<h2>환원력 assay</h2><p>Oyaizu 의 방법에 따라 측정하였다. 시료 \( 1 \mathrm{ml} \)에 \( \mathrm{pH} 6.6\)의 \( 200 \mathrm{mM} \) 인산 완충액 및 \( 1 \% \)의 potassium ferricyanide를 각 \( 1 \mathrm{ml} \) 씩 차례로 가하여 교반한 후 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)의 수욕상에서 \(20 \mathrm{min}\) 동안 반응시켰다. 여기에 \( 10 \% \) TCA (trichloroacetic acid) 용액을 \( 1 \mathrm{ml} \) 가하여 \( 13,500 \times \)에서 \( 15 \mathrm{~min} \) 동안 원심분리하여 상등액 \( 1 \mathrm{ml} \)에 증류수 및 ferric chloride 각 \( 1 \mathrm{ml} \)을 혼합한 후 \( 700 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 환원력은 시료첨가군과 대조군의 흡광도 비를 \( \% \)값으로 환산하였다.</p><h2>세포배양</h2><p>Human dermal fibroblast (HDF) 세포는 \( 5\% \) \( \mathrm{CO}_{2} \) 및 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 95\% \) 이상의 습도를 유지한 배양기에서 \( 10 \% \) fetal bovine serum, \( 2 \mathrm{mM} \) glutamine and \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) penicillin-streptomycin을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였다.</p><h2>MTT assay</h2><p>Hansen 의 방법에 따라 HDF세포에 대한 사포닌의 세포독성을 MTT (3-(4,5-dimethyl-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)를 이용하여 측정하였다.</p><h2>Hydroxyl radical에 의한 DNA 손상을 전기영동법으로 분석</h2><p>Genomic DNA는 약간 변형된 표준 과정에 따라 HDF 세포로부터 추출 하였다. Fenton반응에 의하여 발생된 hy-droxyl radical에 노출된 DNA 산화는 기존에 실험된 방법에 따라 수행되었다. 먼저 \( 100 \mu \mathrm{l} \)의 DNA 용액에 시험농도의 사포닌, \( 200 \mu \mathrm{MeSO}_{4}\), \(1 \mathrm{mM} \mathrm{H} \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 및 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) genomic DNA 를 첨가하였다. 반응 혼합물을 \( 30 \mathrm{~min} \) 동안 상온에서 반응시킨 후 \( 10 \mathrm{mM} \) EDTA 를 첨가하여 반응을 종결시킨다. \( 1 \mu \mathrm{g} \)의 DNA를 포함하는 \( 20 \mu \mathrm{l} \) 의 반응혼합물을 \( 1 \% \) agarose gel에서 \( 100 \mathrm{~V} \)로 \( 30 \mathrm{~min} \) 동안 전기영동 하였다. Gel은 \(1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) ethidium bromide로 염색하여 물로 세척하여 UV로 LAS3000® image analyzer (Fujifilm Life Science, Tokyo, Japan)를 이용하여 관찰하였다.</p>
Hansen 의 방법에 따라 어떤 식으로 측정되었어?
MTT assay