<h2>SOD 활성 측정</h2><p>각 시료의 SOD 활성은 SOD assay kit-WST (Dojindo, Japan)를 사용하였다. 96 well plate를 이용하여 각각의 시료 \( 20 \mu \mathrm{l}\)를 WST-1 용액 \( 200 \mu \mathrm{l} \), enzyme용액 \( 20 \mu \mathrm{l} \)와 반응시키고, blank는 시료대신 증류수를 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20분간 반응시키고 난 후, ELISA reader (Molecular Devices, SpectraMAX 250, USA)로 \( 450 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. SOD 활성은 시료 첨가구와 blank의 흡광도 비로 나타내었다.</p><h2>세포의 배양</h2><p>실험에 사용한 Human hepatocellular carcinoma인 HepG2(KCLB, 88065) 세포는 한국 세포주 은행에서 구입하였다. 간암 세포주인 HepG2(KCLB, 88065) 세포는 \( 10 \% \) FBS가 함유된 DMEM 배지를 사용하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(5\% \mathrm{CO}_{2}\), \(95 \% \mathrm{O}_{2} \)가 유지되도록 \( \mathrm{CO}_{2}\)incubator (Galaxy 170S, New Brunswick, UK)에서 배양하였다. 이 때 세포의 오염이나 증식을 억제하기 위해 \( 1 \% \) Penicillin-Streptomycin Mixture을 첨가하였다. 세포가 \( 80 \% \) 정도 dish를 덮으면 Phosphate Buffered Saline로 2회 세척한 후 Trypsin-Versene (EDTA) Mixture 을 3분 동안 처리하여 세포를 분리시킨 후 계대 배양하였으며 배지는 24시간마다 교환하였다.</p><h2>시료의 조제</h2><p>굴 분획물인 Oyster (이하 \( \mathrm{O} \))와 식용으로 사용 가능한 효소인 Neutrase, Flavourzyme, Protamex으로 각각 굴을 효소 가수분해하여 만든 분획물 (이하 \( \mathrm{N}\), \(\mathrm{F}\), \(\mathrm{P} \))은 phosphate buffered saline (PBS) 용액에 녹여 사용하여 최종농도가 각각 \( 100 \mu \mathrm{g} / \)\( \mathrm{ml}\), \(200 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\), \(250 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \) 및 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)이 되도록 하여 사용하였다. 간 보호 기능이 밝혀진 Silymarin은 최종농도가 \(20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)이 되도록 하여 실험에 사용하였다.</p><h2>굴 분획물 (\( \mathrm{O} \)) 및 효소별 굴 가수분해물 (\( \mathrm{N}\), \(\mathrm{F}\), \(\mathrm{P} \)) 의 간세포 독성 측정</h2><p>배양한 인간 간암 세포주인 HepG2 세포를 PBS로 2회 세척한 다음 Trypsin-Versene (EDTA) Mixture를 3분 동안 처리하여 세포를 분리시키고 serum free DMEM로 각 well당 \( 2.5 \times 10^{5} \mathrm{cells} /\mathrm{ml}\)로 조절하여 \( 100 \mu \mathrm{l} \) 씩 96 well plate에 넣은 다음 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 5 \% \mathrm{CO}_{2}\), \(95 \% \mathrm{O}_{2} \) 가 유지되는 \( \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 24시간 동안 예비 배양하였다. 배지를 제거한 후 준비된 시료를 농도별로 처리한 serum free DMEM으로 24시간 배양한 후, MTT assay를 실시하였다.</p>
각 시료의 슈퍼옥시드 디스무타아제 활성은 무엇을 사용했어?
SOD assay kit-WST