<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 재료</h2><h3>시험약물</h3><p>실험에 사용된 금사목질진흙버섯 자실체 추출물은 \( 3 \sim 4 \) 년생 건조 상황버섯을 분쇄하여 \( 110^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 96~100 시간 열수로 추출하여 조제 하였다. Positive control로 사용된 doxorubicin(adriamycin, ADR)은 Sigma Chemical Co. (St.Louis, MO, USA)로부터 구입하여 사용직전 멸균된 saline에 용해시켜 사용하였으며, Negative control로는 saline을 사용하였다.</p><h3>Mouse sarcoma cells</h3><p>Mouse sarcoma cells는 S-180 세포 주를 한국 세포 주 은행으로부터 분양 받아 RPMI 1640 (Sigma, USA) 배지에 \( 10 \% \) fetal bovineserum (Gibco, USA)과 penicillin-streptomycin \( (100 \mathrm{unit} / \mathrm{ml}, 100 \mathrm{\mu g} / \mathrm{\mu l}) \) 을 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) 에서 계대 배양하며 사용하였다.</p><h2>사용 동물 및 사육환경</h2><p>실험에 사용된 동물은 샘타코(주)(Seoul, Korea)에서 공급받은 4-5주령의 수컷 ICR 마우스 \( (30 \pm 1 \mathrm{~g}) \) 를 사용하였다. 공급받은 마우스는 마우스용 케이지(220×200×145 mm)에서 1주일 간 순화시킨 후 실험에 사용하였다. 동물 실험실의 사육 환경은 온도 \( 22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 상대습도 \( 55 \pm 5^{\circ} \mathrm{C} \), 조명주기 12 시간, 조도 200 lux로 조절하여 사육하였다. 급이 사료는 pellet형 고형사료인 Purina Rat Chow를 Nestle Purina Pet Care Korea Ltd.(Seoul, Korea)로부터 공급받아 자유롭게 섭취할 수 있도록 급이 하였으며, 음수도 멸균 정제수를 자유롭게 섭취하도록 하였다.</p><h2>금사목질진흙버섯 자실체 추출물의 S-180 암종에 대한 in Vivo 항암효과</h2><p>금사목질진흙버섯 자실체 추출물의 S-180 암종에 대한 in Vivo 항암효과는 셈타코(Seoul, Korea)로부터 분양 받아 순화 시킨 웅성의 ICR 마우스를 각 투여군 당 10 마리씩 분리하여 mouse sarcoma cells인 S-180 세포를 사용하여 마우스 당 \( 1 \times 10^{7} \) cell씩 피하로 서혜부에 이식 후 약물을 투여하여 약효를 측정 하였다. 암 세포 이식 후 24 시간부터 음성 대조군은 \( 0.9 \% \) 생리식염수를, 양성 대조군에는 \( 2 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) doxorubicin(adriamycin, ADR)을 투여 하였으며, 실험 군에는 금사목질진 흙버섯 자실체 추출물을 각각 \( 31.3 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 62.5 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 125 \) \( \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 250 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 의 농도로 \( 1,3,5,7,9,11,13 \) 일에 체중 \( \mathrm{kg} \) 당 \( 10 \mathrm{ml} \) 의 용량으로 정맥 주사하고, 14 일째 체중 측정 후 부검하여 종양의 무게를 측정하여 항암 효과를 측정하였다.</p><h2>금사목질진흙버섯 자실체 추출물의 급성독성 시험</h2><p>Mouse 시험 군을 암 수 각 6군으로 나누어 각 군당 5 마리씩 분리하였다. 각 시험물질은 Saline에 녹인 후 꼬리 정맥을 통하여 \( 125 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 250 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 500 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 750 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 1,000 \) \( \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 의 농도로 단회 투여 하였으며, 음성 대조군은 saline을 투여 하였다. 이때 최대 투여 량은 체중 \( \mathrm{kg} \) 당 \( 10 \mathrm{ml} \) 을 넘지 않게 서서히 투여 하였으며, 일주일간 사육하면서 임상적 증상, 체중 변화, 사망률 그리고 최종 실험 완료 후 부검하여 내부 장기를 관찰하였다.</p><h2>금사목질진흑버섯 자실체 추출물의 아 급성독성 시험</h2><p>Mouse 시험 군을 암 수 각 5 군으로 나누어 각 군당 5 마리씩 분리하였다. 각 시험물질은 Saline에 녹인 후 꼬리 정맥을 통하여 \( 31.3 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 62.5 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 125 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 250 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 의 농도로 2 일 간격으로 1 회씩 4 주간 투여 하였으며, 음성 대조군은 saline을 투여 하였다. 각 군은 투여 직 후 임상적 증상, 사망률 그리고 최종 실험 완료 후 부검하여 내부 장기를 관찰하였으며, 체중은 2 일 간격으로 투여 전 측정하여 최대 투여량이 체중 \( \mathrm{kg} \) 당 \( 10 \mathrm{ml} \) 를 넘지 않게 서서히 투여하였다.</p><h2>통계학적 처리</h2><p>체중, 장기, 암세포의 무게는 SPSS프로그램의 ANOVA에서 LSD (significance difference) 사후검증 통계처리방법으로 통계적 유의성 검정을 조사하였다. 유의 차가 \( p<0.1 \) 일 때 통계적 유의성을 인정하였다. LD_50 값은 SPSS 프로그램의 probit 분석방법을 이용하였다.</p>
버섯을 몇 시간 열수로 추출했어?
96~100 시간