<h2>추출물 및 분획물의 총 플라보노이드 함량 측정</h2><p>총 플라보이드 함량은 diethylene glycol을 이용한 발색법을 변형하여 측정하였다. 추출물 및 분획물을 증류수에 녹여 \( 200 \mathrm{ppm} \)의 시료를 제조하고 그 중 \( 200 \mu \mathrm{L} \)를 취한 뒤 diethylene glycol \( 2 \mathrm{~mL} \)와 혼합하였다. 여기에 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \) 용액 \( 200 \mu \mathrm{L} \)를 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) (water bath)에서 \( 1 \)시간 동안 반응시켰다. 이후 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 위 과정을 \( 3 \)회 반복하였으며 측정한 값은 naringin 표준정량곡선을 이용하여 \( 1 \mathrm{~g} \)의 추출물 혹은 분획물 중에 함유된 naringin의 양 \( (\mathrm{mg} \mathrm{NAE} / \mathrm{g} \mathrm{DW}) \)으로 제시하였다.</p><h2>추출물 및 분획물의 DPPH radical 소거활성 측정</h2><p>Brand-Williams 등의 방법에 의하여 소거활성을 측정하였다. 추출물 및 각 분획물의 농축 건조물을 \( 25 \mathrm{ppm}\) \((99.5 \% \) methanol)의 농도로 조제한 용액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \) (control: \( 99.5 \% \) methanol)에 \( 0.1 \mathrm{mM} \) DPPH용액(\( 99.5\% \)methanol) \( 1.9 \mathrm{~mL} \)를 가하였다. Vortex mixer로 \( 10 \)초간 진탕한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 30 \) 분간 반응시켰다. 이후 UV spectrophotometer를 이용하여 \( 517 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 앙성 대조 약물로는 \( \alpha \)-tocopherol을 \(12.5, 25,50,100 \mathrm{ppm}\) \((99.5 \% \) methanol) 의 \( 4 \)가지 농도로 용액을 조제하여 측정하였다. 각 시료의 항산화작용은 DPPH에 대한 전자공여능(Electron donating ability, EDA \(\%\))으로 나타내었다. EDA \( (\%)=\{( \) Control \( \quad \) O.D. \( - \) Sample O.D. \( ) / \) Control O.D. \( \} \times \) \( 100\) (\(\%\)); Sample O.D.: 시료를 가한 시험액의 흡광도; Control O.D.: 시료 대신 methanol을 가한 시험액의 흡광도. 효과가 좋은 분획물은 농도를 낮게 하여 \( 3 \)가지 농도로 같은 방법으로 측정하였다. 각 실험은 \( 3 \) 반복으로 실시하였다.</p><h2>추출물 및 분획물의 tyrosianase 활성 억제 효과 측정</h2><p>Tyrosinase 활성 억제효과는 L-DOPA 기질과 tyrosinase의 반응을 거쳐 생성되는 dopachrome을 UV spectrometer로 측정하여 확인하였다. 꽃으로부터 얻은 추출물과 분획물 시료 용액에 \( (1,000 \mathrm{ppm})\), \(8.3 \mathrm{mM} \) L-DOPA 기질, \( 2000 \mathrm{unit} \) mushroom tyrosinase 순으로 첨가해 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) heating block에서 \( 30 \)분 동안 배양한 후, \( 475 \mathrm{~nm} \)에서 dopachrome의 생성 정도를 흡광도로 측정하였다. 다음과 같은 식으로 활성 억제 정도를 \( \%\)로 나타냈다. Tyrosinase 활성 억제 정도 \( =\{(\mathrm{A}-\mathrm{B})-\mathrm{C} / \)\( (\mathrm{A}-\mathrm{B})\} \times 100 \%\). A는 시료 대신 buffer를 넣었을 때, B는 시료와 tyrosinase 대신 buffer를 넣었을 때 측정한 흡광도이다. C는 시료를 넣고 반응 후 측정한 흡광도이다. 각 실험은 \( 3 \) 반복으로 실시하였다.</p>
DPPH에 대한 전자공여능을 구하는 식은?
EDA \( (\%)=\{( \) Control \( \quad \) O.D. \( - \) Sample O.D. \( ) / \) Control O.D. \( \} \times \) \( 100\) (\(\%\))