<h2>대식세포에서의 Nitric oxide 생성능 측정</h2><p>대식세포를 이용하여 Nitric oxide \(\mathrm{NO}\) 생성능을 확인한 결과를 Fig. 2에 나타내었다. \(\mathrm{NO}\)는 면역 세포에서 NOS (nitricoxide syntase)에 의해 생성되는데 다량으로 외부의 자극에 의해 유전자 수준에서 발현되고 주로 침입한 미생물이나 종양 세포에 대해 독성을 갖는 방어 물질로서 작용하는 것으로 알려져 있다. 또한, 최근에는 \(\mathrm{NO}\)가 세포 활성화 물질 및 reactive oxygen intermediates (ROI)에 의해 유발된 세포 독성을 최소화 시키는 역할이 밝혀짐으로 이 분야에 대해서 활발히 연구되고 있다. 이에 본 실험에서는 시료를 대식세포에 투여하여 \(\mathrm{NO}\)의 생성능을 확인하였다. 결과에서도 확인할 수 있는 것처럼 대식세포가 생성하는 \(\mathrm{NO}\)량 \( 2 \mu \mathrm{m} \) 보다 발효액의 첨가로 인해 \( 22.0 \mu \mathrm{m} \) 의 높은 \(\mathrm{NO}\) 생성능을 나타내었다. 이로써, 산야가 면역활성과 관련하여 활용 가능성이 있으며 전통발효를 통해 높은 면역활성의 증진이 있음을 확인할 수 있었다. 지금까지의 연구는 주로 침입한 미생물이나 종양세포가 분비하는 독성물질로 유발되는 \(\mathrm{NO}\) 생성을 저해하는 효능에 대해 조사해 왔으며, 방어 물질로 또는 독성을 최소화시킬 수 있는 물질로써의 \(\mathrm{NO}\) 생성 활성에 대한 연구는 거의 없는 것으로 판단된다.</p><h2>\(\mathrm{NO}\) Assay 및 cell viability</h2><p>대장균 Bacterial lipopolysaccharide (LPS)를 대식세포에 처리하여 \(\mathrm{NO}\)를 유도시킨 다음 산야 발효액을 대식세포에 처리하여 \(\mathrm{NO}\) 활성에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과, LPS에 의하여 유도된 대식세포의 \(\mathrm{NO}\) 합성은 산야 발효액을 농도별로 첨가하였을 때 점차 감소하였다. 발효액의 첨가로 \( 56 \% \) 의 \(\mathrm{NO}\) 생성 저해능을 나타났으며, 이러한 결과는 산야로 부터의 성분들이 면역기능과 밀접한 관계가 있음을 보여주는 것이다. \(\mathrm{NO}\)는 L-arginine의 guanidino nitrogen으로부터 nitric oxide synthase (NOS)에 의하여 생성되며, \(\mathrm{NO}\)는 분비조직과 세포의 기능에 영향을 미치며, 세포성 면역계의 주된 역할의 하나로 세포 독성이나 성장 억제 작용을한다. \(\mathrm{NO}\)는 대부분의 포유류 동물의 세포내에서 생성되고 신경계에서는 화학적 신호 전달 물질로서, 혈관계에서는 혈압 조절과 혈소판의 응집 및 호중성구의 집합 작용을, 골격근에서는 대사와 근 수축 조절 등 생리학적으로 중요한 역할을한다. \(\mathrm{NO}\)가 발현하는 기능의 다양성은 농도 및 표적세포의 활성화여부에 따라 달라진다고 알려져 있다. 대식세포가 pathogen에 의하여 활성화되면 \(\mathrm{NO}\) 뿐만 아니라 superoxide anion을 호흡과정에 의하여 대량생산되는데, \(\mathrm{NO}\) 자신은 매우 약한 산화성을 가진 라디칼로서 vitamin E와 비슷하게 세포의 지질과산화물을 막는 항산화 기능도 수행한다는 보고도 있다. 최근 염증반응을 완화시키는데 있어서도 종래에 사용되어온 \(\mathrm{NO}\)를 소거하는 방식보다는 superoxide anion의 생성을 저해 하거나 NADPH oxidase의 활성을 감소시키는 방법이 더욱 비중 있게 다루어지고 있다.</p><p>LPS에 의한 산야 성분의 \(\mathrm{NO}\) 합성 저해효과 또한 연구되어 왔는데 Seo 등은 \( 50 \% \) 이상의 \(\mathrm{NO}\) 생성 저해능을 \( 100 \mu \mathrm{g} / \) \( \mathrm{ml} \)의 봉선화, 금불초, 산옥잠화, 모시풀등과 같은 약초의 메틸 추출물에서 보고하였다. 이는 본 연구에서 이용된 시료보다 높은 \(\mathrm{NO}\) 합성 저해율을 나타내고 있다. Ahn 등은 도라지의 \(\mathrm{NO}\) 합성 저해율을 보고하였는데, 우수한 \(\mathrm{NO}\) 합성 저해율로 차세대 염증질환 치료제와 예방약으로 활용할 수 있을 것으로 판단하고 있다. 이는 역시 본 연구에서 분석된 산야의 활용도를 대변하고 있다.</p><p>발효액 시료에 대한 세포활성은 MTT 분석을 통해서 측정하였다. 그 결과 시료로 처리된 대식세포의 세포생존율이 \( 90 \% \)정도를 나타내는 바 본 연구에서 사용된 시료에 대한 세포독성은 없는 것으로 관찰되었다. 또한, 실험결과에 나타난 \(\mathrm{NO}\)의 생성량의 변화가 세포독성에 의한 영향과는 무관함을 확인할 수 있었다.</p>
\(\mathrm{NO}\)는 면역 세포에서 무엇에 의해 생성돼?
NOS