<h1>재료 및 방법</h1><h2>유산균의 분리 및 동정</h2><p>유산균의 분리를 위해 닭, 염소 및 돼지 등의 분변을 수집하여 분리원으로 사용하였다. 각각의 시료를 멸균수에 희석하여 \( 0.5 \% \mathrm{CaCO}_{3} \)를 함유한 MRS 평판배지에 \( 100 \mu \)씩 도말하였으며, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24-48 시간 배양한 뒤 투명환을 생성하는 콜로니를 선택하여 순수분리하였다. 분리된 균주의 16S ribosomal DNA 염기서열분석을 하였고, Genbank의 database에 등록된 다른 균들과 상동성을 비교, 분석하였다. 이들 결과에 기초하여 clustal X2.0 (CLC bio, Denmark)을 사용하여 neighbor joining method를 기반으로 계통수를 작성하였고, 분리된 균주의 생리, 생화학적 특징은 Bergey's manual of determi-native bacteriology의 방법에 준하여 조사하였다.</p><h2>용혈성 등 안전성 조사</h2><p>용혈성 여부를 조사하기 위하여 선별된 유산균을 sheep blood agar plates(아산제약)에 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 48 시간 배양한 뒤 \( a, \beta \), 및 \( \lambda \) 용혈성을 확인하였다. 유해효소 생성능 조사는 선별균주의 배양액을 30 분간 원심분리 \( \left(3000 \mathrm{rpm}, 4^{\circ} \mathrm{C}\right) \)하여 침전물을 \( 20 \mathrm{ mM } \) phosphate buffer (PBS, \( \mathrm{pH}\ 7.0 \))로 현탁시킨 후 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 2 분간 sonication하였다. 현탁액을 원심분리한 다음 상등액을 조효소액으로 사용하여 대장암을 유발하는 효소인 \( \beta \)-glucosidase, \( \beta \)-glucoronidase, tryptophanse 및 urease에 대한 효소 활성 유무를 조사하였다.</p><h2>내산성 및 담즙산에 대한 내성 조사</h2><p>산에 대한 저항성을 알아보기 위해, 분리균주를 MRS broth에서 18 시간 배양한 뒤, \( 1 \mathrm{ml} \)의 배양액을 \( 9 \mathrm{ml} \)의 PBS buffer \( \left(\mathrm{pH}\right. \) 2.5)에 현탁하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 배양하였으며, 0 시간과 3 시간 후의 생균수를 측정하였다. 담즙산에 대한 저항성은 MRS broth에서 18 시간 배양한 균주를 \( 0.3 \%, 0.6 \%, 1 \% ( \mathrm{w} / \mathrm{v}) \)의 oxgall이 포함되어 있는 \( 9 \mathrm{ml} \)의 MRS broth에 \( 1 \mathrm{ml} \)씩 접종하였으며, 0과 24 시간 후의 생균수를 측정하였다. 생균수는 MRS 평판배지에서 48 시간 동안 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에 배양하여 측정하였다.</p>
대장암을 유발하는 효소에는 \( \beta \)-glucosidase, tryptophanse 및 urease가 있다 나머지 하나는 무엇인가?
\( \beta \)-glucoronidase