<h2>Daidzein 및 Genistein</h2><p>마쇄한 된장 \( 2 \mathrm{~g} \) 에 acetonitril \( 10 \mathrm{~ml}\), \(0.1 \mathrm{~N}\) \(\mathrm{~HCl} \) \(2 \mathrm{~ml} \)를 첨가한 후 2시간 동안 교반하고 이를 여과(Whatman No. 42)하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 농축한 뒤 HPLC용 \( 80 \% \) methanol \( 10 \mathrm{~ml} \)에 녹인 다음 \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 여과하여 HPLC로 분리하였다.</p><h2>관능검사</h2><p>된장의 관능검사는 훈련된 패널원 5명을 통하여 발효된 각각의 한약재추출물 첨가 된장 시료를 그대로 실시하거나 된장찌개를 조리하여 실시하였다. 평가 항복은 색깔, 이상취, 구수한 맛, 단맛 및 전체적인 기호도에 대하여 실시하였다. 평가방법은 4점 기호도 혹은 강도 채점법(+ 매우 싫다, ++ 약간 싫다, +++ 약간 좋다, ++++ 매우 좋다)을 이용하였다.</p><h2>생균수</h2><p>호기성 세균의 생균수 측정은 무균적으로 마쇄한 된장 \(1 \mathrm{g} \)를 멸균 생리식염수로 3단계 희석한 다음, plate count agar 배지(PCA : tryptone \( 0.5 \% \), yeast extract \( 0.25 \% \), glucose \( 0.1 \% \), agar \( 1.5 \% \)) 를 이용하여 평판 도말하고 \( 35 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 ~ 2일간 배양한 후 나타난 colony수를 측정하였다.</p><h2>효소활성</h2><p>효소활성 측정을 위한 조효소액은 마쇄한 된장 \( 10 \mathrm{~g} \)에 증류수 \( 90 \mathrm{ml} \)를 혼합하여 실온에서 2 시간 동안 진탕 추출하여 원심분리한 용액을 사용하였다. Protease 활성을 위한 기질 용액은 milk casein \( 1.8 \mathrm{~g} \)을 sodium phosphate buffer (\( \mathrm{pH} 7.2\)) \( 300 \mathrm{ml} \)에 녹여 사용하였으며, 효소활성 측정은 기질용액 \( 1 \mathrm{ml} \) 와 증류수 \( 1 \mathrm{ml} \) 를 혼합하여 항온수조에서 전처리한 후 조효소액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 가하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \), 30분간 반응시킨 다음 \( 0.4 \mathrm{M} \) trichloro acetic acid(TCA) \( 3 \mathrm{~ml} \)를 가하고 반응을 중지시켰다. 이 반응 중지용액을 원심분리하여 얻은 상징액 \( 2 \mathrm{~ml} \) 에 \( 0.5 \mathrm{~M}\) \(\mathrm{~Na}_{2} \mathrm{CO}_{3}\) \(5 \mathrm{~ml} \) 와 \(1/3\) Folin phenol 시약 \(1 \mathrm{~ml} \)를 가하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 30분간 발색시킨 후 실온으로 냉각시킨 다음 \( 660 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 tyrosine (\( \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \))의 양으로 환산하여 나타내었다. Protease의 1 unit는 조효소액 \( 1 \mathrm{~ml} \) 가 1분간에 \( 1 ~\mu \mathrm{g} \)의 tyrosine을 생성하는 효소의 양으로 하였다.</p><p>\(\alpha\)-Amylase 활성 측정은 \( 0.1 \mathrm{M} \) acetate buffer(\(\mathrm{pH} 4.8\))에 용해한 \( 1 \% \) 수용성 전분기질용액 \( 10 \mathrm{ml} \)를 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5분 동안 전처리한 다음 조효소액 \( 1 \mathrm{~ml} \)를 첨가하여 20분 동안 반응시킨 후 반응용액 \( 1 \mathrm{~ml} \)를 취하여 \( 0.1 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl}\) \(10 \mathrm{~ml} \)를 가하여 반응을 정지시켰다. 반응이 정지된 용액 \( 0.5 \mathrm{~ml} \)에 \( 0.005 \% \) iodine과 \( 0.05 \% \) potassium iodine을 함유한 발색 용액 \( 10 \mathrm{~ml} \)를 가한 후 \( 660 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. \(\alpha\)-Amylase의 \(1 \mathrm{unit}\)는 amylose-iodine complex의 blue color가 \( 10 \% \) 감소되는 효소량으로 하였다.</p>
된장 혼합물을 여과, 농축 후 HPLC 분리 작업을 위해 용해시킨 메탄올의 농도는 얼마인가?
\( 80 \% \)