<h1>결 과</h1><p>Biorenovation 전환물의 HPLC 분석</p><p>조록나무 잎 추출물을 기질로 biorenovation 생물 전환 하여 얻은 반응액을 원심분리(\( 4,000 \) \( \mathrm{rmm}, 15 \mathrm{~min}) \)하여 cell pellet과 상등액으로 분리한 뒤, pellet을 제거한 상등액을 동결건조하여 실험에 사용 하였다. 조록나무 잎 추출물(DL), 생물 전환 된 조록나무 잎 추출물(DLB)과 생물 전환에 이용한 미생물 Bacillus sp. JD\( 3 \)- \( 7 \) (BJ)를 대조군으로 하여 HPLC 분석을 진행한 결과, DLB에서 기존 DL 추출물에서는 검출되지 않은 신규 peak의 존재를 확인하였으며, \( 10.05 \mathrm{~min} \)에서 가장 큰 peak가 확인되었다. Koiralal 등에서 연구된 결과에 따르면 biorenovation은 naringenin로부터 naringenin \( 7 \)-O-phosphate, naringenin \( 7 \)-O-glucoside 및 \( 6 ^{\prime \prime} \)-O-succinylpruin와 같은 유도체의 생성을 촉매 하는 것으로 보고 되었다. 따라서 조록나무 내 존재하는 다양한 성분에서도 이와 같은 구조적 변화가 유도되었을 것으로 판단되며, DL (\(10.94 \mathrm{~min}) \)의 전구체가 DLB (\( 10.05 \) min)의 유도체로 전환되었을 가능성을 시사한다.</p><h2>세포 독성 비교 측정</h2><p>LPS에 의해 유도된 RAW\( 264.7 \) 세포에서 DL, DLB 및 BJ의 세포 생존율을 조사하기 위해 MTT assay를 수행하였다. 각 시료를 \( 6.25,12.5,25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도로 처리하여 세포 생존율을 확인한 결과, \( 25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 내에서 DL,DLB은 \( 85 \% \) 이상의 세포생존율이 나타내었으며, BJ 또한 \( 80 \% \) 이상의 세포생존율이 확인되었다. 따라서 본 실험의 결과를 바탕으로 추후 실험은 세포 독성을 보이지 않는 \( 25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)을 최대 농도로 하여 진행하였다.</p><h2>\( \mathrm{NO} \) 생성 억제 활성 비교</h2><p>LPS에 의해 유도된 염증 반응에서 대식세포로부터 생성 및 분비되는 \( \mathrm{NO}, \mathrm{PGE}_{2} \), leukotriene, 전염증성 사이토카인과 같은 \( 2 \)차 매개물들은 선천성, 후천성 면역을 조절하는데 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 그 중에서 특히 iNOS에 의해 생성된 \( \mathrm{NO} \)는 병리학적으로 중요한 의미를 갖는데, 높은 농도의 \( \mathrm{NO} \)는 염증매개체의 생합성을 촉진하여 염증 반응을 촉진할 뿐만 아니라 DNA의 손상, 염증 증폭, 패혈성 쇼크 및 세포의 괴사를 유발하는 등 다양한 면역 질환의 원인으로 보고된 바있다. 따라서 \( \mathrm{NO} \)를 특이적으로 억제하는 물질은 다양한 면역 질환을 효과적으로 예방 및 치료 할 수 있음을 의미한다. 이에 본 실험은 RAW264.7 세포에서 LPS 자극에 의해 증가된 \( \mathrm{NO} \)의 생성에 대해 DLB가 미치는 영향을 알아보고자 수행되었으며, LPS \( (1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)와 DL, DLB 및 BJ를 \( 6,25,12.5,25 \)\( \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도로 동시 처리한 뒤, griess reagent (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA)를 이용하여 세포 배양액에 존재하는 \( \mathrm{NO}^{2-} \)의 양을 측정하였다. 측정 결과, DLB는 LPS 단독 처리군 대비 \( \mathrm{NO} \) 생성을 \( 22.9 \pm 2.8,43.1 \pm 2.5 \% \) 억제 하였으며, 가장 고농도인 \( 25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도에서는 \( 61.1 \pm 2.2 \% \)로, 모든 농도에서 유의적인 억제 활성이 관찰되었다. 반면 DL에서는 유의한 억제 활성이 관찰되지 않았으며, BJ 또한 유의적인 억제 활성이 관찰되지 않았다. 이는 DLB의 활성이 BJ와는 무관한 고유의 효과이며, DL대비 DLB의 \( \mathrm{NO} \) 억제 효능이 항상되었음을 시사한다. 따라서 DLB는 \( \mathrm{NO} \) 억제 기전을 통한 효과적인 항염증 소재라 사료된다.</p><p>\( \mathrm{NO} \) 생성 역제 활성 비교</p>
HPLC 분석실험 결과, DLB에서 검출된 peak값은 언제 가장 큰 값을 가지는가?
\( 10.05 \mathrm{~min} \)