<h1>결과 및 고찰</h1><h2>DPPH radical 소거 효과</h2><p>DPPH는 free radical의 안정된 모델로 반응 중 DPPH의 감소는 free radical의 소거반응이 진행됨을 알 수 있고, 지질과 산화의 초기반응의 억제 정도를 예측할 수 있다. 대황 추출물의 항산화 효과를 알아보기 위해 DPPH를 이용하여 항산화작용을 측정한 결과 vitamin C는 \( 11 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 50 \% \)의 DPPH radical을 소거하였으며, 대황 추출물은 투여 농도 의존적으로DPPH radical 소거작용을 나타냈다(Fig. 1). 즉, 대황 추출물을 \( 5,10,20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리한 경우 각각의 DPPH radical 소거능은 \( 22 \%, 65 \%, 72 \% \)로 나타났다. Oh 등은 대황 뿌리로부터 분리한 piceatannol이 DPPH radical 소거활성과 지질과 산화 억제활성이 높다고 보고하였고, Jung 등은 결명자로부터 분리한 alternin과 emodin이 hydroxyl radical 소거능이 있다고 보고하였다. 본 실험에서는 대황 추출물의 free rad-ical 소거효과가 단일 성분인 비타민 C에 뒤지지 않는 매우 우수한 효과를 가지는 것으로 밝혀졌다.</p><h2>초산화 음이온 라디칼(Superoxide anion radical) 소거 효과</h2><p>피부 노화에 중요한 영향인자는 자외선에 의해 비정상적으로 생성량이 증가하는 활성 산소종과 자유 라디칼이다. 유해 산소라 불려지는 활성 산소종은 세포 생체막의 구성 성분인 불포화 지방산을 공격하여 지질과 산화 반응을 일으켜 체내 과산화지질을 축적함으로 인해 생체 기능이 저하되고 동시에 노화 및 성인병 질환을 유발하는 것으로 알려져 있으며, 다양한 종류의 식물성분 및 추출물에 의한 항산화 작용이 보고되어 있다. 초산화 음이온 라디칼의 저해작용은 초산화 음이온 라디칼 소거작용과 xanthine oxidase의 효소활성 저해에 의해 나타난다고 보고되었다. 대황 추출물의 xanthine oxidase에 의해 생성되는 초산화 음이온 라디칼의 소거 결과는 Fig. 2에 나타내었다. 양성 대조그룹으로 3-t-butyl-4-hydroxyanisole (BHA)를 이용하여 대황 추출물의 초산화 음이온 라디칼 소거효과를 비교하였다. 그 결과 대황 추출물은 투여 농도 의존적으로 초산화 음이온 라디칼소거작용을 나타내 \( 5,10,20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리한 경우,각각의 초산화 음이온 라디칼 소거능은 \( 25 \%, 60 \%, 80 \% \)로 우수한 초산화 음이온 라디칼 소거효과를 나타내었다. 양성 대조그룹인 BHA는 \( 32 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 50 \% \)의 초산화 음이온 라디칼을 소거하였다. 상기의 결과로 볼 때 대황 추출물은 양성대조그룹인 BHA보다 우수한 초산화 음이온 라디칼 소거능을 가지는 것으로 밝혀졌다.</p><h2>세포 독성</h2><p>대황 추출물이 사람 피부 섬유아세포의 생존에 미치는 영향을 알아보기 위하여 대황 추출물을 다양한 농도로 처리하고 세포의 생존율을 관찰하였다. Fig. 3에서 보는 바와 같이 대황 추출물을 최고 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 처리 시에도 세포 생존율이\( 90 \% \) 이상으로 나타났으며, 그 이상의 농도부터는 서서히 생존율이 저하되는 경향을 보였다. 따라서 대황 추출물 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 이하 범위에서는 세포독성이 거의 없는 것으로 사료되어 이 농도 범위를 기준으로 실험을 실시하였다.</p><h2>UVA에 의한 MMP-1 합성 저해 효과</h2><p>피부의 광노화에 있어 중요한 역할을 담당하고 있는 MMP-1의 발현은 UVA에 의해 세포에서 JNK/p38 활성도가 증가하고 전사인자인 AP-1의 활성도가 증가되는 신호 전달경로를 통해 MMP-1 발현을 증가시켜 피부에서 교원질의 결핍을 초래한다고 알려져 있다. 이러한 자외선 A에 의해 발현이 증가되는 MMP-1에 대황 추출물이 미치는 영향을 알아보고자 사람 피부 섬유아세포에 자외선을 조사하고, 대황 추출물을 첨가하여 24시간 배양한 후 MMP-1의 합성량을 측정하였다. 그 결과 대황 추출물은 농도 의존적으로 MMP-1 합성저해 효과를 나타내었다(Fig. 4). 즉, 대황 추출물을 \( 0.25,0.5 \), \( 1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리한 경우 MMP-1의 합성 저해 효과는 \( 63.0 \%, 72.6 \%, 79.5 \% \)로 나타났다. 본 실험에서 대황 추출물은 사람 피부 섬유아세포에서 자외선 A에 의해 발현이 증가되는 MMP-1의 합성을 저해하는 효과가 있음이 확인되었으며, 이는 기존에 보고된 retinoic acid보다 우수한 효과를 가지는 것으로 확인되었다. 또한, Kochanek 등과 Wlaschek 등은 사람 피부 섬유아세포에서 자외선 A에 의해 활성 산소종이 생성되며, 활성 산조종으로 인한 MMP의 발현이 촉진된다고 보고하였으며, 본 실험의 결과로 볼 때 대황 추출물은 활성 산소종 소거작용을 통하여 MMP-1 합성을 효과적으로 조절할 수 있을 것으로 사료된다.<p><h2>MMP-1 활성 저해 효과</h2><p>피부세포의 결합조직을 구성하는 성분들 가운데 콜라겐은 피부 건조중량의 약 \( 90 \%)에 달하는 주요 구성 단백질이다. 따라서 콜라겐의 분해는 곧 결합조직의 탄력 저하와 피부의 주름 및 처짐에 직접적인 영향을 미친다. 체내에서 생성되는 수십종의 MMPs 가운데 MMP-1은 콜라겐에 특이적으로 작용하는 단백질 분해효소(proteinase)로서 MMP-1의 활성을 억제하여 콜라겐을 보호하면 피부조직의 탄력을 유지하고 주름의 생성을 예방할 수 있는 것으로 알려져 있다. 따라서 대황 추출물의 MMP-1 활성 저해 효과를 양성 대조그룹으로 MMP-1 활성 저해 작용이 있는 것으로 알려진 1,10-phenanthroline을 이용하여 비교하였다. 그 결과 1,10-phenanthroline는 \( 24 \mu \mathrm{g} / \) \( \mathrm{ml} \)에서 \( 50 \% \)의 MMP-1의 활성을 저해하였으며, 대황 추출물의 경우 투여 농도 의존적으로 MMP-1의 활성을 저해하는 것으로나타났다(Fig. 5). 즉, 대황 추출물을 \(5, 10, 20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리한 경우 MMP-1의 활성을 각각 \( 40 \%, 50 \%, 70 \% \) 저해하는 것으로 나타났으며, IC50은 \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)로 우수한 MMP-1 활성저해 효과를 나타내었다. 상기의 결과로 볼 때 대황 추출물은 양성 대조그룹인 1,10-phenanthroline보다 약 2.4배 정도 높은 MMP-1 활성 저해능을 가지는 것으로 밝혀졌다.</p>
세포독성이 거의 없는 것으로 사료되어 이 농도 범위는 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 이하 범위가 맞는가?
YES