h2>분리균주의 단백질 발현 특성</h2><h3>1) Cell lysates의 제조</h3><p>균체를 TEAN (50 mM Tris, \( 1 \mathrm{mM} \) EDTA, \( 3 \mathrm{mM} \) sodium azide, \( 0.2 \mathrm{M} \mathrm{NaCl}, \mathrm{pH} \) 7.5)의 완충액에 현탁시키고 초음파 파쇄기로 파쇄하였다. \( 4,500 \times \mathrm{g} \) 로 20 분간 원심분리한 후 상청액을 cell lysate fraction으로 사용하였다. Cell lysates에 포함된 단백질량은 Bradford assay[3]로 정량하였고 SDS-PAGE를 수행하여 whole cell의 단백질 패턴을 분석하였다.</p><h3>2) 외막단백질의 분석</h3><p>Filip 등의 방법으로[9] 외막단백질을 추출해 내어 SDS-PAGE로 분석하였다[8]. 균체를 상기의 방법으로 파쇄한 후 얻어진 상청액을 \( 50,000 \times \mathrm{g} \) 에서 1 시간 동안 원심분리하여 막 침전물과 상청액의 원형질 단백질을 분리하였다. 침전물을 \( 1 \% \) sodium lauroyl sarcosine이 첨가된 TEAN 완충액에 현탁시켜 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30 분간 방치한 후 \( 100,000 \times \mathrm{g} \) 에서 1 시간동안 원심분리하여 용해성 내막 분획(inner membrane fraction) 과 불용성 외막분획(insoluble outer membrane fraction)을 분리하였다. 외막분획을 TEAN 완충액에 현탁하고, Bradford 법으로 정량한 후 SDS-PAGE를 실시하였다.</p><h1>결과 및 고찰</h1><h2>분리균주의 분리 및 생화학적 검사</h2><p>분리시료는 2002년 5월에서 7월 사이 부산과 대천 해수욕장 일대의 해수 및 해저질, 해산물을 대상으로 하였고 이들 시료를 증균용 배지에서 증균한 후 TCBS 배지에 도말하여 녹색의 작은 콜로니를 취하여 API \( 20 \mathrm{E} k \mathrm{k} t \) 의 검사를 실시한 결과 분리된 균주 중 다대포의 2균주와 대천의 1균주가 \( V \). vulnificus일 확률은 \( 93.7 \% \) 였고, 다른 대천의 1 균주는 \( 91.5 \% \), 다대포의 1균주는 \( 89.4 \% \) 로 나타났다(Table 1). 부산에서는 송정해수욕장과 서남해안의 특징을 나타내는 다대포해수욕장에서 분리 실험이 진행되었으나 송정해수욕장에서는 \( V \). vulnificus가 분리되지 않았고 다대포에서는 25개의 분리균주 중 3개 균주가 \( V \). vulnificus로 판정되었다. 서해안 대천 지역은 총 26균주의 분리균주 중 2개 균주가 \( V . v u l n i f i c u s \) 로 판정 되었다. V. vulnificus에 의한 패혈증은 우리나라의 매년 여름철 특히 해수온도가 \( 18.5 \sim 26.3^{\circ} \mathrm{C} \) 사이인 6-10월 사이에 환자가 집중적으로 발생한다. 특히 V. vulnificus는 염도가 비교적 낮은 강 하구에 많이 분포하므로 우리나라의 경우 남, 서해안지방의 환자 발생률이 동해안 지역의 10 배가 넘는 것으로 보고되고 있고 본 연구에서도 부산해역에서도 낙동강 하구지역인 다대포에서는 V. vulnificus로 판정된 균주가 분리되었지만 동해안의 특성을 지닌 송정해역에서는 발견되지 않았다.</p>
Filip 등의 방법으로 외막단백질을 추출해 내어 SDS-PAGE로 분석하였어?
YES