<h1>결 과</h1><h2>유산균의 분리 및 동정</h2><p>건강한 가축의 분변으로부터 100 여 균주를 분리하였으며, \( \mathrm{CaCO}_{3} \)를 함유한 MRS agar에서 넓은 투명환을 생성하는 4균을 선발하여 BCNU 9036, BCNU 9041, BCNU 9042, BCNU 9043으로 명명하였다. 16S ribosomal DNA 염기서열을 바탕으로 계통수를 확인한 결과 이들 모든 균주가 Lactobacillus group에 속함을 알 수 있었으며, NCBI의 blast program을 이용하여 상동성을 비교하였을 때 BCNU 9036은 L arizonensis, BCNU 9041과 BCNU 9042은 L. brevis와 BCNU 9043은 L. salivarius와 \( 99 \% \)의 가장 높은 상동성을 보였다. 분리균주의 생리, 생화학적 특징을 조사한 결과 그람양성 세균임을 확인하였으며, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)의 온도에서 가장 잘 생육하는 것으로 조사되었다. \( \mathrm{NaCl} \ 3-7\% \)에서 생육하며, 균에 따른 차이는 나타나지만 산성과 알칼리성의 폭넓은 \( \mathrm{pH} \)에서 생육하는 것을 확인할 수 있었다. 그리고 이들 균주들은 glucose, lactose 및 sucrose 등 탄소원을 발효함이 확인되었다.</p><h2>용혈성 등 안전성 조사</h2><p>분리균주 Lactobacillus BCNU 9036, BCNU 9041, BCNU 9042 및 BCNU 9043은 적혈구의 파괴 또는 분해현상인 용혈현상을 나타내지 않았으며, 유해대사산물로 알려진 indole, phenylpyruvic acid를 생성하지 않았다. 또한 암형성에 유의한 \( \beta- \) glucosidase, \( \beta- \) glucoronidase, tryptophanase, 그리고 urease를 생성하지 않아 전체적으로 프로바이오틱 균주로서 사용상 안전성이 있는 것으로 확인되었다.</p><h2>내산성 및 담즙산에 대한 내성 조사</h2><p>동정된 4균주를 대상으로 \( \mathrm{pH} \) 대한 내성을 조사한 결과 \( \mathrm{pH} 2.5\)의 PBS buffer에서 BCNU 9041, BCNU 9042는 각각 \( 96.3\% \), \( 91.6 \% \)의 높은 생존률을 나타내었고, BCNU 9036, 9043은 \( 50\% \), \( 31 \% \)의 다소 낮은 생존률을 보였다. \( 0.3 \%, 0.6 \%, 1 \% \)의 oxgall을 첨가한 배지에서 내 담즙산을 측정한 결과 내산성에서 높은 생존률을 나타내었던 BCNU 9041, BCNU 9042는 \( 0.3 \%, 0.6 \%, 1 \% \)의 oxgall에서도 오히려 균이 증식하거나 전혀 저해를 받지 않은 것으로 조사되었다. 반면, BCNU 9043은 \( 0.3 \% \)의 oxgall에서 \( 28 \% \)의 낮은 생존률을 나타내었고 BCNU 9036의 경우 \( 0.3 \% \)의 oxgall에서만 \( 2.2 \% \)의 생존률을 나타내었다. 균주의 내산성 및 내답즙산의 능력에서 볼 때 분리균주 BCNU 9041 및 9042는 장내의 극한 환경에서 생존가능성이 높을 것으로 확인되어 프로바이오틱스 균주로 안정성이 높다고 판단된다.</p><h2>항균력 조사</h2><p>분리균주의 식중독 원인균에 대한 항균활성을 조사한 결과, \( \mathrm{pH} \)를 중성화 시킨 시료에서는 항균활성이 나타나지 않았으나, \( \mathrm{pH} \)를 조정하지 않은 시료에서는 균에 따라 차이를 보이지만 항균활성을 나타낸 것을 확인하였다. 특히 그람양성 세균인 B. cereus, L monocytogenes, S. aureus에 대한 항균활성이 우수하였고 그람음성 세균인 S. sonnei에 대해서도 항균활성이 관찰되었지만 E. coli와 S. typhimurium에 대해서는 항균활성이 관찰되지 않음을 확인하였다. 균주를 배양한 MRS broth의 \( \mathrm{pH} \)는 6.4였으며, 배양여액의 \( \mathrm{pH} \)는 균에 따른 차이는 있었지만 \( \mathrm{pH} 3.8-4.5 \) 사이로 측정되었으며, 이러한 결과는 분리균주가 생산하는 유기산, 초산 등의 생성물에 의해 항균활성을 나타내는 것으로 판단된다.</p><h2>항생제 감수성</h2><p>분리균주 BCNU 9041및 BCNU 9042는 penicillin계 ampicillin, aminoglycoside계 gentamicin, tetracycline계 tetracycline 및 기타 chloramphenicol 항생제에 대해 감수성을 나타내었고, aminoglycoside계 항생제 streptomycin에 대해서는 내성을 나타내었다. BCNU 9036은 gentamicin, tetracycline에 대하여 \( 30 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \)의 농도에서 내성을 나타내었으며 BCNU 9043은 gentamicin에 대해서는 내성을 나타내었지만 strepto-mycin에 대해서는 내성이 없는 것으로 조사되었다.</p><h2>세포 표면 소수성</h2><p>가축의 분변으로부터 분리한 균주의 소수성 실험결과 n-hexadecane에 대해서 BCNU 9041 및 9042 균주는 각각 \( 95 \%, 92 \% \)로 높은 소수성을 나타내었고, BCNU 9043은 \( 80\% \) 이상의 소수성을 나타내었다. 반면 BCNU 9036는 \( 20 \% \)의 낮은 소수성 값이 측정 되었다. Chloroform에 대해서 BCNU 9043, 9041 및 9042는 \(85\% \)-\( 58\% \) 사이로 높은 소수성을 나타내었다.</p><h2>Bile salt hydrolase (BSH) 활성과 콜레스테롤 흡수활성 조사</h2><p>BCNU 9041 및 9042의 BSH 활성을 조사한 결과 흰색환을 생성하여 효소활성이 있음이 확인되었다. 또한 BCNU 9041 및 9042 는 각각 \( 66 \%, 69 \% \)로 우수한 콜레스테롤 흡수현상을 나타내었다.</p>
투명환을 생성하는 4균이 MRS agar에서 함유한 성분은 무엇인가?
\( \mathrm{CaCO}_{3} \)