<h2>P96L/F139W, P96L/F258W 및 P96L/F139W/F258W 치환체의 분광학적 성질</h2><p>단백질의 형광은 티로신과 트립토판 같은 방향족 잔기에 의해서 나타나는데 이를 둘러싸고 있는 분자환경에 의해 영향을 받음으로 3차 구조 변화 척도로 쓰여지고 있다. 야생형의 트립토판 중합효소 알파 소단위체는 트립토판을 함유하지 않아 형광 성질은 주로 티로신에 의한 것이나 P96L/F139W와 P96L/F258W는 각각 하나의 트립토판을 그리고 P96L/F139W/F258W은 두 개의 트립토판을 가진다. 이들의 트립토판 형광을 이용하여 단백질들의 3차 구조와 리포트로 사용되는 트립토판 잔기 주변 환경을 조사하였다.</p><p>Fig. 2에서 변성제인 요소가 없는 native 상태의 P96L/F139W, P96L/F258W 와 P96L/F139W/F258W 는 각각 328 \( \mathrm{nm}, 330 \mathrm{~nm} \), 그리고 \( 338 \mathrm{~nm} \) 에서 최고의 형광값을 가지며 농도가 \( 150 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 일 때 상대적 형광 세기는 각각 88, 107 ,과 1680 이다. P96L/F139W과 P96L/F139W/F258W는 F139W와 F139W/F258W 와 같은 파장에서 최고 형광값을 가지나 P96L/F258W는 F258W에 비해 \( 10 \mathrm{~nm} \) 정도 낮은 파장으로 이동하였다. \( 8 \mathrm{M} \) 요소가 존재하는 unfolded상태에서는 P96L/F139W, P96L/F258W 와 P96L/F139W/F258W 모두 형광의 세기가 감소하며 최고 형광값 파장이 오른쪽으로 이동하여 약 \( 350 \mathrm{~nm} \) 근처에서 최고 형광값을 가지는데 이는 free L-Tryptophan의 최고 형광값 나타나는 위치와 유사한 것으로 보아 용매에 트립토판 잔기가 완전히 노출되었다고 보여진다. 트립토판 잔기는 주변에 소수성 잔기가 많이 존재 할 때나 용매와 접촉이 되지 않을 때 높은 형광값을 가진다. 이 실험에서 P96L/F139W, P96L/F258W은 각각 F139W 와 F258W에 비하여 2 배와 5 배 형광이 감소하였다. 이것은 3 번 베타 구조의 프롤린 96 번이 루이신으로 치환됨에 따라 4 번 베타 구조와 3 번 알파구조 사이의 loop이 더 많이 용매에 노출되어진 것을 의미하고 8 번 알파구조가 불안정해진 것을 의미한다. 그러나 P96L/F139W/F258W가 F139W/F258W 보다 두배 정도 높은 형광값을 내는 것으로 보아 P96L/F139W/F258W의 F139W와 F258W 잔기 주변은 F139W/F258W 에 비해 소수성 잔기가 조밀한 형태로 구성 되어졌다고 생각된다. 이상의 결과에서 3번 베타 구조의 96 번 프롤린 잔기의 루이신으로 치환은 4 번 베타 구조와 4 번 알파구조 사이의 loop과 8 번 알파구조를 불안정하게 하나 두 잔기를 동시에 치환하면 야생형의 구조와는 다른 안정한 구조가 형성된다고 생각된다.</p>
\( 8 \mathrm{M} \) 요소가 존재하는 unfolded상태에서 P96L/F139W, P96L/F258W 와 P96L/F139W/F258W 모두 형광값 파장이 오른쪽으로 이동하여 약 얼마 근처에서 최고 형광값을 가지지?
\( 350 \mathrm{~nm} \)