<p>\( 0.02 \% \) 및 \(0.1\%\) L-tryptophane이 첨가된 King's B broth에서 P. agglomerans의 배양시간 경과에 따른 IAA 생성능을 정량 분석한 결과는 Fig. 4에서 보는 바와 같다. 균체 생육은 L-tryptophane의 농도에 관계없이 비슷하였으나 IAA 최대 생성량은 \(0.1\%\) L-tryptophane이 첨가된 배지에서 높았으며 \( (46 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \), 정지기부터 IAA 생성량이 크게 증가하였다. 분리균주 MF12 역시 정지기부터 IAA 생성량이 증가하기 시작 하였으며, 최대 생성량 \( (156 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)은 P. agglomerans보다 많았다(Fig. 5). B. megaterium의 경우, 균체 생육도 및 IAA 생성량 \( (639 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)이 상기 두 균주보다 월등히 많았으며, 두 균주와 달리 균체 생육과 비례하여 IAA를 생성하였다. 이것은 2차 대사산물 생산의 일반적인 패턴과 다른 양상이므로 이에 대한 추가적인 연구가 필요함을 알 수 있었다(Fig. 6).</p><p>NBRIP broth에서 P. agglomerans의 배양시간 경과에 따른 가용성 인산 생성능을 정량 분석한 결과는 Fig. 7에서 보는 바와 같이 배양 2일 후 \( 578 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 가용성 인산은 생성할 수 있었다. B. megaterium은 NBRIP agar plate에서 불용성 인산 가용능을 관찰할 수 없었으나 NBRIP broth에서는 배양 3일 후, \( 159 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 가용성 인산을 생성할 수 있었다(Fig. 7). Gupta 등은 고체 평판배지에서 불용성 인산 가용능의 지표인 육안 관찰 가능한 투명대를 형성하지 못하는 많은 미생물이 액체배지에서 불용성 인산을 가용화시킬 수 있다고 보고하였으며, 이것은 미생물에 의하여 생산된 유기산의 확산 속도가 너무 느리기 때문인 것으로 추정하였다.</p><p>새로이 분리된 균주 MF12의 형태학적, 배양적 및 생화학적 특성을 조사한 결과, 본 균주는 그람양성의 호기성 간균으로서 포자를 형성할 수 있었으며, citrate 이용능과 젤라틴 액화능을 가지고 있었으나 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{~S} \) 생성능 및 urease 등은 가지고 있지 않았다(미제시). 이상의 데이터를 Bergey's manual of determinative bacteriology를 참조하여 동정한 결과, 분리 균주는 Bacillus 속에 포함됨을 알 수 있었다. 분리균주의 보다 정확한 동정을 위하여 16S rDNA의 염기서열 분석을 실시하였으며, 16S rDNA 부분 염기서열을 NCBI GenBank에 등록된 유사 균주와 비교분석하여 유전자간의 상관성을 알아본 결과, 본 분리균주는 Bacillus pumilis와 \( 99 \% \)의 상동성을 가지고 있었다(Fig. 8).</p><p>본 연구에서는 식물병원성 진균에 대한 길항능, IAA 및 siderophore 생성능, ammonification ability, 진균 세포성분 분해효소 생성능, 불용성 인산 가용능을 나타내는 3 균주를 분리하였다. 현재, 이들 균주들의 구체적인 배양적 특성 및 항진균 기작에 대한 실험이 진행되고 있다. 이들을 적절하게 조합 및 병용 적용한다면 식물병원성 진균의 생육을 억제함과 동시에 각종 농작물의 성장도 촉진할 수 있을 것으로 예상되며, 이에 따라 환경오염 감소, 농작물의 품질 향상 및 수확량을 증가시킬 수 있을 것이다.</p><h1>요 약</h1><p>다기능성 농업용 미생물 제제를 개발하기 위하여 생물방제 및 생물비료 활성을 가지는 미생물을 탐색하였다. 본 연구실에서 분리 및 동정된 균주가운데 Pantoea agglomerans 및 Bacillus megaterium을 실험균주로 선정하였으며, 경남 밀양에 위치하는 양계장 부근 부엽토로부터 새로운 다목적 세균 MF12를 분리하였다. 형태학적, 배양적, 생화학적 특성 및 16S rDNA 염기서열을 분석한 결과, MF12는 Bacillus pumilis로 동정되었다. 이 균주들의 불용성 인산 가용능, IAA 및 side-rophore 생성능, ammonification ability, 식물병원성 진균 세포성분 분해효소 생성능 및 항진균능을 조사하였다. P. agglomerans는 고체배지에서 불용성 인산을 가용화할 수 없었으나 액체배지에서는 가용성 인산을 생성하였다. 상기 모든 균주들은 배양시간에 따라 \( 3 \sim 639 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 IAA를 생성하였으며, P. agglomerans만이 siderophore를 생성하였다. 이 균주는 pectinase와 lipase를 생성하였다. B. megaterium은 amylase, protease 및 lipase를 생성한 반면 B. pumilis는 protease와 lipase를 생성하였다. P. agglomerans는 Fusarium oxysporum과 Colletotrichum gloeosporioides의 생육을 억제하였으며, B. pumilis는 Botrytis cinerea, Sclerotinia sclerotiorum 및 Phythium ultimum의 생육을 억제하였다.</p>
NBRIP broth에서 무엇을 분석했어?
P. agglomerans의 배양시간 경과에 따른 가용성 인산 생성능을 정량 분석