<h1>재료 및 방법</h1><h2>손바닥선인장 줄기 분말 제조</h2><p>본 실험에 사용한 손바닥선인장 줄기는 제주도 농장에서 생산된 것을 구입하여 가시를 제거하여 동결건조한 후 파쇄하여 사용하였으며, 또한 북제주군 농업기술센터에서 설립한 손바닥선인장 줄기 분말 생산공장으로부터 줄기 분말을 구입하여 실험에 사용하였다.</p><h2>사용 균주 및 사용 배지</h2><p>본 실험에 사용한 균주 중 Staphylococcus aureus KCTC 1621 등 공시균주는 한국생명공학연구원 생물자원센터 유전자은행에서, MRSA (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus) 등 약제내성균은 부산광역시 소재 병원 임상병리과에서 환자로부터 분리한 균주를, Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus, Escherichia coli O-157, Escherichia coli O-157 H(-) 등의 분리균은 부산광역시 보건환경연구원에서 분리한 균주를, Escherichia coli ATCC 10536 등의 공시균주는 American Type Culture Collection (USA)에서 분양된 것을, 충치 원인균인 Streptococcus mutans 균주의 sero-type은 Department of Biology, Washington University (USA)의 보관용 균주를, Saccharomyces delburuekii IFO 0285는 Institute for Fermentation (Japan)에서 각각 분양 받아 실험에 사용하였다. 또한 본 실험에 사용한 배양용 배지는 일급시약(Difco, USA)을 사용하였고, 염과 금속이온 및 기타 시약도 일급시약(Junsei Chemical Co., Ltd., Japan)을 사용하였다. 본 실험에 사용한 균주 및 배지는 Table 1 과 같다. 각 균주의 배양은 각각 배양조건을 달리하여 배양한 다음 항균활성 시험 등에 사용하였다.</p><h2>손바닥선인장 추출물의 항균활성 측정</h2><p>손바닥선인장 줄기 분말 \( 100 \mathrm{~g} \) 과 \( 50 \% \) methanol \( 1 \mathrm{~L} \) 를 혼합하여 3 시간 동안 교반(CORNING, Stirrer, USA)하면서 항균활성 물질을 추출한 후 원심분리기(BECKMAN COURTER, Avanti J-E Centrifuge, USA)를 사용하여 \( 17,000 \times \mathrm{g} \) 에서 20 분 간 원심분리를 실시하여 상등액을 취한 후, 진공농축기(EYELA ROTARY VACUUM EVAPORATOR N-N SERIES, Japan)를 이용하여 \( 800 ~ \mathrm{ml} \) 의 상등액이 최종 부피 \( 80 ~ \mathrm{ml} \) (\( 1 / 10 \) volume)가 되도록 농축을 실시하였다. 진공농축액 찌꺼기를 제거하기 위하여 \( 17,000 \times \mathrm{g} \) 에서 20 분간 원심분리하여 그 상등액을 실험에 사용하였다.</p><p>실험에 사용한 각 균주 중 세균은 \( 1.0 \sim 2.0 \times 10^{6} ~ \mathrm{cells} / \mathrm{ml} \) 가 되도록 배양한 후 각 평판배지에 \( 100 ~ \mu \mathrm{l} \) 씩 도말 하였으며, methanol 추출시료는 각 paper disc ( \( \phi ~ 8 \mathrm{~mm} \), ADVANTEC, Japan)에 \( 50 ~ \mu \mathrm{l} \) 씩 흡수시킨 후 균주의 최적 배양온도에서 24~72 시간 배양한 후 생육 저지환의 크기를 확인하였다. 이때 혐기성 균주는 anaerobic jar (AnaeroGen, OXOID, England) 에서 배양하였으며, 곰팡이인 Aspergillus niger ATCC 8642는 PDA 배지에 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \), 3 일간 배양한 후 멸균된 \( 0.1 \% \) Tween 80 용액 \( 10 ~ \mathrm{ml} \) 을 배지에 부어 loop를 이용하여 포자를 가볍게 긁어모아 원심분리한 후 포자상등액을 시험에 사용하였다. 각 실험은 3 번 실행하여 평균값으로 평가하였다. 저지환의 크기가 \( 20 \mathrm{~mm} \) 이상인 것은 \( +++ \) 로, 저지환의 크기가 \( 10 \sim 20 \mathrm{~mm} \) 인 것은 \( ++ \) 로, 저지환의 크기가 \( 10 \mathrm{~mm} \) 미만 인 것은 \( + \) 로 구분하여 표기하였다.</p>
본 실험에 사용한 손바닥선인장 줄기는 어디에서 생산된 것을 구입하였는가?
제주도 농장