<h1>결 과</h1><h2>정상세포와 암세포의 세포증식에 대한 에탄올의 억제 효과 비교</h2><p>다양한 조직 유래의 정상세포주와 암세포주를 배양하여 에탄올에 의한 세포증식억제 효과를 조사하였다. 사용한 세포주를 분류하면, 유방세포주로는 사람의 정상세포인 MCF-12A와 대표적인 유방암세포 연구에 사용되는 MCF-7, SK-BR-3, T-47D에서의 에탄올의 효과를 비교하였고, 간세포는 정상세포인 Chang세포주와 간암세포인 HepG2세포를 비교하였고, 췌장세포로는 정상세포인 HIT-T12와 암세포인 MIA PaCa-2를 비교하였고, 신경세포에서는 정상세포인 RSC96과 암세포인 PC-12 및 Neuro-2a를 비교하였고, 폐세포로는 정상세포인 WI-38과 암세포인 HT-1080 및 A549 세포를 비교하였다. 그 결과, 공통적으로 정상세포에서는 에탄올에 의해 세포증식이 현저하게 억제되었고, 반면 암세포에서는 그 효과가 없음을 알 수 있었다. 또한 일반적인 세포 연구에 많이 사용되는 신장 유래 세포인 CV-1, 근육세포인 L6, 지방세포인 3T3-L1에서도 동일하게 에탄올에 의해 세포성장이 억제 되었다. 그 억제 정도는 조직별로 차이가 있으며, 신경세포에서 현저한 억제 효과가 관찰되었고, 유방세포에서는 그 효과 다소 약함을 알 수 있었다.</p><h2>발암원성 H-ras와 K-ras에 의해 형질전환된 세포에서의 에탄올의 세포증식 억제 효과</h2><p>Fig. 1의 실험에서 사용한 암세포는 다양한 암유전자의 변이로 형질전환된 세포이므로 세포내의 어떤 유전자 변이로 인한 것인지, 세포증식 신호전달 과정의 어떤 경로가 에탄올의 세포증식 억제효과를 상쇄하는지 알 수 없으므로 이를 이해하는 것은 중요하다. 따라서 본 연구에서 정상적인 Rat-2 세포에 발암원성 H-ras\( ^{V12} \)나K-ras\( ^{V12} \)로 형질전환 시킨 세포에서 에탄올의 세포증식 억제 효과를 조사하여 Ras단백질과의</p><p>상호관계를 알아보았다. Fig. 2에서 보이는 바와 같이 에탄올은 parental Rat-2 세포의 증식을 농도의존적으로 억제했고, 이를 다른 세포주 연구와 비교해볼 때 유의성을 가진 것을 알 수 있었다. 반대로 형질변환된 H-ras나 K-ras 세포의 경우에는 에탄올 존재 하에서도 세포증식에는 특이한 영향이 없었다. 이는 에탄올의 세포증식억제 작용이 ras 변이에 의한 세포 증식은 억제할 수 없으며, 또한 이는 알코올의 작용점이 Ras 단백질의 upstream에 존재하거나, 아니면 Ras단백질과는 상관이 없을 것이란 것을 보여준다.</p><h2>정상유방세포인 MCF-12A에 미세주입된 발암원성 H-Ras\( ^{V12} \) 단백질에 의한 DNA 합성 유도에 대한 에탄올의 영향</h2><p>발암원성 ras\({ }^{\mathrm{V} 12} \)와 에탄올에 의한 세포증식억제 효과 사이의 관계를 직접적으로 확인하기 위해 우리는 세포미세주사기술을 적용했다. 정상유방세포인 MCF-12A세포의 세포주기를 정지시켜 DNA 합성을 억제시킨 후, 발암원성 발암원성 H-Ras\( ^{V12} \) 단백질을 세포 내로 미세주사하고, 주입된 Ras단백질에 의한 세포증식을 위한 DNA합성에 대한 에탄올의 영향을 알아보았다. 본 연구팀에 미세주사된 발암원성 H-Ras\( ^{V12} \) 단백질은 농도의존적으로 DNA 합성을 촉진한다고보고하였다. 대조군으로 미세주입된 Rat IgG를 주입한 세포에서는 \( 15 \% \)의 세포에서 DNA 합성이 일어났고, 발암원성 Ras\( ^{V12} \) 단백질이 미세주입된 세포에서는 \( 66 \% \)의 세포에서 DNA합성이 유도되었다. 에탄올을 전처리한 세포에 발암원성 H-Ras단백질를 미세주입한 세포에서는 \( 58.6 \% \)세포에서 DNA합성이 유도되었다. 따라서 에탄올에 의해 유의한 영향은 존재하지 않았다. 이러한 결과는 에탄올에 의한 세포증식 억제효과를 나타내는 작용점이 Ras단백질이 관여하는DNA 합성 유도 신호전달경로에서 Ras 단백질의 upstream에 존재하거나, 아니면 Ras단백질과는 상관이 없을 것이란 것을 다시 한번 확인해준다.</p><h2>에탄올의 세포증식 억제효과와 활성산소 형성과의 상관관계에 관한 연구</h2><p>Ras단백질외에도 활성산소가 에탄올의 세포증식억제 효과에 중요한 것으로 보고되어 왔다. 우리는 다음으로 활성 산소가 에탄올에 의한 세포증식억제효과와 어떤 관계가 있는지 알아보기 위해, 먼저 에탄올에 의한 활성산소의 형성을 조사하였고, Ras 형질전환 Rat-2 세포에서의 활성산소 형성을 조사하였다. 에탄올에 의해 대조군인 Rat-2 세포에서 활성산소 생성이 증가하였다. Ras 형질전환 세포에서는 ROS의 발생을 조사한 결과, 대조군에 비해 증가하였다. 그러나 에탄올에 의해 유의한 활성산소의 증가를 관찰할 수 없었다. 정상세포에서 에탄올에 의해 증가한 활성산소가 세포증식 억제를 유도하는지를 조사하기 위해 free radical trapping agent를 사용하여 에탄올의 세포증식억제효과에 대한 영향을 조사하였다. 사용한 활성산소 억제제로서 free radical scav-enger 인 N-acetylcysteine (NAC), CYP2E1 inhibitor인 4-methylpyrazole (4-MP), lipid peroxidation inhibitorol vita-min E} (Vit. E), soluble Vit. E인 trolox와 같은 항산화제를 사용하였다. 항산화제를 MCF-12A세포에 전처리 후, 에탄올을 처리하고 그 효과를 측정하였다. NAC와 4-MP는 효과적으로 에탄올에 의한 세포증식 억제효과를 방해하였다. 그러나 흥미롭게도 Vit. E와 그 유도체인 trolox는 에탄올에 의한 세포증식억제 작용에는 특이한 효과가 없었다. 즉 수용성 항산화제인 NAC나 4-MP와 지용성 항산화제인 Vit. E계열간의 작용 차이는 에탄올에 의해 형성된 활성산소 중 세포내 수용성 부위에 작용하는 것이 에탄올에 의한 세포증식 억제에 중요할 것으로 사료된다. 이러한 결과는 활성산소 형성이 에탄올에 의한 세포증식 억제효과에 중요한 역할을 하며, 활성산소의 형성 부위에 따라 다르게 작용한다는 것을 알 수 있다.</p>
암세포에서는 에탄올에 의해 세포증식이 현저하게 억제되었어?
NO