<h2>ZFX-ZFY 증폭 양상과 유전자 성판별</h2><p>염기서열 결정에서 확인된 ZFX 인트론 7에서 LsSINE의 삽입/결실 형태를 이용하여, 수집된 전 개체에 대한 유전자 성판별을 시도하였다. 먼저 암수에 대한 표현형 정보를 알고 있는 시료에 대한 성판별 시험결과, 암수에서 ZFX와 ZFY 인트론 7을 포함한 절편에 대한 증폭양상이 서로 상이하게 관찰되었다. 전기영동 겔 상에서 암컷은 단일 PCR 밴드 \( (695-\mathrm{bp} \) )를, 수컷에서는 두 개의 PCR 밴드 \( (390-\mathrm{bp}, \ 695-\mathrm{bp} \) )를 보였다. 수컷에서 관찰되는 \( 695-\mathrm{bp} \) 밴드는 암컷의 것과 동일한 위치에서 확인되어, 결과적으로 이 밴드는 암수 공통인 X 염색체 ZF 유전자 즉, ZFX를 주형으로 증폭된 산물이며, 그에 반해 수컷에서만 특이적으로 발견되는 또 하나의 밴드는 Y 염색체의 ZFY 유전자를 주형으로 증폭된 것임을 알 수 있었다. 또한 수컷-특이적인 ZFY 밴드는 암수 공통인 ZFX 밴드에 비해 앞에서 언급한 LcSINE의 결실에 따라 더 작은 크기를 갖는 것으로 관찰되었다. 유전자 성판별에 대한 결과의 재확인과 궁극적으로 웅성발생을 유도하는 핵심 유전자인 SRY의 존재를 확인하기 위해 PCR 증폭을 수행하였다. 그 결과 전기영동 겔 상에서 수컷에서는 PCR 산물이 관찰되나, 암컷은 PCR 산물이 관찰되지 않았다. 또한 SRY와 ZFX-ZFY 증폭양상은 서로 일치하였고, 생식기관 관찰에 의한 표현형 자료들과도 정확히 일치하였다. 이상의 결과는 본 연구에서 이용한 시료들은 SRY와 ZFY 유전자가 Y 염색체 위에 완전히 연관되어 있어, SRY 유전자 전위에 위한 XX (+SRY) 웅성 또는 XY (-SRY) 자성은 없는 것으로 판단된다.</p><p>최근 집토끼 SRY 유전자의 단백질 암호화 영역과 5'-, 3'- 비해독부위의 서열의 변이가 품종 간 특이성이 없다는 것으로 보고되었고, 이후 SRY의 3' 비해독부위 상의 \( 7-\mathrm{bp} \) 삽입이 O. algirus 종에서만 빈번하고 집토끼에서는 관찰되지 않는다고 보고되었으나, 현재까지 유전자 성판별 기법은 멧토끼뿐만 아니라 집토끼에 대한 보고마저도 없다. 본 연구에서는 X, Y 성염색체 상동인 ZFX-ZFY 유전자 서열 사이에서 성별 이형성을 발견하였고, 이를 이용하여 멧토끼 사체에 대한 유전자 성판별을 수행하여 멧토끼의 사체에 대한 유전자 성판별에 따른 성별 자료를 얻어낼 수 있었다. PCR에 의한 유전자 성판별은 미량의 DNA라도 확보 가능하다면, PCR 증폭과 전기영동으로 이어지는 간단한 분석을 통해 거의 정확한 성판별 자료를 얻어낼 수 있어 밀렵이나 불법 포획된 멧토끼의 암수 판별에 활용할 수 있을 것이다. 야생동물 사체에 대한 성비조사는 야생집단의 변화추이를 확인할 수 있어 야생동물의 보존과 체계적인 관리를 위해 좋은 자료가 될 수 있다. 향후, 집토끼를 대상으로 암수 성판별 가능성의 확인, 포획이나 사고, 자연사에 의해 죽은 멧토끼를 다른 포유류와 구분할 수 있는 유전자 식별 기법 등을 보완한다면, 사체에 대한 정확한 종 동정과 더불어 암수 판별을 가능하게 할 수 있는 분석 체계가 구축될 수 있을 것으로 사료되며, 가축화된 집토끼의 산업적 이용에서도 기여할 수 있을 것으로 사료된다.</p>
본문의 PCR 증폭 수행은 어떤 유전자를 확인하기 위해서인가?
SRY