<h1>재료 및 방법</h1><h2>식물재료</h2><p>본 연구에 사용된 식물재료는 기내에서 종자 발아된 정금나무 소식물체의 정아를 포함한 줄기를 사용하였다. 기내식물체 증식은 염류를 반으로 줄인 \(1/2\mathrm{MS}\) 에 \( 0.5 \mathrm{~mg} / \mathrm{L} \) zeatin, \( 2 \% \) sucrose 및 \( 0.35 \% \) gelritc를 첨가한 배지를 사용하였으며, 4 주마다 동일 조성의 배지로 계대배양하였고, 계대배양 시에는 잎이 3 ~ 4 개 포함된 신초를 조제하여 치상하였다. 모든 배양은 광량자속밀도 \( 40 ~\mu \mathrm{m} \mathrm{~m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1} \), 광주기 \( 16 / 8 \) 시간, 온도 \( 25 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \) 로 유지되는 배양실에서 배양하였다.</p><h2>Cytokinin 종류와 농도에 따른 다신초(multiple shoot) 유도 효과</h2><p>기내 배양 중인 정금나무의 줄기에서 정아를 포함하는 줄기를 \( 1 \mathrm{~cm} \) 정도 길이로 절단하여 1.0, 2.0 및 \( 5.0 \mathrm{~mg} / \mathrm{L} \) 의 Zeatin, 6-Benzylaminopurine (BA), 6-( \( \mathrm{\gamma}\), \(\mathrm{\gamma} \)-Dimethylallylamino)purine(2-iP) 또는 Thidiazuron (TDL) 를 농도별로 각각 첨가한 MS 고체 배지 (\( 3 \% \) sucrose, \( 0.35 \% \) gelrite, \( \mathrm{pH} 5.7 \) )에 치상하였다. 절편은 각 처리구당 10 개씩 3 반복하여 치상하였그, 배양 8 주 후에 다신초 유도율, 신초 유도 수 및 길이를 각각 조사하였다.</p><h2>Auxin 종류 및 농도에 따른 기내발근 효과</h2><p>기내발근 유도를 위해 정아가 포함된 줄기를 \( 2 \mathrm{~cm} \) 길이로 절단하여 \( 1 / 2 \mathrm{MS} \) 배지에 \( 1 \% \) sucrose를 첨가하고 0,0.5,1.0,2.0 및 \( 5.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 의 Indole-3-butyric acid(IBA) 또는 1-Naphthalencacctic acid(NAA) 를 단용처리한 배지에 치상하였다. 절편은 각 처리구당 10 개씩 3 반복하여 치상하였고, 배양 8 주 후에 발근율, 뿌리의 수와 길이를 각각 조사하였다.</p><h2>IBA 농도 및 삽목기질 종류(FLEXI-PLUG 및 Horticultural substrate)에 따른 기외발근 효과</h2><p>기외발근 유도를 위해 먼저 정아를 제거하고 대신 액아 4 ~ 6 개가 포함된 줄기를 \( 2.5 \sim 3 \mathrm{~cm} \) 길이로 절단하여 사용하였다. IBA 농도는 0, 0.05, 0.1, 0.5, \(1 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \) 및 Talc(삼전화확, 일본)를 섞어 사용하였는데 각각 IBA 농도 별 용액 \( 2.0 \mathrm{~mL} \) 에 Talc \( 2.0 \mathrm{~g} \) 을 혼합 후 절단된 줄기 절단 말단부위에 묻혀 피트플러그 혹은 Horticultural substrate(원예범용상토, 팜한농)에 치상하였다. 절편은 각 처리구당 10 개씩 3 반복하여 치상하였고, 배양 8 주 후에 발근율, 뿌리길이 및 줄기길이를 각각 조사하였다. 기외 발근용 삽목 컨테이너 내 공중습도는 \( 90 \% \) 이상 유지하였고 광량자속밀도 \( 40 ~\mu \mathrm{m} \mathrm{~m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1} \), 광주기 16 시간 및 \( 25 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \) 조건에서 배양하였다.</p><h2>조직학적 관찰</h2><p>기외발근으로 유도된 뿌리 절편체를 발근 초기부터 약 1 주 간격으로 3 주 동안 줄기 하단부를 채취하여 \( 2.5 \% \) glutaraldehyde와 \( 1.6 \% \) paraformaldehyde가 포함된 고정액 (pH \(6.8\)) 에 녛어 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 ~ 48시간 동안 고정시켰다. 그후 ethanol 농도별 (30, 50, 70, 80, 90, 95, \(100 \% \)) 로 차례로 탈수처리 후 glycol methaacrylate(Technovit 7100, Kluzer, Germany)에 포매하였으며, Autocut microtome (Leica RM 2165, Germany)을 이용하여 \( 3 ~\mu \mathrm{m} \) 두께로 박편을 만들어서 슬라이드 글라스에 고정시컸다. 그후 \( 0.1 \% \) periodic acid-Schiffs (PAS)를 사용하여 carbohydrates 및 \( 0.05 \% \) toluidine blue O (TBO)로 2차 염색 후 광학현미경으로 관찰하였다.</p><h2>통계분석</h2><p>본 실혐 모두 총 3 반복으로 수행하였고, 데이터분석은 SPSS를 이용하였으며 각 처리간 유의성 검정은 one-way 및 two-way ANOVA 를 실시하였다. 유의성이 있는 경우 Duncan's multiple range test로 사후분석을 하였고, 통계적 유의성은 \(\mathrm{P}<0.05\) 로 설정하여 분석하였다.</p>
기내식물체 증식에 사용한 배지는 무엇을 첨가하였나요?
\(1/2\mathrm{MS}\) 에 \( 0.5 \mathrm{~mg} / \mathrm{L} \) zeatin, \( 2 \% \) sucrose 및 \( 0.35 \% \) gelritc