<h1>재료 및 방법</h1><h2>동물 및 재료</h2><h3>동물</h3><p>동물은 체중 20g 내외의 I.C.R계 생쥐(대한실험동물 센터, 한국)를 구입하여 고형사료(삼양 배합사료 실험동물용, 삼양유지사료, 한국)와 물을 충분히 공급하면서 실험실 환경(온도: \( 20 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도: \( 40 \sim 60 \% \), 명암: 12 시간 light/dark cycle)하에서 2주 적응 후 사용하였다.</p><h3>재료</h3><p>본 실험에 사용된 약재는 동의대학교 부속한방병원에서 구입하여 정제한 후 사용하였으며 처방은 《方藥合編》에 기재된 補中益氣湯으로, 1첩 분량은 Table Ⅰ 과 같다.</p><h3>검액의 조제 및 투여</h3><p>上記한 補中㿽氣湯 20 첩 분량 \(488 \mathrm{~g} \).을 \( 5,000 \mathrm{ml} \) round flask에 넣고, \( 3,000 \mathrm{ml} \) 정제수를 가한 뒤 3 시간 가열 전탕한 후 여과한 검액을 동결건조기로 완전 건조시켜 보중익 기탕물 추출물 \( 115 \mathrm{~g} \) 을 얻었다.</p><h3>試藥 및 機哭</h3><p>Compound \( 48 / 80 \) 은 Sigma, Picryl Chloride는 동양화학, 면양적혈구(SRBC : Sheep Red Blood Cell)는 Media, Hank's Balanced Salt Solution은 Ginbco에서 구입하였으며 기타 시약은 시판 특급을 사용하였다. 기기는 caliper(Mitutoyo, Tokyo, Japan)를 사용하였다.</p><h2>방법</h2><p>항 알레르기에 대한 실험을 즉시형과 지연형으로 구분하여 시행하였다.</p><h3>즉시헝 알레르기 실험</h3><p>(1) Compound 48/80 유발 전신성 아나필락시스</p><p>Amir 등의 방법에 따라 실험하였다. 즉 비만세포의 탈 과립제로 Compound \( 48 / 80(8 \mu \mathrm{g} / \mathrm{g} \), 체중)을 생쥐 복강 내에 투여하기 60 분전에 생리식염수로 조제한 보중익기탕을 0.01,0.05,0.10,0.05 및 \( 1.0(\mathrm{mg} / \mathrm{g} \), 체중)의 용량으로 복강 내에 주사하였다. 치사율은 아나필락시를 유발시킨 후 60 분 동안 관찰하였다. 시간 의존 실험으로 보중익기탕 ( \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{g} \), 체중)을 Compound \( 48 / 80 \) 투여 1 시간 전, 5 분전과 10 분 후에 각각 복강 내에 주사하고 치사율을 관찰하였다.</p><p>(2) 비만세포 탈과립의 조직화학적 연구</p><p>ICR계 생쥐에 보중익기탕을 Compound \( 48 / 80(8 \mu \mathrm{g} / \mathrm{g} \), 치중)를 투여하기 1 시간 전에 \( 1.0(\mathrm{mg} / \mathrm{g} \), 체중 \( ) \) 의 용량으로 복강 내로 주사하고 compound \( 48 / 80 \) 을 주사한 후 15 분이 경과하여 경추탈구법으로 도살하였다. 복벽 중앙선을 소절개하여 메탄올로 20여분간 고정한 후 고정된 장간막을 얻어 슬라이드 위에 놓고 수세하고 \( 0.25 \% \) toluidine blue\( (\mathrm{pH} 4.0) \) 로 염색하고 \( \mathrm{X} 400 \) 시야에서 검경하여 아래와 같이 탈 과립지수를 산출하였다.</p><p>탈과립지수 \( (\%)=[( \) 정상 \( \times 0)+( \) 경도 \( \times 50)+( \) 강도 \( \times 100)] \) / 비만세포의 총수</p><h3>지연형 알레르기 실험</h3><p>(1) Picryl chloride(PC)에 의한 접촉성피부염증 반응</p><p>(1) 항원의 조제</p><p>감작항원으로는 \( 1 \% \mathrm{PC} \) (동양화학, 일본) ethanol 용액을 사용하였고 유발항원으로는 \( 1 \% \mathrm{PC} \) olive 용액을 사용하였다.</p><p>(2) PC에 의한 접촉성피부염증반응 측정과 검액투여</p><p>Asherson and Ptak[3]의 방법에 준하여 횐쥐 10 마리를 \( 1 \% \mathrm{PC} \) ethanol 용액 \( 20 \mu \ell \) 을 左耳에 도포하여 감작시 켰으며, 감작 후 7일에 1% PC olive 용액 \( 20 \mu \ell \) 을 右耳介에 도포하여 반응을 야기시키고 반응야기 전과 24시간 후에 耳介의 두께차롤 caliper (Mitutoyo, Tokyo, Japan)를 사용 하여 측정하였다.</p><p>검액은 1 일 1 회 감작시킨 날부터 유발시킨 날까지 8 일 간 經口投與 하였다.</p><p>(2) 면양적헐구(SRBC)에 의한 지연형 족부종반응</p><p>(1) 항원의 조제</p><p>감작항원과 유발항원으로는 면양적혈구(Korea Media Corp.)를 Hank's Balanced Salt Solution (HBSS: Ginbco, U.S.A)으로 세척한 후 적혈구 수를 조정하여 사용하였다.</p><p>(2) 측정과 검액 투여</p><p>생쥐 10마리를 1군으로 하여 대조군과 실험군으로 나누 고 생쥐 1 마리당 면양적혈구 \( 2 \times 105 \) cell를 미정맥에 주사 하여 감작시킨 후 4 일째 생쥐 1 마리당 면양적혈구 108 cell 를 왼쪽 발바닥에 피하주사하여 부종을 유발시켰다. 유발 야기 전과 24시간 후의 발의 두께차를 caliper(Mitutoyo, Tokyo, Japan)를 사용하여 측정하였다. 검액은 1 인 1 회 감작시킨 날부터 유발시킨 날까지 6 일간 經口投與 하였다.</p><h3>통계처리</h3><p>성적은 평균치 \( \pm \) 표준오차로 나타내었으며, 평균치간의 유의성은 Student's t-test를 이용하여 검정하였고 \( \mathrm{p} \) 값이 0.05미만일 때 유의한 것으로 판정하였다.</p>
上記한 補中㿽氣湯 20 첩 분량을 동결건조기로 완전 건조시켜 추출물 몇 \( \mathrm{~g} \)을 얻었는가?
\( 115 \mathrm{~g} \)