<h1>결 과</h1><h2>Norovirus 검출을 위한 최적 nested RT-PCR법의 확립</h2><p>먼저 norovirus 검사법을 확립하기 위하여 양성 및 음성 대조군 시료를 대상으로 재료 및 방법에 제시한 바와 같이 cDNA의 합성, 1st PCR, nested PCR순으로 진행하였다. Primer쌍은 문헌에 보고된 서열에 근거하여 합성하였으며 이들의 서열을 Table 1에 제시하였다. 증류수에서 추출한 RNA를 음성 대조군으로 이용하였으며, 예비 연구에서 양성으로 판정되었던 지하수 시료에서 추출한 RNA를 양성 대조군으로 이용하였다. GI의 경우에는 GI-R1M으로 cDNA 를 합성한 뒤, GI-F1M/GI-R1M으로 1차 PCR을 실시하고 GI-F2/GI-R1M으로 nested PCR을 수행하여 \( 313 \mathrm{bp} \) 크기의 특이적인 산물을 양성 대조군에서 얻을 수가 있었다. 하지만, GII 의 경우에는 GII-R1M으로 cDNA를 합성한 뒤, GII-F1M/GII-R1M으로 1차 PCR을 실시하고 GII-F3M/GII-R1M으로 nested PCR을 수행한 결과, 양성 대조군 뿐만 아니라 음성 대조군에서도 비특이적인 산물이 생성되었다. 따라서 본 연구에서는 GII에 속하는 12개의 유전자형들의 염기서열을 분석하여 보존적인 영역에서 GII-R1M primer를 대체할 수 있는 GII-R3M을 제작하였다. GII-F3M/GII-R3M을 이용하여 nested PCR을 수행한 결과 양성 대조군에서만 GII형의 norovirus를 특이적으로 검출할 수 있었다.</p><h2>지하수 중 norovirus 검출률</h2><p>총 145 개의 지하수 시료들 가운데 36개 시료에서 norovirus가 검출되어 \( 25 \% \) 의 검출률을 나타내었으며, 지역별로는 경남의 91 개 시료에서 \( 32 \% \), 부산의 40개 시료에서 \( 15 \% \), 울산의 14개 시료에서 \( 7 \% \)의 바이러스 검출률을 나타내었다. 건기(4~6월)의 81개 시료와 우기(7~8월)의 64개의 시료에서 각각 \( 25.9 \% \)와 \( 23.4 \% \)의 바이러스 검출률을 나타내어 norovirus의 계절별 검출률은 큰 차이를 보이지 않았다.</p><h2>Norovirus의 계통분류학적 분석</h2><p>지하수에서 검출된 norovirus 36개의 염기서열을 결정하고NCBI의 Medline search를 통하여 norovirus 염기서열을 최종 확인하였다. GI 은 5개에 불과한 반면에 GII의 검출률은 이보다 많은 31개가 검출되었다. 계통분류학적 분석 결과, GI 으로 동정된 5개 분리주들은 모두 유전자형 GI.5로 분류되었다. 이와는 달리GII로 동정된 31개 분리주들 가운데 23개는 GII.3이고 나머지 8개는 GII.4로 분류되었다.</p><h2>Norovirus 검출과 이화학적 인자들과의 상관관계</h2><p>\( \mathrm{pH} \) 는 알칼리 또는 산의 상태를 나타내며 물의 화학적, 생물학적 변화에 매우 중요한 오염지표이다. 본 연구에서는 \( \mathrm{pH} \) \( 6.49 \) 이하, 6.50 6.99, 7.00 7.49, 그리고 7.50 이상으로 구분하여 norovirus의 검출률을 조사한 결과, \( \mathrm{pH} 6.49 \) 이하의 17개 시료에서 \( 24 \% \), pH 6.50~6.99와 7.00~7.49에 해당하는 55개와 44 개의 시료에서 각각 \( 22 \% \) 와 \( 20 \% \) 의 바이러스 검출률을 나타내었다. 특히, \( \mathrm{pH} \) 가 7.50 이상인 29개의 시료에서는 norovirus 검출률이 \( 38 \% \) 로 가장 높았다. 하지만 상관성 분석 결과에 의하면, \( \mathrm{pH} \) 가 norovirus 검출률에 영향을 준다고 볼 수 없었다 \( \left(x^{2}=3.4, p=0.33\right) \).</p><p>수온은 미생물의 생존에 영향을 미치는 환경 요소 중 하나이므로 수온을 \( 14.9^{\circ} \mathrm{C} \) 이하, \( 15.0^{\circ} \mathrm{C}\) ~ \(19.9^{\circ} \mathrm{C}\) , \(20.0^{\circ} \mathrm{C}\) ~ \(24.9^{\circ} \mathrm{C} \) 그리고 \( 25.0^{\circ} \mathrm{C} \) 이상으로 구분하여 norovirus 검출률을 조사하였다. 비교적 낮은 수온인 \( 14.9^{\circ} \mathrm{C} \) 이하의 2개 시료에서는 norovirus가 검출되지 않은 반면에 \( 15.0^{\circ} \mathrm{C}\) ~\( 19.9^{\circ} \mathrm{C} \) 의 시료 55개에서 \( 31 \% \)의 비교적 높은 검출률을 나타내었다. \( 20.0^{\circ} \mathrm{C}\) ~\(24.9^{\circ} \mathrm{C} \) 와 \( 25.0^{\circ} \mathrm{C} \) 이상에 해당하는 74개와 14개의 시료에서 각각 \( 22 \% \) 와 \( 21 \% \) 의 검출률을 나타내었다. 하지만, 상관성 분석 결과, 수온은 norovirus 검출률과 통계적 유의성을 나타내지 않았다 \( \left(x^{2}=\right. \) \( 2.24, p=0.52) \)</p>
norovirus 검사법 확립을 위해 양성 및 음성 대조군 시료를 대상으로 실험을 진행한 순서가 어떻게 돼?
cDNA의 합성, 1st PCR, nested PCR순