<h1>재료 및 방법</h1><h2>추출물의 제조</h2><p>본 실험에 사용된 오징어부산물(internal organs Todarodespacificus, IOT)은 (주)동우산업(경상북도, 포항)에서 paste 형태로 제공 받아 시료로 사용하였다. Paste를 동결건조한 후 건조시료에 80% ethanol 2 l를 가해 3회 열 추출하여 감압 농축기로 농축한 후 분말로 만들어 동물실험에 사용하였다.</p><h2>실험동물, 사육조건 및 식이조성</h2><p>실험동물은 \( 180 \sim 200 \mathrm{g}\)의 Sprague-Dawley계 암컷 흰쥐(오리엔트사, 부산)를 구입하여 1주간 적응시킨 뒤 실험에 사용하였다. 적응 후 실험동물들은 난괴법에 의해 4군으로 나누어온도<p></p>\( 23 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 50 \pm 5 \% \), 12시간 조명주기의 조건하에서 4주간 사육하였다. 실험군은 비난소절제(SHAM)군, 난소절제대조(CON)군, 난소절제 후 오징어부산물 추출물 \( 50 \mathrm{mg}/\mathrm{kg}\) 투여(IOT50)군, 난소절제 후 오징어부산물 추출물 \( 200 \mathrm{mg}/\mathrm{kg}\)투여(IOT200)군으로 구성하였다. 실험동물은 각 군마다 7마리씩 나누고, 실험식이와 탈이온수는 자유 섭취방법(adlibitum)으로 급여 하였고, 추출물을 매일 \( 1 \mathrm{ml}\)씩 4주간 경구투여 하였으며, 대조군은 동일용량의 생리식염수를 경구 투여하였다. 식이섭취량은 매일 일정한 시간에 측정하였고, 체중은 이틀에 한번 씩 정기적으로 측정하였다.</p><h2>난소절제시술</h2><p>1주일 동안 주위환경에 적응시켜 난괴법에 의해 군을 나누어 난소 절제 수술을 실시하였다. 수술은 ether 마취 후 심마취기에 이르면 늑골하부를 절개하여 난소를 제거하고 절개 부는 봉합하였다. 시술 후 3일부터 매일 오징어부산물을 추출한 시료를 경구 투여하였다.</p><h2>혈액 및 장기 채취</h2><p>실험종료 전 실험동물을 하룻밤 절식시킨 후 ethyl ether마취 하에서 복부대동맥으로부터 채혈하였다. 채취된 혈액은 \( 3,000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심 분리하였고, 분리된 혈청은 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 냉동보관하면서 분석에 사용하였다.</p><h2>혈청 중의 alkaline phosphatase 분석</h2><p>혈청 중 alkaline phosphatase (ALP)의 활성측정을 위해 FUJI DRI-CHEM SLIDE 위에 분리한 혈청 \( 10 \mu \mathrm{l} \)를 점착하여 Dry Chemistry Analyzer 3500i (Fuji Film Co., Tokyo, Japan)를 사용하여 500 \( \mathrm{nm} \)의 파장에서 분석하였다.</p><h2>혈류측정</h2><p>혈류는 Micro Channel Array Flow Analyzer KH-6 (MCLab, ToKyo, Japan)을 이용하여 채취 한 혈액 25, 50, 75 및\( 100 \mu \mathrm{l} \)를 주입하여 측정하였다.</p><h2>혈소판 응집력</h2><p>Ether 마취 후 개복하여 대동맥으로부터 채혈하여 \( 3.2 \% \) so-dium citrate용액과 1:9의 비율로 혼합한 뒤 \ \( 1,100 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심 분리하여 상층의 PRP (platelet rich plasma)를 취하고, \( 3,000 \mathrm{rpm}\)에서 10분간 더 원심분리 하여 상층에 혈장을 제거한 후 EDTA를 포함하는 washing buffer \( 138 ~\mathrm{mM~NaCl}, 2.7 ~\mathrm{mM} ~\mathrm{KCl}, 12 ~\mathrm{mM} ~\mathrm{NaHCO} 3, 0.36 ~\mathrm{mM} ~\mathrm{NaH_{2 }} \mathrm{PO}_{4} \), \( 5.5 ~\mathrm{mM} \) glucose, \( 1 \mathrm{mM} \) EDTA, \( \mathrm {pH}6.5\) \( 5 \mathrm{ml} \)를 가하고 섞어주어 혈소판을 현탁시켰다. 이 혈소판을 다시 \( 3,000 \mathrm{rpm}\)에서 10분간 원심분리 한 후, 세척액을 버리고 혈소판을 위의 방법으로 한번 더 세척하였다. 세척 후 suspending buffer \(( 138 ~\mathrm{mM~NaCl}, 2.7 ~\mathrm{mM} ~\mathrm{KCl}, 12 ~\mathrm{mM} ~\mathrm{NaHCO} 3, 0.36 ~\mathrm{mM} ~\mathrm{NaH}{ }_{2} \mathrm{PO}_{4} \), \( 5.5 ~\mathrm{mM} \) glucose, \( 0.49 ~\mathrm{mM} ~\mathrm{MgCl}_{2}, 0.25 \% \) Gelatin, \( \left.\mathrm{pH} 7.4\right) \) 로 재 현탁시켜 \( 3,000 \mathrm{rpm}\)에서 10분간 원심분리한 후 다시 sus-pending buffer로 현탁시켜 washed platelet을 조제하였다.Washed platelet는 suspending buffer로 희석하여 혈소판 수가 \( 5 \times 10^{8} / \mathrm{ml} \) 이 되도록 하였고, 응집유도제로 collagen을 \( 2.5 \mu \mathrm{l} \) 가하여 5분간 반응시켜, Whole Blood Lumi-aggregometer (Chrono-log, Philadelphia, USA)를 사용하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 혈소판 응집을 측정하였다.</p><h1>혈청 중의 지질농도 분석</h2><p>혈중 triglyceride, total cholesterol, HDL-cholesterol 농도는 자동 측정용 slide (Fuji Film Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 Dry Chemistry Analyzer 3500i (Fuji Film Co., Tokyo,Japan)로 측정하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>연구결과 얻어진 자료를 SPSS Version 14.0 통계 프로그램을 사용하여 하위그룹 각각의 기술통계치(mean\( \pm \)SD)를 산출하였다. 집단 간의 차이를 알아보기 위해 일원변량분석(one-way ANOVA)를 이용하여 분석하였고, 유의수준은 p\(< \)0.05 수준으로 검증하였다.</p>
제공 받은 Paste를 동물실험에 사용하기 전 어떤 과정을 거쳐서 분말로 만들어?
건조시료에 80% ethanol 2 l를 가해 3회 열 추출하여 감압 농축기로 농축한 후 분말로 만들어