<h2>2.4 액상가수분해산물 분석</h2><p>액상가수분해산물에 포함된 발효가능한 당(글루코오스, 자일로스)과 furfural, acetic acid, \( \mathrm{HMF} \), formic acid와 같은 발효저해물질의 농도는 Aminex \( 87 \mathrm{H} \) column \( (300 \times \) \( 7.8 \mathrm{~mm}, \mathrm{BIO}-\mathrm{RAD} \) )과 refractive index detector(Waters 2414 , USA)로 구성된 HPLC(Waters e2695, USA)를 이용하여 분석하였다. 이동상은 \( 5 \mathrm{mM} \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 을 이용하여 유량 \( 0.6 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 으로 55 분 동안 분석하였다. 액상가수분해산물에 포함된 total phenolic compounds(TPC)의 함량은 Folin-Ciocalteu's reagent로 측정하였다.</p><h2>2.5 올리고머 분석</h2><p>액상가수분해산물에 존재하는 발효가능한 당 이외의 올리고머를 확인하기 위해 National Renewable Energy Laboratory(NREL)의 방법에 따라 post-hydrolysis를 수행하였다. 액상가수분해산물 \( 1 \mathrm{~mL} \) 와 \( 4 \% \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} 9 \mathrm{~mL} \)를 \( 50 \mathrm{~mL} \) 삼각플라스크에 투입하여 \( 121^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 60 분간 처리하였다. 그 후 \( 0.22 \mu \mathrm{m} \) micro centrifuge filter를 이용하여 분리된 액상가수분해산물은 발효가능한 당 측정에 사용된 조건에서 HPLC로 분석하였다.</p><h2> 2.6 평균 분자량 및 다분산도 측정</h2><p>액상가수분해산물의 분자량 분포는 gel permeation chromatography(GPC)를 이용하여 측정하였다. Waters Ultrahydrogel \(120\), \(500\), \(1000\) column \(3\)개를 연결하여 사용하였고, refractive index detector를 포함하는 Dionex HPLC Ultimate \(3000\)(USA, Thermo)으로 분석하였다. 이동상으로 sodium azide \( 0.1 \mathrm{M} \) 을 사용하였으며, 유량은 \( 1 \mathrm{mL} / \mathrm{min} \) 으로 분석하였다. Pullulan(Mw: \(342~805000\))을 표준물질로 사용하였다.</p><h2>2.7 Gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) 분석</h2><p>GC-MS 분석을 위해 ethyl acetate와 액상가수분해산물을 \(3:1\)로 혼합하여 추출하였다. 추출 후, anhydrous \( \mathrm{MgSO}_{4} \)를 이용하여 수분을 제거하고 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 감압 농축하였다. 유도체화를 위해 \( 50 \mu l \) 의 pyridine과 \( 100 \mu l \) 의 BSTFA(N, O-Bis(trimethylsilyl, TMS) trifluoroacetamide)를 첨가하여 \( 70^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \(60\)분 동안 반응시켰다. 반응이 완료된 샘플은 \( 0.22 \mu \mathrm{m} \) micro centrifuge filter를 이용하여 분리한 후 분석을 수행하였다. GC-MS(5975C, Agillent)를 이용하여 분석하였으며, column은 \( \mathrm{HP}-5 \mathrm{MS}(30 \mathrm{~m} \times 0.25 \mathrm{~mm} \), \( 0.25 \mathrm{um}) \), 이동상은 \( \mathrm{He}(\mathrm{gas}) \), split ratio는 \(20:1\), mass range는 \( 1.6 \sim 1050 \mathrm{~m} / \mathrm{z} \), 시료 주입량은 \( 1 \mu \ell \) 로 하였다. 주입구 및 검출기의 온도는 각각 \( 250^{\circ} \mathrm{C} \) 와 \( 300^{\circ} \mathrm{C} \), 검출기는 flame ionization detector(F\(I\)D)를 사용하였다. 오븐온도는 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 분간 유지한 후 \( 5^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \) 의 승온속도로 \( 250^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 상승시킨 후 \( 10^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \) 의 승온속도로 \( 320^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 상승시켰다.</p><h2>2.8 통계분석</h2><p>데이터의 유의미한 차이는 통계 프로그램 IBM SPSS Statistics version \(23\) 을 이용한 일원배치 분산분석(One-ay ANOVA)으로 통계분석 하였으며 모든 통계치의 유의수준은 사후분석(Tukey법)을 통해 유의수준 \( 0.05 \) 에서 검증하였다.</p>
분석에 쓰이는 \(\mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \)의 농도는 \(15\mathrm{mM}\)인가?
NO