<h1>재료 및 방법</h1><h2>재료 및 시약</h2><p>본 실험에 사용한 구성 약재는 2016년 2월 (주)휴먼허브(Gyeongsan, Korea)에서 구입하여 실험 재료로 사용하였다. 효능 실험과 세포 독성 측정 시약 1-1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl(DPPH), 2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)(ABTS), potassium persulfate, porcine pancreas elastase, L-ascorbic acid, L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), n-succinyl-(L-Ala) \( { }_{3}-\mathrm{p} \)-nitroanilide, collagenase from Clostridium histolyticum, 3-[4,5-dimethylthiazol-2-y1]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT)은 Sigma chemical Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다. 세포 배양에 사용되는 dulbecco’smodified eagle medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS), penicillin/streptomycin, \( 0.25 \% \) trypsin-EDTA, \( 0.4 \% \) trypan bluestain은 gibco BRL Co. (Grand Island, New York, USA), haemacytometer (Marienfeld, Lauda-Königshofen, Germany)를 구입하였다. Melanin 생성 유발을 위한 human tumor necrosis factor-\( \alpha \) with carrier, sterile (TNF- \( \alpha \) )는 Cell Signaling사(Danvers, MA, USA)에시 구입하여 사용하였다. 주름 및 항산화활성 측정을 위해 procollagen type I C-peptide kit (Takara Shuzo, Kyoto, Japan)와 ROS-Glo \( { }^{\mathrm{TM}}\) \(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) assay kit (Promega, Madison, WI, USA)를 구입하여 사용하였나. Primary antibody인 MMPs 및 tyrosinase, MITF, TRP-1, TRP-2와 secondary antibody는 Santa cruz technology Inc. (Santa Cruz, CA, USA)에서 구입하였다.</p><h2>시료 추출 및 용매 분흭</h2><p>인삼 \( 8 \mathrm{~g} \), 황기, 백출, 진피, 당귀, 숙지황, 감초를 각각 \( 4 \mathrm{~g} \), 백복령, 백작약을 각각 \( 2 \mathrm{~g} \) 계량하고, 이것의 \(3\)회 분량의 시료 중량에 \(10\)배의 물을 넣어 환류추출기에서 \(3\)시간씩 \(3\)회 반복 추출한 다음 filter paper (Whatman No. 2, Tokyo, Japan)로 여과하고 감압농축기로 농축하여 추출물 \( 29.3 \mathrm{~g} \) 을 얻었다. 그중 \( 14 \mathrm{~g} \) 을 가지고 순차적 용매분획법을 이용하여 \( \mathrm{n} \)-hexane 분획물( \( 0.67 \mathrm{~g}) \), ethyl acctate 분획물( \( 1.1 \mathrm{~g}) \), butanol 분획물(4.57 g) 최종 물분획물(7.5 g)을 확보하였다.</p><h2>세포배양</h2><p>본 실험에 사용된 세포주는 fibroblast인 CCD-986sk cell과 melanocyte인 HEM cell을 American Type Culture Collection(ATCC, Rockville, MD, USA)에서 구입하여 사용하였다. 세포의 배양은 \( 10 \% \) FBS 와 \( 1 \% \) penicillin/streptomycin \( (100 \mathrm{U} / \mathrm{mL}) \)을 첨가한 DMEM 배지와 human melanocyte growth medium(CEFO, Seoul, Korea)에 \( 1 \% \) pericillin/streptomycin \( (100 \mathrm{U} / \mathrm{mL}) \)를 첨가한 배지를 각각 사용하였으며, \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator 에서 배양하였다.</p>
본 실험에 사용하기 위하여 구성한 약재의 구매처는 어디인가?
(주)휴먼허브(Gyeongsan, Korea)