<h1>재료 및 방법</h1><h2>배양재료</h2><p>본 실험에는 '밀양23호'와 '기호벼'가 교배된 재조합 자식성유전집단 (MG RIL; Milyang23-Gihobyeo recombinant in-bred lines)에서 약배양 효율이 높은 계통으로 선발된 'MGRI 079'에 'IR36'이 반복친으로 교배되어 양성된 \( \mathrm{BC}_{2} \mathrm{F}_{4} \) 세대 100계통과 'MGRI 036'에 'IR36'이 여교배(back cross)되어 양성된 \( \mathrm{BC}_{4} \mathrm{F}_{3} \) 세대 50계통을 공시하였다. 2004년 하계에 'MGRI 079/IR 36' 조합의 \( \mathrm{BC}_{3} \mathrm{F}_{4} \) 100계통을 경북대학교 농업생명과학대학 실습포장에 \( 30 \times 15 \mathrm{~cm} \) 의 재식밀도로 주당 1 본 씩 계통재배하였다. 최고분열기 전후에 각 계통별로 DNA를 채취하여 Kwon과 Shon 및 Kwon 등이 선발한 RFLP marker (RZ400) 분석을 실시하고, DNA marker에 의해 선발된 계통의 약과 현미를 계통별로 배양하였다. 'MGRI 036/IR 36' 조합의 \( \mathrm{BC}_{4} F_{2} \) 세대를 2003년 하계에 위와 같은 방법으로 교 내 실습포장에 전개하고 계통별로 종자를 채종한 \( \mathrm{BC}_{4} \mathrm{F}_{3} \) 계통의 현미를 배양하였다.</p><h2>Southern hybridization 분석</h2><p>Southern 분석을 위해서 \( 3 \mu \mathrm{g} \) 의 genomic DNA를 EcoRI (Takara)으로 digestion 처리한 후 \( 0.8 \% \) 의 agarose gel 상에서 \( 37 \mathrm{V} \) 의 전압으로 16~19시간 전기영동을 하여 nylon membrane (Hybond- \( \mathrm{N}^{+} \), Amersham)에 transfer 하였다. Probe 제작은 RZ 400을 농촌진흥청 농업과학기술원으로부터 분양받아 marker로 알려진 부분만을 PCR로 증폭한 뒤 probe로 사용하였다. Prehybridization은 prehybridization용액 (\(5 \times \text{SSC}\), \( 5 \times \text{Denhardt's solution}\), \( 0.1 \% \) SDS, \( 50 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{Na}-\mathrm{Pi}\) \(\mathrm{pH} 6.5 \) ), \( 0.1 \mathrm{mg} / \mathrm{m} \ell \) denatured sperm DNA, \(50\%\) dextran sulfate)에 \( 42^{\circ} \mathrm{C} \) 용액에서 2시간 동안 incubation하여 \(\mathrm{a-P^{32}} -\mathrm{dCTP}\) 로 labeling한 뒤 hybridization하였다. Hybridization이 끝난 mem-brane은 X-ray film에 장착한 후 \( -70^{\circ} \mathrm{C}\), 3일간 노출시켜 다형성 밴드를 조사하였다.</p><h2>약배양</h2><p>약배양은 화분발달단계가 1 핵성 소포자기의 이삭을 채취 하여 \( 12^{\circ} \mathrm{C} \) 에 10 일간 저온처리 된 약을 \( 2 \mathrm{mg} / \ell \) NAA, \( 0.2 \mathrm{mg} / \ell \) kinetin, \( 30 \mathrm{~g} / \ell \) sucrose, \( 5 \mathrm{~g} / \ell \) gelrite 가 첨가된 \( \mathrm{N} 6-\mathrm{Y}_{1} \) 배지에 배양한 다음 Kwon과 Sohn의 방법에 준하여 수행하였다. 종자배양은 캘러스를 형성하기 위하여 \( 2\mathrm{mg} / \ell \) 의 2,4-D와 \( 2 \mathrm{~g} / \ell \) 의 casein hydrolysate CH, \(30 \mathrm{~g} / \) \( \ell \) sucrose와 \( 5 \mathrm{~g} / \ell \) gelrite가 첨가된 \( \mathrm{N}_{6}-\mathrm{Y}_{1} \) 배지를 이용하였으며, sucrose와 gelrite 농도가 캘러스형성에서와 동일하고 \( 5 \mathrm{mg} / \ell \) kinetin과 \( 1 \mathrm{mg} / \ell \) NAA 가 첨가된 \( \mathrm{N}_{6}-\mathrm{Y}_{1} \) 배지에서 캘러스로부터 식물체를 재분화 시켰다.</p><h2>생육 특성조사</h2><p>본 실험에 공시한 'MGRI 079/IR 36' 조합의 \( \mathrm{BC}_{2} \mathrm{F}_{4}\) 100 계통을 대상으로 출수기(heading data), 간장(culm length), 수장(panicle length), 수수(panicle number)를 농촌진흥청의 농사시험 조사기준에 따라 조사하였고 그중 배양 효율이 높았던 6계통은 현미의 길이, 폭, 두께 및 무게를 조사하고 길이와 폭의 비로 장폭비를 구하였다.</p>
본 실험에는 무엇이 교배된 재조합 자식성유전집단 인가?
'밀양23호'와 '기호벼'