<h1>재료 및 방법</h1><h2>토양과 목초액의 물리·화학적 특성 분석</h2><p>토양은 질소 비료를 처리하지 않은 토양을 표토 \(1\) cm를 제거한후 \(0-20\) cm 깊이에서 채취하였으며 \(2\)mm 이하로 체질 후 상온보관하였다. 토양의 pH와 EC는 토양 \(5\)g 에 증류수 \( (1: 5) \) 를 넣어 \(30\) 분간 교반한 후 pH와 EC를 측정하였다. 유기물 함량은 Walkley-Black 법으로 분석하였다. 교환성 질소의 분석을 위해 토양 \(5\)g 을 \(2\)M KCl 로 추출 후 용액의 질소 함량을 Kjeldahl법을 사용하여 분석하였다. 목초액의 Ph와 EC는 pH meter와 EC meter로 각각 측정하였고, 증류잔사물은 목초액 \(100\)mL를 \( 105{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 건조시키고 남은 무게로 측정하였다. 토양 분석 결과는 Table \(1\)에 나타내었으며 목초액의 특성 분석 결과는 Table \(2\)에 나타내었다.</p><h2>목초액 chloroform 분획이 토양의 암모니아화 작용에 미치는 영향</h2><p>목초액에서 urease를 저해하는 유효성분을 분리하기 위해 chloroform으로 분획하였다. Chloroform층을 취하여 evaporator 로 용매를 증발시킨 후 고형분의 무게를 측정하고 \(10,000\) mg/L의 농도가 되도록 에탄올에 녹였다. 목초액이 토양의 암모니아화 작용에 미치는 영향을 평가하기 위해 토양의 수분 함량은 미생물이 활발히 활동할 수 있는 water filled pore space의 \( 60 \% \)로 하였다. 토양 \(200\)g 에 목초액 분획 \(1,000\) mg/L \(10\) mL, 요소 \(0.48\)g 을 첨가해 혼합 후 \(20\)g씩 소분하여, \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 항온 배양기에서 \( 1,3,5,14 \) 일 동안 항온 배양하였다. 배양 후 \(2\)M KCl \(70\) mL를 넣고 \(180\) rpm 에서 \(30\)분간 진탕하여 암모늄을 추출하였다. 용액을 \( 2500 \)rpm 에서 \(5\)분간 원심분리 후 Whatman No. \(2\) 필터를 이용해 상징액을 여과하였다. 여과한 용액 내 암모늄태 질소의 양을 켈달법으로 분석하였다.</p><h2>배추(Brassica campestris var. Pekinensis) 포트 재배</h2><p>목초액이 질소비료 절감에 미치는 영향을 평가하기 위해 관행대비 \( 50 \% \) 요소를 목초액과 같이 토양에 공급하면서 배추 생육에 미치는 영향을 온실과 노지에서 평가하였다. 목초액은 토양에 균일하게 퍼지도록 물에 희석하여 비료 처리 전 토양에 처리하였다. 배추에 대한 관행의 질소 처리량은 \(32\)kg/\(10\)a 이며 밑거름으로 \(11\) kg/\(10\)a 웃거름으로 \(7\)kg/\(10\)a 씩 \(3\)회에 걸쳐 처리하였다. 인산은 \(7.8\)kg/\(10\)a 를 밑거름으로 칼륨의 경우 \(11\) kg/\(10\)a 를 밑거름 \( 8.8 \mathrm{~kg} / 10 \mathrm{a} \) 를 웃거름으로 처리하였다. 포트 실험의 경우 urease 억제제인 목초액과 목초액의 chloroform 분획의 사용 효과를 비교하기 위해 총 \(6\) 가지의 처리구를 두었다. 목초액의 chloroform 분획을 목초액에 녹여서 만든 것을 유효성분(AI)이라고 명명하였다. 배추는 관행적으로 질소를 \(4\)번에 나누어 처리하고 그 비율을 \(3-1-1-1\)로 공급한다. 따라서 관행과 같이 요소를 \(4\)회에 걸쳐 처리한 것(Conventional treatment)을 대조구로 하였다. 질소 표준시비량의 \( 50 \% \) 와 목초액을 처리한 것(LPA, HPA, 질소 표준시비량의 \( 50 \% \) 와 목초액의 chloroform 분획을 처리한 것(LAI, HAI, 질소 표준시비량의 \( 50 \% \) 를 기비로 준 것 (Urea)을 처리구로 하였으며 각각은 Table \(3\)과 같이 처리하였다. P, K의 경우, 모든 처리구에 대해 표준시비량으로 처리하였다. 관행의 경우 배추 모종을 심고 \(3\)주 경과 후부터 \(10\)일 간격으로 요소를 처리하였으며 모든 처리구는 \(3\)반복으로 하였고 온실내에 무작위로 배치하였다.</p><p>배추는 마지막 비료를 처리하고 \(12\)일 후에 수확하였으며, 수확 후 잎과 뿌리를 분리해 생체중을 재고, \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 오븐 \( (\mathrm{ON}-11 \mathrm{E} \), JeioTech, Daejeon, Korea)에서 건조하여 건물중을 잰 후 분쇄기를 이용하여 잘게 분쇄하였다. 식물체 원소 함량 분석을 위해, 분쇄한 식물체 잎 \(0.5\)g 을 \( 100 \)mL 삼각플라스크에 넣어 농질산 \( 5 \)mL를 첨가해 \(16\)시간 반응시키고 \( 140^{\circ} \mathrm{C} \) 의 흑연 가열판(OD-\(98\)-\(002\), Od lab, Gwangmyeong Korea)에서 식물체가 완전히 분해되도록 가열하였다. 남은 용액은 식힌 후 \( 50 \)mL로 희석하였다. 희석한 용액을 \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) syringe 필터로 필터한 후 CA, K, Ke, Mn, Zn, P, S의 함량을 Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectroscopy (ICP-OES, Avio \(500\), PerkinElmer, Waltham, MA, USA)로 측정하였다. 배추의 총질소 함량을 분석하기 위해 건조시켜 분쇄한 잎 \( 0.5 \mathrm{~g} \) 을 \( 250 \mathrm{~mL} \) 유리관에 넣고 분해촉매제(Kjeltabs, Foss)와 황산 \( 20 \mathrm{~mL} \) 를 넣은 후 \( 420^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \(2\)시간 가열하였다. 분해액을 식힌 후 켈달 분석장치(Kjeltec \(2300\), Foss)를 이용하여 질소 함량을 분석하였다. 배추 수확 후 토양을 건조하여 초순수로 \( 1: 5 \) 의 비율로 추출하여 pH와 EC를 분석하였으며 KCl 로 추출하여 켈달법으로 교환성 암모늄태 질소 함량을 분석하였다.</p>
목초액에서 urease를 저해하는 유효성분을 분리하기 위해 무엇으로 분획하였는가?
chloroform