<h1>재료 및 방법</h1><h2>뿌리썩이선충(root-lesion nematode)의 분리 및 배양</h2><p>뿌리썩이선충은 Barker의 진동법에 준하여 고사한 잎들깨 뿌리에서 분리하였다. 잎들깨 뿌리는 부산 대저동 잎 들깨 재배지에서 채취하였으며, 이후 선충 분리전 까지 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 의 냉장고에 보관하였다. 잎들깨 뿌리를 증류수로 3회 세척한 후, 칼로 잘게 절단하여 증류수 \( 100 \mathrm{m \ell} \)에 침지시켜 \( 25^{\circ} \mathrm{C}\), \(100 \mathrm{rpm} \) 에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 뿌리를 제거하고 200 mash를 이용하여 선충을 분리하였다. 분리 된 뿌리썩이선충은 carrot disc을 이용한 뿌리썩이선충 배양 방법에 준하여 배양하였다. 분리된 뿌리썩이선충을 \( 1 \% \) streptomysin sulfate, \( 0.01 \% \) chlorhexidine용액에 24시간 동안 침지하여 표면을 소독한 후, 화염 살균된 carrot disc에 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 항온기에 2개월간 배양하였다. 잎들깨 뿌리의 cortex에 침입한 뿌리썩이선충은 acid fuchsinlactophenol (\( 0.005 \% \) acid-fuchsin, \( 20 \% \) liquid phenol, \( 18 \% \) lactic acid, \(35\%\) glycerin) 염색법으로 확인하였다. Acid fuchsin-lactophenol \( 50 \mathrm{m \ell} \)을 비등점까지 가열한 후, 잎들깨 뿌리를 1분간 침지하여 뿌리를 염색하였다. 염색된 뿌리는 lactophenol \(21.5\%\) liquid phenol, \(19\%\) lactic acid, \(36.6\%\) glycerin) 용액에 3일간 침지시켜 탈색하였다.</p><h2>선충포식성 곰팡이(nematode-trapping fungi)의 분리 및 배양</h2><p>선충포식성 곰팡이는 1998년 부산 대저동 및 밀양 삼문 동 일대의 잎들깨 재배지에서 채취한 토양에서 분리하였다. 토양으로부터 선충포식성 곰팡이의 분리는 채취한 토양을 \( 0.75 \% \) water agar 배지에 두는 방법으로 실시하였으며, 순수 분리된 곰팡이는 corn meal agar(Difco; CMA)에 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 배양하였다. 분리된 곰팡이의 형태적 특성 관찰은 김 등이 보고한 방법에 준하여 실시하였다. Water agar( \( 2 \% \)) 를 직경 \( 9 \mathrm{~cm} \) petri dish에 부어 굳힌 후, 미리 증식시킨 뿌리썩이선충을 약 100마리씩 접종하였으며, 곰팡이를 그 중앙에 접종하였다. 접종 7일 후 해부현미경으로 선충 포식기관(Trapping organ)의 형태 및 크기, 분생포자의 형태, 크기, 가지의 유무, 포자마디(node)의 존재 여부등 그 형태적 특성 관찰을 통하여 선충포식성 곰팡이를 동정하였다. 동정된 선충포식성 곰팡이는 고체 배지인 pellet에서 대량 배양하였다. Pellet \( 500 \mathrm{~g} \)과 증류수 \( 150 \mathrm{~m} \ell \)를 polypropylene bag에 넣은 후, \( 121^{\circ} \mathrm{C}\), 50분간 멸균하였다. 이 후, potato dextrose broth(Difco; PDB)의 액체배지에서 진탕 배양 (\( 25^{\circ} \mathrm{C}\), \(120 \mathrm{rpm} \)) 한 선충포식성 곰팡이를 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 22일간 배양하였다.</p><h2>포장시험</h2><p>뿌리썩이선충의 감염밀도가 높은 부산 대저동 잎들깨 재배지를 선정하여 고체 배지에 배양된 선충포식성 곰팡이의 선충 방제효과를 검정하였다. 각 곰팡이 처리구 및 대조구는 \( 10 \mathrm{~m}^{2} \)으로 각각 3구역씩 설정한 후, 선충 포식성곰팡이를 처리하기 전에 토양내 선충의 평균밀도를 조사하였다. 이 후, 고체배지(pellet)에 배양 증식한 선충포식성 곰팡이를 각 처리구당 \( 5 \mathrm{Kg} \)씩 살포한 후, 40일 경과후 각 처리구 및 대조구에서 선충밀도를 조사 비교하였다.</p>
고사한 잎들깨 뿌리에서 분리한 게 무엇이지?
뿌리썩이선충