<h1>재료 및 방법</h1><h2>누룩의 전처리</h2><p>누룩시료로는 (유)금정산성토산주에서 산성막걸리 생산을 위해 제조된 산성누룩을 사용하였다. 시료의 균질화는 누룩 \(10\mathrm{~g} \)을 분쇄하여 이루어졌으며 이중 \( 2 \mathrm{~g} \)은 미생물계수를 위해 그리고 \( 2 \mathrm{~g} \)은 DGGE (Denaturing Gradient Gel Electrophoresis) 분석을 위해 이용하였으며 나머지는 균주 보관용 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \) 냉동고에 보관하였다.</p><h2>미생물 count 및 분리</h2><p>균질화된 누룩 \( 1 \mathrm{~g} \)을 생리식염수 \( 9 \mathrm{~ml} \)에 첨가하여 연속희석법으로 희석한 후 일반세균은 Plate Count Agar (PCA; Difco, USA)배지에 진균은 Potato Dextrose Agar (PDA; Difco, USA) 배지에 도말하여 접종하였다. 배양은 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 수행하였으며 PCA는 3일간 그리고 PDA는 5일간 배양 한 후 성장된 집락(colony)을 계수하였다. 미생물의 분리는 성장된 집락의 모양과 색을 기준으로 동일배지를 이용하여 분리하였으며 순수 분리된 균주는 \( 20 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) glycerol에 현탁 한 후 \( -70{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보존하였다.</p><h2>Total genomic DNA의 추출</h2><p>누룩으로부터 세균과 진균의 genomic DNA 추출을 위한 세포파쇄를 위해 균질화된 누룩 \( 1 \mathrm{~g} \)을 막자 사발에 넣고 액체 질소를 이용하여 세포파쇄를 하였으며 동일과정을 4회 반복하였다. Genomic DNA의 추출은 hot phenol extraction법 에 의거하여 수행하였으며 그 방법은 다음과 같다. 액체질소에 첨가한 파쇄된 시료 \( 0.25 \mathrm{~g} \)은 Lysis buffer (\(50 \mathrm{~mM}\) Tris-base, \(20 \mathrm{~mM} \) EDTA, \(400 \mathrm{~mM} ~\mathrm{NaCl}, 0.75 \mathrm{~M} \) sucrose) \(1 \mathrm{~ml}, 10 \% \) sodium dodecyl sulfate (SDS) \( 100 \mu \mathrm{l}\)를 첨가한 후 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 반응하였다. 시료에 RNase A \( (10 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml}) \)를 \( 10 \mu\mathrm{l}\) 첨가한 뒤 상온에서 5분 반응시킨 후 원심분리(\(16,000\times g, 10 \mathrm{~min}\))하여 상등액 \( 750 \mathrm{\mu l} \)를 취하였다. 동량에 phenol : chloroform : isoamyl alcohol (25:24:1)을 첨가하여 혼합한 후 원심 분리 \( (16,000 \times g, 10 \mathrm{~min}) \)를 통하여 상등액 \( 600 \mathrm{\mu l} \)를 취하였다. 이 상등액에 동량의 chloroform: isoamyl alcohol (24:1)를 넣고 원심 분리한 후 상등액 \( 400 \mathrm{\mu l} \)를 빈 튜브에 옮기고 \( 100 \% \) cold ethanol \( 1 \mathrm{ml}, 3 \mathrm{M} \) sodium acetate \( 40 \mu \mathrm{l} \)를 첨가하여 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 200분 이상 정치하였다. 이후, 튜브를 원심분리(\(14,000\times g, 10 \mathrm{~min}) \)한 후 상등액을 제거하고 \( 70 \% \) cold etha-nol \( 1 \mathrm{ml} \)을 사용하여 혼합한 후 원심 분리하여 상등액을 제거하고 건조하였다. 최종적으로 \(100 \mathrm{\mu l} \)의 증류수에 용해한 후 \( 1 \% \) agarose gel을 이용하여 전기영동을 한 후 ethidium bro-mide (EtBr)로 염색하여 확인하였다.</p>
금정산성토산주에서 산성막걸리를 만들기 위해 사용한 누룩은 무엇인가?
산성누룩