<h1>재료 및 방법</h1><h2>동물의 사육 및 식이</h2><p>본 실험에서는 임신 2일된 암컷 Sprague Dawley (SD)계 흰쥐 40 마리를 Charles River 실험실 (Portage, MI)로부터 구입하여 각각 10 마리씩 4군으로 나누어 n-3 지방산이 결핍된 군 [n-3 Deficient (Def) group]과 DHA가 첨가된 식이 (Def+DHA group) 및 n-3 지방산이 적절히 함유된 식이군 [n-3 Adequate (Adq) group]과 DHA가 첨가된 식이 (Adq+DHA group)로 임신기간 및 수유기동안 사육하였다. 신생흰쥐가 이유기가 되었을 때 각각 암컷 흰쥐로부터 1마리씩의 수컷 흰쥐를 취하여 어미 흰쥐의 식이와 동일한 식이로 15 주령까지 사육하였다. 실험에 사용된 식이는 지방산의 양이 변형된 AIN-93G 표준식이이고 실험식이와 음용수는 실험기간동안 자유 섭취방법으로 급여하였다. 적정 환경은 온도 \( 23 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \), 상대습도, 명암 12 시간 주기였다. 네가지 그룹들에서 총 포화지방산과 monounsaturates의 함량에는 큰 차이가 없었으나, n-3 지방산이 결핍된 식이군 (Defgroup)의 지방산 조성은 \( 17.6 \% \) linoleic acid (LA), \( 0.08 \% \)LNA 이며 Def+DHA 그룹의 경우 \( 17.5 \% \)LA, \( 0.08 \% \) LNA 및\( 10.2 \% \) DHA 를 함유하였다. 한편 n-3 지방산이 적절히 함유된 식이군(Adq group)의 지방산 조성은 \( 16.9 \% \) LA, \( 3.4 \% \) LNA 이며 DHA 는 함유되어 있지 않고 DHA 첨가군 (Adq+DHA group)의 경우는 \( 16.9 \% \) LA로 n-3 지방산이 적절히 함유된 식이군과 함량이 같으나 LNA 는 \( 3.31\% \)를 그리고 DHA 는 \( 9.65 \% \)를 함유하였다.</p><h2>Gas chromatography를 이용한 지방산 측정</h2><p>실험 쥐들이 15 주가 되었을 때 희생시키고 뇌 및 간을 취해서 지방산 조성을 검토하였다. 지질 추출은 Folch 등 을 변형하여 실시하였으며 즉 생체 조직을 butylated hydroxy toluene BHT 를 함유한 \( \mathrm{CCl}_{4} \) :methanol (2:1)로 교반하여 균질화하였다. 균질물을 일정양 취한 후 클로로포름 \( 2 \mathrm{ml} \) 와 \( 0.2 \mathrm{M} \) \( \mathrm{NaH}_{2} \mathrm{PO}_{4}\) \(1.4 \mathrm{ml} \) 를 넣고 교반하여 \(3,000 \mathrm{rpm} \)에서 5 분간 원심분리한 후 지질층을 얻었다. 최종적으로 질소가스를 이용하여 서서히 지질층의 유기용매를 완전히 날린 다음 지질을 얻었다. Morrison과 Smith의 방법에 따라 추출된 지질에 methylation용 시약인 boron trifluoride methanol \( 1 \mathrm{ml} \) 와 hexane \( 0.4 \mathrm{ml} \) 를 가한 후 1 시간 동안 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 가열하여 methylation시켰다. 지방산 분석은 HP-5890B gas chromatography (Agilent, Palo Alto, CA)를 이용하였고 이용된 칼럼은 silica capillary column (DB-FFAP, \( 30 \mathrm{~m} \times 0.25 \mathrm{~mm} \) innerdiameter \( \times 0.25 \mu \mathrm{m} \) film thickness, J and W Scientific,Folsome, CA) 이었으며 기기의 분석 조건은 detector (FID) \( 250^{\circ} \mathrm{C} \), oven (initial \( 130^{\circ} \mathrm{C} \), 분당 증가율 \( 175^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 \( 4^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \), \( 250^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 \( 1^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min}\), 210 까지 \( 30^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \), final \( 245^{\circ} \mathrm{C} \) ), injector\( 250^{\circ} \mathrm{C} \) 그리고 carrier gas는 수소를 사용하였다. 지방산 분석에 사용한 표준용액은 미국 Nu-Check 사의 462 standard를 이용하였으며 표준용액의 retention 시간과 비교하여 정성하였으며 내부표준물질(22:3n-3 methyl ester)을 사용하여 개개의 지방산들의 농도를 산출하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>실험결과는 Mean \( \pm \mathrm{SEM} \) (Standard Error of Mean)으로 나타내었고 분석된 실험 데이터는 Statistica program(Statsoft, Tulsa, OK)을 이용하여 repeated measures one-way ANOVA를 실시하여 유의성이 있을 경우에 post-hoc test로 Tukey's HSD (Honest Significant Difference) test를 실시하여 유의성을 검증하였다.</p>
임신한 암컷 흰쥐는 4개의 군에 각 10마리씩 배치된 후에 어떤 과정을 거쳤는가?
임신기간 및 수유기동안 사육