<h1>재료 및 방법</h1><h2>표면살균 밎 줄기유도</h2><p>온실에서 자라는 2년생 개느삼의 당년 신초 액아를 절편으로 사용하였다. 절편의 조제는 전정가위로 \(1\sim2\)개의 액아가 포함되게 줄기를 절단하여 \( 500 ~ \mathrm{ml} \) 삼각후라스크에 넣은 다음 tween 20 용액을 \(2\sim3\)방울 첨가 후 흔들어 주면서 2시간 정도 수돗물로 세척하였다. 다음 무균상에서 \( 70 \% \) 에탄올로 1분간 세척한 후 다시 \( 2 \% \) 차아염소산나트륨 \( (\mathrm{NaClO}) \) 용액을 줄기가 잠길 정도로 붓고 Triton X-100 용액 \(2\sim3\) 방울 첨가하여 10분 정도 흔들어 주면서 표면살균 하였다. 그 후 소독액은 버리고 멸균 증류수로 5회 세척한 다음 액아배양을 실시하여 줄기를 유도하였다. 증식용 배지로는 DKW 배지를 기본으로 탄소원으로 \( 2 \% \) sucrose, 경화제로는 \( 0.3 \% \) gelrite를 사용하였다.</p><h2>줄기의 증식</h2><p>본 시험에서는 예비시험을 통해 MS 배지, WPM 배지, DKW 배지 가운데 DKW 배지가 개느삼의 아배양에 가장 적합하다는 결과를 얻었으며, 이 배지를 기본으로 줄기의 증식에 미치는 BA 단독처리 혹은 BA와 TDZ의 혼용처리로 증식시험을 실시하였다. 각 배지에는 \( 3 \% \) sucrose를 공히 처리하였고, \( 0.3 \% \)의 gelrite로 경화하였다. 배지는 조제 후 \( \Phi ~ 2.5 \times 15 \mathrm{~cm} \) 크기의 유리 시험관에 \( 8 \mathrm{~mL} \) 정도 분주하여 상온에서 하롯밤 정도 굳힌 후 사용하였다. 4주간 초대배양 후에는 \( \Phi ~ 6 \times 11 \mathrm{~cm} \) 크기의 유리 배양병으로 옮겨 증식을 도모하였다. 배양환경은 온도는 \( 25 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \)로 유지되고, 1일 16시간 조명 (냉백색 형광등, \( 40 ~ \mu \mathrm{mol} ~ \mathrm{m^{-2 }} ~ \mathrm{sec}^{-1} \) )되는 배양실에서 수행하였다. 배양 4주 후 증식된 줄기 수, 길이 등의 성적조사를 실시하고 동일한 배지로 계대배양 하였다.</p><h2>발근유도</h2><p>기내 증식 후 약 8주간 배양된 건전한 줄기를 재료로 \( 1 / 2 \)DKW 배지에 IBA 및 NAA를 농도별로 처리하여 발근에 미치는 효과를 조사하였다. 또한 IBA \( 100 ~ \mathrm{ppm} \)을 Talc에 섞어 반죽된 형태로 기부에 처리하여 micro-cutting을 실시하였다. 기외삽목시 상토는 버미큘라이트 (vermiculrite)를 단독으로 사용하였다. 기외 및 기내발근 유도의 배양환경은 \( 25 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \)가 유지되는 배양실 에서 실시하였고, 조명은 1일 16시간의 조명 \( \left(40 ~ \mu \mathrm{mol} ~ \mathrm{m}^{-2} ~ \sec ^{-1}\right) \) 으로 유지하였다. 기외삽목 시에는 micro-cuttings 후에 충분히 관수를 하고 식물체의 습도 유지를 위해 투명비닐과 아크릴판으로 덮어주었고, 하루 한 차례씩 관수를 하였으며, 배양 1 주 후부터는 뚜껑을 열어 하루 \(1\sim2\)회씩 환기를 시키고, 3주 후에는 비닐을 제거하고 점차 외부 환경에 순화하였다. 4주 후에 처리에 따른 발근율을 조사하였다.</p><h2>토양순화 및 포지 이식</h2><p>발근된 개체는 혼합상토 (버미큘라이트\( + \)펄라이트\( + \)피트모스, \( 1: 1: 1 \) \(\mathrm{v} / \mathrm{v} \) )가 담긴 폿트에 이식하여 온실에서 공중습도를 높게 유지하며 순화를 도모하였다. 6주간 순화 후 성적을 조사하고 생존된 묘목은 야외의 포지로 이식하였다.</p>
절편 조제할때 tween 20 용액을 몇방울 첨가했어 ?
\(2\sim3\)방울