<h1>재료 및 방법</h1><h2>시약 및 실험재료</h2><p>본 실험에서 사용한 조각자(stings of Gleditsia sinensis)는 2010년 3월 경남 마산시 (주)금강제약으로부터 제공을 받아실험에 사용하였으며, 항산화 활성 실험을 하기 위해 사용한 시약으로 Folin-Ciocalteau's phenol, 2.2-diphenyl-1-picrylhy-drazyl, hydrogen peroxide, Histopaque 1077, low melting point agaroses, normal melting point agarose Triton \( X-100 \), disodium salt ethylenediaminetetraacetic acid, Tris-buffer, sodium chloride, sodium hydroxide, ethidium bromide, po-tassium chloride, potassium phosphate, sodium hydrogen phosphate, sodium, \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) 등은 Sigma Chemical Co.에서 구입 하였다. 항당뇨 효과를 확인하기 위해 a-glucosidase 효소로 사용한 rat intestinal acetone pow-der 시약은 Sigma Chemical Co. 에서 구입하였고, glucose kit는 Bioclinical system에서 구입하였다. 그 외 연구에 사용된 여러 종류의 용매 및 시약은 모두 일급 이상의 등급을 사용하였다.</p><h2>시료의 추출</h2><p>조각자 \( 5 \mathrm{~g} \) 을 \( 100 \mathrm{ml} \) 의 methanol 또는 ethanol 용매에 첨가하여 상온에서 3일간 정치시켜 추출한 다음 여과지를 이용하여 여과를 한 후, 회전감압농축기 이용하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 감압 농축을 하였다.</p><p>Methanol 추출물은 GSM 그리고 ethanol 추출물은 GSE이라 명명을 하였다. 각각의 추출물은 항산화 활성 및 항당뇨 효과 실험을 위하여 DMSO와 methanol에 녹여 사용하였다.</p><h2>총 페놀 함량</h2><p>총 페놀의 함량은 Singleton과 Rossi의 방법을 실험에 맞게 변형하여 조각자 추출물인 GSM과 GSE 200 씨에 1N-Folin-Ciocalteau reagent 200 \( \mu \mathrm{l} \)를 첨가하여 3분 동안 실온에 방치한 후 \( 10 \% \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} 200 \mu \mathrm{l} \) 를 첨가 하여 암실에 1 시간 방치한 후 \( 13,400 \times g \) 에서 5 분 동안 원심분리 후 반응액을 690 \( \mathrm{nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 표준검정곡선은 gallic acid를 사용하여 나타냈으며, 총 페놀의 함량은 시료 \( 100 \mathrm{~g} \) 을 추출 용매에 녹여 나오는 페놀의 함량을 구하였다.</p><h2>DPPH 라디칼 소거능 측정</h2><p>조각자 추출물인 GSM과 GSE의 DPPH 라디칼 소거능 (radical scavenging activity, RSA)을 알아보기 위해 Thitilertdecha등의 방법을 실험에 맞게 변형하여 측정을 하였다. 추출한 시료 \( 20 \mu 1 \) 에 \( 0.2 \mathrm{mM} \mathrm{DPPH} \) 용액 \( 80 \mu 1 \) 를 첨가하여 10 초 동안 섞은 후 실온에서 10 분간 방치 후 \( 492 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p>
조각자 \( 5 \mathrm{~g} \) 을 \( 100 \mathrm{ml} \) 의 어느 용매 또는 ethanol 용매에 첨가하여 상온에서 3일간 정치시켜 추출하는가?
methanol