<h2>Ferulic acid-rich fractions의 제조</h2><p>Ferulic acid-rich fraction은 Bonnin 등의 방법에 따라 맥주박(brewer's spent grain)을 이용하여 제조했다. 시료에 \( 50 \mathrm{mM} \) trifluoroacetic acid로 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 30 분 처리한 산 추출물에 4 배의 ethanol을 첨가하여 침전시키고 상등액을 분리하여 동결 건조한 시료를 탄소원 HBSG I (hydrolyzed brewer's spent grain I)로 했다. 불용성 시료와 ethanol 침전물을 합하여 다시 \( 150 \mathrm{mM} \) trifluoroacetic acid로 동일한 조건에서 가수분해 시켜 ethanol 침전과 여과 후 얻은 상등액을 동결 건조하여 본 실험의 탄소원인 HBSG II 로 사용했다. AFBSG(autoclaved fraction from brewer's spent grain)의 제조는 Saulnier 등의 방법에 따라 autoclave (\(120^{\circ} \mathrm{C}\), 60 분)했다. 용해된 분획은 원심 분리 및 여과로 회수하여 동결 건조한 시료를 AFBSG(autoclaved fraction from brewer's spent grain)으로 했다.</p><h2>APPL의 측정</h2><p>Pseudomonas sp. LG2에 의해 생성되는 APPL(acid-precipitable polymer lignin)의 측정은 앞에서 보고한 방법에 따라 extractive-free lignocellulose를 제조하여 조사하였다.</p><h2>전기영동 및 효소 활성 염색</h2><p>Polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE)는 Laemmli의 방법을 수정하여 사용하였다. \(3\%\) acrylamide로 된 stacking gel과 \( 10 \% \) acrylamide로 된 separating gel을 사용하여 시료 단백질 \( 30 \mu \mathrm{g} \) 을 loading한 후 전기영동을 실시했다. 전기영동 후 gel을 조심스럽게 분리하여 효소 활성 염색에 사용하였다. Xylanase의 효소 활성 염색은 Royer 방법을 변형하여 사용하였다. Agarose (Sigma type I) \( 2 \mathrm{~g} \) 을 phosphate buffer(\( \mathrm{pH} 6.8)\) \( 100 \mathrm{ml} \) 에 용해하고 xylan 또는 remazol brilliant blue-xylan \( 2 \% \) 용액을 \( 1: 2 \) 로 혼합하여 gel을 제조하였다. 제조한 gel을 단백질 gel에 덮고 기포를 제거한 후 밀봉하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간 반응 시키고 \( 95 \% \) ethanol에 30분 처리하였다. 한편 FAE의 활성 염색은 Ferreira 등의 방법에 따라 기질로서 \( 70 \mathrm{mM} \) phosphate buffer \( (\mathrm{pH} 6\))에 \( 0.05 \% \) 4-methyl umbelliferyl trimethyl ammonium cinnamate chloride (MUTMAC)를 함유한 용액에 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 반응시키고 \( 312 \mathrm{~nm} \) 에서 활성 형광 band를 확인하였다.</p>
시료를 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 30 분 처리한 후 무엇을 첨가한 용액을 이용해 침전시키니?
ethanol