<h1>재료 및 방법</h1><h2>공시동물 및 시험설계</h2><p>본 시험에 공시된 동물은 육용계 수컷 1일령 Ross종 162수를 (주)올품에서 구입하여 2일간 적응 기간을 거쳐 3일령에 본 시험에 이용하였다. 공시된 시험동물은 무작위로 선별하여 대조군(Control, 표준밀도)과 고밀도군(High stocking denssity, HSD; 고밀도) 으로 배치하여 본 대학교 종합농장 동물사육장에서 5주 동안 케이지 사육을 실시하였다. 대조군 54수의 사육밀도는 \( 495 \mathrm{~cm}^{2} \) /수(닭 사육시설 소요면적 농림부 고시 제2004-89호에 준함), 고밀도군 108수는 \( 245 \mathrm{~cm}^{2} / \) 수의 사육밀도를 유지하였다. 점등은 전 사양기간 동안 24시간 종일 전등을 실시하였고, 계사온도는 일령별로 \( 32^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 22^{\circ} \mathrm{C} \)까지 본 대학의 육계 사육실 온도관리 프로그램에 따라 조절하였다.</p><h2>체중, 사료섭취량 및 사료요구율</h2><p>사양시험 동안 사양성적(성장 및 증체율, 사로섭취량 및 사료요구율) 및 폐사율을 조사하였다. 사료섭취량, 체중 및 사료 요구율은 시험개시와 종료(35일령)시에 측정하였다. 사료요구율은 시험기간 중 평균 사료섭취량을 평균체중 증가량으로 나누어 계산하였다.</p><h2>RNA 분리 및 real time PCR</h2><p>사양시험 종료 후 각 시험구당 평균체중에 가까운 8수씩을 처리별로 선정하여 간조직을 채취하여 액체질소에 급속 냉동하였다. 분석항목으로는 간에서 전사체 발현(global gene expression) 분석(Affymetrix Chicken Genome Array X, Affymetrix, Inc., Santa Clara, USA)과 real-time RT-PCR을 이용하여 microarray 발현 유전자들의 검증에 이용하였다. 각 처리군의 공시동물의 조직으로부터 RNeasy kit (Qiagen, Hilden, Germany)을 이용하여 total RNA를 추출하였다. cDNA 합성은 Improm-II Reverse Transcription System(Promega, Fitchburg, USA)를 이용하여 cDNA를 합성하였다.</p><p>Real-time PCR은 MyiQ (Bio-Rad, Herculus, USA)을 이용하여 시행하였다. Real-time PCR을 위한 primer의 정보는 Table 1에 제시하였다. PCR 반응물은 cDNA (\(10 \mathrm{~ng} \)) \( 5 ~\mu \mathrm{l} \), primer (\(5 \mathrm{~pmole} \))는 각각 \( 0.5 ~\mu \mathrm{l} \), SYBR Green (Bio-Rad) \( 10 ~\mu \mathrm{l} \), \( \mathrm{ddH_{2}{O}} \) \( 4 ~\mu \mathrm{l} \)를 넣어 총 \( 20 ~\mu \mathrm{l} \)가 되도록 혼합하고 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 3분간 최초 변성을 시킨 다음 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 15초간 변성, \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15초간 접합, \( 72^{\circ} \mathrm{C} \) 40초간 확장과정을 40회 반복하였다. 그리고 \( 94^{\circ} \mathrm{C} \) 1분간 재 접합 과정을 거친 후 \( 55^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1분간 재 확장 과정을 실시하였다. 마지막으로 \( 55^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 0.5^{\circ} \mathrm{C} \)씩 상승시켜 형광접합물질인 SYBR Green이 떨어져 나오는 마지막 과정을 수행하였다. 유전자 발현의 상대적 발현양은 \( 2^{-\Delta \Delta \mathrm{Ct}} \) 방법을 이용하였다.</p><h2>Microarray 분석</h2><p>표준사양군과 고밀도 사양군의 시험동물의 간에서 RNeasy kit (Qiagen)으로 추출한 total RNA는 DNALINK, INC(Seoul, Korea)에 의뢰하여 Affymetrix Chicken Genome Array X (Affymetrix, Inc.)로 microarray (Affymetrix GeneChip Scanner 3000 7G)를 실시하였다. 같은 처리구의 total RNA는 동일량을 각각 취하여 합한 다음 microarray 시료로 이용하였다.</p><h2>통계분석</h2><p>본 시험에서 얻어진 결과는 평균 \( \pm \)표준오차로 표시하였다. 통계분석은 Proc GLM을 이용하여 분산분석을 하였으며, 대조구와 처리구간 유의성 검정은 t-test를 이용하여 분석하였다.</p>
본 시험에 공시된 동물을 구입한 업체는 어디인가?
(주)올품