<h1>재료 및 방법</h1><h2>연구대상 및 시료채취</h2><p>본 연구는 인체시료를 채취함에 있어 윤리적, 과학적인 측면을 검토하고 시료 제공자를 보호하며, 연구의 이득과 위험을 판단해 균형을 잡기 위하여 보건복지부 생명윤리 및 안전에 관한 법률 제9조의 규정에 따라 본 연구계획은 기관생명윤리심의회의 IRB(Institutional review boards)에 의하여 승인되었다. 1964년 헬싱키 선언으로 공식화된 윤리기준과 2000년 개정된 기준을 따랐다.</p><p>연구대상자는 본 연구의 취지를 잘 이해하고 협력이 가능한 일반인을 대상으로 2006년 춘천지역에 거주하고 있는 22명의 산모로부터 수집하였다. 모든 산모는 대상지역에서 최소 5년이상 거주하고 수유대상 유아는 1인이며, 모유제공에 이상이 없는 건강한 산모(모유제공, 동의서 작성)를 대상으로 하였다. 또한, 직업, 연령, 식이습관, 흡연습관과 같은 산모정보는 모유를 수집할 때 설문지에 기록하였다. 연구대상 산모는 모두 비흡연자였으며, 직업적인 노출은 없었다. 산모의 연령, 체중, 신체질량지수(Body mass index, BMI) 등 일반적인 특성을 Table 1에 요약하였다.</p><p>모유 시료의 채취는 광분해의 영향을 최소화하기 위하여 \( 100 \mathrm{~ml} \) 용량의 테프론으로 코팅된 병마개가 있는 갈색 유리병을 이용하여 출산 후 30일째 모유를 \( 50 \sim 100 \mathrm{~ml} \) 채취하였다. 채취된 모유는 분석 전까지 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \) 이하에서 냉동 보관하였다.</p><h2>분석방법</h2><p>모유 시료 \( 50 \mathrm{~g} \)을 취하여 \( 500 \mathrm{~ml} \) 분액여두에 넣고 이때 농도 보정 및 회수율 산정을 위하여 정제용 내부표준물질(MBDE-MXFS, Wellington Laboratories, Canada) C-labelled BDEs (C-BDE-28,-47,-99,-100,-153,-154 및 -183) \( 1,250 \mathrm{~pg} \)을 첨가 하여 잘 흔들어준 뒤 소량의 옥살산나트륨, 에탄올, 염화나트륨(PCB analysis grade, Wako, Japan)을 가하여 분해시켰다. 이후 \( n \)-헥산(Ultra residue analysis, J.T. Baker) \( 100 \mathrm{~ml} \)를 첨가하여 액-액 추출을 3회 반복한 다음 세정수 \( 200 \mathrm{~ml} \)로 2회에 걸쳐 수세하였으며, 추출액은 무수황산나트륨(PCB analysis grade, Wako, Japan)을 통과시켜 수분을 제거하였다. 추출액은 회전증발농축기(EYELA N-1000)를 이용하여 \( 2 \mathrm{~ml} \)까지 농축한 다음 지질 및 방해물질을 제거하기 위하여 다층실리카겔컬럼(70~230 mesh, Merck, Darmstadt, Germany)을 통과시켰다. 다층실리카겔 컬럼은 하단부터 무수황산나트륨 \( 1 \mathrm{~g} \), 중성 실리카 \( 1 \mathrm{~g} \), \( 2 \% \) 알칼리 실리카 \( 3 \mathrm{~g} \), 중성 실리카 \( 1 \mathrm{~g} \), \( 44 \% \) 황산 실리카 \( 10 \mathrm{~g} \), \( 22 \% \) 황산실리카 \( 4 \mathrm{~g} \), 중성 실리카 \( 1 \mathrm{~g} \), 무수황산나트륨 \( 3 \mathrm{~g} \)을 충진 한 후 \( n \) 헥산 \( 50 \mathrm{~ml} \)를 통과시켜 PCBs 및 기타 방해물질을 제거한 후 \( 10 \% \) 디클로로메탄:\( n\)-헥산\( \mathrm{v}/ \mathrm{v} \) \( 150 \mathrm{~ml} \)를 이용하여 PBDEs를 용출시킨 다음 활성탄(dioxin analysis grade, Wako, Japan) \( 1 \mathrm{g} \)을 사용하여 \(25\%\) 디클로로메탄:\( n \)-헥산 \( (\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) \( 80 \mathrm{~ml} \)를 이용하여 PBDEs를 회수하였다.</p><p>회수된 용출액은 회전 증발 농축기와 질소농축기를 이용해 \( 50 \mu \mathrm{l} \)로 농축한 후 회수율 측정용 내부표준물질(MBDE-MXFR, Wellington Laboratories, Canada) C-BDE-77, -138을 \( 1,250\mathrm{~pg} \) 첨가하고 최종적으로 \( 25 \mu \mathrm{l} \)로 농축한 다음 HRGC/HRMS (Agilent 6890 series gas chromatograph/JEOL Mstation 800D mass spectrometer)로 분해능 10,000 이상(\(10 \% \) valley)에서 선택이온검출법(Selected ion monitoring, SIM) 모드로 검출하였다.</p><p>PBDEs 각 이성체에 대한 정성확인을 각 동족체마다 2개의 선택이온의 이온 강도의 비가 \( 99 \% \) 신뢰구간에 들어오면 정성 확인된 것으로 간주하였으며, 대상물질이 검출된 경우에는 이에 대응하는 LCS (Labelled compounds standard)에 대한 반응계수를 이용한 동위원소 희석법(Isotope dilution method)과 상대반응계수(Relative Response Factor, RRF)를 이용한 내부표준법에 따라 정량하였다.</p><p>본 연구에서는 바탕시료(blank sample) 분석은 는 용매나 초자로 부터 방해물질 또는 오염을 검토하기 위하여 5개 시료마다 1개씩 동시에 분석하였다. 주입된 7종의 C-이성체의 평균 회수율은 \(64 \sim 115 \% \)의 범위로 USEPA (EPA 1614 draft)에 의해 확립된 조건범위 \( 25 \sim 150 \% \)를 만족하였으며, 검출한계(Limit of detection, LOD) 범위는 \( 0.02 \sim 0.08 \mathrm{~ng} / \mathrm{g} \) 이었다.</p><h2>통계적 분석</h2><p>PBDEs와 연구대상자의 인구통계학적 특성(연령, BMI, 신장, 몸무게 등) 또는 관련 인자 사이의 상관관계를 찾기 위해 피어슨 상관분석(pearson correlation analysis)을 실시하였으며, 두 그룹사이(예, 출산경험)를 비교할 때 student \( t \)-test를 사용하였다. 일원적 분산분석(one way ANOVA)과 Bonferroni post-hoc test는 식이습성(예, 어류, 육류, 유제품 섭취 빈도)사이의 비교를 위해 사용되었으며, \( p<0.05 \)의 차이는 통계학적으로 유의하다고 간주하였다. 결과 해석을 위한 데이터의 통계분석은 Statistica (version 6.0, statsoft Inc., OK, USA) software system으로 수행되었다.</p>
본 연구는 인체시료를 채취함에 있어 어떤 측면을 검토하였어?
윤리적, 과학적인 측면