<h1>결과 및 고찰</h1><h2>\( \lg E / \mathrm{Ag} \) 에 의해 매개된 아나필락틱 쇼크에 대한 nodakenin의 효과</h2><p>아나필락틱 쇼크 평가를 위한 수동피부과민반응 동물 모델은 알러지 반응의 생체 수준 평가에 광범위하게 사용된다. 그러므로, 수동피부과민반응에서 nodakenin의 효과를 탐색하였다. Anti-DNP-specific IgE를 ICR mice의 귀에 피하주사 하고, nodakenin을 25 와 \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 로 경구투여 하였다. 이후 Evans blue와 DNP-HSA을 정맥주사하여, 귀의 항원-항체 반웅에 의한 Evans blue 염색약의 양을 육안으로 확인하였다. 그리고 비교 대조군으로서 사용한 \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 의 diphe-nylhydramine (DPH)와 비교되었다. Nodakenin는 \( 25 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)와 \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{m} \) 에서 \( \operatorname{IgE} / \mathrm{Ag} \) 에 의해 매개된 수동피부과민반응을 농도 의존적으로 억제함을 확인 할 수 있었다. 또한, 생확학적인 분석을 위하여, formamide에 해당 귀를 절개하여, \( 63^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 하루 동안 반응시켜 염색약의 양을 측정한 결과, nodakenin은 Evans blue의 양을 농도 의존적으로 억제함을 확인하였고, \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 의 nodakenin을 경구투여 하였을때, 수동피부과민반응의 정도가 가장 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, nodakenin이 in vivo 상에서 항원-항체 반응에 의한 알러지 반응을 효과적으로 억제할 수 있다는 사실을 할 수 있었다.</p><h2>\( \lg E / \mathrm{Ag} \) 에 의해 매개된 \( \mathrm{RBL}-2 \mathrm{H} 3 \) 세포의 탈 과립현상에 대한 nodakenin의 효과</h2><p>비만세포는 알러지 반응에 의한 탈 과립현상의 결과로서 히스타긴이나 사이토카인, 또는 다른 중재자들을 방출한다. \( \beta- \) hexosaminidase의 방출량은 알러지 반응의 정도를 측정할 수 있는 좋은 표지로서 이용되기 때문에, in vivo에서 nodakenin의 항 알러지 효과를 확인한 결과를 바탕으로, nodakenin의 \( \beta- \) hexosaminidase 방출 억제 정도를 탐색하였다. ३-hexosamini-dase의 방출량은 nodakenin에 의해 농도 의존적으로 억제되는 것을 확인할 수 있었고, 특히 \( 100 \Perp \mathrm{M} \) 의 농도에서는 \( 50 \% \) 이상의 \( \beta \)-hexosaminidase 방출량 억제 효과를, 그리고 \( 200 \Perp \mathrm{M} \) 농도에서는 \( 70 \% \) 이상의 억제 효과를 나타내었다. 이를 통하여 우리는 nodakenin이 비만 세포의 탈 과립현상을 효과적으로 억제함으로써 항알러지 효과를 나타낸다는 사실을 알 수 있었다.</p><h2>Nodakenin에 의한 \( \mathrm{RBL}-2 \mathrm{H3} \) 세포의 독성 영향</h2><p>생체상이나 혹은 세포상에 효과를 보이는 nodakenin의 독성 존재 여부를 판단하기 위하여 RBL-2H3 세포를 대상으로 Ez-Cytox kit를 이용한 세포생존율 측정 실험을 실시하였다. Nodakenin이 첨가된 RBL-2H3 세포에서 세포독성을 측정한 결과를 Fig. 4에 나타내었다. Nodakenin을 첨가하지 않았을 경우, 세포 생존율을 \( 100 \% \) 로 볼 때 nodakenin을 첨가한 첨가군에서는 95\% 이상의 생존율을 보였다. 따라서, 본 실험에 사용한 nodakenin은 RBL-2H3 세포에 독성을 나타내지 않음을 알 수 있었다. 본 결과를 통하여, nodakenin은 세포독성을 갖지 않고, \( \mathrm{IgE} / \mathrm{Ag} \) 관련 알러지 반응을 효과적으로 억제한다는 것을 알 수 있었다.</p><h2>Nodakenin에 의한 RBL-2H3 세포의 사이토카인 발현 억제 효과</h2><p>IL-4는 면역 B 세포의 IgE 생성에 영향을 미치며 naïve \( \mathrm{T} \) 세포의 Th2 세포로의 전환을 촉진하는 역할을 한다. TNF-a는 잠재적인 염증성 인자로서 비만 세포의 \( \operatorname{IgE} \) 와의 반응을 유도한다. 본 연구에서 항원-항체 반응에 의해 활성화된 RBL-2H3 세포의 IL-4와 TNF-a 의 발현에 있어서 nodakenin 의 효과에 대하여 알아보았다. Fig. 5에서 볼 수 있듯이, noda-kenin은 항원-항체 반응에 의한 IL-4과 TNF-a mRNA의 발현을 농도 의존적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 이로부터, nodakenin이 IL-4 하위 조절자의 발현을 억제함으로써 \( \mathrm{IgE} \) 의 생성을 억제하고, \( \mathrm{TNF}-\mathrm{a} \) 의 발현을 억제함으로씨 결국 항원-항체 반응에 의한 탈 과립현상을 억제한다고 생각 된다.</p><p>본 연구를 통해 nodakenin이 비만 세포의 항원-항체 반응</p><p>에 의해 매개되는 탈 과립현상을 효과적으로 억제한다는 것을 알 수 있었다. 그레나, 현재까지의 연구로는 알러지 반응 억제 관련 nodakenin의 정확한 분자 수준의 기전에 대해서는 많이 부족하며, 더 연구가 진행될 펄요성이 있다. 결과적으로, no-dakenin이 알러지 반응을 억제하거나 저해할 수 있는 효과를 입증하였고, nodakenin을 이용하여, 여러 가지 알러지 질환 즉, 알러지성 비염, 알러지성 아토피성 피부염, 알러지성 결막염, 알러지성 천식, 음식 알러지를 포함한 항 알러지 기능성 천연 소재로서의 사용 가능성을 확인할 수 있었다.</p>
알러지 반응의 생체 수준을 평가하는데 널리 쓰이는 방법이 뭐야?
수동피부과민반응 동물 모델