<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 재료</h2><p>본 연구에서 사용한 콩은 2006년 가을에 수확한 서목태를 사용하였다. 이들 품종은 경상대학교 자원식물환경학부 유전육종연구실에서 작물유전체 기능연구 및 바이오그린 사업연구비의 협조를 얻어 유전자 조작이 아닌 전통적인 유전·육종기술을 이용하여 육종된 콩 품종의 일부를 분양받아 사용하였다.</p><h2>청국장의 제조</h2><p>두아청국장의 제조는 콩을 선별, 세정 및 수침한 다음 발아시켜 싹의 길이가 \( 20 \mathrm{mm} \) 정도 균일하게 성장하였을 때 \( 121^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30 분 동안 증자하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 의 항온실에서 발효를 행하였다. 대조구인 전통청국장은 냉수에 콩을 12시간 수침시킨 후 물빼기를 하고 stainless steel에 담아 두아청국장 제조과정과 동일하게 발효시켰다.</p><h2>환원당</h2><p>동결건조한 각 청국장 시료 \( 10 \mathrm{g} \)씩을 \( 250 \mathrm{ml} \) 삼각플라스크에 넣고 증류수 \( 90 \mathrm{ml} \) 을 첨가하여 2시간 동안 교반한 다음 원심분리\( (8,000 \times g, 10 \mathrm{min}) \)하여 얻은 상등액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 취하여 DNS법으로 환원당 함량을 측정하였다.</p><h2>질소함량의 정량</h2><p>총질소는 micro Kjeldahl법으로 측정하였으며, 수용성질소함량은 청국장 \( 5 \mathrm{g} \), 증류수 \( 200 \mathrm{ml} \), 실리콘 소포제 1방울을 첨가하고 3분간 마쇄한 다음 \( 250 \mathrm{ml} \)로 정량한 후 \( 3,000 \mathrm{rpm} \)으로 30 분간 원심분리하여 얻은 상등액 \( 25 \mathrm{ml} \) 를 취하여 micro Kjeldahl법으로 측정하였다. 아미노태 질소함량은 청국장 시료 \( 2 \mathrm{g} \)을 취하여 기준미증분석법에 준하여 측정하였다.</p><h2>효소활성</h2><p>Protease 활성은 Anson 등의 방법에 준하여 측정하였으며, protease \(1\mathrm{unit}\)는 조효소액 \( 1 \mathrm{ml} \)가 1분간 \( 1 \mu \mathrm{g} \) 의 tyrosine을 생성하는 효소의 양으로 나타내었다. \( \beta \)-Glucosidase 활성은 Peralta 등의 방법을 변형하여 조효소액을 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5분간 미리 활성화시켜 사용하였다. \( 5 \mathrm{mM}\) -\(p\)-nitrophenyl- \( \beta \)-D-glucopyranoside (sigma chemical Co., U.S.A)를 함유한 50\( \mathrm{mM} \) potassium phosphate buffer \( (\mathrm{pH} \) 6.0) \( 0.5 \mathrm{ml} \)에 조효소액 \( 0.2 \mathrm{ml} \) 를 가하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 반응시킨 후 \( 1 \mathrm{ml} \)의 sodium tetraborate 포화용액으로 반응을 중지시켜 유리되는 \(p\)-nitrophenol의 양을 \( 405 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 효소 활성 \(1\mathrm{unit}\)는 1분 동안에 \(p\)-nitrophenol \( 1 \mu \mathrm{mole} \)을 생성하는 효소의 양으로 정의하였다. Glucoamylase 활성은 시험관에 \( 0.05 \mathrm{M} \) acetate buffer ( \( \mathrm{pH} \) 4.8)에 1% 가용성전분을 녹인 기질용액 \( 5 \mathrm{ml} \) 와 조효소액 \( 1 \mathrm{ml} \)을 첨가 한 후 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30 분간 반응 시키고 그 반응액 \( 1 \mathrm{ml} \)을 취하여 환원당량을 DNS으로 측정하였다. 효소활성 \(1\mathrm{unit}\)는 1분 동안에 \( 1 \mu \mathrm{mole} \)의 glucose를 생산하는 효소량으로 나타내었다.</p><h2>Isoflavone 분석</h2><p>Isoflavone 분석은 동결건조하여 분쇄한 시료 \( 1 \mathrm{g} \)에 \(0.1 \mathrm{NHCl}\) \( 2 \mathrm{ml} \)와 acetonitril (HPLC grade, 99.9%) \( 10 \mathrm{ml} \)를 첨가한 다음 실온에서 2시간 교반한 후 여과지(No. 4)로 여과하여 그 여과액을 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 이하에서 진공농축 시켜 \(80\%\) methanol (HPLC grade, \(99.9\%\)) \( 10 \mathrm{ml} \)에 용해시킨 다음 \( 0.45 \mathrm{\mu m} \) membrane filter로 다시 여과하여 HPLC의 분석시료로 사용하였다. Isoflavone isomer 분석을 위한 HPLC (LC-10AD, Liquid Chlomatograph)의 칼럼은 YMC-pack ODS-AM-303 (\( (5 \mu \mathrm{m} \), \( 25 \mathrm{cm} \times 4.6 \mathrm{mm} \) i.d)을 사용하였고, UV/VIS Detector 유속은 solvent \( 1 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \)으로 하였다. 파장은 \( 254 \mathrm{~nm} \)에서 3 차 증류수의 \(0.1 \%\) glacial acetic acid를 용매로 하여 0.1 glacial acetic acid / acetonitrile linear을 이동상으로 하여 linear gradient법으로 분석하였다. Isoflavone의 표준품은 일본 후지코 주식회사에서 구입하여 사용하였다.</p><h2>Anthocyanidin 함량 측정</h2><p>Anthocyanidin 성분은 동결건조하여 분쇄한 각 청국장 시료 \( 2 \mathrm{g} \) 을 추출용매(Ethanol : Water : HCl=85: 13: 2) 40\( \mathrm{ml} \) 에 혼합하여 암실에서 24시간 교반하여 추출한 다음 그 추출용액을 원심분리 \( (4,500 \times g, 30 \mathrm{~min}) \)하여 \( 100 \mathrm{ml} \)로 정용한 후 \( 660 \mathrm{nm} \)에서 optical density (O.D.)를 측정하여 cyanidin-3-glucoside 함량으로 나타내었다.</p>
본 연구에서 사용한 콩은 어떤 방식으로 육종되었니?
유전자 조작이 아닌 전통적인 유전·육종기술을 이용하여 육종