<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 재료, 시약 및 분석 기기</h2><p>실험에 사용된 새싹인삼은 경상남도 사천시 서포면 소재 (주)드림팜의 식물공장에서 재배된 것을 공급받아 사용하였다. 즉, 온도 \( 19 \pm 2{ }^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 55 \pm 5 \% \) 및 식물성장 LED 광원(적색, 청색과 백색 혼합 광원) \( 400 \pm 200 lx \)로 자동 제어된 식물공장(Fig. 1A)에서 30 일간 재배된 새싹인삼을 공급받았으며 크기에 따라 small (S), small-middle (SM), middle (M), middle-large (ML) 및 large (L)로 분류하였다(Fig. 1B). 21종의 ginsenoside 표준품(Rb1, Re, Ro, Rg2, Rg3, Rb2, Rd, F2 및 compound (K 등)은 KOC 바이오텍(Daejeon, Korea)에서 구입하였다. 총 phenolics 측정에 사용된 Folin-Cicalteu phenol과 총 flavonoids 함량 측정에 사용된 diethyleneglycol 등은 Sigma-Aldrich사(St.Louis, MO, USA) 에서 구입하여 사용하였고 항산화 활성에 사용된 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 2,4,6-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphnoic acid) diammonium salt (ABTS), thiobarbituric acid (TBA) 및 trichloroacetic acid (TCA) 등 역시 Sigma-Aldrich사에서 구입하여 사용하였다. HPLC-grad water, acetonitrile 및 methanol은 Fisher Scientific사(Fairlawn, NJ, USA)에서 구입하였고 이외 분석에 사용된 시약은 1급으로 구입하여 실험에 사용하였다.</p><p>총 phenolics, 총 flavonoids 및 라디칼 소거활성 측정은 분광 광도계(UV-1800 240V, Shimadzu Corp., Kyoto, Japan)를 사용하여 측정하였다. Ginsenoside 함량은 high performance liquid chromatography (HPLC Agilent 1260 system, Agilent Technologies Inc., Waldbronn, Germany)를 사용하였고 검출기로 diode array detector를 사용하였다.</p><h2>길이 및 무게 측정</h2><p>각 크기별 새싹인삼 30 수에 대해서 지상부(잎과 줄기)와 지하부(뿌리)로 나눈 후 길이와 무게를 측정하여 평균값으로 표기하였다.</p><h2>추출물 제조</h2><p>각 크기별 새싹인삼의 지상부와 지하부는 \( 55 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 2일간 건조하고 분쇄한 후 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \) 에 보관하면서 사용하였다. 건조하여 분쇄한 시료 10 \( \mathrm{g} \) 에 50\(\ % \) 발효주정(I1-San Trading Co., Ltd. Haman, Korea) \( 10 \mathrm{~mL} \) 를 분주하여 상온에서 12시간 추출하여 원심분리한 후 상등액을 0.45 \( \mu \mathrm{m} \) membrane filter (Dismic-25CS, Toyotoshikaisha, Ltd, Tokyo, Japan)로 여과하여 추출물을 제조하였다. 추출물은 총 phenolic과 총 flavonoid 함량 및 항산화 활성 측정에 사용하였고 음성대조구로는 50 \( \% \) 발효 주정 추출 시료 대신에 50 \( \% \) 발효 주정을 사용하였다.</p><h2>총 phenolics 및 flavonoids 함량</h2><p>총 phenolics 함량은 Folin과 Denis의 방법을 조금 변형하여 실시하였다. 희석한 시료 50배 희석 추출물과 25 \( \% \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \)용액을 각각 0.5 \( \mathrm{~mL} \) 씩 시험관에 분주하여 3분간 반응한 후 2 N Folin-Ciocalteu phenol 시약 0.25 \( \mathrm{~mL} \) 첨가하여 30\( ^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간 발색 시켰다. 이 후 원심분리하여 상등액을 \( 750 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였고 함량은 gallic acid를 이용하여 작성된 표준 검량곡선에 대입하여 값을 계산하였다. 총 flavonoids 함량은 Lee 등의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 희석된 시료 (20배 희석) 추출물 0.5 \( \mathrm{mL} \) 를 시험관에 분주하고 diethylene glycol 용액 1 \(\mathrm{~mL} \) 과 1 \( \mathrm{N} \mathrm{NaOH}\) 0.01 \(\mathrm{~mL} \)를 혼합하여 항온수조 (37\( ^{\circ} \mathrm{C} \)) 에서 1시간 반응시킨 후 420 \( \mathrm{nm} \) 로 측정하였으며 rutin을 이용하여 작성된 표준 검량곡선으로부터 함량을 계산하였다.</p>
HPLC-grad water는 본사가 미국에 있는 회사에서 구입하였지?
YES