<h2>추출물 제조</h2><p>시료 \( 1 \mathrm{~g} \)와 \( 50 \% \) 주정 \( 20 \mathrm{~mL} \) 혼합하여 실온에서 \(12\)-\(14\)시간 추출한다. 이어 \( 15,000 \mathrm{~rpm} \)에서 \(15 \)분간 원심분리하고 상등액을 \( 0.45 ~\mu \mathrm{m} \)-membrane filter로 여과 후 총 phenolics, 총 flavonoids 및 항산화 활성 측정 시료로 사용하였다.</p><h2>총 phenolics 및 총 flavonoids 분석</h2><p>총 phenolics 함량은 Folin Denis법에 준하여 측정하였다. 제조한 추출물 \( 0.5 \mathrm{~mL} \)과 \( 25 \%\) \(\mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3}\) \(0.5 \mathrm{~mL} \)을 시험관에 가하여 \(3 \)분간 반응한다. 이어 Folin-ciocalteu phenol 시약 \( 0.25 \) \( \mathrm{mL} \)을 가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 온도로 \(1 \)시간 반응시켜 분광 광도계(UV-\( 1800\) \(240 \mathrm{V} \), Shimadzu Corp., Kyoto, Japan)를 이용하여 \(750 \mathrm{~nm} \)로 흡광도 값을 측정하였다. 함량은 gallic acid (GAE)로 작성한 표준곡선을 이용해 구하였다.</p><p>총 flavonoids 함량은 Park 등의 방법을 변형하여 측정하였다. 제조한 추출물 \( 0.5 \mathrm{~mL} \), diethylene glycol \( 1 \mathrm{~mL} \) 및 \( 1 \mathrm{~N} \) \( \mathrm{NaOH}\) \(0.01 \mathrm{~mL} \)을 시험관에 분주하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 온도로 항온수조에서 \(1 \)시간 반응시켜 분광 광도계를 이용하여 \( 420 \mathrm{~nm} \)로 흡광도 값을 측정하였다. 함량은 rutin (RE)으로 작성한 표준곡선을 이용해 구하였다.</p><h2>항산화 활성</h2><p>DPPH 라디칼 소거활성은 Hwang 등의 방법에 준하여 측정하였다. DPPH 용액 (\( 1.5 \times 10^{-4} \mathrm{M}\)) \(0.8 \mathrm{~mL} \)과 추출액 \( 0.2 \mathrm{~mL} \)를 시험관에 분주하여 암실에서 \(30 \)분 반응 후 분광 광도계를 이용해 \( 525 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도 값을 측정하였다. 음성 대조구는 시료 대신에 추출용매를 사용하였다.</p><p>ABTS 라디칼 소거활성은 \( 7 \mathrm{~mM}\) ABTS 용액과 \( 2.45 \mathrm{mM} \) potassium persulphate를 \(1:1\)로 혼합하여 \(12\)-\(16\)시간 동안 ABTS 양이온이 형성되도록 암실에서 방치하였다. 이 ABTS 용액을 메탄올을 이용해 \( 732 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도 값이 \( 0.7 \pm 0.02 \)가 되도록 희석하여 ABTS+ 용액을 제조하여 실험에 사용하였다. ATBS\(^{+} \) 용액 \( 0.9 \mathrm{~mL} \)과 추출물 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)을 시험관에 가하여 \(3 \)분간 반응 후 분광 광도계를 이용해 \( 732 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도 값을 측정하였다. 음성 대조구는 시료 대신에 추출용매를 사용하였다.</p><p>Hydroxyl 라디칼 소거활성은 Hwang 등의 방법에 준하여 측정하였다. 시험관에 시료 추출물 \( 1.2 \mathrm{~mL}\), \(10 \mathrm{~mM}\) \(\mathrm{FeSO}_{4} \)•\( 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)-EDTA 용액 \( 0.2 \mathrm{~mL}, 10 \mathrm{~mM} \) \(2\)-deoxylribose \( 0.2 \mathrm{~mL} \)과 \( 10 \mathrm{~mM}\) \(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}\) \(0.4 \mathrm{~mL} \)를 가하고 \( 37{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(4\)시간 반응하였다. 반응 후 이에 HPLC water에 용해시킨 \( 1 \% \) TBA와 \( 2.8 \%\) TCA를 각각 \( 1 \mathrm{~mL} \)씩 가하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(20 \)분간 가온하였다. 발색된 반응물을 냉각 후 분광 광도계를 이용하여 \( 525 \mathrm{~nm} \)로 흡광도 값을 측정하였다. 음성대조구는 시료 추출물 대신 PBS 용액을 취하여 실험하였다. 한편 모든 라디칼 소거 활성은 실험구와 음성대조구의 흡광도 차이를 백분율 (\( \% \))로 산출하였다.</p><p>\(\text{라디칼 소거 활성} ( \% ) \\=[1 -(\text{실험구 흡광도 값}/\text{음성대조구 흡광도 값})] \times 100 \)</p><p>FRAP 환원력 측정은 Lee 등 준하여 실험하였다. \( 30 \mathrm{~mM} \) acetate buffer (\( \mathrm{pH} ~3.6\)), \( 40 \mathrm{~mM}\) \(\mathrm{HCl} \)에 용해시킨 \( 10 \mathrm{mM} \) TPTZ 시약, 및 증류수에 용해시킨 \( 20 \mathrm{~mM}\) \(\mathrm{FeCl}_{3} \) 용액을 \( 10: 1: 1 \) \((\mathrm{v} / \mathrm{v} / \mathrm{v}) \)의 비율로 혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(15 \)분 반응하여 FRAP 측정 시약을 조제하였다. 시료 \( 50 ~\mu \mathrm{L} \)와 예비 반응시킨 FRAP 시약 \( 950 ~\mu \mathrm{L} \)를 시험관에 분주하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(15 \)분 반응시키고 분광 광도계를 이용하여 \( 590 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도 값을 측정하였다. 음성대조구 실험은 시료대신에 추출용매를 사용하였다.</p><h2>통계분석</h2><p>통계처리 실험 결과는 SPSS \( 12.0 \) package를 사용하여 분산 분석을 수행하였고 평균 \( \pm \) 표준편차로 나타내었다.</p>
phenolics 함량은 gallic acid로 작성한 표준곡선을 이용해 계산한다.
YES