<p>간섬유화(Hepatic fibrosis)는 만성적인 간 손상 후에 간의 상처 치료 반응으로써, 세포외기질의 과모한 축적으로 정의될 수 있다. 간섬유화는 간경변증, 간부전, 간세포암을 유발하며 사망에까지 이르게 한다. 말기 간섬유화 즉, 간경변증은 대부분이 간암으로 발전이 되며 세계적으로 높은 질병률과 사망률을 보인다. 이와 같은 만성 간 질환의 대부분이 간섬유화로부터 시작 됨에 따라 만성 간 질환의 치료에 있어 간섬유화의 치료는 매우 중요하다. 간섬유화의 초기 단계에서, 간 내의 콜라겐(collagen), 파이브로넥틴(fibronectin), 엘라스틴(elastin) 등과 같은 세포외기질이 정상 간에 비해 6배 증가하게 되는데, 이 과정을 주도하는 것이 간성상세포(hepatic stellate cell, HSC) 이다. 휴지상태의 HSC 가 여러 자극에 의해 활성화 상태인 근섬유모세포 유사 표현형(myofibroblast-like phenotype)으로 전환되면서 세포외기질의 합성이 증가하게 된다. 간섬유화를 유도하는 또 다른 메커니즘에서는 활성산소가 증요한 역할을 한다. 정상적인 간에서는 생성된 활성산소를 제거하는 항산화 시스템이 작동하지만, 만성 간 질환의 상태에서는 항산화 활성이 감소할 뿐만 아니라 활성산소 생성이 증가하여 산화스트레스가 발생이 되고 그 견과 HSCs 의 활성화를 유도된다. 최근 들어 NADPH oxidase (NOX) 가 간섬유화에서 핵심적인 중재자로 인식 되고 있다. NOX 는 산화스트레스를 생성하고 HSCs, 쿠퍼 세포(Kupffer cell), 대식세포(macrophage)를 활성화 함으로써 간 손상과 간 섬유화를 조절한다.</p><p>간섬유화를 일으키는 요인 중 하나인 B 형 간염 바이러스 (hepatitis B virus, HBV)는 진세계적으로 약 20 억명이 감염되어 있고 3 억 6천여명이 만성 B 형 간염 상태이며, 매년 50-70만명의 사망자를 발생시킨다. 또한 간경변증의 삼분의 일, 간세포암의 절반이 만성 B 형 간염에 의한 것이라는 보고가 있다 . B형 간염 바이러스에서 발현되는 Hepatitis B X (HBx) 단백질은 감염 초기 단계 시 바이러스 생명 주기, 바이러스 유전자 복제에 필수적인 역할을 하고 있다. 그러나 B형 간염 바이러스가 간섬유화를 유도하는 자세한 기전은 잘 알려져 있지 않다. 따라서 본 연구에서는 B형 간염 바이러스 특히 HBx 가 간섬유화를 유도하는 메커니즘을 관찰하고자 하였다.</p><p>실험에 사용된 세포는 인간 간암세포주 Huh7으로 10 \( \% \) fetal bovine serum이 첨가된 Dulbecco's modified Eagle's medium 을 이용하여 37\( ^{\circ} \mathrm{C} \), 5\( \% \) \(\mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 배양하였다. Huh7 세포에 HBx 를 형질진환하기 위해서 HBx 유전자를 함유하는 재조합 pGEM 플라스미드를 *** 박사님(Jeju University, Jeju, Korea)으로부터 제공받았다. 제공받은 재조합 플라스미드를 Xhol과 EcoRI의 인식 부위를 함유하는 프라이머를 이용하여 HBx 유진자 절편(gene fragment)을 PCR을 통해 증폭하였다. 이후 pcDNA3.0 vector로 HBx-expressing 재조합 플라스미드 pcDNA3.0-HBx 플라스미드를 생성하여 Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 제조사의 지시에 따라 형질진환을 시행하였다.</p><p>형질진환 48시간 후에 TRIzol 용액을 500\( \mu \mathrm{L} \) 를 가해 4\( ^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 표반기에 30분간 반응시킨 후 scraper로 RNA를 걷어 microtube에 chloroform과 함께 넝어주고 10분 간 실온에서 방치하였다. 그리고 원심 분리하여 상층액을 세 튜브로 옮긴 후 이소프로필알콜을 가하여 실온에서 10 분간 반응시킨 다음 다시 원심 분리하였다. 원심 분리 후 상충액을 버리고 침전물에 70\( \% \) 알코올을 가하여 원심 분리하는 과정을 2번 반복 수행하였다. 상충액을 버리고 침전물을 공기 중에서 건조한 후 DEPC 용액으로 침전물을 현탁 시킨 후 \( 1 / 50 \) 로 희석하여 정량 하였다. 정량 결과를 통해 2\( \mu \mathrm{g} \) 의 RNA 를 사용하여 cDNA 를 합성하였다. 합성된 cDNA는 -20\( ^{\circ} \mathrm{C} \) 에 냉동보관하며 사용하였으며 중합효소 연쇄반응에 이용하였다.</p>
활성산소가 증가하면 간섬유화가 유도될 수 있어?
YES