<h1>재료 및 방법</h1><h2>발효기질 및 계면활성제</h2><p>In vitro 소화율 시험을 위한 기질로서 국내산 일반미(동진벼) 볏짚을 \( 1 \mathrm{~mm} \) screen이 부착된 Wiley mill (Thomas scien-tific, No. 4, USA)로 분쇄하여 시료로서 사용하였으며, \( \mathrm{AOAC} \) 법으로 분석한 볏짚의 화학적 조성은 Table 1 과 같다. 비이온성 계면활성제(non-ionic surfactant, NIS)는 시판 Tween 80 (Sigma, Cat No. P8074, USA)와 SOLFA-850 ((주) 일신유화, Korea) 2 종류를 사용하였고, 양쪽 이온성 계면활성제(Zwitterionic surfactant, ZIS)는 3-(Dodecyl dimethy-lammonio) propanesulfanate (Sigma Cat No. D4516, USA) 1 종류를 사용하였다.</p><h2>배양액 제조 및 발효 조건</h2><p>배양액은 Dehority와 Scott 의 방법에 따라 제조되었다. 반추위액은 농후사료와 볏짚(40:60)을 섭취(체중의 \( 2 \% \) 하는 반추위 누관이 장착된 홀스타인 착유우 2두(평균체중 500\( \mathrm{kg}) \) 로 부터 시험 2시간 전에 채취하여 4겹의 cheese cloth로 여과하고 30분 1시간 정도 정치시켜 사료입자를 가라앉힌 후, vacuum 펌프로 상층액을 채취하여 사용하였다. 계면활성제 첨가구는 혐기상태로 주입된 Dehority's artificial me-dium에 NIS 및 ZIS를 수준별 \(0.05\%\), \(0.1\%\)로 첨가한 medium \( 15 \mathrm{ml} \) 을 볏짚 \( 0.2 \mathrm{~g} \) 이 든 시험관에 분주한 다음, 위액 \( 5 \mathrm{ml} \) 를 넣고 \( 39^{\circ} \mathrm{C} \) 의 shaking incubator에서 시간대별로 발효시켰다.</p><p>In vitro 시험에서 2 종의 비이온성 계면활성제와 1 종의 양쪽 (+/-) 이온성 계면활성제의 반추위 미생물 발효효과에 대한 첨가 수준별 영향을 밝히기 위하여 \( 0.05 \% \) 및 \( 0.1 \%(\mathrm{v} / \mathrm{w}) \) 의 첨가비율을 각각 설정함으로써 무처리 대조구와 함께 총 7 처리를 두었으며, in vitro 발효 시간 \( (6,12,24,48 \) 그리고 72 \( h r) \) 에 따라 시료를 채취하여 처리 당 3 반복으로 수행하였다.</p><h2>건물소화율, Gas발생량, 미생물성장 및 \( \mathrm{pH} \) 변화</h2><p>In vitro 건물소화율은 Moore 방법에 따라 발효지표로서 배양액의 \( \mathrm{pH} \) 를 측정한 후, 미리 칭량된 filter paper (Whatman No. 541)를 통해 aspirator로 여과한 다음, filter paper에 남아있는 미 소화물질을 \( 105^{\circ} \mathrm{C} \) drying oven에서 12 시간 동안 건조시킨 후, 아래 공식으로 구하였다.</p><p>In vitro건물소화율(\%)= \( =\frac{\begin{array}{c}\text { 발효 전 기질의 무게-(여과 후 남은 } \\ \text { 기질의 무게-Blank) }\end{array}}{\text { 발효 전 기질의 무게 }} \times 100 \)</p><p>Gas 발생량은 각 발효시간대별로 시험관을 shaking in-cubator에서 꺼낸 후, 온도에 따른 변화를 감안하여 상온에서 20분간 방치시킨 다음, 자체 고안된 water displacement apparatus를 이용하여 gas 발생량을 측정하였다.</p><p>Gas 발생량은 각 발효시간대별로 시험관을 shaking in-cubator에서 꺼낸 후, 온도에 따른 변화를 감안하여 상온에서 20분간 방치시킨 다음, 자체 고안된 water displacement apparatus를 이용하여 gas 발생량을 측정하였다.</p><p>미생물 함량은 반추위 혼합 미생물의 in vitro 발효에 있어서 배양액 중 미생물 함량은 각 발효시간대별 시험관으로부터 발효액 \( 1.5 \mathrm{ml} \) 를 tube에 취하고, \( 3,000 \mathrm{rpm} \) 에서 3분간 원심분리하여 사료 입자를 제거하고, 상층액을 취하여 \( 14,000 \mathrm{rpm} \)에서 3분간 재원심분리하여 미생물 pellet을 침전시킨 다음, 상층액은 제거하고 침전물에 sodium phosphate buffer \( (\mathrm{pH} \) 6.5)를 첨가하여 교반하여 현탁시킨다.</p><p>이 과정을 3회 반복한 후에 spectrophotometer (BIO-RAD Model 680, USA)를 이용하여 \( 550 \mathrm{~nm} \) 에서 O.D. (optical density)값을 비교하여 미생물 함량을 구하였다. \( \mathrm{pH} \) 변화는 각 발효시간대별 gas 발생량과 미생물 함량 측정을 위한 시료 채취 후 \( \mathrm{pH} \) meter (Mettler Toledo, MP230, Switzerland)를 이용하여 측정하였다.</p><h2>전자현미경(SEM) 관찰</h2><p>SEM관찰을 위한 시료의 준비는 발효 12시간 후 각 처리별로 비슷한 크기의 볏짚 fraction을 임의로 채취하여 Ho 등의 방법을 응용한 전처리 방법을 이용하였다. 즉, 진공상태에서 시료의 변형을 방지하기 위하여 \( 0.5 \% \) 와 \( 5 \% \) gluta-raldehyde 용액으로 고정한 후, cacodylic buffer로 세척하여 유기용매 치환법으로 \( 10,20,30,50,70,90 \) 및 \( 100 \% \) 의 ethyl alcohol을 차례로 30분간 통과시켜 탈수시켰다. 탈수가 끝난 시료를 임계점 건조법(critical point drying method)으로 시료를 내압 하여 mounting 시켰다. 진공 증착장치에서 금(gold)를 분사하여 시료표면에 증착시킨 후.SEM (Philips XL30 S FEG, Netherlands)을 이용하여 관찰 (\(\times 5,000) \) 하였다.</p><h2>통계 처리</h2><p>시험결과는 SAS program의 General Linear Model (GLM) procedure에 따라 처리되었으며, 각 처리구간에 유의성 검증을 위해 분산분석을 실시한 후, Duncan's multiple range test로 유의성을 검정하였다.</p>
Moore 밥법에 따른 In vitro 소화율은 어떤방법으로 진행하여 구하는가?
배양액의 \( \mathrm{pH} \) 를 측정한 후, 미리 칭량된 filter paper (Whatman No. 541)를 통해 aspirator로 여과한 다음, filter paper에 남아있는 미 소화물질을 \( 105^{\circ} \mathrm{C} \) drying oven에서 12 시간 동안 건조시킨 후