<h2>Xanthine oxidase (XOase) 저해효과 측정</h2><p>Xanthine oxidase 저해효과 측정은 Stirpe와 Corte(1969)의 방법에 준하여 측정하였다. 반응구는 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate buffer (\( \mathrm{pH} 7.5\))에 녹인 기질액 \( 2 \mathrm{mM} \) xanthine \( 3 \mathrm{~mL} \) 에 \( 0.05 \) \( \mathrm{U} / 0.1 \mathrm{~mL} \) xanthine oxidase \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 과 시료 \( 0.3 \mathrm{~mL} \) 를 넣고 대조구에는 시료 대신 증류수를 \( 0.3 \mathrm{~mL} \) 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5분간 반응시키고 종료시약 \( 20 \%\) \(\mathrm{TCA}\) \(1 \mathrm{~mL} \) 를 가한 후 반응액을 원심분리하여 단백질을 제거하고 생성된 uric acid를 \( 292 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여, 저해율(\(\%\))은 \((\text{1-시료의 uric acid 함량}/ \text{대조구의 uric acid 함량} ) \times 100 \) 으로 계산하였다.</p><h2>Tyrosinase 저해효과 측정</h2><p>Tyrosinase 저해효과 측정은 Hearing(1987)의 방법에 준하여 측정하였다. 반응구는 \( 0.1 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer (\( \mathrm{pH} 6.8\)) \( 2.3 \mathrm{~mL} \) 와 기질액 \( 1.5 \mathrm{mM} \) L-tyrosine 용액 \( 0.4 \mathrm{~mL} \) 의 혼합액에 \( 250 \mathrm{U} / \mathrm{mL} \) mushroom tyrosinase (Sigma-Aldrich Co., Louis,MO, USA) \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 와 시료 \( 0.2 \mathrm{~mL} \) 를 넣고 대조구에는 시료 대신 증류수를 \( 0.2 \mathrm{~mL} \) 를 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 20 분간 반응시켜 생성된 L-3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) chrome을 흡광도 \( 475 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하여 저해율(\(\%\))은 \((\text{1-시료의 absorbance}/\text{대조구의 absorbance}) \times 100 \) 으로 계산하였다.</p><h2>Collagenase, elastase 저해효과 측정</h2><p>주름개선 효과를 확인하기 위해 collagenase 저해활성과 elastase 저해활성을 측정하였다. Collagenase 저해활성 측정은 Wûnsch 과 Heindrich(1963)의 방법에 준하여 반응구는 \( 0.1 \mathrm{M} \) tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer (\( \mathrm{pH} 7.5\))에 \( 4 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{CaCl}_{2} \) 를 첨가하여, \( 0.3 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 4phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg를 녹인 기질액 \( 0.25 \mathrm{~mL} \) 와 시료용액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 의 혼합액에 \( 0.2 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) collagenase \( 0.15 \mathrm{~mL} \) 를 첨가하여 실온에서 20 분간 방치한 후 \( 6 \% \) citric acid \( 0.5 \mathrm{~mL} \) 을 넣어 반응을 종료시키고 ethyl acetate \( 1.5 \mathrm{~mL} \) 을 첨가하여 \( 320 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 저해율(\(\%\))은 \((\text{1-시료의 absorbance}/\text{대조구의 absorbance}) \times 100 \) 으로 계산하 였다. Elastase 저해효과 측정은 Kraunsoe 등(1996)의 방법에 준하여 반응구는 \( 0.2 \mathrm{M} \) Tris-HCl buffer (\( \mathrm{pH} 8.0\)) \( 1 \mathrm{~mL} \) 와 기질액 \( 0.8 \mathrm{mM} \) \(\text{N-succinyl-(Ala)} )_{3} \) - \( \rho \)-nitroanilide 용액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 의 혼합액에 \( 1.0 \mathrm{U} / \mathrm{mL} \) porcine pancreatice elastase (PPE) (SigmaAldrich Co., Louis, MO, USA) 효소용액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 와 시료 \( 0.1 \) \( \mathrm{mL} \) 를 넣고 대조구에는 시료 대신 증류수 \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 를 첨가하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 20 분간 반응시켜 \( \rho \)-nitroaniline 생성량을 \( 410 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정한 후 저해율(\(\%\))은 \((\text{1-시료의 absorbance}/{대조구의 absorbance}) \times 100 \) 으로 계산하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>본 실험의 결과는 3-6회 반복하여 측정한 결과값을 평균표준 편차 (\( \operatorname{mean} \pm \mathrm{SD} \)) 로 표기하였으며, SPSS 23 for windows (Statistical Package for Social Science, Chicago, IL, USA) 를 이용하여 분산분석 및 Duncan's multiple range test one-way ANOVA으로 \( 5 \% \) 이내에서 유의성을 검정하였다.</p>
Stirpe와 Corte(1969)의 방법으로 무엇의 저해 효과를 측정했나요?
Xanthine oxidase