<h1>재료 및 방법</h1><h2>추출물의 제조</h2><p>본 실험에서 사용한 천년초(Opuntia humifusa) 열매는 2010년 10월 전남 여수시 돌산읍 라파엘 농장에서 구입하여 물로 \( 4\sim5 \)회 씻어 가시와 불순물을 제거하였다. 세척된 천년초 열매는 동결 건조하여 다시 씨와 껍질로 분리 하였다. 분리된 천년초 씨(Opuntia humifusa seed, OHS)를 분쇄하고 물 \( 2 \mathrm{l}\)를 가해 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)에서 4시간 추출하여 분말화한 후 농도별로 식이에 첨가하였다.</p><h2>실험동물</h2><p>본 연구에서는 체중이 \( 250-350 \mathrm{~g} \)인 9주령의 Sprague-Dawley계 암컷 횐쥐를 (주)오리엔트 바이오에서 분양 받아 1주일간 환경에 적응시킨 뒤 실험에 사용되었다. 적응 후 난괴법(randomized complete block design)에 의해 군을 나누어 난소절제 수술(ovariectomy)을 하였고 비 난소절제 대조군에게는 sham-operation을 실시하였다. 수술 후 1 주일간 고형 사료를 주어 상처가 회복된 후 각 군으로 나누었다. 즉, 실험동물은 비 난소절제 대조군(SHAM), 난소절제 대조군(OVX-CON), 난소절제 후 천년초 씨 열수 추출물 \( 2\% \) 함유 식이군(OVX-OHS \(2 \%) \), 난소절제 후 천년초 씨 열수 추출물 \( 6 \% \) 함유 식이군(OVX-OHS \(6\%\))으로 각 7마리씩, 4군으로 나누어 매일 식이를 투여하며 7주간 사육하였다(Table 1). 실험기간 동안 식이 섭취량과 체중은 매일 일정한 시간에 측정하였으며 동물실험실의 사육조건으로 온도 \( 24\pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 50 \sim 55 \% \) 를 유지시켰고, 광주기, 암주기를 12 시간으로 조절하였다. 실험기간 동안 식이와 물은 모든 군에서 제한 없이 섭취하게 하였다.</p><h2>난소절제시술</h2><p>실험동물을 ether로 마취하여 심마취기에 이르면 늑골하부를 절개하여 난소를 제거하고 절개부는 봉합하였다. 수술 후 3일간 모든 군에게 일반 식이를 공급하며 상처를 회복시켰다. 또한 대조군 설정을 위하여 비 난소절제군은 복막 절개 단계까지 난소절제 수술과 같은 방법으로 시행하고, 양측의 난소를 노출 하였다가 절제하지 않고 복막 속으로 다시 넣어 난소 절제와 같은 스트레스를 주었으며, 다시 봉합하는 모의수술(sham operation)을 시행하여 이들을 대조군으로 사용하였다.</p><h2>실험 식이</h2><p>실험 식이는 기본적으로 조단백질 \( 18 \% \) 이상, 조지방 \( 6.7 \% \) 이상, 칼슘 \( 0.8 \% \) 이상, 인 \( 0.6 \% \) 이상을 포함하고 있는 실험동물 전형 고형사료(Lab Diet사의 5L79 rat용 사료)에 기준하였으며, 천년초 씨 추출물 첨가군은 분쇄된 사료에 천년초 씨 분말 \( 2 \% \)( \( 20 \mathrm{~g} / 1 \mathrm{~kg} \) basics diet)와 \( 6 \%(60 \mathrm{g} / 1 \mathrm{kg} \) basics diet)을 각각 첨가하여 제조한 후 고형사료 형태로 공급하였다.</p>
작게 부순 천년초 씨에 물 몇 \(\mathrm{l}\)를 첨가하였는가?
\( 2 \mathrm{l}\)