<h1>결과 및 고찰</h1><h2>ARTI의 분리 및 정제</h2><p>택사로부터 ARTI를 황산암모늄을 이용한 염석법, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, Sephadex G-150을 이용한 gel filtration chromatography등을 행하여 정제한 결과를 Table 1에 나타내었다.</p><p>Crude extract로부터 60.6배 정제되었고 \( 9.85 \% \) 의 회수율을 나타내었으며 전기 영동한 결과 하나의 밴드가 나타나 순수하게 정제되었음을 알 수 있었다.</p><h2>분자량</h2><p>ARTI의 분자량은 Sephadex G-150 gel filtration 행한 결과 약 23,000 Da으로 나타났으며, SDS-PAGE 전기영동한 결과 Fig. 5 에서 보는 바와 같이 약 23,000Da으로 나타나 monomer로 되어 있음을 알 수 있었다. Trypsin inhibitor의 분자량과 subunit의 수나 그 분자량은 매우 다양하며 subunit의 수도 monomer에서부터 oligomer로 이루어져 있는 것까지 있으며 한 종류의 subunit으로 되어 있는 것에서부터 여러 종류의 subunit가 모여 분자를 이루고 있는 것으로 보고되어 있다. 이러한 차이는 생물종의 차이에 기인하는 것으로 생각된다.</p><h2>온도에 대한 안정성</h2><p>온도에 따르는 trypsin에 대한 ARTI의 저해활성은 Fig. 6에서 보는 바와 같이 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)까지는 안정하였으나 그 이상의 온도에서는 저해능이 떨어지기 시작하였다. 그러나 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 이상 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서도 \( 35 \% \)정도의 저해활성을 나타내어 고온에서는 약간 불안정한 것으로 나타났다. 일반적으로 trypsin inhibitor들은 저온에서는 안정하나 고온에서는 불안정하다고 보고되어있다. 예를 들어 쌀의 trypsin inhibitor는 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분 가열할 때 저해 활성도가 감소하기 시작하여 1시간 이상 가열하면 저해 활성도가 거의 소실된다고 보고되었고 taro trypsin inhibitor는 꿇는 물에서 10분~20분 후 저해 활성이 거의 소실된다고 보고 되었다. 그러나 E. coli에서 정제된 protease inhibitor는 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서도 30분 동안은 안정하다고 보고되었다.</p><h2>농도에 따르는 저해능</h2><p>일정 농도의 trypsin에 ARTI 및 soybean inhibitor의 농도를 증가시키면서 저해능을 측정한 결과 Table 2 와 같이 나타났다. Trypsin 활성에 대하여 \( 50 \% \) 저해능을 나타내는 농도는 ARTI의 경우 \( 1.85 ~\mu \mathrm{g}(0.071 ~\mu \mathrm{M}) \)이었고 soybean inhibitor는 \( 2.0 ~\mu \mathrm{g}(0.17 ~\mu \mathrm{M}) \) 이었으므로 ARTI가 soybean inhibitor보다 2.4배정도 강한 새로운 TI를 얻을 수 있었다.</p><h2>\( \mathrm{ART} \) 의 trypsin에 대한 저해형 결정</h2><p>ARTI의 trypsin에 대한 저해형을 결정하기 위해 먼저 trypsin의 BAPNA에 대한 가수분해반응속도를 측정한 다음 Lineweaver-Birk 도시하여 Fig. 7과 같은 결과를 얻었다. 그 결과 \( \mathrm{K}_{\mathrm{m}} \) 값은 \( 0.81 ~\mu \mathrm{M} \)이었으며 \( \mathrm{V}_{\max } \)는 \( 1.92 ~mu \mathrm{M} / \mathrm{min} \) 이었다. 저해형을 알아보기 위해 ARTI를 반응용액에 함께 첨가한 후 반응속도를 측정한 결과를 Fig. 7에 같이 실었다. 그림에서 나타난 바와 같이 \( \mathrm{V}_{\max } \) 값은 \( 1.22~ \mu \mathrm{M} / \mathrm{min} \)으로 변화하였지만 \( \mathrm{K}_{\mathrm{m}} \)값은 불변임을 볼 수 있다. 이 실험결과로부터 ARTI는 trypsin에 대하여 비경쟁적 저해를 하는 것으로 추정할 수 있다. 그러므로 경쟁적 억제작용을 하는 inhibitor와는 다른 조절 작용을 하는 것으로 추정된다.</p>
여러 방법을 통해 ARTI를 정제했을 때 어떤 결과가 나타났는가?
Crude extract로부터 60.6배 정제되었고 \( 9.85 \% \) 의 회수율을 나타내었으며 전기 영동한 결과 하나의 밴드가 나타나 순수하게 정제되었음