<h2>식물 형질환 및 형질전환 식물체 선별</h2><p>애기장대 형질전환을 위해 제작된 벡터를 freeze-thaw 방법을 이용하여 Agrobacterium tumefaciens 균주 GV3101로 도입하였고, floral-dipping 방법을 이용하여 애기장대로 형질전환하였다. \( 25 \mathrm{mg} /\mathrm{l}\) kanamycin 이 포함된 MS 배지에서 종자를 발아시켜 형질전환체를 선별하였다.</p><p>벼 형질전환을 위해 제작된 벡터를 freeze-thaw 방법을 이용하여 Agrobacterium tumefaciens 균주 PC2760으로 도입하였고, 벼(Kitake)의 비성숙 embryo로부터 유래된 캘러스에 형질전환하였다. \( 30 \mathrm{mg} /\mathrm{l}\) hygromycin이 포함된 MS 배지에서 종자를 발아시켜 형질전환체를 선별하였다.</p><h2>GUS 분석</h2><p>GUS 활성 분석을 위해, 형질전환 식물체를 X-gluc 용액[\(2 \mathrm{mM} \) 5-bromo-4-chloro-3-indolyl- \( \beta \)-D-glucuronic acid, \( 0.5 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{K}_{3} \mathrm{Fe}(\mathrm{CN})_{6}\), \(0.5 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{K}_{4} \mathrm{Fe}(\mathrm{CN})_{6}\), \(50 \mathrm{mM} \) phosphate (\( \mathrm{pH} 7.0 \)) ]에 담가 10 분간 진공 처리를 한 후, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 6 시간 동안 암조건에서 반응시켰다. 반응이 끝난 식물체는 \( 50 \mathrm{mM} \) phos-phate 완충용액 (\( \mathrm{pH} 7.0 \)) 으로 세척하여 X-gluc 용액을 제거하고 ethanol (\( 100 \% \)) :acetic acid (\( 9: 1, \mathrm{v} / \mathrm{v} \)) 용액을 하루 동안 처리하여 색소 탈색 및 고정을 시켰다.</p><h2>GFP 분석</h2><p>GFP 발현 분석은 \( \mathrm{T}_{2} \) 형질전환체를 대상으로 수행하였으며, fluorescence phase microscope (Zeiss Axioskop, Carl Zeiss co. Jena, Germany)를 이용하여 GFP 형광을 관찰하였다. GFP에 대한 흡수파장은 \( 395 \mathrm{~nm} \), 발광파장은 \( 508 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였다.</p><h2>RNA 분리 및 semiquantitative RT-PCR</h2><p>Trizol reagent (Invitrogen, USA)를 사용하여 식물체에서 RNA를 분리하였다. \( 5 \mu \mathrm{g} \) RNA에 2 unit RNase-free DNase I (Promega, USA)을 처리한 후, 100 pmole poly-T 프라이머, \( 10 \mathrm{mM} \) dNTP mixture, 200 unit M-MLV Reverse Transcriptase (Promega, USA)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. RNA의 발현량을 확인하기 위해, 합성한 cDNA를 이용하여 semi-quantitative RT-PCR을 수행하였다. RT-PCR에 사용한 각 유전자-특이적인 프라이머는 Table 1에 나타내었다. PCR 반응은 \( 1 \mu \mathrm{L}\) cDNA, 1 unit F-taq DNA 중합효소(Solgent, Korea), 25 pmole 프라이머(정방향, 역방향), \( 0.5 \mathrm{mM} \) dNTP mixture, \( 5 \mu \mathrm{l} \) 10x 완충용액에서 수행하였다. PCR 반응은 \( 94^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 분간 변성 후, \( 94^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 45 초, \( 56^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 45 초, \( 72^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 45 초의 PCR cycles을 25-30회 반복하여 수행하였다.</p>
어떤것이 포함된 MS 배지에서 종자를 발아시켜 형질전환체를 선별 했니?
\( 25 \mathrm{mg} /\mathrm{l}\) kanamycin