<h1>서 론</h1><p>식물은 항균성을 가진 여러 종류의 단백질 생산을 통하여 병원성 곰팡이로부터 방어한다고 알려져 있다. 식물 방어 단백질은 박테리아와 곰팡이 등의 병원성에 대하여 독성이나 억제 작용을 나타낸다. 예를 들어 nonspe-cific lipid-transfer proteins (nsLTPs)은 기관과 기관사이를 오가면서 지방성분이 포함되어 있다고 생각되어지고 있으며, 이들의 기능이 정확하지는 않지만 식물의 방어 기능에 관여하고 있을 가능성이 있다고 보고되고 있다. 식물의 nsLTP 는 벼, 밀 및 보리를 포함한 많은 종들의 식물로부터 분리되었으며, 또한 Arabidopsis에서도 분리되었다. 생물적 또는 비생물적 스트레스는 nsLTPs 유전자발현을 유도하는 것으로 알려져 있다. NsLTPs는 식물표면 위의 소수성 충의 형성에서 포함된다고 알려져 있다. 식물에서 스트레스에 방어적인 수단으로 내성이 증가되는 효과적인 기작이 있음에도 불구하고 nsLTPs의 그 기능은 명확하지 않으나, 개화와 규틴과 코르크의 단위체 이동과 같은 생물학적 작용도 또한 포함하고 있다. 최근에는 nsLTPs가 곡물류에 있어서 식품화학적으로 중요한 역할을 하고 있는 것으로 밝혀졌으며, 밀가루반죽의 유동성과 빵부스러기의 성분에 직접적으로 연성의 효과가 있다고 보고하고 있다.</p><p>잎들깨는 현재 과대한 농약의 살포와 막대한 노동력이 소요되는 노동집약적 재배방식으로 재배되고 있어서 환경 오염의 문제점과 생력재배의 문제점이 나타나고 있다. 또 한 품질개선을 위하여 감마선을 처리하여 휘발성 방향성분을 높이거나, 잎들깨 재배시 광질에 따른 anthocyain 및 향기 성분의 변화에 대한 연구가 행해지고 있다. 잎 들깨 재배시에 온실과 주연재배에 의한 연작의 피해가 나타나고 있으나 토양소독을 실시함으로서 연작의 피해를 줄이고 있는 실정이다. 따라서 생산성을 높이려면 무엇보다도 친환경재배법의 개발이 시급하다. 본 실험에서는 Arabidopsis의 nsLTP를 과대 발현시킨 효모로부터 nsLTP 를 분리 정제하여, 잎들깨 재배시 처리함으로 친환경재배법 개발 및 품질과 기능성 향상을 위한 기초 자료를 제공 하고자 하였다.</p><h1>재료 및 방법</h1><h2>Arabidopsis의 AtnsLTP 분리정제</h2><p>pTS909-LTP (Fig. 1)가 형질전환된 효모를 \( 500 \mathrm{ml} \) 삼각 플라스크에 \( 200 \mathrm{ml} \) SD-galactose-T-U 액 체배지에 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C}, 160 \mathrm{rpm} \) 으로 만 2일간 배양하여 \( 50 \mathrm{ml} \) tube에 옮겨 담은 후 \( 3,500 \mathrm{rpm} \) 원심 한 후 상등액은 버리고, \( 1 \mathrm{ml} \) 멸균된 물을 넣은 후 잘 섞은 다음 \( 4,500 \mathrm{rpm} \) 원심 한 후 상등액을 새로운 튜브에 옮긴다. 3 배량의 추출버퍼 \( (20 \mathrm{mM} \) Tris-HCl, \( 1 \mathrm{mM} \) EDTA, \( 5 \mathrm{mM} \mathrm{MgCl}_{2}, 50 \mathrm{mM} \mathrm{KCl} \), \( 5 \% \) glycerol)와 동량의 glassbead를 넣고 vortex로 30 초간 교반하고 얼음에 1 분간 방치한다. 이 작업을 약 20 회 가량<p>수행한 뒤 현미경으로 효모세포가 \( 80-90\% \) 파괴된 것을 확인하고 \( \mathrm{OD}_{595} \) 를 측정하였다. 단백질 정량은 Bio-Rad Pro-tein Assay Control (66872A)를 이용하였다. 약 \( 25 \mathrm{kD} \) 의 AtnsLTP를 분리 정제하기 추출한 단백질을 전기영동 한 후 \( 25 \mathrm{kD} \) 의 단백질만을 회수하여 \( 50,100,150 \mathrm{ppm} \) 의 농도로 맞추어 사용하였다.</p>
nsLTP는 벼, 밀, 보리 뿐만 아니라 많은 종의 식물로부터 분리되었는데, 그 식물이 무엇인가?
Arabidopsis