<h2>Invertase 활성 검정</h2><p>16 주간 배양한 유묘를 오전 10 시경 식물체를 기외로 꺼내 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 냉장고에서 보관한 식물체의 지상부와 지하부를 각각 생체중 \( 5 \mathrm{~g} \) 씩 미량저울로 달아 절단한 후 얼음상자 내의 유발에서 마쇄하였다. 마쇄 직후 냉장고에 미리 저장해둔 증류수를 생체중의 10 배정도 첨가하여 \( 10 \mathrm{rpm} \) 으로 교반하면서 시료를 30 분간 안정화시켰다. 안정화 후 마쇄용액을 \( 5000 \mathrm{rpm} \), \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 분간 원심분리하여 상등액을 \( 1 \mathrm{ml} \) 씩 4 개의 시험관에 뽑아내고, Macllvaine Buffer (0.2 M sodium phosphate+ \( 0.1 \mathrm{M} \) citric acid)를 soluble acid invertase 활성측정용인 \( \mathrm{pH} \) 4.6인 Macllvaine Buffer와 soluble alkaline invertase 활성측정용인 \( \mathrm{pH} 7.8 \) Macllvaine Buffer를 각각 두 개의 시험관에 첨가하였다. 이 과정 후 각각 두 개의 시험관 중 하나의 시험관은 식물체내에 원래 함유하고 있는 당량을 측정하기 위해 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 분간 중탕 처리하여 효소의 활성을 실활시켰다.각각의 Buffer 용액과 흔합된 용액을 \( 0.3 \mathrm{ml} \) 씩 뽑아내고, 여기에 \( 0.2 \mathrm{M} \) 의 sucrose 용액을 첨가, 혼합하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 반응시킨 후 바로 Somogyi-Nelson 환원당 정량법으로 soluble acid invertase와 soluble alkaline invertase 활성을 측정하기 위한 환원당 측정을 실시하였다. 여기서 측정된 환원당 값에서 원래 식물체내에 함유된 당량을 때준 값을 환원당 측정값으로 사용하였고, 환원당 측정값은 미리 측정해 둔 glucose 표준 곡선에 의해 환산하였다.</p><p>Soluble acid invertase와 soluble alkaline invertase 활성 분석을 위한 단백질 분석은 Macllvaine Buffer \( (0.2 \mathrm{M} \) sodium phosphate+ \( 0.1 \mathrm{M} \) citric acid), \( \mathrm{pH} 4.6 \) 용액과 Macllvaine Buffer ( \( 0.2 \mathrm{M} \) sodium phosphate+ \( 0.1 \mathrm{M} \) citric acid), \( \mathrm{pH} 7.8 \) 용액이 각각 혼합된 용액을 \( 0.3 \mathrm{ml} \) 뽑아내고, 여기에 \( 0.2 \mathrm{M} \) 의 sucrose 용액 \( 0.7 \mathrm{ml} \) 을 첨가하여 혼합한 후 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 반응시킨 다음 상등액 \( 1 \mathrm{ml} \) 을 뽑아내어 상등액 내에 함유하고 있는 단백질의 양을 Lowry 등의 방법을 이용하여 분석하였는데 단백질 표준용액(bovine serum albumin stan-dard)으로 작성한 단백질 표준곡선을 이용하여 환산하였다. 한 단위의 invertase 활성은 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 매분 glucose로 환원하는 당 \( 1 \mu \mathrm{mol} \) 의 생산을 촉매하는 효소의 양으로 정의되는데, 한 단위의 invertase 활성을 각각의 분석에서 계산하여 얻은 값에 각각의 단백질 총량으로 나눈 값을 invertase 활성값으로 하여 각각의 invertase 활성도를 나타내었다.</p>
Invertase 활성 검정화를 위하여 사용되는 식물 검체는 얼마동안 배양되어진 유모를 사용할까?
16 주