<h2>Heatmap 및 Microarray와 real-time PCR에 의한 유전자 발현 비교분석</h2><p>Microarray 분석에서 확보한 자료 중 스트레스 및 지방대사 연관 유전자들을 선발하여 유전자 heatmap을 작성하였다(Fig. 1). Heatmap은 처리별 유전자간 발현의 차이를 색으로 나타내어 쉽게 처리에 다른 반응을 확인 할 수 있었다. 또한 2-fold 미만의 유전자발현 차이로 간과해서 지나칠 수 있는 유전자들(예, SCD, FASN, FABP4)의 발현도 확인 할 수 있었다. 스트레스 마커 유전자들인 HMGCR과 HSP90 (Fig. 1A) 등과 ER stress의 마커유전자인 XBP1, ATF4, HSPA5 (Fig. 1A, 1B) 등이 대조구에 비하여 붉은 색에 더 가깝게 표지되어 유전자의 발현이 증가함을 보여 주었다. 지방대사 연관 유전자들인 SREBP1과 ACOX1 등은 고밀도 사양체계에서 발현의 증가를 보였으며, FABP4과 FASN 등은 처리에 큰 변화가 없음을 보여 주었다(Fig. 1C). 유전자 발현을 microarray로 분석한 다음 일부 유전자들을 선택하여 real-time PCR을 실시하여 microarray 결과와 비교분석 하였다(Table 5). 대체적으로 microarray의 결과와 real-time PCR의 결과는 발현정도의 차이는 있었지만 비슷한 경향을 보였다. 다만 SREBP1의 경우 microarray 결과와 real-time PCR의 결과가 상반된 결과를 보였다. HSP70은 microarry에서 발현이 확인되지 않았지만 real-time PCR에서는 처리구간에 차이가 없는 것으로 나타났다. 마이크로어레이와 real-time PCR에서 제시된 바와 같이 HMGCR과 HSP90은 밀사 스트레스에 민감하게 반응하는 것으로 나타났으며, 본 연구자들에 의해 닭의 스트레스 마커인자로 보고된 바 있다. 본 연구에서 확인한 바와 같이 XBP1과 HSPA5 또한 닭의 ER스트레스의 주요 마커인자로서 활용할 수 있을 것으로 사료된다.</p><p>결론적으로 본 연구는 닭의 주요 대사기관인 간에서 밀사에 의한 스트레스가 지방합성과 지방산 분해에 영향을 미치고 있음을 보여 주었다. 밀사에 의한 사육방식은 외적으로 증체량 및 사료효율 등의 사양성적에도 영향을 미치지만, 동물의 분자 수준(DNA), 세포 수준(ER stress), 면역체계(스트레스)에도 불리한 환경을 제공할 수 있음을 보여 주었다. 따라서 닭의 사양관리에서 사육밀도를 적절한 수준이하로 줄여 스트레스를 최소화 시키는 것이 좋을 것으로 사료된다.</p>
스트레스 및 지방대사 연관 유전자를 확보할 수 있는 분석이 뭐가 있어?
Microarray 분석