<h2>활성물질 동정 및 LC-MS/MS를 이용한 정량분석</h2><p>항산화 활성이 가장 높았던 단일물질인 TME-10-8 (9)에 대하여 Nuclear magnetic resornance (NMR), infrarad spectroscopy (IR), \( \mathrm{FAB} / \mathrm{MS} \) 를 측정하여 구조동정을 실시하였다. 화합물 1 은 flavone 화합물로 TLC 확인시 UV (254/365 nm)에서 UV 흡수를 보였으며, \(10 \%\) \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 발색 시 노란색으로 발색 되었다. positive FAB/MS에서 \( m / z \) 361 \([\mathrm{M}+\mathrm{H}]^{+} \) 분자이온 peak가 관측 되어 분자량을 360로 확인하였다. IR spectrum으로부터 공역화된 카보닐기 \( \left(1613 \mathrm{~cm}^{-1}\right) \), 수산기 \( \left(3356 \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 와 이중결합 \( (1580 \) \( \left.\mathrm{cm}^{-1}\right) \)이 있는 것으로 확인되었다. \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR}(600 ~\mathrm{MHz} \), pyridine-\( d_{5}, ~\delta_{\mathrm{H}} \) ) spectrum에서 2개의 olefin methine proton signal \( 7.65 \) \( \left(1 \mathrm{H}, ~\mathrm{d}, ~J=2.4 \mathrm{~Hz}, ~\mathrm{H}-2^{2}\right), 7.23\left(1 \mathrm{H}, ~\mathrm{d}, ~J=2.4 \mathrm{~Hz}, ~\mathrm{H}-6^{\prime}\right. \) 를 통해 1,2,4-trisubstituted benzene 구조가 존재함을 예상하였다. 또한 2개의 olefin methine proton signal \( 7.05 \) (1H, s, H-3), \( 6.88 \) (1H, s. H-8)을 통해 1,2,3,4,5-pentasubstituted benzene 구조가 존재함을 예상하였다. 이를 통해 이 화합물이 flavone 화합물임을 예상하였다. 또한 3개의 methoxy proton signal \( 3.98\left(3 \mathrm{H}, ~\mathrm{s}, ~6-\mathrm{OCH}_{3}\right), 3.95\left(3 \mathrm{H}, ~\mathrm{s}, ~4{ }^{\prime}-\mathrm{OCH}_{3}\right), 3.87(3 \mathrm{H}, ~\mathrm{s} \), \( \left.3^{\prime}-\mathrm{OCH}_{3}\right) \) 을 관즉하였다. \( { }^{13} \mathrm{C}-\mathrm{NMR}\left(150 \mathrm{MHz}\right. \), pyridine- \( \left.d_{5}, ~\delta_{\mathrm{C}}\right) \) spectrum에서 3개의 methoxy carbon signal \( \left[\delta_{\mathrm{C}} 61.72\right. \) (6-\( \left.\left.\mathrm{OCH}_{3}\right), ~61.49\left(4 '-\mathrm{OCH}_{3}\right), ~57.47\left(3^{\prime}-\mathrm{OCH}_{3}\right)\right] \) 을 제외하고 탄소수가 15개임을 확인하였고, 이를 통해 flavone임을 확인하였다. 1개의 conjugated ketone carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}} ~184.38\right) \), 8개의 oxygenated olefin quaternary carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}}\right. \) 165.47;\( 160.14 ; 155.58 ; 155.29 ; 155.00 ; 153.84 ; 142.25 ; 133.89) \) 을 확인하였고, 2개의 olefin quaternary carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}} 128.62; ~106.71\right)\) 을 확인하였으며, 4개의 olefin methine carbon signal \( \left(\delta_{\mathrm{C}} ~110.60 ; ~106.37 ; ~103.72 ; ~95.50\right) \) 을 확인하였다. 위의 data를 문헌값과 비교하여 화합물 1을 5,7,3'-trihydroxy-6,4',5'-trimethoxyflavone 으로 구조 동정 하였다(Fig. 5).</p><p>화합물 1의 정량분석을 위해 \( \mathrm{LC}-\mathrm{MS} / \mathrm{MS} \) 를 사용하여 크로마토그램을 분석하였다. 최적의 용매 기울기 조건을 확립하고 분석된 결과의 머무름 시간(RT)을 비교하였을 때, 화합물 1은 7.85분에서 검출되었다(Fig. 6). 검량 곡선 \( (\mathrm{y}=72,770.1869 \mathrm{x}+ \) \( 12,519.4791) \) 은 표준물질의 5 농도 범위 안에서 측정된 값을 회기 분석을 통해 작성하였다. 상관계수 \( \left(r^{2}\right) \)는 0.9992로 매우 높은 값을 보여주었다. 화합물 1 의 함량분석 결과, 추출물에서 \( 0.96 \pm 0.03 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mg} \) 그리고 \( \mathrm{TME} \) 분획에서 \( 4.02 \pm 0.12 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mg} \) 으로 확인되었다. 추출물과 분획물에서의 높은 함량은 토마토의 항산화능에 화합물 1의 높은 기여도를 보여준다.</p><p>Flavone은 다양한 문헌에서 항산화 활성, 항염 활성, 당뇨 활성 등이 보고되어 있다. 따라서 토마토 추출물과 분획물에서의 높은 GSH 회복능 또한 주요화합물 중 하나인 5,7,3'-trihydroxy-6,4',5'-trimethoxyflavone 에 의한 영향이 있음을 알 수 있다. 또한, 이와 같은 결과로 토마토가 항산화능을 가지는 건강식품소재로서 사용할 수 있는 가능성을 확인하였다.</p>
flavone 화합물은 발색 시 무슨 색으로 발색되었나요?
노란색