<h1>재료 밎 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>실험에서 사용한 인삼(P. ginseng)의 열매는 2013년 2월에 농촌진흥청에서 제공받아 실험을 진행하였으며, 표본시료(KNPCL-HP-201302)는 경희대학교 생명과학대학 천연물화학실에 보관되어 있다.</p><h2>시약 및 기기</h2><p>Column chromatography (c.c.)용 silica gel \( \left(\mathrm{SiO}_{2}\right) \) resin은Kiesel gel 60 (Merck, Darmstadt, Germany)을 octadecyl \( \mathrm{SiO}_{2} \) (ODS)은 Lichroprep RP-18 (40-60 \( \mu \mathrm{M} \), Merck) 을 사용하였다. Thin layer chromatography (TLC)는 Kiesel gel 60F254와 RP-18 F254s (Merck)을 사용하였다. Nuclear magneticresonance (NMR) 스펙트럼은 \(400\mathrm{MHz} \) FT-NMR spectrometer(Varian Inova AS-400, Palo Alto, CA, USA)를 사용하였고,infrared (IR) spectrum은 Perkin model 599B (Perkin-Elmer,Waltham, MA, USA)로 측정하였다. Fast atom bombardmentmass spectrometry (FAB/MS)는 JEOL JMS-700 (Tokyo, Japan)을 사용하여 측정하였다. UV lamp는 Spectroline (ModelENF-240 C/F, Spectronics Corporation, Westbury, NY, USA)을 사용하였다. 세포독성 실험에서 사용한 배지 RPMI 1640와Penicillin-Streptomycin은 GIBCOBRL, Life Technologies Inc.(Grand Island, NY, USA)에서 구입하였다. Fetal bovine serum(FBS)은 Hyclone (Logan, UT, USA) 제품을 사용하였고, 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)와 dimethyl sulfoxide (DMSO)는 Sigma (St, Louis, MO,USA)에서 구입하였다.</p><h2>추출 및 분리</h2><p>건조한 인삼의 열매 \(6.3\mathrm{~kg} \) 을 \(80 \% \mathrm{MeOH} \) 수용액( \(30 (\mathrm{~L}) \))으로 실온에서 24시간씩 3회 반복 추출하였다. 얻어진 여액을 감압농축하여 \(1.4\mathrm{~kg} \)의 추출물을 얻었다. 얻어진 추출물은 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}(3.0 \mathrm{~L}) \)와 ethyl acetate \( (\mathrm{EtOAc}\), \(3.0 \mathrm{~L} \times 3), n \)-butyl alcohol n-\( \mathrm{BuOH}\), \( 2.6 \mathrm{~L} \times 3) \) 로 분배 추출하였다. 각 층을 감압농축하여 \( \mathrm{EtOAc} \) 분획( PGE, 75.0 \(\mathrm{~g})\),\( n-\mathrm{BuOH} \) 분획 (PGB, \(470.0 \mathrm{~g}) \) 및 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 분획( PGH, \(855.0 \mathrm{~g}) \) 을 얻었다. (PGE (75.0 \mathrm{~g}) \) 에 대하여\( \mathrm{SiO}_{2} \) c.c. \( (\phi \) \( 14.0 \times 16.0 \mathrm{~cm}, \quad \mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}=30: 1 \rightarrow \mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=15: 3: 1 \),각 60 \(\mathrm{~L}) \)를 실시하여, 총 24개의 분획( PGE-1-PGE-24) \)을 얻었다. 그 중에서 PGE-20분획 \( [1.6 \mathrm{~g} \), elution volume/total volume \( (\mathrm{Ve} / \mathrm{Vt}) 0.62-0.69] \) 에 대하여 \( \mathrm{SiO}_{2} \) c.c. \( \left(\phi 3.5 \times 12.0 \mathrm{~cm}, \mathrm{CHCl}_{3}-\right. \)\( \left.\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=13: 3: 1,3.0 \mathrm{~L}\right) \) 를 실시하여, 총 16개의 분획(PGE-20-1-PGE-20-16)을 얻었다. 이 중 PGE-20-7 분획\( (86.4 \mathrm{mg}, \mathrm{Ve} / \) \( \mathrm{Vt} 0.19-0.22) \) 에 대하여 ODS c.c. \( \left(\phi 2.0 \times 7.0 \mathrm{~cm}, \mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=\right. \) \( 2: 1,300 \mathrm{~mL}) \) 를 실시하여, 총 9개의 분획( PGE-20-7-1-PGE-20- 7-9) 을 얻었고, 화합물 1 (PGE-20-7-7, \(59.6 \mathrm{mg}, \mathrm{Ve} / \mathrm{Vt} 0.33- \) \( 0.61 \), ODS TLC \( \mathrm{R}_{\mathrm{f}} 0.5 \), \( \mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=7: 2 \) )을 분리하였다. PGE- 20-11 분획( \(835.5 \mathrm{ mg} , \mathrm{ Ve} / \mathrm{Vt} 0.48-0.69) \) 에 대하여 ODS c.c. ( \( \phi \) \( 4.0 \times 9.0 \mathrm{~cm}, \mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=3: 2 \rightarrow 4: 1 \), 각 \( \left.2.5 \mathrm{~L}\right) \) 를 실시하여, 총18개의 분획( PGE-20-11-1-PGE-20-11-18) \)을 얻었고, 화합물 2(PGE-20-11-16, \(49.8\mathrm{mg}, \mathrm{Ve} / \mathrm{Vt} 0.86-0.90 \), ODS TLC \( \mathrm{R}_{\mathrm{f}} 0.4 \), \( \left.\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=6: 1\right) \) 을 분리하였다. PGE-20-11-11 분획 ( \(84.0 \mathrm{mg}, \mathrm{Ve} / \mathrm{Vt} 0.28-0.43) \) 에 대하여 ODS c.c. \( (\phi 3.0 \times 5.0 \mathrm{~cm} \), acetone- \( \left.\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=2: 3,450 \mathrm{~mL}\right) \) 를 실시하여, 총 10개의 분획( PGE-20-11-11-1-PGE-20-11-11-10)을 얻었다. PGE-20-11-11-4 분획\( (54.0 \mathrm{mg} \), \( \mathrm{Ve} / \mathrm{Vt} \quad 0.34-0.48) \) 에 대하여 \( \mathrm{SiO}_{2} \) c.c. \( \left(\phi 1.5 \times 8.0 \mathrm{~cm}, \mathrm{CHCl}_{3}-\right. \) \( \mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=10: 3: 1,800 \mathrm{~mL} \)를 실시하여, 총 4개의 분획(PGE-20-11-11-4-1−PGE-20-11-11-4-4)을 얻었고, 화합물 3 (PGE-20-11-11-4-2, 41.0 \( \mathrm{mg}\), \( \mathrm{Ve} / \mathrm{Vt} \quad 0.43-0.69, \mathrm{SiO}_{2} \) TLC \( _{\mathrm{f}} \) \( \left.0.5, \mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=65: 35: 10\right) \)을 분리하였다. PGE-22 분획 \( (985.0 \mathrm{mg}, \mathrm{Ve} / \mathrm{Vt} 0.80-0.89) \) 에 내하여 \( \mathrm{SiO}_{2} \) c.c. \( (\phi 3.0 \times 12.0 \mathrm{~cm} \), \( \left.\mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=16: 3: 1,2.2 \mathrm{~L}\right) \) 를 실시하여, 총 18개의 분획(PGE-22-1−PGE-22-18)을 얻었다. PGE-22-16 분획 \( (205.5 \mathrm{mg} \), \( \mathrm{Ve} / \mathrm{Vt} 0.59-0.63) \) 에 대하여 ODS c.c. \( (\phi 3.0 \times 9.0 \mathrm{~cm}, \mathrm{MeOH}- \) \( \left.\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=2: 5,4.0 \mathrm{~L}\right) \)를 실시하여 총 20개의 분획 (PGE-22-16-1−PGE-22-16-20)을 얻었고, 화합물 4 ( PGE-22-16-4,\(7.3 \mathrm{mg}, \mathrm{Ve} \) \( \mathrm{Vt} 0.13-0.15\), ODS TLC \( \left.\mathrm{R}_{\mathrm{f}} 0.5, \mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=1: 2\right) \) 와 화합물5 (PGE-22-16-17, \(39.7 \mathrm{mg}\), \( \mathrm{Ve} / \mathrm{Vt}\) 0.84-0.87, ODS TLC \( \mathrm{R}_{\mathrm{f}} \) 5 (PGE-22-16-17, \(39.7 \mathrm{mg}\), \( \mathrm{Ve} / \mathrm{Vt} \) 0.84-0.87, ODS TLC \( \mathrm{R}_{\mathrm{f}} \) \( \left.0.5, \mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=1: 1\right) \)를 얻었다.</p>
건조한 인삼의 열매를 수용액으로 실온에서 24시간씩 3회 반복 추출하였는 데 여기서 사용된 수용액은 무엇인가요?
\(80 \% \mathrm{MeOH} \) 수용액