<h1>실험 재료 및 방법</h1><h2>시약 및 원료</h2><p>본 연구에서 사용한 실크 단백질은 (주)웰드웨이(Yeongi-gun, Korea)에서 공급 받아 4\({ }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 보관하여 실험에 사용하였다. 냉동 오디를 4\({ }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 녹여 착즙기로 짜서 용출액을 사용하였다. 발효유의 생리활성 측정에 사용된 시약은 대부분 SigmaAldrich (St. Louis, MO, USA) 및 Merck (Darmstadt, Germany)에서 구입하여 사용하였으며, 그 외의 시약은 특급이상의 시약을 사용하였다. 실험에 사용된 유산균은 전통발효식품인 발효식초로부터 자체 분리 동정한 Bacillus acidiproducens VG1 (BA)와 (재)발효미생물산업진흥원(MIFI, Sunchang-gun, Korea)으로부터 분양 받은 Lactobacillus plantarum YD09 (LP)을 이용 하였으며, 대조군으로는 상업용으로 판매되고 있는 복합균주 ABT-4 (Lactobacillus acidophilus, Streptococcus thermophilus, and Bifidobacterium; Probio-Tec\( { }^{\circledR} \) blended culture, Hansen, Denmark)를 사용하였다. 실험에 사용한 유산균은 MRS 액체배지(Difco, Detroit, MI, USA)에서 3회 계대 배양하여 활성화시킨 후 실험에 사용하였다.</p><h2>균주 분리 및 커드형성 균주 선별</h2><p>각각의 유산균(YF, LP, BA)을 0.004\( \% \) bromocresol purple 첨가한 MRS평판배지에 도말하여 배양하고 (30\( ^{\circ} \mathrm{C}\), 24시간) 노란색의 환을 형성하는 균주를 선별하여 MRS 액체 배지에 배양 (30\( ^{\circ} \mathrm{C}\), 24시간)하였다. 실험에 사용하기 전, 각각 유산균과 20\( \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) glycerol을 1:1의 비율로 혼합하여 -80\( { }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 보관하였고, 실험에 사용하기 전, 유산균을 액체배지에 2회 계대 배양하여 활성을 높인 뒤 발효유 제조에 사용하였다.</p><p>커드(curd)형성 유산균을 선발하기 위해 10\( \% \) skim milk broth (Difco)에 배양한 유산균 균주를 각각 \( 2 \times 10^{8} \mathrm{CFU} / \mathrm{mL} \)를 0.02\( \% \) 접종하여 37\( { }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 4일간 배양하여 커드 형성능력이 좋은 균주를 1차로 선발하였고, 1차 선발한 균주를 대상으로 10\(\% \) skim milk broth에 1차에 선발된 유산균을 각각 \( 2 \times 10^{8} \mathrm{CFU} / \) \( \mathrm{mL} \) 를 0.02\( \% \) 로 접종하여 37\( { }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 4일간 배양하여 향이 좋고 산과 커드 형성 능력이 좋은 균주를 최종적으로 선발하였다.</p><h2>발효유 제조</h2><p>제조한 발효유의 배합비는 Table 1과 같다. 대조군의 3차 증류 수에 탈지분유(Seoul-milk, Seoul, Korea) 10\( \% \), 설탕(CJ, Seoul, Korea) 2.0\( \% \)를 넣어 발효유 base를 제조하고 오디-실크 단백질 첨가군은 오디와 실크 단백질을 2: 1로 혼합한 시료를 2.0\( \% \) 넣어 발효유 base를 제조하였다. 이때 오디-실크 단백질 첨가군은 설탕과 탈지분우유의 양에서 오디의 설탕 함량, 실크 단백질의 단백질 함량을 감안하여 모든 군에서 전체 양을 동일하게 만들었다. 군별로 제조한 base는 고압멸균기(AC-12 autoclave, Jeio tech, Deajeon, Korea)에서 121\(^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 15\( \mathrm{~min} \) 동안 멸균하였다. 클린벤치(CLB-201-04 vertical laminar flow cabinet, CHC lab, Deajeon, Korea)에서 37-40\( ^{\circ} \mathrm{C} \)까지 식힌 후, 선별된 균주를 접종하였고, base에 \( 2.0 \times 10^{4} \mathrm{CFU} / \mathrm{mL} \)의 유산균이 되도록 접종하였다. 이 혼합물을 24시간 동안 37\( ^{\circ} \mathrm{C} \) incubator (IB-600M incubator, Jeio tech, Deajeon, Korea)에서 발효시켜 제조하였다. 제조가 완료된 발효유는 4에서 냉장보관 하였다.</p>
Bacillus acidiproducens VG1 (BA)는 어디로부터 분리되어 얻어졌는가?
발효식초