<h2>정제 방법에 따른 복어독의 회수율 및 생산량</h2><p>복어독의 정제는 Fig. 1 에 기술한 바와 같이 시행하였다. 즉, 복어독을 초산으로 추출하고 디클로로메탄으로 탈지한 후 한외여과법 및 활성탄 칼럼법으로 복어독을 각각 분리한 후, Bio-gel P-2 칼럼크로마토그래피에 의하여 정제하였다. 한편, 분리 정제 과정 중 처리방법에 따른 복어독 회수율을 조사하여 Table 6에 나타내었다. 즉, 한외여과는 독력이 \(40,000\mathrm{MU}\)인 시료액을 \( \mathrm{NaOH} \) 로서 \( \mathrm{pH} 4 \sim 5 \)로 조정한 후 한외여과법으로 분자량 \(1,000\mathrm{dalton}\)이하의 것만을 얻은 다음, 대형 Bio-gel P-2 칼럼 \( (5.6 \mathrm{~cm} \) I.D. \( \times 50 \mathrm{~cm}) \) 으로 부분정제한 후, 다시 소형 Bio-gel P-2 칼럼(\(2\mathrm{cm}\) I.D. \( \times 96 \mathrm{~cm}) \)으로 다시 정제하였다. 최종 단계로부터 분리된 독력은 \( 32,000 \mathrm{MU} \)이었으며, 회수율은 \( 65.3 \% \) 이었다. 한편 활성탄 칼럼 \( (2 \mathrm{~cm} \) I.D. \( \times 25 \mathrm{~cm} \) )을 사용한 경우에는 최종 단계로부터 분리된 독력은 \( 18,000 \mathrm{MU} \)이었고, 회수율은 \( 45.0 \% \) 로서 한외여과법에 비하여 정제과정 중 독소의 손실이 큰 것으로 생각되었다. Table 7은 이들 2종류의 방법을 이용하여 복어독을 정제한 경우 까치복 간장 \( 1 \mathrm{~kg} \) 에서 얻을 수 있는 TTX의 양을 계산한 것이다. 즉, TTX \( 1 \mathrm{mg} \) 은 약 \( 5,000 \mathrm{MU} \)의 독력을 나타내기 때문에 이에 근거하여 계산하였을 경우 한외여과법을 사용한 것은 약 \( 68 \mathrm{mg} \), 활성탄을 사용한 것은 약 \( 54 \mathrm{mg} \)의 TTX을 얻을 수 있었다.</p><h2>독소의 분석 및 동정</h2><p>Fig. 3은 분리된 독소의 HPLC 분석결과를 나타내었다. 즉, TTX 표준품의 경우 3개의 peak가 나타났는데, 이것은 TTX(머무름 시간, \( 7.52 \mathrm{~min} \) ) 및 그 유도체들이다. TTX는 tetrodonic acid(TDA), anhydro TTX 등의 유도체를 가지고 있는데, 이들의 머무름 시간은 가각 \( 5.14 \mathrm{~min} \) 및 \( 9.27 \mathrm{~min} \) 이었다. 복어 간장으로부터 얻은 시료에서도 같은 머무름 시간에서 TDA, TTX 및 anhydro TTX peak를 얻을 수 있었으며 전형적인 TTXs의 peak 패턴을 나타내었다. 그런데 미지의 작은 peak(머무름 시간, \( 6.21 \mathrm{~min} \) )가 한 개 더 나타나, 표준품과 시료가 약간의 다른 것은 TTX 유도체들의 조성이 시료에 따라 다소 다르기 때문이라 생각된다. 또한 GC-MS에 의한 분석결과는 Fig. 4 에 나타내었다. Suenaga 등은 TTX의 tri-TMS-Cg- base의 mass spectrum은 base peak가 \( \mathrm{m} / \mathrm{z} \) 392, parent peak가 \( \mathrm{m} / \mathrm{z} \) 407 이며, intense peak가 \( \mathrm{m} / \mathrm{z} \) 376 등의 peak가 나타나지만, di-TMS-Cg-base인 경우에는 base peak가 \( \mathrm{m} / \mathrm{z} \) 277이며, parent peak는 없고, intense peak가 165, 221, 320 등의 peak가 나타난다고 보고한 바 있다. 본 실험에서 얻은 독소를 \( 2 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \) 로 가수분해시킨 후 TMS화하여 분석한 결과, base peak \( \mathrm{m} / \mathrm{z} \) 277, intense peak 165, 221, 320과 일치하는 di-TMS-C9-base의 peak로 보아 TTX 및 그 유도체임이 확인되었다.</p>
최종 단계에서 회수율은 몇퍼센트였나요?
\( 65.3 \% \)