<h2>총 폐놀 함량 측정</h2><p>총 페놀 함량은 Folin-Ciocalteau 방법을 응용하여 측정하였다. 증류수로 희석한 2 \( \mathrm{~mL} \) 시료에 phenol reagent 200 \( \mu \mathrm{L} \) 를 가하여 실온에서 5 분간 반응시켰다. 이 혼합액에 7 \( \% \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) 용액 2 \( \mathrm{~mL} \) 을 혼합하여 실온에서 90분간 반응시켰다. 반응이 끝난 후 750 \( \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였고, 페놀 함량은 표준물질 tannic acid를 이용하여 검량선을 작성한 뒤 정량하여 tannic acid equivalent 페놀 함량으로 나타내었다.</p><h2>총 플라보노이드 함량 측정</h2><p>총 플라보노이드 함량은 Gorinstein 등의 방법을 응용하여 실험하였다. 400 \( \mu \mathrm{L} \) 의 증류수에 희석한 시료 용액에 5 \( \% \) 의 \( \mathrm{NaNO}_{2} \) 30 \( \mu \mathrm{L} \) 를 가하여 6분간 반응시킨 후 10 \( \% \) \( \mathrm{AlCl}_{3} \) 을 가하여 6 분간 실온에서 반응시켰다. 이 혼합용액에 \( 1 \mathrm{M} \) \( \mathrm{NaOH} \) 400\( \mu \mathrm{L} \) 를 첨가하여 15분간 방치 후 510 \( \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 총 플라보노이드 함량은 표준물질 quercetin을 이용하여 검량선을 작성한 후 정량하여 quercetin equivalent 플라보노이드 함량으로 나타내었다.</p><h2>세포 종류 및 시약</h2><p>본 실험에 사용된 C6 glial cell은 한국세포주은행(KCLB, Seoul, Korea)에서 구입하였으며 배양을 위한 Dulbecco's modified eagle medium (DMEM)배지, fetalbovine serum (FBS)과 100 \( \mathrm{units} / \mathrm{mL} \) penicillin streptomycin, trypsin EDTA 용액은 Welgene (Daegu, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 세포 생존율과 ROS 생성율 측정을 위하여 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), dimethyl sulfoxide (DMSO)와 2'7'-dichlorofluorescin diacetate (DCF-DA)는 Sigma사 제품을 구입하여 사용하였다. 산화적 스트레스를 유도시키기 위해 사용한 \( A \beta_{25-35} \)는 Sigma사에서 구입하였으며, 3차 멸균수를 이용하여 1 \( \mathrm{mM} \) 의 농도로 stock solution을 제조하여 37\( ^{\circ} \mathrm{C} \) incubator 에서 72시간 배양 후, 실험에 사용하였다.</p><h2>세포 배양</h2><p>C6 glial cell은 100 units/mL penicillin-streptomycin과 10 \( \% \) FBS 를 첨가한 DMEM 배지를 사용하여 37\( ^{\circ} \mathrm{C} \), 5 \( \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 배양하였다. 배양된 세포가 T75-flask에서 80 \( \% \) 이상 세포 증식이 진행된 상태에서 phosphate buffered saline ( \( \mathrm{pH} \) 7.4)로 세척을 진행한 후 trypsin-EDTA 혼합액 2 \( \mathrm{~mL} \)를 이용하여 부착된 세포를 분리한 후 1,000 \( \mathrm{rpm} \) 에서 3분간 원심분리하여 세포를 모아 배지에 넣고 골고루 분산되도록 혼합한 후 계대배양하여 사용하였다.</p>
총 페놀 함량은 어떤 방법을 응용하여 측정했는가?
Folin-Ciocalteau 방법