<h2>Whole cell 항원분리</h2><p>Whole cell (WC) 항원은 먼저 액체 배양된 균주를 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \), \( 4,000 \times g \) 로 30분간 원심분리 하여 회수한다. 회수된 균주는 \( 10 \mathrm{mM} \) Tris \( \mathrm{HCl}\left(\mathrm{pH}\right. \) 8.5)-2 mM EDTA로 \( 4^{\circ} \mathrm{C}, 4,000 \times g \) 로 30분간 원심분리 하여 1회 세척 후 멸균된 증류수에 현탁시킨다. 세척된 균은 얼음물에서 30초간 4 회 sonicate (pulse 20 , duty cycle 50)한 다음 syringe filter \( (0.45 \mu \mathrm{m}) \) 로 여과하였다. 여과된 WC 의 농도는 Lowry법을 이용한 단백질정량 kit로 측정하여 사용 전까지 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \) 에 냉동 보관하였다.</p><h2>Outer membrane protein 항원분리</h2><p>액체 배양된 균주를 \( 10 \mathrm{mM} \) Tris HCl (pH 8.5) - \( 2 \mathrm{mM} \) EDTA로 \( 4^{\circ} \mathrm{C}, 4,000 \times g \) 로 30분간 원심분리로 1회 세척한 후 차가운 증류수에 현탁하였다. 강하게 vortex \( (2,500 \mathrm{rpm}, 1 \mathrm{min}) \) 한 후 원심분리 \( \left(25,000 \times g, 15 \mathrm{~min}, 4^{\circ} \mathrm{C}\right) \) 된 침전물을 얼음물에서 30초간 4 회 sonicate (pulse 20, duty cycle 50)한다. 파쇄된 균은 \( 4^{\circ} \mathrm{C}, 10,000 \times g \) 로 10 분 동안 원심분리 한 다음 상층액을 \( 4^{\circ} \mathrm{C}, 100,000 \times g \) 로 1시간동안 원심분리한다. 침전물을 \( 1 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) sodium laurylsarcosine이 함유된 \( 10 \mathrm{mM} \) Tris-HCl buffer (pH 8.0)로 현탁시킨 후 \( 4^{\circ} \mathrm{C}, 10,000 \times g \) 로 10분 동안 원심분리하는 과정을 1회 반복한다. 최종 침전물은 \( 10 \mathrm{mM} \) Tris-HCl buffer ( \( \mathrm{pH} \) 8.0)로 현탁시키고 syringe filter \( (0.45 \mu \mathrm{m}) \) 로 여과한다. 여과된 OMP 항원은 sodium dodesyl sulfate-polyacrylamide gel clectrophoresis (SDS-PAGE, \( 12 \%) \) 로 분자량을 확인하였고, 농도는 Lowry법을 이용한 단백질정량 kit로 정량하여 사용 전 까지 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \) 에 냉동 보관하였다.</p><h2>Crude urease 항원분리</h2><p>액체 배양된 균주를 \( 10 \mathrm{mM} \) Tris \( \mathrm{HCl}(\mathrm{pH} \) 8.5)-2 mM EDTA로 \( 4^{\circ} \mathrm{C}, 4,000 \times g \) 로 30 분간 원심분리로 1 회 세척한 후 차가운 증류수에 현탁하였다. 강하게 vortex \( (2,500 \mathrm{rpm}, 1 \mathrm{min}) \) 한 후 원심분리 \( \left(25,000 \times 8,15 \mathrm{~min}, 4^{\circ} \mathrm{C}\right) \) 된 상층액을 crude urease 항원으로 사용하였다. 분리된 crude urease는 SDS-PAGE \( (12 \%) \) 로 분자량을 확인하였고, 항원 농도는 Lowry법을 이용한 단백질정량 kit로 정량하여 사용 전까지 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \) 에 냉동보관 하였다.</p>
Whole cell 항원은 액체 배양된 균주를 어떤 조건에서 30분 동안 원심분리시켰어?
\( 4^{\circ} \mathrm{C} \), \( 4,000 \times g \)