<h2>최적 염 농도, 온도 및 \( \mathrm{pH} \)</h2><p>최적 염 농도와 염 안정성을 검토하기 위하여 정제 물질을 \( 0-5 \% \) 범위 내에서 10분간 반응시킨 다음 각 염 농도에 대한 잔존활성을 측정하였다. 앞서 결정된 최적반응 \( \mathrm{pH} \)에서 효소의 최적 반응 온도를 결정하기 위하여 정제 효소액을 \( 30-60^{\circ} \mathrm{C} \) 범위 내에서 5분간 보정한 다음, 각 온도에 V. anguillarum NCMB1 배양액을 시간별로 반응시킨 후 잔존활성을 측정하였다. 앞에서 결정된 최적 반응 조건에서 정제물질의 최적 반응 \( \mathrm{pH} \)의 측정은 정제 효소 액을 \( 20 \mathrm{mM} \) sodium citrate buffer ( \( \mathrm{pH} 3.0, 4.0\)), \(20 \mathrm{mM} \) sodium acetate buffer ( \( \mathrm{pH} 5.0\)), \( 20 \mathrm{mM} \) potassium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} 6.0\) ), \( 20\mathrm{mM} \) sodium phosphate buffer (\( \mathrm{pH} 7.0\) ), \( 20 \mathrm{mM} \) Tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer (\( \mathrm{pH} 8.0\) ), \( 20 \mathrm{mM} \) sodium carbonate buffer (\( \mathrm{pH} 9.0\) )을 이용하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 방치시킨 후 잔존 저해활성의 최적반응 \( \mathrm{pH} \)를 비교하였다.</p><h2>각종 금속이온 및 EDTA의 영향</h2><p>여러 금속이온 \( \mathrm{MgSO}_{4}\), \(\mathrm{MnSO}_{4}\), \(\mathrm{CaCl}_{2}\), \(\mathrm{CoCl}_{2}\), \(\mathrm{FeSO}_{4} \), \( \mathrm{HgCl}_{2}\), \(\mathrm{ZnSO}_{4}\), \(\mathrm{CuSO}_{4}\), \(\mathrm{AgNO}_{3} \)과 EDTA를 \(5 \mathrm{mM} \) 이 되게 조정하여 정제된 저해물질과 동량 혼합한 뒤 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10 분간 반응시킨 후 잔존 활성을 측정하였다.</p><h2>화학 처리제와 항생제와의 활성 비교</h2><p>현재 양식장에서 사용되고 있는 화학 처리제인 Oxolinic acid (Sigma), Flumequine (Sigma)을 \( 10 \mathrm{uM} \)의 농도로 24시간 진탕 배양한 V, anguillarum NCMB1에 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 반응시켜 잔존 생육도를 측정하였다. 항생제는 penicillin (Serva Co.)과 tetracycline (Sigma Co.)을 \( 100 \mathrm{ppm} \) 농도로 처리하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 반응시켜 잔존 생육도를 측정하였다. 정제된 저해물질은 위의 반응제와 동량 혼합한 후 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 반응시켜 잔존 생육도를 측정하였다.</p><h2>정제 저해물질의 독성 검사</h2><p>정제물질이 어류에 미치는 독성검사를 위하여 약 \( 10 \mathrm{~cm} \) 크기의 넙치 치어 10마리에 정제된 저해물질을 각각 \( 0.2 \mathrm{ml} \)씩 복강 주사하고, 대조군은 \( 0.65 \% \) 생리식염수만을 주사하여 한달간 관찰하였다. 실험 수조 (\(23^{\circ} \mathrm{C}\), \(300 \mathrm{l}\))의 사육수는 실험 종료 시까지 교환하지 않았으며 사료는 투여하지 않았다.</p>
항생제는 무엇을 써서 잔존 생육도를 계측했어?
penicillin (Serva Co.)과 tetracycline