<h1>재료 및 방법</h1><h2>공시재료</h2><p>1998년 1월부터 12뭘까지 설사중으로 지정병원 (동아대학병원, 고신의료원)에 내원한 환자 1,239 명의 분변을 공시 재료로 하였다.</p><h2>E. colli의 분리 및 동정</h2><p>환자의 분변을 MacConkey agar (Difco)에 직접 도말하고, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 18-24시간 배양한 후 lactose를 분해한 집락을 하나이상 선태하어 그람 염색을 실시하고, IMViC 시험 즉, indole 시험 양섬, methyl red 시험 양성, Voges-Proskauer 시험 음성 및 citrate 이용능 시험에서 음성을 나타내는 분리균주를 \( E. coli \)라고 잠정 동정하였다. 이들 분리균주를 Edward와 Ewing의 방법에 따라 Kligker iron agar (KIA, Difco) 사면배지에 접종하고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \), 하룻밤 배양하여 lactose 및 glucose 향성, \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{~S} \) 를 생산하지 않는 군주를 API \( 20 \mathrm{E} \) strip (bioMérieux)으로 동정하였다. 또한 \( E. coli \) O157을 분리하기 위하여 모든 분리균주를 MacConkey sorbitol agar (Difco)에 도말하고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \), 하룻밤 배양한 다음 sorbitol을 분해하지 않는 집락에 대하여 항혈청으로 screening 하였다.</p><h2>E. coli의 verotoxin 생산성 시험</h2><p>Verotoxin 독성시험올 위한 세포주는 수의과학 검역원으로부터 분양받은 Vero cells (African green monkey kidney cells)을 사용하였고, \( 5\% \) 우태아혈청과 \( 100 \mu \mathrm{s} / \mathrm{m} \) 의 gentamicin 및 \( 100 \mathrm{U} / \mathrm{ml} \) 의 penicillin이 첨가된 minimal essential medium (MEM; Sigma)에 계대배양하면서 공시하였다.</p><p>\( E. colt \) 분리주의 verotoxin에 대한 세포독성 시험은 Karmali 등의 방법에 따라 분리균의 배양여맥을 단층배양한 Vero cells에 접증하고 \( 37 \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) 조건으로 3일간 비양하면서 매일 cytopathic effects (CPE)를 헌미경으로 관찰하였다. 배양 3일 후 세포를 \( 50 \% \) 사멸 \( \left(\mathrm{CD}_{50}\right) \) 시키는 시료의 가장 높은 희석배수를 end point로하여 verotoxin 활성의 정도를 결정하였다. \( \mathrm{CD}_{50} \) 의 판정은 Mary 등의 방법에 따라 실시하였다.</p><h2>혈청형 시험</h2><p>본 실험에 사용한 병원성 대장균의 혈청형은 Table 1 과 같다. 병원성 대장균 \( \mathrm{O} \) 항혈청 (Denka Seiki Co.)을 이용하여 slide 응집반응으로 실시하였다. 분리균을 tryptic soyagar에 2회이상 활성화시킨 후 자란 S형 집락을 항원으로 이용하여 먼저 다가혈청과 응집반응을 실시하고 이어서 응집된 다가혈청에 포함되는 단일 \( \mathrm{O} \) 혈청 각각과 응집반응을 실시하였다. 응집유무의 판정은 육안으로 분명하게 확인되는 응집이 30초 이내에 일어나는 경우를 양성으로 판정하고, 응집이 일어나지 않거나 늦게 일어나는 응집은 음성으로 판정하였다.</p>
minimal essential medium 에 penicillin은 몇 \( \mathrm{U} / \mathrm{ml} \)가 추가되었는가?
\( 100 \mathrm{U} / \mathrm{ml} \)