<h1>재료 및 방법</h1><h2>S. commune, E. coli 균주 및 \( \mathrm{p} \) asmids 특성</h2><p>S. commune은 University of Vermont (U.S.A.)에 보존된 균주를 본 실험에 사용하였으며, 이들 죽 북미산 1-34 strain은 genomic library의 제조 및 \( \mathrm{A} \alpha \) mating locus 분리에 사용되었다. Mating activity 확인을 위하여 사용된 recip-ient와 tester strain은 mating allele type 및 영양요구성 표시와 함께 Table 1에 나타내었다. 또한 E. coli strain DH1 \( \alpha \) 는 genomic library 제조시 host 균주로 사용되었다.</p><h2>사용 배지</h2><p>S. commune의 배양과 mating test, 그리고 \( \operatorname{Trp} 1^{+} \)transformant들의 선발에는 CYM 배지를 사용했으며, \( \operatorname{trp} 1 \) recipien 와 tester 균주를 사용할 때는 tryptophan을 최종농도 0. \( \mathrm{g} / \ell \) 로 첨가한 CYMT 배지를 사용했다. E. coli의 배양에는 LB, 2YT 배지를 사용했으며, 필요에 따라 ampicillin을 50-\( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 로 첨가하여 사용하였다.</p><h2>DNA sequencing 및 polypeptide 분석</h2><p>S. commune 1-34 strain의 \( \mathrm{A} \alpha 3 \) mating type gene의 se-quencing은 dideoxy chain termination method에 따라 행하였다. 사용한 sequencing kit는 United States Biochemical의 Sequenase T7 DNA polymerase version 2.0을 사용하였으며, 기타 acrylamide, bisacrylamide, urea 등은 Sigma 및 BRL 제품을 사용하였다. 그리고 \( \mathrm{A} \alpha 3 \) mating activity를 나타내는 5.7kb의 PstI-fragment는 random subcloning method로 pBluescriptII KS나 pGEM7의 BamHI site 에 0.5-2 kb 크기로 partial digstion시킨 DNA를 subcloning 하여 sequencing reaction에 사용하였다. 반응에 사용된 primer인 T7, T3 및 reverse primer는 oligonucleotide synthesizer (Dupont)로 합성하여 각 반응에 5-10 ng 농도로 사용하였다. 염기와 polypeptide 서열에 대한 homolgy 비교 분석은 blast program을 사용하였다.</p>
genomic library의 제조에 사용된 것은 무엇인가?
북미산 1-34 strain