<h2>GC-MS에 의한 독소의 동정</h2><p>복어의 간장으로부터 추출, 정제한 TTX 획분을 농축하여, Fig. 2의 과정과 같이 전처리하여 분석하였다. 즉, 시료를 \( 1 \mathrm{ml} \) 의 \( 2 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \)에 녹이고, 비등 수욕조에서 45분간 가열하여 TTX 및 그 유도체를 C9-base로 전환시켜 방냉한 후, \( 20 \% \mathrm{HCl} \) 로 \( \mathrm{pH} \) 를 4.0으로 조정한 다음 \( 2 \mathrm{ml} \) 의 n-butanol로 3회 반복 추출하였다. 각 추출액을 섞고 vacuum evap-orator에서 농축한 후 동결건조하여 BSA (N.O-bis(triem-thylsilyl) acetamide)-TMCS(Trimethyl chlorosilane)- pyri-dine (2: 1: 1) 용액에 녹인 다음 30분간 방치시켜 GC-MS로 분석을 하였다. TTX 및 그 유도체의 동정을 위한 GC-MS 분석 조건은 Table 1 과 같다.</p><h2>총지질의 추출 및 정제</h2><p>시료의 총지질은 Bligh and Dyer법에 따라 추출하였다. 즉, 시료 \( 50 \mathrm{~g} \) 을 취하여 \( 10 \mathrm{ml} \) 의 증류수를 첨가한 후 100\( \mathrm{ml} \) 의 메탄올과 \( 50 \mathrm{ml} \) 의 클로로포름의 혼합용액을 넣어 hom-ogenizer에서 2분간 마쇄하였다. 이 혼합액에 \( 50 \mathrm{ml} \) 의 클로로포름을 첨가하고 30초간 더 균질화하였다. 이 균질액을 Toyo filterpaper (No.5)를 사용하여 buchner funnel로 약하게 흡인여과시킨 후 활성탄(Wako pure chemical)을 사용하여 색소를 제거한 후 그 여액을 분액여두로 옮겨 에테르를 붓고 세게 흔들어 순수 지방질만을 추출한 후 이것을 무수 \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 를 통해 수분을 제거시킨 뒤 총지질을 얻었다. 지방질의 추출에 사용된 모든 용매는 질소기류 하에서 vacuum evaporator로 제거하며 지질의 양은 중량법에 의하여 계산하였다. 한펀, 정제한 지질은 소량의 에테르에 녹여 질소가스로 충진한 후 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \) 의 냉동실에 보관하면서 모든 지방질의 분석시료로 사용하였다.</p><h2>복어 간유 지질 조성의 분석</h2><p>각 조직으로부터 추출한 정제된 총지질을 Rouser 등의 방법에 따라 silicic acid column chromatography(SSC)에 의하여 중성지질, 당지질 및 인지질 획분을 분리하였다. 즉, silicic acid (\(70\sim 230\mathrm{mesh}\), Merck**)를 증류수로 씻어서 미립자를 제거하고 메탄올로 다시 씻은 후 \( 110^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 하룻밤동안 활성화시켰다. 활성화된 silicic acid 약 \( 15 \mathrm{~g} \) 을 클로로포름으로 slurry를 만든 후 glass wool이 \( 1 \sim 2 \mathrm{~cm} \) 채워진 column (i.d. \( 2.5 \times 30 \mathrm{~cm} \) )에 충진하고 총지질 \( 200 \mathrm{mg} \) 을 주입한 후 질소 gas를 통과시켜 용매의 유출속도를 1분당 약 \( 3 \mathrm{ml} \)되게 조절하면서 관 부피의 10 배량의 클로로포름으로 중성지질 획분을 얻은 다음 관 부피의 20 배가량의 아세톤과 다시 10배량의 메탄올로 각각 용출시켜 극성지질인 당지질 및 인지질 획분으로 분획하며 용매를 제거한 후 중량법에 의하여 이들의 함량을 계산하였다.</p><h2>GC에 의한 지방산 분석</h2><p>정제된 총지질의 지방산 분석은 \( 0.5 \mathrm{~N} \) methanolic so-dium hydroxide 용액으로 비누화 시킨 후 지방산을 분리하며 이것을 Metcalfe등의 방법에 의하여 \( 14 \% \mathrm{BF}_{3} \) / methanol용액을 사용하여 methylation시켜 이를 GC로 분석하였으며 이때의 분석조건은 Table 2 와 같다. 그리고 상대 머무름 부피 및 머무름 시간을 동일한 조건에서 표준지방산과 시료의 peak를 서로 비교하여 지방산을 확인하고 각 peak 면적의 비율(\(\%\))은 총 면적에 대한 백분율로 표시하였다.</p><h2>HPLC에 의한 DHA 및 EPA의 분리</h2><p>총지질 중의 DHA 및 EPA 함량의 분석은 GC 분석과 마찬가지로 시료를 검화한 후, methylation시켜 이를 HPLC로 분석하였으며, 이때의 분석조건은 Table 3과 같다. 그리고 머무름 시간을 동일 조건하에서 표준품 DHA 및 EPA와 시료의 peak를 서로 비교하여 확인하고 GC와 같은 방법으로 면적 백분율로 나타내었다.</p>
본 논문에서는 무엇을 복어의 간장으로부터 추출하여 정제하였는가?
TTX 획분