<h1>재료 및 방법</h1><h2>균주의 분리</h2><p>하르가이 기내 배양증식 중 하르가이의 생육 촉진 효과를 유도하는 특정 곰팡이를 선발하여 생육증진 효과를 보인 하르가이 (Urtica cannabina L.) 배지의 일부를 채집하여 PDA배지에 배양하였다. 그리고 PDA배지에 나타난 미동정 진균을 단포자분리법으로 순수분리 하였다. 진균의 배지는 \( 25^{\circ}\mathrm{C} \)의 항온기에 배양하면서 배지에 형성된 진균을 조사하였다. 형성된 진균의 포자를 살균수에 현탁하여 물한천배지(water agar)에서 발아시켰고, 현미경을 이용하여 단포자분리법으로 순수분리 하였다. 순수 분리된 진균은 PDA배지가 들어있는 시험관에 이식 및 배양하여, PGPF 성능 검정 및 동정을 위한 실험에 사용하였다. 진균의 보관 및 변질 방지를 위해 일부는 멸균수를 넣은 바이알(vial)에 넣어 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 냉장고에 보관하였다.</p><p>본 연구에서는 식물 생장에 반응하는 분리된 진균을 UOS로 임의로 이름을 명명하여 실험을 진행하였다.</p><h2>UOS의 식물 생장 촉진 효과 검증</h2><p>UOS의 PGPF 효과를 확인하기 위해 생장 촉진 효과 조사와 생장상 조사 두 가지 방법으로 실험을 진행하였고, 식물은 실험에 모델 식물로 주로 쓰이는 담배, Nicotiana tabacum L. var. Xanthi nc.를 사용하였다.</p><p>생장 촉진 효과 확인을 위해 I-plate의 한쪽에는 담배 종자를 파종할 MS배지를, 다른 한쪽에는 진균을 키울 PDA배지를 분주하였다. MS배지에 파종할 담배 종자들은 \( 1.5 \mathrm{ml} \) 팔콘 튜브(falcon tube)를 이용하여 \( 70 \% \) 알코올에 30 초, \( 2 \% \) 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite)에 1 분 30 초간 소독한 후 멸균수로 5 회 헹구어 사용하였다. 소독한 종자는 I-plate의 MS 배지 위에 10 립 파종하였다. \( 28^{\circ} \mathrm{C} \) 기내배양 조건에서 10 일 후 발아율을 측정하였고, 식물체의 균일성을 위해 발아된 식물체 중 5구만을 선별하여 사용하였다. 선별작업과 동시에 동일한 I-plate의 PDA 배지에는 아무것도 치상하지 않은 무처리구(control)와 UOS를 치상한 처리구와 같이 2그룹으로 구분하여 배양하였고, 14 일째에 생체중을 측정하였다. 모든 실험은 3반복으로 실시하였다.</p><p>생장상 확인을 위해 Vertical plate에 PDA 배지를 분주하였다. 역시 배지에 파종할 담배 종자들은 \( 1.5 \mathrm{ml} \) 팔콘 튜브 (falcon tube)를 이용하여 \( 70 \% \) 알코올에 30 초, \( 2 \% \) 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite)에 1 분 30 초간 소독한 후 멸균수로 5 회 헹구어 사용하였다. 소독한 종자는 Vertical plate의 PDA 배지 윗부분에 22립 파종하였다. \( 28^{\circ} \mathrm{C} \) 기내배양 조건에서 10 일 후 발아율을 측정하였고, 식물체의 균일성을 위해 발아된 식물체 중 10 구만을 선별하여 사용하였다. 선별작업과 동시에 동일한 Vertical plate의 아래 부분에 아무것도 치상하지 않은 무처리구(control)와 UOS를 치상한 처리구와 같이 2그룹으로 구분하여 배양하였고, 14 일째에 생체중을 측정하였다. 모든 실험은 3반복으로 실시하였다.</p>
진균의 보관 및 변질 방지를 위해 어떤 방법을 사용하였는가?
멸균수를 넣은 바이알(vial)에 넣어 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 냉장고에 보관