<h2>세포 배양액 내 lactate dehydrogenase (LDH) 측정</h2><p>굴 분획물 O 및 효소별 굴 가수분해물 N, F, P의 간세포손상에 대한 영향을 조사하기 위해 배지내의 LDH 활성을 측정하였다. LDH 활성은 GOT 활성 측정과 동일한 방법으로 세포실험을 수행한 후 세포 배양액을 취한 다음 아산제약에서 구입한 LDH assay kit (ASAN parm, seoul, Korea)를 이용하여 LDH 활성을 측정하였다. 이 측정법의 원리는 pyruvic acid와 \( \mathrm{NADH}_{2} \)가 LDH에 의해 lactic acid가 생성되고 \( \mathrm{NADH}_{2} \)는 NAD로 될 때, 이 반응에서 소비된 \( \mathrm{NADH}_{2} \)의 감속속도를 측정하여 LDH를 \( 340 \mathrm{~nm} \)에서 UV/Vis spec-trophotometer를 사용하여 흡광도를 측정한다. 양성 대조 약물로는 현재 간 보호 작용이 있는 것으로 알려진 Silymarin을 사용하였다.</p><h2>아미노산 분석</h2><p>굴 분획물 O 및 효소별 굴 가수분해물 N, F, P \(0.1 \mathrm{~g} \)을 \( 100~ \mathrm{ml} \)의 Sodium loding buffer에 녹인 후 \( 1~ \mathrm{ml} \)을 취하여 membrane filter \( 0.20 ~\mu \mathrm{m} \)로 여과시켜 Amino Acid Analyzer(Biochrom 30, Biochrom Ltd, UK)를 이용하여 정량 분석하였다.</p><h2>통계</h2><p>실험한 결과의 통계처리는 SPSS 12.0 program을 이용하여 각 실험군의 평균과 표준 편차로 나타냈으며, 각 군의 비교는 유의수준은 \( p<0.001 \)에서 One-way ANOVA test로 나타내었으며, 유의성 검증은 Duncan's multiple range test를 이용하였다.</p><h1>결과 및 고찰</h1><h2>굴 분획물(\(\mathrm{O}\)) 및 효소별 굴 가수분해물 \(\mathrm{N}\), \(\mathrm{F}\), \(\mathrm{P}\)의 항산화 활성</h2><p>DPPH분자 내 질소는 쉽게 전자를 받아들임으로써 본래의 짙은 자색이 탈색됨으로서 항산화 물질의 전자 공여능을 측정 할 수 있는 실험 방법으로 DPPH법이 항산화 활성을 측정하는 유용한 방법으로 잘 알려져 있다. Free radical은 인체 내에서 각종 질병과 노화를 일으키는 원인물질이기 때문에 이들과 반응하여 그 활성을 소거시키는 능력을 지닌 항산화제로 작용할 수 있는 물질을 탐색할 필요성이 있다. SOD는 항산화 효소로서 세포에 해로운 환원 산소를 과산화수소로 전환 시키는 반응 (\( 2 \mathrm{O}_{2}^{-}+2 \mathrm{H}^{+} \rightarrow \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}+\mathrm{O}_{2} \))을 촉매 하는 효소이며, SOD에 의해 생성된 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)는 peroxidase나 catalase에 의하여 무해한 물분자와 산소분자로 전환되어 산소 상해로부터 생체를 보호하는 역할을 하는 효소이다. 굴 분획물 및 굴 효소 가수분해물의 DPPH radical scavenging 및 SOD 활성 측정 결과는 Table 1 에서와 같이 가장 높은 활성을 가지고 있는 것은 Protamex를 이용한 굴 효소 가수분해물이 가장 높은 활성을 가지며, 그 활성은 \( 69.65 \pm 0.53 \% \)의 활성이었다. Flavourzyme을 이용한 효소 가수분해물 F는 \( 67.10 \pm 1.04 \% \)의 활성을 나타내었다. 굴 분획물인 O와 Neutrase를 이용한 효소 가수분해물에서는 각각 \( 65.17 \pm 0.94 \%\), \(63.89 \pm 1.64 \% \)의 DPPH radical scavenging 활성을 보였다. Ranathunga 등은 단백질이 가수분해 되면 free amino acids와 저분자 peptide가 생성되며 이들의 크기, 함량, 구조나 구성하고 있는 아미노산의 종류, 배열순서 등 복합적인 작용에 의하여 항산화 효과를 나타낸다고 하였고, peptide 크기가 항산화 활성에 영향을 준다는 보고도 있다. 이것으로 보았을 때, 다양한 효소 처리에 의하여 항산화 활성이 높은 peptide가 만들어져 다른 DPPH radical scavenging 활성이 나타난 것이라 생각된다. SOD 활성 측정 결과에서는 굴 분획물인 O의 활성이 \( 76.02 \pm 2.13 \% \)로 가장 높았으나, 다양한 효소 가수분해물에서는 항산화 활성이 떨어진 결과를 보였다. 이것은 Wu 등도 free amino acids와 small peptides의 크기, 함량, 조성의 변화에 따라 항산화 활성에 영향을 준다고 하였고, Jun 등의 보고에서도 기질, 효소의 종류, 효소 첨가량, 가수분해 시간, 온도 등의 가수분해 조건이 단백질 가수분해물의 항산화활성에 영향을 준다고 보고한 바있다.</p>
굴로 부터 얻은 물질의 무엇에 대한 영향을 확인하고자 LDH 활성을 측정했나요?
간세포손상에 대한 영향