<h2>pUC19과 pUC-MYC I DNA에 CPT를 투여했을 때 Topo I 활성도</h2><p>앞의 Topo I 활성도 측정용 반응혼합액에 CPT를 \(1,10 , 100,1000 \mu \mathrm{M} \) 의 농도로 각각 넣고 이완 활성 측정 방법에 따라 분석하였는데 agarose gel상에 우선 EtBr를 첨가한 경우와 전기영동 후 EtBr 염색을 한 경우를 비교 확인하였으며 선형(linear) DNA에 대한 Topo I의 절단효과틀 확인하기 위하여 pUC-MYC DNA를 HindIII로 절단한 선형 DNA를 기질로 하여 앞의 호소 반응 혼합액에 CPT를 농도별 가한 후 이완 활성측정 방법에 따라 반응시키고 \( 5 \mu \mathrm{l}\) 의 \( 5 \%\) SDS를 넣어 반응을 정지하고 proteinase K (\(0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)) 를 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 추가로 60 분간 더 반응시켰다. 반응 후 phenol/chloroform을 동량 가하여 섞은 후 \( 12,000 \times \mathrm{g} \) 에서 원심 분리하여 흰 중간층의 단백질이 포함되지 않게 상층액을 회수하여 여기에 \( 1 / 10 \) 부피의 3M sodium acetate (\(\mathrm{pH} 5.2\))를 넣고 보조 침전제)(pellet paint; Novagen사) \( 2 \mu \mathrm{l} \) 와 2.5x의 ethanol을 가하여 잘 섞고 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30 분간 방치한 후 원심분리 (\( 12,000 \times \mathrm{g} \)) 하여 상충액을 버리고 침전물을 건조시켜 중류수 \( 18 \mu \mathrm{l} \) 씩 각각 가하여 녹이고 \( 1 \mu \mathrm{l} \) 는 PCR 분석에 사용하고 나머지는 10x Nuclease\( S 1 \) 완충액 \( 2 \mu \) 와 Nuclease S1 \( 1 \mu \mathrm{I} \) (2units)씩 가하여 \(37 { }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 반응시킨 후 시료에 \( 3 \mu \) 의 전개 완충핵 (\( 0.3 \% \) bromophenol blue, \( 16 \% \) Ficoll, \( 0.01 \mathrm{M}\) \(\mathrm{Na} 2 \mathrm{HPO}_{4}\) 을 가하여 이를 \( 1.2 \% \) agarose gel상에서 전기영동하고 절단형태를 비교하였다. 그리고 nuclease S1을 처리하지 않은 시료 \( 1 \mu \) l에 c-myc exon 1 sense primer를 가하여 앞의 PCR 조건에 따라 증폭한 후 위의 nuclease 51 반응핵과 함께 \( 1.2 \% \) agarose gel상에 전기영동 (\( 2 \mathrm{~V} / \mathrm{cm} \)) 하여 절단 형태를 비교 분석하였다.</p>
호소 반응 혼합액에 CPT를 농도별로 추가한 후에 이완 활성측정 방법에 따라 반응시키고 반응을 정지시키기 위해 무엇을 넣었지?
\( 5 \mu \mathrm{l}\) 의 \( 5 \%\) SDS