<h1>결과 및 고찰</h1><h2>Whole cell 분리</h2><p>세균항원은 일반적으로 항혈청 제조와 분석을 위하여 일반적으로 두 가지 형태가 사용되어 왔다. 한 가지 형태는 정제된 항원과 세균세포(bacterial cell), 편모(flagellum) 또는 협막(capsule) 으로부터 분리된 것이 있고, 또 다른 형태는 일반적으로 열, formalin, acetone 또는 alcohol로 사멸된 whole cell이 있다.</p><p>본 연구에서는 H. pylori을 처리하여 나타나는 균체 단백질의 종류를 알아보고 그 중 면역원성(immunogen)을 나타내는 항원성 단백질을 알아보고자 하였다. H. pylori의 WC 단백질은 SDS-PAGE로 분자량을 측정한 결과 12 종류의 주요단백질 band를 확인할 수 있었다(Fig. 1).</p><h2>Crude outer membrane protein 분리</h2><p>세균의 OMP는 백신항원으로 많이 개발하여 사용되어 왔으며, H. pylori로부터 분리된 OMP 는 분자량이 다른 7종류의 주요 단백질로 분리되는 것을 관찰할 수 있었다(Fig. 1).</p><h2>Crude urease 분리</h2><p>Urease는 짧은 chain의 urease A 와 긴 chain의 urease B 로 두 가지의 subunit 구조로 구성되어 있으며, 활성 urease 효소를 생산하기 위해서는 적어도 5개의 추가 단백질을 더 필요로 하는 것으로 알려져 있다. 또한 면역학적 연구에서 urease에서 정제된 urease B 는 높은 면역원(immunogenic)이 되는 것으로 보고되고 있다.</p><p>H. pylorir로부터 분리정제된 urease에서도 분자량이 32 \( \mathrm{kDa} \) 인 urease A와 \( 62 \mathrm{kDa} \) 인 urease B 두 가지 subunit로 나누어지는 것으로 보고되고 있으며, 본 실험방법에 의해 분리된 crude urease는 25,36,64 \( \mathrm{kDa} \) 의 분자량을 갖는 3종류의 단백질 band를 확인 할 수 있었다(Fig. 1).</p><h2>Lipopolysaccharide 분리</h2><p>LPS는 그람음성균의 외막에 존재하는 성분으로써 체내에 들어오면 혈압을 저하시키며, 발열, 호중구 감소증, 혈액 응고, 쇼크 등의 endotoxin으로 작용할 수 있다. 또한 LPS에 의하여 대식세포가 IL-1과 TNF를 분비하거나, LPS가 보체의 대체경로를 활성화 시키거나, B 임파구를 형질세포로 분화시키는 작용을 한다.</p><p>Pasteurella haemolytica에서 분리된 LPS는 \( 20 \sim 24 \mathrm{kDa} \) 정도에 위치하는 것으로 보고되고, 본 실험에서 H. pylori로부터 분리된 LPS는 \( 20 \mathrm{kDa} \) 부위에 한 종류의 band가 형성되는 것을 볼 수 있었다(Fig. 1).</p><h2>IgG 항체생성</h2><p>IgG 는 감마 \( (\gamma) \) 사슬을 가진 immunoglobulin으로 포유동물의 3/4 를 차지하여 가장 많은 양을 차지한다 항체의 작용 중에서 독성물질이나 바이러스에 결합하여 그것을 무해화하는 작용 및 백혈구의 식살균 작용의 보조기능을 하는 중화항체, 옵소닌항체 대부분은 IgG 에 속한다. H. pylori로부터 분라된 각항원에 대한 IgG 항체 함량을 측정한 결과 Fig. 2 와 같이 나타났다. 항원의 종류에 따라 생성된 IgG 항체 생성량은 WC (H) \( 113.5 \pm 0.4 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \), WC(L) \( 77.9 \pm 6.4 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \), OMP \( 84.9 \pm 6.4 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \), Urease \( 123.8 \pm 2.9 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 로 나타났으며, 동일 항원농도에서의 IgG 항체 생성은 urease 항원이 \( 123.8 \pm 2.9 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 으로 가장 많은 양을 생산하였다.</p>
세균항원이 항혈청 제조와 분석을 위하여 whole cell의 형태로 사용될 때 일반적으로 어떤 과정을 거쳐야 돼?
열, formalin, acetone 또는 alcohol로 사멸