<h2>실험 재료 및 세포배양</h2><p>연구에 사용된 LPS는 Sigma-Aldrich에서 구입하였으며, RAW\( 264.7 \) 세포는 한국세포주은행에서 분양 받아, \( 10 \% \) fetal bovine serum (FBS, Gibco, Grand Island, NY, USA)과 \( 100 \mathrm{U} / \mathrm{mL} \) penicillin, \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) streptomycin을 함유된 Dulbecco's Modified Eagle Medium (Gibco) 배양액을 사용하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) 조건의 incubator 에서 배양 하였으며, \( 2 \)일을 주기로 계대 배양하였다.</p><h2>세포 독성 측정</h2><p>RAW \( 264.7 \) 세포에 대한 시료의 세포 독성은 MTT assay를 이용한 cell viability assay를 통해 측정하였다. \( 24 \)-well plates에 RAW \( 264.7 \) 세포를 \( 7.0 \times 10^{4} \) cells/well의 농도로 접종하여 \( 37 \)\( { }^{\circ} \mathrm{C} \), \( 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 \( 24 \)시간 동안 전 배양한 후, 배양 배지로 희석한 시료 \( (6.25,12.5,25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)와 \( \mathrm{LPS}(1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)를 동시 처리하여 동일한 배양 조건하에 \( 24 \)시간 동안 염증을 유도하였다. 그 후 \( \mathrm{MTT} \) 시약을 첨가하여 incubator에서 \( 3 \)시간 동안 반응하였으며, 각 well에 형성된 formazan blue를 DMSO로 용해시킨 후 ELISA reader를 이용하여 \( 570 \mathrm{~nm} \) 파장에서 흡광도를 측정하였다.</p><h2>\( \mathrm{NO} \) 생성 억제 활성 측정</h2><p>RAW \( 264.7 \) 세포를 \( 24- \) well plates에 \( 7.0 \times 10^{4} \) cells/well의 농도로 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator 에서 \( 24 \)시간 동안 전배양한 후 \( \mathrm{LPS}(1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)와 희석 된 시료\( (6.25,12.5,25 \mu \mathrm{g} / \) \( \mathrm{mL}) \)를 동시 처리하여 동일한 배양 조건하에 \( 24 \)시간 동인 염증을 유도하였다. 이후 배양액 \( 100 \mu \mathrm{L} \)에 Griess 시약 \( [1 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) sulfanilamide, \( 0.1 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) naphylethylenediamine in \( 2.5 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) phosphoric acid] \( 100 \mu \mathrm{L} \)를 \( 96 \)-well plates에서 혼합하여 \( 15 \)분간 암반응 시킨 후, ELISA reader를 사용하여 \( 540 \mathrm{~nm} \) 파장에서 흡광도를 측정하였다.</p><h2>Prostaglandin \( \mathrm{E}_{2}\left(\mathrm{PGE}_{2}\right) \) 생성 억제 활성 측정</h2><p>RAW \( 264.7 \) cell 을 \( 24 \) -well plates에 \( 7.0 \times 10^{4} \) cells \( / \) well 농도로 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 \( 24 \)시간 동안 전 배양한 후, LPS \( (1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)와 희석된 시료 \( (6.25,12.5,25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)를 동시 처리하여 동일한 조건하에 \( 24 \)시간 동안 염증을 유도하였다. 이후 회수한 배양액을 \( 10,000 \mathrm{rpm} \)에서 \( 3 \)분 동안 원심분리하여 침전물을 제거한 뒤, 상등액을 회수하여 실험에 사용하였으며, 상등액에 존재하는 \( \mathrm{PGE}_{2} \)의 함량은 mouse enzyme-linked immnunosorbent assay (ELISA) kit (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 측정하였다.</p>
연구에 사용된 LPS를 어디에서 구입하였나요?
Sigma-Aldrich