<h1>결 과</h1><h2>과발현 벡터 및 RNAi 벡터 제작</h2><p>식물의 특정 유전자의 생물학적 기능을 연구하기 위해서, 대상 유전자의 과발현 또는 발현 억제 형질전환체가 매우 유용하게 사용된다. 이를 위해 애기장대의 세 종류 프로모터를 이용한 과발현 형질전환용 벡터 및 RNAi 벡터를 제조하였으며, 이를 이용한 애기장대 및 벼 형질전환체를 분석하였다.</p><p>먼저, CaMV 35S 프로모터, UBQ3 및 UBQ10 프로모터를 대상으로 과발현 벡터를 제조하였다. CaMV 35S 프로모터는 기존에 특정 유전자의 과발현으로 알려져 있으며, 전체 프로모터는 B 도메인과 A 도메인으로 구성되어 있다. 하지만 CaMV 35S 프로모터의 B 도메인과 A 도메인 전체를 이용할 경우에는 일부 기관에서만 대상 유전자의 과발현이 나타나므로 A 도메인의 core 부분만을 B 도메인과 연결시켜 modified CaMV 35S 프로모터를 제작하였다. 또한 애기장대에서 대부분의 조직에서 지속적으로 과량 발현되는 프로모터로 알려진 UBQ3 및 UBQ10 프로모터를 포함하는 과발현 벡터를 제작하였다. 쌍자엽식물 과발현용 벡터를 제조하기 위한 binary 벡터로 pPZP211 벡터가 사용되었는데, 이 벡터는 크기가 작고 MCS에 많은 수의 제한효소 부위를 가지고 있으며, 박테리아 내에 copy 수가 많다는 장점을 가지고 있다. Modified CaMV 35S 프로모터, UBQ3 프로모터, UBQ10 프로모터 각각을 Nos terminator와 함께 pPZP211 벡터에 클로닝 하였으며, 프로모터와 terminator 사이에는 5개 또는 7개 제한효소 부위를 가지는 MCS를 두어 과발현 하고자하는 유전자를 손쉽게 클로닝 할 수 있게끔 하였다. Modified CaMV 35S 프로모터, UBQ3 프로모터, UBQ10 프로모터에 대한 제작된 각각의 벡터들을 pFGL571, pFGL846, pFGL847이라 명명하였다.</p><p>제조된 벡터가 식물체 내에서 유전자를 적절히 과발현 시킬 수 있는지 알아보기 위하여 pFGL571, pFGL846, pFGL847의 각 프로모터 뒷부분에 리포터 유전자인 GUS를 클로닝 하여 pFGL578, pFGL848, pFGL849를 각각 제조하였다. 한편 modified CaMV 35S 프로모터에 대한 대조구 프로모터로 intact CaMV 35S 프로모터::omega 서열을 이용하였으며, 이 서열에 GUS 유전자가 연결된 벡터, pFGL1089를 제조하였다. 또한 sGFP의 암호화 부위를 pFGL571의 modified CaMV 35S 프로모터에 연결시킨 pFGL586 벡터를 제조하였고, 이를 이용해 GUS 벡터의 결과를 다른 리포터 유전자를 사용하여 재확인하고자 하였다. 이렇게 제작된 벡터들은 모두 야생형 애기장대에 형질전환하였다.</p><p>RNAi 벡터의 경우 쌍자엽식물 및 단자엽식물에 모두 사용할 수 있는 RNAi 기본 벡터를 제작하였다. 기존의 연구에서 식물의 인트론을 spacer로 사용할 경우 RNAi 효과가 매우 높다고 알려져 있기 때문에, spacer DNA로 벼의 OSEMF1 유전자의 세 번째 인트론을 pBSIIKS 벡터에 클로닝 하였고, 이를 pFGL727이라 명명하였다. pFGL727은 인트론 왼쪽 및 오른쪽에 각각 5 개 및 8 개의 제한효소 부위를 가지고있어 동일한 서열에 대한 역반복 서열의 클로닝을 쉽게 할 수 있다. 클로닝 된 역반복 서열 부위는 쌍자엽식물용 또는 단자 엽식물용 과발현 벡터로 옮겨 식물에 형질전환할 수 있다.</p>
논문에서 제작한 과발현 벡터는 무슨 프로모터를 포함해?
UBQ3 및 UBQ10 프로모터