<h2>세포정량</h2><p>세포가 자란 \( 75-\mathrm{cm}^{2} \) plastic flask에서 배지액을 제거하고, phosphate buffered saline (PBS, \(\mathrm{pH}~ 7.2\))으로 세척한 후, \( 0.25 \% \) trypsin/EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid)로 처리하여 세포를 플라스크 바다으로부터 떼어낸 다음 세포배양액으로 중화시켜서 원심분리 ( \( 80 \times \mathrm{g}, ~3 \mathrm{~min}) \) 하였다. 남은 세포의 pellet에 배양액을 가한 다음, 멸균 피펫으로 반복흡입하여 단일 세포부유액을 만든 후 trypan blue를 세포부유액과 \(9:1\)의 비율로 혼합하여 광학현미경상에서 혈구계산판 (Hemocytometer)을 이용하여 측정하였다.</p><h2>세포독성 측정</h2><p>정상 간세포 (Chang)에 대한 계란 노른자 단백질 가수분해물의 세포독성을 관찰하기 위하여, 먼저 96-well plate에 간세포를 \( 5 \times 10^{4} \) cells/well이 되도록 넣고 2시간 \( \mathrm{CO}_{2} \) 배양기에서 배양시킨 후, 가수분해물을 \( 0 \sim 7.5 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml}\)이 되도록 각각의 well에 첨가한 다음, \( 10 \%\) FBS가 포함된 DMEM으로 전체부피를 \( 200 ~\mu \)로 조절하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, ~5 \% ~\mathrm{CO}_{2} \)의 조건에서 18시간 배양한 후, MTT assay로 세포의 생존율을 측정하였다 (이때 \( 100 \% \) 세포괴사는 \( 0.9 \% \) 2-mer-captoethanol을 넣어 2시간 매양시킨 후, MTT assay로 세포의 생존율을 측정한 값으로 하였다).</p><h2>\( t \)-BHP 농도별 세포괴사에 대한 가수분해물의 효과</h2><p>\( t \)-BHP의 농도별 세포괴사에 대한 계란 노른자 단백질 가수분해물의 호과를 관찰하기 위하여, 먼저 96-well plate에 간세포를 \( 5 \times 10^{4} \) cells/well이 되도록 넣고 2시간 \( \mathrm{CO}_{2} \) 배양기에서 배양시킨 다음, 가수분해물의 농도를 well당 \( 5\mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \) 씩 첨가한 후, \( 10 \%\) FBS가 포함된 DMEM으로 전체 부피를 \( 200 ~\mu \) 조절하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, ~5 \%~ \mathrm{CO}_{2} \)의 조건에서 18시간 배양한 후, PBS로 세척하고 serum free medium (SFM)과 \(t\)-BHP를 \( 0 ~\mu \mathrm{M} \)에서부터 \( 300~ \mu \mathrm{M} \)까지 농도별로 전체부피가 \( 200~ \mu l\)가 되게 첨가하였다. 이를 다시 2시간 배양시킨 후, MTT assay로 측정하였다.</p><h2>\( t \)-BHP의 세포괴사에 대한 가수분해물의 농도별 효과</h2><p>\( t\)-BHP의 세포괴사에 대한 게란 노른자 단백질 가수분해물의 농도별 효과를 관찰하기 위하여, 96-well plate에 간세포를 \( 5 \times 10^{4} \) cells/well이 되도록 넣고 2시간 \( \mathrm{CO}_{2} \) 배양기에서 배양시킨 다음, 가수분해물의 농도를 well당 \( 0.5 \mathrm{~mg}/\mathrm{ml} \)에서 \( 7.5 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \)까지 첨가한 후, \( 10 \%\) FBS가 포함된 DMEM으로 전체부피를 \( 200 \mu l \)로 조절하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, ~5 \% ~\mathrm{CO}_{2} \)의 조건에서 18시간 배양시킨 다음, PBS로 세척하고 SFM과 \(225\mu \mathrm{M}\) \(t\)-BHD의 전체부피가 \( 200 \mu l\)가 되게 첨가하였다. 이를 다시 2시간 배양시킨 후, MTT assay로 측정하였다.</p>
광학현미경상에서 혈구계산판 (Hemocytometer)을 이용하여 측정하기위해 남은 세포의 pellet에 배양액을 가했어?
YES