<h1>결과 및 고찰</h1><h2>Xylanase의 정제</h2><p>B. pumilus TX703의 배양 상등액 \( 500 \mathrm{~ml} \)로부터 “재료 및 방법"에 기술한 정제과정을 통하여 약 \( 0.21 \mathrm{~mg} \)의 정제효소를 얻을 수 있었다. 정제효소의 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis를 실시한 결과 \( 48 \mathrm{~kDa} \)의 분자량을 지니는 단일 band를 확인할 수 있었으며 이는 xylanase 유전자의 염기배열에서 추론한 분자량과 동일한 것으로 나타났다.</p><h2>화학수식제에 의한 영향</h2><p>여러 가지 화학수식제를 효소용액에 첨가하고 효소활성을 측정한 결과 Table 2에 나타낸 바와 같이 여러 가지 화학수식제 중에서 tryptophan 잔기에 선택적으로 작용하는 N-bromosuccinimide와 glutamic acid 또는 aspartic acid 잔기 등 산성 아미노산에 선택적으로 작용하는 carbodiimide 만이 효소활성을 완전히 저해하였다. 한편 cysteine, lysine 또는 histidine에 작용하는 화학수식제들은 효소활성을 부분적으로 저해시킴을 알 수 있었다. 이 결과로부터 xylanase에는 tryptophan, glutamic acid 또는 aspartic acid 잔기들이 효소의 활성중심 구조 형성을 포함한 전반적인 구조에 영향을 미첬을 것이라 추정된다.</p><h2>기질에 의한 효소의 보호효과</h2><p>화학수식제에 의한 효소활성 저해시 반응용액에 기질인 xylan을 첨가하여 효소에 기질을 결합시킴으로써 첨가 기질에 의해 화학수식제의 저해반응으로부터 효소활성이 보호되는지를 확인함으로써 화학수식제가 효소의 기질결합 부위에 직접 작용하는 것인가를 확인하였다. 효소활성을 완전 저해시킨 N-bromosuccinimide와 carbodiimide를 사용하여 효소를 수식할 때 기질인 oat-spelts xylan을 효소용액에 첨가하여 보호한 후 효소의 잔존활성을 측정한 결과 Table 3에 나타낸 바와 같이 carbodiimide를 사용하여 효소를 불활성화 시켰을 때 기질의 첨가가 효소의 불활성화를 방지하지 못하였다. 이는 glutamic acid 또는 aspartic acid 잔기가 기질 결합부위가 아닌 촉매활성부위임을 보여주는 것이다. N-bromosuccinimide에 의한 효소활성 저해시 기질 첨가에 의해 효소의 잔존활성이 대조구와 비교하여 \( 90 \% \)를 보여주어 기질에 의해 효소가 보호되는 것을 알 수 있었으며, 이로부터 기질결합부위에 tryptophan이 관여하는 것을 확인할 수 있었다.</p>
B. pumilus TX703의 배양 상등액 \( 500 \mathrm{~ml} \)로부터 정제효소를 약 몇\( \mathrm{~mg} \) 얻을 수 있을까?
약 \( 0.21 \mathrm{~mg} \)