<h2>토양 urease 활성에 미치는 목초액의 영향</h2><p>토양 urease 활성 측정은 음건 후 수분함량을 \( 20 \%(\mathrm{W} / \mathrm{W})\)로 맞추고 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 하루 배양한 토양 \( 2 \mathrm{~g} \)에 toluene \( 80 \mu \mathrm{L} \)를 첨가 후 PEB (\( \mathrm{pH~} 7.0\)) \( 4 \mathrm{~mL} \)를 더하여 효소액을 준비하였다. 요소농도와 배양온도, 처리조건은 jack bean과 Bacillus urease 활성 측정방법과 같고 \(3\)시간 동안 배양하였다. 반응 후 stop reagent로 \( \mathrm{Ag_{2}SO_{4}} \) (\(3 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \))를 \( 2 \mathrm{~mL} \)첨가하여 반응을 종결시킨 후 \( 2 \mathrm{M} \) \( \mathrm{KCl} \)을 \( 20 \mathrm{~mL} \) 넣어 \(30\)분간 진탕 후 No. \(2 \) 여과지에 여과하였다. 증류수 \( 400 \mu \mathrm{L} \)에 여과한 토양 추출액 \( 100 \mu \mathrm{L} \)를 취해서 넣고, EDTA \( 50 \mu \mathrm{L} \), phenol-nitroprusside \( 200 \mu \mathrm{L} \)와 \( \mathrm{NaOH} \)-hypochlorite \( 200 \mu \mathrm{L} \)를 넣어 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)수조에서 \(30\)분간 발색시킨 후 \( 630 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 암모니아 농도 및 urease 활성 저해도(\(\%\)) 계산은 jack bean과 Bacillus urease 활성 계산방법과 동일하다.</p><h2>Jack bean urease 반응속도에 미치는 목초액의 영향</h2><p>목초액의 요소분해 저해 기작을 알기 위하여 목초액 \( 500\), \(5,000 \), \( 10,000 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \)와 요소농도를 \( 20\), \(80\), \(160\), \(320\), \(500 \mathrm{mM} \)로 달리하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(3\)분 동안 반응시킨 후 jack bean urease 반응 속도를 측정하였다. 요소농도별 반응속도값을 요소농도와 반응 속도의 역수를 취하여 Lineweaver-Burk plot으로 환산하여 \( \mathrm{V_{max}}\), \(\mathrm{K_{m}} \) 값을 구한 후 inhibition의 반응기작을 평가하였다.</p><h2>토양 내 요소 가수분해에 미치는 목초액의 영향</h2><p>목초액이 토양 내 요소 가수분해에 미치는 영향을 보기 위하여 요소와 목초액을 토양에 직접 처리한 후 요소 가수분해 시 발생하는 토양 내 암모니아를 \( 2 \mathrm{M} \) \(\mathrm{ KCl} \) 추출-indophenol blue 변법으로 측정하여 요소 가수분해 정도로 나타내었다. 음건 후 토양의 수분함량을 \( 30 \% \)로 맞추고 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 하루 배양한 토양 \( 20 \mathrm{~g} \)에 urea \( 100 \mathrm{mg} \)과 목초 희석액을 증류잔사물 기준 농도별 (\(1,000\), \(5,000\), \(10,000 \mathrm{mg} / \mathrm{L}\))로 \( 1 \mathrm{~mL} \)씩 첨가한 후 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \) 항온 배양기에서 \( 1\), \(2\), \(3\), \(5\), \(10 \)일 동안 항온 배양하였다. 이때 토양의 수분함량은 미생물의 최적 수분함량인 water filled pore space \( 60 \% \)로 맞추었다. 배양 후 \( 20 \mathrm{~g} \) 토양 중 \( 2 \mathrm{~g} \)을 취해 \( 2 \mathrm{M} \) \( \mathrm{KCl}\) \(20 \mathrm{~mL} \)를 넣어 \(30\)분간 진탕 후 No. \(2\) 여과지에 여과하였다. 증류수 \( 400 \mu \mathrm{L} \)에 여과한 토양 추출액 \( 100 \mu \mathrm{L} \)를 취해서 넣고, EDTA \( 50 \mu \mathrm{L} \), phenol-nitroprusside \( 200 \mu \mathrm{L} \)와 \( \mathrm{NaOH} \)-hypochlorite \( 200 \mu \mathrm{L} \)를 넣어 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 수조에서 \(30\)분간 발색시킨 후 \( 630 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Control은 목초액 대신 \( \mathrm{MeOH} \)를 처리하는 것으로 하였다.</p><h2>분석 데이터의 통계적 처리</h2><p>모든 실험은 \(3\)반복으로 하였으며 분석한 데이터는 평균과 표준편차로 표시하였다. 목초액 처리에 따른 urease 활성 저해는 R \( 3.3.3 \) 프로그램을 이용하여 일원분산분석으로 차이를 검정하였다. 사후검정으로 Tukey HSD를 사용하였으며 처리 집단에 차이가 없는 경우(\( p<0.05\)) 같은 영문자로 그래프 위에 표시하였다.</p>
사후검정으로 사용된건 뭐야?
Tukey HSD