<h1>재료 및 방법</h1><h2>세포배양 및 파이토케미칼</h2><p>마우스 전지방 세포주인 3T3-L1은 한국식품연구원으로부터 분양 받았다. 세포주 배양은 \( 10 \% \) BS (Bovine Serum, Gibco,USA), \( 1 \% \) penicillin 및 streptomycin (WelGene, Korea)이 포함된 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco,USA)을 사용하였으며, 배양은 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \)조건 하에서 배양하였다. 파이토케미칼인 genistein, resveratrol, capsaicin,daidzein과 대조구로 사용된 DMSO (Dimethyl Sulfoxide)는 Sigma사(USA)로부터 구입하였다.<p><h2>Cell viability assay (MTS assay)</h2><p>마우스 전지방 3T3-L1세포주에 파이토케미칼을 조건에 따라 24시간 처리한 후 cell viability assay를 수행하였다. Cellviability assay의 방법과 절차는 기 발표된 논문에 따라 진행하였다 즉, 96 well plate에 well당 \( 3 \times 10^{3} \)개의 세포를 접종하고 24시간 동안 배양한 후, 파이토케미칼을 24시간 처리 후, MTS용액(Promega, USA)을 각 well당 \( 20 \mu{l} \)씩 첨가하고 배양기에서 4시간 동안 반응하였다. 반응이 끝난 후 NanoQuantPlate\( ^{\mathrm{TM}} \) (Tecan Trading AG, Switzerland)를 이용하여 \( 490 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 결과 수치는 4개의 독립적인 well에서 수행한 값을 Microsoft EXCEL program을 이용하여 분석한 후 mean±SD 값으로 나타내었다.</p><h2>마우스 전지방 세포의 분화 유도</h2>마우스 전지방 3T3-L1세포주가 \( 90 \% \) confluent 상태가 될때까지 배양한 후, 분화를 유도하였다. 세포가 confluence상태가 되었을 때 \( 10 \% \) FBS (Fetal Bovine Serum, Gibco-BRL, USA), \( 1 \% \) penicillin 및 streptomycin (WelGene, Korea)이 함유된 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco-BRL,USA) 배지에 분화유도 물질인 Methylisobutylmethylxanthine(IBMX, Cayman, USA), Dexamethasone (Dex, Cayman, USA)그리고 Insulin(Ins, Cayman, USA)을 \( 1 \mu \mathrm{l} / \mathrm{ml} \)로 처리한 후,2일간 분화를 유도하였다. 분화도중 genistein이 미치는 영향을 확인하기 위하여 배지에 \( 50 \mu \mathrm{M} \) genistein을 분화유도 시약과 함께 처리하였다. 그 후 2일 후에 Insulin \( 1 \mu \mathrm{l} / \mathrm{ml} \)를 첨가한배지와 genistein \( 50 \mu \mathrm{M} \)과 DMSO를 각각 처리하여 배지를교환하였고, 분화유도 4일 후에 genistein 50 μM과 DMSO만을 각각 처리한 배지로 배양액을 교환해주어 4일간 더 배양하였다. 또한, 배지는 2일 간격으로 새로운 배지로 교환해주었다.</p><h2>Oil red O</h2><p>염색지방세포 형성여부를 확인하기 위하여 Oil red O 염색을 수행하였다. 즉, 분화가 유도된 세포를 PBS로 세척한 후,\( 4 \% \) formaldehyde로 20분 상온에 고정 시킨 뒤 isopropanol 을 5분간 처리하였다. 그 후, Oil red O staining 용액(Sigma,USA)을 첨가하여 지방세포를 염색시킨 후, 역상 현미경(DFC-295, Leica, Germany)을 이용하여 100배의 배율 하에서세포의 형태적 변화를 비교 관찰하였고, 현미경에 설치된 카메라를 이용하여 well 단위로 세포 형태를 관찰 하였다.</p>
3T3-L1어떤 세포인가?
전지방 세포주