<h1>재료 및 방범</h1><h2>공시재료</h2><p>1999년 1월부터 12월까지 부산광역시의 10개 감시지정병원의 외래 또는 입원한 급성호홉기 감염증 환자와 16 개 보건소 환자로부터 1,686 건의 인후가검물을 채취하였다. 채취한 가검물은 바이러스 수송용배지(virus transport medium, Difco)에 넣어 냉장온도를 유지하면서 실험실로 운반하여 바이러스 분리에 사용하였다.</p><h2>세포주</h2><p>국립보건원 호홉기계 바이려스로부터 분양받은 Mardin-Darby canine kidney(MDCK) 세포주를 penicillin(0.05 units/ \( \mathrm{ml}) / \) streptomycin \( (0.05 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m} l) \) 과 \( 10 \% \) 우태아혈청이 첨가된 Minimum essential medium(MEM)을 기본배지로 하여 \( 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) 농도를 유지하면서 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 로 조정된 \( \mathrm{CO}_{2} \) 배양기에서 배양하였다.</p><h2>바이러스의 분리</h2><p>검체를 전처리하기 위하여 실험실로 옮긴 인후가검물에 penicillin( 5 units/ml)/streptomycin \( (5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m} \ell) \) 및 nystatin \( \left(1000\right. \) units/ml)을 첨가하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 방치한 후, 3000 \( \mathrm{rpm} \) (한일 원심분리기, HM-160)으로 20분간 저온 원심분리하여 상청액을 접종 가검물로 사용하였다. 미리 준비해 둔 24-well 배양용기에 단충배양시켜 놓은 MDCK 세포주에 3-well 당 각 well에 접종용 배양액 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 를 넣은 후 전처리 된 가검물 \( 0.3 \mathrm{m \ell} \) 씩 다중접종하고 \( 5 \% \mathrm{CO}_{2}, 37^{\circ} \mathrm{C} \) 로 조정된 \( \mathrm{CO}_{2} \) 배양기에서 10 일간 배양하면서, 매일 현미경하에서 세포병변효과(cytopathic effect, CPE)를 관찰하였다. 세포 병변효과를 나타내는 검체는 2 3회 연속계대배양하여 역 가롤 증가시킨 후 바이러스를 분리하여 동정하기 위한 배 양액 및 감염세포롤 확보하였다. 11일간 발육시킨 계태아의 장뇨막과 양막에 가검물을 각각 \( 0.2 \mathrm{m \ell} \) 씩 접종하여 34 \( { }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 3일간 배양한 후 계태아를 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 냉장고에 하루동안 넣어 둔 다음 양막액과 요막액을 채취하여 인풀루엔자바이 러스 배양액으로 사용하였다.</p><h2>혈구응집시험 및 바이러스의 동정</h2><p>기니픽 심장에 혈액을 채취하여 혈구응집시험(hemagglutination test, HA test)용 인산완충액(PBS, pH.2)으로 혈구를 3 번 세척하여 적혈구가 1% 농도가 되도록 한다. 96웰 플레이트에 바이러스 배양액을 1 번 웰에 \( 100 \mathrm{ul} \) 넣고 2번 웰부터 12번 웰까지 PBS \( 50 \mathrm{ul} \)을 넣어 1 번 웰의 \( 50 \mathrm{ul} \)를 취하여 2 번 웰에 넣어 2 배 단계희석한 후 12 번 웰을 음성대조군으로 두고 1% 기니아피그 적혈구롤 모든 웰에 \( 50 \mathrm{ul} \) 을 넣는다. 플레이트를 잘 진탕시켜 실온에서 1 시간 정치시킨 후 응집이 일어나는 최종 웰의 희석배수 혈구응집의 HA 역가 를 판독한다. 1: 8 이상의 역가를 나타내는 검체에 대하여 2~3 회 연속 난계대배양하여 역가가 높은 바이러스 항원을 준비하였다. 바이러스의 동정은 FITC-conjugated anti-mouse immunoglobulin을 사용한 간접면역형광법(indirect fluo-rescent antibody test, IFA)으로 동정하고 국립보건원 호흡 기 바이러스과에 외뢰하여 HA 및 혈구응집억제시험(hemagglutination inhibion test, HI test)으로 아형과 항원특성을 검사한 후 일부는 미국 CDC (centers for disease control and prevention)에 있는 세계보건기구 인플루엔자 센터에 검체를 송부하여 재확인하였다.</p><h2>바이러스의 형태학적 특성</h2><p>분리된 바이러스를 연속적으로 2~3회 계대하여 4% uranyl acetate에 약 1 분간 negative stain한 다음, 전자현미경(JEM 1200 EX2, JEOL, TEM)으로 \( 80 \mathrm{KV}(\times 120 \mathrm{~K}) \) 에서 관찰하였다.</p>
본문에서 인후가검물을 어느 도시에서 채취했어?
부산광역시