<h2>암세포 배양</h2><p>본 실험에 사용한 암세포주는 자궁 경부암 세포인 HeLa(human cervices adenocarcinoma), 유방암 세포인 MCF-7(human breast adenocarcinoma pleural effusion), 대장암세포인 HT-29 (human colon cancer cell) 및 인체 간암 세포인 HepG2 (human hepatocellular carcinoma)를 2003년 7월 부산대학교 의과대학 생화학교실에서 제공받았다. HepG2, HeLa, MCF-7 세포주는 DMEM medium에 HT-29 세포주는 RPMI 1640 배지에 \( 10 \% \) fetal bovine serum (FBS)과 \( 1 \%\) \(100 \mathrm{units}/\mathrm{ml}\)의 penicillin streptomycin \( 10 \mathrm{ml} \) 가 함유된 배지를 사용하여, \( 37^{\circ} \mathrm{C}\) \(5 \%\) \( \mathrm{CO_2} \) incubator에서 monolayer로 배양하였다.</p><h2>암세포 증식억제 효과측정</h2><p>배풍등 추출 분획물의 암세포 증식억제 효과는 MTT assay를 사용하여 행하였다.</p><p>MTT assay는 세포의 생육을 측정하는 방법으로서 살아있는 세포의 미토콘드리아 내의 dehydrogenase가 황색 수용성 물질인 MTT에 의해 dark blue formazan을 생성하는 원리를 이용한다. 이를 위해 각 세포주를 \( 1 \times 10^5 \) \( \mathrm{cells/well}\)의 농도로 맞추고 24 well에 각각 \( 1 \mathrm{ml} \) 첨가하여 24시간 동안 \( 37^{\circ} \mathrm{C}\), \(5 \% \) \( \mathrm{CO_2} \) incubator에서 배양한 후 용매 종류별 분획물을 각각 일정량의 dimethyl sulfoxide (DMSO)에 녹여서 100, 200, 300, 400 및 500 \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 의 농도로 첨가하였다. 48 시간 동안 배양한 후 각 well에 PBS 완충액에 녹인 MTT 용액 \( (3 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \) 을 100\( \mu \mathrm{l}\)씩 첨가하여 4시간 동안 다시 배양시킨 후, well 바닥에 형성된 formazan이 흩어지지 않게 상등액을 제거하고 DMSO와 ethanol을 1:1로 혼합한 용액 \( 1 \mathrm{ml} \) 를 첨가하여 천천히 녹인 후 UV-visible spectrophotometer를 이용하여 \( 570 \mathrm{nm} \), \( 690 \mathrm{nm} \) 에서 각각 흡광도를 측정하여 대조군 세포수를 \( 100 \% \)로 하였을 때의 상대적인 세포성장 억제율을 구하였다. 같은 방법을 이용하여 정상세포인 liver cell을 이용하여 배풍등 분획물의 세포 독성효과 실험을 하였다.</p>
실험에 사용 된 암세포는 몇도로 배양 되었는가
\( 37^{\circ} \mathrm{C}\)