<p>인체 간암세포의 성장에 미치는 \( \beta \)-lapachone의 영향을 조사하기 위해 MTT assay를 실시한 결과 HepG2 및 Hep3B 세포 모두에서 \( \beta \)-lapachone 처리 농도 의존적으로 증식이 억제되었으며, \( \mathrm{LC}_{50} \)의 농도는 \( 3.5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 전후였으며, 이러한 결과는 다른 인체 암세포에서 나타난 선행연구의 결과들과 매우 유사하였다. \( \beta \)-lapachone 처리에 따른 암세포들의 증식억제와 연관된 형태변화를 조사하기 위해서 \( 3.5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도의 \( \beta \)-lapachone을 처리한 세포를 시간 의존적으로 도립 현미경을 통하여 관찰한 결과는 Fig. 1C 및 D에서 나타난 바와 같이 \( \beta \)-lapachone의 처리농도가 증가할수록 암세포의 밀도가 감소할 뿐 아니라 세포막 형태의 변화를 나타내어 길고 분지를 형성하는 듯한 모양으로 바뀌면서 부착력을 상실하고 배지 위로 부유되는 경향성이 증가함을 관찰 할 수 있었으며, 이는 선행연구에서 관찰된 연구들과 매우 유사하였다.</p><p>Receptor tyrosine kinase는 세포 내에서의 세포주기, apoptosis, 유전자 발현, 세포골격 형성 등의 다양한 세포기능을 조절하는 signaling pathway와 세포외부 환경을 연결하는데 매우 중요하다. Receptor tyrosine kinase인 type 1 insulin-like growth factor receptor (IGF-1R)와 그 ligand들은 많은 인체 종양에서 그 발현이 증가되며 mice pancreas에서도 IGF-1R 발현이 종양의 침윤과 전이를 유도한다고 보고됨으로 항암치료의 훌륭한 target marker가 될 수 있음이 제시된 바 있기 때문에, 본 연구에서는 IGF-1R 단백질 발현에 미치는 \( \beta \)-lapachone의 영향을 조사하였다. Fig. 2의 결과에서 알 수 있듯이 IGF-1R의 발현은 \( \beta \)-lapachone 처리에 따라 HepG2 및 Hep3B 세포 모두에서 처리 시간 의존적으로 감소함을 알 수 있었다. 따라서 \( \beta \)-lapachone 처리가 HepG2와 Hep3B 세포의 증식 억제뿐 아니라 adhesion과 migration에도 영향을 줄 것으로 생각되어, wound healing assay와 matrigel invasion 실험을 실시한 결과 간암세포의 침윤과 전이에 \( \beta \)-lapachone이 강력한 억제 효능이 있음을 확인한 바 있으므로(data not shown) 세포의 junction과 관련된 단백질 발현에 미치는 \( \beta \)-lapachone의 영향을 조사하였다.</p><p>암세포의 전이와 관련한 다양한 생체 반응 중 세포의 adhesion과 junction 관련 단백질의 변화에서 특히 TJ 관련 claudins 단백질의 변화가 중요하게 작용할 것으로 추정되어 \( \beta \)-lapachone이 이들 유전자들의 발현에 미치는 영향을 조사하였는데, 특히 유방암세포를 포함한 상피세포성 암세포의 다른 조직으로의 침윤과 전이성은 사망률을 높이고 있어 환자의 예후가 나빠 암세포의 전이를 막는 새로운 방법이 시급하며, claudin 유전자가 hallmark로서 작용할 수 있을 것으로 기대되고 있다. 본 실험의 결과에 의하면 HepG2 및 Hep3B 세포 모두에서 \( \beta \)-lapachone 처리에 따른 암세포의 증식억제 효능은 \( \beta \)-lapachone 처리 시간 의존적인 claudin- 3 및 -4 단백질의 발현 증가와 연관성이 있음을 알 수 있었다. 아울러 \( \beta \)-lapachone은 TJ 단백질인 ZO-1의 발현 역시 전사 및 번역 수준에서 유의적으로 증가시켰으며, \( \beta \)-catenin 발현 또한 \( \beta \)-lapachone 처리 시간 의존적으로 증가되었다. 그러나 claudin-3 및 -4 의 mRNA 발현은 HepG2 및 Hep3B 세포 모두에서 \( \beta \)-lapachone 처리에 따라 유의적인 변화를 관찰할 수 없었다. 따라서 조사된 TJ 관련 유전자의 발현 중 claudin-3 및 -4는 \( \beta \)-lapachone 처리에 따라 전자수준에서 보다는 번역 수준에서 조절 받을 수 있을 것으로 기대되어지며, 이에 관한 추가적인 연구를 실시 중이다. 이상의 결과는 \( \beta \)-lapachone의 처리에 의한 TJ의 강화로 암세포의 전이 억제에 영향을 줄 수 있음을 시사하여 주는 것이며, 부가적인 관련 유전자의 발현에도 유의적인 조절 가능성을 제시하여 주는 결과로서 이에 관한 후속 연구의 실시가 필요할 것으로 생각된다.</p>
\( \beta \)-lapachone가 인체 간암세포의 성장에 미치는 영향을 조사하기 위해 실시한 것은 무엇이니?
MTT assay