<h2>LDH 측정에 의한 세포독성 확인</h2><p>PC12 세포의 세포독성 효과를 측정하기 위한 방법으로 LDH release assay를 실시하였다. 세포를 \( 1 \times 10^{5} \) cells \( / \mathrm{ml} \)로 맞춘 후, \(100\mathrm{\mu l}\)씩 96-well plate에 분주하여 24시간 동안 배양한 뒤, \(50, 100, 250 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 제조한 PSE를 세포에 처리 하였다. 30분 후 \( 0.5 \mathrm{mM} ~\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)를 처리하여 2시간 배양한 다음, 배양액을 새로운 96-well plate에 \( 50 \mu \mathrm{l} \) 분주하고, 이 배양액에 LDH reagent를 \( 50 \mu \mathrm{l} \)씩 첨가하여 상온에서 정치시킨 후, 20분간 반응하였다. 반응이 완료되면 stop solution인 \(1\mathrm{N~HCI}\)을 \( 100 \mu \mathrm{l} \)씩 첨가하여 반응을 중지시킨 후, ELISA reader를 이용하여 \( 540 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 살아남은 세포의 LDH 측정을 위해 배양액을 제거한 후, \( 0.5 \% \) triton X-100 용액을 \( 50 \mu \mathrm{l} \) 첨가하여 40\(/mathrm{rpm}\)으로 10분간 shaking시켜 세포벽을 깨트린 다음, 같은 방법으로 LDH reagent \(50\mathrm{\mu l}\)를 첨가하여 반응시키고, 반응이 끝나면 반응 정지액을 넣은 뒤, \( 540 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. LDH에 의한 세포독성의 백분율은 배양액과 살아있는 세포에서 총 LDH에 대한 배양액으로부터 유리된 LDH의 값으로 계산하여 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 실험군과 비교한 값을 나타내었다.</p><h2>Colony formation assay</h2><p>PC12 세포의 세포생존율을 측정하기 위하여 colony formation assay를 실시하였다. 24-well plate에 \( 5 \times 10^{4} \)cells\( / \mathrm{ml} \)로 plating하여 24시간 배양시킨 후 PSE \(50, 100,250 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리하여 30분 배양시킨 후, \( 0.5 \mathrm{mM} ~\mathrm{H} \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)를 처리하고 다시 2시간 반응시킨 후 새로운 배지로 희석하여 6-well plate에 \( 1 \times 10^{3} \)cells\( / \mathrm{ml} \)이 되도록 replating하여 7~8일 동안 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \), \( 5 \% ~\mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 배양하였다. 형성된 colony는 \( 10 \% \) formalin으로 고정하고, \( 0.01 \% \) crystal violet으로 염색하여 counting하였다. 세포생존율은 PSE를 처리하지 않은 대조군 값을 \( 100 \% \)로 두고 계산하였다.</p>
PC12 세포의 세포독성 효과를 측정하기 위한 방법으로 LDH release assay를 실시할 때 세포에 PSE를 어떻게 처리하였어?
세포를 \( 1 \times 10^{5} \) cells \( / \mathrm{ml} \)로 맞춘 후, \(100\mathrm{\mu l}\)씩 96-well plate에 분주하여 24시간 동안 배양한 뒤, \(50, 100, 250 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 제조한 PSE를 세포에 처리