<h2>Hoechst 33342 염색</h2><p>PC12 세포의 apoptosis 유도 활성을 측정하기 위하여 Hoechst 33342로 세포의 핵을 염색하였다. 6-well plate에 \( 2 \times 10^{5} \) cells/well로 24시간 동안 배양하여 PSE를 \(100, 250 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리한 후, \( 0.5 \mathrm{mM} ~\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)를 처리하여 2시간 반응 하였다. PBS 완충용액으로 2회 세척하고 \( 10 \% \) formalin을 처리하여 4시간 고정한 후 다시 PBS 완충용액으로 세척하고 Hoechst 33342(Sigma)로 30분 동안 염색하였다. 염색 후 PBS 완충용액으로 세척하고 형광 현미경으로 각 well의 세포를 관찰하고 400배로 사진 촬영하였다.</p><h2>Flow cytometric analysis</h2><p>PC12 세포의 apoptotic cell을 측정하기 위하여 세포주기를 측정하였다. 세포를 \( 6 \mathrm{cm} \) dish에 \( 1.5 \times 10^{5} \) cells/dish로 24시간 배양한 후, PSE를 \( 100,250 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리하고 30분 후, \( 0.5 \mathrm{mM} \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)를 처리하여 2시간 배양한 다음, 부유 세포 및 trypsin 처리한 세포들을 모아서 \( 4^{\circ} \mathrm{C}, 2,000 \mathrm{rpm} \)으로 5분간 원심 분리한 후, \( 70 \% \) ethanol \( 1 \mathrm{ml} \)을 넣고 세포를 고정시켰다. PBS 완충용액으로 수세한 후, propidium iodide/RNase staining buffer(BD pharmingen \( { }^{\mathrm{TM}} \))를 \( 500 \mu \mathrm{l}\) 첨가하고, 어두운 상온에서 10분간 staining한 후, flow cytometry caliber(Beckman coulter epics XL)를 이용하여 세포주기를 분석하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>모든 자료의 처리는 SPSS-PC+ 통계 package를 사용하여 처리하였다. 각 항목에 따라 백분율과 평균치표준편차(SD)를 구하고 PSE의 PC12 세포 보호효과를 비교하기 위해 one-way 분산분석(ANOVA)을 시행하여 F값을 구하고 Scheff's test를 이용하여 대조군과 각 구간의 유의성 차이를 검증하였다. 통계적 유의성은 \( 5 \% \) 수준에서 평가하였다.</p>
무슨 세포의 apoptosis 유도 활성을 측정하는가?
PC12 세포