<h1>재료 및 방법</h1><h2>사용 균주 및 배지</h2><p>본 실험에 사용한 균주는 2001년 7월부터 2003년 8월까지 제주도, 가거도, 추자도, 귀녀, 구들녀와 태안 염전의 해수로부터 Marine broth 2216 (Difco, USA)에서 \( 30^{\circ} \mathrm{C}, ~1 \sim 3 \) 일간 배양 후 형태적으로 다르게 구분되는 집락을 분리하였고 이 중 색소를 생성하는 30 균주를 1차적으로 선별하고 최종적으로 색소 생성능이 우수한 Ju11-1, Ju14, TA20 세 균주를 선별하여 실험에 사용하였다. 순수 분리된 균주는 배양액에 \( 20 \% \) glycer-ol을 첨가하여 \( -80^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하였다.</p><h2>균주의 형태 및 생화학적 특성</h2><p>분리된 균주들은 MA (Marine agar 2216, Difco, USA) 배지를 기본배지로 하여 배양온도 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 Yeon 등의 방법에 따라 그람염색, 운동성 및 최적 \( \mathrm{pH} \)를 조사하였다. \( \mathrm{pH} \)는 \( \mathrm{KOH} \)와 \( \mathrm{HCl} \)로 각 각 조정하였다. 최적 \( \mathrm{NaCl} \) 농도는 Ventosa 등의 기초배지를 변형하여 사용하였다. 즉, \( \mathrm{MgSO}_{4}\cdot7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 4.8 \mathrm{~g}; ~\mathrm{MgCl}_{2} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 3.5 \mathrm{~g};~ \mathrm{KCl}, 1.0 \mathrm{~g} ;~ \mathrm{CaCl}_{2} \cdot2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 0.18\mathrm{~g};~\mathrm{NaHCO}_{3}, 0.03 \mathrm{~g}; ~\mathrm{NaBr}, 0.013 \mathrm{~g} \)을 주요 염성분으로 사용하였고, Bacto-Peptone (Difco, USA), \( 2.5 \mathrm{~g} \); Yeast extract (Difco, USA), \( 5.0 \mathrm{~g} \); Glucose (Sigma, USA), \( 1.0 \mathrm{~g} \); 증류수 \(1,000 \mathrm{~ml}\), \(\mathrm{pH} ~7.2\)에 \( \mathrm{NaCl} \)은 각각 \( 0 \%, 1 \%, 2 \%, 3 \%, 4 \%, 5 \%, 6 \% \)와 \( 7 \% \)가 첨가된 배지를 사용하여 최적 생장 \( \mathrm{NaCl} \) 농도를 구하였으며, 당으로부터 산 생성능 조사에는 glucose 대신 조사하고자 하는 기질을 \( 1 \% \) 첨가하여 사용하였다.</p><h2>염색체 DNA의 분리 및 \( \mathrm{G}+\mathrm{C} \) 함량\( (\mathrm{mol} \%) \) 측정</h2><p>세균 세포의 염색체 DNA 분리와 \( \mathrm{G}+\mathrm{C} \) 함량\( (\mathrm{mol} \%) \)의 측정은 Jeon과 Park 의 방법에 따라 결정하였다. nuclease P1과 Alkaline phosphatase를 처리한 후 HPLC (High-performance Lipiud Chromatograph, Simadzu, Japan)에 의해 측정하였다.</p><h2>지방산 조성의 분석</h2><p>균체지방산의 분석은 MA 배지에 \( 30^{\circ} \mathrm{C}, 48 \) 시간 배양하여 Lim 등[11]의 방법에 따라 Sherlock Microbial Identification System (MIDI Inc., USA)에 의해 분석하였으며 유사도 \( 0.5 \) 이상을 신뢰성 있는 결과로 판별하였다.</p>
형태적으로 다르게 구분되는 집락을 분리하는 곳은?
Marine broth 2216