다음 2차 항체를 처리 후, chemiluminescent ECL kit (Amersham Pharmacia Biotech)를 사용하여 목적단백질을 검출하였다. Western blot의 band는 LAS3000® image analyzer (Fuifilm Life Science, Tokyo, Japan)를 이용하여 관찰하였다.</p>
Bands의 진하기를 촬영할때 사용한 도구는 어떤 것인가?
LAS3000® image analyze