<h1>재료 및 방법</h1><h2>시료 제조</h2><p>본 연구에 사용된 정금나무의 열매는 2009 년 10 월 12 일에 충청남도 태안군 안면읍 일원에서 채취하였다. 시료에 아세톤과 물을 7:3(volume/volume)의 비율로 넣은 다음 3일 동안 추출한 후 여과하여 회전 농축기로 감압 농축하여 동결 건조 후 사용하였다.</p><h2>총 폴리페놀 함량 측청</h2><p>총 폴리페놀 함량은 phosphomolybdic acid가 페놀성 물질과 반응하여 청색으로 발색되는 것을 이용한 Folin-Denis법 을 통해 측정하였다. 즉, 농도별 시료용액 \( 1,500 \mu \mathrm{l} \) 에 1N-Folin-Ciocalteu phenol reagent 시약을 \(500 \mu \mathrm{l} \)가하고 3분간 반응 후 \( 10 \% \)의 포화 \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) 용액 \( 500 \mu \mathrm{l} \)를 가하였다. 이 혼합액을 1 시간 반응 후 \( 640 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였으며, tannic acid를 이용하여 표준곡선으로 함량을 구하 였다.</p><h2>전자공여능 측정 (Elctron donating ability)</h2><p>전자공여능은 Blois 방법을 변형한 1.1-diphenyl-2-pic-rylhydrazyl (DPPH) free radical 소거법으로 측정하였다. DPPH 는 자신이 가지고 있는 홀수의 전자 때문에 \( 517 \mathrm{~nm} \)에서 강한 흡수 스펙드럼을 보이나 페놀성 화합물과 같이 수소 전자를 제공해 주는 전자공여체와 반응하게 되면 전자를 제공하는 hydrogen radical을 받아 phenoxy radical을 생성하게 되며 흡수 band도 사라지게 되고 안정한 분자가 된다. 즉 \( 70 \% \) ethanol을 용매로 한 \(10, 50, 100, 500, 1,000 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \)의 농도별 시료액 \( 100 \mu \mathrm{l} \)와 \( 99.9 \% \) ethanol에 용해 한 \( 0.2 \mathrm{mM} \)의 DPPH \( 50 \mu \mathrm{l} \)를 넣고 교반한 후 암소에 30분 반응 후 \( 517 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 대조군에 대한 흡광도 감소치를 DPPH 라디칼 소거활성으로 하여 항산화 활성도를 나타내었다. 이때 상대 활성의 비교를 위하여 양성대조군으로 BHA를 사용하였다.</p><h2>Nitic oxide radical 소거능 측정</h2><p>Nitric oxide (NO) radical 소거 실험은 Marcocci 등의 방법을 변형하여 다음과 같이 측정하였다. \( 20 \mathrm{~mM} \) phosphate buffer \( \mathrm{pH} \) 7.4에 용해시킨 \( 10 \mathrm{mM} \) sodium nitroferricyanide (Ⅲ) dihydrate \( 50 \mu \mathrm{l} \)과 농도별 시료액 \( 50 \mu \mathrm{l} \)를 넣고 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 150분간 반응시켰다. 이 반응액에 griess reagent \( 100 \mu \mathrm{l} \)를 넣고 15분 후 \( 542 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 nitrite 소거활성을 확인하였다.</p><h2>ABTS cation radical 소거능 측정</h2><p>\( \mathrm{ABTS}^{◦+} \)radical을 이용한 항산화력 측정은 \( \mathrm{ABTS}^{◦+} \)Cation Decolorization Assay방법에 의하여 측정하였다. ABTS(2,2'-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) 7.4\( \mathrm{mM} \)과 potassium persulphate \( 2.6 \mathrm{mM} \)을 12시간 이상 암소에 방치하여 청록색의 \( \mathrm{ABTS}^{◦+} \)radical을 형성 시키며 이 용액은 냉장 보관하였다. radical stock solution은 \( 734 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도 값이 1.5가 되도록 몰 흡광계수\( \left(\varepsilon=1.6 \times 10^{4} \mathrm{~mol}^{-1} \mathrm{~cm}^{-1}\right) \)를 이용하여 methanol로 희석하였다. 이 stock solution \(100 \mu \mathrm{l} \)에 시료추출 용액 \( 100 \mu \mathrm{l} \)을 가한 후 상온에서 1 분 방치하여 \( 734 \mathrm{~nm} \)에서 반응액의 흡광도 변화를 측정하였다.</p><h2>Hydrogen peroxides 소거능 측정</h2><p>Hydrogen peroxide 저해활성은 Jayaprakasha등의 방법에 의해 측정하였다. 농도 별 시료용액 \(1000 \mu \mathrm{l} \)와 phos-phate-buffer saline (PBS at \( \mathrm{pH}~7.4\))에 녹인 \( 40 \mathrm{mM} \) hydro-gen peroxide solution \(2,000 ~\mu \mathrm{l}\) 를 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 반응시킨 후 반응액 중에 저해된 hydrogen peroxide의 양을 \(230 ~\mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 합성 항산화 물질인 BHA와 활성을 비교해 보았다.</p><h2>Tyrosinase 저해활성 측정</h2><p>Tyrosinase 저해활성 측정은 Yagi 등의 방법에 따라 측정하였다. 농도별 시료액 \( 100 \mu \mathrm{l} \)와 \( 500 \mu\mathrm{l}\)의 \( 0.175 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer (\(\mathrm{pH} 6.8\))와 \( 10 \mathrm{mM} \) L-DOPA 녹인 기질액 \( 200 \mu \mathrm{l} \)에 \( 200 \mu \mathrm{l} \)의 mushroom tyrosinase \( (110 \mathrm{U} / \mathrm{ml}) \)을 첨가 후 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 2분간 반응시킨 후 생성된 DOPA chrome을 \( 475 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. Tyrosinase 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p><h2>통계처리</h2><p>실험 결과는 3회 반복 측정 후 평균 \( \pm \mathrm{SD} \)로 나타내었다. 통계분석은 SAS program (SAS Institue, Cary, NC, USA)을 이용하여 분산분석한 후 Duncan의 다중검정을 실시하였으며, 상관관계를 분석하였다.</p>
본 연구에 사용하기 위해 채집된 개체는 무엇인가?
정금나무의 열매