<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>본 실험에 사용된 비파잎(E. japonica Lindl. Leaf)은 2009년 7월 (주)두루시스템에서 구입하여 비파잎 뒷면의 잔털을 깨끗이 제거한 후 \( 3 \sim 4 \mathrm{~cm} \) 정도로 자른 다음 냉동 건조시켜 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 냉동보관하면서 시료로 사용하였다. 각 시험 항목에 대한 시료의 분석은 3회 반복 실시하였다.</p><h2>일반성분</h2><p>비파잎의 일반성분 분석은 Association of Official Analytical Chemists (A.O.A.C.) 방법에 준하여 실시하였으며, 수분은 \( 105^{\circ} \mathrm{C} \) 상압가열건조법, 조단백질은 micro-kjeldahl법, 조지방은 soxhlet 추출법 및 조회분은 회화법으로 분석하였고, 식이섬유소는 효소중량법(enzymatic-gravimetric meth-od)에 의하여 분석하였다. 탄수화물은 100에서 수분, 조단백질, 조지방, 조회분 및 식이섬유소량을 제외한 값으로 나타내었다.</p><h2>구성당</h2><p>구성당 분석은 Gancedo 방법에 준하여 실시하였다. 시료 \( 1 \mathrm{~g} \) 에 \( 80 \% \) ethanol \( 50 \mathrm{~ml} \) 를 가하여 heating mentle에서 \( 75^{\circ} \mathrm{C} \) 로 5시간 가열한 다음 Whatman filter paper (No. 2)로 여과하고 여액을 rotary vacuum evaporator에서 감압 \( \cdot \) 농축 후 \( 10 \mathrm{~ml} \) 로 정용하여 Ion Chromatography (DX-600, Dionex, CA, USA) 로 분석하였다. 분석조건으로 Column은 CarboPac \( { }^{\mathrm{TM}} \)-PA10 analytical \( (4 \times 250 \mathrm{~mm}) \) 을, detection은 ED50 Integrated Amperometry를 이용하여 실시하였다. Flow rate \( 1.0 \mathrm{~ml} / \mathrm{min} \), injection volume \( 20 \mu \mathrm{l} \), 이동상은 \( 18 \mathrm{mM} \mathrm{~NaOH} \) 수용액을 사용하였다.</p><h2>유리 아미노산</h2><p>유리 아미노산의 분석은 시료 \( 2 \mathrm{~g} \) 에 ethanol \( 20 \mathrm{~ml} \) 을 가한 후 homogenizer로 10분 동안 교반하여 \( 1,900 \times g \)에서 20분간 원심분리 하였고, 잔사에 다시 \( 75 \% \) ethanol \( 10 \mathrm{~ml} \) 를 첨가하여 homogenizer로 10분 동안 교반한 후 \( 1,900 \times g \) 에서 20분간 원심분리 하였다. 상층액을 합하여 감압농축한 후 증류수로 용해시켜 sulfosalicylic acid \( 20 \mathrm{~ mg} \) 을 첨가하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 로 1시간동안 방치시킨 다음 다시 \( 1,900 \times ~ g \) 에서 20분간 원심분리한 후, membrane filter \( (0.2 \mu \mathrm{m}) \) 로 여과시켜 아미노산 자동분석기 (S433-H, Sykam GmbH, Eresing, Germany)로 정량분석하였다. 분석조건은 Cation separation column (LCA K07/Li, \( 4.6 \times 150 \mathrm{~mm} \) )을 사용하였으며, column의 온도는 \( 37 \sim 74^{\circ} \mathrm{C} \) 로 하였다. Flow rate는 buffer ( \( \mathrm{pH} 2.90 \sim 7.95 \) ) \( 0.45 \mathrm{~ml} / \mathrm{min} \), re-agent는 \( 0.25 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \) 으로 하였으며, \( 440 \mathrm{~nm} \) 와 \( 570 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였다.</p><h2>구성 아미노산</h2><p>구성 아미노산의 분석은 시료 \( 0.5 \mathrm{~g} \) 을 \( 18 \mathrm{~ml} \) test tube에 칭량하여 \( 6 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} 3 \mathrm{~ml} \) 를 가하여 감압 밀봉한 후 \( 120^{\circ} \mathrm{C} \) 로 setting된 heatting block에 24시간 이상 동안 가수분해 시켰다. 가수분해가 끝난 시료는 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 rotary evaporater로 산을 제거한 후 sodium loading buffer로 \( 10 \mathrm{ml} \) 정용한 다음, 이중 \( 1 \mathrm{ml} \) 를 취하여 membrane filter \( 0.2 \mu \mathrm{m} \) 로 여과시켜 아미노산 자동분석기(S433-H, Sykam GmbH, Eresing, Germany)로 정량분석하였다. 분석조건으로 column은 Cation separation column (LCA K06/Na, \( 4.6 \times 150 \mathrm{~mm} \) )를 사용하였으며, column의 온도는 \( 57^{\circ} \mathrm{C} \)~\( 74^{\circ} \mathrm{C} \) 로 하였다. Flow rate는 buffer \( (\mathrm{pH} 3.45 \sim 10.85) \) \( 0.45 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \), reagent \( 0.25 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \) 으로 하였으며, \( 440 \mathrm{~nm} \) 와 \( 570 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였다.</p><h2>지방산</h2><p>지방산 분석은 A.O.A.C.방법에 준하여 시료 \( 5 \mathrm{~g} \) 을 warming blender에 넣고 chloroform \( 10 \mathrm{~ml} \) 와 methanol 20 \( \mathrm{~ml} \) 을 가하고 2분간 균질화한 다음, chloroform \( 10 \mathrm{~ml} \) 을 더 가한 후 30초간 균질화 하였다. 여과 후 30분간 방치한 후 상충을 제거하고 무수 \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 를 가하여 탈수한 다음 rotary vac-uum evaporator로 감압 \( \cdot \) 농축하였다. 지방 \( 100 \mathrm{mg} \) 을 toluene \( 5 \mathrm{ml} \) 에 용해하고 Wungaarden의 방법에 따라 \( \mathrm{BF}_{3} \)-Methanol로 메칠화하여 Gas Chromatography (GC-17A, Shimadzu, Kyoto, Japan)로 분석하였다. 분석조건은 \( \mathrm{SP}^{\mathrm{TM}}-2560 \) capillary column \( (100 \mathrm{~m} \) length \( \times 0.25 \mathrm{~nm} \) I.d. \( \times \) \( 0.25 \mu \mathrm{m} \) film thickness)을 이용하였고, oven temperature는 \( 120^{\circ} \mathrm{C} \) 로 하였으며, FID detector로 검출하였다.</p>
본 실험에 사용된 비파잎(E. japonica Lindl. Leaf)을 시료로 사용하기 위해 어떤 처리 과정을 거쳤는가?
비파잎 뒷면의 잔털을 깨끗이 제거한 후 \( 3 \sim 4 \mathrm{~cm} \) 정도로 자른 다음 냉동 건조시켜 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 냉동보관