<h1>재료 밎 방법</h1><h2>실험재료 및 시료의 전처리</h2><p>2004년 3월부터 11월까지 부산 밎 경남일대의 횟집, 재래 시장, 대형유통점 등에서 광어(넙치), 우럭 등의 생선회 83건과 해삼, 우렁쉥이(멍게), 굴 등의 기타해산물 130 건(총 213건)을 바로 섭취할 수 있는 상태로 구입하여 시료로 사용하였다. 포장된 경우를 제외한 모돈 시료들은 sterile sampling bag을 사용하여 채춰하였고, \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 를 워지한 ice box에 보관하여 실험실로 운반하였으며, 도착 즉시 실험에 사용하였다.</p><h2>식중독 원인균 분리시험</h2><p>식중독 원인균의 검출방법은 기본적으로 식품공전, 제7. 일반시험법, 8. 미생물시험법에 준하여 실험하였으며, 아울러 최종확인은 VITEK 32 system (bioMérieux, Marcy l'Etoile, France) 및 각종 API kit (bioMérieux)를 사용하였다. 각 균주 별 자세한 실험방법은 다음과 같다.</p><h3>Salmonella spp. 분리</h3><p>검체 \( 25 \mathrm{~g} \)을 취하여 \( 225 \mathrm{ml} \)의 Buffered peptone water (Oxoid, England)에 가하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 18시간동안 1차 증균시킨 후, 이 액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 Selenite broth (Difco, U.S.A.)에 첨가하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 18~24시간동안 2차 증균 배양하였다. 증균 배양액을 SS agar (Oxoid)에 접종하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 18~24시간동안 배양한 후, 검은색의 전형적인 집락을 선택하여 혈액한천 배지(아산제약, Korea)에 이식하였다. 확인시험은 그람염색, 미생물자동동정기(VITEK 32 system) 및 혈청형 응집반응을 통해 최종 확인하였다.</p><h3>S. aureus 분리</h3><p>검체 \( 25 \mathrm{~g} \)을 \( 10 \% \mathrm{~NaCl} \)이 첨가된 Tryptic soy broth (TSB; BD, U.S.A.) \( 225 \mathrm{ml} \)에 가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 18~24시간 증균 배양하였다. 증균 배양액을 난황을 첨가한 Mannitol salt agar(Difco)에 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24~48시간 배양한 후, 혼탁한 백색환에 황색을 띄는 전형적인 집락을 선택하여 혈액한천 배지에 이식하였다. 그람염색 결과 포도상배열을 갖는 그람 양성 구균을 확인한 후, coagulase test 및 미생물자동동정기를 사용하여 최종 확인하였다.</p><h3>V. parahaemolyticus 분리</h3><p>검체 \( 25 \mathrm{~g} \) 을 취하여 \( 2 \% \mathrm{~NaCl} \) 이 첨가된 \( 1 \% \) 펩톤수 \( 225 \mathrm{ml} \)에 가하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 18~24시간 동안 증균 배양하였다. 증균 배양액을 Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose (TCBS) agar (Difco)에 접종하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 18~24시간 동안 배양한 후, 녹색의 전형정인 집락을 선택하여 \( 3 \% \mathrm{~NaCl} \) 이 첨가된 Nutrient agar (Difco)에 이식하였다. 확인시험은 oxidase 반응 및 미생물자동동정기를 사용하여 최종 확인하였다.</p><h3>E. coli O157:H7 분리</h3><p>검체 \( 25 \mathrm{~g} \)을 취하여 novobiocin을 첨가한 mEC broth (Difco) \( 225 \mathrm{ml} \)에 가하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 18~24시간 동안 증균 배양하였다. 증균 배양액을 Sorbitol MacConkey agar (Difco)에 접종하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 18~24시간 배양한 후, 맥젹의 전형적인 집락을 선택하여 혈액한천배지에 이식하였다. 미생물자동동정기를 사용하여 대장균임을 확인한 후, 혈청형 응집반응을 통해 최종 확인하였다.</p><h3>L. monocytogenes 분리</h3><p>검체 \( 25 \mathrm{~g} \)을 취하여 \( 225 \mathrm{ml} \)의 Listeria enrichment broth (Difco)에 가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간동안 증균 배양하였다. 증균 배양액을 Oxford agar (Difco)에 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 동안 배양한 후, 회색의 의심집락이 확인되면 \( 0.6 \% \) yeast extract (Difco)가 포합된 Tryptic soy agar (TSA; BD)에 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 동안 배양하였다. 확인시험은 CAMP test 및 API Listeria (bioMérieux)를 통해 확인하였다.</p><h3>C. jejuni 분리</h3><p>검체 \( 25 \mathrm{~g} \)을 취하여 \( 5 \% \) horse blood와 항생제가 포함된 Bolton broth (Oxoid) \( 225 \mathrm{ml} \) 에 가하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 3 시간동안 미호기적으로 1차 증균 배양한 뒤, \( 42^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24~48시간 미호기적으로 2차 증균 배양하였다. 증균 배양액을 Abeyta-Hunt agar (Oxoid)에 접종하여 \( 42^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 24~48시간 미호기적으로 배양한 후에 원형 또는 불규칙적한 형태로써 반투명한 흰색 또는 투명한 전형적인 집락울 선별하여, 항생제를 넣지 않은 Abeyta-Hunt agar에 배양하였다. Catalase와 oxidase test 및 API Campy (bioMérieux)를 통해 확인하였다.</p><h3>B. cereus 분리</h3><p>B. cereus의 검출은 Kim 등의 방법에 따라 다음과 같이 시험하였다. 시료 \( 25 \mathrm{~g} \)을 취하여 \( 100 \mathrm{IU} / \mathrm{ml} \) 의 Polymyxin B를 첨가한 \( \mathrm{TSB} \) 배지 \( 225 \mathrm{ml} \) 에 가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 증균 배양한 후, Mannitol egg yolk polymyxin (MYP) agar (Oxoid)에 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 배양하였다. MYP Agar에서 분홍색의 혼탁한 환을 갖는 전형적인 집락들을 선별하여 혈액한천배지에 이식하였고, \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양 후 그람을 실시하여 그람양성의 긴 간균으로, oxidase 음성 및 \( \beta \)- 용혈성을 보이며 rhizoid growth를 보이지 않는 균주들을 분리하였다. 분리균은 61개의 생화학적 시험들을 통해서 동정 되었으며, data는 APILAB Plus software V3.3.3.로서 처리되었다. API 50 CHB를 사용하여 49개의 당발효능을 조사하였고, API 20E를 사용하여 12가지의 생화학적 시험(ONPG, ADH, LDC, ODC, CIT, \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{S} \), URE, TDA, IND, VP, GEL and NIT) 을 행하였으며, 실험은 제조사의 방법에 따라 실험하였다. 혈액한천배지에 배양함으로써 rhizoid growth 및 \( \beta \)-he-molysis 유 · 무를 확인하였고, oxidase test는 filter paper상에서 Oxidase reagent (bioMérieux)를 사용하여 조사하였으며, 운동성을 알아보기 위하여 \( 0.1 \% \) beef extract를 첨가한 Motility test medium (Difco)를 사용하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 동안 배양하면서 관찰하였다.</p>
식중독 원인균의 검출방법의 기반이 된 시험법으로 옳은 것은?
미생물시험법