<h2>항산화[\(1\),\(1\)-diphenyl-\(2\)-picrylhydrazyl（DPPH), antioxidant protection factor (PF)] 활성 측정</h2><p>라디칼의 생성 여부에 따라 보라색으로 변하는 수용성 항산화활성 중 DPPH radical 소거능은 Blois의 방법에 준하여 측정하였다. 주름조개풀 추출물 \( 1 \mathrm{~mL} \)에 \( 60 ~\mu \mathrm{M}\) DPPH \(3 \mathrm{~mL} \)를 첨가하여 시약이 섞일 수 있게 vortex한 후 \(15 \)분 동안 실온에서시약을 반응시켰다. 측정은 \( 517 \mathrm{~nm} \)의 파장에서 흡광도를 측정하였으며, 추출물의 흡광도와 대조구의 흡광도 차이를 이용하여 계산하였다. \( \beta \)-Carotene의 산화 정도에 따라 지용성 항산화 활성을 측정하는 PF는 Andarwulan과 Shetty의 방법에 준하여 측정하였다. Evaporator용 수기에 \( \beta \)-carotene과 chloroform을 각각 \( 1 \mathrm{~mg} \)당 \( 5 \mathrm{~mL} \) 비율로 제조하여 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 넣고 \( 40-50^{\circ} \mathrm{C} \) water bath에서 용액을 증류시킨 다음, linoleic acid과 tween \(40 \)을 각각 \( 20,184 \mu \mathrm{L} \) 넣고 \( \beta \)-carotene을 재용해시킨다. Emulsion을 제조하기 위해 \( 50 \mathrm{~mL} \)의 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)를 넣어주고, 주름조개풀 추출물 \( 100 \mu \mathrm{L} \)와 emulsion \( 5 \mathrm{~mL} \)을 혼합하여 vortex한 후 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)의 water bath에서 \(30 \)분간 반응시켜 \( 470 \mathrm{~nm} \)의 파장에서 흡광도를 측정하였다.</p><h2>Tyrosinase 저해 효과 측정</h2><p>주름조개풀 추출물의 tyrosinase 저해 효과 측정을 하기 위해 Vincent와 Hearing의 방법에 준하여 실험하였다. 주름조개풀 추출물 \( 0.2 \mathrm{~mL} \)와 \( 0.1 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer (\(\mathrm{pH} ~6.8\)) 용액 \( 2.3 \mathrm{~mL}\), \(1.5 \mathrm{mM} \) L-tyrosine 농도의 기질 용액 \( 0.4 \mathrm{~mL} \)를 혼합하고, mushroom tyrosinase (Sigma-Aldrich Co, Louis, MO, USA, \( 250 \mathrm{U} / \mathrm{mL})\) \(0.1 \mathrm{~mL} \)를 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)의 water bath에서 \(20 \)분간 시약반응을 시킨 후 \( 475 \mathrm{~nm} \)의 파장에서 흡광도를 측정하였다.</p><h2>Elastase 저해 효과 측정</h2><p>피부 탄력을 유지하는 elastin을 분해하여 주름 형성에 영향을 미치는 효소인 elastase 저해 효과를 측정하기 위해 Kraunsoe 등의 방법에 준하여 실험하였다. 주름조개풀 추출물 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)와 \( 1 \mathrm{~mL} \)의 \( 0.2 \mathrm{M} \) Tris-HCl buffer (\( \mathrm{pH} ~8.0 \)), \( 0.1 \mathrm{~mL} \)의 \( 0.8 \) \( \mathrm{mM} \mathrm{N} \)-succinyl-Ala\(_{3} \)-\( \rho \)-nitroanilide 기질 용액을 혼합하고, \( 1.0 \) \( \mathrm{U} / \mathrm{mL} \) porcine pancreatice elastase (Sigma-Aldrich Co.) 농도의 효소 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)을 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)의 water bath에서 \(20 \)분간 시약반응을 시켜 \( \rho \)-nitroaniline 생성량을 \( 410 \mathrm{~nm} \)의 파장에서 흡광도를 측정하였다.</p>
피부 탄력을 유지하는 elastin을 분해하여 주름 형성에 영향을 미치는 효소인 elastase 저해 효과를 측정과정은 뭐야?
주름조개풀 추출물 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)와 \( 1 \mathrm{~mL} \)의 \( 0.2 \mathrm{M} \) Tris-HCl buffer (\( \mathrm{pH} ~8.0 \)), \( 0.1 \mathrm{~mL} \)의 \( 0.8 \) \( \mathrm{mM} \mathrm{N} \)-succinyl-Ala\(_{3} \)-\( \rho \)-nitroanilide 기질 용액을 혼합하고, \( 1.0 \) \( \mathrm{U} / \mathrm{mL} \) porcine pancreatice elastase (Sigma-Aldrich Co.) 농도의 효소 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)을 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)의 water bath에서 \(20 \)분간 시약반응을 시켜 \( \rho \)-nitroaniline 생성량을 \( 410 \mathrm{~nm} \)의 파장에서 흡광도를 측정하였다.