<h1>재료 및 방법</h1><h2>시료</h2><p>본 실험에 사용한 매생이(C. fulvescens)는 전남 완도산을 냉동상태의 생체로 구입하여 깨끗이 씻은 후 일주일 동안 음지에서 자연 건조 시켰다. 이후 믹서기(HMF-1000A, Hanil Electronics, Seoul, Korea)로 분쇄한 매생이 중 30 mesh 이하의 것을 추출용 시료로 사용하였다. 매생이의 열수 추출물은 분쇄된 매생이 시료 \( 20 \mathrm{~g} \)에 증류수 \(1 \mathrm{l}\)를 가하고, \( 90^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 6시간 동안 추출하여 얻었으며, 에탄올 추출물은 \( 80 \% \) 에탄올로 24시간 추출하여 얻었다. 추출한 다음은 Whatman No. 2 filter paper로 여과한 후 rotary evaporator (EYELA N-1000, Rikakikai Co., Tokyo, Japan)에서 농축하고 다시 \( -70{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 동결건조한 것을 시료로 사용하였다. 시료 추출물의 수율은 열수 추출물 \( 20 \% \), 에탄올 추출물 \( 39.5 \% \) 로, 각 생리활성 측정시 시료는 증류수에 농도별로 용해한 후 측정하였다.</p><h2>DPPH 라디칼 소거능 측정</h2><p>매생이 추출물의 전자공여능은 Blois의 방법에 따라 DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl, Sigma Chemical Co.,St. Louis, MO, USA)에 대한 수소공여 효과로 측정하였다. DPPH 용액은 \( 100 \mathrm{ml} \) 에탄올에 DPPH \( 1.5 \times 10^{-4} \mathrm{M} \)을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm{ml} \) 혼합하여 Whatman filter paper No. 2로 여과하여 만들었다. 96 well plate에 시료와 DPPH용액을 \(1:4\)비율로 혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30분간 반응시킨 후, ELISA reader (Molecular Device, VersaMax Microplate Reader, Los Angeles, CA, USA)를 이용하여 \( 520 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능(Electron donating ability, EDA)은 EDA \( (\%)=( \) 대조구흡광도-시료 첨가구흡광도 \( ) / \) 대조구흡광도 \( \times 100 \)으로 계산하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조그룹과 흡광도차를 비교하여 라디칼의 제거활성을 백분율로 나타내었다. Positive control은 항산화제로 알려져 있는 Vit C 를 사용하였다.</p><h2>SOD 유사활성(Superoxide dismutase-like activity, SODA) 측정</h2><p>SOD 유사활성은 Marklund 와 Marklund의 방법에 따라 활성 산소종을 과산화수소 \( \left(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}\right) \)로 전환시키는 반응을 촉매하는 pyrogallol (Sigma)의 생성량을 측정하여 나타내었다. 시료를 농도별로 희석하여, \( 10 ~\mu \mathrm{l} \)씩 96 well plate에 첨가한 후, Tris-HCl buffer \( (50 ~\mathrm{mM} \) Tris aminomethane, \( 10 ~\mathrm{mM} \mathrm{~EDTA}, \mathrm{pH} 8.0,\) Sigma) \( 150 ~\mu \mathrm{l} \)와 \( 7.2 \mathrm{~mM} \) pyrogallol \( 10 ~\mu \mathrm{l} \)을 첨가하여, 실온에서 10분간 반응시키고, \(1 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl} ~50 ~\mu \mathrm{l} \) 을 첨가하여 반응을 정지시킨 후 ELISA reader (VersaMax Microplate Reader)를 사용하여 \( 420 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. SOD 유사활성은 시료 첨가구와 무첨가구 사이의 흡광도 차이를 백분율 \( (\%)\)로 나타내었다. Positive control은 항산화제로 알려져 있는 Vit C (Sigma)를 사용하였다.</p><p>SODA \( (\%)=(1-A / B) \times 100 \)</p><p>A: 시료 첨가구의 흡광도</p><p>B: 시료 무첨가구의 흡광도</p>
흡광도를 어떻게 측정했는지 알려줄래?
96 well plate에 시료와 DPPH용액을 \(1:4\)비율로 혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30분간 반응시킨 후, ELISA reader (Molecular Device, VersaMax Microplate Reader, Los Angeles, CA, USA)를 이용하여 \( 520 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정