<h2>혈청 면역물질</h2><p>실험종료일 에 각 처리구 당 12수씩(반복펜 당 3수씩)을 임의로 선정하여 목정맥으로부터 plain tube (Greine Co Ltd, Australia)를 이용해서 \( 1 \mathrm{~ml} \) 혈액을 채취하였다. 원심분리기 (RC-3, SORVALL Co., USA)를 이용하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \), 15분간 \( 3,000 \mathrm{~rpm} \)에서 원심분리하여 혈청을 얻었다. 액화질소가스를 이용해서 혈청을 급속동결 한 이후에 분석 시까지 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \) 냉동보관하였다. ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, Bethyl laboratories., Inc., USA)에 의해서 면역물질을 측정하였다. 항체의 량은 IgG (chicken IgG ELISA quantitation set, E30-104), IgA (chicken IgA ELISA quantitation set, E30-103) 및 IgM (chicken IgM ELISA quantitation set, E30-102) 을 이용하여 각각 반응시킨 다음 microplate reader (Molecular Devices, Inc., New York, USA)에 의해서 \( 450 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정해서 계산하였다.</p><h2>맹장 미생물</h2><p>실험종료일에 안락사 이후 처리구 당 브로일러 16수씩(반복 펜 당 4수씩)을 선정하여 무균적인 방법으로 맹장을 채취하였다. 맹장은 AnaeroGen sachets (Oxoid, Hampshire, UK)가 갖춰진 Sealed anaerobic jars (Oxoid, Basingstoke, UK)에서 분석할 때까지 혐기적인 상태로 유지하였다. 균질화한 맹장 내용물 \( 1.0 \mathrm{~g} \)과 멸균된 인산완충식염수(Phosphorus buffered saline; PBS \( 0.1 \mathrm{M} \), \( \mathrm{pH~} 7.0 \)) \( 9 \mathrm{~ml} \)를 혼합해서 10배로 1차 희석한 다음에 멸균된 혐기성 생리식염수로써 일련의 희석을 계속하였다. 상기의 절차는 Anaerobic chamber ( \(5 \% \) hydrogen, \(5 \% \) \( \mathrm{CO}_{2} \), balanced nitrogen)에서 혐기적인 상태하에서 진행하였다. 희석된 시료 (\( 10^{2} \sim 10^{7} \)) 를 멸균된 평판배지에 각각 \( 100 \mu \mathrm{l} \) 씩 분주하여 미생물 배양을 실시하였다. 사용한 배지는 Lactobacillus SPP. (MRS agar, Oxoid, Basingstoke, UK); Bifidobacterium SPP. (bifidobacterium selective agar, BIM-25 medium); Salmonella (SS agar Difco, CM0099); Escherichia coli (McConkey Purple agar)이었다. Salmonella 와 Escherichia colli는 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 호기배양 하였고, Lactobacillus SPP.와 Bifidobacterium SPP.는 AnaeroGen sachets가 갖춰진 Sealed anaerobic jars를 이용한 혐기적인 상태하에서 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 로 각각 48, 72시간 정치배양 한 후 미생물카운터로써 colony의 수를 조사하였다. 계수는 맹장내용물 \( \mathrm{g} \)당 균수(CFU, colony-forming \(\mathrm{unit}/\mathrm{g}\) of fresh cecal content)로써 상용로그를 취하여 제시하였다.</p><h2>통계분석</h2><p>얻어진 모든 자료는 SAS software의 GLM procedure를 사용하여 분산분석을 실행한 후 Duncan"s multiple range test에 의해서 \( 95 \% \) 신뢰수준에서 통계적인 유의차 (\( p<0.05 \))를 검정하였다.</p>
사용한 배지는 총 5개였는가?
NO