<h2>UPLC-PDA를 이용한 한국산 반하 칼럼분획물 분석</h2><p>유효성분 화합물의 위치를 확인하기 위해, UPLC 에 BEH \(\mathrm{C}_{18} \)\( (2.1 \times 100 \mathrm{~mm}\), \(1.7 \mathrm{~mm}) \) 칼럼관과 photodiode array (PDA) 검출기를 장착하고 칼럼오븐의 온도를 \( 35{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 로 유지하여 각 분획물에 대한 분석을 진행하였다. A 용매는 \( 0.1 \% \) formic acid가 포함된 증류수로, B용매는 \( 0.1 \% \) formic acid가 포함된 ACN으로 준비하였다. UPLC 이동상 조건은 \( 0-1 \mathrm{~min}\) \(10 \% \mathrm{~B}\), \(1-2 \mathrm{~min} \) \( 50 \% \mathrm{~B}\), \( 2-8 \mathrm{~min}\) \(100 \% \mathrm{~B}\), \( 8-10 \min\) \(100 \% \mathrm{~B}\), \(10-10.5 \mathrm{~min} \) \( 10 \% \mathrm{~B}\), \(10.5-13.0 \mathrm{~min}\) \(10 \% \mathrm{~B} \) 를 유속 \( 0.4 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \)로 흘렸으며, 시료는 \( 5 \mathrm{~mL}(2 \mathrm{mg} / \mathrm{mL}) \) 주입하여 분석을 실시하였다.</p><h2>한국산 반하 칼럼분획물의 세포 독성 및 활성측정을 위한 세포 배양</h2><p>마우스 멜라노마 세포인 B16F10 cell을 각각 \( 1 \% \) antibiotic과 \( 10 \% \) FBS 가 함유된 DMEM배지를 사용하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}\), \(5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 배양하였다.</p><h2>한국산 반하 칼럼분획물의 세포 독성 측정</h2><p>B16F10 cell을 \( 2.0 \times 10^{4} \mathrm{cells} / \mathrm{mL} \) 로 96 well plate에 분주하고 18시간 배양 후 샘플을 \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 농도로 조제하여 첨가하고 24시간 배양하였다. 이후 \( \mathrm{MTT} \) 용액 \( 100 \mathrm{~mL} \) 를 첨가하여 4시간 동안 반응 시켰다. 배양배지를 완전히 제거하고 DMSO 200 \( \mathrm{mL} \) 를 가하여 침전물을 완전히 용해시킨 후, microplate reader를 사용하여 \( 540 \mathrm{~nm} \) 흡광도를 측정하였다. 각 샘플 군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군의 흡광도 값과 비교하여 세포생장률을 측정하였다.</p><h2>한국산 반하 칼럼분획물의 melanin 생합성 저해 활성 측정</h2><p>B16F10 cell을 DMEM 배지를 이용하여 \( 2.0 \times 10^{4} \mathrm{cells} / \mathrm{mL} \) 로 24 well plate에 분주하고 \( \alpha \)-MSH (200 nM)로 활성화 시킨 후 24시간 배양 후 샘플을 \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 농도로 조제하여 첨가한 후 48시간 후에 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate buffer \( (\mathrm{pH} 7.4\) )으로 세척하였다. 그 다음 melanin에 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \) 를 가하여 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간 반응시킨 후 분광광도계 \( 405 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. Melanin 생합성 저해는 샘플 용액의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p>
B16F10 cell은 키보드 멜라노마 세포야?
NO