<h1>고 찰</h1><p>어병균 중 V. anguillarum은 여러 종류의 어류에 감염하며 어류의 장이나 여러 부위에 손상을 입히는 균으로 알려져 이를 제어하기 위한 방법이 시도 되었으나 어떤 경로로 어류에 침입하는지는 알 수 없으며 어류의 장에서 증식한다는 것은 실험적으로 감염시킨 경우에 어류의 분변에서 본 균을 검출하거나 감염 후 수개월 뒤 양식장 주변이나 침전물에서 분리함으로서 증명되었다.</p><p>해수 세균 중에는 Vibrio sp.에 저해능을 가진 균종의 존재가 밝혀져 왔으며 해수 미생물이 항균성 물질을 생산한다는 보고가 있어옴에 따라 여러 해양 미생물들이 실용 가능한 항미생물 물질의 보고로 알려지면서 근년에 이르러 해조류, 해산어, 담수어 등에서 이런 물질을 탐색하기에 이르렀다. 해양 환경보다 해산어의 장이나 위 등이 이들 미생물의 서식처로서 장에서 번식하며 장의 점막이 효과적인 방패막이로서의 역할과 영양의 공급처로 제공되며 이들 세균의 정착을 도우는 역할을 하여 다른 유해균의 침략, 성장 억제, 그리고 증식을 막아주는 저해물질들을 생산하여 어류를 보호하는 기능을 수행한다고 하였다. 이미 여러 연구자들이 해양에서 분리된 균에서 항균성 물질을 생산하는 세균을 분리, 보고 하였으며 이들에 의한 어류 보호가 계속됨을 시사하였다.</p><p>본 과정에서도 세균성 어류질병인 V. anguillarum균을 예방하기 위한 생물 전구체의 개발에 목적을 두고 어류를 중심으로 어병균 저해물질을 생산하는 균을 탐색하는 과정에서 해산어의 장에서 B. amyloliquefaciens H41를 분리하게 되어 위 내용에 공감하게 되었다. 앞선 과정에서 균의 특성 및 저해물질 생성인자들을 관찰하고 본 내용에서는 V. anguillarum 생육을 저해하는 물질을 정제하기에 이르렀다. 배양 상등액을 시작으로 4 단계 정제과정을 통하여 최종 회수율 \( 2.9 \% \)을 얻을 수 있었으며 40.8배의 정제된 생육 저해물질을 얻을 수 있었으며 분자량은 \( 48 \mathrm{kDa} \)이었다. 정제된 저해물질은 저해정도에 따라 활성을 측정하였으며, 정제물질의 활성을 위한 최적 반응 \( \mathrm{pH} \)와 온도는 \( \mathrm{pH} 7.5 \)와 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)로 확인되었다. 금속이온의 효과에 있어서는 \( \mathrm{CoCl}_{2}\), \(\mathrm{HgCl}_{2}\), \(\mathrm{ZnSO}_{4} \), \( \mathrm{AgNO}_{3} \)에서는 완전히 저해되는 양상을 나타내었고 \( \mathrm{MgSO}_{4} \), \( \mathrm{MnSO}_{4} \)에서 미미한 효소활성의 증가를 나타내었다. 일부 어병균의 경우에 저해활성에 \( \mathrm{Fe} \)같은 성분이 영향을 미치는 결과를 보고하였으나 본 균에서는 뚜렷한 차이가 나타나지 않았다. 염에 관한 안정성은 일반 해수 균의 생육가능 농도인 \( 3 \% \)의 농도에서 활성을 나타내는 것으로 확인되었다.</p><p>정제된 V. anguillarum 생육 저해물질을 현재 상업적으로 사용되고 있는 화학 처리제나 항생제와 함께 효율성을 비교해 보았을 때 V. anguillarum 생육 저해물질은 약 \( 78 \% \)의 저해 활성을 나타내어 시험 항생제에 비해 저해 효율성이 약간의 차이를 나타내는 것을 알 수 있었다. 그러나 환경 친화적인 면에서는 더욱 응용 가치가 있는 것으로 보아지며 최근의 생물 방제에 대한 관심이 높은 면에서도 의의가 있을 것으로 보아진다.</p><p>분리 균의 독성검사를 위해 정제물질을 해수어에 투여한 결과 30일간의 기간이 지나도 어떤 해수어도 폐사하지 않고 생존하는 것으로 보아 B. amyloliquefaciens H41 정제물질이 어류 자체에는 독성을 가지지 않는 것으로 판단되었다.</p><p>본 과정에서 분리된 균이 어류의 장에서 분리되어 정상세균의 한 종류로 볼 수도 있겠으나 생물 방제의 균종 다양성 확보 차원에서 지속적인 시도로 많은 균종의 확립이 필요할 것으로 보이며, 또한 본 과정에서의 결과로 볼 때 생육 저해 범위가 제한 적인 점으로 보아 다른 어류 병원성 미생물의 생물학적 방제 차원에서의 다각적인 탐색이 요구되는 바이다. 이미 밝혀진 몇몇 균종에 대한 결과로 봐서도 어류에 따른 질병 양상을 파악하여 응용 가능한 균종의 탐색이나 균주 확보가 필요하다고 보아진다.</p><p>본 과정을 통하여 Bacillus amyloliquefaciens H41가 분비하는 V. anguillarum 생육저해물질이 양식업에 사용 될 수 있는 가능성을 나타내고 있으므로, 산업적 이용을 위한 대량생산, 저해물질의 유전자 검토, 그리고 저해물질의 효과적인 사용 방법 개발 등이 앞으로 남은 과제라고 사료된다.</p>
V. anguillarum의 검출 방법 중에서 수개월 뒤 양식장 주변이나 침전물에서 분리하지 않고도 검출할 수 있는 방법이 뭐야?
어류의 분변에서 본 균을 검출