<h1>결 과</h1><h2>\( \mathrm{Zn}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 의 동시 첨가에 따른 상승효과</h2><p>톨라신은 세포막에 pore를 형성하여 세포독성을 나타내며 \( \mathrm{Zn}^{2+} \)와 같은 \(2\)가 금속이온에 의헤 가역적으로 저해됨이 보고되었다. 적혈구를 이용한 용혈활성 측정에서 톨라신의 작용특성을 밝히기 위하여 \(2\)가 양이온인 \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 의 효과를 측정하였다. \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 의 톨라신 저해 농도를 조사하였을 때, \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 는 \( 100\mu \mathrm{M} \) 이상의 농도에서 용혈활성을 저해하기 시작하여 \( 500 \mu \mathrm{M} \) 이상의 농도에서 용혈활성을 완전히 저해하였다. 그러나 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 은 \( 100 \mu \mathrm{M} \) 이상의 농도에서 저해하기 시작한 것은 \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 와 같으나, \( 10 \mathrm{mM} \) 이상의 농도가 되어야 톨라신의 용혈활성을 완전히 저해하였다(Fig. 1). \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 의 \( \mathrm{K}_{\mathrm{i}} \) 값은 각각 \( 170 \mu \mathrm{M} \) 과 \( 1.8 \)\( \mathrm{mM} \) 로 \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 보다 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 이 농도기준으로 약 \( 10 \)배 낮은 저해 효과를 보였다.</p><p>용혈활성에 대한 금속이온의 저해효과를 조사하기 위하여 \( \mathrm{Zn}^{2+} \)와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 을 톨라신과 함께 적혈구에 처리하였다. 금속이온의 농도는 톨라신의 활성을 \( 20-30 \% \) 저해하는 농도로, \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 을 각각 \( \mathrm{K}_{\mathrm{i}} \) 값보다 낮은 농도인 \( 100 \mu \mathrm{M} \) 과 \( 1 \mathrm{mM} \) 이 되도록 반응용액에 첨가하였다. 이러한 조건에서 \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 은 \(20\)분 후에 톨라신의 용혈활성을 각각 \( 50 \% \) 와 \( 25 \% \) 저해하였으나, 두 금속이온을 함께 처리하였을 경우에는 용혈활성이 약 \( 90 \% \) 이상 저해되어 톨라신의 세포독성이 거의 완전히 저해되었다(Fig. 2). 각 저해실험에서 톨라신에 의해 용혈활성이 \( 50 \% \) 일어나는 시간인 \( \mathrm{T}_{50} \) 을 비교해보면, 톨라신만을 처리한 대조구는 \( 14.5 \) 분, \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 의 경우는 \(19.9\) 분, \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 을 추가한 경우는 \(16.7\) 분으로 대조실험 조건에 비하여 각각 \( 5.4 \) 분과 \( 2.2 \) 분의 시간이 지연되어 용혈작용이 이 두 금속이온에 의해 저해됨을 확인하였다. 그러나, 같은 농도의 \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 을 동시에 첨가한 경우에는 시간이 경과하여도 적혈구의 용혈이 크게 증가하지 않아 \( \mathrm{T}_{50} \) 을 측정할 수 없었다. 이는 \( \mathrm{Zn}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Ni}^{2+} \) 을 함께 처리하였을 때, 이들에 의한 톨라신 세포독성 억제효과가 크게 증가하는 상승작용이 있음을 보인다.</p>
톨라신은 세포독성을 어떻게 나타내?
세포막에 pore를 형성하여