<h1>재료 및 방법</h1><h2>세포 배양 및 시약</h2><p>Human Jurkat T 세포와 마우스 T 세포주인 EL4 T 세포를 RPMI 1640 배지에서 배양한다. \(10\%\) FCS 및 penicillin/strep-tomycin을 함께 넣어 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 배양하였다. RhoA 활성화를 위한 \( 10 \mu \mathrm{M} \) phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA, AG scientific Ins., CA, USA)는 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12시간, 18시간 처리하였고 \( 10 \mu \mathrm{M} \) cytochalasin D (CytD, Nacalai Tesque, Japan)는 1시간 동안 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 처리하였다.</p><h2>면역 염색</h2><p>EL4 T lymphocyte는 trichloroacetic acid (TCA, ICN) 고정 방법을 이용하여 고정한 후 \( 0.2 \% \) Triton X- 100을 처리하고 PBS로 washing한 후 FITC-p-ezrin antibody (Cell Signaling Technology, MA, USA)와 rhodamine phalloidin으로 염색하고 laser scanning confocal microscope (MRC-1024; Bio-Rad, Osaka, Japan)를 이용하여 이미지를 촬영하고 이미지는 Adobe Photoshop software을 이용하여 분석하였다.</p><h2>Western blot</h2><p>\( 1 \times 10^{8} \)세포를 \( 1 \mathrm{ml} \) lysis buffer \( (50 \mathrm{mM} \) Tris-HCl, \( \mathrm{pH} 7.5 \), \( 0.5 \mathrm{M} \mathrm{~NaCl}, 1 \% \) Triton X-100, full set protease inhibitors)에 넣고 30 분 동안 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 반응시킨다. 원심분리 후 상등액을 회수하였고 단백질 농도는 BCA 단백질 정량 방법을 이용하여 동일 양을 SDS-PAGE gel에 로딩하였다. 1차 항체로 rabbit anti-p-Lin-11, Isl-1, Mec-3 Kinase (LIMK) antibody, rabbitanti-p-cofilin antibody를 \( 1 / 1,000 \)로 희석하여 사용하였고 2차 항체로 HRP-conjugated goat anti-rabbit antibody (Jackson ImmunoResearch Laboratoires)는 \( 1 / 10,000 \)로 희석하여 Westernblot을 수행하였다.</p><h2>전자현미경 관찰(SEM)</h2><p>\( 3 \% \) glutaraldehyde, \( 0.1 \mathrm{M} \) cacodylate, \( 7.5 \% \) sucrose, \( 0.05 \% \) \( \mathrm{CaCl}_{2} \)로 세포를 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 동안 고정하고 PBS로 washing을 행한다. 이후, 세포를 \( 1 \% \mathrm{~OsO}_{4} \)로 1시간 동안 상온에서 postfixation을 행 한 후 \( 0.1 \mathrm{~M} \) cacodylate buffer로 washing하고 graded ethanol로 탈수 반응을 수행하며 tetramethylsilane에 담건 후 상온에서 건조를 한다. 샘플을 진공상태에서 gold-palladium으로 코팅을 한 후 SEM을 통해서 관찰하였다.</p>
RPMI 1640 배지에서 배양하는 것은 무엇인가요?
Human Jurkat T 세포와 마우스 T 세포주인 EL4 T 세포