<h2>암세포 성장 억제 실험</h2><p>인체 위암세포(AGS gastric adenocarcinoma cells)와 인체 간암세포(Hep 3B hepatocellular carcinoma cells)은 한국 세포주 은행(서울의대)으로부터 분양받아 배양하였고 원심분리 한 후 집적된 암세포를 골고루 분산되도록 잘 혼합하여 24시간 well plate에 \(20,000 \mathrm{cells}/\mathrm{ml}\)의 농도로 seeding하여 하룻밤 배양하였다. 각 시료 메탄올 추출물 및 그 분획물들을 \( 10 \mu \mathrm{l} / \mathrm{ml} \) medium에 첨가하여 2일 마다 배지로 교체해서 배양 6일 후에 증식된 세포를 \( 0.05\%\) trypsin-\(0.02\%\) EDTA 효소로 분리하여 각 세포수를 hemocytometer로 측정하여 대조군과 비교하여 암세포 성장 억제효과를 관찰하였다.</p><p>SRB assay를 위하여 암세포를 96 well plate에 well당 \(40,000 \mathrm{cells}/\mathrm{ml}\) 되도록 seeding하고 24시간 배양 후 세포가 plate에 부착되면 시료 추출물 \( 100 \mu \mathrm{l} \)를 첨가한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \), \( 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 배양하였다. 이때 blank에는 시료와 \( 10 \% \) FCS를 함유한 배지만 넣고 대조군에는 세포와 시료대신에 DMSO를 첨가하였다. 배양 48시간 후에 배지를 제거한 후 PBS로 한번 씻은 후 \( 50 \% \) TCA를 첨가하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 냉장 방치하였다. 1 시간 후 TCA를 제거하고 증류수로 5번 씻은 후 실온에서 건조시킨 후 \( 0.4 \% \) sulforhodamine B \( 100 \mu \mathrm{l} \) 첨가하여 30분간 염색시켰다. 다음 \( 1 \% \) acetic acid로 5번 씻은 후 다시 실온에서 건조시킨 후 \( 0.01 \mathrm{M} \) tris base를 \( 150 \mu \mathrm{l} \)를 첨가한 후 \( 510 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다.</p><h2>통계분석</h2><p>대조군과 각 시료로부터 얻은 실험 자료로부터 ANOVA를 구한 후 Duncan's mutiple range test를 이용하여 통계 분석하였다.</p>
한국 세포주 은행(서울의대)으로부터 분양받아 배양하고 어떻게 분리 하였는가?
원심분리