<h1>재료 및 방법</h1><h2>균주 및 보존</h2><p>본 연구에 사용한 균주는 Agrobacterium sp. ATCC 31750을 개량한 변이주로 평판배지에서 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)로 2일간 배양 후, \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하였고 2주마다 계대배양을 하면서 생체활성을 유지하였다.</p><h2>배지조성</h2><p>본 연구에 사용된 종배양 배지 조성은 sucrose \( 20 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \), yeast extract \( 5 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \), peptone \( 5 \mathrm{~g} / \mathrm{L}(\mathrm{pH} 7.0) \) 으로 조성하였으며 본 배양 배지 조성은 sucrose \( 40 \mathrm{~g} / \mathrm{L}, \mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 0.5 \) \( \mathrm{g} / \mathrm{L}, \mathrm{NH}_{4} \mathrm{Cl} 4 \mathrm{~g} / \mathrm{L}, \mathrm{KH}_{2} \mathrm{PO}_{4} 0.5 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \), 그리고 \( 10 \mathrm{~mL} \) 의 미량 원소 용액 \(( 0.1 \mathrm{N} \mathrm{~HCl} \ 1 \mathrm{L} \)에 \( 5 \mathrm{~g} \mathrm{FeSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 2 \mathrm{g} \mathrm{~MnSO}_{4} \cdot \left.\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 0.5 \mathrm{~g} \mathrm{CaCl}_{2}, 1 \mathrm{~g} \mathrm{ZnCl}_{2}, 1 \mathrm{~g} \mathrm{CoCl}{ }_{2} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\right) \) 을 녹여 조제한 후 초기 \( \mathrm{pH} \) 는 7.0으로 하였다. 연솝배양공정 개발을 위한 배지는 회분식 배양의 조성과 동일한 배지조성을 이용하였다. 배지는 \( 121^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 15 분간 멸균 후에 사용하였으며 반응기의 \( \mathrm{pH} \) 조절은 \( 2 \mathrm{~N} \mathrm{HCl}, 2 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \) 를 사용하였다.</p><h2>회분식 및 연속식 배양방법</h2><p>본 연구에서는 초기 회분식 배양에서는 본 발효의 \( 5 \% \)에 해당하는 종배 양액 \( 100 \mathrm{~mL} \)을 키우기 위해 flask에서 \( 120 \mathrm{rpm} \), \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 의 조건으로 17시간 동안 배양한 후 \( 1.9 \mathrm{~L} \)의 본 배지에 접종하였다. 본 배지의 초기 \( \mathrm{pH} \) 는 \( 7.0 \) 이고, 배양온도는 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 로 하였으며, 교반속도는 초기 \( 300 \mathrm{~rpm} \) 에서 \( 700 \mathrm{~rpm} \)으로 조절하였으며 통기량은 \( 1 \sim 2 \mathrm{vvm} \)으로 조설하여 배양하였다. 연속식 배양 공정은 세포가 최대 횔성을 갖게 되는 24시간 후부터 기질의 유입속도를 유량펌프를 사용하여 \( 0.18 \mathrm{~L} / \mathrm{hr} \)로 조절하여 최종 생산물의 농도를 일정하게 유지하였다.</p><h2>분석방법</h2><p>균체량은 원심분리기를 이용하여 \( 6000 \mathrm{~rpm} \)에서 15분동안 원심분리하여 침전된 균체를 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) dry oven에서 24시간 건조시켜 건조중량을 측정하였다. 그리고 최종 생산물인 glu-can은 에탄올에 침전시켜 회수하여 3회 증류수로 세척 후 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) dry oven 24시간 건조시켜 건조중량을 촉정하였으며, Sucrose 농도는 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl} \)을 이용하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 가수분해 시킨 후 dinitrosalicylic acid 방법을 이용하여 측정 하였다.</p>
본 배양 배지의 산성도는 얼마야?
7.0