<h1>재료 및 방법</h1><h2>생리활성물질유도제(elicitor)의 제조 및 적용</h2><p>Elicitor의 제조는 Cho 등의 방법에 의하여 생리활성물질유도제(elicitor) 분말을 제조하였다. Elicitor의 적용은 노지에서 주름조개풀의 어린잎이 자라기 시작하는 \(4\)월 하순경부터 잎이 다자라는 \(6\)-\(7\)월 하순경까지 \(1\)평\( \left(3.3 \mathrm{~m}^{2}\right) \)을 기준으로 성장단계 및 평당 주름조개풀의 분포도를 측정하여 \(1\)평당 elicitor 처리 살포량을 결정하였다. Elicitor 살포량은 처리그룹별 \( 1 \mathrm{~mg} / \mathrm{mL} \) (group A), \( 3 \mathrm{~mg} / \mathrm{mL} \) (group B), 및 \( 5 \mathrm{~mg} / \mathrm{mL} \) (group C)의 농도로 설정하여 \(1\)평당 \( 1 \mathrm{~L}(1,3,5 \mathrm{~g} / \mathrm{L}) \)를 기준으로 계산하였다. 주름조개풀의 평당 분포도는 \(1\)차, \(2\)차, \(3\)차 처리 시기별로 \(1 \)평당 분포도를 측정하여 \( 60,80,100 \% \)로 설정한 후 elicitor를 제조하였으며, 일정기간에 따라 총 \(3\)회에 걸쳐 elicitor 용액을 제조한 후 분무기를 사용하여 직접 잎에 분무하였다.</p><h2>추출물의 제조</h2><p>Elicitor 처리한 주름조개풀 잎을 수확하여 이물질을 제거한 후, \( 45^{\circ} \mathrm{C} \) dry oven에서 건조하였다. 건조한 시료는 분쇄기를 이용 하여 \(40 \mathrm{~mesh}\)로 분쇄하여 밀봉하여 보관하며 사용하였다. 열수추출물의 제조는 시료 \( 1 \mathrm{~g} \)에 증류수 \( 200 \mathrm{~mL} \)를 넣고 가열하여 액이 \( 100 \mathrm{~mL} \)이 되었을 때 냉각하였으며, 에탄올 추출물은 \( 1 \mathrm{~g} \)의 시료에 \( 70 \% \) 에탄올 \( 100 \mathrm{~mL} \)를 가하여 homogeniger로 \( 20,000 \mathrm{rpm} \)에서 \(1\)분간 균질화하였다. 열수, 에탄올 추출물 모두 \(12\)시간 이상 교반 추출하고 추출액은 whatman No. \(1\) filter paper로 여과하였다.</p><h2>Total phenolic 정량</h2><p>추출물에 함유된 total phenolic compounds의 함량을 측정하기 위해 Folin과 Denis의 방법에 준하여 주름조개풀 추출물 \( 1 \mathrm{~mL} \), 동량의 \( 95 \% \) 에탄올 \( 1 \mathrm{~mL} \)와 \( 5 \mathrm{~mL} \)의 증류수를 첨가한 후 \( 2 \mathrm{~N} \) 농도의 Folin-ciocalteu reagent를 \(2 \)배 희석하여 \( 0.5 \mathrm{~mL} \)를 첨가하였다. 이 후 vortex하여 실온에 \(5 \)분간 반웅시킨 후 발색시약인 \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} 1 \mathrm{~mL} \)를 섞어주고 암실에서 \(1 \)시간 반응시켰다. 측정은 \( 725 \mathrm{~nm} \)의 파장에서 흡광도(Optical density, OD)를 측정하였으며, total phenolic compounds 함량은 gallic acid를 이용한 표준곡선을 이용하여 정량하였다.</p>
Elicitor의 적용은 주름조개풀의 분포도를 측정하여 1평당 elicitor 처리 살포량을 결정하지?
YES