<h2>Microarray 분석에 의한 하위 유전자 발현 확인</h2><p>최근에 들어서는 과발현 형질전환체에서 하위 유전자 발현 양상 분석에 DNA chip을 이용한 유전체 발현분석 방법이 널리 이용되고 있다. 35S:OsZF2 형질전환체에서 발현이 조절되는 유전자를 확인하기 위하여 2주간 생육시킨 유묘를 이용하여 낙동벼와 35S:OsZF2 형질전환체에서 total RNA를 분리하고 Bioanalyzer 2100 를 이용하여 28S rRNA/18S rRNA ratio가 1이상인 고순도의 RNA를 사용하여 유전체 발현 분석을 하였다. 35S:OsZF2 형질전환 계통 중에서 LS333-8의 독립적인 2계통을 이용하여 각각의 분석을 수행하였는데 무처리 낙동벼를 cy3, 무처리 형질전환벼를 cy5로 라벨링을 하여 DNA chip 분석을 수행하였다. DNA chip 분석 결과 과다발현 시킨 OsZF2 유전자가 두 형질전환 계통에서도 낙동벼에 비해 4 배 이상 발현이 증가되었으며 이는 Northern 분석에 의해 35S:OsZF2 형질전환체에서 OsZF2 발현이 증가된 현상과 정확히 일치하였다 . 대조구인 낙동벼에 비해 두 계통 모두에서 4배 이상 발현이 증가된 유전자는 100 개로 확인이 되었으며 실지로 게놈상에 주석이 된 유전자는 35개로 나타났으며 65개 유전자는 기능이 아직 알려지지 않은 유전자, 가상 유전자 및 트랜스포존 유전자였다. 35개 유전자에 대한 게놈 주석을 근거로 기능을 유추하면 신호전달과 관련된 protein kinase, DNA binding protein 과 대사에 관련된 효소 유전자 및 스트레스 반응 유전자들의 발현이 증가되었다. 내염성과 관련된 유전자로서 Chaperone 단백질인 dnaJ 72 유전자 발현이 거의 20배 이상 증가하였으며 salt stress-induced protein의 발현도 5 배 이상 증가하였다. 또한 병저항성과 관련된 유전자 발현이 상당히 증가한 것으로 나타났으며 wall-associated kinase인 OsWAK27, OsWAK126 유전자 발현이 5 배 이상 증가하였다. 애기장대에서 WAK 유전자 그룹은 세포팽창, 병저항성 및 중금속 스트레스 저항성에 중요한 역할을 하는 것으로 보고되었으며 벼에는 125 개의 WAK 유전자가 게놈 상에 존재한다고 보고되었다. 따라서 zinc-finger 단백질인 OsZF2는 세포내 과발현에 의해 다른 유전자들의 발현을 조절하고 발현 양상에 영향을 주는 것으로 추측되며 이는 염처리에 의한 스트레스 반응에서 어느 정도의 저항성을 보이는 현상과 생육 및 출수 지연 현상을 일부 설명할 수 있으리라 추측된다. 따라서 벼에서 분리된 OsZF2 CCCH zinc finger 유전자는 벼 성장 발달과 스트레스에 반응하는 상위조절자로서 기능을 할 것으로 추측된다.</p>
과발현 형질전환체에서 하위 유전자 발현 양상 분석을 위해 최근에는 어떤 방법을 이용하여 분석하지?
DNA chip을 이용한 유전체 발현분석 방법