<h2>유세포 분석(flow cytometric analysis)을 봉한세포 표면 특이 단백질 발현 검사</h2> <p>FACS Calibur \( { } ^ {\text { TM } } \) flow cytometer (BD, USA)를 이용한 유세포 분석을 통해서 지방 조직으로부터 분리한 세포의 세포 표면 특이 단백질의 발현을 조사한다. 해당 세포에 형광 물질 fluorescein isothiocyanate (FITC) 또는 phycoerythrin \( ( \mathrm { PE } ) \) 이 결합된 CD34, CD45 (BD, USA) 및 CD44 (Abcam, UK) 항체를 사용하였으며, Cell Quest Pro (BD, USA) 프로그램을 사용하여 결과를 분석한다.</p> <h2>중배엽 분화 유도 및 염색</h2> <p>중배엽 세포로 분화능을 확인하고자 adipogenesis, chondrogenesis, osteogenesis 유도용 맞춤 배지(Table 1)를 사용하여 분화를 유도한다. \( 3-4 \) 일 주기로 분화용 맞춤 배지를 교체하며, 21일째에 분화 확인용 키트를 이용하여 분화 여부를 관찰한다. Adipogenesis 분화는 Oil Red-O stain kit, chondrogenesis 분화는 Alcian Blue stain kit,osteogenesis 분화는 Alzarin Red stain kit를 이용한 특이 세포 염색을 통해 성체줄기세포의 중배엽 분화능을 확인한 다(IHC World, USA).</p> <table border><caption>Table 1. Composition of differentiation media.</caption> <tbody><tr><td colspan = 2>Adipogenesis</td><td colspan = 2>Chondrogenesis</td><td colspan = 2>Osteogenesis</td></tr><tr><td>Dexamethasone</td><td>\( 1 \mu \mathrm { M } \)</td><td>Dexamethasone</td><td>\( 100 \mu \mathrm { M } \)</td><td>Dexamethasone</td><td>\( 100 \mu \mathrm { M } \)</td></tr><tr><td>Indomethacin</td><td>\( 200 \mu \mathrm { M } \)</td><td>Ascorbic acid 2-phosphate</td><td>\( 25 \mu \mathrm { M } \)</td><td>Ascorbic acid 2-phosphate</td><td>\( 50 \mu \mathrm { M } \)/ml</td></tr><tr><td>Isobutyl methylxanthine</td><td>\( 500 \mu \mathrm { g } \)</td><td>\( \beta \)-glycerophosphate</td><td>\( 10 \mu \mathrm { M } \)</td><td>TGF- \( \beta 1 \)</td><td>\( 0.5 \mu \mathrm { g } \)/ml</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>\( 20 \mu \mathrm { g } \)/ml</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>
단백질 발현을 어떻게 분석해?
유세포 분석을 통해서