<h1>재료 및 방법</h1><h2>시료 채취 및 발효</h2><p>본 실험에 사용된 실험 재료는 증류수 \(10 \mathrm{~l}\)에 산야(민들레 \( 40 \mathrm{~g} \), 연자육 \( 40 \mathrm{~g} \), 솔잎 \( 30 \mathrm{~g} \), 참나리 \( 30 \mathrm{~g} \), 애쑥 \( 30 \mathrm{~g} \), 질경이 \( 30 \mathrm{~g} \), 뽕열매 \( 40 \mathrm{~g} \), 감초 \( 24 \mathrm{~g} \), 도라지 \( 9 \mathrm{~g} \), 쇠비름 \( 9 \mathrm{~g} \), 자소엽 \( 9 \mathrm{~g} \), 박하 \( 36 \mathrm{~g} \), 금불초 \( 9 \mathrm{~g} \), 오가피 \( 18 \mathrm{~g} \), 참마 \( 15 \mathrm{~g} \), 연뿌리 \( 18 \mathrm{~g} \), 두충 \( 30 \mathrm{~g} \), 둥글레 \( 200 \mathrm{~g} \), 녹차잎 \( 100 \mathrm{~g}\)) 와 다시마 (\( 100 \mathrm{g} \)) 및 미네랄 수(해양성심층수, \( 0.5 \% \))는 부재료로 첨가하여 당의 농도가 50.0~60.0 \(\mathrm{Brix}\)가 되도록 설탕시럽을 넣은 후 발효시켰다. 약 6개월 동안 발효 시킨 후 산야 발효액의 \( \mathrm{pH} 5.2 \) 였고, 시료로 사용하기 위해 발효액은 여과하였으며 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 냉장 보관하였다.</p><h2>전자공여능(Electron donation ability: EDA) 측정</h2><p>전자공여능 측정은 Blois의 방법에 따라서 각 시료의 DPPH (1,1-diphenyl- 2-picrylhydrazyl)에 대한 수소공여 효과로 측정하였다. 시료를 농도별로 희석하여 시료 \( 40 \mu \mathrm{l} \) 와 \( 1.5 \mathrm{mM} \) DPPH용액 \( 160 \mu \mathrm{l} \) 를 섞은 후, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30분 동안 반응시킨 다음 ELISA reader를 이용하여 \( 520 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능(Electron donating ability, EDA)은 EDA \((\%)=( \) 대조구흡광도\(-\)시료첨가구흡광도) / 대조구흡광도\(\times 100\)으로 계산하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조그룹과 흡광도차를 비교하여 프리라디칼의 제거활성을 백분율로 나타내었다.</p><h2>세포배양</h2><p>마우스대식세포주인 RAW264.7 세포는 American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA. USA)에서 구입하였으며, 세포배양에 사용된 배지인 RPMI 1640 medium (Eagle's MEM)과 fetal bovine serum (FBS), Hank's balanced salt solution (HBSS) 등은 모두 Hyclone (Logan, UT, USA)의 제품을 구입하여 사용하였다 RAW264.7 세포주는 \( 10 \% \) FBS와 100 \(\mathrm{unit}\)의 penicillin과 streptomycin이 함유된 RPMI 1640 media를 사용하여 \( 5 \% \) 의 이산화탄소를 포함한 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 의 포화습도 공기조건하에서 배양하였다.</p>
여과한 발효액은 몇 도로 냉장 보관했어?
\( 4^{\circ} \mathrm{C} \)