<h1>재료 및 방법</h1><h2>재료</h2><p>본 실험에 사용한 계란 노른자는 레시틴을 추출하고 남은 잔사로 경기도 용인에 위치한 두산인재기술개발원에서 구입하여, 잔존하는 지질을 제거하고 남은 단백질을 2mer-captoethanol로 환원시겨 사용하였다.</p><p>가수분해시 사용한 효소인 Alcalase는 Novo. Co. (Den-mark)으로부터 구입하였으며, 계란 노른자 단백질을 가수분해시켜 분자량별로 분획하키 위해 사용한 한외여과탁장치(ultrafiltration membrane system)는 Millipore Co. (Bed-ford, MA, USA)으로부터 구입하였고, 사용된 막의 분자량 한계범위 (molecular weight cut-off : MWCO)는 각각 \( 10\mathrm{~KDa}, ~5 \mathrm{~KDa} \) 및 \( 1 \mathrm{~KDa} \)을 사용하였다.</p><p>세포 배양계에서의 항산화작용과 항산화 호소활성을 측정하기 위해 사용한 정상 간세포 (Chang)는 Japan Health Sciences Foundation (JHSE, Tokyo, Japan)으로부터 분주받아 사용하였으며, 그 외의 tert-butyl hydroperoxide (t-BHP), MTT (4,5-dumethyl thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazoli-um bromide), dulbecco's modified eagle medium (DMEM), L-ghtatamine, hydrogen peroxide \( \left(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}\right) \), dimethyl sul-foxide (DMSO), ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA), superoxide dismutase (SOD : from bovine liver), xanthine, xanthine oxidase (XOD), nitro blue tetrazolium (NBT), catalase (from bovine liver), diethylene triamine penta-acetic acid (DETAPAC), reduced glutathione (GSH), oxidz-zed glutathione-reductase (GSSG-reductase), \( \rho \)-nicotina-mide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)는 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA), fetal bovine serum (FBS) 및 antibiotic/antimycotics는 Gibco Co. (Gibco BRL, Grand Island, NY, USA), malondialdehyde tetra butylam-monium salt 는 Fluka Co. (Fluka Chimie AG, Switzer-land), 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB)과 \( \mathrm{NaN}_{3} \)는 Ald-rich Chemical Co. (Milwaukee, WI, USA)으로부터 구입하였으며, 그 외의 모든 시약은 분석용 특급치악을 사용하였다.</p><h2>가수분해물의 제조</h2><p>가수분해물은 Park 등의 방법에 따라 계란노른자 단백질을 Alcalase로 가수분해시커 각 단계별로 분자량 크기에 따라 분획하였다. 즉, Alcalase로 가수분해시킨 후 한외여과막장치를 사용하여 분자량 한계범위가 각각 \( 10 \mathrm{~KDa} \), \( 5 \mathrm{~KDa} \) 및 \( 1 \mathrm{~KDa} \)인 막에 차례로 통과시켜 분획한 후 동결 건조하여 가수분해물을 제조하였다.</p><h2>세포배양</h2><p>정상 간세포 (hepatocytes, Chang)를 fetal bovine serum (FBS)이 \(10\%\) 함유된 dulbecco's modified eagle medium (DMEM)으로 내양하였다. 즉, \( 75-\mathrm{cm}^{2} \) plastic flask (Falcon Co., Paigton, Devon, UK)에 Chang cello을 \(10\%\) FBS, \(7.5\%\) \( \mathrm{NaHCO}_{3} ~150 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) , glutamine \( 58.4 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\) 및 antibiotic/ antimycotics \( 4.4 ~\mu \mathrm{l}/\mathrm{ml} \) 가 함유된 DMEM으로 \( 37^{\circ} \mathrm{C},~ 5 \% ~\mathrm{CO}_{2} \)의 조건에서 베양하여, 2~3일마다 한번씩 subculture하여 세포주를 유지하였다.</p>
본 실험에 사용한 계란 노른자는 레시틴을 추출하고 남은 잔사로 경기도 용인에 위치한 두산인재기술개발원에서 구입하여, 잔존하는 지질을 제거하고 남은 단백질을 어떤걸로 환원시켜 사용하였나요?
2mer-captoethanol