<h2>Actinomycin D 처리에 의한 STAT3의 인산화 조절에서의 SOCS3, SHP-1, JAK2의 관련성 여부</h2><p>Actinomycin D 처리로 인해 STAT3의 Tyr705의 인산화가 증가한다는 것을 확인하였고, 이러한 actinomycin D에 의한 인산화 조절에 어떤 인자가 관여하는지 알아보고자 하였다. 이전의 보고에 의하면 STAT3의 인산화는 포스파타아제인 SOCS3, SHP-1에 의해 조절된다고 알려져 있으며, STAT의 upstream kinase인 JAK2의 인산화에 의해 STAT3의 인산화가 조절된다고 알려져 있다. Actinomycin D를 농도별로 \(1, 3, 5 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \) 을 4시간 동안 처리한 후 Western Blotting으로 SOCS3와 SHP-1의 발현정도와 JAK2의 인산화를 확인한 결과 SHP-1의 발현과 JAK2의 Tyr1007의 인산화 정도에는 변화를 확인 할 수가 없었다. 하지만 특이적으로 SOCS3의 발현이 actinomycin D 농도별로 감소하는 것을 확인하였다. SOCS3의 단백질 발현 감소가 전사단계인 mRNA 발현 정도를 RT-PCR 방법으로 확인한 결과 SOCS3의 mRNA 발현정도가 감소되는 것을 확인하였다. SOCS는 SOCS1-SOCS7이 알려져 있고 JAK와 결합하여 촉매작용을 억제하기도하고 cytokine receptor의 tyrosine 잔기의 인산화를 억제한다. SOCS1과 SOCS3이 염증반응 및 IFN- \( \gamma \) 신호전달계의 STAT1 과 STAT3의 인산화 과정에 결정적인 역할을 한다. STAT3 의 mRNA 발현에는 actinomycin D가 아무런 영향을 주지 않 았다. 그렇지만 SOCS3의 전사 억제력이 \( 1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) actinomycin D 농도에서 야기됨을 확인하였다. 이는 actinomycin D에 의한 유전자의 전사억제가 특이적으로 일어남을 제시하여 준다.</p><h2>전사억제제인 DRB에 의한 STAT3의 인산화 조절 여부</h2><p>다른 전사억제제 처리 시에도 actinomycin D와 같이 STAT3의 인산화 조절을 유도하는지를 확인하기 위해 전사억제제인 DRB (5, 6-dichloro-1-b-D-ribofuranosyl benzimida-zole)를 처리하여 실험을 진행하였다. Caki 세포에 DRB를 농도 \( (5-20 \mu \mathrm{M}) \) 별로 4 시간 동안 처리한 후 세포를 수확하여 Western Blotting으로 확인한 결과에서도 Fig. 4에서 ac-tinomycin D에 의한 STAT3의 인산화 조절과 유사하게 STAT3의 Tyr705의 인산화가 증가하였다. 하지만 SHP-1과 STAT3 단백질 발현량에서는 변화가 없는 것을 확인하였다. 또한 SCOS3 단백질의 발현에는 actinomycin D가 유사하게 감소함을 확인하였다. 이상의 결과는 유전자의 전사 억제제인 actinomycin D와 DRB에 의하여 특이적인 유전자의 전사 과정의 억제를 통하여 새로운 세포의 기능조절에 관여 할 수 있다는 가능성을 제시하여 준다. 또한 보다 더 추가적인 실험을 통하여 전사억제제의 다른 기능적 연구가 필요할 것으 로 생각된다.</p><h1>초록 : 신장암 세포주에서 actinomycin D에 의한 SOCS3 발현 감소를 통한 STAT3 활성화</h1><p>본 연구에서는 전사억제제(transcriptional inhibitor)로 알려진 actinomycin D가 전사조절인자(transcription factor)인 STAT의 인산화를 유도한다는 것을 확인하였다. Actinomycin D 처리 시 STAT1의 Tyr701, Ser727 인산화는 유도되지 않았지만 STAT3의 Tyr705 잔기의 인산화를 특이적으로 유도하는 것을 확인하였다. Actinomycin D에 의한 STAT3의 Tyr705 인산화 유도가 어떠한 기전을 통한 것인지 확인하기 위해서 관련 인자의 단백질 및 mRNA 발현을 확인한 결과 SOCS3의 단백질 및 mRNA 발현의 감소를 확인하였다. STAT3의 탈인산화를 유도한다고 알려진 tyrosine phosphatase인 SHP-1와 STAT의 upstream kinase인 JAK2의 인산화는 변화가 없었다. 또한 actinomycin D 뿐 아니라 다른 전사억제제인 DRB를 처리 하였을 경우에도 STAT3의 Tyr705 인산화가 유도되는것을 확인하였다. 이상의 결과는 전사억제제에 의하여 특이적인 SOCS3 단백질 발현감소는 SOCS3의 하류의 target인 STAT3 인산화를 유도하였다.</p>
지문에서 무엇을 알아보고자 하는가?
actinomycin D에 의한 인산화 조절에 어떤 인자가 관여하는지