<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험동물, 식이조성 및 사육조건</h2><p>실험동물은 6주령의 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 (주)대한 바이오링크(충북 음성, 한국)로부터 구입하여 온도 \( 22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 50 \pm 5 \% \), 명암주기 12 시간(명주기: 07:00 19:00)이 자동 설정된 동물 사육 실에서 사육하였다. 식이 조성은 전보에 준해서 조제하였으며, 육종에 의해 Cordycepin 함유량을 높인 C. militaris (JLM0636), P. japonica와 C. militaris 분말을 청원농산(김해, 경남)에서 제공받아 각각 \( 3 \% \) 식이에 첨가 하였다.</p><p>본 실험에서는 체중이 동일하게 난괴법으로 분류하여 정상군(N), 사염화탄소 투여 대조군(C), 사염화탄소+P. japonica 투여군(CPJ), 사염화탄소+C. militaris 투여군(CCM), 사염화탄소+Cordycepin 고함유 C. militaris (JLM0636) 투여군(CCMa)으로 나누어, 식이와 물은 4 주간 자유섭취시켰다. 정상군(N)을 제외한 대조군 및 P. japonica, C. militaris 및 육종에 의해 Cordycepin 함유량을 높인 C. militaris (JLM0636) 투여군은 사염화탄소와 올리브유를 1: 1 비율로 섞어 체중 \( 100 \mathrm{~g} \) 당 \( 0.1 \) \( \mathrm{ml} \) 을 해부하기 48시간 전, 24시간 전 두번에 걸쳐 복강 주사하여 간 손상을 유발하였다. 사육 기간 중 식이 섭취량은 매일 측정하였고, 체중은 3일에 한번씩 일정한 시간에 측정하였다. 본 연구는 동아대학교 동물실험윤리심의위원회의 승인(승인 번호: DIACUC-승인-11-24)을 받아 진행하였다.</p><h2>동물실험, 시료 채취 및 분석시료 조제</h2><p>동물실험은 4주간 각 군별로 조제사료를 급여하면서 사육한 후, 실험 최종일 12시간 이상 절식시킨 후 디에틸에테르로 가볍게 마취시켜 해부하였다. 개복 후 복부 대동맥으로부터 채혈하여 혈액을 채취하고, 약 30분간 실온에 방치시킨 후 \( 3,000 \mathrm{rpm} \) 에서 20분간 원심분리 하여 혈청을 얻어 혈청 효소 분석에 제공하였다. 채혈 후 각 조직을 적출하여 차가운 \( 0.9 \% \)생리식염수로 세척하고 여과지로 물기를 제거한 후 무게를 측정하고 분석시료로 제공 하였다.</p><h2>혈청 효소 분석</h2><p>혈청 중의 간장의 손상 상태를 파악하는 몇몇 효소로 알려진 aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkalinephosphatase (ALP) 그리고 lactate dehydrogenase (LDH) 활성은 의료전문수탁검사기관인 네오딘의학연구소(서울, 한국)에 의뢰하여 분석하였다.</p><h2>각 조직의 분획 조제 및 과산화지질 측정</h2><p>각 조직으로부터 homogenate 분획 조제는 조직을 일정량 취해 \( 250 \mathrm{mM} \) sucrose를 함유한 homogenate 용액을 4 배량 첨가하여 마쇄 균질액을 제조하였다. 분획한 homogenate 생체막의 과산화지질 함량은 전보의 방법에 준하여 정량 하였다. 즉, 각 조직 homogenate 분흭 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)에 각각 thiobarbituric acid (TBA)시약 \( 2 \mathrm{ml} \)을 가하여 잘 혼합하고, 수조상에서 30 분간 가열한 후 실온에서 방냉하여 \( 3,000 \mathrm{rpm} \)으로 10 분간 원심분리 한 상등액을 \( 535 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 과산화지질 함량은 malondialdehyde를 \( \mathrm{nmol} / \mathrm{g} \) 으로 나타내었다.</p><h2>미네랄 함량 측정</h2><p>각 조직의 미네랄 함량은 A.O.A.C. 분석 방법에 준하여 측정하였다. 즉, 간 조직 \( 1 \mathrm{~g} \) 을 각 \( 550^{\circ} \mathrm{C} \) 회화로에서 3시 간회화 시킨 후 \( 6 \mathrm{~N}\) HCl에 용해시켜 완전히 산분해시켜 수욕상에서 산을 완전히 제거하고, 이 건고물에 \( 3 \mathrm{~N}\) HCl 를 가하여 Whatman No. 4 여과지로 여과하여 원소 종류에 따라 각각 일정비율로 희석하여 원자흡광 분광광도계(AAnalyst 300,Perkin Elmer, Norwalk CT, USA)를 이용하여 측정하였다.</p><h2>Glutathione 함량 측정</h2><p>Glutathione 함량은 각 조직의 homogenate 분획 \( 0.2 \mathrm{ml} \) 에 3차 증류수 \( 0.3 \mathrm{ml} \) 과 \( 0.4 \% \) sulfosalicylic acid \( 0.5 \mathrm{ml} \) 를 가하여 혼합하고 원심분리 시킨 뒤 상등액 \( 0.3 \mathrm{ml} \) 에 5,5'-dithio-bis(2-nitrobenzoic acid) (DTNB) 발색시약을 첨가하여 \(412 \mathrm{nm} \) 흡광도에서 측정하여 glutathione의 표준 검량 곡선에 의해 함량을 산출하였으며 간 조직 \( \mathrm{g} \) 당 \( \mathrm{mg} \) 으로 표시하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>실험으로부터 얻어진 결과치는 one-way ANOVA 검정에 의한 평균치와 표준오차 \( (\operatorname{mean} \pm \mathrm{SE}) \)로 표시하였으며, 각 실험군 간의 유의성 검증은 Duncan's multiple range test로 하였다.</p>
6주령의 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 어디에서 구입하였는가?
(주)대한 바이오링크