<h2>항균 spectrum 조사</h2><p>Bacillus subtilis, B. licheniformis, B. cereus의 배양배지는 TSB, Staphylococcus aureus, Salmonella Typhimurium, Pseudomonas aeruginosa, Shigella flexineri, S. sonnei, S. boydii, Escherichia coli O157:H7의 배양배지는 nutrient broth (NB, Difco, MI, USA), Vibrio parahaemolyticus 는 \( 2.5 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 염화나트륨이 포함된 TSB배지를 사용하였다. Streptococcus mutans, Listeria monocytogenes 는 Brain Heart Infusion broth (BHI, Difco), Candida albicans는 Yeast Mold broth (YM, Difco, MI, USA), Aspergillus flavus, A. fumigatus, Rhizopus oryzae, Mucor circinelloides, Penicillum camemberti 는 potato dextrose agar (PDA, Difco) 배지를 사용하여 배양하였다. 피검균으로 사용한 균주들은 생명자원센터(KCTC), 한국농업미생물자원센터(KACC) 그리고 한국미생물보존센터(KCCM)에서 분양받았다. 배양온도는 C. albicans 는 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \), A. flavus, A. fumigatus, R. oryzae, M. circinelloides, P. camemberti 는 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \), 나머지 균들은 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 배양하였고 이들 균주에 대한 길항력은 분리 균주 배양상등액의 황산암모늄 침전액을 사용하여 측정하였고 paper disc 주변의 투명환의 직경으로 비교하였다.</p><h2>항균 작용 기전</h2><p>항균작용 기전은 Nicolas 등의 방법으로 수행하였다. B. cereus KCCM 12667 를 TSB에 \( 5 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 접종한 후 2시간 진탕 배양한 배양액에 항균물질 \( (32 \mathrm{AU} / \mathrm{ml}) \)를 첨가하였고, 항균물질을 첨가하지 않은 B. cereus 배양액을 대조군으로 사용하였다. 항균물질 첨가 후 12시간동안 진탕 배양하며 2시간 간격으로 생균수를 측정하였다.</p><h2>항균물질의 안정성</h2><p>항균물질의 \( \mathrm{pH} \) 안정성을 측정하기 위해 \( \mathrm{pH} 2.0-4.0 \)은 \( 0.1 \mathrm{M} \) glycine- \( \mathrm{HCl} \) 완충용액, \( \mathrm{pH} 4.0-6.0\) 은 \( 0.1 \mathrm{M} \) sodium acetate 완충용액, \( \mathrm{pH} 6.0-8.0\) 은 \( 0.1 \mathrm{M} \) sodium phosphate 완충용액, \( \mathrm{pH} 8.0-10.0\) 은 Tris-\(\mathrm{HCl}\) 완충용액을 사용하였다. 각각의 \( \mathrm{pH} \) 완충용액과 정제 항균물질을 1: 15 비율로 혼합하여 배양온도인 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12시간 방치한 후 잔존 항균활성을 측정하였다. 대조군으로는 항균물질을 첨가하지 않은 각각의 \( \mathrm{pH} \) 완충용액을 사용하였다. 항균물질의 온도안정성을 측정하기 위하여 정제한 항균물질을 \( 40-80^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12 시간, \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)는 1시간 방치한 후 잔존 항균활성을 측정하였다. 각종 효소의 영향을 측정하기 위해 lysozyme (EC 3.2.1.17, Sigma), \( \alpha \)-amylase (EC 3.2.1.1, Sigma), lipase (EC 3.1.1.3, Type VII, Sigma), trypsin (EC 3.4.21.4, Sigma), protease (EC 3.4.24.31, Sigma), Proteinase K (EC 3.4.21.64, Sigma), pronase E(EC 3.4.24.4, Merck)를 \( 10 \mathrm{mM} \) sodium phosphate 완충용액 \( (\mathrm{pH} 7.0) \)에 \( 4 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)이 되도록 준비하였다. 정제한 항균물질에 각각의 효소를 \( 2 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분 동안 방치한 후 항균물질의 잔존활성을 측정하였다.</p>
본 논문에서 Vibrio parahaemolyticus는 무엇이 함유된 TSB배지를 사용했는가?
염화나트륨