<h1>재료 및 방법</h1><h2>재료 준비</h2><p>치상 재료는 줄기가 가늘고 꽃이 잘피는 금산 수집종과 줄기가 굵고, 꽃이 거의 피지 않는 완주 수집종을 원광대학교 포장에 삽목하여, 이듬해 봄에 새로 자란 신초를 채취하여 \( 70 \% \) 에탄올에 30초간, \( 1 \% \) sodium hypochlorite에 20분간 소독한 다음, 멸균수로 4회 세척하였다. 부정아를 얻기 위하여 생장조절제를 첨가하지 않은 MS 배지 (Murashige and Skoog 1962)를 \( 20 \mathrm{~mL} \)씩 분주한 샤레에, 줄기 상부에서 잎을 제거하고 \( 10 \mathrm{~mm} \) 길이로 마디를 잘라 샤레당 20개씩 치상하였다. 3~4회 계대배양 후 새로 발생한 \( 5 \mathrm{~cm} \) 크기의 신초에서 잎을 채취하여 \( 2 \times 5 \mathrm{~mm} \) 크기로 잘라 배양 절편체로 이용하였다.</p><h2>Glutamine과 \( \mathrm{AgNO}_{3} \) 첨가에 따른 식물체 분화</h2><p>두 수집종간 캘러스로부터 식물체 분화에 미치는 glutamine과 \( \mathrm{AgNO}_{3} \) 첨가의 영향을 조사하기 위하여, 잎 절편으로부터 캘러스 유도는 MS 배지에 \( 3 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), \(1\mathrm{~mg} / \mathrm{L} \) 6-benzyladenine (BA)를 첨가한 캘러스용 배지 (Ahn and Lee 2004)를 이용하여, \( 25 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \)에서 암배양하였다. 배양 40일 후 형성된 캘러스 중 균일한 크기의 것만을 재분화 배지에 이식하였다. 재분화 배지도 Ahn과 Lee(2004)의 방법에 따라 \( 0.2 \mathrm{~mg} / \mathrm{L}\) NAA, \(3 \mathrm{~mg} / \mathrm{L} \) BA를 첨가한 MS 배지를 이용하였다. 재분화 배지에 L-glutamine (Duchefa Co. Netherlands)을 \(0, ~150,~ 250,~ 350,~ 500 \mathrm{~mg} / \mathrm{L} \)를 첨가하여, 샤레당 12개의 캘러스를 5반복으로 옮겨 배양하였다. \( \mathrm{AgNO}_{3} \) (Duchefa Co. Netherlands)는 \( 0,~5,~10,~15,~20,~25,~30,~50~ \mu \mathrm{M} \)을 첨가한 재분화 배지에 샤레당 8개의 캘러스를 5반복으로 옮겨 배양하였다. 배양조건은 \( 25 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 27 ~\mu \mathrm{mol} / \mathrm{m}^{2}~(18 / 6 \mathrm{~h},~\mathrm{day} / \mathrm{night}) \)로 조절된 배양실에서 배양하여 30일과 50일 째에 분화된 식물체 수를 조사하였다.</p><h2>식물체 순화 및 토양이식</h2><p>재분화 식물체는 생장조절제를 첨가하지 않은 MS배지로 옮겨 초장과 뿌리가 약 \(3\sim5 \mathrm{~mm}\) 정도 자란 식물체를 배양병 뚜껑을 열어 실온에서 3일간 적응시킨 후, 꺼내어 흐르는 물로 부드럽게 헹구어 뿌리에 묻은 배지성분을 제거하였다. 72구 트레이에 vermiculite와 perlite를 단독 또는 혼합하여 채운 후 한 캘러스 유래의 식물체들을 모듬으로 각각의 트레이 셀에 이식하였다. 식물체 관리는 처음 5일 동안은 측광이 들어오는 실내에서 비닐을 씌워서 \( 90 \% \) 정도의 과습상태로 유지하였다가, 2일 간격으로 서서히 노출시켜, 10일 후 비닐을 제거한 다음, 온실로 옮겨 \( 70 \% \) 차광막을 이용하여 3일간 둔 다음, 오전 9~10시와 오후 16~18시 전후의 약한 햇빛을 쪼여가며 순화시켰다. 육묘 트레이에 옮긴 후 20 일째에 생존율을 조사한 후, 강모래와 밭흙 \( (1: 1) \)을 채운 삽목상자 \( (48 \times 33 \times 8.6 \mathrm{~cm}) \)에 \( 5 \times 8 \mathrm{~cm} \) 간격으로 32개체씩 정식하여 온실에서 관리하였다. 정식 30일 후에 중앙부의 10개체에 대한 초장을 5반복 조사하였고, 형태적 특성을 모식물과 비교하였다.</p>
부정아를 얻으려면 어떻게 해야하니?
생장조절제를 첨가하지 않은 MS 배지 (Murashige and Skoog 1962)를 \( 20 \mathrm{~mL} \)씩 분주한 샤레에, 줄기 상부에서 잎을 제거하고 \( 10 \mathrm{~mm} \) 길이로 마디를 잘라 샤레당 20개씩 치상