<h1>재료 및 방법</h1><h2>시험어 사육</h2><p>자연산 암컷 친어의인위적 성성숙 및 배란 유도는 Kim et al. 방법에 따라 실시하였으며, 양식산 수컷 친어의 배정 유도는 Kim et al. 방법에 따라 실시하였다. 인공 수정 및 부화 자어 생산은 Kim et al. 방법에 따라 수행하였으며, 부화후 7일째 자어들은 20 \(\mathrm{l}\) 아크릴 수조에 약 2,000마리씩 분주하였다. 사료 공급은 부화 후 8일째부터 상어알 기반의 액상 사료를 변형한 slurry 형태의 사료를 1일, 5회 공급하면서 인공 실뱀장어까지 사육하였다.</p><h2>두부의 형태학적 형태 변화</h2><p>자어 및 실뱀장어의 두부 외형 변화를 조사하기 위하여 사육중인 자어를 부화후 10일, 30일 및 60일째 개체 10마리 이상을 채집하여 \( 5 \% \) 중성포르말린에 고정하였고, 부화후 120일, 240일(변태직전)의 자어들과 변태 후 실뱀장어(부화후 270일)는 3-aminobenzoic-acid ethyl ester (MS-222, Sigma)로 마취시켜 실체현미경(Olympus MVS10 Macroview Stereo Microscope) 및 영상장치(Olympus DP73 research disital color camera)를 이용하여 촬영하였다.</p><h2>안구 발달의 조직학적 변화</h2><p>자어 및 실뱀장어의 안구 조직학적 변화를 조사하기 위하여 부화후 10일, 60일, 100일 및 200일째 개체 \(3 \sim 10\)마리를 \(5 \sim 10\%\) 중성포르말린에 고정하였고, 인공 실뱀장어는 개체수가 제한되어 변태후 약 1주 경과한 실뱀장어 1마리를 \( 10 \% \) 중성포르말린에 고정하여 시료로 사용하였다. 상기의 모든 시료는 부위별로 세절하여 재고정 한 후, 수세, 탈수, 파라핀친화과정을 거친후 파라핀조직블럭을 제작하였으며, 두부에 해당하는 부위에 대하여 마이크로톰(Leica RM2165, Germany)을 이용하여 \( 3 \sim 4 \mu \mathrm{m} \) 의 두께로 박절하여 슬라이드글라스에 절편을 부착시켜 건조하고, 탈파라핀 과정을 거쳐 Hematoxylin-Eosin(H\(\&\)E)염색을 실시하였다. 그 후, 광학현미경(Zeiss Axio Imager A1) 및 영상장치(Germany Axio Cam MRC5, Axiovs40v 4.6.3.0, Germany)를 이용하여분석하였다.</p>
인공 수정 및 부화 자어 생산은 어떤 방법에 따라 수행하였어?
Kim et al. 방법