<p>화합물 4는 positive FAB/MS에서 \( \mathrm{m} / \mathrm{z} \) 823.5 \( [\mathrm{M}+\mathrm{Na}]^{+} \)의 분자이온 peak가 관측되어 분자량을 800으로 결정하였다. IR 스펙트럼으로부터 수산기(\(3401 \mathrm{cm}^{-1} \))와 이중결합(\(1649 \mathrm{cm}^{-1} \))이 있는 것으로 확인되었다. 화합물 1과의 분자량 차이가 162인 것으로 보아 육탄당이 하나 더 존재함을 예상하였다. NMR 데이터는 추가된 육탄당을 제외한 나머지 signal들이 화합물 1과 유사한 값을 가지는 것을 확인하였다. \( { }^{13} \mathrm{C}\)-NMR 스펙트럼에서 당으로부터 유래한1개의 hemiacetal carbon signal \( \delta_{\mathrm{C}} \) 107.1 (C-1''), 4개의 oxygenated methine , 1개의 oxygenated methylene \( \delta_{\mathrm{C}} \) 62.8 (C-6'') carbon signal이 추가로 관측됨에 따라, 추가로 결합한 당이 \( \beta \)-glucopyranose임을 확인하였다. 또한 Peng 등의 연구에서 C-3, C-20의 carbon signal은 대개 \(78.5\), \(72.9 \mathrm{ppm}\)에서 관측되나, \( \delta_{\mathrm{C}} \) 88.8, 83.2까지 저자장으로 이동한 것으로 보아 \( \beta \)-D-glucopyranose가 각각 C-3과 C-20의 수산기에 결합하여 glycosidation shift가 일어난 것임을 알 수 있었다. gHMBC 스펙트럼에서 glucopyranose의 anomer proton signal \( \delta_{\mathrm{H}} \) 5.12, d,\(J =7.8 \mathrm{Hz}\), (H-1'')이 aglycone의 oxygenated methylene carbonsignal \( \delta_{\mathrm{C}} \) 90.8 (C-3)과 cross peak를 보여 glucopyranose가 3번 수산기에 결합하는 것을 다시 한번 확인하였다. 위 결과를 종합하여 화합물 4를 ginsenoside Ia로 구조 동정 하였고, Dou등의 연구에서 보고된 문헌 값과 비교하였다.</p><p>화합물 5는 positive FAB/MS 에서 \( \mathrm{m} / \mathrm{z} \) 939.5 \( [\mathrm{M}+\mathrm{Na}]^{+} \) 의분자이온 peak가 관측되어 분자량을 917로 결정하였다. IR 스펙트럼으로부터 수산기(\(3401 \mathrm{cm}^{-1} \))와 이중결합(\(1649 \mathrm{cm}^{-1} \))이 있는 것으로 확인되었다. 화합물 2와의 분자량 차이가 133인 것으로 보아 오탄당이 하나 더 존재함을 예상하였다. NMR 데이터는 추가된 오탄당을 제외한 나머지 signal들이 화합물 2와 유사한 값을 가지는 것을 확인하였다. \( { }^{13} \mathrm{C}\)-NMR 스펙트럼에서 당으로부터 유래한 1개의 hemiacetal carbon \( \delta_{\mathrm{C}} \)110.0 (C-1'''), 3개의 oxygenated methine , 1개의 oxygenated methylene \( \delta_{\mathrm{C}} \) 62.6 (C-5''') carbonsignal이 추가로 관측됨에 따라, 추가로 결합한 당이 \( \alpha \)-arabinofuranose임을 확인하였다. 또한 Seo 등의 연구에서 C-6'' carbon signal은 대개 62.5 ppm에서 관측되나, \( \delta_{\mathrm{C}} \) 68.4까지 저자장으로 이동한 것으로 보아 \( \alpha \)-L-arabinofuranose가 C-6''에 위치함을 예상하였고, gHMBC 스펙트럼에서 arabinofuranose의 anomer proton signal \( \delta_{\mathrm{H}} \) 5.59 (H-1''')이 \( \beta \)-glucopyranose의oxygenated methylene carbon signal \( \delta_{\mathrm{C}} \) 68.4 (C-6'')과 crosspeak를 보여 arabinofuranose가 6''번 수산기에 결합하는 것을 다시 한번 확인하였다. 위 결과를 종합하여 화합물 5는 Wang 등이 보고한, notoginsenoside Fe로 구조결정하였다. 그러나, 화합물 2-5는 인삼열매에서는 이번에 처음 분리 보고되었다.</p><p>인삼 열매로부터 분리한 5종의 화합물을 5종의 인체 암세포주(HCT-116, SK-OV-3, HeLa, HepG2, SK-MEL-5)에 처리하여 세포독성을 측정하였다(Fig. 2). Ginsenoside F2 는 SK-MEL-5 (\( 82.8 \mu \mathrm{M} \)), HepG2 ( \( 86.8\mu \mathrm{M} \)), HeLa ( \( 78.3\mu \mathrm{M} \)) 농도에서 각암세포주의 세포 생존율이 \( 50\% \) 이하로 감소하였다. GinsenosideIa는 HCT-116 (\(24.5 \mu \mathrm{M} \)), SK-MEL-5 ( \(25.4 \mu \mathrm{M} \)), SK-OV-3 (\( 26.3\mu \mathrm{M} \)), HepG2 (\( 22.0 \mu \mathrm{M} \)), HeLa (\( 24.9 \mu \mathrm{M} \)) 농도에서 각 암세포주의 세포 생존율이 \( 50\% \) 이하로 감소하였다. Notoginsenoside Fe는 SK-MEL-5: \( 81.7\mu \mathrm{M} \) 농도에서 각 암세포주의 세포 생존율이 \( 50\% \) 이하로 감소하였다. 위 결과에 따르면 ginsenoside Ia는 5종의 모든 인체 암세포주에 대해 세포독성이 있었으며, ginsenoside F2는 피부암, 간암 및 자궁암에, notoginsenoside Fe는 피부암에 대한 세포독성이 나타났다. 화합물 2, 4, 5의 구조 모두 3번 수산기에 glucopyranose가 결합 되어있는 것을 확인하였고, 위 결과에 따라 3번 수산기에 당이 결합되면 인체 암세포주에 대해 세포독성이 나타나는 것을 알 수 있었다. 실험을 통해 인삼 열매로부터 분리한 5종의 ginsenoside가 인체 암세포주에 대해 세포독성을 저해시키는 것을 확인하였다.</p>
인삼 열매로부터 세포 독성을 측정하기 위해 어떤 암세포주에 처리하였나요?
5종의 인체 암세포주(HCT-116, SK-OV-3, HeLa, HepG2, SK-MEL-5)