<h2>ADH 활성 측정</h2><p>ADH 활성도는 Choi 등과 Racker의 방법을 변형하였는데, spectrophotometer를 이용하여 \( 340 \mathrm{~nm} \) 에서 형성되는 NADH의 흡광도를 측정함으로써 나타내었다. 즉, 시험관에 alcohol, NAD (Sigma) 수용액, 시료 \( 0.1 \mathrm{~ml} \)를 첨가하고 \( 0.01 \mathrm{~M} \) \( \mathrm{glycine}-\mathrm{NaOH} \) 완충용액 \( (\mathrm{pH} ~8.8)\)을 총 부피가 \( 1.8 \mathrm{~ml} \)가 되게 첨가한 후 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 10분간 반응시키고 ADH \( (10 \mathrm{unit}/ \mathrm{ml} \), Sigma)를 가하여 \( 340 \mathrm{~nm} \) 에서 spectrophotometer (Amersham Pharmacia Biotech UK Ltd.)를 이용하여 흡광도의 변화를 측정하였다. 이때 대조구는 시료대신 증류수를 넣은 것으로 하였다. Positive control로 사용한 hepos는 약국에서 구입한 것으로, 처방전에 따라 1/2로 희석하여 사용하였다. ADH의 활성은 반응 종료시의 최대 흡광도를 대조구의 최대 흡광도에 대한 비율로 나타내었으며 다음과 같은 식으로 계산하였다.</p><p>ADH activity \( =(\mathrm{B} / \mathrm{A}) \times 100 \)</p><p>A: 대조구의 최대 흡광도</p><p>B: 실험구의 최대 흡광도</p><h2>ALDH 활성 측정</h2><p>ALDH의 활성도는 Tottmar 등의 방법을 변형하여 NADH생성에 따른 흡광도의 변화를 spectrophotometer (Amersham Pharmacia Biotech UK Ltd.)를 이용하여 \( 340 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. 즉, ALDH의 활성도 측정을 위해 증류수, \( 1 \mathrm{~M} \) Tris-\(\mathrm{HCl} \) buffer ( \( \mathrm{pH} ~7.5)\), \( 3 \mathrm{~M} \mathrm{~KCl} \), 시료, \( 20 \mathrm{~mM} \mathrm{~NAD} \) (Sigma), \(0.33 \mathrm{~M}\) 2-mercaptoethanol, \(0.1 \mathrm{~M}\) acetaldehyde (Sigma)를 혼합한 다음 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 10분간 반응시키고 ALDH ( \( 1 \mathrm{~unit} / \mathrm{ml} \), Sigma)를 가하여 \( 340 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 이때 대조구는 시료대신 증류수를 넣은 것으로 하였다. Positive control은 ADH 활성 측정에서 사용한 것과 동일한 것으로 하였으며, ALDH의 활성은 ADH 활성 계산식에 따라 측정 되었다.</p><h2>Elastase 저해활성 측정</h2><p>시료의 elastase 저해활성은 James의 방법에 따라 측정하였다. 즉, \( 0.05 \mathrm{~M}\) Tris- \(\mathrm{HCl}\) buffer \( (\mathrm{pH} ~8.2)\)에 기질인 \( 0.5 \mathrm{~mM} \) N-succinyl-Ala-Ala-Ala-pnitroniline (Sigma)를 용해시킨 후 시료와 효소인 elastase ( \( 1 \mathrm{unit} / \mathrm{ml} \), Sigma) 용액을 첨가하였 다. 이 혼합액을 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 10분간 반응시킨 후 ELISA reader (VersaMax Microplate Reader)를 이용하여 \( 415 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. Elastase 저해활성은 다음의 식에 의해 계산하였다.</p><p>저해활성 \( (\%)=(1-\mathrm{S} / \mathrm{C}) \times 100 \)</p><p>S: 시료 첨가구의 흡광도</p><p>C: 무첨가구의 흡광도</p><h2>통계분석</h2><p>본 실험에서 얻은 결과는 각 시료마다 세 번씩 반복 실험을 통해 실험군당 평균과 표준편차를 계산하여 나타내었다.</p>
본 연구에서 사용한 spectrophotometer를 이용하여 \( 340 \mathrm{~nm} \) 에서 형성되는 NADH의 흡광도를 측정하는 방법은 어떤 방법을 기반으로 한거야?
Choi 등과 Racker의 방법