<h1>재료 및 방법</h1><h2>토양 미생물의 분리 및 동정</h2><p>본 연구에 사용된 미생물은 미생물 제재의 제조에 사용할 목적으로 경남 깁해에 위치하는 동아대학교 부속농장의 유기물이 풍부한 토양에서 분리하였다. 채취한 토양 시료는 멸균수로 희석한 후 nutrient agar 배지를 사용하여 평판 도말법으로 미생물들을 분리하였으며 분리한 미생물 중에서 섬유소를 분해하는 능력을 가진 균주를 생화학적 방법 및 API \( 50 \mathrm{CH} / \mathrm{B} \mathrm{kit} \) (BioMerieux, France)를 사용하여 동정하였다.</p><h2>미생물 제재의 제조</h2><p>분리한 균주를 \( 5.0 \mathrm{~g} / 1 \) 의 \( \mathrm{K}_{2} \mathrm{HPO}_{4}, 1.0 \mathrm{~g} / 1 \) 의 NaCl, \( 0.2 \mathrm{~g} / \mathrm{l} \) 의 \( \mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 0.6 \mathrm{~g} / 1 \) 의 \( \left(\mathrm{NH}_{4}\right)_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 및 \( 2.5 \mathrm{~g} / 1 \) 의 효모 추출물이 포함된 배지를 사용하여 배양하였으며, 탄소원으로 포도당을 별도로 멀균한 후, 멀균된 배지에 무균적으로 \( 2.0 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)으로 흔합하여 사용하였다. 전배양은 고체 배지에서 일정시간 배양한 균주를 한 백금이 취하여 \( 500 \mathrm{ml} \) 용량의 플라스크에 멸균하여 준비된 \( 120 \mathrm{ml} \) 의 배지에 접종한 후, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서\( 200 \mathrm{rpm} \) 의 진탕 속도로 48 시간 진탕 배양하였다. 본 배양은 전배양한 배양액을 71 용량의 생물 배양기에 멸균되어 준비된 51 의 동일 배지에 \( 5 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)를 접종하여 3일간 배양하였다. 미생물을 배양하기 위한 생물 배양기의 운전조건은 통기량이 \( 1.0 \mathrm{vvm} \) 이었으며 교반속도는 \( 400 \mathrm{rpm} \) 이었다. 배양액 11 를 \( 9 \mathrm{~kg} \) 의 미강 에 흔합시킨 후, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 배양하여 수분함량이 \( 20 \% \) 이하의 미생물 제재를 제조하였으며 미생물 제재에 존재하는 생균의 함량은 \( 2.58 \times 10^{8} \pm 0.28 \mathrm{CFU} / \mathrm{g} \) 아었다.</p><h2>공시작물 재배지 토양의 며생물 조사</h2><p>미생물 제재를 처리시기 직전과 처리한 후 공시작물을 정식 한 뒤, 2주 단위로 하여 총 3회, 공시작물의 재배토양 표면으로부터 깊이 \( 10 \mathrm{~cm} \) 까지의 홁을 채취한 후, 가는 체로 고른 다음 \( 0.85 \% \mathrm{NaCl} \) 멸균수에 현탁시킨 다음 선택배지를 사용하여 미생물 제재의 처리량, 채취 시기별 및 균 종류별로 희석법과 한천배지 평판 도말법으로 토양내의 미생물의 종류별 계수를 실시하였다. 실험에 사용한 선택배지의 종류는 일반 세균을 선별하는 Tryptic Soy Agar (TSA), 방선균을 선별하는 Actinomycetes Isolation Agar (AIA), 곰팡이의 선별에는 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도의 chloramphenicol을 첨가한 Potato Dextrose Agar (PDA) 및 트리코데마의 선별에는 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도의 chlorotetracycline을 첨가한 Malt Extract Agar (MEA)를 사용하였다. 선별 배지에 도말한 미생물은 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에 48 시간 배양하여 형성된 콜로니수를 측정하였다. 토양 상의 총 균수는 이들 선택배지를 사용하여 계수 된 개별 미생물들의 생균 수의 총 합계로 계산하였다.</p><h2>공시작물을 이용한 미생물 제재의 효과검정</h2><p>마생물 제재의 효과를 겁정하기 위한 공시작물로 상추는 적치마 상추(경신종묘)를 사용하였으며 배추는 가락 신호 배추(중앙종묘)를 사용하였다. 시험 장소는 경상남도 김해시 소재 동아대학교 생명자원과학부 실험 농장에서 실시하였으며 포트와 포장시험으로 나누어 수행하였다. 공시작물의 포트시험은 동일한 크기의 포트에 동일한 양의 토양을 사용한 포트를 일정한 간격을 두어 미생물 제재를 처리하지 않은 무처리구, 미생물 제재를 기준량 처리한 기준량 처리구 및 기준량의 두 배를 처리한 배량 처리구로 나누어 시험하였으며 포장시험은 무처리구와 기준량 처리구로 나누어 시 험하였다.</p><p>포트시험의 기준량 처리구로 사용한 토양은 \( 400 \mathrm{~g} \) 의 미생물 제재를 10 의 물에 녹여 가로 \( 1 \mathrm{~m} \), 세로 \( 1 \mathrm{~m} \) 및 높이 \( 10 \mathrm{~cm} \) 의 사각 나무통에 넣은 토양과 골고루 섞어 사용하였으며 배량 처리구로 사용한 토양은 \( 800 \mathrm{~g} \) 의 미생물 제재를 10 l의 물에 녹여 동일한 양의 토양과 골고루 섞어 사용하였다.</p><p>포장시헌의 시헙구 배치는 완전임의배치법 (Completely randomized design)을 이용하였다. 포장시헙은 \( 1 \mathrm{~m} \times 1 \mathrm{~m} \) 의 면적에 미생물 제재를 처리하지 않은 무 처리구와 공시 제폼에 명서된 포준량을 처리한 기준량 처리구로 나누어 3회 반복 처리하였고 상추와 배추 두 종류의 공시작물의 재식거리는 \( 30 \mathrm{~cm} \times 30 \mathrm{~cm} \) 로 하였다. 공시작물을 재배할 토양에 대한 미생물 제재의 기준량 처리는 \( 400 \mathrm{~g} \) 의 미생물 제재를 101 의 물에 녹여 \( 1 \mathrm{~m}^{2} \) 의 토양에 살포한 후 기계적으로 표층과 포층에서 \( 20 \mathrm{~cm} \) 깊이의 하층 토양을 골고루 섞어 주었다.</p><p>공시작물에 대한 미생물 제재의 특성과 효과를 검정하기 위해서 상추와 배추의 뿌리를 수세시킨 후, 충 중량을 촉정한 생체중량과 수분을 건조시킨 건조중량, 줄기에서부터 엽의 길이를 측정한 엽장, 엽중에서 가장 넓은 부분을 측정한 엽폭 그라고 엽의 수를 측정하였다.</p>
채취한 토양 시료에서 분리한 미생물 중에서 섬유소를 분해하는 능력을 가진 균주를 어떤 방법으로 동정하였는가?
생화학적 방법 및 API \( 50 \mathrm{CH} / \mathrm{B} \mathrm{kit} \) (BioMerieux, France)를 사용하여