<h1>재료 및 방법</h1><h2>메주의 용매 추출 및 분획</h2><p>메주는 화영식폼(주)으로부터 구입하였고 메주의 항돌연변이 활성 물질을 추줄하기 위해 극성이 다른 용매로 더욱 분획하였다. 메주를 동결 건조한 후 분날 \( (2798 \mathrm{~g}) \)로 만들었고, 헥산으로 3회 추출하고 얻어진 잔사물 \( (1169 \mathrm{~g}) \)을 2배 메탄올로 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \)에서 환류 냉각기를 사용하여 3회 추출 \( (119 \mathrm{~g}) \)하였다(methanol soluble fraction, \( \mathrm{MeOH} \) ). 회전식 진공 농축기를 이용하여 농축한 후, 다시 디클로로메탄(dichloromethane, \( \mathrm{CH}_{2} \mathrm{Cl}_{2} \) ), 에틸아세테아트(ethylacetate, \( \mathrm{EtoAc} \)) 및 부탄올 (butanol, \( \mathrm{BuOH} \) ) 순서로 분획깔때기를 이용하여 분획한 후 회전식 진공 농축기로 용매를 제거하고 각각 디클로로메탄 분획물 \( (71 \mathrm{~g}) \), 에틸아세테이트 분획물 \( (2 \mathrm{~g}) \) 및 부탄올 분획물 \( (9 \mathrm{~g}) \) 및 물 분획물 \( (37 \mathrm{~g}) \)을 얻었다. 각각의 분획물들은 회전식 진공 농축기로 완전히 용매를 제거한 후 dimethylsulfoxide(DMSO)에 녹여 실험에 사용하였다(Fig. 1).</p><h2>SOS Chromotest 실험</h2><p>SOS chromotest는 Frame shift mutation과 point mutation을 동시에 측정할 수 있는 실험으로 Quillard 등의 방법을 변형시킨 백과 함의 방법을 이용하였다. 냉동 보관된 PQ37 균액 \( 50 \mu l \)를 \( 5 \mathrm{ml}\) L 배양액에 접종하고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 하룻밤 진탕 배양한 후 이를 다시 \( 5 \mathrm{ml}\) L 배양액에 접종하고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( \mathrm{A}_{660} \) 측정치가 \( 0.3 \sim 0.4 \)에 이를 때까지 2시간 정도 진탕 배양하였다. 얻어진 균액을 L 배양액에 \( 1 / 10 \)로 희석하여 각 농도별로 준비된 시료와 돌연변이원인 N-meth-yl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine MNNG, Sigma사)을 혼합한 시료 \( 20\mu \mathrm{l} \)를 미리 분주하여 둔 96 well plate의 각 well에 \( 100\mu \mathrm{l} \)씩 분주하고 90분간 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 진탕하여 SOS 반응을 유도한 후 한쪽에는 \( \beta \)-galactosidase ( \( \beta \)-G)의 활성 측정을 위하여 O-nitrophenyl- \( \beta \)-D-galactopyranoside (ONPG) \( 100\mu \mathrm{l} \) , 다른 쪽에는 alkaline phosphatase (A-P)의 활성 측정을 위해 P-nitrophenyl phosphate disodium (PNPP) \( 100 \mu \mathrm{l} \) 를 첨가하였다. 발색 시간은 50분으로 하였으며 \( \beta\)-G는 \( 1.5 \mathrm{M} \mathrm{~Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) \( 100 \mu \mathrm{l} \)로 A-P는 \( 1 \mathrm{M} \mathrm{~HCl}\) \(50 \mu \mathrm{l} \)로서 효소에 의한 발색 반응을 정지시키고 5분 후 A-P쪽에 \( 50\mu \mathrm{l} \) 의 \( 2 \mathrm{M} \) tris buffer를 첨가하여 \( \mathrm{HCl} \)을 중화하고 분광광도계로 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 측정된 O.D. \( 420 \mathrm{~nm} \) 측정치는 다음과 같이 enzyme unit \( (\mathrm{Eu}) \) 값을 구하였다.</p><p>\( \mathrm{Eu}=\left(1000 \times \mathrm{A}_{420}\right) / 50(\mathrm{~min}) \)</p>
메주의 항돌연변이 활성 물질을 추줄할 때 사용하는 냉각기는 무슨냉각기야?
환류 냉각기