<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 재료</h2><p>본 실험에 사용한 국화과 꽃은 \( 18 \)종으로 수집 시기는 \( 2015 \)년 \( 10 \)월 \( 12 \)일이며, 충청남도 농업기술원 예산 국화시험장에서 제공받거나, 서울시 양재꽃시장에서 구입하였다. 꽃은 꽃잎, 암술, 수술, 씨방과 꽃받침으로 나누어져 있는데, 이번에 수집한 꽃은 모든 부위를 사용하였다. 건조하지 않은 생체 꽃 시료 \( 30 \mathrm{~g} \)을 \( 100 \%\) \(\mathrm{MeOH} \(150 \mathrm{~mL} \) 및 \( 80 \%\) \(\mathrm{MeOH}\) \(150 \mathrm{~mL} \) 로 실온에서 추출하였다. 얻어진 추출물은 용매의 극성을 이용하여 \( n \)-hexane \( (100 \mathrm{~mL} \times 2) \), \( \mathrm{EtOAc}\) \( (100 \mathrm{~mL} \times 2)\), \(n-\mathrm{BuOH}\)\((100 \mathrm{~mL} \times 2)\) 및 물 \( (100 \mathrm{~mL}) \) 로 분획물을 제조하였다. 자세한 내용을 Table \( 1 \)에 나타냈다. 표본시료(HUU-\( 15 \)-\( 515 \) KHU-\( 15 \)-\( 532 \))는 경희대학교 천연물화학 실험실에 보관되어 있다. 본 연구에서 사용된 Folin & Ciocalteu's phenol 시약, \( 3,4,5\)-trihydroxybenzoic acid (gallic acid), naringin, DPPH, kojic acid, mushroom tyrosinase, L-DOPA는 Sigma Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA)에서, \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \), diethyleneglycol, \( \mathrm{NaOH} \)는 덕산약품(Ansan, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 그 외의 실험에 사용한 시약은 대정화금주식회사(Siheung, Korea)에서 \( 1 \)급 시약을 구입하여 사용하였다. 감압 농축기는 Eyela CCA-\( 1110 \) (Tokyo, Japan)을 사용하였으며, UV spectrophotometer는 Shimadzu UV-\( 16 \)-\( 1 \) (Tokyo,Japan)와 Tecan UV/Vis (Hombrechtikon, Switzerland)를 사용하였다.</p><h2>추출물 및 분획물의 총 페놀 함량 측정</h2><p>총 페놀 함량은 Folin-Cioaclteu's phenol 시약을 이용한 발색법을 변형하여 측정하였다. 추출물 및 분획물을 증류수에 녹여 \( 200 \mathrm{ppm} \) 의 시료를 제조하고 그 중 \( 200\mu \mathrm{L} \)를 취한 뒤 \( 100 \mu \mathrm{L} \)의 \( 50 \% \) Folin-Cioaclteu's phenol 시약을 첨가하였다. 이들을 실온에서 \( 30 \)분간 반응시킨 후 \( 750 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였으며 위 과정을 \( 3 \)회 반복하였다. 측정한 값은 gallic acid 표준정량곡선을 이용하여 \( 1 \mathrm{~g} \)의 추출물 혹은 분획물 중에 함유된 gallic acid의 양 \( (\mathrm{mg} \mathrm{GAE} / \mathrm{g} \mathrm{~DW} ) \)으로 제시하였다.</p>
총 페놀 함량을 측정하기 위하여 어떤 시약을 사용하였는가?
Folin-Cioaclteu's phenol 시약