<h2>재료 및 방법</h2><h3>시약 및 기기</h3><p>참굴 (Crassostrea gigas, 각장 \( 4.6 \pm 2.3 \mathrm{~cm} \), 각중 \( 9.9 \pm 3.2 \mathrm{~g} \) )은 경남 통영 연안의 양식장에서 채취하여 인근의 가공공장에서 Individual Quick Frozen (IQF)으로 가공한 제품으로서 냉동보관된 제품을 가수분해 시료로 사용하였다.</p><p>굴 효소 가수분해물을 제조하기 위해서 사용한 상업적 효소들 중에서 Neutrase, Flavourzyme, Protamex은 Novozyme사(Busan, Korea)에서 구입하여 사용하였다.</p><p>HepG2 세포 배양에 사용한 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)과 Fetal Bovine Serum (FBS)와 배지용 항생제(Penicillin-Streptomycin Mixture)와 Phosphate Buffered Saline (PBS), Trypsin-Versene (EDTA) Mixture는 Lonza 사(Switzerland)에서, 세포생존율을 측정하기 위한 3-(4,5-di-methylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)시약은 Sigma에서 구입하였다. Dimethyl sulfoxide (DMSO)와 silymarin 등은 Sigma 사(St. Louis, MO, USA) 에서 구입하여 사용하였으며, 기타 일반 시약들은 특급 시약을 사용하였다. 세포배양용 culture dish, 96-well plate, 6-well plate, corning tube는 SPL (Gyeonggido, Korea)을 사용하였다.</p><h2>효소 가수분해 방법</h2><p>Jang의 방법을 변형하여 Neutrase, Flavourzyme, Protamex를 이용한 굴 가수분해물을 제조 하였다. 즉, 냉동굴\( 1,000 \mathrm{~g} \)을 1분 동안 끓는 물에 데치고, 수도수를 2배 양을 가한후 마쇄하였다. 마쇄물의 단백질 농도에 대하여 \( 1 \% \)의 농도가 되도록 각각의 효소를 첨가하여 반응 시켰다. Neutrase는 첨가 후 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 에서, Flavourzyme은 첨가 후 \( 55^{\circ} \mathrm{C} \) 에서, Protamex는 첨가 후 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 2시간 동안 처리한 후 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 가열 처리하여 불활성화 시켰다. 이렇게 재조한 각각의 효소 가수분해물들은 원심분리(Model SUPRA 21K, Hanil science Industrial, Co., Ltd, Korea) 하여 불용성 물질을 제거하였고, 상층액과 잔사를 동결 건조하여 건조 분말을 만든 후 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하면서 실험에 사용하였다(Fig. 1).</p><h2>DPPH radical-scavenging 활성 측정</h2><p>Brand 등의 방법에 의해 \( 0.1 \mathrm{mM} \) DPPH용액 \( 1.0 \mathrm{ml} \) 을 취하여 \( 0.5 \mathrm{ml} \)의 시료와 혼합하고 20분 후 UV spectrophotometer (Mecasys, Optizen 2120UV, Korea)로 \( 525 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 음성 대조군으로는 \( 1 \mathrm{ml} \) DPPH에 시료대신 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 증류수를 가한 용액을 사용하였고 양성 대조군으로는 ascorbic acid를 사용하였고 DPPH에 의한 라디칼 소거활성을 다음 공식으로 계산하였다.</p><p>\(\text{DPPH radical scavenging activity} (\%)=\left[\left(\mathrm{A}_{0}-\mathrm{A}_{1}\right) / \mathrm{A}_{0}\right] \times 100 \)</p><p>\( \mathrm{A}_{0}= \text{시료대신 증류수를 첨가한 반응액의 흡광도}\)</p><p>\( \mathrm{A}_{1}= \text{시료를 첨가한 반응액의 흡광도}\)</p>
DPPH-radical scavenging에서 음성 대조군에선 시료대신 무엇을 첨가하였는가?
증류수