<h2>Ci-VSP of pNPP kinetics</h2><p>앞서의 최적화 실험을 통해 얻게 된 pNPP 측정 조건으로 pNPP 농도에 따른 반응성을 확인하여 Ci-VSP-His의 pNPP의 반응에 대한 kinetic 상수들을 얻었다. 이를 통해 얻게된 Ci-VSP-His의 pNPP의 탈인산화에 대한 반응성을 specific activity \( (\mu \mathrm{mol} / \mathrm{min} / \mathrm{mg}) \) 로 전환하여 그래프로 표시하였다. 이렇게 얻어진 그래프를 가지고 curve-fitting 방법으로 Ci-VSP-His의 \( K_{m} \) 과 \( V_{\max } \) 값을 계산하였다. 이렇게 얻어진 \( \mathrm{K}_{\mathrm{m}} \) 값은 대략 \( 350 \mu \mathrm{M} \) 정도이며 \( \mathrm{V}_{\max } \) 는 \( 0.0607 \mu \mathrm{mol} / \mathrm{min} / \mathrm{mg} \) 정도인 것으로 확인하였다. 이를 통해 얻을 수 있는 Ci-VSP-His의 \( \mathrm{k}_{\mathrm{cat}} \) 값은 \( 2.359 \mathrm{~min}^{-1} \) 로 확인되었다. 이를 통해 Ci-VSP-His의 half-maximal pNPP 결합 농도가 대략 \( 400 \mu \mathrm{M} \)이며 반응의 turn-over rate이 1분에 대해 대략 2.4 번 정도임을 확인할 수 있다. 이렇게 얻어진 값을 다른 탈인산화 효소와 비교하여 보면 저자가 이전에 구조 연구를 수행하였던 Small CTD phosphatase 1(SCP1)의 \( K_{m} \) 값에 비해 10배 정도 적은 값을 보였으며, \( \mathrm{k}_{\text {cat }} \) 값은 약 110 배 정도 적게 나타났다. 이러한 결과는 pNPP에 대한 활성이 거의 없는 것으로 보고된 PTEN이나 GST-Ci-VSP(248-576)-His의 경우에 비해 높은 값으로 나타났다고 볼 수 있다. 이러한 비교를 통해 판단하기에 위 측정 값은 적정한 수준의 활성을 보인 것으로 판단된다. 그리고 이러한 측정 값의 결과는 본 연구를 통해 정제된 Ci-VSP(248-576)-His의 구조적 integrity가 보존되고 있다고 볼 수 있다. 그러므로 본 연구에서 제작한 Ci-VSP(248-576)-His는 활성을 가진 단백질로써 향후 그 구조 연구와 기질 특이성 연구를 수행함이 가능하리라 예상한다.</p>
최적화 실험을 통해 얻게 된 것은 무엇인가요?
pNPP 측정 조건