<h2>MTT assay에 의한 세포 독성 측정</h2><p>세포 독성 측정은 Carmichael 등의 방법에 따라 측정하였다. CCD-986sk cell과 HEM cell을 각각 \(96\) well plate에 \( 1 \times 10^{4}\), \(3 \times 10^{4} \mathrm{cells} / \) well을 분주하고 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에시 \(24\)시간 배양하였다. 새 DMEM을 \( 200 \mu \mathrm{L} \) 넣고 시료를 농도 별로 처리한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 \(48\)시간 동안 배양하였다. 여기에 \( 5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 농도로 제조한 MTT 용액 \( 20 \mu \mathrm{L} \)를 첨가하여 \(4\)시간 배양한 후 배양액을 제거하고 각 well에 DMSO \( 150 \mu \mathrm{L} \) 를 가하여 실온에서 \(30\)분간 반응 시킨 뒤 microplate reader로 \( 540 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 세포 독성 측정은 시료용액의 첨가군와 무첨가군의 흡광도 감소율(%)로 나타내었다.</p><h2>DPPH radical scavenging activity 측정</h2><p>DPPH radical 소거능에 대한 실험은 Blois 등을 변형하여 \(96\) well plate를 이용하여 측정하였다. 각 시료 \( 100 \mu \mathrm{L} \)에 \( 0.2 \mathrm{mM} \) 의 DPPH 용액 \( 50 \mu \mathrm{L} \)을 넣고 교반 한 후 10분간 방치 한 다음 \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였으며, 시료용액의 첨가구와 무첨가구 사이의 흡광도의 차이를 백분율(%)로 나타냈다.</p><h2>ABTS radical scavenging activity 측정</h2><p>ABTS radical 소거능을 이용한 항산화력 측정은 Re 등의 방법을 이용하여 측정하였다. \( 7 \mathrm{mM} \) 2,2'-azino-bis(3-ethyl-berzothizzoline-6-sulfonic acid)와 \( 2.45 \mathrm{mM} \) potassium persulfate를 혼합하여 실온에서 24시간 동안 방치하여 ABTS\( ^{+} \)를 형성시킨 후 ethanol로 \(1:9\)로 희석하여 사용하였다. 각 시료 \( 50 \mu \mathrm{L} \)에 희석한 ABTS 용액 \( 100 \mu \mathrm{L} \)를 가하여 \(5\)분 동안 방치한 후 \(734\) \( \mathrm{nm} \) 에시 흡광도를 측정하였다.</p><h2>ROS 생성량 측정</h2><p>ROS-Glo \( ^{\mathrm{TM}} \) \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) assay kit를 시용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 ROS 발생량을 측성하였다. CCD-986sk cell을 이용하여 \(96\) - well plate에 각 well 당 \( 1 \times 10^{4} \) cells/well 세포가 되도록 분주 한 후 \(24\)시간 동안 배양하였다. 이후, 배양된 배지를 제거하고 PBS를 넣어 UV-B \( \left(20 \mathrm{~mJ} / \mathrm{cm}^{2}\right)\) 처리하고 PBS를 제거한뒤 DMEM 배지를 각 well에 넣고 TNF- \(\alpha \) 를 \( 10 \mathrm{ng} / \mathrm{mL} \) 의 농도로 첨가한 후 시료를 농도별로 처리하여 \(48\)시간 동안 배양하고 ROS 발생양을 microplate reader를 사용하여 측정하였다.</p>
DPPH radical scavenging activity 측정 과정에서 교반을 마친 각 시료 하나의 부피는 \( 150 \mu \mathrm{L} \)라고 할 수 있다.
YES