<h2>Silica gel column chromatogaphy</h2><p>코스모스꽃 분획물들 중에서도 EtOAc층 추출물이 우수한 항균 효과가 나타남에 따라 균의 성장을 저지하는 물질에 대해 알아보기 위해 silica gel column chromatograpy를 실시하였다. Column관에 silica gel \(60\)을 시료량 대비 \(100\)배로 충전한 후 전개용매를 \( 2 \sim 3 \)번에 나누어 부어주면서 적셔주었다. 전개용매는 chloroform : methanol : hexane \( =7: 4: 1 \) 비율로 제조하였다. 전개용매로 세척되어진 silica gel 위에 전개용매에 용해된 코스모스꽃 EtOAc충 시료를 loading하였다. 전개용매를 column 관 내로 나누어 가한 후 \( 5 \mathrm{mL} \)씩 이어 받고 이를 TLC를 이용하여 동일한 분획물들끼리 모아 감압 농축하였다.</p><h2>항균 활성 실험</h2><p>박테리아 배양하는 액체 배지(LB 배지)는 시험관에 \( 5 \mathrm{mL} \)씩 담은 후 auto clave에서 멸균 처리를 하였다. 실험에 처리된 균주들은 액체 배지에서 배양 후 고체 배지에 처리한 후 얻은 single strain을 \( 18 \mathrm{h} \) 동안 액체 배지에서 배양하여 얻었다. 실험에 사용된 균주들은 멸균 처리가 된 액체 배지에 \( 5 \mu \mathrm{L} \) 씩 접종되었고 코스모스꽃 시료들은 \( 0.1,0.2,0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 농도로 처리되었다. LB 배지가 담긴 시험관 마다 처리된 시료와 균주를 고루 섞은 다음 배지를 \( 100 \mu \mathrm{L} \) 씩 \(96\) well plate에 담아 microplate reader기의 \( 600 \mathrm{nm} \)에서 흡광도값을 측정하였다. 이를 \( 0 \mathrm{h} \) 의 측정값으로 하고 \( 6 \mathrm{h} \) 이후부터 \( 3 \mathrm{h} \) 마다 \( 24 \mathrm{h} \) 동안 흡광도값을 측정하였다. 시험관들을 shaking incubator에 보관하면서 측정시간마다 LB 배지를 얻어 흡광도값을 측정하여 시간 흐름에 따라 균의 성장과 이에 대응하는 시료의 활성을 살펴 보았다. 항균 활성은 대조군의 접종 초기의 \( 0 \mathrm{h} \) 흡광도값에 대한 각 시간대별 시료군들의 흡광도값을 시료의 색채값을 제한 효과값으로 나타내었다. 또한, 항균 활성을 시간 흐름의 연속적인 형태로 관찰하고 표현하였다.</p><p>Relative activity \( (\%)=\left(\mathrm{A}_{\mathrm{t}}-\left[\mathrm{A}_{0}-\mathrm{B}_{0}\right] / \mathrm{B}_{0}\right)\times100 \)</p><li>\( \mathrm{A}_{\mathrm{t}} \) : 시료 처리군(균 접종 후 시간별 상태)의 흡광도</li><li>\( \mathrm{B}_{0} \) : 시료 무처리된 DMSO 용매 대조군의 흡광도 \( (0 \mathrm{h}) \)</li><li>\( \mathrm{A}_{0} \) : 시료 처리군(균이 없는 상태)만의 흡광도 \( (0 \mathrm{h}) \)</li></ul><h2>NMR</h2><p>코스모스꽃의 항균 활성 물질을 살펴보기 위해 silica gel column chromatography 분획물(silica gel 분획물)에 대해 Nuclear Magnetic Resonance (NMR)을 진행하였다. \( { }^{1} \mathrm{H} \)의 NMR 분광분석은 한국기초과학지원연구원에 의뢰하여 Unity Inova \( 500\)\((499.5,125.6 \) \( \mathrm{MHz} )\)을 통해서 분석하였다. \( \mathrm{NMR} \) 스펙트럼은 \( 298 \mathrm{K} \) 의 온도에서 진행하여 결과를 얻었다.</p><h2>HPLC</h2><p>코스모스꽃 silica gel 분획물들에 함유된 화합물의 분석을 위해 High-Pressure Liquid Chromatography (HPLC)를 시행하였다. HPLC분석은 iLC\(3300\)을 통해 진행되었는데 YMC-Pack Polyamine II \( \left(4.6^{*} 250 \mathrm{mm}, \mathrm{S}-5 \mu \mathrm{m}, 12 \mathrm{nm}\right) \)의 column을 사용하였다. 분석은 Methanol : Distilled water \( =3: 1 \) 혼합액을 \( 37{ }^{\circ} \mathrm{C}, 20 \mathrm{min} \) 동안 흘러 보내면서 wave length는 \( 250 \mathrm{nm} \) 에서 추적하였다.</p><h2>통계 분석</h2><p>본 연구의 실험들은 \(3\)회 이상 반복, 시행하였다. 그래프의 값들은 각 실험들의 횟수에 따르는 평균(mean)과 표준편차(standard deviation)로 나타내었다.</p>
silica gel column chromatograpy를 실시한 목적은 무엇인가요?
EtOAc층 추출물이 우수한 항균 효과가 나타남에 따라 균의 성장을 저지하는 물질에 대해 알아보기 위해