<h1>결 론</h1><p>Ci-VSP는 신경전달 및 다양한 생명현상에 영향을 미치는 전위차의 변화를 감지하여서 phosphoinositide의 인산기를 제거하는 탈인산화 효소 활성을 보여준다. 이러한 과정을 살펴보면 전위를 감지하는 구간인 S1-S4 부분으로 인하여 PD로 전달하는 메커니즘을 가짐으로써 Ci-VSP가 phophatase로써 PIP들을 탈인산화하여 세포막에서의 PIP의 조성 변화가 일어나고 이로 인해 세포막에 있는 다른 단백질의 활성을 유도한다. Ci-VSP는 이런 과정에서 주로 \( \mathrm{PI}(3,4,5) \mathrm{P}_{3} \) 와 \( \mathrm{PI}(4,5) \mathrm{P}_{2} \) 등을 탈인산화한다고 알려져 있다.</p><p>본 연구는 이러한 특성을 가지고 있는 단백질 구조 연구와 생화학적인 연구 수행을 위해 적합한 형태의 발현 시스템 구축과 이의 정제 과정에 대한 검토와 그 효소 활성에 대한 검토를 수행한 내용을 정리한 것이다. 앞서의 실험적 결과를 통해 얻을 수 있는 의미는 다음과 정리할 수 있으리라 본다. 앞서 연구된 논문에는 Ci-VSP를 GST 버전으로 정제하여 pNPP에 대해 그 활성이 거의 없기에 그 kinetic constant가 보고되지 못하였으나 본 연구를 통해 Ci-VSP-His로 정제하여 (pNPP) 에 대한 탈인산화 활성의 \( \mathrm{K}_{\mathrm{m}} \) 값이 \( 0.354 \pm 0.143 \mathrm{mM} \) 인 점과 \( \mathrm{k}_{\text {cat }} \) 값이 \( 2.359 \pm 0.009751 \mathrm{~min}^{-1} \) 인 점을 보고하였다. 한편 Ci-VSP 유사 단백질인 PTEN의 경우에도 pNPP에 대한 kinetic constant가 보고된 바가 없기에 Ci-VSP 유사 단백질들 중에서 본 연구를 통해 Ci-VSP의 pNPP에 대한 kinetic 상수를 처음으로 보고한다는 의미를 가질 수 있다고 본다. 그리고 이러한 활성을 가진 단백질을 가지고 그 기질 특이성과 활성화 기작 연구와 같은 생화학적 연구의 기반을 마련하였다는 의미를 가지는 것으로 생각한다.</p><p>다음으로는 Ci-VSP의 phosphatase-like domain의 구조적 연구를 위한 첫 단계로서 His-tag 이 단백질 구조 연구에 영향을 미칠 수 있는 약점을 가지고 있기는 하지만, His-tag 버전의 단백질 발현과 정제에 대한 조건 확립에 그 의미를 부여할 수 있으리라 본다. 다시 말해 지금까지 보고된 GST-tag 버전의 경우에는 구조적 연구에 있어 그 한계가 있기에 이를 극복하는 His-tag 버전의 Ci-VSP phosphatase-like domain의 E. coli 발현의 조건과 그 정제 조건의 확립을 통해 약 \( 90 \% \) 이상의 순도의 구조적 연구를 위한 단백질 생산이 가능하게 되었다는 점이 가장 큰 의미가 되리라 본다. 현재 이 정제된 단백질을 가지고 X-ray crystallography를 통한 구조 연구를 진행 중에 있으며 일차적으로 Ci-VSP(248-576)-His의 결정을 얻어 그 구조 연구를 수행하여 4A 정도의 회절 패턴을 구하였으나 더 좋은 해상도의 회절 패턴을 구하고자 추가적인 연구를 수행하고 있는 중이다.</p><p>이런 Ci-VSP(248-576)-His에 대해서 실행한 단백질 발현 및 정량 실험과 활성 실험을 통해서 기본적으로 Ci-VSP의 정제와 활성 측정에 필요한 여러 조건들을 성립할 수 있었으며 앞으로 Ci-VSP 단백질에 대한 구조 연구 등과 같은 생화학적인 실험들에 대한 발판이 될 것으로 예상되며 더 나아가서는 human의 TPTE 단백질과의 상관성을 찾아내서 정자의 편모 운동을 더 활발하게 만들어 주는 약을 개발하여 불임문제를 해결할 수 있도록 연구가 이루어 질 것으로 기대된다.</p>
Ci-VSP가 세포막에 있는 다른 단백질의 활성을 어떻게 유도하는거야?
phophatase로써 PIP들을 탈인산화하여 세포막에서의 PIP의 조성 변화가 일어나