<h2>분획물의 생육저해 효과</h2><p>시료를 dimethylsulfoxide(DMSO)로 녹인 후 제균하고 농도별로 멸균한 TSB 또는 nutrient broth(NB.Difco)에 첨가하여 혼합하였다. 각 시험균의 초기농도를 일정량 조절하여 접종하고 여기에 분획물을 일정 농도씩 각각 첨가하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 일정시간 배양하면서 각 시험군별로 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 취하여 Spectrophotometer (DR-20, BASUSH \& LOMB 국명)로 이용하여 흡광도 \( 620 \mathrm{~nm} \)를 측정하여 균의 생육을 나타내었다.</p><p>최소저해 농도(minimum inhibitory concentration, MIC)는 한천 배지 확산 평판법으로 측정하였다. 항균물질을 농도별로 각각 조절한 TSA 혹은 NB를 샤례에 넣어 응고 시킨 후 미리 활성화 시킨 각 실험균의 배양액을 접종한 다음 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 24 \sim 48 \)시간동안 배양하여 증식이 관찰되지 않은 농도로 결정하였다.</p><h2>시료처리에 의한 전자 현미경의 관찰</h2><p>항균활성 물질을 처리한 피검 대상세균의 세포의 변화를 관찰하기 위하여 투과 전자현미경(TEM, Transmission electron microscope, HitachiH-600, Japan)으로 측정하였다. 즉, 배향하여 동결한 미생물 세포의 절취한 부위를 \( 2.5 \% \) paraformaldehyde-glutaraldehyde (\( 4^{\circ} \mathrm{C},\) phosphate buffer, \( \mathrm{pH} 7.2 \)) 고정액에서 2시간 전 고정하고, 완충액(\( 0.1 \mathrm{M}\), phosphate buffer, \( \mathrm{pH} 7.2\))으로 10분씩 3회 세척한 후, \( 1 \% \mathrm{OsO}_{4}\)(\( 25^{\circ} \mathrm{C}, 0.1 \mathrm{M} \) phosphate buffer,\( \mathrm{pH} 7.2 \))에서 2시간동안 고정하였다. 고정이 끝난 시료는 동일 완충용액으로 수회 세척한 후 ethanol 농도 상승순으로 탈수하였으며, propylene oxide로 치환하여 Epon-812로 포매한 다음, \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) oven에서 36시간 중합반응시켰다. 포매된 조직은 ultramicrotome(ULTRACUTE, Leica 국명)으로 초박절편을 제작하여 uranyl acetate와 lead citrate로 이중염색하여 TEM으로 관찰하였다.</p><h2>\( \beta \)-galactosidase 활성 측정</h2><p>세포막 손상정도를 추정하기 이하여 균체 효소인 \( \beta \)-galactosidase( \( \beta \)-D-galactosidase galactohydrolase ; EC3.2.1.23, 이하, \( \beta \)-galactosidase)활성을 정량하였다. 공시균주로는 E. coli를 이용하였으며, 세포를 파쇄하지 않고, toluene, chloroform과 초석잠 잎 추출물을 같은 농도로 처리하였고, 기질로써 ONPG(o-nitrophenyl-\( \beta \)-D-galacto-pyranoside, 4\( \mathrm{mg} \)/ \( \mathrm{mL} \))를 첨가하여 반응을 시킨 후 \( 420 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 증류수를 넣은 경우를 0으로 하고 toluene을 넣어준 경우를 100으로 하여 초석잠 잎 추출물이 세포막 손상정도를 추정하였다.</p><h2>열 및 \( \mathrm{pH} \) 안정성 시험</h2><p>열 안정성 시험을 위하여 E. coli 및 L. monocytogenes의 농도를 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)으로 조절한 다음, 처리온도 40, 60, 80, \( 100, 120, 180^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분 동안 열처리한 후, 처리온도별로 paper disc법을 이용하여 실험하였다. \( \mathrm{pH} \) 안정성은 분획물을 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도가 되게 조절한 다음, buffer 용액을 이용하여 \( \mathrm{pH} \)를 4, 6, 7, 8, 10으로 각각 처리한 후 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 방치한 다음 다시 \( \mathrm{pH} 7 \)로 중화시켜 열 안정성 시험과 같은 방법으로 생육 저해 활성을 측정하였다.</p>
시료를 어떤 물질로 녹였어?
dimethylsulfoxide