<h1>결과 및 고찰</h1><h2>항균활성 균주의 분리 및 동정</h2><p>전통적인 방법으로 제조한 청국장과 제조할 때 사용한 볏짚을 멸균 생리식염수로 희석한 후, TSA 배지에서 14시간 동안 배양한 후, 미생물의 집락을 관찰하였고 다양한 미생물의 집락이 관찰되었다. B. cereus에 대한 항균활성 실험결과, 항균활성이 가장 높은 분리균주 1종을 선발하였다.</p><p>분리한 미생물은 포자를 형성하는 그람 양성 간균이며, API 50 CHB system을 이용한 당이용성 조사를 통한 동정 결과는 Bacillus subtilis로 판정되었다. 보다 정확한 동정을 위하여 16S rDNA의 염기서열을 결정하고, GenBenk에 등록된 다른 균주의 염기서열과 비교한 결과 B. subtilis와 \( 98 \% \)의 상동성을 보였다. 따라서, 선발균주는 B. subtilis로 동정되었고, B. subtilis HH28로 명명하였다.</p><h2>분리균주의 생육시기에 따른 항균활성</h2><p>B. subtilis HH28의 생육에 따른 항균활성 특성을 조사하였다. 생육곡선 측정 결과, 배양 12시간까지 대수증식기이고 24시간까지 정체기이며 그 이후 사멸기에 도달하였음을 알 수 있다. B. cereus에 대한 항균활성은 생육이 대수기인 9시간부터 생성되어 사멸기인 60시간에 가장 높은 활성 \( ( 80 \mathrm{AU} / \mathrm{ml}) \)을 보였다.</p><p>많은 항균물질이 영양원이 고갈되는 정체기에 축적되는 것과 같이 본 연구의 항균물질 또한 정체기인 12시간 이후부터 항균활성이 나타나는 것을 알 수 있다. 또한 항균활성이 가장 높은 시기인 60시간부터 실험이 종료된 시점 144시간(6일)까지 활성이 감소하지 않고 유지되는 것을 확인할 수 있다. 반면 Guo 등의 B. licheniformis B11이 생산하는 bacteriocin - like substance (BLIS)는 배양 후 20시간이 지난 후에 항균활성이 감소하고, 또한 Yang 등의 항균물질도 배양시간이 길어짐에 따라 항균활성이 감소하는 것을 확인할 수 있다.</p><h2>항균물질의 분리 및 정제</h2><p>B. subtilis HH28의 배양상등액 \( 500 \mathrm{ ml} \)을 \( 0 - 80 \% \) 황산암모늄 침전한 후, 크로마토그래피 방법으로 정제하였다. 황산암모늄 침전시료를 DEAE-sepharose fast flow를 사용하여 음이온 교환 크로마토그래피를 실시하였고, \( 0 - 1 \mathrm{M}\)의 이온강도를 사용하여 항균물질을 용출하였다. 이온 교환 크로마토그래피에서 활성이 있는 분획 143-156번을 취합한 후 sephacryl S-200HR을 사용하여 겔 크로마토그래피를 하였다. 겔 크로마토그래피의 항균활성이 있는 분획 46-56 번을 모아 정제된 항균물질로 사용하였다. 항균물질 정제의 결과를 Table 1에 나타냈고, 19.7배의 정제도와 \( 38.4 \% \)의 수율로 정제되었다.</p>
분리한 미생물은 무엇을 형성하는 그람 양성 간균인가?
포자