<h2>항균력 조사</h2><p>식중독 원인균인 Bacillus cereus ATCC 14579 , Listeria monocytogenes ATCC 15313, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 10798, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 25931에 대한 분리균주의 항균력 조사하였다. 분리균주를 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24 시간 배양한 후 균체를 제거한 뒤 \( \mathrm{pH} \)를 중성화시킨 배양상등액과 \( \mathrm{pH} \)를 조정하지 않은 상등액 각각을 \( 0.22 \mu \mathrm{m} \) membrane 필터로 여과하여 항균력 측정을 위한 시료로 사용하였다. 각각의 시료를 \( 8 \mathrm{~mm} \)의 paper disk에 \( 75 \mu 1 \)씩 흡수시켰으며, 식중독 원인균이 도말된 고체배지에 이들 paper disk를 올려놓고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 8-12 시간 배양한 후 생육억제환을 측정하였다.</p><h2>항생제 감수성</h2><p>항생제 감수성은 disk diffusion method법으로 측정하였다. 분리된 유산균을 MacFarland scale 0.5로 보정하였으며, MRS 평판배지에 \( 100 \mu \mathrm{l} \) 분주하여 도말하였다. 유산균이 도말된 배지에 농도별로 접종된 항생제 paper disk를 올려 놓고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24 시간 배양하여 항생제의 최소억제범위를 조사하였다.</p><h2>세포표면 소수성</h2><p>실험 균주의 세포표면 소수성 검사는 Doyle 등의 방법으로 실시하였다. 실험 균주를 MRS broth에 접종한 뒤 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 18 시간 배양하였다. 배양액을 원심분리하여 균체를 회수 하였으며 quarter-strength Ringer's 용액으로 두 번 washing한 다음 같은 용액으로 현탁하였다. 현탁액과 \( n \)-hexadecane, chloroform를 각각 1:1의 비율로 첨가한 뒤 2 분 동안 vortex 후 30 분 동안 상온에 방치하여 층이 분리되도록 하였다. 시험 균주의 현탁액과(reading 1) 분리된 층의 수용성 층에 (reading 2) 대한 흡광도를 \( 580 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였으며 소수성의 계산은 다음과 같이 측정하였다. 모든 실험은 3회 반복하여 수행하였다.</p><p>\( \% \) hydrophobicity \( =[(\mathrm{OD} 580 \mathrm{~nm} \) reading 1- OD \( 580 \mathrm{~nm} \) reading 2)/ OD \( 580 \mathrm{~nm} \) reading 1] \( \times 100 \).</p><h2>Bile salt hydrolase (BSH) 활성과 cholesterol 흡수 활성 조사</h2><p>실험균주의 BSH 활성을 조사하기 위해 BSH medium (MRS agar, 0.5\( \% \) sodium salt of taurodeoxycholic acid (TDCA), \( 0.37 \mathrm{~g} \mathrm{CaCl}_{2} / \mathrm{l} \))에 실험균주의 배양액을 \( 10 \mu \mathrm{l} \) 점적하였으며, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 72 시간 배양한 뒤 흰색환의 생성여부로 판단하였다. 콜레스테롤 흡수(cholesterol assimilation) 활성 조사는 실험균주를 \( 0.5 \% (\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) TDCA와 \( 0.1 \mathrm{~g} / \mathrm{l}\) 수용성 cholesterol을 첨가한 MRS broth에 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24 시간 배양하였다. 배양액을 \( 10,000 \mathrm{rpm} \)으로 5 분간 원심분리하여 균체를 제거한 뒤 배양 상등액을 획득하였으며, 콜레스테롤은 Rudel과 Morris 법에 준하여 정량적으로 측정하였다. 균주를 접종하지 않은 MRS broth를 대조구로 사용하였다.</p>
항생제 감수성을 측정하는데 사용한 방법은 무엇인가?
disk diffusion method법